复方谷氨酰胺

复方谷氨酰胺（精选8篇）

复方谷氨酰胺 篇1

摘要：目的:探讨复方谷氨酰胺预防和治疗小儿肺炎继发腹泻的疗效。方法:将120例小儿肺炎患儿按随机数字表法分为试验组60例和对照组60例, 两组均给予抗生素等对症治疗, 试验组在此基础上加用复方谷氨酰胺。比较两组患儿的腹泻发生情况、治疗效果和不良反应。结果:试验组继发腹泻的发生率明显低于对照组, 差异具有统计学意义 (P<0.05) ;试验组继发腹泻后治疗总有效率88.3%高于对照组的75.0%, 差异有统计学意义 (P<0.05) ;两组患儿均未出现明显不良反应。结论:复方谷氨酰胺减少了继发性腹泻的发生, 服用快捷方便, 安全可靠, 对实践有指导意义。

关键词：小儿肺炎继发性腹泻,复方谷氨酰胺,疗效

小儿肺炎是儿科比较常见的疾病, 临床上多使用抗生素进行治疗, 抗生素打破了肠道内各菌群的平衡, 使得病菌大肠杆菌等大量繁殖, 产生毒素, 降低了患儿的抗感染能力, 导致患儿出现继发性腹泻[1,2], 本文运用复方谷氨酰胺对小儿肺炎患儿进行防治, 疗效肯定, 现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2010年7月-2013年5月本院儿科小儿肺炎患儿120例, 排除消化道先天畸形、治疗前已使用过止泻药物者及其他器官功能不全者, 按随机数字表法分为试验组和对照组, 每组各60例, 试验组男34例, 女26例, 年龄6~18个月, 病程5~40 h;对照组男22例, 女38例, 年龄6~24个月, 病程6~45 h。两组患儿性别、年龄、病程方面比较差异无统计学意义 (P>0.05) , 具有可比性。

1.2 方法

两组患儿均给予抗生素等对症治疗, 在此基础上试验组加服复方谷氨酰胺 (地奥集团成都药业股份有限公司, 批号:970302) , 饭前口服500 mg, 其中<1岁, 1次/d;1~6岁, 2次/d;>6岁, 3次/d, 连续服用14 d为1个疗程。

1.3疗效判定标准

显效:治疗72 h粪便性状及次数恢复正常, 全身症状消失;有效:治疗72 h粪便性状及次数明显好转, 全身症状明显好转;无效:治疗72 h粪便性状、次数及全身症状均无好转甚至恶化[3]。总有效=显效+有效。

1.4统计学处理

采用SPSS 13.0统计学软件对数据进行处理, 比较采用X2检验, 以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组继发腹泻情况

试验组继发腹泻的发生率明显低于对照组, 差异具有统计学意义 (P<0.05) , 见表1。

例 (%)

2.2 两组治疗效果比较

试验组总有效率88.3%高于对照组的75.0%, 差异有统计学意义 (P<0.05) , 见表2

*与对照组比较, P<0.05

2.3 不良反应情况

两组患儿均未出现明显不良反应。

3 讨论

导致小儿肺炎继发性腹泻的原因很多, 现代医学研究表明: (1) 肠道外感染引起消化功能紊乱, 由于病原体的毒素作用, 肺炎患儿的消化系统发育尚未完善, 常常受其影响, 表现为呕吐、腹泻、腹胀等症状; (2) 应用抗生素打乱了肠道菌群平衡, 造成肠道菌群失衡, 大肠杆菌等病菌大量繁殖, 抗感染能力下降, 外部细菌入侵导致腹泻; (3) 肺炎治疗中应用某些抗生素可直接刺激小儿肠道, 破坏了肠道黏膜的机构或刺激植物神经引起肠蠕动增快, 葡萄糖吸收减少, 双糖酶活性降低而发生腹泻; (4) 肺炎会产生很多痰液, 患儿由于年龄较小, 很容易将痰液吞咽到胃肠道, 痰液中的有害物质引起肠蠕动加快, 刺激肠黏膜而发生腹泻; (5) 患儿的生活环境或饮食习惯的改变, 患儿由于抵抗力和适应能力较差, 很容易受到外界环境的影响从而产生各种疾病[4,5,6]。对于小儿肺炎继发性腹泻要给予足够的重视, 不可掉以轻心。

中西药合成制剂复方谷氨酰胺主要由L-谷氨酰胺、人参、白术、茯苓和甘草组成, 其中, 谷氨酰胺是最重要的成分[7,8], 是肠黏膜上皮细胞等的重要能量物质, 能维持肠道黏膜结构的完整性, 促进胃肠激素分泌, 增加肠黏膜中免疫球蛋白的含量, 维持肠道内环境平衡, 促进肠道免疫功能, 从而保护肠黏膜。并能促进受损肠黏膜的修复, 减轻炎性反应, 保持组织代谢功能, 其作用机制可能为:一方面, 谷氨酰胺参与葡萄糖三羧酸循环, 氧化生成ATP供能, 促进肠黏膜细胞的更新和再生, 保持其超微结构的完整性;另一方面, 谷氨酰胺刺激机体产生高血糖素, 增加萎缩肠黏膜谷氨酰胺酶的活性, 从而改善其自身组织结构。此外, 复方谷氨酰胺中的人参、白术、茯苓和甘草是经典传统医学方剂中的四君子汤, 有健睥、和胃、调理消化功能的作用, 用于脾胃气虚之心腹胀满、肠鸣泄泻等症, 整体调节消化系统功能。现代药理研究发现, 人参大补元气、扶正固本, 具有调节中枢神经系统功能[9,10,11], 提高机体免疫力的作用;白术燥湿化痰、健脾和中, 有保护胃肠道黏膜及调节肠蠕动的作用;茯苓利水渗湿, 健脾补中, 有镇静、缓解精神紧张, 促进人体免疫功能的作用;甘草补中益气、调和诸药, 有抗炎、抗过敏、解毒等作用, 并能解除肠道平滑肌痉挛、止腹痛, 促进消化道上皮细胞再生。复方谷氨酰胺口服后可从肠道直接溶出, 易于吸收, 可促进肠黏膜功能重建, 改善肠道分泌和运动功能。本文通过分析得出:试验组继发腹泻的发生率明显低于对照组, 差异具有统计学意义 (P<0.05) ;试验组继发腹泻后治疗总有效率88.3%高于对照组的75.0%, 差异有统计学意义 (P<0.05) ;两组患儿均未出现明显不良反应。由此可见, 复方谷氨酰胺减少了继发性腹泻的发生, 服用快捷方便, 安全可靠, 对实践有指导意义。

复方谷氨酰胺 篇2

关键词：产吲哚金黄杆菌；蛋白质谷氨酰胺酶；培养基；优化

中图分类号： TS201.3 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）03-0218-03

植物蛋白（如大豆蛋白、小麦蛋白和玉米蛋白等）在食品工业中应用非常广泛，但由于在弱酸性环境中（大多数食品系统的pH值范围）存在溶解性差、稳定性低等问题，如在植物蛋白饮料产品中出现蛋白沉淀、脂肪上浮现象，使产品口感和外观变差，产品保质期缩短[1]，造成植物蛋白在生产应用中受到限制。

植物蛋白含有大量的谷氨酰胺残基，通过脱酰胺基作用可以改善植物蛋白的溶解性。Yong等通过酶法分别脱去部分玉米胶蛋白和小麦蛋白的氨基，使蛋白质溶解性得到提高[2-3]。通过蛋白质的脱氨基作用，不仅能够提高蛋白质在酸性条件下的溶解性，而且可以提高其乳化性、发泡性和凝胶性等多种功能特性，这些都是食品蛋白质的必需性能。因此，催化蛋白质脱酰胺基酶在工业应用中具有很大潜力。目前，报道能催化蛋白质脱酰胺基作用的酶有谷氨酰胺转胺酶、蛋白酶和肽谷氨酰胺酶[4-6]。蛋白酶和谷氨酰胺转胺酶的主要酶促反应不是蛋白质残基中谷氨酰胺的脱氨基作用，因此，用于植物蛋白脱氨时有副作用，会给食品带来不利影响。肽谷氨酰胺酶虽然脱氨具有专一性，但是仅以多肽为底物进行反应，对大分子蛋白质没有作用[6]。2000年，日本学者Yamaguchi等发现了1种由微生物产生的新的脱酰胺基酶——微生物蛋白质谷氨酰胺酶[7]，该酶是由从土壤中分离出的1株金黄杆菌（Chryseobacterium proteolyticum）产生，对酪氨酸和 Cbz-Gln-Gly（苯甲基氧化碳酰-L-谷氨酰胺甘氨酸）均有脱酰胺基活性，而没有蛋白酶和谷氨酰胺转胺酶活性，这是首次报道的微生物产蛋白质谷氨酰胺酶[3]。

笔者所在实验室从土壤中筛选出了1株产吲哚金黄杆菌（Chryseobacterium indologenes），能够产生微生物蛋白质谷氨酰胺酶。本研究对该产吲哚金黄杆菌发酵培养基配方进行初步优化，为其进一步工业化应用奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌种 产吲哚金黄杆菌由华东师范大学微生物实验室分离并保存。

1.1.2 试剂 Cbz-Gln-Gly，购自Sigma公司；大豆蛋白胨、多聚蛋白胨生化纯，购自上海生工生物科技有限公司；酵母提取物，购自安琪酵母有限公司；苯酚、硝普钠等常规试剂分析纯，购自上海化学试剂公司。

1.1.3 培养基 种子培养基（1 000 mL）：多聚蛋白胨10 g、酵母提取物2 g、MgSO4·7H2O 1 g，调节pH值至7.0；基础发酵培养基（1 000 mL）：乳糖5 g、多聚蛋白胨10 g、NaH2PO4·H2O 1.7 g、 K2HPO4 0.25 g、MgSO4·7H2O 0.25 g、FeSO4·7H2O 0.05 g，调节pH值至7.2。

1.2 方法

1.2.1 培养方法 种子培养：菌种活化后，以2%接种量接入种子培养基，200 r/min、25 ℃震荡培养12 h。发酵培养：以1%接种量把种子培养液接种到发酵培养基，200 r/min、25 ℃震荡培养。

1.2.2 酶活性测定方法[7] 100 μL含有10 mmol/L Cbz-Gln-Gly和175.6 mmol/L磷酸钠缓冲液的底物溶液，与 10 μL 酶液混合均匀，37 ℃温浴30 min，然后加入100 μL 12%三氯乙酸终止反应；对照反应是先加入三氯乙酸，后再加入酶液。18 000 r/min 离心5 min，上清液中释放的氨用卢玉棋的方法[8]检测。酶活性单位定义为：释放氨1 μmol/min的酶量为1个酶活性单位。

2 结果与分析

2.1 产吲哚金黄杆菌代谢曲线

从图1可以看出，产吲哚金黄杆菌延滞期较短，接种后 4 h 进入对数期，发酵12 h后逐渐进入稳定期，最终发酵液D600 nm可达到1.187；发酵液pH值随着发酵时间的延长不断升高，当进入稳定期时pH值达到8.7，这一变化趋势和发酵液中氨浓度趋势一样，这是因为发酵液中蛋白质谷氨酰胺酶分解蛋白质产生氨，氨浓度不断升高，导致pH值升高，与Yamaguchi等的研究结果[7]一致。蛋白质谷氨酰胺酶的活性随着发酵时间延长而增加，12 h达到最大，为0.37 U/mL，随后又略有下降。

2.2 初始发酵pH值

发酵液初始pH值分别设为5.2、6.2、7.2、8.2、9.2，发酵12 h时测定酶活性。由图2可见，pH值5.2时酶活性最高，为0.514 U/mL，这可能是因为发酵后期大量产氨，导致pH值升高（图1），初始pH值低可以延缓pH值升高，而较低的pH值有利于增加酶活性。

2.3 发酵培养基对蛋白质谷氨酰胺酶的影响

2.3.1 碳源 试验选择速效碳源葡萄糖、蔗糖、乳糖和缓效碳源糊精、淀粉作为常规发酵培养基碳源，分别在基础培养基中添加5%浓度，发酵12 h后测定酶活性。由图3可见，当碳源为5%乳糖和5%蔗糖时酶活性较高，分别为 0.390 U/mL

nlc202309022338

和 0.412 U/mL，表明速效碳源有利于产酶。

2.3.2 氮源 试验选取有机氮源植物水解蛋白、多聚蛋白胨、大豆蛋白胨和无机氮源硫酸铵、氯化铵作为氮源，在基础培养基中添加1%浓度，发酵12 h后测定酶活性。由图4可以看出，以1%大豆蛋白胨和1%多聚蛋白胨为氮源时酶活性较高，分别为0.460 U/mL和0.480 U/mL，表明有机氮源适合产酶。

2.3.3 表面活性剂 不同表面活性剂对产酶有很大影响。由表1可见，0.15% Tween 80和0.15% Tween 40酶活性最高，均为0.530 U/mL，和对照相比，酶活性增加了26%；在试验浓度范围内，Tween 20和曲拉通比对照酶活性低。3 小结与讨论

脱氨基是提高植物蛋白食品功能最有价值的方法之一。蛋白质谷氨酰胺残基侧链酰胺基中的氨基脱掉后生成羧基，导致蛋白质水合程度和负电荷增加，因此，蛋白质的溶解性增加[9]。Matsudomi等研究表明，即使少量的脱氨也会大幅度提高蛋白质的功能特性[10]。化学脱氨基法虽然可以提高植物蛋白（如小麦蛋白）的乳化性和起泡性，但是，该方法会引起蛋白质肽链断裂，导致蛋白质水解而失去蛋白质的功能。与化学脱氨法相比，酶法脱氨更为理想，底物专一，如蛋白质谷氨酰胺酶仅作用于蛋白质中的谷氨酰胺，反应条件温和，而且安全性高。

对蛋白质脱氨的酶目前报道比较多的主要有谷氨酰胺转胺酶、蛋白酶、肽谷氨酰胺酶和蛋白质谷氨酰胺酶。蛋白质谷氨酰胺酶已经应用于α-玉米蛋白、小麦蛋白和大豆蛋白[2-3，11]，还有乳清蛋白、脱脂牛奶[12-13]。微生物蛋白质谷氨酰胺酶由Yamaguchi等2000年首次从Chryseobacterium proteolyticum发酵产生，并对土壤中分离的菌种进行了鉴定，对其发酵进行了初步研究，其发酵上清液以Cbz-Gln-Gly为底物的谷氨酰胺酶活性最高，为0.258 U/mL，且最高酶活性在发酵24 h出现[7]。本试验通过单因素试验和正交试验，得到最优培养配方（1 000 mL）为大豆蛋白胨12 g、乳糖7 g、Tween 80 1.5 g、NaH2PO4·H2O 1.7 g、K2HPO4 0.25 g、MgSO4·7H2O 0.25 g、FeSO4·7H2O 0.05 g，经过该优化培养基发酵，最高酶活性可达0.661 U/mL，远远高于Yamaguchi等的试验结果，且最高酶活性在发酵12 h后即可出现。

参考文献：

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复方谷氨酰胺 篇3

1 资料与方法

1.1 一般资料:

回顾性将2014年8月至2015年6月的80例肠易激综合征患者根据治疗方法的不同分为实验组40例和对照组40例,实验组患者男11例,女29例,年龄23~41岁,平均年龄(32.4±1.6)岁;对照组患者男15例,女25例,年龄21~38岁,平均年龄(29.7±2.1)岁;两组患者的性别及年龄差异无统计学意义(P>0.05),可以进行对比研究。

1.2纳入和排除标准。纳入标准:符合罗马Ⅲ诊断标准(反复发作的腹痛或不适,每个月出现此症状在3 d以上,连续持续3个月,并且合并以下至少2条:①症状在排便后可缓解;②排便频率改变;③大便性状的改变;④症状持续至少6个月;患者自愿加入本次实验,并签署同意书。排除标准:合并消化系统器质性病变;合并心、肝肾等脏器疾病;由其他病症所引起的腹痛、腹胀等症状患者;经检查有细菌性痢疾感染的患者;拒绝加入实验的患者。

1.3 治疗方法。

对照组患者:双歧杆菌四联活菌片(思连康)(生产厂家:杭州龙达新科生物制药有限公司,国药准字:S20060010)规格:0.5克/片,1次3片,1天3次,饭后口服。实验组患者:双歧杆菌四联活菌片+复方谷氨酰胺颗粒(舍兰)(生产厂家:海南海神同洲制药有限公司,国药准字:H20030947)规格:0.67克/袋,1次1袋,1天3次,饭前30 min冲服。

1.4 观察指标:

治疗2周后,观察两组患者的治疗效果。显效为患者的症状消失或有明显减轻,有效为患者的症状有所好转,无效为患者的症状无变化或加重,治疗有效率=显效率+有效率。

1.5 统计学分析:

所有患者的资料以及研究所得数据均输入SPSS统计学软件,通过方差检验(计数资料)和t检验(计量资料)对其结果进行统计分析,当P<0.05,则表示具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者的治疗效果比较:

实验组患者的显效率为60%(24/40),有效率为37.5%(15/40),无效率为2.5%(1/40),治疗有效率为97.5%;对照组40例患者中有16例显效,有18例有效,有6例无效,治疗有效率为85%;实验组患者的治疗有效率与对照组患者相比,两组间的差异较大(χ2=3.914,P=0.048),有统计学意义。

2.2 两组患者不良反应比较:实验组不良反应发生率为2.5%(1/40),表现为呕吐,未见其他不良反应;对照组不良反应发生率为0%,两组数据对比后差异性不大,χ2=1.013,P=0.314,无统计学意义。

3 讨论

肠易激综合征是临床上常见的功能性疾病,具有间歇性,近年来,我国肠易激综合征的发病率在逐年升高,且病情反复发作,其发病机制尚未明确,很多学者认为肠易激综合征可能与异常的胃肠动力功能、内脏的高度敏感、精神压力等心理因素、外界环境因素都有较大的关系[3]。对于肠易激综合征患者的治疗,目前主要是以对症的药物治疗为主,但是到现在为止还没有发现有一种可以有效治愈肠易激综合征的药物,但随着临床试验摸索的增多,发现有一部分的药物对于缓解肠易激综合征的症状有很好的效果。由于肠易激综合征是胃肠功能紊乱的疾病,那么胃肠道的肠道菌群也会发生紊乱,故而采取益生菌进行治疗,发现可以取得较好的效果[4]。益生菌是一类生存在人体肠道内的可以帮助人类改善微生态平衡、产生健康有益功效的一类活性微生物的总称[5]。当患者由于某些原因引起肠道功能紊乱造成肠道菌群失衡后,补充益生菌可以帮助平衡患者的肠道菌群,恢复肠道的正常状态,缓解患者由于菌群失衡而产生的腹泻症状[6]。双歧杆菌属于益生菌的一种,双歧杆菌四联活菌片是一种复方制剂,主要是由婴儿双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、蜡样芽孢杆菌这四种组成,当人体的肠道菌群失去平衡,肠道内的中间状态(有条件致病)的细菌就会转变为致病菌,对肠道产生破坏作用,诱发肠道疾病的发生,双歧杆菌四联活菌片中的双歧杆菌、嗜酸乳杆菌就是肠道中的正常菌群,服用后可以补充肠道内的生理细菌,通过这样的方式调整肠道菌群数目,使肠道菌群能够恢复到正常状态;另外,它还可以激发患者机体的免疫因子,增强患者的免疫功能;从而在肠道内形成一道强大的、难以突破的生物、化学屏障,对患者的肠道形成保护作用;还可以合成维生素,促进食物的消化和营养物质的吸收,缓解便秘,增强患者抵抗力。复方谷氨酰胺颗粒也是一种复方制剂,主要包括L-谷氨酰胺和薁磺酸钠,其中的薁磺酸钠能够通过直接作用于炎症性黏膜达到抗炎效果,L-谷氨酰胺是蛋白质合成的编码氨基酸,可以在体内由葡萄糖转变而来,参与消化道黏膜黏蛋白构成成分氨基葡萄糖的生物合成,能够促进胃黏膜上皮成分己糖胺及葡萄糖胺的生化合成,减少胃蛋白酶的含量,从而促进黏膜上皮组织的修复,能够快速增生细胞特别是免疫细胞,二者联合时能够强化防御因子,促进组织修复。谷氨酰胺作为小肠黏膜细胞上主要的能源物质,能够快速增生小肠内的免疫细胞,阻止肠道内炎性介质的增生,从而达到保护肠黏膜且提高患者的免疫功能的作用。

在上述实验中,实验组患者的治疗有效率(97.5%、39例)明显高于对照组患者(85%、34例);两组患者的不良反应发生率相比,差异不大;说明实验组患者采用复方谷氨酰胺颗粒联合双歧杆菌四联活菌片的治疗效果要明显好于对照组患者单独采用双歧杆菌四联活菌片治疗,且不良反应发生率相差不大。综上所述,肠易激综合征患者采用复方谷氨酰胺颗粒联合双歧杆菌四联活菌片治疗,比单独应用双歧杆菌四联活菌片进行治疗,具有更好的治疗效果,且不良反应少,值得应用推广。

摘要：目的 探究复方谷氨酰胺颗粒对肠易激综合征的治疗效果。方法 回顾性将80例肠易激综合征患者按照不同的治疗方法分为实验组和对照组,实验组患者通过复方谷氨酰胺颗粒+双歧杆菌四联活菌片进行治疗,对照组患者通过双歧杆菌进行治疗,比较两组患者的治疗效果和不良反应。结果 实验组患者的治疗有效率为97.5%,对照组患者为85%,两组间治疗有效率差异有统计学意义(P<0.05);实验组患者的不良反应发生率(2.5%),对照组患者的不良反应发生率(0),两组的不良反应发生率相比,差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论 肠易激综合征患者采用复方谷氨酰胺颗粒联合双歧杆菌四联活菌片治疗,能够具有更好的治疗效果,且不良反应少,值得应用推广。

关键词：复方谷氨酰胺颗粒,肠易激综合征,治疗

参考文献

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复方谷氨酰胺 篇4

1 材料与方法

1.1 一般资料

上海市中医药大学普陀区中心医院收集于2001年1月至2010年12间收治的294例患者随机分为两组,治疗组254例,对照组40例。254病例中男性134例,女性120例,年龄22～65岁,平均43.5岁。对照组40例,其中男性14例,女性26例,年龄20～68岁,平均44岁。均符合罗马Ⅱ标准,并经生化检查、内镜、B超、X线或CT等影像学检查,排除器质性疾病。所有患者都表现为稀便或水样便、大便次数增多、时有腹痛,部分患者有焦虑,抑郁和睡眠障碍,病程3个月～10余年。

1.2 方法

治疗组:复方谷氨酰胺5～6粒,每日3次,氟西汀胶囊5mg,每日2次,或氟西汀胶囊10mg、每日1次。共用4～8周。对照组:单纯应用复方谷氨酰胺5～6粒,每日3次,共用4～8周,治疗完成后继续随防12周。

1.3 疗效判断标准

(1)完全缓解:腹痛、腹胀和其他非结肠源性消化道症状(包括烧灼感、吞咽困难、癔球感或非心源性胸痛、恶心、呕吐等)消失,粪便性状和排便次数基本转为正常。(2)部分缓解:腹痛、腹胀和其他非结肠源性消化道症状较治疗前改善,排便次数较治疗前减少,粪便性状改变为糊状。(3)不缓解:腹痛、腹胀和其他非结肠源性消化道症状末改善,排便次数和粪便性状与治疗前无差别。

2 结果

治疗组254例IBS患者中,完全缓解119例,部分缓解102例,不缓解34例,总有效率为87.01%,对照组完全缓解7例,部分缓解18例,不缓解15例,总有效率为62.5%,治疗过程中两组病员进行相关肝肾功能及心电图检查、均无异常变化。在治疗组中,有一部分患者曾出现轻度头昏,疲乏无力等症状,但对治疗无影响。见表1。

3 讨论

IBS的病因与发病机制比较复杂,临床表现多为腹痛、腹胀、排便习惯和粪便性状的改变,持续存在或间歇发作而又缺乏形态学和生化指标异常的综合征,临床上占普通人群发病率的15%～30%十分常见。最初认为IBS是肠道平滑肌功能障碍和内脏痛觉过敏,逐渐发展到现在的脑-肠轴学说,多种因素参与了IBS的发生与发展,如精神心理因素,肠道动力,消化道激素,肠道感染,内脏痛觉过敏等因素都与本病有关。临床上大多数患者发生IBS之前总有1～2次以上急性的肠道感染,如细菌性痢疾、病毒性腹泻等。而且特别能够影响自身永久难易忘却肠道感染和小肠细菌过度生长使肠道黏膜发生炎性反应,破坏肠上皮及黏膜层神经。结直肠黏膜出现免疫功能异常状态,肠黏膜中IL-1α、IL-1β等炎症介质增加[1,2]。IL-1β可抑制肠道钠-钾-ATP酶的活性,进而抑制水、钠吸收而产生腹泻[3,4]。研究还显示,IBS患者存在明显的精神心理异常,其中焦虑和抑郁症状以及躯体化表现尤其突出,约65.12%的IBS患者有明确的焦虑症状,39.53%的IBS患者有明确的抑郁症状,25.58%的IBS患者同时存在明确的焦虑和抑郁症状[5]。氟西汀是一种新型的特异性较强的5-HT再摄取抑制剂,能改善患者精神心理异常,调节引起内脏胃肠痛觉的5-羟色胺介质活性及其受体[6],复方谷氨酰胺主要是谷氨酰胺系统能使机体细胞减轻氧化应激反应的主要机制之一。谷氨酰胺提供谷氨酸钠前体后者是合成谷胱甘肽的氨基酸之一。谷氨酸不能通过细胞膜,而是谷氨酰胺易于通过细胞膜,是细胞内谷氨酸的来源。具有拮抗机体过度炎症反应[7],是维持肠道肠黏膜结构的完整性和更新。促进损伤的肠黏膜得以修复。促进肠道吸收,从而改变粪便的性状,缓解腹胀。治疗组患者总有效率为87.01%,对照组患者总有效率为62.5%(P<0.05),我们认为复方谷氨酰胺和氟西汀联合使用治疗肠易激综合征疗效满意,依从性好,不良反应甚微,尤其适用于显著心理障碍的IBS患者。

摘要：目的 研究复方谷氨酰胺和氟西汀联合应用治疗肠易激综合征(IBS)的临床疗效。方法 对294例肠易激综合征患者随机分为治疗组254例和对照组40例,治疗组:口服复方谷氨酰胺(5粒),每日3次,氟西汀胶囊5mg,每日2次,用48周。对照组:单纯应用复方谷氨酰胺56粒,每日3次,用48周。结果 治疗组完全缓解119例(46.85%),部分缓解102例(40.15%),不缓解34例(13.4%),总有效率为87.01%,对照组完全缓解7例(17.5)%),部分缓解18例(45.0%),不缓解15例(37.5%),总有效率为62.5%,两组有明显差异(P<0.05)。结论 复方谷氨酰胺和氟西汀联合应用治疗肠易激综合征疗比较理想的效果,不良反应甚微,尤其适用于有显著心理障碍的患者。

关键词：肠易激综合征,复方谷氨酰胺,氟西汀

参考文献

[1]王利华,方秀才,潘国宗,等.肠道感染与肠易激综合征[J].中华内科杂志,2002,41(2):90-92.

[2]梁列新,侯晓华.内脏感觉功能障碍与肠易激综合征[J].中国实用内科杂志,2004,24(8):511-512.

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[4]Khan I,Collins SM.Interleukin-1βinhibits sodium pump activity in the small intestine of rat[J].Gastroenterology,1994,106:A523.

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[6]史峰,唐振铎.抗抑郁药物在功能性胃肠综合征中的应用[J].国外医学消化系疾病分册,1996,16(1):31-33.

谷氨酰胺高效酶法转化条件研究 篇5

谷氨酰胺的生产方法主要有化学合成法、发酵法和酶法。1974年Tochikura等提出将酵母酒精发酵与纯化酶结合生产谷氨酰胺的方法后, 酶法生产谷氨酰胺得到了人们的重视。木村光等人利用微生物发酵产生的化学能使ADP转换成ATP, 同时控制糖和无机磷的浓度, 由氨及谷氨酸来合成Gln获得成功。果糖-1, 6-二磷酸发酵产生的化学能通过ADP←→ATP相互转化反应, 能连续被用于从谷氨酸合成Gln的反应中, 因此不需再大量加入ATP, 同时因为没有副产物ADP的生成, 所以Gln不受抑制而能顺利积累。在上述反应条件下, 氨对生成Gln的抑制作用变得不明显。另外, 酶法合成谷氨酰胺与发酵法相比具有许多优点, 如反应步骤简单、副反应少、易分离、容易实现自动化等。由于具有上述优点, 所以此法有可用于工业生产的潜力[6,7,8,9,10]。

本研究通过模拟Tochikura将酵母酒精发酵与纯化酶结合生产谷氨酰胺的方法, 考察了在此过程中影响谷氨酰胺酶转化效率的因素, 提出了在酵母酒精发酵与纯化酶结合生产谷氨酰胺的过程中[11,12,13,14], 谷氨酰胺酶的最佳转化工艺条件。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌种:

安琪酵母

1.1.2 主要试剂和实验仪器

1.1.2.1 试剂:谷氨酰胺合成酶 (GS) , NaH2PO4·2H2O, Na2HPO4·12H2O, MgSO4, MnCl2, ATP, NAD, AMP , 甲苯, 丙酮, L-谷氨酸钠, NH4Cl。

酵母斜面培养基 (YEPD) /g·L-1:葡萄糖20, 蛋白胨20, 酵母膏10, 琼脂20。

酵母摇瓶培养基 (YEPD) /g·L-1:葡萄糖20 , 蛋白胨20, 酵母膏10。

1.1.2.2 设备仪器

SBA-40B生物传感分析仪, JY62-Ⅱ型超声波细胞粉碎机, AB204-N型电子分析天平, UV-2100紫外分光光度计, Sigma3K15冷冻高速台式离心机, HYG-Ⅱ回转式恒温调速摇瓶柜, pHS-3TC精密数显酸度计。

1.2 酶法合成L-Gln与酵母酒精发酵能量偶联体系的建立

将酵母细胞在YEPD培养基中28℃, 摇瓶 (转速200 r·min-1) 培养24 h。用气流干燥法处理培养成熟的酵母 (10 g过滤分离的细胞均匀地分布在细目过滤网上, 过滤网放在一个相应大小的布氏漏斗上, 从漏斗底部均匀地通入压缩空气, 24℃下气流干燥24 h) 。将处理过的气流干燥细胞放置到谷氨酰胺生物合成偶联反应系统当中 (L-谷氨酸钠:6.7 g·L-1, NH4Cl:3 g·L-1, 葡萄糖:20 g·L-1, MnCl2 15 mmol·L-1, MgCl2 15 mmol·L-1) , 在此体系中酵母细胞为60 g·L-1的菌悬液, 加入谷氨酰胺合成酶, 使得体系内谷氨酰胺合成酶活力达到每毫升80 U, 调整反应体系pH 6.5, 37℃下静置反应6 h。

1.3 L-Gln与酵母酒精发酵能量偶联体系中各因素对谷氨酰胺酶转化效率的影响

1.3.1考察偶联体系中酵母、谷氨酸钠、葡萄糖、NH4Cl对谷氨酰胺酶转化效率的影响, 单因素实验只改变其中对应因素的量, 其它因素条件不变。

1.3.2 通过单因素实验, 初步确定各因素的最佳条件, 再通过设计正交实验优化工艺条件。

1.3.3 测定方法

葡萄糖检测方法:

Gln反应后, 取样在6000 r·min-1下离心10 min, 取上清液用300 mmol·L-1 磷酸缓冲溶液稀释一定倍数后, 取25 μL在SBA上直接测定。

谷氨酸检测方法

Gln反应后, 在6000 r·min-1下离心10 min, 取上清液用300 mmol·L-1 磷酸缓冲溶液稀释一定倍数后, 取25 μL在SBA上直接测定。

谷氨酰胺的检测方法:

1) 纸层析定性测定:

Gln反应后, 在6000 r·min-1下离心10 min, 取0.5 μL点样, 进行纸层析处理。

2) 氨基酸分析仪测定:

将样品在16000 r·min-1下离心10 min, 取上清液稀释一定倍数后于H835-50氨基酸分析仪上测定。测定条件为:2.6×150 mm离子交换柱, 柱温53℃, 流速0.225 ml·min-1紫外检测器波长570 nm, 流动相为柠檬酸和柠檬酸钠缓冲溶液, pH 3.3到9梯度洗脱。

2 结果与讨论

2.1 初始葡萄糖添加量对Gln转化的影响

葡萄糖经酵解产生ATP是能量偶联的重要环节, 有效利用葡萄糖是成功偶联的必要条件, 图1为葡萄糖的添加量对谷氨酸转化率的影响实验结果, 从图中知道, Gln的转化随着葡萄糖的加入量的增加而提高, 但从能量偶联效率来讲, 葡萄糖的利用率却随葡萄糖的加入量的增加在降低。因此, 从经济方面讲, 提高葡萄糖的添加量并不是提高酶法转化Gln的有效途径。

2.2 酶、酵母添加量对Gln转化的影响

考察了酶添加量对底物转化的影响, 图2中显示, 在一定的酶量范围内, Gln的转化量随酶液加入量的增加而增加, 当酶液浓度在80～100×103U·L-1时, 谷氨酸的转化最大, 进一步加大酶量, 转化量开始下降, 推测原因为酶液不是纯化酶而是粗酶液, 含有其它一些细胞内含物等物质, 这些物质达到一定程度可能对反应生产抑制作用, 从而使Gln转化降低。

图3中显示, 在一定高浓度酵母添加量的反应体系中, 酵母的添加量大小对Gln的转化影响很小, 可以得出在一定浓度下酵母添加量不是影响酶转化反应的重要因素。

2.3 谷氨酸加入量对Gln转化的影响

在偶联体系加入不同浓度的谷氨酸盐, 反应7 h检测结果如图4所示。可以看出Gln转化量随Glu浓度的增加而有所提高。这可能是由于谷氨酰胺合成酶的分子结构所致, 如图5所示, 从谷氨酰胺合成酶的分子结构图可以看出, ATP是从GS活性部位容易的一端通道进入到酶活性中心部位, 而Glu进入酶活性中心部位则相对要困难的多, 高浓度的Glu则会增加或加快其进入到酶活性中心部位, 促进酶催化反应。但从如图4中也能看到Gln转化率却随着Glu浓度的增加而下降。

2.4 NH4+浓度对Gln转化的影响

有资料报道, 在用发酵法生产谷氨酰胺的研究中, NH4Cl浓度大于4%时对谷氨酰胺的合成会产生明显的抑制作用。因此考察了在酶法合成Gln的能量偶联体系中, NH4+浓度对Gln转化的影响。根据我们的实验结果, 与Glu用量相比, 低铵离子浓度时, Gln的转化率较低, 而铵离子浓度与Glu用量相当或高于与Glu相当的用量时, Gln的转化率差别不大, 说明适量NH4+浓度对Gln的转化影响不大。这与报道在酶法合成Gln体系中, 氨对生产谷氨酰胺的抑制作用变得不明显[15,16]基本一致。

2.5 正交实验进一步优化实验条件

在生产实践和科学实验中, 为了实现高产、优质、低消耗, 往往要通过实验来寻找最优工艺条件, 常用的方法是采用正交实验。它所安排的少量的正交试验, 可以获得常规实验所得不到的全面结果, 如因素对指标的影响大小、每个因素的最佳水平、各因素间最佳的水平搭配、提高实验精确度等, 从而找出较优的工艺条件。以下设计了一个四因素三水平的正交实验L9 (34) , 实验设计如表1所示, 结果如表2。由表中数据经极差分析, 因素的重要性大小为C>B>D>A。即酶底物谷氨酸浓度是对Gln转化影响最大的因素, 其次为酶的添加量, 优化合成工艺条件为A1B1C2D2, 以此条件进行实验, Gln产量达17.8g·L-1, 转化率为71.2%。

3 结论

3.1 根据各单因素对谷氨酰胺转化的影响结果知道:合适的磷酸盐浓度为0.15 mol·L-1;葡萄糖的提高会增加谷氨酰胺的转化, 但利用率明显降低;酶液浓度在80～100U/ml时, 谷氨酰胺的转化最大, 进一步加大酶量, 转化量开始下降;在一定高酵母浓度 (50 g·L-1以上) 反应体系中, 酵母的添加量大小对Gln的转化影响很小;高的谷氨酸添加量会使转化率降低, 但低的添加量又会使谷氨酰胺的产量降低, 最适谷氨酸加入量为25 g·L-1。

复方谷氨酰胺 篇6

1 材料与方法

1.1 仪器

HLPC色谱仪型号:LC-20A, 色谱仪编号:L20134506488AE, 分析天平型号:AE100

分析天平编号:L S 0 1 2, 超声波型号:AS3120A, 检测波长:λ=215 nm。

1.2 色谱条件

检测器型号:S P D-2 0 A, 检测器灵敏度:2.0AUFS柱温:35℃, 进样体积:20 ul流速:1.0 ml/min, 流动相:0.05 mo L/L的磷酸二氢钾 (取磷酸二氢钾6.8 g, 加水至1000 ml, 用磷酸调节PH值为4.0) ∶乙腈=70∶30, 色谱柱:NH￠4.6×250 mm, 色谱柱号:312316。

1.3 材料与试剂

乙腈 (色谱纯, 康科德公司) , 磷酸二氢钾 (AR级) , 磷酸 (AR级) , 谷氨酰胺对照品 (山东宝齡生物技术有限公司) , 高纯水。

1.4 样品制备

标准溶液的制备:精密称取谷氨酰胺标准品250 mg于50 ml容量瓶中, 用纯化水稀释并定容至刻度, 摇匀, 再精密吸取2 ml于10 ml容量瓶中, 用流动相稀释定容至刻度, 摇匀, 备用。其浓度为1 mg/ml。

样品溶液的制备:称取本品约250 mg, 精密称定于50 ml容量瓶中, 用纯化水稀释并定容至刻度, 摇匀, 再精密吸取2 ml于10 ml容量瓶中, 用流动相稀释定容至刻度, 摇匀, 备用。其浓度为1 mg/ml。

1.5 测定方法

分别取标准品溶液和供试品溶液盛装于2 ml自动进样瓶中, 进行自动进样 (进样量为20 ul) , 注入液相色谱仪, 按外标法以峰面积计算供试品中谷氨酰胺的含量。

2 实验结果

2.1 系统适用性试验

在上述色谱条件下, 取标准溶液进行自动进样, 连续进样6针, 谷氨酰胺峰与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5;理论板数、拖尾因子, 6次色谱峰峰面积的相对标准偏差 (RSD) 、六次色谱峰的保留时间分别为:9.80、9.79、9.79、9.78、9.70、9.71, 其相对标准偏差RSD=1.2%, 小于2.0%;6次色谱峰面积分别为:1205488、10665、1200380、1204391、1170905、1186594, 其相对标准偏差标准偏差 (RSD) 为1.2%小于5%;拖尾因子分别为:1.2、1.2、1.3、1.4、1.4、1.4, 其相对标准偏差标准偏差 (RSD) 为0.7%均小于2%;理论塔板数分别为:4886、4867、5001、5185、5545、5867, 均大于4000。

2.2 线性

用对照品制备不同浓度的样品, 使其浓度分别为0.5 mg/ml、0.75 mg/ml、1.0 mg/ml、1.25 mg/ml、1.5 mg/ml。每个浓度连续进样3针。以检测得到的峰面积平均值、浓度作线性回归, 其线性回归方程为y=1188457x, 其中y为峰面积, x为谷氨酰胺浓度 (见图1) , 线性相关系数R2为0.999。结果表明在目标浓度0.5 mg/ml~1.5 mg/ml内, 该方法具有良好的线性关系。

2.3 准确度

分别制备浓度约为1 mg/ml的对照品溶液和浓度约为1 mg/ml的样品溶液。分别吸取样品溶液1 ml和标准溶液0.8 ml;样品溶液1 ml和标准溶液1.0 ml;样品溶液1 ml和标准溶液1.2 ml分别加入10 ml容量瓶中, 用流动相稀释定容至刻度, 制备浓度分别为80%、100%、120%的三种浓度的混合溶液。每个浓度连续进样三针, 记录实验结果。实验结果表明该方法在三个浓度下其回收率分别为99.5%、97.6%、97.9%。平均回收率达到98.3%, 表明该测定方法具有较高的检测准确度。

2.4 精密度

称取标准品约2 5 0 m g, 精密称定于50 ml容量瓶中, 用纯化水稀释并定容至刻度, 摇匀, 作为贮备液备用。再分别加标准贮备溶液0.8 ml、1.0 ml、1.2 ml, 用流动相稀释定容至刻度, 摇匀, 制成浓度分别为80%、100%、120%的三种浓度, 备用。每个浓度连续进样三针, 记录色谱图。实验结果表明三个实验下其相对标准偏差RSD分别为0.47%、0.42%、0.20%, 平均相对标准偏差RSD=0.37%。该结果表明该方法重现性较好。

2.5 专一性

从图2可以看出, 用该方法可以较好的分离测定谷氨酰胺的相关物质如谷氨酸、焦谷氨酸等, 具有专一性高的特点。

3 讨论

本文建立的高效液相色谱法测定谷氨酰胺含量的方法, 其检测波长为215nm, 流动相为0.05 mol/L的磷酸二氢钾 (用磷酸调节PH值为4.0) ∶乙腈=70∶30, 实验结果表明该方法在其线性范围内具有专一性高, 检测结果准确的特点。

参考文献

小麦蛋白源谷氨酰胺肽的研究进展 篇7

小麦蛋白主要由麦谷蛋白和麦醇溶蛋白组成, 它们都含有丰富的谷氨酸 (Glutamate, Glu) 和脯氨酸。而Glu与谷氨酰胺 (Glutamine, Gln) 在小麦蛋白中含量尤其高, 约占小麦蛋白氨基酸总量的35%, 小麦蛋白中酰胺基是Glu的主要存在形式, Glu有67.4%的活性基团为酰胺基活性基团。因此, 小麦蛋白可以作为Gln肽的重要来源。但是小麦蛋白自身的粘性大, 溶解度低, 极容易导致机体发生过敏性反应, 这些因素都影响到小麦蛋白的广泛应用。在水产养殖中能够利用小麦蛋白的延展性、黏弹性和持水性, 作为水产动物营养强化剂。

1 Gln的营养价值

小麦蛋白的重要功能性氨基酸—Gln, 是动物机体大量存在的游离氨基酸之一, 大概占总游离氨基酸的40%~60%。动物体需要的Gln多数由自身组织合成, Gln参与动物机体内蛋白质的合成, 也可作为氮源参与核酸和糖蛋白的合成[1], 对动物体产生特定的保护作用及免疫功能。Gln为机体内迅速增殖和分化的细胞, 如肠黏膜上皮细胞、淋巴细胞、肿瘤细胞等, 提供主要能源供应。对于多数动物来说, 小肠是Gln的主要吸收场所, 小肠中存在丰富的肠绒毛, 能够吸收肠道中大多数Gln, 其中相当一部分的Gln被吸收后直接在肠道细胞内被利用, 肠道细胞对于Gln的需求量远高于其它氨基酸。Gln在合成肠道分泌型免疫球蛋白A (Secretory immunoglobulin A, SIg A) , 调节肠道淋巴组织功能, 防止肠道内细菌易位发挥了关键作用。手术、烧伤、创伤、断乳、高温等情况下, 都容易使动物机体处于应激状态, 此时动物体内需要的Gln急剧增长, 使得自身合成的Gln严重不足, 容易导致体内Gln缺乏, 引起肠道萎缩、分解和吸收功能下降、免疫系统紊乱等症状[2]。这时如果给动物体额外添加Gln可以缓解这些症状的出现, 因而Gln又被称为“条件性必需氨基酸”[3]。

Gln的生理作用归纳为: (1) Gln的载体功能。在机体循环中, 约30%~35%的氨基酸利用Gln的α-氨基和酰胺基作为载体, 实现其在各组织器官之间的流动, 这种结合具有特异性, 故Gln又称作“氮梭”。 (2) Gln是构成机体的基础物质。Gln普遍存在于机体内, 参与机体新陈代谢, 是核酸生物合成所必需的氮源, 对蛋白质的合成与分解有调节作用。 (3) Gln作为一系列快速增殖细胞的关键性能源物质, 可以提高机体免疫功能, 保护肠道的形态完整和屏障功能, 防止肠道内细菌和有害物质的易位。 (4) Gln能够促进损伤组织的修复。额外添加Gln能有效促进创伤组织的恢复, 并且起到节氮和提高机体抗感染能力。 (5) Gln作为谷胱甘肽的前体物质, 通过调节谷胱甘肽的合成达到调节机体的炎症反应。

Gln的特殊生理活性使其在动物临床营养上的应用空间十分宽广, 尤其对与年幼的动物更加有意义。有研究指出, 添加了Gln的氨基酸营养液, 可使离体小肠黏膜蛋白质含量、DNA、RNA含量增加[4]。Wu[5]在早期断乳仔猪的日粮中添加1%的Gln, 可有效减少仔猪肠道绒毛的萎缩, 提高仔猪的饲料转化率。刘涛[6]通过在断乳仔猪的日粮中添加Gln, 能够提高早期断乳仔猪的平均日增重, 降低腹泻率, 但饲料转化率提高不显著。张军民等[7]研究了Gln对饲喂生大豆仔猪肠道通途性和消化吸收能力的影响, 指出Gln能够有效缓解采食生大豆对仔猪肠道造成的损伤, 改善氮代谢, 降低腹泻率, 促进肠道水分吸收。另据研究表明, Gln对仔猪小肠黏膜形态与功能保护作用, 可以改善断乳后的腹泻情况, 增强机体免疫能力, 提高早期断乳仔猪肠道消化酶活性及消化功能, 从而提高仔猪对环境的适应性, 进而改善仔猪生产性能[8]。

2 Gln肽的营养价值

当前随着肽营养领域的研究越来越深入, 人们发现肽比相同组成的游离氨基酸组合具有更强大的生理功能。肽由两个及两个以上的氨基酸通过肽键连接形成, 它作为机体内重要活性成分参与体内多种生理活动并发挥功能。肽的生理功能涉及机体的神经调节、内分泌、细胞代谢等多方面, 并且协调机体不同系统发挥其相应的功能。Gln单体在溶液中的溶解度低, 其活性基团不稳定, 遇热时极容易变性, 这些因素都影响到Gln的广泛应用。通过研究发现, Gln单体的氮端被取代能够提升其稳定性和溶解度, 肽中Gln的酰胺基稳定性明显高于单体Gln的酰胺基团, 因此, Gln肽可以作为Gln单体的稳定形式之一, 代替其在动物生产过程中的应用。

动物试验和人体试验都已经证明了Gln小肽代替Gln单体的可行性和安全性[9]。蒋建文等[10]在全胃肠外营养支持的猪自体移植小肠的营养液中加入甘氨酰谷氨酰胺二肽后, 猪自体移植小肠的肠道细胞代谢、生理形态、吸收功能以及防止细菌移位等方面都有显著改善。Stehle等指出, 丙氨酰谷氨酰胺二肽能促进体外培养的肠黏膜细胞的增殖, 并具有改善回肠营养的作用[9]。在早期断乳仔猪日粮中应用Gln肽, 可以降低早期断乳对仔猪造成的应激, 有效提高仔猪的生产性能[11]。席鹏彬等[12]、曾翠平[13]、杨彩梅[14]也有相似报道。

3 小麦蛋白源谷氨酰胺肽

目前可以通过酶法、碱法、人工嫁接法及基因表达法等方法获取肽。利用酶法分解小麦蛋白来制备小麦活性肽是近年来的研究热点。小麦蛋白在酶的作用下, 得到的小肽分子量大小容易控制且无毒, 小麦蛋白原有的多种性质发生了改变, 包括乳化、起泡、吸水、增稠等性质, 一定程度提高了小麦蛋白的营养价值和生理功能[15]。酶解后得到的小肽中含有丰富的Gln活性肽, 这些小分子肽可以被动物肠道直接吸收, 对动物体发挥动力、载体、运输、递质和营养等生理功能。

最早利用麦谷蛋白制得富含Gln活性肽的营养液并申请专利的是日本的研究者[16]。最近的研究表明[17], 利用小麦蛋白制得的Gln活性肽营养液中有效Gln的量可以高达213.5 mg/g。Tanabe等[18]酶解谷蛋白后得到的富含Gln小肽的营养液能够显著提高大鼠肠道黏膜的代谢速率, 降低肠道炎症的产生, 其生理功能优于相同氨基酸组成的氨基酸单体混合物。杨小军等[19]给SD大鼠灌喂小麦蛋白的胃蛋白酶解物, 能够有效提高SD大鼠免疫器官的增殖, 增加肠道SIg A的分泌量, 增强肠道免疫功能。周业飞[20]利用弹性蛋白酶制得的小麦蛋白酶解物可以一定程度提高AA肉鸡免疫器官的重量和免疫器官指数。王石等[21]研究表明, 仔猪断乳前期, 在日粮中添加小麦蛋白酶解物能有效降低仔猪的腹泻率, 且效果优于血浆蛋白添加组。国外最新研究表明, 经过特殊生化处理制得的水解小麦蛋白饲料, 可提高仔猪饲料的消化效率, 无抗营养因子, 可促进仔猪肠道绒毛的发育, 获得较高的饲料转化效率, 可替代昂贵的喷雾干燥血浆蛋白 (2.5%~8%) , 同时用作犊牛的代乳料, 可替代大豆分离蛋白 (5%~8%) [22]。

通过酶解法制取小麦蛋白源活性肽, 特别是Gln肽因其各种优点而受到青睐的同时, 在实际生产或实验室制备时, 酶解法因受酶特异性以及小麦蛋白特性影响, 还存在酶解率低、产物纯度差等不足之处。在保证酶解产物生物活性同时如何提高蛋白酶解效率仍然是需要解决的课题。此外, 实际生产中酶解工艺线性放大也需要进行更深入的研究[23]。

复方谷氨酰胺 篇8

谷氨酰胺 (glutamine, GLN) 是人体血浆和细胞内含量最丰富的氨基酸, 约占血液游离氨基酸的50%, 是肠黏膜细胞、免疫细胞、成纤维细胞、淋巴细胞等增生代谢旺盛细胞的主要能量来源[3], 它既能产生ATP供能, 又能提供氮源作为合成核酸及蛋白质的原料。上世纪八十年代以来, GLN开始应用于创伤领域, 经过多年的动物实验及临床研究, 发现在大手术、烧伤、创伤等严重消耗性疾病时, 机体组织对谷氨酰胺的消耗明量显增加, 若补充不足或不及时, 则将导致机体谷氨酰胺的缺乏, 从而产生细胞结构及功能受损、免疫功能低下等一系列的变化。目前谷氨酰胺在临床上的应用多针对各种代谢应激所导致的胃肠损伤的保护作用, 同时也证实了谷氨酰胺改善肠黏膜细胞能量代谢的作用机制, 并明确其有良好的临床效果[4,5]。有学者认为[6], 谷氨酰胺可能具有双向免疫调节作用, 其在增强机体免疫功能的同时, 还可抑制炎症因子的表达。谷氨酰胺因其独特的生理功能, 在不同的组织器官损伤中具有不同的保护作用。现对谷氨酰胺在肺损伤中的保护作用研究进展综述如下。

1 谷氨酰胺的生理功能及药理作用

谷氨酰胺是人体内最丰富的氨基酸之一, 是含两个氮原子的特殊氨基酸, 可以直接为其他氨基酸、核酸和蛋白质的合成提供氮源, 血液中氨基酸的转运有30%～35%是靠谷氨酰胺完成的, 因此它是体内许多物质代谢过程的中间体, 具有促进蛋白合成、降低高分解代谢、提高机体免疫功能、调节炎症反应、保护肠屏障等多种功能。谷氨酰胺也是快速增殖、分化细胞的能源物质之一。正常血浆浓度为0.6～0.9mmol/L, 但在应激情况下, 机体对谷氨酰胺利用明显增加, 导致蛋白质合成的减少, 机体免疫功能的下降, 肠道细菌移位等[7], 此时及时补充外源性谷氨酰胺就显得极为重要。因此, 谷氨酰胺也被认为是机体应激状态时的条件必需氨基酸[8]。

目前认为谷氨酰胺具有以下一些药理作用: (1) 谷氨酰胺能转化为谷氨酸, 促进肝脏合成谷胱甘肽 (GSH) , 增强机体抗氧化能力。 (2) 能促进蛋白合成, 防止肌肉组织过度分解, 降低多器官功能不全的发生率。 (3) 能减轻应激时肠道损伤程度, 保护肠黏膜屏障, 防止菌群、内毒素移行, 降低肠源性感染的发生。 (4) 能减少应激状态下蛋白分解, 促进蛋白合成, 改善患者全身状况, 减少并发症。 (5) 谷氨酰胺参与免疫细胞的物质、能量代谢, 提高机体免疫力, 降低感染率。

2 谷氨酰胺肺保护作用机制

在某些病理状态下, 血浆中和细胞内谷氨酰胺水平下降, 内源性储备的谷氨酰胺及其的合成均不能满足机体组织、器官的正常需求, 从而引起糖、脂肪、蛋白质三大物质代谢的明显异常, 可进一步导致免疫力下降、肠道功能衰竭。因此, 外源性补充谷氨酰胺有抗分解代谢及促进细胞合成代谢的作用, 促进蛋白合成, 能防止肌肉过度分解。同时, 谷氨酰胺有减轻肠黏膜损伤及优化肠黏膜屏障功能, 可减少内毒素释放, 从而减轻组织、器官的损伤。谷氨酰胺除了对全身的影响外, 对肺脏又具有特殊的保护作用。

2.1 谷氨酰胺抑制炎症反应作用

GLN诱导热休克蛋白 (heat shock protein, HSP) 表达[9]。HSP是细胞对热环境产生反应并合成的一组特殊蛋白质, 在生理和应激条件下均能产生。HSP的合成对细胞损伤具有明显的保护作用, 在应激状态下表达量不能满足机体的需要, 而GLN被证明是一种安全有效的增强HSP表达并且改善危重患者预后的措施[10,11]。

HSP的抗炎作用与其抑制核因子-κB (nuclear factor-κB, NF-κB) 的活性, 减少炎症介质的产生有关。NF-κB是一类能与多种炎症免疫因子基因启动部位的κB位点发生特异性结合并促进转录的蛋白的总称。所以抑制NF-κB活性是减少炎症介质产生的重要途径。研究发现大鼠在致伤性机械通气4h后, 肺组织HSP70的表达较正常条件通气组增加, 通过给予谷氨酰胺诱导肺组织HSP70大量表达, 发挥上皮/内皮细胞保护作用, 调节失控的炎症反应, 从而减轻细胞损伤及脏器功能障碍, 阻止ALI/ARDS的进展[12]。

2.2 谷氨酰胺抑制细胞凋亡作用

细胞凋亡是一种适应性机制, 控制细胞死亡而使整个生物体能够幸存。GLN参与调节凋亡酶, 对细胞内的氧化还原平衡产生重要的影响, 主要表现在对细胞信号传导系统产生的影响。在活性氧的作用下, 诱导激活了原来处于无活性、酶原状态的Caspases, 从而导致细胞凋亡。目前认为, 细胞凋亡增加是ALI的发病机制之一。GLN可以减轻大鼠肠源性脓毒症引起的肺和远端脏器损伤, 通过实验可见谷氨酰胺干预组大鼠炎症反应明显减轻, 氧合改善, 肺上皮细胞凋亡明显减轻。

2.3 谷氨酰胺抗氧化损伤作用

肺缺血再灌注以及在炎症介质作用下, 激活吞噬细胞, 产生大量氧自由基, 攻击生物膜上不饱和脂肪酸, 发生脂质过氧化, 使膜通透性增高, 从而加大了肺组织生物膜及细胞器的脂质过氧化反应。谷胱甘肽 (GSH) 是重要的抗氧化剂, 应激状态下GSH减少, 补充谷氨酰胺有助于增加GSH水平, 利于减轻内皮细胞受到氧自由基介导的损伤, 利于稳定细胞膜和蛋白质结构, 以增强机体抗氧化的能力。GLN可诱导细胞HSP表达, HSP能保护血红素氧合酶-1 (HO-1) 的产生, 可以减轻脂质过氧化、蛋白氧化、中性粒细胞侵润及细胞凋亡, 防止ATP消耗, 减少氧自由基的产生, 起到保护细胞的作用[13]。

3 谷氨酰胺增强机体免疫功能作用

免疫系统中的中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞利用谷氨酰胺作为核苷酸前体合成的氮供体和原料, 因此, GLN可以促进淋巴细胞和巨噬细胞的有丝分裂、分化增殖, 还可以促进磷脂mRNA的合成。严重创伤、烧伤以及感染均引起不同程度的炎症反应, 血浆GLN水平明显降低, 免疫细胞增殖受限, 大量炎症介导致组织损伤和器官功能下降。提供外源性GLN可显著增加危重患者淋巴细胞总数、T淋巴细胞数及循环中CD4/CD8的比率, 可抑制TNF-a、IL-6等的过度产生, 从而避免过强的炎症反应, 改善机体免疫机制异常, 对组织细胞及免疫功能起到了保护作用[14]。

4 谷氨酰胺调节酸碱平衡、营养支持作用

机体组织细胞的正常代谢需要一个适宜的酸碱环境, ALI/ARDS患者因气血交换功能障碍导致机体酸碱平衡紊乱, 影响细胞正常的生理活动。谷氨酰胺通过肾脏和在细胞内发挥酸碱调节能力从而调节体内氨基的平衡代谢。在代谢旺盛而酸负荷过重的危重患者, 肌肉组织蛋白大量分解而呈负氮平衡, 导致营养不良, 机体免疫力下降。及时补充足量的外源性谷氨酰胺及其他营养物质对促进正氮平衡、调整细胞内氧化还原电位起到细胞保护作用[15,16]。

5 谷氨酰胺的临床应用

谷氨酰胺作为一种安全的HSP诱导剂[17,18], 目前已用于临床实践。给予危重患者应用谷氨酰胺可降低脓毒血症、肺炎的发生率, 减少住院时间和医疗费用。有研究认为[19], 危重患者在疾病早期通过静脉途径补充外源性谷氨酰胺, 不仅可有效改善患者的营养状况, 还可使患者血浆GSH水平增高, 提高机体抗氧化能力。

GLN的补充应遵循早期足量原则。休克、感染、烧伤、机械通气是ALI/ARDS的常见病因, 这些疾病状态下血浆GLN骤减, 炎症介质大量释放, 此时及时足量地补充外源性GLN可以发挥其肺保护作用抑制疾病的发生发展。白涛等认为[20], 谷氨酰胺延迟给药未对脂多糖致大鼠急性肺损伤起到保护作用。可能是当损伤后体内瀑布式炎症反应已经发生时再给予GLN已经不能有效地阻断炎症介质级联效应。

目前认为肠内和静脉给药对于肺损伤均有保护作用[21]。肠道给予GLN营养液的直接刺激可以改善细胞能量代谢、恢复细胞活性、减轻肠道损伤、促进修复。静脉给药目前多采用稳定且溶解好的丙氨酸/甘氨酸-谷氨酰胺二肽制剂。在发生肠功能不全的24h内给予静脉营养, 24～28h后尽快启动肠道营养以维持肠道屏障完整性, 可减少菌群移位[22,23], 并发挥其肺保护的重要作用。因谷氨酰胺为氨基酸类药物, 故在慢性肾功能衰竭患者中应慎用, 过量应用可能对肾脏造成损害。因血氨可诱发肝性脑病甚至肝昏迷, 故对有严重的肝硬化及其他代谢性疾病的患者禁用GLN。

谷氨酰胺可在ALI/ARDS发生发展的诸多环节中发挥重要的保护作用, 其临床应用价值令人期待。目前大多数的研究仅停留在动物实验基础上, 在人体中的研究资料尚不多见。有关谷氨酰胺的肺保护作用机制、给药时机、给药途径及给药剂量等问题, 仍有待进一步探讨, 以更好地指导临床实践。

摘要：谷氨酰胺被称为“非必需氨基酸”, 但是在应激和危重状态下, 则成为必需氨基酸。谷氨酰胺除做为主要氮源物质外, 还对多种组织器官具有保护作用, 因此引起人们越来越多的关注, 对谷氨酰胺的研究不断深入。本文从谷氨酰胺的生理功能、药理作用、对肺脏的保护作用及其在临床应用中的前景等方面进行综述。