肥大细胞

肥大细胞（精选8篇）

肥大细胞 篇1

牦牛(yak)是青藏高原特有的珍稀畜种,其对高寒、缺氧、低压、强紫外线照射等多种环境刺激具有极强的适应性[1]。因此,牦牛消化道黏膜免疫特性应具有独特的适应基础。家畜肠道不仅具有对营养物质消化和吸收的功能,同时也具有免疫屏障功能[2]。已有学者对相关动物肠道黏膜上皮内淋巴细胞的分布和数量进行了研究[3,4]。到目前为止,有关牦牛肠道黏膜浆细胞、肥大细胞与杯状细胞的分布特点和比较变化规律,尚未见系统报道。本研究对牦牛肠道黏膜浆细胞、肥大细胞与杯状细胞的分布进行了比较观察,探讨牦牛肠道黏膜的屏障特性。

1 材料与方法

1.1 动物及样品处理

16例牦牛(10♂6♀)均来自青海某屠宰场。经颈动脉放血处死后,迅速切取十二指肠、空肠、回肠、结肠、盲肠和直肠数段。每例牦牛十二指肠、空肠、回肠、盲肠与直肠每隔10cm取一块(约5cm),分别取4块。牦牛结肠较长,每例结肠每隔80cm取一块(约5cm),共取8块。样品置于4%多聚甲醛磷酸缓冲液中固定。同时,在牦牛放血处死后30min内切取肠道各段黏膜(1mm3)数块电镜样品,于2%多聚甲醛-2.5%戊二醛溶液中固定,4℃冰箱保存。

1.2 石蜡切片与染色

固定后的样品,常规石蜡包埋,制备连续切片。HE染色、Masson三色染色、PAS (高碘酸-Schiff氏)染色、MGP(甲基绿派洛宁,Methyl green-Pyronin)染色及MTB (甲苯胺蓝)染色,光镜观察。

1.3 透射电镜观察

对所取电镜材料采用2%多聚甲醛-2.5%戊二醛溶液预固定后,再经1%锇酸PBS溶液后固定,丙酮乙醇梯度脱水,Epon812环氧树脂包埋,超薄切片机切片,醋酸铀与硝酸铅双重染色,透射电子显微镜观察、照相。

1.4 测量与数据处理

采用光镜对牦牛肠道各段连续切片进行观察、拍照,以及测量、统计(采用Image-Pro Plus软件)。每段肠道做连续切片,每隔十张取一张,共取5张。选取肠道各段黏膜上皮细胞排列整齐连续的切片,统计每150个上皮细胞间的淋巴细胞数量。对数据进行单因素方差分析和比较(采用SPSS17.0软件)。

2 结果

研究结果表明,牦牛肠道浆细胞主要分布于肠黏膜固有层的肠腺之间,胞核位于细胞中央或一端。在整个肠道中浆细胞数量在盲肠分布最丰富(图1)。小肠从十二指肠、空肠到回肠浆细胞逐渐增多且差异显著(P<0.05),盲肠达到最多,从盲肠、结肠至直肠依次减小(表1)。杯状细胞散在于肠黏膜上皮细胞和肠腺柱状细胞之间,细胞顶部因含有糖原颗粒而膨大,底部纤细,呈典型的高脚杯状(图1)。杯状细胞在直肠数量最多(表1)(图2),在盲肠最少,两者差异显著(P<0.05),结肠与直肠之间差异不显著,结肠与盲肠之间差异显著(P<0.05)(表1)。直肠因杯状细胞分泌大量黏液,使黏膜表面覆有厚层黏性薄膜。在小肠杯状细胞由十二指肠到回肠也是逐渐减少且差异显著(P<0.05)(表1)。肥大细胞大多分布于肠黏膜固有层肠腺及小血管和小淋巴管周围,黏膜下层、肌层和浆膜有少量分布。肥大细胞数量在十二指肠黏膜分布最多(图3),由十二指肠到回肠逐渐减少且差异显著(P<0.05)(表1)。大肠肥大细胞与小肠比较相对较少,且结肠和盲肠差异不显著,直肠分布最少(表1)。

注:数据比较,标有相同字母的数据间差异不显著(P>0.05),不同字母标注的数据差异显著(P<0.05)。

电镜下,浆细胞呈椭圆形,核膜清晰,胞质中除少量线粒体外,几乎充满粗糙型内质网(图4)。杯状细胞顶端呈不规则游离面,散在于柱状细胞之间,细胞间界限轮廓清晰,顶部侧面与相邻细胞以中间连接和桥粒相连,胞质中充满着黏液颗粒,有些颗粒相互融合,成为较大的分泌泡。肥大细胞呈椭圆形,细胞核较大,核膜清晰可见,胞质内有高电子密度的大小不等的圆形颗粒聚集(图5)。

3 讨论

肠道不仅是消化、吸收营养物质的场所,而且具有重要的免疫屏障功能[5]。黏膜的防御功能与黏膜的各种免疫相关细胞的数量和分布密切相关。浆细胞、肥大细胞与杯状细胞在肠黏膜免疫屏障中扮演着重要的角色。肠黏膜浆细胞、肥大细胞与杯状细胞作为肠道相关淋巴组织中的一个特殊组分,是机体免疫系统中与外来抗原以及微生物发生接触的重要免疫细胞,同时也是产生免疫应答反应的重要细胞[6,7],可诱导产生一系列黏膜免疫应答。因此,肠道黏膜浆细胞、肥大细胞与杯状细胞的数量可以反映肠道局部黏膜免疫屏障的完整及免疫防御功能的完善程度。本研究表明,牦牛肠道浆细胞主要分布于肠黏膜固有层的肠腺之间,胞核位于细胞中央或一端。在整个肠道中浆细胞数量在盲肠分布最丰富。而浆细胞是B淋巴细胞发育的最终阶段,主要参与体液免疫[8,9]。大量IgA可通过分泌片段的介导进入肠黏膜表面,中和抗原物质(如细菌、毒素等),起到清除外来抗原和保护机体的作用[10]。

本研究也表明,牦牛肠道杯状细胞散在于肠黏膜上皮细胞和肠腺柱状细胞之间,细胞顶部因含有糖原颗粒而膨大,底部纤细,呈典型的高脚杯状。杯状细胞在直肠数量最多。直肠因杯状细胞分泌大量黏液,使黏膜表面覆有厚层黏性薄膜。而分泌黏蛋白是杯状细胞的主要功能之一。黏蛋白可对机体肠黏膜起到机械性保护作用,是肠道机械屏障的组成之一[9,10,11]。

牦牛肠道肥大细胞大多分布于肠黏膜固有层肠腺及小血管和小淋巴管周围,黏膜下层、肌层和浆膜有少量分布。肥大细胞数量在十二指肠黏膜分布最多。而肥大细胞源于骨髓造血干细胞,其增殖分化成熟中随血流迁移至结缔组织。一方面,在动物机体天然免疫中肥大细胞发挥着重要的作用;另一方面,肥大细胞还能产生多种生物活性物质,通过这些生物活性物质参与机体获得性免疫[11,12]。

总之,牦牛肠道黏膜具有丰富的浆细胞、肥大细胞和杯状细胞,其分布并不均匀,它们在牦牛对环境适应及黏膜免疫屏障保护中具有十分重要的作用。

参考文献

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肥大细胞 篇2

鼻翼肥大的两种类型：

1、鼻翼宽大合并鼻孔宽大者

可选择施行鼻翼基底部分切除、鼻孔缩小术。设计切口位于鼻翼基底及鼻翼沟下部，局麻下适当切除部分鼻翼基底全层组织，然后内旋推进，缩小鼻孔，分层间断缝合。术后可见瘢痕长度一般不超过1CM。

2、鼻孔不大、鼻翼过厚或鼻翼沟上部过于丰满者

在切口位于鼻翼沟及鼻翼游离缘内侧，手术操作较为方便，由于鼻子处于面部的显要位置，大鼻子整形手术从纵横双向切除部分鼻翼组织，纠正了鼻翼长度，缩小了鼻孔周径，术后鼻翼肥厚较术前均明显改善，整个鼻部外观更加协调，增添美感，并且手术切口瘢痕隐蔽、细小达到了良好的美容效果。

鼻翼肥大太宽怎么办?鼻翼缩小来“解决”。

一、鼻翼肥大鼻翼太宽怎么缩小?

鼻翼宽时鼻孔就会显得很大，如果鼻翼很宽，就算鼻子不低也会显得很低。鼻子低而鼻翼稍微宽时只进行隆鼻术就可以达到鼻翼缩小自然的效果。但是鼻翼很宽的人，需做鼻翼缩小术才能使整个鼻子显得协调。

二、鼻翼缩小的手术方法：

1、鼻翼不太宽时可插入鼻小柱内辅助柱，鼻尖行软骨移植术，鼻尖就会挺上去，鼻翼幅度就会缩小，不需要动别的手术。所以需不需要缩小鼻翼必须在行挺立鼻尖的手术后再评价判断。

2、鼻翼切除术主要适用于东方人或黑人，是鼻底太宽或鼻孔太大时缩小鼻翼的方法。鼻翼宽时大多是因为鼻翼皮肤多余，应切除鼻翼下边皮肤后缝合切口缩小鼻翼，可使鼻孔显得长。切口留在鼻翼和颊的界线，疤痕很不显眼。

肥大细胞 篇3

关键词：硒缺乏,鸡,免疫器官,肥大细胞,超微结构

硒是谷胱甘肽过氧化物酶的必需组分, 参与体内抗过氧化物氧化过程, 使细胞膜免受过氧化物的损害, 对细胞膜的结构和功能具有保护作用。肥大细胞 (mast cell, MC) 是重要的免疫细胞, 能分泌多种生物活性物质, 在速发型变态反应和炎症反应中起重要作用, 可能与抗寄生虫感染、抗肿瘤等有关。研究证明, 肥大细胞的形态学、颗粒化学成分和超微结构特征及功能具有高度异质性[1]。研究硒缺乏对鸡免疫器官中肥大细胞超微结构的影响, 对揭示硒缺乏对肥大细胞功能的影响及病理机制具有十分重要的意义。试验在复制雏鸡硒缺乏病理模型基础上, 应用透射电镜技术对鸡免疫器官中肥大细胞的形态结构、细胞质颗粒状态进行超微结构观察, 探讨硒缺乏与免疫器官肥大细胞超微结构的关系。

1 材料与方法

1.1 试验动物及分组

选择10只1日龄健康海兰褐蛋用雏鸡随机分成2组, 每组5只。第1组为试验组, 饲喂自配低硒饲料, 该混合料的硒含量经测定为0.032 mg/kg[预混料中含5%未添加硒元素的全价饲料, 玉米含量为63.5%, 豆粕含量为28%、麦麸含量为3.5% (各种饲料均来源于缺硒地区黑龙江省齐齐哈尔市龙江县) ];第2组为对照组, 日粮组成在自配低硒饲料基础上添加亚硒酸钠 (纯度98%, 含硒44.7 mg/kg) (根据饲料标准每千克饲料添加0.44 mg亚硒酸钠, 测得硒含量为0.229 mg/kg) 。试验组与对照组均自由采食与饮水, 加强饲养管理, 做好消毒防疫工作。

1.2 血清硒含量的测定

试验鸡75日龄时断头处死 (先禁食12 h) , 取血液分离血清, 采用原子吸收法测定硒含量:取血清0.2 mL于磨口三角瓶内, 加入10 mL混合酸液 (5%Na2MoO4∶H2SO4∶HClO4=3∶3∶4) , 过夜后加热至黄色, 再冷却变为无色;消化后加入EDTA混合液20 mL, 混匀, 用1∶1氨水及浓盐酸调pH值至1.5～2.0;于冷水中冷却后转入暗室, 加入0.1%DAN试剂3 mL混匀, 沸水浴5 min;冷却后加环己烷3.0 mL, 振摇4 min;转入分液漏斗, 待分层后放掉水层, 将环己烷层倾入试管中测定荧光强度。

精确取标准硒溶液 (0.5 μg/mL) 0, 0.2, 1.0, 2.0, 4.0 mL加去离子水至5 mL, 然后进行测定。计算公式:硒含量 (μg/g) =[标准硒含量 (μg) / (标准硒荧光读数-空白荧光读数) ]×[ (样本荧光读数-空白荧光读数) /样本重量 (g) ]。

1.3 电镜标本的制备

将75日龄鸡断头处死后, 立即取出脾脏、胸腺和法氏囊, 切成0.5 cm2的组织块, 用0.1 mol/L磷酸缓冲液 (pH值7.2) 配制的4%戊二醛4 ℃固定2 h后再切成1 mm×2 mm的小块;用含10%蔗糖的磷酸盐缓冲液洗3次, 每次10 min;用1%锇酸后固定, 4 ℃ 1 h;梯度丙酮脱水, 环氧树胶包埋;0.1%甲苯胺蓝染色, 光镜检查定位, 选分布大量肥大细胞的部位进行LKB超薄切片 (厚约为50 nm) ;醋酸双氧铀、柠檬酸铅双重染色;JEM100-CXⅡ透射电镜观察。

2 结果

2.1 血清中硒含量的测定结果及缺硒组鸡的临床表现

经计算, 缺硒组与对照组全血硒含量分别为 (0.049±0.012) μg/g和 (0.287±0.036) μg/g, 二者差异极显著 (P<0.01) 。

缺硒组鸡的临床表现:食欲不振, 站立困难, 不愿走动, 头向前倾, 细步前进, 精神沉郁、羽毛蓬松, 软弱无力, 眼睑半闭, 双翅下垂;全身皮下组织出现淡绿色或青色水肿, 触之有波动感, 腹部和双腿内侧皮下有积液, 穿刺可看见有黄绿色黏性液体流出。

临床表现及硒含量的测定结果说明硒缺乏病例模型复制成功。

2.2 免疫器官中肥大细胞的超微结构观察结果 (见图1～6)

2.2.1 胸腺

电镜下, 对照组鸡胸腺内含有大量的肥大细胞, 它们主要分布于髓质, 肥大细胞表面有少许突起, 并与淋巴细胞、网状上皮细胞等密切接触;胞体和胞核呈圆形、椭圆形或略微不规则形, 核仁明显, 异染色质贴附于核膜下, 核中央有时可见块状异染色质, 核质比大小不等;胞质内含较丰富的细胞器, 如线粒体、游离核糖体、高尔基复合体等, 并有大量的分泌颗粒, 颗粒多呈圆形或椭圆形, 少数为不规则形, 大小不一, 表面有膜包裹, 内部结构呈现多样性。有的颗粒内含细颗粒状致密物, 有的含中等电子密度的羊绒状物, 有的呈均质状高电子密度 (见图1) 。缺硒组胞内异染色质增多, 胞浆颗粒明显增多 (见图2) 。

2.2.2 法氏囊

法氏囊淋巴滤泡内肥大细胞的形态与淋巴结和脾脏中的肥大细胞相同, 对照组胞核呈椭圆形, 胞浆颗粒呈均质状 (见图3) 。缺硒组中硒含量越低胞核固缩越明显, 胞浆颗粒逐渐呈高电子密度 (见图4) 。

2.2.3 脾脏

脾结缔组织中的肥大细胞形态多样, 胞体和胞核呈圆形、椭圆形或略微不规则形, 核仁明显, 表面可见少量短的突起, 核中央有时可见块状异染色质, 核质比大小不一;胞浆内除了常见细胞器外, 尚可见数量不等、大小基本一致、电子密度高低不等的两类颗粒结构。对照组颗粒中含有绒毛状、杆状等特殊亚微结构, 表面可见微绒毛, 无空泡形成 (见图5) ;缺硒组随硒含量降低胞浆内颗粒增多, 并逐渐互相融合形成空泡 (见图6) 。

试验结果表明, 缺硒组肥大细胞多为脱颗粒的, 直接与变性细胞密切接触, 有的和血管内皮紧密接触, 在此部位的血管内可见有大量淋巴细胞黏附, 异染色质增多, 核偏位或固缩, 胞质稀疏, 其特点为细胞器不发达, 胞浆中颗粒增大, 密度增大, 颗粒间互相融合, 颗粒与胞膜融合形成空泡 (见图6) ;有时可见胞浆内颗粒向细胞表面突出, 有时被排挤在细胞外并遗留空腔, 形成所谓的脱颗粒管道[2]。

3 讨论

在硒缺乏雏鸡的淋巴器官中观察到大量的肥大细胞, 主要分布在与外界抗原直接接触的浅层黏膜组织和病变严重的上皮细胞周围[3], 提示鸡免疫器官中肥大细胞的分布与变性上皮有密切关系, 其胞浆颗粒的内部构造呈电子密度不同的均质状, 这与对照组鸡淋巴器官的肥大细胞相似, 但颗粒内部密度较对照组稍高, 数量也显著增多, 且颗粒密度随着硒含量的降低而升高, 这可能与肥大细胞的活动状态有关。硒缺乏时, 鸡的肠黏膜变厚, 充血或轻度出血, 通透性增大, 黏液分泌增加, 肥大细胞脱颗粒并释放炎性介质。同时肥大细胞直接与变性细胞紧密接触, 有的和血管相接触, 在此部位的血管内可见有大量淋巴细胞黏附。这提示了肥大细胞与免疫活性细胞有一定的联系。

鸡胸腺的肥大细胞主要分布于髓质, 并与淋巴细胞、网状上皮细胞等密切接触。胸腺肥大细胞分泌于颗粒内, 有的含细颗粒状致密物, 有的含中等电子密度的羊绒状物, 有的呈均质状高电子密度[4]。法氏囊中肥大细胞主要分布于淋巴滤泡周围的结缔组织中, 胞浆颗粒多呈细颗粒、均质状。而脾脏中的肥大细胞主要分布在脾小结周围、血管周围、被膜下的浅层实质中, 部分颗粒含有绒毛状、指纹状或杆状等特殊亚微结构, 大多为均质状高电子密度颗粒。这种超微结构差异与其酶组分不同有关, 而肥大细胞分泌颗粒的超微结构与其富含多糖物质密切相关, 并且超微结构的变化与缺硒程度也有一定的相关性。

参考文献

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肥大细胞 篇4

1 材料和方法

1.1 研究对象

1.1.1 牙周炎病例选择

2008~2010 年在暨南大学第一附属医院牙周科门诊就诊的20~60 岁成年人,无糖尿病和其他系统疾病;纳入标准依据美国牙周病学会1999 年的牙周病新分类指南[2];所有受试者均签署知情同意书。

1.1.2 分组

轻度慢性牙周炎组:牙龈有炎症,探诊出血,牙周袋≤4 mm,附着丧失≤2 mm,共17 例,为接受牙周翻瓣术者;重度慢性牙周炎组:牙周袋>6 mm,附着丧失≥5 mm,牙松动Ⅲ度,共18 例,为无保留价值或预后极差的患牙需要拔除者;正常对照组:15 例,取自因正畸治疗需要拔除的正常前磨牙且牙周健康者。

1.2 实验方法

1.2.1 组织标本采集、处理与观察

牙龈标本于4%中性甲醛液中固定48 h以上,制成5 μm厚度切片,HE染色,光学显微镜下观察牙周组织学改变。由2 名病理医师盲法观察,对牙周组织的炎细胞浸润情况进行评分,求其平均值。炎症程度评分标准如下:0:无炎症细胞浸润;1:轻度炎症,炎症细胞局部呈小灶状浸润;2:中度炎症,炎症细胞呈灶状及片状浸润;3:重度炎症,炎症细胞在牙周组织内呈弥漫性浸润。

1.2.2 纤维化染色和等级评分标准

采用天狼猩红染色来观察牙周组织胶原纤维的沉积情况。结果由2 名病理医师在光镜下盲法观察,对牙周组织胶原纤维的沉积情况进行评分,求其平均值。评分标准如下:0:正常牙周组织,无胶原纤维沉积;1:出现少量胶原纤维;2:胶原纤维沉积增多并迁延;3:大量胶原纤维呈弥漫性分布,出现条索状或薄层状胶原纤维。

1.2.3 牙周组织肥大细胞及脱颗粒观察

采用甲苯胺蓝染色法来观察肥大细胞及其脱颗粒的情况。染色切片由2 名作者于光镜下观察肥大细胞形态并计数,取其平均值。形态判定方法:细胞膜完整、细胞核染色清楚的为稳定状态肥大细胞;细胞核破裂、周围组织中存在蓝染状颗粒的为脱颗粒肥大细胞。计数方法为:每张切片在高倍视野(×400)下选取肥大细胞数目最多的5 个视野进行计数,计算5 个视野肥大细胞总数和脱颗粒率各自的平均值。脱颗粒率=(脱颗粒肥大细胞数/肥大细胞总数)×100%。

1.2.4 统计学分析

应用GraphPad Prism统计学分析软件进行分析,不同组间的牙周组织病理学观察数据使用Wilcoxon 符号秩检验分析,不同组间的肥大细胞数量和脱颗粒百分率用Student's t检验分析。

2 结 果

2.1 组织学观察

正常对照组:没有发现炎性细胞浸润(图 1A);轻度慢性牙周炎组:有少量散在炎性细胞浸润(图 1B);重度慢性牙周炎组:表现出明显的炎性细胞浸润,有单核细胞分布和点状破坏,出现大范围的淋巴细胞、浆细胞和肥大细胞浸润,可见散在分布的巨噬细胞样细胞及多形核细胞(图 1C)。图 2表明重度慢性牙周炎组的得分明显比轻度慢性牙周炎组高(P<0.05)。

A: 健康对照组; B: 轻度慢性牙周炎组; C: 重度慢性牙周炎组

2.2 肥大细胞数量和肥大细胞脱颗粒情况

正常对照组:牙周组织中肥大细胞数量极少,且不伴脱颗粒现象(图 3A);轻度慢性牙周炎组:肥大细胞数量显著增加伴脱颗粒现象(图 3B);重度慢性牙周炎组:有大量的肥大细胞和明显的脱颗粒现象(图 3C)。图 4显示:与正常对照组相比,牙周炎组的肥大细胞和脱颗粒的肥大细胞数量明显上升(P<0.01),其中,重度慢性牙周炎组显著高于轻度慢性牙周炎组(P<0.01)。

2.3 纤维化程度分析

正常对照组:天狼猩红染色不明显,提示在正常对照组中缺乏胶原纤维沉积(图 5A);轻度慢性牙周炎组:可见炎症细胞浸润和胶原纤维沉积(图 5B)。重度慢性牙周炎组表现为显著的炎症细胞浸润和呈细线状或板块状的胶原纤维沉积(图 5C);图 6显示随着牙周炎症程度的加重,牙周组织的纤维化程度亦加重。

3 讨 论

肥大细胞通常分布在如皮肤、消化道等机体与外界环境相通的地方, 与树突状细胞一起是造血-免疫

系统中首先与环境中的应变原、病原体接触并相互作用的细胞群体。肥大细胞和免疫反应的其他细胞之间存在潜在的功能性联系,激活的肥大细胞紧邻浆细胞和淋巴细胞,在各种获得性免疫反应包括多种炎症反应性疾病中相互作用[3],活化的效应T细胞激活肥大细胞,导致其脱颗粒和释放多种细胞因子包括组织胺(histamine, HA)、白三烯、血小板活化因子、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、肿瘤坏死因子- α(tumor necrosis factor- α,TNF- α)和一氧化氮等[4]。

A: 健康对照组; B: 轻度慢性牙周炎组; C: 重度慢性牙周炎组

关于肥大细胞在牙周炎组织中的作用,有观点完全相反的报道。Gemmell等[5]观察到肥大细胞在慢性牙周炎组织中的数量比正常牙龈组织少,但Batista等[6]的研究显示肥大细胞的数量在慢性牙周炎组织较正常牙龈组织增加。本研究观察到肥大细胞在慢性牙周炎中的数量较正常牙龈组织明显增多且有明显的脱颗粒现象,提示肥大细胞可能参与慢性炎症的防御和破坏机制,结果与Batista 等的研究一致。

肥大细胞作为效应细胞及其释放的活性介质在牙周病中的作用尚未明确。Zhang等[7]的研究发现,TNF- α能够诱导内皮细胞E选择素的表达,使中性粒细胞、T淋巴细胞、单核细胞、白细胞等黏附和聚集;同时,肥大细胞募集除了在宿主牙周感染免疫反应中起着关键作用外,也可能在牙槽骨吸收的病理过程中发挥潜在作用。肥大细胞介质如肝素、HA、神经蛋白酶、前列腺素、白细胞介素等可影响骨的转换和重建[8]。Dobigny等[9]在动物模型中观察到,阻止小鼠的HA摄入量可以抑制破骨细胞的激活,使破骨细胞的生成数量减少,说明肥大细胞释放的HA等介质参加骨代谢调节的过程。TNF- α参与破骨细胞的分化和增殖[10]以及诱导金属蛋白酶的表达,而金属蛋白酶能够促进胶原和其他细胞外基质蛋白裂解,从而引起组织的破坏。

在我们的研究中,健康牙龈组织几乎观察不到纤维化的现象,在慢性牙周炎组织中出现明显的纤维化现象,纤维化的严重程度在重度慢性牙周炎组显著高于轻度慢性牙周炎组。同时,脱颗粒的肥大细胞数在重度慢性牙周炎组明显地高于轻度慢性牙周炎组,提示在慢性牙周炎中肥大细胞可通过释放活性介质以刺

A: 健康对照组; B: 轻度慢性牙周炎组; C: 重度慢性牙周炎组

激成纤维细胞增殖和胶原沉积,从而导致牙周组织纤维化。许多研究发现,肥大细胞是促成各种纤维化的条件,其合成和分泌活性介质和细胞因子,如类胰蛋白酶、糜蛋白酶、HA、肝素和细胞因子如TNF- α、bFGF等刺激成纤维细胞增多和细胞外基质积聚,促进组织纤维化[11]。Gruber等[12]发现类胰蛋白酶能够促进成纤维细胞增生,激活胶原酶,刺激原胶原向纤维胶原转化,在体外诱导成纤维增殖和胶原蛋白合成。肥大细胞对成纤维细胞的功能调节主要是通过释放的活性物质介导,两者相互作用,既参与复杂的炎症反应又参与组织纤维化的发生发展。通过调节肥大细胞的功能活动将为防治牙周病提供有价值的依据、制订更好的治疗措施。

参考文献

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肥大细胞 篇5

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验动物及饲料。

昆明系小白鼠scxk (黔) 2002-0001和饲料, 均购自贵阳医学院实验动物中心。

精氨酸 (Arg) , 纯度≥99.8%, 购自北京某生物技术有限公司。

1.1.2 主要试剂及药品。

甲苯胺蓝 (TB) , SigmaT3260;盐酸、乙醇、氯仿、氢氧化钠、二甲苯、柠檬酸钠、柠檬酸三钠等常规试剂。

1.1.3 主要仪器。

TP1020自动组织脱水处理机, 德国产;Mias图像采集系统, 四川大学计算机系图像图形研究所研发;RM2125旋转式切片机, 德国产。

1.2 试验方法

将40只雌小白鼠 (体重为35.0±3.0 g) 随机分为4组:对照组 (饲喂基础日粮) , 0.25%Arg组、0.5%Arg组和1.0%Arg组 (基础日粮中分别加入2.50、5、10 g·kg-1Arg, 拌饲) , 每组10只, 分笼饲养, 饲养环境一致, 食物和水自由摄取。预饲1周后, 按雌雄比例2∶1配种。当晚将雄鼠放进雌鼠笼内, 次日早晨检查雌鼠, 若有阴道栓的判定为怀孕第1 d。妊娠到第15 d时禁食24 h, 然后处死妊娠小鼠, 计数胎鼠, 再取孕鼠子宫组织经Carnoy′s液固定, 甲苯胺蓝染色镜检, 观察并计数MC。

1.3 数据处理

各组试验数据以平均数±标准误 (MEAN±SEM) 表示, 用SPSS13.0软件中One-way ANOVA进行统计分析。

2 结果

2.1 精氨酸对胎鼠宫内生长的影响

由表1可见, 0.5%Arg组的胎鼠数极显著高于对照组、0.25%Arg组和1.0%Arg组 (P<0.01) , 对照组、0.25%Arg、1.0%Arg组间的胎鼠数差异不显著 (P>0.05) 。

2.2 精氨酸对孕鼠子宫MC数量的影响

孕鼠子宫组织经Carnoy′s液固定, TB染色后镜检, 发现MC主要分布于肌层近血管处, 外膜中较少, 内膜内极少, 胞体大小、形态不一, 着染紫红色, 胞质颗粒清晰 (详见图1~图4) 。由表2可见, 0.25%Arg和0.5%Arg组的子宫MC数量较对照组显著减少 (P<0.05) ;1.0%Arg组的子宫MC数量较对照组极显著减少 (P<0.01) 。1.0%Arg组的子宫MC数量比0.25%Arg和0.5%Arg组显著减少 (P<0.05) 。

注:与对照组比较, *表示差异显著 (P<0.05) ;**表示差异极显著 (P<0.01) , 下同。

注:箭头所指为MC, 下同

3 讨论

本试验结果显示, 0.5%Arg组的胎鼠数极显著高于对照组、0.25%Arg组和1.0%Arg组, 而且0.25%Arg组较对照组和1.0%Arg组都偏高。说明Arg在不同动物日粮中的添加量必须适中, 在生产上使用时必须找准最佳添加剂量, 这与王喜波 (2007) 等、谢小利 (2008) 等的报道一致。大量研究表明, 子宫MC在性周期中呈规律性波动, 啮齿类动物在胚胎着床前MC数量达到一个高峰, 在着床期内数目减少。Nakaura等报道MC还可能与卵泡的破裂即排卵有关。本试验中, 子宫中MC主要分布在肌层近血管处, 小血管和微血管周围分布较多, 浆膜和黏膜层很少, 细胞形态、大小不一, 胞浆内充满紫红色的粗大颗粒, 紧密地围绕在细胞核周围;在MC数量上, 0.25%Arg和0.5%Arg组较对照组显著减少 (P<0.05) ;1.0%Arg组较对照组极显著减少 (P<0.01) ;1.0%Arg组比0.25%Arg和0.5%Arg组显著减少 (P<0.05) 。这说明在妊娠期间添加适量Arg可能对妊娠小鼠调节子宫组织MC脱颗粒反应, 减少MC在子宫中的分布, 维持子宫内环境相对稳定等有重要作用。

参考文献

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肥大细胞 篇6

1 资料与方法

1.1 一般资料

总结该院新生儿科收治的弥漫性皮肤肥大细胞增生症的31例患儿, 对其临床资料进行回顾性的分析。女性患儿为12例, 男性患儿为19例, 体重为3 483~4 034 g, 测得平均体温为 (36.84±2.83) ℃。所有患儿母亲为初产妇, 患儿为足月剖宫产分娩, 出生后第1天皮肤出现轻微暗红色的斑疹的患儿为14例;出生21~34 d后, 所有患儿的腹背、胸前、躯干部位出现红色丘疹, 随后迅速蔓延至全身, 且在温暖环境下患儿皮肤瘙痒加剧难以忍耐, 出现潮红, 皮肤表面有明显的抓痕。但所有患儿并未出现晕厥、便血、恶心、腹痛等不良症状。根据母亲表述证实, 排除了孕期滥服药物、接触放射性物质或毒物等致病条件, 无此类病症家族史, 父母身体均健康。

1.2 方法

所有患儿入院后立即进行多方面检查, 皮肤科检查后得出, 患儿皮肤处可明显看见淡黄色或淡红色的苔藓化丘疹和色素沉积, 且大小不一, 形状各异。在患儿四肢或头皮的部位出现黄豆粒大小的血袍、水疱, 疱液清亮, 但有些由于瘙痒抓破后出现结痂。之后对患儿进行骨髓细胞学检查、腹部B超等检查, 通过实验室检查血液后得出红细胞计数、白细胞计数、血红蛋白数值、血小板计数等并进行记录。确诊后给予赛庚啶与曲安西龙药物治疗, 口服赛庚啶药物, 3次/d, 2mg/次;曲安西龙药物, 口服4~12mg, 1次/d。直到病情好转后停药, 若出现的皮肤肥大细胞瘤呈孤立性, 可运用手术的方法进行切除。

1.3 疗效标准

痊愈:确诊并接受治疗后, 皮损现象得到完全恢复或恢复90%以上, 肝脾肿大消失。显效:确诊并接受治疗后, 皮损现象明显恢复或恢复到75%以上, 肝脾肿大明显消失。有效:确诊并接受治疗后, 皮损现象基本恢复或恢复40%-60%以上。无效:确诊并接受治疗后, 皮损现象未能消失或恢复25%以下。

1.4 统计方法

采用SPSS14.0统计学软件对数据进行分析, 所得计量资料采用t检验, 计数资料采用χ2检验。

2 结果

通过对患儿骨髓细胞学的检查, 发现有细胞核的细胞较为活跃, 骨髓粒细胞系统中主要为中杆状细胞。细胞核的成熟度、形态等未出现异常[3]。对皮损组织的病理进行检查后得出, 真皮内血管的周围出现大量肥大细胞的侵润现象, 细胞核为卵圆形、圆形, 见图1。腹部B超检查得出所有患儿肝脏肾脏等器官出现明显的肿大现象。根据以上检查结合临床病症, 确诊患儿为该病病症, 见图2。经赛庚啶与曲安西龙药物治疗后, 再次对血液的红细胞计数、白细胞计数、血红蛋白数值、血小板计数进行检查, 治疗前后对比差异有统计学意义 (P<0.05) 。见表1。根据治疗标准, 治疗有效的患儿为28例, 无效患儿为3例, 治愈有效率为90.32%。见表2。有3例患儿服药期间产生轻微的口干、嗜睡等不适症状, 但用药一段时间后, 不适症状得到缓解。

3 讨论

皮肤性肥大细胞增生症的病症形态与其他皮肤病变疾病较为相似, 在临床诊断中常出现误诊现象。根据该疾病皮损的状态分型除弥漫性外, 还可分为持久性、单发性、大疱性、色素性这5种类型[4]。弥漫性类型较为少见, 成人与新生儿均可发病, 但新生儿或<2岁的婴幼儿发病率较高, 且脾、肝常常出现肿大现象。有研究表明该疾病与遗传、家族史毫无联系, 是由多种病理性机制产生的疾病[5]。发病后在患儿皮肤上可出现结节、丘疹或出现轻微水疱症状, 呈弥漫性的分布。与色素性相比发病年龄较早, 大多在出生后1 d或1岁之前就可发病。该研究中患儿在出生34 d后皮肤组织病变加重, 首先在躯干、胸前出现丘疹和水疱症状, 迅速蔓延到身体各处。入院后可明显看到患儿头部有水疱破溃后留下的结痂, 经血液诊断后得出, 血小板计数超出正常范围值较多, 有必要留院进行骨髓等详细检查诊断[6]。B超诊断后患儿的肝脾器官均出现肿大现象;皮损检查出现大量侵润现象, 最终确诊为该病。立即给予患儿口服赛庚啶与曲安西龙药物, 有效的改善患儿临床症状。赛庚啶药物为抗组胺类药物, 同时对抗胆碱也起到一定作用。曲安西龙为一种激素类药物具有抗炎的作用, 与同类型的抗炎药物相比, 抗炎效果更强, 出现的钠潴留现象较轻, 口服后能被患儿更好吸收[7]。该药物还可给予注射给药, 药效一般可维持较长时间。但由于该研究的患儿均为新生儿年龄较小, 控制药物剂量防止用药过量出现意外状况。本次研究中, 给予药物治疗后, 有效率为90.32%, 与其他相关研究结果比较, 患儿临床症状与治疗结果基本一致。由于该研究的患儿中并未出现孤立性的肥大细胞瘤, 所以不需要进行切除手术[8]。运用赛庚啶与曲安西龙药物治疗该病, 具有较好的疗效, 但还需对预后进行长期观察研究, 以表明此类药物对该病治疗的长久性。

综上所述, 该病患儿在发病后及时对症治疗, 大大降低新生儿肝脾器官及皮肤的损害。

参考文献

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肥大细胞 篇7

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集我院2006年2月至2010年6月门诊及住院按照2008年WHO造血与淋巴组织肿瘤分类标准[1]确诊的2例系统性肥大细胞增生症(SM)患者的临床病理档案资料。男性与女性各1例,年龄分别为73岁和57岁。临床及实验室资料见后。

1.2 方法

1.2.1 标本制备

骨髓标本取材部位为髂前或髂后上棘。骨髓涂片为瑞特染色,分类计数200个有核细胞,计算不同细胞成分比例。骨髓活检标本用10%中性福尔马林固定,梯度酒精脱水,石蜡包埋制片(厚3μm),经H-E染色及甲苯胺蓝染色光镜观察。

1.2.2 免疫组化

常规石蜡包埋制片,Elivsion二步法免疫组化染色,所用抗体为CD2、CD25、CD117、MPO、lysozyme,CD3,CD20,CK(北京DAKO公司)。阴性对照用PBS代替一抗,用已知阳性片作为阳性对照。

2 结果

2.1 临床特征

1例以皮肤瘙痒7年加重伴乏力2月就诊。查体示脾肿大肋下5cm,浅表淋巴结及肝脏均不大;另1例以面苍、乏力、发热5月余就诊。查体示双下肢、背部少量出血点以外。2例患者均无面色潮红、腹泻、心悸、骨骼肌肉痛等症状。全身皮肤未见皮疹。

2.2 血液学检查

2.2.1 血象

血红蛋白分别为66 g/L、38g/L;白细胞3.3×109/L、1.6×109/L;血小板28×109/L、174×109/L。血涂片分类1例淋巴细胞比例增高(52.3%),另1例未见异常。

2.2.2 骨髓涂片

均出现肥大细胞增多,分别为15.5%、6.5%。细胞胞体大,呈梭形。胞质丰富,散在嗜碱性颗粒。核圆形、卵圆形,部分胞核呈分叶状。粒系、红系、巨核系无明显发育异常。未见原始细胞增多。

2.3 骨髓病理学特点

2.3.1 形态学

骨髓均增生活跃,粒系、红系、巨核系细胞增生,粒、红系细胞分化正常,形态偏成熟,未见核左移。巨核细胞无明显异常。一类异常细胞呈多灶性分布,位于骨小梁旁及小梁之间。细胞胞体大,胞质丰富,核圆、卵圆或呈梭形,染色质稍粗,核仁不明显(图1、2)。伴有淋巴细胞、嗜酸粒细胞、纤维母细胞增生。网状纤维染色示网硬蛋白显著增生,以瘤细胞浸润处最为显著。骨小梁未见明显改变。

2.3.2 特殊染色

甲苯胺蓝染色,胞质中可见紫红色颗粒(图3)。

2.3.3 免疫组化

异常细胞为CD117(+)(图4),CD25(+)(图5),MPO(-),Lysozyme(-),CD2(-),CD20(-),CD3(-),CK(-)。

图1 骨髓增生活跃,异常细胞灶性浸润,位于骨小梁旁。图2 异常细胞胞体大,圆形或梭形,胞质丰富,核圆或卵圆形,密集灶性分布。纤维组织增生明显。图3 甲苯胺蓝染色可见胞质内紫红色颗粒。图4 免疫组化CD117(+)。图5 免疫组化CD25(+)。

3 讨论

肥大细胞增生症是由肥大细胞的克隆性增生所致的恶性肿瘤。按照世界卫生组织(WHO)2008年淋巴造血组织肿瘤分类中的有关标准,根据瘤细胞的侵犯部位不同,将肥大细胞增生症分为两大类型:皮肤肥大细胞增生症(CM)和系统性肥大细胞增生症(SM)[1]。前者病变仅限于皮肤;后者则侵犯皮肤以外的部位,伴或不伴有皮肤侵犯。SM的主要病理学特点为肿瘤性肥大细胞过度增生,在一个或多个脏器中聚集浸润,以骨髓、脾脏、淋巴结、骨组织和肝脏的侵犯最为常见。本病的发生与kit原癌基因突变有着密切关系,kit基因密码子816(D816V)的突变使其编码的kit蛋白(即CD117,为酪氨酸激酶受体,表达于肥大细胞表面)异常,导致酪氨酸激酶信号转导通路异常激活,肥大细胞出现异常增生、恶变[1]。

SM约占肥大细胞增生症的10%[2],其症状是由肥大细胞增生并释放出调节因子而产生的,可出现乏力、体重减轻、发热和出汗、皮肤搔痒和皮疹、胃肠不适、血压异常、心动过速以及骨关节痛和肌痛[3]。主要临床病理特点为:(1)通常见于成人(男女比例为1:1～3);(2)临床表现具有异质性,可为无症状的惰性病程,也可为多脏器损害的侵袭性病程,脾脏肿大常见,肝脏及淋巴结肿大少见;(3)多数病例血清总类胰蛋白酶持续性增高>20ng/mL(正常人1～15ng/ml)。(4)一或多个脏器中异常肥大细胞密集灶性增生(甲苯胺蓝染色阳性);(5)肥大细胞免疫表型为CD117(+)、Tryptase(+)、Chymase(+)、CD2(+)、CD25(+),不表达粒细胞、单核细胞、T细胞以及B细胞系别特异性标记(MPO、CD14、CD3、CD20);(6)绝大多数病例(>90%)有特征性的遗传学异常-KIT基因的密码子816的点突变[1,2]。

2008年WHO造血与淋巴组织肿瘤分类中,SM的诊断标准中包括一个主要标准和四个次要标准,若符合主要标准及一个次要标准或至少三个次要标准可诊断为SM。具体如下:(1)主要标准:骨髓切片和/或其它皮肤外的器官中发现多灶性、密集的肥大细胞浸润(浸润灶中肥大细胞≥15个);(2)次要标准:①骨髓活检切片或其它皮肤外器官中,肥大细胞浸润灶中>25%为梭形或形态不典型,或骨髓穿刺涂片所有肥大细胞中,>25%为不成熟或不典型;②骨髓、血液或另一个皮肤外器官中查到KIT基因的密码子816的活化点突变;③骨髓、血液或其他皮肤外器官中肥大细胞除表达正常肥大细胞标记以外,还表达CD2和/或CD25;④血清总类胰蛋白酶浓度持续>20ng/mL(除伴有克隆性髓系疾病该参数无效外)(1)。我们的病例中,骨髓涂片与骨髓活检切片中均可见异常肥大细胞增生,切片中肥大细胞呈密集灶性或片状分布,免疫组化示瘤细胞呈CD117(+),CD25(+)。尽管未作分子遗传学检查和血清类胰蛋白酶浓度监测,但由于符合主要标准及次要标准中的第①和第③项,因此诊断是成立的。

SM的血液学异常包括贫血、白细胞增多、嗜酸粒细胞增多、中性粒细胞减少及血小板减少。罕见出现大量肥大细胞,若外周血肥大细胞≥10%,则提示为肥大细胞白血病。SM的骨髓涂片中,肥大细胞主要包括4种类型:(1) 异染性母细胞型。胞质中有少量甲苯胺蓝异染颗粒;(2)不典型肥大细胞Ⅰ型。胞体梭形, 颗粒少,核卵圆、偏位;(3) 不典型肥大细胞Ⅱ型。又称为幼肥大细胞,核为双叶或多叶;(4)典型(成熟)肥大细胞。胞体圆形、卵圆形;胞质充满嗜碱性颗粒。核圆,居中,核染色质致密,无核仁。同一病例中可有多种形态肥大细胞混合存在,但以不典型肥大细胞Ⅰ型最为多见[4]。本文病例骨髓涂片中也是以梭形肥大细胞(即不典型肥大细胞Ⅰ型)增生为主。

几乎所有SM病例均可出现骨髓侵犯[1]。SM侵犯骨髓包括三种方式:(1)灶性、密集浸润:最常见。浸润灶多位于骨小梁旁和/或血管周围。。病灶由数量不等的肥大细胞、淋巴细胞、嗜酸粒细胞、组织细胞和纤维母细胞组成。通常以淋巴细胞为中心,被肥大细胞包绕。或以密集分布的肥大细胞为中心,外周为宽带状淋巴细胞。病灶也可主要由梭形肥大细胞组成,靠近骨小梁或沿骨小梁呈溪流样分布。常见显著的网状纤维增生及骨小梁增宽;(2)弥漫性:肥大细胞增弥漫性密集增生,造血细胞明显减少。细胞形态显著异型,类似于纤维母细胞。伴有纤维化;(3)混合性:上述两型混合存在。常导致骨髓衰竭表现,出现重度外周血三系细胞减少[5]。免疫组化检测,正常肥大细胞表达CD117、Tryptase、Chymase,不表达CD34、CD20、CD3、CD38、CD15、CD2、CD25。正常与肿瘤性肥大细胞的最大区别在于肿瘤性肥大细胞为CD2(+)、CD25(+),而正常肥大细胞均阴性。本文免疫组化为CD25(+),因此提示为肥大细胞为肿瘤性增生,支持SM的诊断。

SM的骨髓病变主要与下列疾病鉴别:(1) 反应性肥大细胞增生。见于变态反应性疾病、淋巴瘤(如淋巴浆细胞性淋巴瘤)、慢性肾病、恶性肿瘤等。反应性增生的肥大细胞胞体呈圆形,骨髓中散在稀疏分布,免疫组化为CD2(-)、CD25(-),无kit基因突变;(2)急性髓系白血病(AML)。主要与急性早幼粒细胞白血病(M3)、急性单核细胞白血病(M5)鉴别。AML粒系标记(MPO、CD13、CD15)或单核系标记(CD14、lysozyme、CD163),甲苯胺蓝染色[3]髓系肿瘤伴肥大细胞增生。见于骨髓增生异常综合征、骨髓增殖性肿瘤、急性髓系白血病。上述疾病可伴有骨髓肥大细胞增生,可出现不典型肥大细胞形态,但不符合SM的诊断标准;(3)Tryptase阳性的AML。为罕见的AML类型,原始细胞强表达Tryptase,但尚可表达髓系标记MPO,而CD2、CD25常阴性[6];(4)髓系-肥大细胞白血病(myelomastocytic leukaemia)。髓系肿瘤(AML、MDS、CML、CMML)晚期,骨髓中出现幼稚、不典型的肥大细胞增多,肥大细胞Tryptase(+)、Chymase(+)。但不够SM的诊断标准,免疫组化为CD2(-)、CD25(-);亦无kit基因突变[7];(5)毛细胞白血病(HCL)。 HCL属于B细胞淋巴瘤,瘤细胞胞质丰富,核间距宽,常伴有骨髓纤维化,需与SM中不典型肥大细胞增生鉴别。HCL的免疫表型为CD20、PAX5等B细胞标记阳性,不表达tryptase、chymase与CD117,无kit基因突变;(6)骨髓纤维化(MF)。SM的瘤细胞可出现显著异型,呈梭形,类似于纤维母细胞样,通过免疫组化标记有助于区分SM与MF。

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肥大细胞 篇8

1 材料与方法

1.1 实验动物与试剂

健康雄性清洁级Wistar大鼠108只，体重250g～300g，均由山西医科大学实验动物中心提供，安静屏障环境喂养。硝酸甘油注射液：造模药物，由北京益民药业有限公司生产（批准文号：国药准字H11020289，产品批号：20120601）。养血清脑颗粒天津天士力制药股份有限公司生产（批准文号：国药准字Z10960082，产品批号：120208），每袋4g，用蒸馏水配制成高剂量养血清脑颗粒溶液（0.32g/mL）及低剂量养血清脑颗粒溶液（0.16g/mL）备用。

1.2 实验方法

1.2.1 造模与分组

将108只健康雄性Wistar大鼠分为正常对照组、模型对照组、治疗高剂量组、治疗低剂量组、预防高剂量组及预防低剂量组，各组再随机分为30 min、60 min、180 min组，分别于造模后相应时间点处死大鼠切取标本。根据Tassorelli[3]皮下注射硝酸甘油建立大鼠偏头痛模型。正常对照组予皮下注射生理盐水，大鼠出现短时间的、次数不多的挠头、爬笼动作，未见耳红。治疗高、低剂量组大鼠在造模后10min分别灌胃高、低剂量养血清脑颗粒1次，预防高、低剂量组大鼠在造模前分别灌胃高、低剂量养血清脑颗粒7d。

1.2.2 标本制备

正常对照组、模型对照组、治疗高剂量组、治疗低剂量组、预防高剂量组及预防低剂量组的30min、60min、180min亚组于造模后灌注固定。于挠头明显侧剪取2块硬脑膜组织，将其投入4%多聚甲醛（pH 7.4,4℃）过夜固定，第二天行石蜡包埋切片，每张4μm，连续切片5张。根据赵汝香等[4]所述的Brandon改良甲苯胺蓝染色法对肥大细胞进行特染。计数肥大细胞（MCs）总数和脱颗粒数目（胞膜出现明显破裂或有颗粒外逸为脱颗粒）。计算肥大细胞脱颗粒阳性率。

1.3 统计学处理

计量资料以均数±标准差表示，运用SPSS17.0统计软件分析。各组间先行正态性检验及方差齐性检验。在各组总体方差相等的情况下，采用单因素的方差分析，各组间比较用LSD-t比较。分析给药顺序、剂量、时间的交互效应采用析因设计方差分析。检验水准为α=0.05。

2 结果

2.1 行为学观察

通过对大鼠各时段爬笼、挠头、咬趾、往返等行为学指标进行观察发现，正常对照组在造模后30min内偏头痛相关行为明显多于其他时间段，考虑为给药操作激惹所致。治疗高、低剂量组各时段与模型对照组相比无统计学意义（P>0.05），预防高、低剂量组与模型对照组相比有统计学意义（P<0.001）。

2.2 硬脑膜肥大细胞脱颗粒阳性率

镜下可见肥大细胞多分布于血管周围，呈圆形或椭圆形，胞浆内充满嗜碱性颗粒，被甲苯胺蓝染成蓝紫色或紫红色，其中部分肥大细胞膜破裂，可见紫红色颗粒逸出细胞外，甚至丧失原有的细胞形态，仅见呈爆裂样成簇分布的紫红色颗粒。详见表1。

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3 讨论

1983年有学者发现[5]，肥大细胞可能参与偏头痛的发病过程，流行病学研究显示患有MC相关疾病（如哮喘、湿疹、鼻炎及间质性膀胱炎）的患者中偏头痛发病率明显增高，MC与偏头痛密切联系[6]，硬脑膜或大脑的肥大细胞可能参与发作过程。肥大细胞起源于远处骨髓中的祖先细胞，通过软脑膜进入脑组织并在局部微环境中成熟[7]，通常位于血管周围，与神经元关系密切。肥大细胞不仅在免疫反应中至关重要，而且也参与炎症反应[8]、自身免疫反应[9,10]等，尤其在那些与情绪有关的疾病中发挥重要作用[11]。当三叉神经[12]、颈部[13]或者蝶颚部神经节[14]受到刺激后会激活硬脑膜上的肥大细胞。动物实验表明神经肽类物质，如P物质（SP)[15]、垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP)[16]、CGRP[15,17]、生长抑素[18]、神经加压素（NT)[19]、甲状旁腺激素[20]等，均可刺激肥大细胞脱颗粒并分泌炎症介质。脑膜痛觉感受器激活后这些神经肽类可能由神经周围突分泌[21]。其他研究显示[22]，精神压力作为偏头痛的诱发因素，通过由促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）介导的相关机制也可诱导硬脑膜肥大细胞脱颗粒。肥大细胞脱颗粒可以分泌多种与偏头痛密切相关的介质，如组胺、白三烯[23]、肿瘤坏死因子（TNF-α）、IL-6[24]、内皮素-1[25]等。肥大细胞还分泌各种促炎介质，比如激肽、前列腺素。大脑肥大细胞可以调节脑内血管的渗透性[26]。

伴有先兆的偏头痛发作时，皮层扩散抑制（CSD）致脑膜痛觉感受器激活，很可能通过神经轴突反射促使硬脑膜肥大细胞脱颗粒。而肥大细胞脱颗粒可以进一步使脑膜痛觉感受器及偏头痛痛觉通路维持激活状态。肥大细胞分泌的多种因子中作为偏头痛介质激活脑膜痛觉感受器的可能有5-羟色胺（5-HT）、前列环素，另外还可能有组胺、类胰蛋白酶[27,28]，其中5-HT作用最为重要。5-HT主要通过其中枢神经系统作用参与偏头痛的发病，但是其对脑膜痛觉感受器强大的调节作用提示很可能存在5-HT致偏头痛的周围机制[29]。

本实验根据Brandon等改良后的甲苯胺蓝染色法对硬脑膜肥大细胞进行研究，结果显示模型对照组大鼠硬脑膜肥大细胞脱颗粒阳性率明显高于其他各组，硝酸甘油致偏头痛模型可以增加硬脑膜肥大细胞脱颗粒阳性率，说明了NO具有诱导肥大细胞脱颗粒的作用，印证了偏头痛发病过程中存在肥大细胞脱颗粒现象，且主要位于硬脑膜上，它可能参与了NO所致的三叉神经血管系统激活过程。为了减少实验误差和避免精神压力对实验大鼠的影响，我们选择了安静屏障环境喂养大鼠及进行各阶段实验，单独环境进行单鼠实验操作，以减少对大鼠的各种刺激。

本实验观察高、低剂量养血清脑颗粒对硝酸甘油致偏头痛大鼠模型的治疗和预防作用，发现造模后30min内预防高、低剂量组偏头痛大鼠硬脑膜肥大细胞脱颗粒阳性率与模型对照组相比即有明显降低，而预防高剂量组与预防低剂量组相比未表现出明显优势，提示预防性使用养血清脑颗粒可能在偏头痛起始阶段发挥抗偏头痛作用，该作用可能与其在发作早期稳定肥大细胞膜减少脱颗粒有关，也说明其对偏头痛的预防作用可能大于治疗作用，与临床试验结果相一致[30]。针对各因素交互效应的方差分析结果显示，给药顺序（即治疗性干预或者预防性干预）对行为学指标及硬脑膜肥大细胞脱颗粒阳性率的影响较为明显，而给药剂量以及两者的交互作用不显著，目前还不能认为预防性使用高剂量的养血清脑颗粒能够产生更大的疗效，仍需扩大样本量延长试验周期进一步研究论证。

摘要：目的 观察养血清脑颗粒对硝酸甘油致偏头痛大鼠硬脑膜肥大细胞(MC)脱颗粒的影响。方法 将108只健康雄性Wistar大鼠分为正常对照组、模型对照组、治疗高剂量组、治疗低剂量组、预防高剂量组及预防低剂量组,各组再随机分为30min、60min、180min亚组,通过皮下注射硝酸甘油(NTG)建立偏头痛实验动物模型,用改良的甲苯胺蓝染色法对硬脑膜肥大细胞进行特染,并进行组间比较。结果 治疗高、低剂量组大鼠各时间点硬脑膜肥大细胞脱颗粒阳性率与正常对照组相比无统计学意义(P>0.05),预防高/低剂量组大鼠各时间点硬脑膜肥大细胞脱颗粒阳性率与模型对照组相比有统计学意义(P<0.05)。结论 预防性使用养血清脑颗粒可以明显降低硬脑膜肥大细胞脱颗粒阳性率,提示养血清脑颗粒对偏头痛的预防作用可能大于治疗作用,其预防作用可能与稳定肥大细胞膜减少其脱颗粒有关。