皮肤组织病理学检查

皮肤组织病理学检查（精选3篇）

皮肤组织病理学检查 篇1

HE染色法是皮肤病理组织染色最常用也是最重要的一种病理学染色技术。皮肤病理组织HE切片的质量是皮肤科病理医生得以做出正确诊断的关键。皮肤组织较坚韧, 与其它组织病理切片的制备过程有所不同。若用传统HE染色法对皮肤病理组织进行固定、脱水、透明、浸蜡, 费时费力, 易出现脱水不完全, 使组织变得硬脆易碎, 很难制出效果良好的切片。从1998年开始, 我院皮肤科与病理科合作制作皮肤组织病理切片, 通过对200例皮肤病理组织制片的实践与摸索, 在传统HE染色方法的基础上, 不断进行改进, 找到了适合皮肤病理组织较理想的一种HE染色方法, 明显提高了皮肤病理组织切片的质量和制备速度, 现报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源

200例标本均为我院1998-2011年皮肤科门诊活检的皮肤病理组织, 其中男性84例, 女性116例, 年龄14~65岁, 平均年龄42.5岁。

1.2 仪器

全自动脱水机 (TSJ-3型) 、包埋机 (BJM4型, 常州中威) 、切片机 (Leica2125, 德国) 。

1.3 制备过程

1.3.1 标本

大小不超过1.5 cm×1.5 cm×0.2 cm, 以免大块组织深部未得到固定。此外在浸蜡时, 一定要把二甲苯清除干净, 因为即使少量二甲苯也会污染石蜡而产生结晶, 致使切片时组织碎裂。每步的具体时间见表1。

1.3.2 包埋

浸蜡结束后立即进行石蜡包埋, 组织包埋时石蜡温度应与组织温度相近, 不然会引起组织与周围石蜡脱裂, 影响制片质量[1]。

1.3.3 切片

注意在固定组织块时皮下组织在上, 表皮组织在下。以5~6 μm厚度连续切片, 每个标本连续切6张[2]。

1.3.4 染色

成功染色后胞核蓝染、胞浆红染。脱蜡用的二甲苯应经常过滤且定期更换。苏木素染液在新配制时, 由于着色力极强, 可以相应缩短染色时间, 以后随使用时间延长, 可适当延长染色时间;当染过200张切片后, 胞核着色不鲜艳、呈灰蓝色时, 染液应及时更换。苏木素染液使用一段时间后, 表面会出现亮晶状漂浮物, 这是液体表面的过氧化物, 必须过滤, 否则沾于组织上不易去掉。返蓝液中的碳酸氢钠不易过浓, 若碱性太强, 易使组织从载玻片上脱落, 染色中的脱片大多都因此发生, 故返蓝液中的碳酸氢钠以1 %为宜。分化和透明十分重要, 分化不够清晰、着色不佳时, 细胞成黑团状。分化后一定要镜检, 观察胞核是否清晰、胞浆是否呈淡白色, 若不清晰需再次分化, 否则一旦复染后, 组织即呈紫蓝色。透明欠佳时, 组织表面似有薄雾样膜, 若出现这一现象, 应立即更换100 %酒精脱水并再次透明, 在潮湿季节更应注意100 %酒精的浓度。

2 结果

皮肤组织HE染色改进法制备的切片, 可以长时间保存, 组织完整、结构清晰, 不易碎裂, 染色均匀、色泽鲜艳, 效果好。根据病理组织切片质量评判基本标准进行评价[3], 优良级制片率为92 %, 无不合格切片, 较改进前优良级制片率的70 %, 提高了22 %。

3 讨论

以前我们用常规HE染色法制作的皮肤病理组织切片, 染色时组织宜脱片;蜡块保存1个月以后再次切片时, 组织易碎, 无法制片。皮肤组织结构较特殊, 分为表皮、真皮和皮下脂肪组织。表皮层细胞较多、结构致密、组织较硬, 要求脱水、透明、浸蜡的时间较常规时间短, 以防组织脱水后变得脆、硬。真皮层主要由胶原纤维、弹力纤维、网状纤维与基质构成;皮下组织主要为脂肪, 细胞少, 结构疏松;这两层组织结构要求脱水、透明、浸蜡的时间较常规时间长。为中和两者之间的矛盾, 在长期的实践摸索中, 我们延长了皮肤组织在两个95 %酒精中的脱水时间, 缩短了两个100 %酒精的脱水时间, 这样既可使纤维组织和脂肪组织中大量的水分基本脱净、脂肪溶解, 又可避免表皮组织在100 %酒精中放置过长而变得脆、硬。环钻钻取的皮肤病理组织小标本固定时间不宜超过12 h, 因为表皮组织结构致密, 如固定时间过长, 甲醛结晶沉淀在表皮组织内, 流水冲洗时不易去除, 影响染色质量。脱水、透明、浸蜡的总时间不宜超过13 h。通过以上方法制作的皮肤病理标本保存时间长、制作切片时组织不宜脆裂, 染色后组织结构完整、色泽鲜艳, 缩短了制片时间, 制片后在同一张片子上能观察到表皮、真皮和皮下组织结构。

参考文献

[1]王伯沄, 李玉松.病理学技术[M].北京:人民卫生出版社, 2000:77-93.

[2]赵丽辉, 冷东明, 孙振柱.不同组织病理切片中常见的问题与对策[J].诊断病理学杂志, 2010, 17 (3) :24-25.

[3]中华医学会.中华医学会临床技术操作规范 (病理学分册) [M].北京:人民军医出版社, 2004:6-8.

皮肤组织病理学检查 篇2

1 材料

1.1 实验动物

成年SPF级SD大鼠50只, 雌雄兼用, 体重180～220g, 由甘肃中医学院科研实验中心SPF动物实验室提供, 动物合格证号:SCXK (甘) 2004-0006。

1.2 实验药品及试剂

生肤灵:由兰州中医骨伤科医院制剂室制备;百多邦软膏:中美 (天津) 史克制药有限公司, 批号:20100211。大鼠表皮生长因子 (EGF) 酶联免疫分析 (ELISA) 试剂盒:上海丰翔生物科技有限公司;戊巴比妥钠:中国医药集团上海化学试剂公司。

2 实验方法

2.1 动物分组

SD大鼠适应性喂养1周, 同时电子秤称量体重, 控制体重在 (200±20) g。将40只大鼠随机分为空白组, 模型组, 生肤灵高剂量组、生肤灵低剂量组, 百多邦软膏组, 每组10只, 标记。

2.2 造模

采用文献[4,5]报道的全层皮肤切除动物模型。用3%戊巴比妥钠 (40mg/kg) 腹腔麻醉, 麻醉成功后, 将大鼠固定于手术台上, 剃去大鼠背部及其周围的毛, 面积7cm2×4cm2, 碘伏消毒铺巾后, 在脊柱旁开0.5cm两侧, 按预先设计好的模板 (塑料板开1.6cm2×1.6cm2的空白窗) 用刀将范围内的皮肤切除, 但不要伤及脊柱旁肌肉上的脂肪及筋膜, 简单包扎后待后续处理。

2.3 给药与处置

造模成功后, 第2天开始用药, 模型组于创口处涂抹生肤灵膏剂的基质 (1g/200g) , 生肤灵高、低剂量组分别以生肤灵 (3.08g/kg、5.0g/kg) 涂抹, 百多邦组以百多邦5.0g/kg外涂, 每天给药1次, 连续给药7天。

2.4 观察指标及测定

肉眼观察并记录各组大鼠创面愈合情况。末次给药后2小时, 以戊巴比妥钠麻醉后处死动物, 进行有关指标的检测。取各组创面肉芽组织一块, 用4%多聚甲醛固定, 常规脱水、浸蜡、包埋, 常规切片, HE染色, 光镜观察。

创面修复情况按4级评分。0分:成纤维细胞大量增生, 新生毛细血管较少, 皮下结缔组织增厚, 炎性细胞减少甚至消失;1分:成纤维细胞增生, 新生毛细血管较少, 皮下结缔组织增厚, 少量炎性细胞浸润;2分:成纤维细胞少量增生, 新生毛细血管增多, 血管充血扩张, 大量炎性细胞浸润;3分:创面下大量新生毛细血管增生, 炎性细胞弥漫性浸润。每组4张切片, 每张切片随机选取5个视野, 计数新生毛细血管, 并计算均值。

2.5 统计学方法

采用SPSS13.0版软件包进行统计处理, 计量数据以undefined表示, 各组间比较采用t检验。

3 结果

3.1 各组大鼠创面肉眼观察

造模后2小时, 多数伤口湿润, 并伴有组织液的渗出, 模型组个别大鼠出现伤口化脓、红肿。造模后第3天 (用药第2天) 应用生肤灵及百多邦软膏治疗大鼠背部创面均已见有薄层肉芽组织生长, 创缘皮肤收缩明显。第7天, 百多邦组和生肤灵治疗组背部伤口已基本为肉芽组织填充, 百多邦组伤口干燥, 多数结痂, 伤口皮肤明显收缩, 未见感染;模型组创面仅见薄层肉芽组织, 创口面积也有明显缩小, 但创口新生组织较薄, 容易再次损伤, 个别大鼠创口有撕裂。

3.2 各组大鼠皮肤创面光镜观察

造模后第8天, 模型组坏死区较大, 炎性细胞多, 新生毛细血管数量少, 成纤维细胞增生较少。生肤灵高低剂量组的坏死区小, 炎性细胞少, 新生毛细血管丰富, 成纤维细胞增生明显;肉芽组织中可见大量新生毛细血管生成, 明显多于模型组。

阳性药物组亦可见新生血管及成纤维细胞大量增生。其病理评分见表1。

与模型组比较▲P<0.05, ▲▲P<0.01

4 讨论

皮肤受损后形成的创面如何治疗, 是现代医学面临的难题之一, 如治疗不当则易形成瘢痕。目前尚缺乏特效治疗瘢痕的药物与方法。研究证明[6], 创面运用活血化瘀中药对全身毛细血管通透性没有直接影响, 可避免发生微循环障碍, 但能显著促进创面局部毛细血管通透性, 其高峰主要表现在伤口愈合中期, 恰巧是临床的生肌长肉期。实验研究也证明[7]:外用中药在伤口愈合中期可使局部毛细血管通透性显著增加, 内皮细胞运输作用增强, 血液中有形与无形成分渗透至创面, 为基质内的巨噬细胞、成纤维细胞等及时提供了足够的营养及各种生长因子和淋巴因子, 促进巨噬细胞和成纤维细胞的增殖, 显著的增加创面局部的细胞免疫和体液免疫功能。中药生肤灵具有活血化瘀、解毒抗炎抑菌等功效, 临床研究证实具有促进创面愈合的作用[3]

本实验研究结果表明, 给药后第5天、第7天, 治疗组未愈合创面面积明显减小, 创面愈合率明显升高, 表明生肤灵在促进创伤修复方面有明显作用, 病理学观察表明生肤灵可明显减少皮肤肉芽组织的病理评分, 增加新生毛细血管数量, 为生肤灵治疗皮肤缺损提供微观证据。

摘要：目的:观察生肤灵对大鼠创面修复模型创面愈合情况及组织病理学变化的影响。方法:采用经典创伤修复模型, 外涂生肤灵, 收集创面第8天的肉芽组织, 高倍镜下进行病理切片观察。结果:给药后第7天 (造模后第8天) , 组织学检查发现生肤灵高低剂量组成纤维细胞活跃, 毛细血管丰富, 均明显多于模型组 (P<0.01和P<0.05) 。结论:中药生肤灵能够促进创面的修复。

关键词：创伤和损伤/中医药疗法,@生肤灵/治疗应用,创伤和损伤/病理学,皮肤,大鼠

参考文献

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[2]王临青, 潘建西, 张思胜, 等.生肤灵促进人体皮肤缺损修复的临床研究.中国中医药信息杂志, 2009, 16 (9) :18.

[3]潘建西, 甄文君, 薛有平, 等.生肤灵对人体皮肤缺损的临床研究.中国中医骨伤科杂志, 2007, 15 (7) ;39.

[4]黄清怡, 孔繁飞, 李莉, 等.玉红膏对大鼠皮肤创面愈合修复中神经肽P物质的影响.中国中医药信息杂志, 2008, 15 (1) ;39.

[5]付小兵, 王德文.创伤修复基础.北京:人民军医出版社, 1997:173.

[6]张德, 莫伟, 梁履华.不同血管吻合方式的脐旁皮瓣修复烧、创伤小腿大面积皮肤缺损.实用医学杂志, 2005, 21 (2) :197.

皮肤组织病理学检查 篇3

1 资料与方法

1.1 资料来源

选择2009年1至4月广东省珠海市人民医院妇科门诊或者住院患者中符合已婚、有生育史, 既往无相关病史;并且在液基细胞学检查后6个月内均有活检或者手术标本的病例, 以组织病理诊断作为金标准。共计120例, 年龄21～66岁, 平均年龄为40.14岁, 产次0～4次。

1.2 检查方法与诊断标准

采用安必平全自动液基细胞薄层制片仪制片, 制片后首先评估标本质量, 其中3例不满意涂片从研究组中剔除, 剩余117例由两位细胞病理医师在全盲的情况下以2001版的TBS系统进行读片并评估, 意见不一致时请第三位医师进行评估。2001年TBS诊断标准:未见上皮内病变或恶性病变 (NILM) 、意义不明的不典型鳞状上皮细胞 (ASC-US) 、不典型鳞状上皮细胞不除外高级别病变 (ASC-H) 、低级别鳞状上皮内病变 (LSIL, 包括HPV感染) 、高级别鳞状上皮内病变 (HSIL) 、鳞状细胞癌 (SCC) 、意义不明的不典型腺细胞 (AGC) 和腺癌 (AC) 。组织学活检前行宫颈醋酸发白试验或碘试验, 在阴道镜下观察, 并于阳性区域取活检, 如为阴性则取宫颈12、3、6/9点各一粒检验。活检组织学诊断包括:宫颈炎、宫颈上皮内瘤变 (即CIN, 包括CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ) 、宫颈鳞状细胞癌 (SCC) ;活检组织学报告由两位经验丰富高年资医师同时阅片, 作出诊断。

1.3 统计学分析

应用SPSS 10.0和EXECL软件进行数据处理和分析, 评价指标包括特异度、敏感度、阳性预测值、阴性预测值、阳性结果似然比、阴性结果似然比等诊断性试验常用指标。

2 结果

2.1 117例细胞学检查共检出ASCUS及以上病变26例, 占20%, 其中ASCUS为15例, 占12.8%;液基细胞学诊断结果与组织病理结果的比较, 见表1。

2.2以ASCUS为阳性界点和以LSIL为阳性界点的分层研究, 四格表分别如下 (表2、3) 。以ASCUS为界点时, 该诊断试验的灵敏度为0.95;特异度为0.92;阳性结果似然比 (LR+) 为13.16;阴性结果似然比 (LR-) 为0.05;阳性预测值为0.73。阴性预测值为0.99。以LSIL为界点时, 该诊断试验的灵敏度为0.50;特异度为0.99;阳性结果似然比 (LR+) 为48.5;阴性结果似然比 (LR-) 为0.51;阳性预测值为0.91, 阴性预测值为0.91。

3 讨论

一般认为, 液基细胞学无论从制片技术及诊断性能上都要优于传统涂片检查, 美国食品药品管理局 (FDA) 临床试验数据显示, LCT对常规人群HSIL和LSIL的检出率分别提高了59.7%和65%, 且LCT的假阳性率和假阴性率均比传统涂片都显著降低。潘秦镜等[2]报告, LCT能检出100%的SCC、97%的HSIL、61.4%的LSIL, 显示了高度的敏感性和特异性, 假阴性率仅为2.3%, 大大低于传统巴氏法的15%～50%。目前国内许多医院已经开展了液基细胞学技术, 传统涂片似乎正在慢慢被取代。我们的研究显示, 在以ASC为界点的分层研究中, 液基细胞学的诊断特异度稍低于敏感度, 但均为高于90%的高灵敏度和特异度, 相对于传统涂片的60%～80%的敏感度和特异度来说其优势不言而喻。但是我们认为, 得出的这种高敏感性和特异性可能与我们选择的病例偏倚有关, 在主动来医院就诊的患者中其阳性预期值要远高于一般无症状的筛查人群。在以LSIL为界点的分层研究中, 灵敏度呈现较大幅度的下降, 这是因为TBS诊断系统中存在ASC这样一个“灰色区域”的原因。不典型鳞状细胞 (ASC) 是宫颈TBS诊断系统中的一种不确定细胞学诊断方法, 被称为细胞学诊断中的“灰色地带”。在TBS筛查出的阳性患者中, 意义不明确的不典型鳞状上皮细胞 (ASCUS) 是一个常见的诊断[3,4,5], 这些病例经过组织学检查, 一部分可能会检查出肿瘤性病变, 另一部分也可能是子宫颈的良性病变, 如老年性鳞状上皮萎缩、不成熟鳞状上皮化生、及炎性反应性增生等, 而且ASCUS诊断的人为因素及主观性很强, 导致这些诊断的可重复性差。临床工作中, 如果ASCUS的诊断比例过高将会增加误诊病例, 比例过低, 又会使部分阳性患者漏诊。国内文献报道ASCUS的诊断在LCT检查中占到5.71%～7.23%, 美国国际癌症协会的数据提示在合理的情况下应将其控制在5%左右。我们的研究中高达12.8%的ASCUS比例仍然同我们选择的病例偏倚及样本量过小有关。据报道大约20%ASCUS经组织活检后被证实为CINⅡ或以上病变[6]。在我们研究的15例ASCUS活检后证实有3例为CINⅡ, 占20%, 与报道一致。另外在以LSIL为层面的诊断分析中, 敏感性降低的同时, 特异度有所升高, 阳性似然比也由ASCUS层面的13.16增加到48.5。说明如果以LSIL为起点进行阴道镜活检, 虽然诊断的准确性增加了, 但也会使较多的阳性病例甚至是高级别病变的病例漏诊。因此, 本着筛查的目的, 如果把液基细胞学作为单一的筛查诊断, 应以ASCUS作为阴道镜检查的起点, 尤其是在有症状主动就诊的人群中筛查更为重要。

还需要注意的一点是, 在判读为不满意标本的三个病例中, 随后的组织学证实一例为浸润性鳞状细胞癌, 一例为高级别鳞状上皮内病变 (CINⅡ) , 另一例是阴性[7]。根据TBS系统所述的一项纵向的研究发现, 经处理和判读的不满意标本通常来自更多高危患者, 其中相当数量的患者随访是鳞状上皮内病变或癌。这提示我们对于判读不满意的样本需要慎重处理。

参考文献

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