直接药敏试验（共10篇）
直接药敏试验 篇1
细菌感染病如控制不良, 易诱发菌血症或败血症, 甚至危机患者生命。随着抗生素临床应用增多, 甚至不合理应用, 使细菌耐药性及抗生素敏感性变异, 为临床治疗带来巨大困难[1]。为更好选择有效抗生素, 尽早控制感染, 我院对430例阳性血液样品进行直接药敏试验和常规药敏试验进行对比, 观察两种药敏试验临床效果, 现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
采集我院2011年1月—2012年10月528例门诊和住院患者的血液样品, 经美国Bac T9050型全自动血培养仪培养, 细菌鉴定时所使用的API鉴定板条。其他仪器及试剂包括:细菌鉴定、药敏综合板、药敏纸片以、MH干粉、血平板、巧克力平板、麦康凯平板、无菌拭子及一次性无菌注射器。
1.2 方法
1.2.1 直接药敏试验
取出全自动血培养阳性样本后以无菌注射器抽取并注入无菌试管内, 置入1500r/min离心机内进行细菌分离5min。然后收集试管上层清液置入3000r/min离心机内, 15min后取沉淀物进行0.9%氯化钠溶液洗涤2次, 收集均细胞黏液行涂片革兰染色, 观察细菌形态。如为一般菌则接种与MH平板上, 无菌拭子涂抹均匀并贴上药敏纸片。如为革兰阳性球菌 (G+) 呈链状, 则以MH+羊血平板进行初步药敏试验, 并据结果选择适当酶试验, 调整菌液浓度为6.2×102cfu/L至综合板上行药敏试验及细菌鉴定。
1.2.2 常规药敏试验
取阳性样本接种于不同平板, 于温度为35℃空气质量为5%CO2下孵育18~24h后进行革兰染色。据检测结果选择酶试验。
1.3 纸片选择
革兰阴性杆菌 (G-) 多选择头孢类抗生素, G+多选择β-内酰胺类、部分大环内酯类及万古霉素。
1.4 统计学方法
建立Excel数据库, 采用SPSS18.0统计软件进行分析, 计数资料采用率表示, 进行χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
528例血液样品经生化培养检出430例阳性样本, 其中直接法检出356例, 常规法检出430例, 符合率为82.79%。其中G-检出369株, G+检出61株。两种检测方法G-总符合率比较, 差异无统计学意义 (Z=-26.51, P>0.05) 。两种检测方法G+总符合率比较, 差异无统计学意义 (Z=-33.05, P>0.05, 见表1) 。
3 讨论
随着抗生素临床应用增多, 不合理抗生素使用率明显增高, 细菌多重耐药感染患者比例也明显增高, 易诱发全身感染性疾病, 甚至菌血症、败血症等, 严重危及患者生命。故快速、高效细菌鉴定和耐药性试验成为临床急需方法, 以此快速控制感染, 提高治愈率[2]。
目前, 临床以常规药敏试验为最常用方法。其原理为定性试验, 通过抑菌环直径与抗生素抑菌浓度负相关设计。由于条件要求较高, 使临床广泛应用具有局限性;其次检测时间较长, 通常为2~3d获得结果[3], 得到结果前, 只能依靠临床医生经验判断治疗, 对于多重耐药性细菌疗效往往较差, 导致延误最佳治疗时间, 加重病情;再有误差率偏高, 据相关文献报道, 误差约±2mm, 忽略误差后准确率约>95%[4]。种种条件均限制常规药敏试验快速、高效检验。
直接药敏试验为1973年首次提出, 逐渐引起各界学者重视, 于1986年美国学者Fincgold再次提出这一说法, 认为直接对临床血液标本进行检验, 可达到快速、高效检验目的[5]。本院通过研究发现, 其对G+及G-检验与常规药敏试验总符合率对比, 无明显差异, 而直接药敏试验结果却高于常规法。说明运用直接药敏试验可提高检出率。其次, 直接药敏试验平均检测时间约10h左右, 大大缩短检验时间;耗材少及操作步骤简单, 使各级医疗系统均可应用。
综上所述, 直接药敏试验与传统药敏试验在临床血液细菌鉴定与检验中具有快速确定病原菌和药敏结果, 从而减少盲目用药, 达到降低临床并发症及提高治愈率作用。
摘要：目的 探讨直接药敏试验与常规药敏试验在临床血液细菌鉴定与检验中的临床应用价值。方法 采集我院2011年1月—2012年10月528例门诊和住院患者的血液样品, 经美国BacT9050型全自动血培养仪培养、培养后, 通过之间药敏试验与直接药敏试验检验, 观察两种检测方法的效果。结果 528例血液样品经生化培养检出430例阳性样本, 其中直接法检出356例, 常规法检出430例, 符合率为82.79%。其中革兰阴性杆菌 (G-) 检出369株, 革兰阳性球菌 (G+) 检出61株。两种检测方法G-总符合率比较, 差异无统计学意义 (Z=-26.51, P>0.05) 。两种检测方法G+总符合率比较, 差异无统计学意义 (Z=-33.05, P>0.05) 。结论 直接药敏试验与传统药敏试验在临床血液细菌鉴定与检验中具有快速确定病原菌和药敏结果, 从而减少盲目用药, 达到降低临床并发症及提高治愈率作用。
关键词：药敏试验,细菌,检验,革兰阳性菌,革兰阴性菌
参考文献
[1] 佟青, 张一兵, 刘阳.医院感染多药耐药菌的临床调查与药敏分析[J].中华医院感染学杂志, 2012, 22 (14) :3166-3168.
[2] 张茂海.两种细菌鉴定法在临床血液检验中的应用研究[J].湖南中医药大学学报, 2011, 31 (12) :3-4, 7.
[3] 李慧.两种细菌鉴定法在临床血液检验中的应用[J].现代预防医学, 2011, 38 (9) :1705-1706.
[4] 陈欢欢, 文怡, 刘根, 等.焰血培养阳性标本直接细菌鉴定和药敏中应用分离胶试管的方法探讨[J].实用临床医药杂志, 2011, 15 (15) :156-157.
[5] 田月如, 阮斐怡, 刘红, 等.革兰阴性菌引起的血培养阳性标本的直接鉴定药敏试验[J].中华微生物学和免疫学杂志, 2011 (3) :220-224.
8种发酵床常用菌种的药敏试验 篇2
关键词：发酵床；抗生素；药敏试验：敏感性
发酵床养猪是利用发酵床专用菌种，按一定比例混合锯末、稻壳等农林生产下脚料，通过发酵床的分解发酵，使猪粪、尿中的有机物质得到充分的分解和转化，从而将猪舍垫料发酵床演变成微生态饲料加丁厂，创造一种零排放、兀污染的生态养猪模式。因此发酵床养殖最重要的是其中的活性微生物，即益生菌。所以人们普遍认为，发酵床养猪法猪舍内不能使用化学消毒药品和抗生素类药物，否则将杀灭和抑制益生菌，或抑制其繁殖，使得微生物的活性降低。如杨景辉等在富源县应用发酵床养猪过程中，开展了饲喂含抗生素和不含抗生素饲料、抗生素治疗病猪、发酵床表面消毒、猪群疫苗接种等对发酵床猪舍温度影响，结果发现含抗生素饲料以及用抗生素治疗发病猪会对发酵床床体产生影响，但疫苗免疫对其没有影响。敖梅英等也认为某些抗生素对对垫料中主要益生微生物生长均有不同程度的影响，应减少甚至停止使用抗生素作为饲料的添加剂。然而自20世纪50年代以来，抗生素作为疾病治疗剂和动物生长促进剂，发挥了重大作用。虽然发酵床养猪可以减少疾病的发生，却也不能保证绝不发病，如不使用抗生素及时治疗，也会产生一定的损失。为了解各种抗生素对发酵床益生菌的影响，本研究采用纸片扩散法研究8种发酵床常用的益生菌对50种常用抗生素对的敏感性，为发酵床养猪的临床用药提供依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌种所用8种菌株（纳豆芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、凝结芽胞杆菌、假卑孢菌杆菌、蜡样芽胞杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌）由江苏省农科院畜牧所提供。
1.1.2 主要药敏片所用药敏试纸片购自杭州微生物试剂有限公司，规格：直径6mm，执行标准：WS/T125-1999。
1.1.3 主要试剂及仪器LB液体培养基及LB固体培养基由实验室自配。超净工作台，恒温培养箱。
1.2 方法
1.2.1 细菌培养江苏省农业科学院畜牧所提供上述8益生菌，LB培养基复苏后，每种菌株挑取若干克隆配成0.5麦氏单位浓度的悬浊液，以500μL/块平板（直径90mm）的量均匀涂布LB琼脂平板。同时，取上述8种0.5麦氏单位浓度的菌液各3mL，混合均匀成一个混合菌，再按500μL/块平板涂布LB琼脂平板作为混合菌样本。
1.2.2 药敏试验采用纸片扩散法，细菌涂布好后，立即将纸片置于单独接种上述8种芽孢杆菌以及接种混合菌的LB琼脂平板上，每个培养皿中放五个药敏片，置于37℃温箱中培养。24h后，分度值为1mm的刻度尺量取抑菌圈的直径，根据药敏试验判断标准书，确定该菌对不同药物的敏感程度。如有些抑菌圈过大，无法量取抑菌圈大小，则重复上述实验，但将培养皿中的药敏片降为1个。
2 结果
2.1 8 种益生菌及其混合菌的药敏试验结果
采用50种抗生素对8种益生菌株進行药敏试验，测量抑菌圈直径，计算平均值。结果表明见表1。由表1可知，多数益生菌对多数抗生素（氯霉素类、氨基糖苷类、喹诺酮类、四环素类及大环内酯类）高度及中度敏感，但对青霉素类，头孢类以及林可霉素低敏感性或不敏感。
2.2 抗生素对8种益生菌敏感数统计
按敏感性统计各抗生素，发现混合培养菌对氯霉素类、氨基糖苷类、喹诺酮类、强力霉素，克林霉素高敏感；对四环素、美满霉素、林可霉素、阿莫西林、头孢曲松、头孢噻肟等中度敏感；对氨苄西林和头孢唑肟低敏感；对复方新诺明、多黏霉素B、青霉素、头孢克肟、头孢吡肟、头孢噻吩不敏感（表2）。
3 讨论
据发酵床的微生物作用原理，有益微生物及其产生的有益因子，在猪拱掘采食后，改善猪肠道菌群，大大降低肠道疾病的发病率。且由于发酵床养殖猪舍由于发酵床体中有益菌群发酵粪便，抑制了腐败菌等有害微生物的繁殖和有害气体的产生，从而减少空气中气载微生物的含量，对猪舍内空气环境的改善有一定积极的影响，但是仍然有潜在的危险，仍需要加强对某些细菌、病毒以及寄生虫的防控。所以抗生素的使用成为发酵床养猪法的争论的主要焦点之一。何鑫等利用益生菌高敏感的泰乐菌素和氟苯尼考，进行抗生素预防和治疗用量对发酵床床体的影响，发现在发酵床养殖过程中不是绝对不能使用抗生素类药物，而是要看其使用量是否合适。适当的药物使用是可行的，但如果猪群本身健康状况较差，则不一定适合在发酵床上进行长期用药治疗。说明发酵床益生菌敏感抗生素的使用需要把握药量，但该研究中的药物种类较少，也没有筛选出益生菌不敏感或低敏感的药物。本研究通过纸片扩散法研究8种发酵床中常用的益生菌对50种常用抗生素的敏感性，发现这些益生菌对青霉素类、头孢菌素类、林可霉素及多黏霉素B的敏感性较低，甚至不敏感，适合于发酵床应用，在用药方案制定中可不考虑对床体益生菌的影响，但其余敏感药物并不是一定不能用于发酵床，而是要注意用药方案的把握，尤其是用药量及用药过程的控制，避免药物影响益生菌的生长繁殖。此外曾艳等发现一些中药如蒲公英、茵陈、鱼腥草等对枯草芽孢杆菌、高温放线菌及产朊假丝酵母均无抑制作用，可选择这些中草药防治大肠杆菌及金黄色葡萄球菌。
直接药敏试验 篇3
关键词：药敏试验,革兰阳性菌,革兰阴性菌,检验,细菌
败血症与菌血症均为临床死亡率相对较高的疾病, 而抗生素滥用也会进一步导致病菌出现不同程度的耐药性, 进而病菌对抗生素的敏感程度也存在较大差异[1]。因此, 早期及时、快速地为患者予以临床血液细菌检验、鉴定菌种, 有效、准确地确定敏感抗生素既可以全面提升临床治愈率, 同时, 也可以降低临床并发症的发生[2]。本文为全面提升临床血液细菌检验效率, 对直接药敏与常规药敏试验进行了对比研究, 现将结果报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择2013年4月~2014年3月作者单位门诊及住院患者血液标本300份;其中, 男164例, 女136例, 年龄6~71岁, 平均年龄 (46.5±2.9) 岁;患者在进行血液采集前48 h内均未曾使用药物以及其他相关治疗;并排除血液系统疾病、凝血功能障碍者。两组一般资料差异无统计学意义 (P>0.05) , 具有可比性。
1.2 方法
所有患者均采集20 ml血液标本, 并及时送至检验科。将所有血液标本分为2等份。
1.2.1 直接药敏试验
取10 ml血液标本置于无菌试管中, 以1500 r/min速度在离心机内进行细菌分离;5 min后采集上清液;再以3000 r/min速度下离心15 min后去除上清液;经两次PBS洗涤沉淀后重悬;将采集的悬液经革兰染色后进行检验。要用无菌拭子均匀涂抹, 贴上药敏纸片。并根据2005 NCCLSI药敏检测标准进行评价。
1.2.2 常规药敏试验
将10 ml检查为阳性的血液标本直接接种于麦康凯平板、巧克力平板、血平板;置于5.0%CO2、温度为35℃条件下, 进行孵育, 孵育时间为18~24 h;然后取菌落涂片, 采取革兰染色法检验分析;并依据检测结果选择酶进行试验。
1.3 统计学方法
相关数据应用SPSS19.0软件处理。计量资料用均数±标准差 (±s) 表示, 行t检验;计数资料采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果
本组300份血液标本经临床生化培养后, 共检出阳性血液标本264例;其中直接药敏试验检出224例, 常规药敏试验检出264例, 符合率为84.8%;其中G-检出233例, G+检出31例。两种检验方法G-、G+检出总符合率比较, 差异无统计学意义 (P>0.05) 。详见表1。
3 讨论
据近些年的临床合理药用调查分析来看, 我国现阶段抗生素不合理应用情况存在着较多问题;并在抗生素过量使用的情况下导致了一些细菌产生多种耐药性;甚至引发其他的感染及并发症, 如败血症与菌血症等。因此, 早期及时、快速地为患者予以临床血液细菌检验、鉴定菌种, 有效、准确地确定敏感抗生素既可以全面提升临床治愈率, 同时, 也可以降低临床并发症的发生。
目前, 临床常用的检测方法有直接药敏试验和常规药物试验两种;其中:常规药敏试验是一种定性试验, 是通过抑菌环直径以及抗生素抑菌浓度负相关设计而成;但由于对检测条件要求相对较高, 加之其检测时间相对较长 (2~3 d内完成) , 这也进一步导致其在临床应用受到较大限制。同时, 在常规药敏试验结果出来之前, 临床医生往往仅能依靠经验来进行判断与治疗, 这对于具有多重耐药性细菌的治疗效果往往较差, 甚至造成延误最佳治疗时机而导致患者病情加重。而直接药敏试验可直接对血液标本进行相关的检测, 该方法便捷、简单。
本文为全面提升临床血液细菌检验效率, 对直接药敏与常规药敏试验进行了对比研究, 结果提示:以上两种检验方法对革兰阴性杆菌和阳性球菌检验结果的符合率差异无统计学意义 (P>0.05) 。同时, 在抗生素敏感性方面, 直接药敏试验和常规药物试验结果差异无统计学意义 (P>0.05) 。这也进一步说明, 采用直接药敏试验可极大地缩短临床检验时间, 也更利于临床医生准确使用相关抗生素, 进而对全面提升临床治愈率也具有积极的促进作用。
参考文献
[1]刘鹏.临床血液检验中的两种不同细菌鉴定法应用分析.中国保健营养 (下旬刊) , 2012, 22 (6) :1688-1689.
直接药敏试验 篇4
【关键词】感染；细菌；药敏试验
随着科学技术的发展，医院应多采用现代化的全自动分析仪器，节约患者等待病情确诊的时间，保证实验结果的稳定性和准确性。在临床工作中，医生应重视感染细菌的培养、鉴定和药敏试验，从而合理地使用抗生素，而不能按照经验乱用、滥用抗生素。细菌培养结果表明，开放性创伤感染性疾病的致病菌已发生变化，革兰氏阴性杆菌感染率明显上升，革兰氏阳性球菌感染率下降，与刘尚才氏资料相符。
1 材料和方法
1.1 标本采集 选取从2012年3月至2014年3月期间133例开放性创伤患者的伤口脓液和分泌物，送往我院检验科细菌室。患者受伤部位包括上臂、前臂、手、股部、小腿和足。收集标本时注意无菌操作，避免其他外来细菌对实验结果造成影响。
1.2 细菌培养 将标本用生理盐水稀释为一定浓度的菌群，配制琼脂培养基，然后置入BACTEC9120全自动培养仪（BD，USA）进行细菌培养。
1.3 细菌鉴定和药敏试验 将培养分离得到的菌株用Micro Scan Walkaway96全自动微生物分析仪（Siemens，German）及其配套的试剂（鉴定与药敏复合板）进行细菌鉴定和药敏分析。
1.4 质量控制 用卫生部临床检验中心提供的大肠埃希菌（ATCC 25922）和金黄色葡萄球菌（ATCC 25923）作质控标准参考菌株。
2 结果
从133例标本中共分离出114株细菌，阳性率高，达85.7%；其中革兰阳性菌65株（57%），革兰阴性菌44株（38.6%），真菌5株（0.4%）。通过Micro Scan W/A96仪器软件分析，我们发现分离率占前6位的细菌分别为大肠埃希菌、凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）、金黄色葡萄球菌（SA）、甲种溶血性链球菌、甲型副伤寒沙门菌和肺炎克雷伯菌，百分比分别为28.5%、19.3%、15.8%、10.5%、6.1%、4.8%。在凝固酶阴性葡萄球菌中，耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）占80.23%；而在金黄色葡萄球菌中，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）占30.60%；除此之外，产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分别占其38.67%和46.21%。从药敏分析结果可以看出，革兰阳性球菌对青霉素耐药率最高，可能与青霉素开发早，应用多有关，而其对万古霉素耐药率最低；革兰阴性杆菌对氨苄西林耐药率最高，而对亚胺培南和哌拉西林耐药率最低。结果提示在临床上选用抗生素时，不应随意使用青毒素和氨苄西林这些广谱抗生素，而应针对具体感染选用特殊的抗生素。
3 讨论
本实验采用自动化仪器完成了对创伤感染细菌的培养、鉴定及药敏分析，实验结果和大部分研究报道结果相同[ 1 ]，证明自动化仪器不仅操作方便简单，而且实验结果稳定可靠。大肠埃希菌是人肠道中的正常栖居菌，其致病物质之一是血浆凝固酶，因此其在大多数感染中都是最主要的病原菌，如尿路感染、血液感染等。凝固酶阴性葡萄球菌是在大量头孢菌素和免抑制剂的广泛使用后才成为医源性感染的常见病原菌，特别是MRCNS，其检出率和多重耐药性呈逐年上升趋势，且感染后症状不典型，给临床诊断和治疗带来困难。通过Micro Scan W/A96全自动微生物分析仪，可准确鉴定MRCNS，合理使用抗生素。金黄色葡萄球菌是革兰阳性球菌的代表，是一种常见的病原菌，最早用青霉素治疗SA感染，但由于MRSA逐渐增多，现临床上不使用青霉素，而用红霉素、庆大霉素或万古霉素代替；这和我们的药敏实验结果相一致，我们的研究发现SA對青霉素的耐药率为100%，而对万古霉素的耐药性最低，只有13.2%。超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）主要由大肠杆菌和肺炎克雷伯杆菌产生，这类菌株对青霉素、第三代头孢菌素（头孢噻肟、头胞他啶、头孢哌酮、头孢曲松等）以及单环β-内酰胺类抗生素（氨曲南）耐药，并且ESBLs由质粒介导，容易在细菌中传播，因此快速地筛选出ESBLs菌对治疗感染有重要作用。Micro Scan W/A96全自动微生物分析仪可以快速准确的鉴定并检出ESBLs菌，帮助抑制创伤感染，使患者创伤得以早日恢复。
近年来由于抗生素的广泛使用及细菌变异的频发，使细菌对广谱抗生素的耐药性越来越高，引起人们的重视。在本研究中，我们将对开放性创伤感染伤口的脓液和分泌物进行细菌培养、鉴定和药敏试验，以明确创伤感染中细菌对抗生素的敏感性和耐药性，为临床合理使用抗生素提供依据。我们的实验结果表明不同的菌株其耐药性有明显的不同，常用的抗生素已不能满足抗感染治疗的需求，随着科学技术的发展，医院应多采用现代化的全自动分析仪器，节约患者等待病情确诊的时间，保证实验结果的稳定性和准确性。在临床工作中，医生应重视感染细菌的培养、鉴定和药敏试验，从而合理地使用抗生素，而不能按照经验乱用、滥用抗生素。对于外伤后感染的处理，仅强调合理使用抗生素是不够的，更要强调清创术中操作的无菌观念，充分清洗消毒，切除失活组织，合并骨折时要合理使用固定物，尽量选用外固定器固定骨折，创面要充分引流，对于污染严重、受伤时间超过8h、难以彻底清创的病例创口应延迟闭合。如外伤术后发生感染，应进行细菌培养与药敏试验，合理用药，同时应行感染病灶的清除，清除坏死组织与炎性肉芽组织异物，彻底引流或采用闭式冲洗疗法，才能达到良好的效果[2]。
参考文献
[1] 徐修礼，刘家云.细菌对抗生素耐药机制研究的某些进展[J].国外医学 （临床生物化学与检验学分册），2002，23（2）：83-85.
药敏试验简易方法介绍 篇5
纸片法是生产中最常用的药敏试验方法。它操作简单, 应用普遍, 出结果快, 费用低, 便于生产。试纸片可以购买成品, 也可根据各养殖厂用药情况自制各种抗菌素试纸片。
1 病料的采集
采集具有典型症状的畜禽的肝脏、肠道、泄殖腔棉拭子。采集时应做到无菌。
2培养
将所采病料以划线方式均匀涂布于普通营养琼脂平板表面, 用无菌操作方法贴试纸片于培养基上。试纸片不要贴太密, 以防相邻抑菌圈太大而联合。一般中间一片, 周围贴四片, 并且应在平板上标记好试纸片名称, 以防相互混淆。将贴好纸片的平皿翻转, 底部朝上, 置37℃恒温箱中培养24h, 观察结果。
一例犬瘟热的中西医诊治
赵海玉
(青海省共和县倒淌河镇兽医站813000)
中图分类号:S858.292文献标识码:B文章编号:1007-1733 (2011) 07-0096-02
犬瘟热是由犬瘟热病毒引起的一种急性、高度接触性传染病, 其特征为双相热呼吸道卡他性胃肠炎及神经病状为特征, 少数病犬可见鼻和足垫角化过度, 发病和死亡率极高。
1发病情况
2008年8月25日, 本镇牧户才某带3岁的母犬来门诊就诊, 主诉:该犬已病5d, 精神萎靡不振, 食欲废绝, 停食2d, 呕吐, 稀便, 稀粪里有鼻液样粘液, 流鼻、流泪、咳嗽。现将诊治报告如下。
2 临床症状
病犬精神沉郁, 食欲废绝, 呻吟、口流清涎, 流脓性鼻液、流泪, 腹式呼吸, 气喘、严重脱水、体温41℃。听诊肺部干啰音, 肛门周围泻粪污染, 气味恶臭, 泻粪内有血并附粘液。四肢瘫痪, 并带有神经症状, 共济失调、颈部强直、肌肉痉挛。
3 诊断
根据发病情况, 临床症状初步诊断为犬瘟热病。
4 防治
结核分枝杆菌药敏试验分析 篇6
1资料与方法
1.1 资料
1.1.1 一般资料
本试验样本病例来自于大庆市疾病预防控制中心结核病防治科, 市第二人民医院, 龙凤区、萨尔图区、让胡路区疾病预防控制中心结核病防治科2010年-2012年门诊有低热、倦怠、食欲不振、咳嗽、咯痰及少量咯血等症状[1], 胸透X线摄片显示肺结核征象、两次痰标本涂片镜检抗酸杆菌阳性[2]。包括初治传染性肺结核患者和复治传染性肺结核患者。在患者进行抗结核治疗之前, 采集清晨第一口深咳痰盛无菌痰盒内送检[3]。
1.1.2 试剂
酸性罗氏培养基由杭州天和微生物试剂有限公司生产。结核分枝杆菌药敏培养基 (比例法) 由广州凯升生物科技有限公司生产。
1.2 方法
1.2.1 培养
取确诊肺结核患者的深咳痰1 ml加2%氢氧化钠2～4 ml, 室温30 min, 其间振荡2～3次, 促痰液化, 将液化后的痰液混匀, 用来菌的刻度毛细吸管取0.1 ml缓缓均匀地接种在酸性罗氏培养基斜面上, 每份痰液标本接种二次培养基, 接种完毕置37℃恒温培养箱内培养。
1.2.2 药敏试验
将所有培养出的阳性标本待测菌液制备成10～2 g/L和10～4 g/L菌悬液, 分别用22SWG标准接种环蘸取1环 (即0.01 ml) 的菌液, 用划线法将10～2 g/L菌悬液均匀接种分别含异烟肼 (INH) 、利福平 (RFP) 、链霉素 (SM) 、吡嗪酰胺 (PZA) 、乙胺丁醇 (EMB) 、对氨基水杨酸 (PAS) 、丙硫异烟胺 (1321TH) 、卡那霉素 (KM) 、卷曲霉素 (CPM) 药敏培养基表面, 将10～4 g/L菌悬液接种于对照培养基表面, 应注意是菌液尽可能均匀分散于培养基斜面。接种后培养基置于37℃培养, 4周后读菌落数, 计算耐药百分比, ≤1%为敏感, >1%为耐药。
耐药率 (%) =含药培养基上菌落数/对照培养基上菌落数×100%
2结果
结核分枝杆菌的耐药情况 在总共分离培养出的96株结核分枝杆菌中, 共有41株产生耐药, 来自初治肺结核患者的菌株为7株, 占17%, 来自复治肺病人的菌株为34株, 占82.9%, 结核病人总耐药率为42.7%, 其中耐多药菌株为29例, 占30.2%, 具体内容见表1。
3讨论
结核分枝杆菌本引起慢性传染性疾病, 可以累及全身各个器官, 其中以肺结核最为常见。在结核病防治工作中, 首先要积极开展对未受感染的新生儿、儿童和青少年 进行卡介苗接种。此外对结核病患者进行早期、联用、适量、规律、全程的科学抗结核治疗是唯一的原则。合理的抗结核药物治疗可以达到治愈结核病, 痰中带菌转阴性, 从而消除传染源。目前在许多国家和地区耐药结核病 (DR-TB) 特别是耐多药结核病 (MDR-TB) 的流行严重, 正在使搞结核治疗面临新的挑战。通过本次实验, 在筛选出的96株结核分枝杆菌对9种常规抗结核药物 (INH、RFP、SM、PZA、EMB、PAS、1321TH、KM、CPM) 总耐药率为42.7%, 其中耐多药结核分枝杆菌菌株占30.2%。从结果看出, 在国家防痨规划的抗结核治疗药物中RFP+INH占20.7%, RFP+INH+PZA占13.8%, EMB+RFP+INH+PZA占10.3%, SM +RFP+INH +PZA占6.9%, TH+INH占20.7%, EMB+INH占13.8%, SM+INH+ PZA占13.8%。
本试验结果显示, 在本市结核分枝杆菌对国家方案几种药物 (INH、RFP、 SM、EB、PAZ等) 都有不同程度的耐药, 并有逐渐向多耐药发展趋势。产生耐药情况的原因很复杂, 既有生物因素, 也存在着人为因素。在我们调查中发现, 在复治的传染性肺结核患者中, 大部分人都有未严格按照医嘱的要求坚持服药的情况, 主要原因是, 对药物的副作用耐受性差, 或惧怕药物的副作用, 不肯坚持足量足疗程, 在临床症状稍稳定时中断了服药, 或阶段性中断服药。所以在抗结核病治疗过程中, 做好宣传和监督作用, 让患者遵从医嘱的要求进行抗结核化疗是非常重要的。
摘要：目的 了解本市结核分枝杆菌耐药状况, 为选择更为有效、科学、合理的抗结核病药物治疗提供依据。方法 对本市区筛选初诊疼涂片阳性的患者, 在抗结核治疗前, 取经液化痰液接种于酸性罗氏培养基培养分离结核分枝杆菌, 然后接种于结核分枝杆菌药敏培养基 (比例法) 进行药敏试验。结果 96例药敏试验中, 结核分枝杆菌总耐药菌株为41例, 总耐药率为42.7%, 其中耐多药菌株29株, 耐药率为30.2%。结论 本市结核患者已出现耐药趋势, 且有向耐多药发展, 而在没有出现更有效新药替代已产生耐药的药物前, 必须坚持科学合理的抗结核病药物治疗原则, 从而减少传染性肺结核患者的复治。
关键词：结核分枝杆菌,药敏试验,抗结核病治疗,耐多药菌株
参考文献
[1]陆再英.内科学第7版北京人民卫生出版社, 2008.
[2]中国疾病预防控制中心.传染性肺结核诊断标准及处理原则.GB15987-1995.
禽卡氏杆菌分离鉴定及药敏试验 篇7
1 材料与方法
1.1 试验动物
本次试验采用的是辽宁本地养殖户养殖的240日龄芦花鸡,该鸡产蛋率下降,有明显的腹水症状,行走如企鹅状,疑似为卡氏杆菌感染的病鸡。
1.2 主要仪器
立式压力蒸气灭菌器,上海申安医疗器械厂生产;高速冷冻离心机,购自美国Sigma公司;移液枪(10μL、200μL、1 000μL),购自德国Eppendorf公司;凝胶成像仪、PCR仪,购自美国BIO-RAD伯乐公司。
1.3 药品与主要试剂
月示胨、酵母浸粉、琼脂、牛肉粉、葡萄糖、磷酸氢二钾、氯化钠、牛肝浸粉、消化血清粉、大豆胨、可溶性淀粉、L-半胱氨酸、硫乙醇酸钠,购自青岛海博生物技术有限公司;革兰氏染色剂,购自北京鼎国生物有限公司;Rnase A溶液、细菌基因组DNA快速提取试剂盒、生化反应管,购自上海生工生物工程技术服务有限公司;药敏片,购自杭州微生物试剂有限公司。
1.4 GAM培养基的配制
GAM培养基的配方:月示胨15.0 g,酵母浸粉5.0 g,琼脂12 g,牛肉粉2.0 g,葡萄糖3.0 g,磷酸二氢钾2.5 g,氯化钠3.0 g,牛肝浸粉1.2 g,消化血清粉13.5 g,大豆胨3.0 g,可溶性淀粉0.3 g,L-半胱氨酸0.3 g,硫乙醇酸钠0.15 g。
以上用量为配制1 000 m L GAM培养基的用量,将以上药品倒入1 000 m L锥形瓶中,并用1 000 m L大量筒盛满1 000 m L纯化水,然后往锥形瓶中加入适量纯化水,在电磁炉上加热至药品完全融化再将剩余纯化水全部加入,继续加热至溶液完全澄清,用氢氧化钠调节p H值为7.2,在高压蒸气灭菌锅中于121℃灭菌20 min,倾倒平板,这样无需进一步灭菌,避免重复融化和冷却。
1.5 鸡输卵管细菌的分离、培养及筛选
取疑似卡氏杆菌感染的本地土鸡3只,分别解剖后以无菌剪刀纵向剪开输卵管,无菌磷酸盐缓冲液冲洗3次洗去表面污物,吸水纸吸干表面水渍,用医用无菌棉签沾取或用灭菌载破片刮取输卵管黏膜黏液,然后用灭菌生理盐水冲洗,将冲洗液分别置无菌小烧杯中,各取冲洗液100μL,在无菌条件下,用涂布棒均匀涂布于GAM培养基上,置37℃恒温箱中恒温培养48 h,挑取单个菌落进行多次划线,最后根据菌落的形态、大小、色泽、透明度等挑选与卡氏杆菌相似的菌落,继续接种于GAM培养基中,37℃培养24~36 h,最后对各组细菌进行保种,用200μL菌液与200μL 50%甘油混合保种,备用。
1.6 细菌的革兰氏染色
按照《兽医微生物学实验技术》中常规方法进行:涂片、干燥、固定、初水洗、媒染、水洗、脱色、复染、水洗、干燥、观察。
1.7 细菌的生化试验
在无菌操作台用齿轮将生化管锯开(顶端上1/3处),然后用接种针将卡氏杆菌接种到生化管中;将接种好的生化管顶端密封,倒立插入泡沫板;将插有生化管的泡沫板置37℃恒温箱中培养24 h,24 h后取出观察并记录。
1.8 分子生物学鉴定
利用细菌基因组DNA快速提取试剂盒提取细菌基因组,采用16S rRNA通用引物(引物序列:27f 5'-AGAGTTGATCCTGGCTCAG-3';1492r 5'-GGTTAC-CTTGTTACTT-3'),以提取的细菌基因组作为模板进行PCR扩增。PCR扩增体系(总体积为30μL):PCR Mix 15μL,上、下游引物各1μL,基因组1μL,去离子水12μL。PCR反应条件:95℃预变性5 min;94℃变性45 s,50℃/60℃退火45 s,72℃延伸90 s,共24个循环;72℃再延伸5 min。PCR完成后,产物经1%琼脂糖凝胶电泳试验检验成功与否。扩增成功后送上海生工生物工程技术服务有限公司测序,为了测序的准确性,要求双向测通。测序结果在NCBI上进行BLAST比对,以Gen Bank中得到的与分离株序列同源性较高的菌株作为参考菌株进行同源性分析。使用Clustal X 1.8软件将这些参考菌株序列对齐,再应用DNA Star构建菌株的系统进化树,分析菌株的同源性。
1.9 药敏试验(K-B法)
1)培养基采用M-H琼脂加5%脱纤维兔血清,培养基厚度为4 mm,制备好的平板于4℃保存。在超净台中,无菌挑取孵育16~24 h的菌落4~5个置无菌生理盐水中,用Mc Farland校正其浊度,菌液浓度为0.5麦氏浓度,置培养箱内孵育3~10 min。
2)10 min后取出平板,将药敏片贴到培养基表面。药敏片要有规律地分布于培养基上,各药敏片中心距离应大于24 mm。在该试验中,将这30种药敏片分为8组,前7组每组4片,第8组为2片。
3)将培养基置37℃温箱中培养24 h后观察结果,并做好记录。
4)根据CLSI(clinical and laboratory standards institute)标准,判断细菌对各抗生素的敏感(susceptible,S)、耐药(resistant,R)、中介(intermediate,I),判定标准见表1。
2 结果与分析
2.1 卡氏杆菌的分离与纯化
结果见295页彩图1。
由295页彩图1可知,菌苔的颜色呈灰白色,为半透明、圆形凸起于培养基表面、边缘整齐的均一小菌落。
2.2 卡氏杆菌的革兰氏染色
结果见295页彩图2。
由295页彩图2可知,细菌被染成红色,细菌的形态呈杆状或球状,根据革兰氏染色结果可判断分离的细菌为革兰氏阴性杆菌。
2.3 卡氏杆菌的生化试验
结果见表2。
注:-表示呈阴性。
由表2可知,此细菌能发酵葡萄糖、半乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘露糖、甘露醇、山梨醇、肌醇、木糖、纤维二糖,不能发酵鼠李糖、乳糖、绵籽糖,硫化氢试验为阴性,不能产生脲酶,不能利用枸橼酸盐。这些特性与参考文献[5,7]中记载的卡氏杆菌的特性一样,可以初步确定该菌属于卡氏杆菌。
2.4 卡氏杆菌的PCR扩增
结果见图3和图4。
由图3可知,2条泳道基因的提取效果很好,可以选取其中一个做下一步扩增。
由图4可知,扩增的基因大小为1 500 bp左右,空白对照组并未出现条带,说明试验成功扩增出目的片段。鉴于EB作为核酸的染色剂,对人体会产生毒性,因此本试验使用gold view作为其替代品,减少了试验过程中对人体带来的危害。
2.5 16S r DNA序列分析
将扩增后的16S r DNA序列送至上海生工生物工程技术服务有限公司进行测序,测序结果表明目的基因大小为1 455 bp,将获取的碱基序列输入http://www.ncbi.nlm.nih.gov/中,用BLAST进行基因序列比对,比对结果表明,扩增出来的16S r DNA序列与Gen Bank上Gallibacterium anatis strain Yu-ZMD-XP-1-QG-1和Gallibacterium anatis strain CCM5995的16S r DNA序列同源性均在99%以上,可以判定分离株为卡氏杆菌,命名为Gallibacterium anatis C2-1-1。
M.DL-2 000 Marker;1,2.提取的细菌基因组。
M.DL-2 000 Marker;1.空白对照组;2.细菌16S r DNA序列目的片段。
2.6 卡氏杆菌的药敏试验
结果见表3。
由表3可知:卡氏杆菌对青霉素、阿莫西林、米诺环素极度敏感;对氨苄西林、头孢氨苄、头孢曲松、氟苯尼考高度敏感;对头孢唑林、阿米卡星、头孢呋辛、四环素、环丙沙星中度敏感;对链霉素、林可霉素、红霉素等不敏感。
3 讨论
在分离细菌的过程中,首先要了解所分离菌株的培养条件,卡氏杆菌属于需氧菌,需在有氧的环境才能正常生长,根据细菌生长所需要的条件配制合适的培养基也是重要的部分,因此本试验采用GAM培养基进行分离培养,从疑似卡氏杆菌感染的病鸡体内成功分离出卡氏杆菌。药敏试验结果表明,本次试验分离的卡氏杆菌对青霉素、阿莫西林、米诺环素极度敏感,而对其他参试药物敏感度不高或不敏感。可见,该菌已对多种常用抗生素产生了广泛耐药性,临床用药时应引起注意。到目前为止,尚无有效治疗鸡输卵管囊肿的药物,发病鸡也不可能自愈。因此,对卡氏杆菌的治疗除了使用敏感的抗菌药物,如青霉素、阿莫西林、米诺环素等外,最重要的是做好饲养管理工作,如对禽舍定期消毒、保持通风、及时清扫垃圾等,才能有效预防该病的发生。
mm
摘要：为了能更好地防治禽卡氏杆菌病,试验采用GAM培养基对病鸡输卵管进行了菌株分离,以革兰氏染色试验、生化试验、16S r DNA序列分析分子生物方法对该菌株进行鉴定,并对分离株进行了药敏试验。结果表明:该菌株为革兰氏阴性杆菌,生化试验结果与卡氏杆菌的生化特性一致。16S r DNA序列分析表明,分离株与Gen Bank上的卡氏杆菌16S r DNA序列同源性达到99%以上,最终确定分离株为卡氏杆菌,命名为Gallibacterium anatis C2-1-1。卡氏杆菌对青霉素、阿莫西林、米诺环素极度敏感,对氨苄西林、头孢氨苄、头孢曲松、氟苯尼考高度敏感,对头孢唑林、阿米卡星、头孢呋辛、四环素、环丙沙星中度敏感,对链霉素、林可霉素、红霉素等不敏感,该分离株具有一定耐药性。
关键词：卡氏杆菌,分离鉴定,革兰氏染色,生化试验,药敏试验,耐药性
参考文献
[1]BOJESEN A M,NIELSEN O L,CHRISTENSEN J P,et al.In vivo studies of Gallibacterium anatis infection in chickens[J].Avian Pathol,2004,33(2):145-152.
[2]MIRLE C,SCHONGARTH M,MEINHART H,et al.Studies into incidence of Pasteurella Haemolytica infections and the irrelevance to hens,with particular rreference to diseases of the egg laying apparatus[J].Monatshefte Fr Die Vet,1991,46(15):545-549.
[3]BOJESEN A M,NIELSEN S S,BISGAARD M.Prevalence and transmission of haemolytic Gallibacterium species in chicken production systems with different biosecurity levels[J].Avian Pathol,2003,32(5):503-510.
[4]伍汝宣,刘桂云.种鸡输卵管浆液性囊肿病病原探讨[J].中国畜禽传染病,1991(6):1-2.
[5]李肇增,金山,王金福,等.鸡输卵管囊肿病病原的分离与鉴定[J].内蒙古畜牧科学,2002(5):6-8.
[6]范根成,孙冰爱,马长新,等.鸡输卵管囊肿病因初探[J].养禽与禽病防治,2003(5):20-22.
对普通细菌药敏试验影响因素分析 篇8
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2011年10月~2012年10月我院实验室收集的各个科室的检测标本140份,所有标本综合分析全部为阳性,作为经典标本,作为本次研究的对象。其中尿液标本39例,痰液标本51例,脓液标本50例;肺炎链球菌标本63例,大肠埃希菌标本47例,铜绿假单胞菌30例;对头孢曲松敏感61例,对左氧氟沙星敏感45例,对红霉素敏感34例。所有研究标本均等分为若干份,在培养基选取上、药敏试纸p H值、细菌浓度设置对照组,进行两两比较。使各个组别实验标本在来源上、感染病菌上、阳性例数抗生素敏感种类上等方面均无显著性差异,具有可比性。
1.2 方法
所有纳入研究的实验标本均经过各类方法反复检测确定为相应抗生素敏感性阳性,这些抗生素主要包括头孢曲松、青霉素、红霉素、左氧氟沙星几类经典抗生素。以选取的标本作为经典标本,作为本次研究的对象。研究器材选取上,培养基为M￣H琼脂培养基,一组培养基为单纯M￣H培养基,一组在培养基内添加一些离子如钙、镁等离子;药敏试纸购于上海金穗生物科技有限公司,一组为标准试纸即p H=7,另一组认为改变p H,使其大于或小于7,比例相当;细菌浓度一组为国际标准指示的=1.5亿/ml,另一组认为更改这一浓度,使其大于或小于这个浓度,比例相当。所有研究标本均等分为若干份,在培养基选取上、药敏试纸p H值、细菌浓度设置对照组,进行两两比较,比较各自研究对象在不同对照组因素影响下阳性例数、阴性例数、阳性率情况,综合以上数据结果探讨普通细菌药物敏感性性试验中几个影响因素作用。所有过程均严格按照相关操作指南操作,避免标本污染等情况的出现,一经出现此类情况及时排除本研究,在整个研究中如有排除标本的情况发生,不再纳入新的标本入内。
1.3 统计学处理
对文中所得数据进行统计学处理,采用SPSS17.0软件进行分析,计量资料采用t检验,计数资料采用χ2检验,P<0.05为有统计学意义。
2 结果
所有研究标本在整个研究中未出现标本排除情况,所有研究标本在培养基选择上、药敏试纸p H上、细菌标本浓度上两两比较阳性例数、阴性例数、阳性率情况变化情况结果,所有研究对象两两比较,阳性例数、阴性例数、阳性率情况变化结果见附表。
从附表可以看出,各个对照组别两两比较均具有显著的差异,培养基的选择、药敏试纸的p H值情况、细菌浓度均是影响细菌药敏实验结果的因素,两两比较差异显著,统计分析显示,P<0.05,均具有统计学意义。
3 讨论
细菌感染一直是危害人类生命健康的重要因素之一,青霉素的发现是人类抗感染史上的一个巨大里程碑,并在一段时期内取得了很好的疗效,被称为人类“福音”[2]。但是人们似乎并未意识到后续的一一列问题,随着科学技术的进步,医药事业的不断发展,各类治疗方式被应用到临床抗感染治疗中去,广谱抗生素发明应用,激素的应用,以及一些免疫抑制类药物的不规范应用,抗药性细菌越来越多见,给整个临床抗感染抗生素选用上带来的极大的困难[3]。人们开始细菌药物敏感性实验,以求选得针对性的单一抗生素而阻止这种恶性循环[4]。故细菌药物敏感性实验越来越受到临床工作者的重视,国内外学者尝试不断的更新发展此类技术,以寻求更为精确的结果,给临床用药提供指导[5],同时使整个抗感染治疗向着好的方向发展。细菌药物敏感性实验需要几个基本的过程,培养基的选择,目前应用最多的为M-H琼脂培养基,当然这样的培养基大多针对临床常见普通细菌。一些特别的细菌则需要加入一些特殊的成分来增加检出率。对于M￣H琼脂培养基,人们尝试不断的去完善,如添加一些离子,起到溶酶作用[6]。药敏试纸p H值、细菌标本浓度也是影响结果的另外两个因素,各检验工作者不断的实验,目的就是为了需找合适的p H值及细菌标本浓度,目前国际标准将p H值定为7,细菌浓度定为1.5亿/ml。本研究结果说明:适宜的培养基、接近中性的药敏试纸、每毫升1.5亿个细菌的浓度是实验室普通细菌药敏分析实验取得最佳结果的必要条件;本结论对于实验室相关细菌药敏实验检测提供一定的理论支持,值得在实验室检测工作中推广应用。
摘要：选取2011年10月2012年10月我院实验室收集的各个科室的检测标本140份,所有标本综合分析全部为阳性,作为经典标本,作为本次研究的对象。所有研究标本均等分为若干份,在培养基选取上、药敏试纸pH值、细菌浓度设置对照组,进行两两比较,比较各自研究对象在不同对照组因素影响下阳性例数、阴性例数、阳性率情况,综合以上数据结果探讨普通细菌药物敏感性性试验中几个影响因素作用。结果各个对照组别两两比较均具有显著差异,培养基的选择、药敏试纸的pH值情况、细菌浓度均是影响细菌药敏实验结果的因素,P均<0.05,均具有统计学意义。适宜的培养基、接近中性的药敏试纸、每毫升1.5亿个细菌的浓度是实验室普通细菌药敏分析实验取得最佳结果的必要条件,本结论对于实验室相关细菌药敏实验检测提供一定的理论支持,值得在实验室检测工作中推广应用。
关键词：普通细菌,药敏实验,影响因素,分析
参考文献
[1]刘世明,郭小龙,刘炎琴,等.根据药敏试验结果合理使用抗菌药物[J].临床和实验医学杂志,2011,10(16):1297-1298.
[2]杜先智,黄长武,吴青萍,等.临床分离菌药物敏感性的分析[J].重庆医学,2009,33(4):579-580.
[3]张骞峰,孙增先.临床药师根据药敏试验结果选用抗菌药物分析[J].中国现代应用药学,2009,26(8):678-680.
[4]陈汉杰.甘露醇联合甘油果糖治疗脑出血的疗效观察[J].中国名族民间医药,2010,19(20):122.
[5]池云生,张东浩.对普通细菌药敏试验影响因素的探讨[J].中国保健营养,2012,5:1126-1127.
直接药敏试验 篇9
关键词：胸膜肺炎放线杆菌；分离鉴定；药敏试验
中图分类号： S852.61文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）10-0207-02
收稿日期：2013-12-30
作者简介：王涛（1965—），男，江苏泰州人，硕士，副教授，从事动物传染病防治教学与科研工作。E-mail： wangt61@hotmail.com。猪传染性胸膜肺炎（porcine contagious pleuropneumia，PCP）是由猪胸膜肺炎放线杆菌（act inobacillus pleuropneumoniae，APP）引起的猪的一种接触性呼吸道传染病，以急性出血性纤维素性肺炎、慢性纤维素性坏死性胸膜肺炎为主要特征[1]。2～5月龄猪最易感，急性暴发时，有很高的发病率、死亡率，一些病猪康复后常伴有慢性肺炎，导致猪生长停滞且长期带菌，从而成为其他猪的传染源，此病给养猪业造成较大的经济损失[2]。APP是革兰氏阴性、有荚膜的多形球杆菌，有时呈线性，无鞭毛，不运动，不形成芽孢。根据培养时是否需要烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide，NAD，又称V 因子），可将APP 分为生物Ⅰ型、生物Ⅱ型，生物Ⅰ型为NAD依赖株，包括血清型1～12 型、15 型，生物Ⅱ型生长不依赖NAD，但需要其他特定嘌呤或嘌呤前产物以辅助生长，含有2个血清型，分别为血清型13型、14型[1]。对APP的分离鉴定是确诊PCP感染的重要依据，常用的方法是细菌分离、NAD依赖性、CAMP、尿素酶等生化试验及PCR扩增[3-4]。近年来，伴随养殖业集约化生产规模的不断扩大，APP防治困难逐渐增大。2013年5月，江苏省盐城市建湖县某商品猪场300多头4～5月龄的育肥猪出现体温升高、呼吸困难、死前口鼻有血色泡沫等症状，经诊断为猪传染性胸膜肺炎。为了更好地控制该病，笔者在病原分离鉴定确诊此病的基础上进行了高敏药物的筛选与临床防治试验。
1材料与方法
1.1材料
TSA、TSB琼脂、NAD（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸）均购于江苏省扬州市广陵区全球通实验用品销售中心，按照说明书进行配制。犊牛血清购于杭州四季青生物工程材料有限公司；中药麻黄、黄芩、连翘、板蓝根等购自江苏省泰州市中药材市场；常规培养基、生化试剂、药敏纸片（氟苯尼考、强力霉素、麻黄、黄芩、连翘、板蓝根及其复方药敏纸片等均为自制）购于杭州天和微生物试剂有限公司；金黄色葡萄球菌由笔者所在实验室保存；待检病料来源于苏北某规模猪场疑似胸膜肺炎的发病猪；试验猪场为建湖县某商品猪场，存栏1 153头。
1.2方法
1.2.1细菌的分离培养与形态观察无菌取死亡猪的气管分泌物、肺脏作触片，革兰氏染色，镜检。同时取病料接种于含0.04% NAD的TSA琼脂平板，在需氧及5%～10% CO2条件下37 ℃培养24 h，挑取可疑菌落涂片，镜检。纯培养后，-70 ℃下用50%甘油生理盐水保存备用[3]。
1.2.2CAMP试验用金黄色葡萄球菌在兔血琼脂平板上划1条直线，再用分离菌划与该线垂直但不相接触的2条线，37 ℃ 培养24～36 h，观察试验结果。
1.2.3卫星现象取分离菌均匀涂布于普通琼脂培养基上，再在培养基中央作2条金黄色葡萄球菌平行划线，37 ℃有氧条件下培养24 h，观察菌株生长情况。
1.2.4尿素酶试验取培养24 h的分离菌株接种于含002% NAD的尿素酶液体培养基中，摇匀，37 ℃培养10、60、120 min，分别观察结果。
1.2.5药敏试验分离菌株检测其对头孢噻肟、氟苯尼考、恩诺沙星、强力霉素、复方新诺明、丁胺卡那霉素、红霉素、阿莫西林等8种抗生素与麻黄、黄芩、连翘、板蓝根等4种中药及复方1（板蓝根、黄芩、金银花等）、复方2（板蓝根、麻黄、连翘等）、复方3（麻黄、蒲公英、连翘等）水提物的敏感性。4种中药、3种复方按传统水煎法进行煎煮，真空抽滤并浓缩，最后浓缩为1 g/mL生药，-20 ℃ 保存。滤纸打孔直径为6 mm的纸片，121 ℃高压灭菌，将纸片放入药液里浸2 h，37 ℃烘干，-20 ℃保存备用。将培养好的菌液（浓度稀释至1.5 亿CFU/mL）均匀涂布在TSA琼脂上，然后将药敏纸片贴在平皿上，培养24 h后观察结果，并按抗菌药物药敏试验判定标准判定分离菌株对不同抗生素的敏感程度[5]。
1.2.6高敏药物对猪传染性胸膜肺炎的防治试验苏北某猪场自然发病三元杂交育肥猪发病后经临床诊断、实验室诊断确诊为传染性胸膜肺炎。选择120头日龄110～135 d、体质量70～80 kg、出生后均未接种过胸膜肺炎放线杆菌疫苗的三元杂交育肥猪，试验前常规饲养，自由饮水，随机分成6组： Ⅰ组氟苯尼考肌肉注射、Ⅱ组头孢噻肟肌肉注射、Ⅲ组中药复方2口服、Ⅳ组中药复方2口服+头孢噻肟肌肉注射、Ⅴ组感染对照、Ⅵ组空白对照，每组20头。除空白对照组外，其余每组每天给药，每次用药前测量直肠温度并观察临床症状，试验前后对每头猪进行称重，总疗程均为5 d。
1.3数据处理
采用SPSS 软件对数据进行差异显著性分析。
2结果与分析
nlc202309040435
2.1猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定结果
病料触片以及分离纯化菌革兰氏染色、镜检都可见有革兰氏阴性、多形态的细菌，多为球杆菌、短杆菌，偶有成丝状的细菌，着色不均。在加入0.04%NAD的TSA固体培养基上初次分离培养24 h，可见1～2 mm、露珠状、半透明的菌落，共获得3株分离菌。3株分离菌在靠近溶血性金黄色葡萄球菌的地方出现明显的溶血区域，即CAMP试验阳性。3株分离菌离金黄色葡萄球菌越近，菌落越大、越多；反之菌落越小、越少，证明3株分离菌为依赖NAD生长的细菌。3株分离菌均可水解尿素酶，液体培养基变为粉红色，菌株生长需要NAD，3株分离菌株为猪传染性胸膜肺炎放线杆菌。
2.2猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的药敏试验结果
由表1可知，3株分离菌对头孢噻肟、氟苯尼考、中药复方2高度敏感，对恩诺沙星、强力霉素、复方新诺明、板蓝根、连翘、中药复方1、中药复方3中度敏感，对阿莫西林、丁胺卡那霉素、红霉素、麻黄、黄芩不敏感。
表13株分离菌的药敏试验结果
药物名称抑菌圈直径（mm）YC01YC02YC03头孢噻肟202022氟苯尼考182017恩诺沙星171314强力霉素13911复方新诺明11710阿莫西林735丁胺卡那霉素8710红霉素535板蓝根111415连翘121313麻黄10810黄芩577中药复方1151312中药复方2181918中药复方3111614
2.3高敏药物对猪传染性胸膜肺炎的治疗试验结果
由表2可知，Ⅰ～Ⅳ组给药后，与感染对照组比较，临床症状明显减轻，一般给药3 次左右，大多数猪的体温、食欲基本恢复正常。中药复方2口服+头孢噻肟肌肉注射组有效率达100%，治愈率达92.78%，相对增重率达78.82%，且没有死亡猪。氟苯尼考注射组、头孢噻肟注射组、中药复方2口服组均有死亡猪，死亡率分别为30.57%、23.55%、378%。可见，中药与抗生素联用对控制猪传染性胸膜肺炎死亡效果较好。表2高敏药物对猪传染性胸膜肺炎的治疗试验结果
组别试验数
3结论与讨论
胸膜肺炎放线杆菌营养要求高且受外界影响较大[6]。在分离过程中，最好在病死猪刚死亡或濒临死亡时采集病料，否则，即使病料中有APP感染，也会因死亡时间太长，致使病料中APP死亡[7]。初次分离培养基中要加入NAD，胸膜肺炎放线杆菌在常规培养基中大多不生长或生长不良。本研究选择加入NAD的TSA琼脂培养基，成功分离到3株APP，分别命名为YC01、YC02、YC03。抗生素滥用是困扰兽医临床治疗猪病的难题，根据药敏试验结果指导临床合理用药是比较科学的方法[5]。猪胸膜肺炎放线杆菌对头孢噻呋、地米考星、氟甲砜霉素等敏感。本研究表明，3株分离菌对头孢噻肟、氟苯尼考及由板蓝根、麻黄、连翘等组成的中药复方高度敏感。中西药联用控制猪传染性胸膜肺炎效果较好[8]。在发病猪群的饮用水中按 20 mL/50 kg 添加中药复方2水煎剂，2次/d，连续添加5 d，同时肌注头孢噻肟15～30 mg/kg，1次/d，连续注射 3 d，即可控制该病。
参考文献：
[1]唐文山，李昕. 猪传染性胸膜肺炎研究进展[J]. 动物医学进展，2008，29（2）：98-102.
[2]徐公义，王海丽，葛长城，等. 猪传染性胸膜肺炎的诊断与治疗[J]. 中国畜牧兽医，2008，35（5）：106-107.
[3]刘伟，王慧，陈小军，等. 头孢噻呋混悬剂治疗人工感染仔猪传染性胸膜肺炎的效果观察[J]. 中国畜牧兽医，2009，36（7）：164-166.
[4]吴文学，岳永波，高光，等. 注射用阿莫西林钠对人工感染猪胸膜肺炎的疗效试验[J]. 中国兽医杂志，2009，45（12）：68-70.
[5]江新生，贾卫军. 猪传染性胸膜肺炎病原分离鉴定及防治试验[J]. 郑州牧业工程高等专科学校学报，2008，28（3）：15-16，21.
[6]陈丽雯，杨正梅，毛家伟，等. 猪胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定[J]. 动物医学进展，2009，30（7）：17-19.
[7]蔡丙严，周建强，陈长春，等. 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的血清型鉴定与药敏试验[J]. 湖北农业科学，2012，51（4）：780-781，784.
[8]刘秀玲. 中西药结合治疗猪传染性胸膜炎[J]. 中兽医学杂志，2006（2）：20-21.
直接药敏试验 篇10
1 材料和方法
1.1 标本来源和材料
本院2006年1月至2007年12月的痰标本共1515份, 真菌鉴定及药敏试验所用材料为珠海黑马生物工程有限公司产品, 沙保罗培养基为杭州天和微生物试剂有限公司产品。
1.2 菌株分离鉴定和药敏方法
痰标本接种于沙保罗培养基25℃孵育, 培养阳性者菌落经革兰染色确认为酵母样菌后, 将分离株制成2麦氏单位悬液, 用黑马真菌鉴定药敏联合板进行鉴定和药敏, 按说明书操作。抗真菌药物包括:5-氟胞嘧啶 (5-FC) 、氟康唑 (FLU) 、伊曲康唑 (ITR) 、克霉唑 (C L O) 、益康唑 (E C O) 、两性霉素B (A M B) 、制酶菌素 (N Y S) 、咪康唑 (M I C) 、酮康唑 (K E T) 。
1.3 结果
1.3.1 痰标本检出阳性情况
1515份痰标本, 检出酵母样真菌305株, 阳性率为20.1%。其中白色念珠菌199株 (65.2%) , 热带念珠菌58株 (19.0%) , 光滑念珠菌21株 (6.9%) , 克柔念珠菌14株 (4.6%) , 其他念珠菌13株 (4.3%) 。
1.3.2 305株酵母样真菌药敏结果
见表1。
表1显示, 真菌敏感率由高到低依次为:AMB、ITR、C L O、5-F C、N Y S、M I C、F L U、E C O、K E T。
2 讨论