氨基葡萄糖（共10篇）
氨基葡萄糖 篇1
氨基葡萄糖[1]是蛋白多糖合成的前体物质, 可刺激软骨细胞产生有正常多聚体结构的蛋白多糖, 提高软骨细胞的修复能力, 抑制可损害关节软骨的酶, 并可防止损伤细胞的超氧化物自由基的产生, 促进软骨基质的修复和重建, 从而可缓解骨关节疼痛, 改善关节功能, 并延缓关节病变的发展;硫酸软骨素在关节中具有润滑和支撑功能, 还具有抗动脉粥样硬化与抗粥样斑块作用;两者复方在临床上主要用于骨性关节炎的防治, 减慢软骨退化和缓解疼痛。目前国内仅有氨基葡萄糖常规口服片剂和胶囊的生产与销售, 尚无复方氨基葡萄糖制剂 (氨基葡萄糖和硫酸软骨素) 。为此我们开发了复方氨基葡萄糖咀嚼片, 为控制其质量, 建立了测定氨基葡萄糖咀嚼片含量的高效液相色谱法。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 试药与试剂
硫酸氨基葡萄糖氯化钠复盐 (浙江海正药业股份有限公司) ;氨基葡萄糖对照品 (中国药品生物制品鉴定所;批号:649-200001) ;复方氨基葡萄糖咀嚼片 (规格:氨基葡萄糖∶硫酸软骨素=250mg∶200mg) , 甲醇色谱纯, 乙酸钠、醋酸及邻苯二甲醛等为分析纯。
1.1.2仪器
高效液相色谱仪 (Waters 600E泵控系统) , WatersTM 486紫外检测器, Rheodge 7125进样器, HW色谱工作站。
1.2 色谱条件
色谱柱:Hypersil C18 (50mm×4.6mm) ;流动相:以0.05mol·L-1乙酸钠水溶液 (取6.80g三水合乙酸钠, 加入700ml水使其溶解, 用醋酸调pH至5.9, 加水至1000ml) -甲醇 (900∶100) 为流动相;UV检测波长340nm;流速1.0ml·min-1;进样量为20μl。
1.3 溶液制备
1.3.1 衍生化试剂的制备
称取50mg邻苯二甲醛置14ml聚丙烯试管中, 加入1.25ml无水甲醇使其溶解, 再加入3-巯丙酸50μl和0.2mol·L-1硼酸盐缓冲液11.2ml, 缓慢混匀, 置暗处30min (每2d加入3-巯丙酸10μl以保持试剂浓度, 于暗处室温保存, 2周内使用) 。
1.3.2 对照液与供试液的制备
精密称取盐酸氨基葡萄糖对照品适量, 加水制成每1ml中含氨基葡萄糖1mg的溶液, 作为对照品溶液;取本品20片, 精密称定, 研细, 精密称取细粉适量 (约相当于氨基葡萄糖100mg) , 置100ml容量瓶中, 加稀释剂溶解并稀释至刻度。于快速混匀器上混匀使粉末悬浮, 65℃水浴超声20min, 置磁力搅拌器上搅拌5min, 离心, 取上清液作为供试液。
1.3.3 衍生化方法的制备
取0.2mol·L-1的硼酸盐缓冲液400μl, 置一小瓶中, 加入100μl衍生化试剂和100μl对照液或供试液, 混合, 衍生化1min后进样。记录色谱图。β-异构体与α-异构体的保留时间之比为1.6～1.7。β-异构体的出峰时间在4min左右, 以β-异构体的峰面积计算氨基葡萄糖的标示含量。
1.3.4 空白辅料干扰试验溶液的制备
取0.2mol·L-1硼酸盐缓冲液400μl置一小瓶中, 加入100μl衍生化试剂, 混合, 衍生化1min后进样, 记录空白衍生化试剂色谱图;取处方量硫酸软骨素及空白辅料适量 (约相当于氨基葡萄糖100mg的辅料量) , 置100ml容量瓶中, 加稀释剂溶解并稀释至刻度。以下同“1.3.2”项下“于……离心”制备供试液。
1.3.5 方法学有关溶液的制备
按本品20片处方量取硫酸氨基葡萄糖氯化钠复盐、硫酸软骨素及空白辅料适量, 置研钵中研匀, 作为模拟制剂粉末。另照处方量取硫酸软骨素及空白辅料适量, 置研钵中, 研匀, 作为空白辅料粉末;精密称取模拟制剂粉末适量 (约相当于氨基葡萄糖100mg) 5份, 分别置100ml容量瓶中。取1份加稀释剂稀释至刻度, 以下同“1.3.2”项下“于……离心”制备供试液, 取供试液衍生化后进样;再取1份加入稀释剂1ml, 置沸水浴中加热, 1h后加稀释剂稀释至刻度, 以下同“1.3.2”项下“于……离心”制备供试液, 取上清液衍生化后进样, 另取空白辅料粉末适量同法操作;另外3份中分别加入1mol·L-1盐酸溶液、1mol·L-1氢氧化钠溶液、30%H2O2溶液各1ml, 放置1h后分别调至中性, 加稀释剂稀释至刻度, 以下同“1.3.2”项下“于……离心”制备供试液, 取上清液衍生化后进样, 再分别取空白辅料粉末适量同法操作。
1.3.6 标准曲线的制备
精密称取氨基葡萄糖对照品200.00mg, 置100ml容量瓶中, 加水适量使溶解并稀释至刻度, 摇匀作为储备液。精密量取储备液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0ml置10ml容量瓶中, 加水稀释至刻度, 摇匀, 得浓度为200.00、400.00、600.00、800.00、1000.00、1200.00、1400.00、1600.00mg·L-1的系列溶液。分别取100μl按衍生化方法衍生化后进样, 记录色谱图, 并以浓度为横坐标, 峰面积为纵坐标, 绘制标准曲线。
1.3.7 方法回收率试验
按本品20片处方量精密称取硫酸氨基葡萄糖氯化钠复盐原料适量 (分别相当于标示量80%、100%、120%) , 分别置研钵中, 再分别加入处方量的硫酸软骨素及空白辅料, 研匀作为模拟制剂粉末。分别取相当于氨基葡萄糖80、100、120mg的粉末各3份, 精密称定, 置100ml量瓶中, 以下同“1.3.2”项下“于……离心”制备供试液;另精密称取氨基葡萄糖对照品适量, 用水溶解并稀释制成每1ml中约含1mg的溶液作为对照溶液。分别取对照液及供试液各100μl, 衍生化后进样, 记录色谱图, 按外标法以β-异构体的峰面积计算硫酸氨基葡萄糖的测得回收量, 计算回收率。
1.3.8 稳定性试验
精密称取氨基葡萄糖对照品适量, 用水溶解并稀释制成每1ml中约含1mg的溶液作为对照溶液。参考美国药典ⅩⅩⅦ 版中复方硫酸氨基葡萄片的标准中规定对照液于室温条件下1h内使用, 分别于0、0.5、1、1.5、2、2.5h取对照液100μl按衍生化方法衍生后进样, 以峰面积考察对照液的稳定性;另取本品20片, 精密称定, 研细, 精密称取适量 (约相当于氨基葡萄糖100mg) 的粉末置100ml容量瓶中, 加稀释剂溶解并稀释至刻度, 以下同“1.3.2”项下“于……离心”制备供试液。分别于0、1、2、4、6、8h取100μl按衍生化方法衍生后进样, 以峰面积考察供试液的稳定性。
1.3.9 进样精密度试验
取溶液稳定性项下对照液连续取样6份按衍生化方法衍生后进样, 以峰面积计算相对标准偏差 (RSD) , 考察精密度。
1.3.10 重复性试验
取样品20片, 精密称定, 研细, 精密称取粉末适量 (约相当于氨基葡萄糖100mg) , 共6份, 分别置100ml容量瓶中, 加稀释剂溶解并稀释至刻度。以下同“1.3.2”项下“于……离心”制备供试液。另精密称取氨基葡萄糖对照品适量, 用水溶解并稀释制成每1ml中约含1mg的溶液作为对照溶液。取对照液及供试液各100μl进行衍生化, 反应1min后量取20μl进样, 记录色谱图, 按外标法以β-异构体的峰面积计算其标示含量。
1.3.11 中间精密度试验
取同一样品由不同人员、在不同日期和不同仪器上按含量测定方法进行含量测定, 考察中间精密度。
1.3.12 含量测定溶液的制备
取本品3批各20片, 精密称定, 研细, 精密称取粉末适量 (约相当于氨基葡萄糖100mg) , 置100ml容量瓶中, 加稀释剂溶解并稀释至刻度。以下同“1.3.7”项下操作计算标示含量。
2 结果
2.1 色谱行为
在试验确定条件下, 空白辅料和硫酸软骨素对氨基葡萄糖峰无干扰, 且主峰分离较好, 表明本色谱条件检测复方氨基葡萄糖咀嚼片中的氨基葡萄糖含量是可行的 (分离度大于1.5) 。
2.2 空白辅料干扰试验
空白辅料图谱与空白衍生化图谱相同, 显示硫酸软骨素及空白辅料在此测定方法下对氨基葡萄糖的含量测定无干扰。
2.3 方法学研究
在试验条件下, 主药和辅料在酸、碱、热及氧化等破坏条件下, 酸、碱、热、氧化破坏的图谱与未破坏的供试液图谱相比, 峰面积均减小, 但无杂质峰。所以在此测定方法下, 主药的降解产物对含量测定无影响。
2.4 线性关系
以对照品溶液浓度为横坐标, 峰面积为纵坐标, 回归计算得回归方程:线性方程:A=1474.8C+347977, r=0.9996 (n=8) , 表明本品在200～1600mg·L-1浓度范围内与色谱峰面积线性良好。
2.5 方法回收率
见表1。
2.6 稳定性试验
对照液与供试液的RSD分别为0.7%和0.8% (n=6) , 表明对照液于室温条件下2.5h、供试液于室温条件下8h内稳定。
2.7 进样精密度试验
样品连续进样RSD为0.8% (n=6) , 表明样品衍生化后的进样精密度良好。
2.8 重复性试验
6份样品在相同条件下操作测得的平均含量为99.4%, RSD为0.4% (n=6) , 表明含量测定的重复性良好。
2.9 中间精密度试验
同一样品不同日期及不同仪器下操作的RSD为0.6% (n=6) , 表明中间精密度良好。
2.10 含量测定
3批样品测定的标示含量分别为99.5%、100.1%和99.4%。
3 讨论
本实验中使用的盐酸氨基葡萄糖 (对照品) 和硫酸氨基葡萄糖氯化钠复盐 (原料药) 是以氨基葡萄糖和衍生化试剂发生反应, 与氨基葡萄糖是何种盐没有关系, 并不影响复方氨基葡萄糖咀嚼片中氨基葡萄糖的含量测定。
氨基葡萄糖中含有α-异构体和β-异构体, 其中β-异构体含量较高 (60%左右) 且较稳定, 所以测定时以β-异构体的峰面积计算氨基糖的标示含量。
复方氨基葡萄糖咀嚼片是我们研究开发的3.2类新药, 本研究主要介绍了氨基葡萄糖高效液相色谱法, 将本品中另一有效成分硫酸软骨素视作辅料, 与空白辅料图谱及空白衍生化图谱相同, 显示硫酸软骨素及空白辅料在此测定方法下对氨基葡萄糖的含量测定无干扰, 此法具有准确、可靠、灵敏度高等特点, 对控制本品及相关制剂的质量具有重要意义。
参考文献
[1]张象麟.药物临床信息参考[M].成都:四川科学技术出版社, 2007:1403-1404.
氨基葡萄糖 篇2
氨基酸对锯缘青蟹N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的效应
研究Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Pro、Phe、Met、Asn、Cys、Ser、Thr、Asp、Glu、His、Lys、Arg等17种氨基酸对锯缘青蟹(Scylla serrata)N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响.结果表明:非极性氨基酸中Gly、Ala、Leu、Phe对酶活力几乎没有作用,而Val、Ile对酶略有激活,20 mmol/L的`Val可以使酶活力提高7.5%,40 mmol/L的Ile可以使酶活力提高10.5%;Pro、Met对该酶略有抑制作用,当浓度为40 mmol/L时,分别可以使酶活力下降15.2%和9.8%;极性氨基酸Asn、Cys、Ser、Thr对酶的活力没有影响;带负电荷的酸性氨基酸Asp和Glu对酶有抑制作用;带正电荷的碱性氨基酸His对该酶略有抑制,Lys和Arg对该酶抑制作用较强.研究Lys和Arg对酶催化pNP-NAG水解反应的抑制机理,并测定其抑制常数,结果表明:Lys和Arg的抑制作用均表现为可逆效应,抑制类型均为反竞争性抑制,其K.分别为5.29mmol/L和3.76 mmol/L.
作 者：林建成 谢进金 张继平杨学敏 王勤 陈清西 LIN Jian-cheng XIE Jin-jin ZHANG Ji-ping YANG Xue-min WANG Qin CHEN Qing-xi 作者单位：林建成,LIN Jian-cheng(厦门市妇幼保健院)谢进金,张继平,杨学敏,王勤,陈清西,XIE Jin-jin,ZHANG Ji-ping,YANG Xue-min,WANG Qin,CHEN Qing-xi(厦门大学生命科学学院,细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室,福建,厦门,361005)
刊 名：厦门大学学报（自然科学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF XIAMEN UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE) 年，卷(期)：2006 45(2) 分类号：Q356.1 关键词：锯缘青蟹 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 氨基酸 抑制作用机理氨基葡萄糖 篇3
[关键词] 骨性关节炎；氨基葡萄糖；关节软骨；软骨细胞；中药
[中图分类号] R684.3 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2011）23-108-01
骨性关节炎是中老年人常见疾病之一，与关节软骨退变密切相关[1]。目前国内通常应用中药配合盐酸氨基葡萄糖胶囊口服治疗膝骨性关节炎，取得一定进展。笔者2008年2月~2011年2月采用中药联合硫酸氨基葡萄糖钾胶囊口服治疗骨性关节炎患者30例，取得了满意的疗效，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择2008年2月~2011年2月收治入院的60例骨性关节炎患者为研究对象，按首次就诊次序编号，随机分为治疗组和对照组各30例。治疗组男13例，女17例；年龄50岁以下2例，平均年龄（68.4±7.9）岁，病程4~137个月，平均（59.6±4.3）个月；原发性骨关节OA 13例，继发性骨关节OA 17例；其中同时患2型糖尿病患者15例。对照组男14例，女16例；年龄50岁以下3例，平均年龄（65.1±9.3）岁，病程3~138个月，平均（58.8±5.2）个月；原发性骨关节OA 14例，继发性骨关节OA 17例；其中同時患2型糖尿病患者10例。入组时两组患者年龄、性别、病程、症状及体征等一般资料比较，差异均无统计学意义（P ＞0.05），具有可比性。
1.2 方法
对照组：给于硫酸氨基葡萄糖（山西康宝生物制品股份有限公司，H20051760），0.25～0.50 g/次，3次/d，饭中或饭后服用，6周为1个疗程，治疗3个疗程。治疗组在此基础上给予自拟中药方，牛膝10 g、补骨脂25 g、生地10 g、蜂房15 g、狗脊25 g、威灵仙25 g、细辛5 g、制川乌6 g，上药研细末温水冲服，3次/d，3~5 g/次，6周为1个疗程，治疗3个疗程。随访1年。
1.3 统计学处理
采用SPSS13.0统计软件包，多组间比较采用方差分析及q检验，两组间比较采用t检验。P ＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
试验期间，两组因不良事件各脱落1例，完成试验的病例治疗组29例，对照组29例。治疗组治愈13例，显效10例，好转5例，无效1例，总有效率为96.55%；对照组治愈10例，显效7例，好转6例，无效6例，总有效率为79.31%。两组疗效比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。从治疗2周起，两组患者的临床表现均开始缓解，Lequesne指数呈下降趋势，治疗6周后指数明显下降，与治疗前比较差异均有统计学意义（P ＜0.05），提示患者病情明显改善。治疗组治疗后6周、3个月、6个月改善最为明显，其次对照组，两组间比较差异有高度统计学意义（P ＜0.01）。
3 讨论
骨性关节炎指多种因素（力学和生物学等因素）引起的关节软骨纤维化、皲裂、溃疡、脱落而导致的关节疾病。病理特点为关节软骨变性破坏、关节边缘骨赘形成、软骨下骨硬化、滑膜增生等[2]。由于骨性关节炎的病因和发病机制尚未完全明了，所以至今尚无特效的治疗方法。氨基葡萄糖是一种天然的氨基单糖，是蛋白多糖合成的前体物质，可以刺激软骨细胞，是目前研究较多的结构改善药，硫酸氨基葡萄糖作为药物在欧洲使用多年，在骨关节炎治疗中显示出良好的疗效及安全性。相关研究认为硫酸氨基葡萄糖治疗骨关节炎有良好的疗效[3-4]。
本研究结果显示，硫酸氨基葡萄糖与中药联合治疗组在减轻骨关节的疼痛、压痛、肿胀、晨僵、步行能力等症状体征和改善关节功能的近、中、远期的疗效方面均比单独应用组好，尤其在早期治疗6周内。自拟中药方主要成分为，牛膝、补骨脂、生地、蜂房、狗脊、威灵仙、细辛、制川乌，经研究其具有活血化瘀，开通阻滞，消肿止痛，降低血脂及血黏度，调节免疫的功能的作用。而硫酸氨基葡萄糖也能抑制某些破坏软骨的酶，如胶原酶和磷脂酶A2，减少损伤细胞的内毒性因子及炎性递质（缓激肽前、列腺素等）的释放，从而能减轻骨关节炎症状，但其作用较缓慢。治疗6个月后，硫酸氨基葡萄糖组及联合组仍较治疗前有明显改善。中药停药后3个月症状有加重趋势，停药9个月后疗效与治疗前变化不明显，表明中药改善症状持续时间较短，不能改变骨性关节炎的病程，需长期服药改善症状。治疗12个月后，治疗组为佳，说明中药与氨基葡萄糖之间存在协同效应。
综上所述，联合应用硫酸氨基葡萄糖和中药治疗骨性关节炎疗效确切，可以改善早期症状和关节功能，并且可持续保护关节软骨，防止进一步破坏，促进关节软骨修复，防止进一步破坏，促进关节软骨修复[5-6]；而且不良反应少，患者耐受性好，服用方便，是治疗中老年骨关节炎的一个较好的治疗方案。
[参考文献]
[1] 娄晓芬，翁习生，郑刚.骨关节炎特异性药物的新进展[J].中华实用医药杂志，2003，3（11）：1190-1192.
[2] 邱贵兴，翁习生，张克，等.盐酸、硫酸氨基葡萄糖治疗骨关节炎的平行对照临床研究[J].中华医学杂志，2005，3（85）：3067-3070.
[3] 张志勇，解光越，侯晓华，等.硫酸氨基葡萄糖治疗骨关节炎的临床研究[J].中国骨肿瘤骨病，2009，8（2）：236-237.
[4] 廖春壮.风湿性疾病骨关节炎的诊治进展[J].中外医学研究，2011，9（22）：158-160.
[5]汪琦，汪蕾.中医辨证施治联合玻璃酸钠综合治疗膝关节骨性关节炎疗效观察[J].中国乡村医药杂志，2007，14（9）：50-51.
[6] 徐佑军.硫酸氨基葡萄糖胶囊治疗膝骨关节炎的疗效观察[J].中国当代医药，2010，17（18）：47.
氨基葡萄糖分散片的实验研究 篇4
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 药品和主要试剂
氨基葡萄糖(浙江海正药业有限公司提供,纯度为99.98%)、对照品(盐酸氨基葡萄糖,中国药品生物制品检定所649-200001);氨基葡萄糖分散片(规格:0.25g,批号20070411,20070412,20070413);微晶纤维素pH-301 (日本旭化成株式会社,药用);交联羧甲基纤维素钠(日本旭化成株式会社,药用)、低取代羟丙基维素(淮南山河药用辅料有限公司,药用);微粉硅胶(湖州展望化学药业公司,药用),乙酰丙酮、无水乙醇、二甲氨基苯甲醛等其它试剂均为分析纯。
1.1.2 主要仪器
UV762紫外可见光光度计(上海精密科学仪器有限公司),ZRD6-B型药物溶出度仪(上海黄海药检仪器厂),赛多利斯BP211D型电子分析天平(德国)。
1.2 实验方法
1.2.1 处方筛选
处方设计规格为每瓶0.25g,主要考察其外观、硬度、可压性、脆碎度、分散均匀性、溶出度等多项指标,根据实验条件拟选择微晶纤维素(pH-301)、交联羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基维素、微粉硅胶、乳糖等,进行处方优化。
1.2.2 稳定性考察
将上述样品置光照(4500Lx)、高温(60℃)、高湿(92.5%RH)条件下放置10d及室温(25℃±2℃,60%±10%RH)留样考察12个月,考察其外观、脆碎度、分散均匀性、溶出度、含量及有关物质等。
1.2.3 标准曲线与回收率试验
精密称取105℃干燥至恒重的盐酸氨基葡萄糖对照品约50mg,置50ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,分别精密量取(1.2、1.6、2.0、2.4、2.8)mL置50ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,作为贮备液。精密量取各贮备液5mL分别置具塞试管中;另以水为空白,以下同“含量测定”项下操作,以浓度为横坐标(X)、吸收值为纵坐标(Y),绘制标准曲线,回归方程为Y=0.00710X+0.002,r=0.9998(n=5,相关系数为1.3294),结果表明:氨基葡萄糖在(24.12～56.28)mg.L-1浓度范围内线性关系良好;在上述测定条件下进行回收率试验,分别称取处方量80%、100%、120%的3个不同浓度各3个样品测定回收率,其平均回收率为99.94%,RSD为0.95%(n=9)。
1.2.4 重现性与精密度试验
取070411批样品20片,精密称重,研成粉末,精密称取粉末适量(相当于盐酸氨基葡萄糖50mg)6份,以下同“含量测定”项下操作,其平均标示含量为99.68%,RSD=0.50%(n=6);精密称取本品(批号070411)适量,分2天、由2个分析人员、在2台不同设备上重复上述操作,其平均标示含量为99.66%,RSD为0.68%(n=6)。结果表明本法重复性良好,精密度高。
1.2.5 样品含量测定
取样品20片,精密称重,研成粉末,精密称取粉末适量(相当于盐酸氨基葡萄糖50mg),置50ml容量瓶中,用水溶解并稀释至刻度,摇匀,过滤;取续滤液2.0mL,置50ml容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀;另精密称取105℃干燥至恒重的盐酸氨基葡萄糖对照品50mg,同上操作。分别精密量取样品和对照品溶液各5.0ml分别置具塞试管中,另以水为空白,各加乙酰丙酮溶液2.0ml,摇匀,置沸水浴中加热20min,取出至冰水浴中冷却,再依次精密加入无水乙醇10 ml,对二甲氨基苯甲醛溶液2.0ml,摇匀,置65℃～70℃水浴中加热10 min,取出立即用冷水冷却至室温,照分光光度法在530nm的波长处测定吸收值,计算,并与1.3294相乘即得。
1.2.6 溶出度测定
取本品,照溶出度测定法(《中国药典》2005年版(二部)附录X C第二法),以900ml水为溶出介质,转速50转/分。依法操作,经30min时,取溶出液10mL,滤过,精密量取续滤液5mL置25ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀作为供试品溶液;另精密称取105℃干燥至恒重的盐酸氨基葡萄糖对照品适量,加水溶解并定量稀释制成每1mL约含40μg的溶液。照含量测定项下方法,依法测定,计算出每片的溶出量,限度为标示量的80%。
1.2.7 质量控制
(1)性状:本品均应为白色片。
(2)重量差异:按《中国药典》2005年版(二部)附录ⅠA项下依法操作。取三批样品各20片,分别精密称定各片的重量,计算平均片重。每片重量与平均片重相比较,超出重量差异限度的药片不得多于2片,并不得有1片超出限度的1倍。
(3)脆碎度检查:取本品三批样品各10片(约为6.8g),精密称重,使用FT-2000脆碎度检查仪,按《中国药典》2005年版(二部)附录X G项下检查片剂脆碎度。
(4)有关降解物质检查(TLC法):按处方比例取本品空白辅料适量,置10m[1]量瓶中,加水适量使溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为空白辅料溶液;精密称取本品的细粉适量(约相当于硫酸氨基葡萄糖250mg),置10ml量瓶中,加水适量使溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液;精密量取供试品溶液2.0ml至100ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,制成每1ml中含硫酸氨基葡萄糖0.5mg的溶液作为对照溶液。分别精密吸取上述溶液各4μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以二氯甲烷-甲醇-浓氨溶液(4:4:2)为展开剂,展开后,晾干,置饱和碘蒸气中显色30min,检视。供试品溶液如有杂质点,所显的杂质斑点颜色与对照溶液(2.0%)的主斑点相比应小于2.0%。
(5)其他各项检查均应符合中国药典2005年版片剂项下要求。
1.2.8 室温留样考察
本品模拟上市包装在室条件下放置12个月,并定期考察各项指标。
2 结果
2.1 处方筛选
根据实验条件选用微晶纤维素(pH-301)、交联羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基维素、微粉硅胶、乳糖等,进行处方优化,制得片剂外观、硬度、可压性、脆碎度、分散均匀性、溶出度等多项指标符合中国药典2005年片剂项下要求;在光照(4 500Lx)、高温(60℃)、高湿(92.5%RH)条件下放置10d及室温(25℃±2℃,60%±10%RH)留样考察12个月见表1,结果表明本处方稳定;故最终确定处方为氨基葡萄糖250g,微晶纤维素100g,交联羧甲基纤维素钠50g,乳糖50g,微粉硅胶1g,共制成1000片。
2.2 氨基葡萄糖分散片的含量
三批样品(070411,070412,070413)测定的标示含量分别为100.1%,99.63%,99.98%,结果表明,三批样品的标示含量均符合要求。
2.4 氨基葡萄糖分散片室温留样考察,结果见表2。
3 讨论
3.1 本品在高温(60℃),光照(4 500LX)条件下含量未见明显下降,但有下降趋势;高湿(RH=92.5%)条件下吸湿性较强。参考国内外相关资料,样品应置干燥、避光处保存,样品包装时也需要达到避光效果。
3.2 本品在(24.12～56.28) mg·L-1浓度范围内线性关系良好,含量测定回收率高且重现良好,可克服辅料及有关物质的干扰,具有准确、可靠等特点,对控制本品及相关制剂的质量具有重要的意义。
摘要：目的:探讨氨基葡萄糖分散片的处方与质量控制方法。方法:以微晶纤维素(pH-301)、交联羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基维素、微粉硅胶为辅料制备;采用紫外可见分光光度法测定其含量。结果:本处方制备的氨基葡萄糖分散片在光照(4500L×)、高温(60℃)、高湿(92.5%RH)10d及室温留样考察12mo,物理及化学性质稳定。结论:研制的氨基葡萄糖分散片性质稳定;质量控制方法准确可靠。
关键词：氨基葡萄糖,分散片,处方,质量控制
参考文献
氨基葡萄糖 篇5
关键词：N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 几丁质代谢 酶学性质
中图分类号：556+.2 文献标识码：A文章编号：1672-5336（2014）14-0068-03
Abstract： N-Acetyl-β-D-glucosaminidase （NAGase， EC 3.2.1.52）. is one of the chitin metabolic enzymes， NAGase in chitin metabolism and sugar base on the transfer of special function， cause the foreign and domestic research on its various aspects， including the separation and purification of enzyme， basic properties， enzymatic molecular biology research， cloning sequencing and so on. This article from three aspects as animals， plants， and microorganisms are introduced domestic and foreign research status about NAGase. Microbial NAGase associated with the formation of the cell walls of fungi and bacteria polysaccharides shell， biological control of pathogenic fungi play an important role on the agriculture； NAGase animals is the key enzyme of glycoprotein and mucopolysaccharide completely degradation， chitin in jacket type of animals and the development of biodegradable polymeric materials have higher use value； NAGase plant research is less； NAGase are also exists in the human body， is of great significance for clinical diagnosis and treatment of some diseases.
Key Words：N-Acetyl-β-D-glucosaminidase Chitin metabolism Enzymology properties
几丁质（chitin）又可以称作甲壳素，甲壳质等，是由几千个乙酰葡萄糖胺残基通过β-1，4糖甙链直线连接成的聚合（图1-1）[1]，因此又名（1，4）-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-葡萄糖][2]。其在自然界中的分布仅次于植物纤维，是目前地球上的第二大生物资源，主要分布在低等植物，节肢动物、以及昆虫的外壳、软体动物（如鱿鱼、乌贼）的外壳等，其每年的生物合成量超过百亿吨，因此十分具有研究价值[3]。
多年以来，几丁质的开发一直是研究的热点，研究发现几丁质本身不能被利用，但他的降解产物有广泛的用途，几丁质降解后产生的几丁寡糖类生物活性物质，是几丁质工业中的高附加值产品，已被广泛用于人类保健及医疗抗菌[4]。而N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖酶，正是几丁质降解酶系中的一种，对于南极磷虾几丁质的开发有很大的应用价值，已被广泛用于人类保健及医疗抗菌、环境保护、化学化工及生物工程等領域，目前国外已就几丁质的降解及生物学转化开展一系列研究，国内相关研究报道较少。
1 N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶概述
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（N-Acetyl-β-D-glucosaminidase NAGase，EC 3.2.1.52）是酸性水解酶中的一种，在几丁质降解过程中起关键作用，其在生物体中主要分布在动物内脏中，其可将几丁质代谢过程中产生的寡糖水解成单糖[5]。此外，该酶广泛存在于各种组织器官、体液中。其测定方法有比色法和荧光光度法，甲壳动物体内营养代谢以及周期性脱壳也有该酶的参与，因此，对该酶的研究，有助于促进甲壳动物周期性脱壳的生长研究[6]。该酶的研究可以提高触杀虫剂的效果，将该与一些生物农药联用将有助于药剂对害虫几丁质表皮的渗透，从而提高触杀农业害虫的效果[7]。
2 N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶的分子生物学研究现状
2.1 酶的分离纯化及性质研究概况
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶来源十分丰富，目前已有报道较多的是动物、和微生物中均可分离纯化得到。微生物N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶是目前研究最多，做深入的，动物中主要集中在甲壳类动物的研究，植物中从1994年有学者第一次研究，到目前研究你依然很少[8]。动物中该酶的分离纯化主要采用凝胶柱，DEAE离子交换柱层析分离纯化等；微生物中真菌（Trichoderma asperellum）中主要利用HiTrapQ阴离子交换柱及phenyl-Sepharose疏水柱层析分离纯化出两种同型二聚体N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶[9]； 从嗜高温菌（Thermococcus chitonophagus）中利用butyl-TSK-NPR疏水柱及Mono Q离子交换柱层析分离单亚基N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶[10]等。
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2.2 酶的抑制失活研究性研究概况
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的抑制和失活研究，可影响其生理功能，也可抑制某些细菌、真菌和昆虫的生长发育，在相关研究中也有报道过。相关研究主要做了金属离子Hg2+，Cu2+，Fe2+，和Zn2+，变性剂盐酸胍、尿素等对N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活性、结构等的影响。表明Hg2+，Cu2+，Fe2+，和Zn2+等金属离子抑制剂对N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶，均有不同年程度的抑制作用，重金属离子抑制性更强，其中Zn2+Cu2+，为可逆性非竞争抑制，而Hg2+等金属离子多为不可逆性抑制[11-12]。
3 微生物中 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶研究概况
关于微生物 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶目前研究最多，最有价值的就是其与真菌细胞壁和细菌多糖外壳的形成相关，对于农业上生物控制致病真菌有重要作用[13]。对此多为学者做了相关研究，通过对不同对微生物N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力调控的研究，发现，在大部分真菌中该酶最适pH值介于 4.0～5.5之间，等电点偏酸[14]；而细菌来源的酶的等电点偏酸偏碱的都有，研究者们猜想这可能与其含有较多的谷氨酸和天冬氨酸等有关[15]。不同来源的细菌N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的最适温度差异较大，真菌N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的最适温度大约在50℃[16]。
目前研究报道的微生物 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的分离纯化大多采用盐析、透析、疏水柱、离子交换柱、凝胶柱等多步层析纯化步骤[17]。谭玉龙做了N-乙酰氨基葡萄糖苷酶Nag1对于生物膜结构的作用，发现可有效抑制生物被膜的形成，同时也可清除生物被膜结构并有效的恢复了抗生素的效果[18]。
4 动物中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的研究概况
关于动物，国内外研究较多的主要集中在烟草天蛾、家蚕、蜘蛛、中国螯蟹、山麻鸭、猪、虾等物种，研究表明两栖类动物、鸟类及昆虫等都能产生几丁质酶，而另外一些動物如兔子和龟则不能产生任何几丁质酶，仅含有微量的几丁质二糖酶[19-21]。一些研究表明动物几丁质酶也属于内切酶体系，可将几丁质水解成二糖或三糖，动物几丁质酶主要分布于消化液、腺体、胃和肠粘膜[22]。其中虾类主要研究的是南美白对虾，而对于南极磷虾中有关该酶的报道目前还没有。研究表明N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶主要存在于昆虫和甲壳动物的内脏以及性腺中[26-27]。
有研究者已从烟草天蛾内脏中纯化出两种几丁质水解酶：外切几丁质酶和N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶；对纯化的烟草天蛾NA-Gase酶的研究表明，在蜕皮液中外切几丁质酶和酶协同作用的效率是单NA-Gase酶作用的六倍，而这种协同增效作用的速度取决于蜕皮液中两种酶的比[22-25]。
5 植物中 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的研究概况
到目前为止，关于植物几丁质酶系的报道较少， 2003年Oikawa等人报道了从玉米幼苗中提取β-N-乙酰氨基己糖苷酶，通过凝胶电泳测得该酶分子量为70 kDa，单亚基[26-28]；最适pH为4.5，最适温度为55℃，等电点为6.75，同做了Ag+Hg2+等金属离子对该酶抑制作用的研究，表明Ag+Hg2+是不可逆非竞争性抑制剂[29-31]。
追溯更早发现史益敏等研究者在1994年也做了相关研究[31]，从系统感染TMV（tobacco mosaic virus）的番茄叶胞外蛋白提取液中分离纯化得分子量为145kDa的同型二聚体β-N-乙酰氨基己糖苷酶，该酶同时具有N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶和N-乙酰-β-D-氨基半乳糖糖苷酶活力，最适pH在4.8～5.0之间，最适温度在44～47℃之间[32-33]。进一步做了，N-乙酰葡萄糖和N-乙酰半乳糖等抑制剂对该活性、结构等的影响实验，表明N-乙酰葡萄糖和N-乙酰半乳糖是酶的竞争性抑制剂，Ag+和Hg2+是酶活性的不可逆抑制剂[35-36]。
6 总结和展望
作为几丁质生物降解的主要酶类，N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶受到诸多生命学科的重视，并开展了大量的研究工作，目前已经建立了一整套较为完善的酶学体系和研究方法，对N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的理化性质、生物结构例如N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶蛋白的核苷酸序列、一级结构和高级结构以及作用机理等许多方面进行了深入系统的研究。普遍的观点认为来源于细菌的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶其主要功能是将几丁质分解利用作为营养源；近年来随着分子生物技术的高速发展，大量的不同来源的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶基因被克隆，并作了细致的序列分析。
近年来，我国的海产品养殖加工工业迅猛发展，尤其是南极磷虾的副产品的开发，是目前 生物资源开发的热点。由于对于南极磷虾的加工利用上尚处于初级阶段，在加工中产生大量的废弃物，这些废弃物中50%都是几丁质。所以对于南极磷虾几丁质的开发研究目前是世界上各个国家都在研究的课题，对于该酶的研究有助于我们对于几丁质催化降解机理的研究，为几丁质降解提供理论基础。
致谢
感谢为本文提供帮助的所有老师和同学们，谢谢你们辛勤的付出，感谢本人所采用文献的作者们，因为有你们研究的基础，才有了今天这篇文章，你们是最大的付出者，谢谢你们！
参考文献
[1]张宇婷.来源于维式气单胞菌B565的两个几丁质降解酶基因的高效表达、性质研究及水产养殖应用[D].中国农科院，2012.
[2]张继平.锯缘青蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的性质及活力调控研究[D].厦门大学，2011.
[3]陈少波，吴根福.几丁质酶研究进展[J].科技通报，2004， 20：258-262.
nlc202309020218
[4]蓝海燕，田颖川，王长海，等.表达β-1，3-葡聚糖酶及几丁质酶基因的转基因烟草及其抗真菌病的研究[J].遗传学报，2000，27：70-77.
[5]张莉，杨土凤，陈晓梅，等.气单胞菌几丁质酶的产酶条件优化研究[J].安徽农业科学，2007，35（17）：5035-5037.
[6]王军.棉铃虫N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力调控的研究[D].厦门大学，2006.
[7]龚敏.南美白对虾N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力调控及动力学研究[D].厦门大学，2006.
[8]杨学敏.效应物对锯缘青蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的抑制作用研究[D].厦门大学，2006.
[9]李昕，王海燕，张义正.利用细菌血红蛋白提高大肠杆菌基因工程菌几丁质酶基因的表达[J].四川大学学报，2003，40（4）：787-791.
[10]李华钟，王树英，森本兼司等.Clostridium paraputri ficumM-21β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的表达、纯化与性质[J].无锡轻工大学学报，2003，22（3）；03-05.
[11]KIMURA Y，TOKUDA T，OHNO A，TANAKA H，ISHIGURO Y. Enzymatic properties of endo-β-N-acetylglucosami
nidase from developing tomato fruits and soybean seeds：substrate specificity of plant origin endoglyc
osidase[J]Biochim.Biophys.Acta，1998，1381：27-36.
[12]杨丽，姜亦文.甲壳素物降解的现状[J].青岛化工学院学报，2000，21（4）：301-304.
[13]彭辉银，李星.中国棉铃虫核型多角体病毒几丁质酶基因的定位与克隆[J].中国病毒学，1998，13（2）：139-143.
[14]邱立友.微生物几丁质酶与害虫防治[J].河南农业大学学报，1995，29（2）：184-191.
[15]吴家和，张献龙，罗晓丽，等.转几丁质酶和葡聚糖酶基因棉花的获得及其对黄萎病的抗性[J]. 遗传学报， 2004， 31（2）：183-188.
[16]杨文博，冯波.链霉菌S01菌株几丁质酶的纯化及性质[J].微生物通报，1997， 24（2）：84-87.
[17]黄小红，陈清西，尤民生，等.棉铃虫N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质[J].昆虫学报，2005，48（4）：0454-6296.
[18]陈三凤，李季伦.几丁質酶研究历史和发展前景[J].微生物学通，1993，20（3）：156-160.
[19]陈少波，吴根福.几丁质酶研究进展[J].科技通报，2004，20（3）：258-262.
[20]史益敏，颜季琼，费雪南，等.番茄叶片胞外β-N-乙酰氨基己糖苷酶的部分性质研究[J].植物学报，1994，36（11）：864—870.
[21]黄小红，罗忠宝，李明伟，等.猪精液碱性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的纯化与酶学性质研究[J].中国农业科学，2008，41（9）：2843-2849.
[22]OIKAWA A ，ITOH E，ISHIHARA A，IWAMURA H.Purification and characterization of β-N-acetylhexosaminid
ase from Maize seedlings[J].Plant Physiol.2003，160：991-999.
[23]魏晓倩.凡纳滨对虾壳膜N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶性质及活力调控的研究[D].厦门大学，2006.
[24]石艳.菜青虫N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的性质研究[D].厦门大学，2006.
[25]王吉桥.南美白对虾生物学研究与养殖[M].北京：海洋出版社，2003.
[26]王荫长.昆虫生物化学[M].北京：中国农业出版社，2001.
[27]SCIGELOVA M，CROUT D H G.Microbial β-N-acetylhexosaminidases and their biotechnological applications [J].Enzyme Microb.Technol.1999，25：3-14.
[28]CIFALI AP，Filho BP. Purification and partial characterization ofN-acetyl-β-D-glucosaminidase from Tritrichomonas foetus[J].Parasitol.Res.，1999，85：256-262.
[29]杜鹃.凡纳滨对虾N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的活力调控的研究[D].厦门大学，2008.
[30]DONG D L，HART G W.Purification and characterization of a selective N-acetyl-beta-D-glucosaminidase from rat spleen cytosol [J].J Biol Chem.1994，269（30）：19321-19330.
[31]DROBA B，DROBA M.Properties of acid beta-N-acetyl-D-glucosaminidase from cock semen[J].Folia Biol （Krakow），1992，40（1-2）：67-71.
[32] ROBBINS P W，TRIMBLE R B，WIRTH D F，HERING C，MALEY F，MALEY G F，DAS R，GIBSON B W，ROYAL N，BIEMANN K.Primary structure of the Streptomyces enzymeEndo-β-N-acetylglucosaminidase H[J].J Biol Chem.，1984，259（12）： 7577-7583.
[33]DANULAT E， KAUSCH H，Chitinase in fish[J].J.Fish Biol.1984， 24：125-133.
[34]TSUJIBO H，FUJIMOTO K，TANNO H，MIYAMOTO K，IMADA C，OKAMI Y，INAMORI Y.Genesequence，purification and characterization of N-acetyl-beta-glucosaminidase from a marinebacterium，Alteromonas sp.strain O-7 [J].Gene，1994，146（1）：111-115.
[35]ICHIKAWA M，ICHIKAWA Y.A mechanism-based affinity-labeling agent for possible useinisolating N-acetylglucosaminidase[J].Bioorg.Med.Chem.Lett.，2001， 11：1769-1773.
[36]PETERBAUER C K，LORITO M，HAYES C K，HARMAN G E， KUBICEK C P.Molecular cloning andexpressionof the nag1 gene （N-acetyl-β-D-glucosaminidase -encoding gene）fromTrichoderma harzianum P1[J].Curr.Genet， 1996，30：325-331.
氨基葡萄糖 篇6
1 实验仪器、原料与试剂
1.1 主要仪器
AVATAR360傅立叶变换红外光谱仪 (美国Nicolet公司) , Mettler AE240 (十万分之一) 天平 (梅特勒-托利多上海仪器有限公司) , R201D旋转蒸发器 (郑州长城科工贸有限公司) , 循环水式真空泵 (河南省巩义英峪予华仪器厂) , DF-101S集热恒温加热磁力搅拌器 (郑州长城科工贸有限公司) , CL-4型磁力加热搅拌器 (河南省巩义英峪予华仪器厂) , SK6-01B电热恒温干燥箱 (湖北省黄石恒丰医疗器械有限公司) , DW-2型多功能电动搅拌器, 电热套。
1.2 原料与试剂
甲壳素>99.8% (浙江金壳生物化学有限公司) , 氨基葡萄糖盐酸盐>99.8% (浙江金壳生物化学有限公司) , 浓盐酸, 氢氧化钠, 无水乙醇均为分析纯;粉末状活性炭和粒状活性炭为化学纯, 贝壳 (农贸市场收集) 。
2 实验部分
2.1 甲壳素的制备工作流程
选用新鲜的贝壳原料[5], 去除残留的肉质和污物后在80℃下烘干处理, 用铁锤砸至颗粒≤1cm的小碎片, 用碾钵碾至粉末≤2mm, 取粉末100g, 用1 mol/L的盐酸400mL, 浸泡2.5h, 期间补充30mL浓盐酸2次 (酸处理) , 过滤, 用水洗至中性。进行碱处理 (取NaOH5g配成5%的Na OH溶液100mL, 加入滤渣, 煮沸2h) ;抽滤, 水洗至中性, 继续用1 mol/L的盐酸溶液浸泡, 搅拌3 h (用滴液漏斗滴加浓盐酸, 保持溶液酸度恒定, p H<1) 。抽滤, 水洗至中性, 进行碱处理 (取Na OH2 g配成2%NaOH溶液100mL, 加入滤渣, 煮沸2h) 。抽滤, 水洗至中性, 用1mol/L的盐酸溶液浸泡至无气泡产生, 抽滤, 得产物19.22 g, 50℃下烘干, 得18.32g甲壳素, 产物外观为白色的半透明片状固体, 产率为18.32%。
2.2 氨基葡萄糖盐酸盐 (GAH) 的制备流程
取贝壳制取的甲壳素2.0g, 加人21.6m L浓盐酸, 搅拌, 加热至90℃, 保温回流3.5h后, 加水30mL, 再加2.0g活性炭, 于65～70℃保温35min, 趁热过滤, 活性炭用30mL热水洗涤, 洗液与滤液合并, 减压蒸馏浓缩, 至馏出液为45mL后, 残液趁热过滤, 滤液倾入20mL无水乙醇, 即有混浊出现, 搅拌后加盖, 静置过夜。抽滤, 加无水乙醇洗, 得粗产物0.78g, 外观为白色略带浅黄色晶体粉末。加10m L水, 加热至60～70℃, 加0.5g活性炭, 搅拌, 保温15min, 过滤, 滤液倒入50mL无水乙醇, 搅拌后加盖, 静置过夜, 抽滤, 干燥得无色晶体粉末0.72g, 即氨基葡萄糖盐酸盐 (GAH) 。
2.3、氨基葡萄糖盐酸盐产品红外光谱分析鉴定
采用KBr压片法[7], 对制得的GAH产品进行红外光谱分析测定, 得到自制G A H产品的红外光谱图 (见图1) , 在1200 cm-1处没任何吸收峰, 与浙江金壳生物化学有限公司购得的GAH红外光谱图 (见图2) 和标准GAH的IR谱图 (见图3) 相吻合, 说明产品中不存在糖苷键, 已完全水解成氨基葡萄糖盐酸盐单体。
3 结果与讨论
以甲壳素为原料制备GAH的影响因素有:
3.1 酸水解时间对GAH产率的影响
固定反应的温度为90℃, 盐酸的浓度为3 6%, 甲壳素与盐酸的质量之比为1:6。改变水解的时间, 得到产率的变化情况, 见表1。由表1可以看出, 在实验条件下, 用36%的盐酸水解时, 在一定温度下随着反应时间的增加, GAH的产率逐渐提高, 当反应达到3.5 h时, GAH产率达到最大值36%, 随后则有所下降。这是由于随着时间的增加, 甲壳素β- (1, 4) 糖苷键逐渐被打断, 由于氧化、分解等副反应而导致GAH产率降低, 且在高浓度酸及长时间高温水解时, 又会产生粘壁焦化现象[6], 也导致GAH产率有所降低。
3.2 甲壳素与盐酸质量配比对GAH产率、质量的影响
固定水解反应的时间为3.5 h, 盐酸的百分浓度为36%, 反应温度为90℃, 改变甲壳素与盐酸的质量比, 得到产率变化情况, 见表2。由表2可以看出, 随甲壳素与盐酸质量比的增大, GAH的产率提高。当甲壳素与盐酸的质量比达到1:6时, 产率达到最大值36%, 随后则有所下降。这是因为甲壳素的量一定时, 盐酸的量越多则甲壳素的反应几率就越大, GAH产率越高;但质量比过大时, 就会出现焦化现象, GAH产率则有所下降, 且产品颜色呈灰褐色, 同时成本也明显增大;若盐酸用量过少, 则体系黏度增大, 不能充分反应, 且易造成粘壁, 增加副反应, GAH产率降低。从红外谱图也可看出, 质量比为1:4和1:7时, 在2500 cm-1和3000 cm-1处较标准谱图杂峰多, 表明GAH在甲壳素与盐酸的质量比为l:4和1:7时所含的杂质较多, 而当质量比为1:6时, 杂质峰较少, 杂质较少, 故甲壳素与盐酸的质量比1:6为佳。
3.3 盐酸浓度对GAH产率、质量的影响
固定反应的温度为90℃, 水解时间为3.5h, 甲壳素与盐酸的质量之比为l:6, 改变盐酸的浓度, 得到产率的变化情况, 见表3。由表3可以看出, 随着盐酸浓度的升高, GAH产率也随之提高, 这是由于低浓度盐酸下甲壳素的水解反应慢, 难以打断β- (1, 4) 糖苷键。随着盐酸浓度升高, 打断β- (1, 4) 糖苷键的能力增强, 水解加快, GAH的产量不断增加, 当盐酸浓度为36%时, 水解反应程度达到最大, GAH产率最高。
3.4 水解温度对GAH产率、质量的影响
固定甲壳素与盐酸的质量之比为1:6, 水解时间为3.5h, 盐酸的百分浓度为36%, 改变水解反应的温度, 得到GAH产率的变化情况, 见表4。由表4可以看出, 当温度偏低时, 甲壳素溶解不完全, 而当温度过高时, 焦化现象严重, 从而影响产品的质量, 产品显灰褐色。实验得出最佳温度为90℃。
3.5 浓缩结晶条件对GAH产率、质量的影响
原始浓度越高, 浓缩易达到过饱和, 起晶点高, 出现晶核早[8], 在其它条件相同的情况下, 起晶点高的产生的晶体细小, 晶体量多。实验发现:终点浓度控制在晶体与母液比在1:1左右, 一次结晶率较高;结晶的降温速度也直接影响晶体的大小与整齐度, 在测定GAH在水中的溶解度时发现, 随着温度的升高, 其溶解度增大, 但在60℃～70℃之间, GAH溶解度存在一个突跃区, 在60℃之前与70℃以后, 则溶解度增加相对缓慢, 因此, 浓缩液冷却到60℃～70℃之间时, 要掌握好降温速度, 不能过快, 否则, 晶体颗粒细而造成分离困难。
3.6 脱色时间及温度对GAH质量的影响
由表5可知, 当时间为20min～30min时, 得出的产品略带颜色, 主要原因是脱色时间不够, 当时间达到35min时脱色效果最好, 时间超过40min后, 脱色得效果并没有增加, 从成本核算考虑, 活性炭的最佳的脱色时间为35min。实验中还发现:脱色温度偏低, 脱色效果不佳, 得到的产品颜色微黄。活性炭的最佳脱色温度在65～70℃, 这个温度脱色比较完全, 产品符合标准。
3.7 甲壳素粒度对GAH产率及质量的影响
实验中发现, 当样品颗粒偏大时, 即使水解时间较长, 产率也很低, 而当颗粒偏细时, 则容易发生焦化现象, 从而降低产率, 同时也影响产品的质量, 使产品纯度降低[9]。以粒度为2 5目时, 得出的产品产率及质量最佳。
4. 结论
综上所述, 甲壳素水解制备氨基葡萄糖盐酸盐 (GAH) 的水解时间控制在3.5 h、甲壳素与盐酸的质量比为1:6、盐酸浓度为36%、水解温度为90℃、甲壳素粒度为25目、脱色时间为35min、脱色温度在65～70℃、晶体与母液比在1:1左右时, GAH产品的质量最好, 产率最高。
摘要：本文探讨了水解时间、质量配比、盐酸浓度、水解温度、甲壳素粒度、脱色时间及温度、浓缩结晶条件对GAH产率和质量的影响。实验表明:甲壳素水解制备氨基葡萄糖盐酸盐的水解时间控制在3.5h、甲壳素与盐酸的质量比为1:6、盐酸浓度为36%、水解温度为90℃、甲壳素粒度为25目、脱色时间为35min、脱色温度在65～70℃、晶体与母液比在1:1左右时, 产品的质量和产率最好。
关键词：氨基葡萄糖盐酸盐,影响因素,贝壳
参考文献
[1]蒋挺大.甲壳素[M].北京:化学工业出版社.2003:258-290.
[2]周培根, 尤瑜敏, 戚晓玉等.氨基葡萄糖盐酸盐的制备及其某些性质[J].水产学报.2000, 24 (1) :76-80.
[3]McAlindon T E, La Valley M P, Gulin J Peta1.Glucosamine and chondroitin for treatment of osteoarthritis[J].JAMA, 2000, 283:1469—1475.
[4]王敦, 胡景江, 刘铭汤.从臭蜣螂中提取甲壳素/壳聚糖的研究[J].林业科学.2004, 40 (5) :180—185.
[5]詹永乐, 黄春芳, 陈复生.家蚕蛹皮制取壳聚糖的最佳工艺条件[J].化学通报.2001, 64 (7) :450—453.
[6]王风琴.用龙虾壳制取D-氨基葡萄糖盐酸盐[J].中国生化药物杂志.2002, 23 (3) :129.131
[7]董炎明, 许聪义, 汪剑炜等.不同脱乙酰度壳聚糖的红外光谱分析[J].中国科学 (B辑) .2001, 31 (2) :153-156.
[8]钱和生, 李兰, 薛红梅.氨基葡萄糖盐酸盐制备及溶解度研究[J].化学世界.1994, (2) :75—75.
氨基葡萄糖 篇7
1试剂与仪器
盐酸氨基葡萄糖片对照品,市售( 四川宝光药业股份有限公司出品) ; 盐酸氨基葡萄糖片供试品,本实验室自制。
UV2550紫外可见分光光度计,岛津仪器有限公司; ZRS 4智能溶出仪,天津大学无线电厂。
2试验过程与讨论
2.1溶液配制
( 1) 乙酰丙酮试液的配制: 乙酰丙酮1 m L,加0. 5 mol/L碳酸钠溶液定容至25 m L,备用。
二甲氨基苯甲醛试液的配制: 取对二甲氨基苯甲醛0. 8 g, 加无醛乙醇15 m L溶解后,再加盐酸15 m L,摇匀,备用。
( 2) 供试品溶液的配制: 取一定质量的本品细粉,精密称定,置100 m L量瓶中,加水超声使溶解并稀释至刻度,摇匀, 过滤,精密量取续滤液1 m L,置10 m L量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,备用。
( 3) 对照品溶液的配制: 精密称取盐酸氨基葡萄糖对照品适量,加水制成每1 m L中约含50 μg的溶液,取2 m L置10 m L量瓶中,加水定容,备用。
2.2测定方法
样品中加乙酰丙酮试液1. 0 m L,置沸水浴中准确加热25 min,冰水冷却后,加无醛乙醇3 m L及二甲氨基苯甲醛试液1. 0 m L,置60 ℃ 水浴中保温1 h,立即冷却至室温,用无醛乙醇定容。精密量取水2 m L,同法操作,作为空白对照样品。利用紫外分光光度法分别依次测定吸收度,计算,即得。
2.3溶出度测定条件
2.3.1溶出度测定波长的选择
取盐酸氨基葡萄糖对照品适量,按上述方法配制,取水2 m L同法操作,作为空白溶液,扫描照紫外 - 可见分光光度法测定,最大吸收波长为530 nm,故选择530 nm为检测波长。
2.3.2溶出介质的选择
分别以水、0. 1 mol/L盐酸溶液和0. 01 mol/L盐酸溶液900 m L为溶出介质,转速为50 r/min进行溶出度试验,结果见图1。 以上结果表明,以水作为溶出介质,样品的溶出度较好,从经济节约的原则考虑,选择水( 900 m L) 为溶出介质。
2.3.3转速的选择
以水溶液900 m L为溶出介质,采用篮法,分别以50 rpm、 75 rpm、100 rpm为转速, 测定样品 的全溶出 曲线, 结果见图2。
根据图2结果及今后的生产化考虑,选择50 rpm为转速, 能保证三批样品的质量得到控制,而且所测得的全溶出曲线光滑平整。
2. 4溶出度测定方法学验证
2. 4. 1溶出度测定线性关系试验
精密称取含盐酸氨基葡萄约5. 0 mg、7. 5 mg、10. 0 mg、 12. 5 mg、15. 0 mg盐酸氨基葡萄糖片细粉,分别置100 m L量瓶中,加水超声使溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液1 m L置于10 m L量瓶中,加水稀释 至刻度,摇匀。 按上述方法配制。制成浓度分别为5. 0 μg/m L、7. 5 μg/m L、 10. 0 μg / m L、12. 5 μg / m L、15. 0 μg / m L的溶液,取水2 m L同法操作,作为空白溶液。在530 nm波长处测定吸光度。结果见表1。
由表1数据做拟合曲线得: Y = 0. 07343 + 0. 05447X R = 0. 99929,样品浓度在5. 01 ~ 15. 06 μg / m L范围内线性关系良好。
2. 4. 2准确率测定
精密称取盐酸氨基葡萄糖约20. 0 mg、25. 0 mg、30. 0 mg各三份,分别置于100 m L量瓶中,摇匀,滤过,精密量取续滤液2 m L置于10 m L量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀。按上述方法配制。测定吸光度,计算准确率,结果见表2。表2试验数据表明,准确率良好。
2. 4. 3溶出度测定重复性试验
取本品细粉约23. 8 mg( 约相当于盐酸氨基葡萄糖10 mg) , 置于100 m L量瓶中,加水超声使溶解并稀释至刻度,摇匀, 滤过,精密量取续滤液1 m L置于10 m L量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀。按上述方法配制。测定吸光度,结果见表3。
结果表明,重复性良好。
2.4.4溶出度测定溶液的稳定性
取上述重复性的两份溶液,分别于0 h,1 h,2 h,3 h, 5 h,测定吸光度,结果见表4。
表4结果表明,溶出度溶液在5 h内测定是稳定的。
2.4.5溶出度测定滤膜干扰试验
照溶出度测定方法测定,于30 min取样,用滤膜滤过,分别弃去3 m L、5 m L、7 m L、10 m L,分别取续滤液2 m L置10 m L量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀。按上述方法配制。取水2 m L同法操作,作为空白溶液。测定吸光度,结果见表5。
表5结果表明,溶出度测定溶液弃去3 m L、5 m L、7 m L、 10 m L时,滤膜均没有吸附,故用滤膜过滤不干扰测定。
2.5三批样品与市售样品全溶出曲线的比较
取本品,以水900 m L为溶出介质,转速为50 rpm,于每杯中投1片,依法操作,经5、10、15、30、45 min时,取溶液适量滤过,取续滤液2 m L置10 m L量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀。按上述方法配制。取供试品溶液和对照品溶液,测定吸光度,计算每片的溶出量。
结果表明,自制样品与参比样品的全溶出曲线基本一致, 三批样品的溶出度均一性比参比样品稍好,参比样品的溶出要快。
2.6药物溶出度Weibull模型建立
取本品,照溶出度测定方法,以水900 m L为溶出介质, 转速为50 rpm,于每杯中投1片,依法操作,经30 min时,取溶液滤过,取续滤液2 m L置10 m L量瓶中,加水稀释至刻度, 摇匀。测定全溶出曲线。
利用origin软件拟合结果如图5所示,拟合方程为Y = A( 1 - exp( - ( k( x - xc) ) ^d) ,A = 1. 0147,xc = - 2. 15954E - 8,k = 0. 14823,d = 1. 00518。
由拟合结果可知,R2= 0. 99905,拟合度好,且拟合图形和样品的全溶出曲线一致。
3结论
氨基葡萄糖 篇8
由于美拉德反应的复杂性, 本文采用建立模拟体系的方法研究红枣干制过程中的美拉德反应。Buera等人[3,4]应用溶液模拟体系研究食品的非酶褐变反应时发现, 模型溶液反应的活化能与实际食品中比较接近, 说明溶液模拟体系的研究结果对于真实食品体系有科学的参考意义[4]。本文分别建立葡萄糖和不同氨基酸 (甘氨酸、苏氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸) 的溶液模拟体系, 研究加热条件下葡萄糖和氨基酸的含量以及体系的褐变度, 确定不同氨基酸与葡萄糖的褐变反应程度, 为红枣干制加工过过程中褐变控制提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
骏枣:购于新疆阿拉尔市, 9a树龄。
其他试剂均为国产分析纯。
AR2140型电子天平, 梅特勒-托利多;AR2140电子炉;756N紫外可见分光光度计, 上海菁华科技仪器有限公司;HHS型电热恒温水浴锅, 上海博迅实业有限公司医疗设备厂。
1.2 实验方法
1.2.1 模拟体系的建立
以市售阿克苏骏枣中葡萄糖和氨基酸含量为基准, 分别建立葡萄糖与不同氨基酸的褐变溶液模拟体系:磷酸盐缓冲液100m L为基质, 葡萄糖3%、甘氨酸0.093%、苏氨酸0.1233%、缬氨酸0.358%、甲硫氨酸0.189%、赖氨酸0.076%、异亮氨酸0.321%、亮氨酸0.128%。
样品在60℃水浴中, 每隔2h测定一次还原糖残留量、氨基态氮含量以及280nm, 420nm处的吸光度。
1.2.2 指标测定
还原糖测定:参照GB/T5009-7-2003测定。
氨基态氮测定:参照参考文献[2]测定。
褐变度测定:采用紫外-可见分光光度计测定在280nm、420nm处吸光度。
1.3 动力学分析
研究显示, 对于一个特定的食品褐变模拟体系, 其褐变度等的变化速率符合一级反应动力学, 即:
式中:At——热处理时间为t时的样品褐变度;t——热处理时间, h;
k——褐变速率常数, h-1;A0——热处理时间为0时的样品褐变度。
2 结果与分析
2.1 模拟体系中葡萄糖残留量变化
图1为p H6时, 60℃条件下不同模拟体系中葡萄糖含量随热处理时间的变化。如图可知, 随着加热时间的延长, 葡萄糖含量显著下降, 且“甘氨酸-葡萄糖”模拟体系中葡萄糖含量的下降速率最快, 反应6h后, 还原糖降至2.22%。
2.2 模拟体系中氨基态氮的残留量变化
图2为p H6时, 60℃条件下不同模拟体系中氨基态氮含量随热处理时间的变化。由图可知:随着加热时间的延长, 氨基态氮含量显著减少。氨基态氮含量在反应前4h下降较快, 在反应4h后, 变化趋势减缓。原因可能是在模拟体系中氨基酸和葡萄糖发生了美拉德反应, 缩合生成希夫碱, 希夫碱经Amadori重排形成Amadori产物, Amadori产物根据p H值的不同发生降解, 整个模拟体系的p H值为6, 因此Amadori产物主要发生1, 2烯醇化而形成5-羟甲基糠醛 (5-HMF) , 进而发生一系列反应, 如环合、脱氢、重排、异构化等, 最终形成棕色含氮聚合物类黑素[10]。
2.3 模拟体系褐变度的研究
本文通过测定模拟体系在280nm、420nm处的吸光值, 研究体系褐变度的变化。前者反映了部分美拉德反应中间产物, 如吡嗪类物质的形成速率及浓度变化, 后者是评价体系褐变度变化的指标, 也反映了美拉德反应的中间产物HMF的形成速率及浓度的变化[11,12,13]。
图3为60℃条件下, 不同褐变模拟体系在280nm处的吸光值的变化。由图可知:随着加热时间的延长, 280nm处吸光值显著增加, 说明随着反应的进行, 美拉德反应中间产物逐渐积累, 浓度增大, 导致吸光值不断增大。其中“甘氨酸-葡萄糖”模拟溶液吸光值最大, “亮氨酸-葡萄糖”模拟溶液吸光值最小, 说明甘氨酸与葡萄糖反应得到的中间产物浓度最大, 反应速率最快;亮氨酸与葡萄糖反应速率最慢。
图4为模拟体系在420nm处的吸光值随加热时间的延长的变化。由图可知:随着加热时间的延长, 420nm处的吸光值显著升高, 且各个模拟体系中A280值的变化要快于A420值的变化, 原因可能为反应中间体产生在颜色聚合之前[13]。
图5为在60℃条件下, 模拟体系在280nm与420nm处吸光值之比, 该值表示中间产物的聚合程度, 即中间产物转化为棕色聚合物的程度[14]。由图可知:随着时间的变化, 曲线成下降趋势, 反应2h后, 下降速率减缓。原因可能是反应2h后中间体已大部分转化为棕色聚合物, 美拉德反应速率在2h后减缓。
2.4 模拟体系褐变动力学研究
以Ln (At/A0) 为纵坐标, 加热时间t为横坐标, 研究不同褐变模拟体系的褐变动力学, 结果如图6所示。
结果表明:不同葡萄糖-氨基酸模拟体系在420nm处的褐变符合一级反应动力学模型, 拟合程度良好。k值为褐变反应速率常数, k值越大, 说明褐变反应速率越快。由表1可知:褐变速率以“甘氨酸-葡萄糖”模拟体系最快, “苏氨酸-葡萄糖”模拟体系最慢。
3 结论
本文通过建立葡萄糖与不同氨基酸褐变溶液模拟体系模拟红枣干制过程中的美拉德反应。主要得出以下结论:
在p H6时, 60℃的条件下, 随着加热时间的变化, 氨基酸与还原糖的含量逐渐减少, “甘氨酸-葡萄糖”模拟体系反应最为剧烈。在60℃条件下, 模拟体系褐变速率符合一级反应动力学, 褐变速率以“甘氨酸-葡萄糖”模拟体系最快, “苏氨酸-葡萄糖”模拟体系最慢。
摘要：本文利用溶液体系模拟研究红枣干制过程中葡萄糖和氨基酸 (甘氨酸、苏氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸) 的褐变反应, 根据骏枣中葡萄糖和氨基酸含量建立溶液模拟体系, 测定在60℃条件下体系中葡萄糖和氨基酸的含量及A280nm、A420nm, 研究体系褐变程度。结果表明:随着加热时间的延长, 模拟体系中葡萄糖含量、氨基态氮含量均下降, 褐变度增加;280nm处的吸光值大于420nm处的吸光值。在本模拟体系中, 甘氨酸与葡萄糖褐变反应速率最大, 苏氨酸与葡萄糖褐变反应速率最小。
关键词：模拟溶液,美拉德反应,动力学
参考文献
[1]于静静, 毕金峰, 丁媛媛.不同干燥方式对红枣品质特性的影响[J].现代食品科技, 2011, 27 (6) :610-614.
[2]蔡长河, 郭际, 曾庆孝.荔枝在干制过程中非酶褐变的研究[J].食品科学, 2006, 27 (10) :158-161.
[3]刘凤霞, 张燕, 汪厚银, 等.热破碎番茄浆贮藏期间非酶褐变动力学分析[J].食品科学, 2011, 32 (10) :260-265.
氨基葡萄糖 篇9
关键词：盐酸氨基葡萄糖,臭氧,膝关节炎
膝关节骨关节炎又称骨关节病, 是一种老年常见的退行性关节疾病, 以关节软骨的变性、破坏及骨质增生为特征。本病的发生与衰老、肥胖、炎症、创伤、关节过度使用、代谢障碍及遗传等因素有关。本病多发于55岁以上, 女性多于男性, 主要症状为疼痛、肿胀、关节畸形、功能障碍等。2009-2012年笔者用盐酸氨基葡萄糖+臭氧注射治疗膝关节炎患者200例, 效果满意, 现报告如下。
资料与方法
2009年3月-2012年3月收治膝骨性关节炎患者200例, 男86例, 女114例, 年龄55~80岁, 平均67.5岁, 病程6个月~20年。男86例108膝, 女114例186膝, 单膝128例, 双膝72例。关节活动受限56例78膝, 膝关节肿胀伴积液106例160膝, 膝关节绞锁22例35膝, 关节畸形伴活动障碍16例26膝。所有患者均有膝关节困、沉、胀、疼痛, 活动后加重, 休息后减轻, 天冷加重, 天热减轻等特征, 膝关节压痛点多分布在膝关节内侧、上侧、外侧及关节内疼痛。
诊断标准:按照中华医学会风湿病学分会制定的膝关节炎诊断标准及临床放射学标准[1]: (1) 1个月前有膝关节疼痛。 (2) X线片显示骨骨赘形成。 (3) 关节液检查符合骨性关节炎。 (4) 年龄>40岁。 (5) 受累膝关节晨僵<30分钟。 (6) 有骨摩擦音。满足 (1) + (2) 条或 (1) + (3) + (5) + (6) 条或 (1) + (4) + (5) + (6) 条者可诊断膝OA。
根据X线片将病情程度分4期[2,3]: (1) 第1期:有关节边缘增生, 关节间隙无狭窄。 (2) 第2期:有关节边缘增生。 (3) 第3期:除上述变化外, 还有软骨下囊性变。 (4) 第4期:关节已毁坏, 出现屈曲挛缩、X形腿或O形腿, 伴有不同程度骨缺损。
主要症状:200例患者有不同程度膝关节周围疼痛, 上下楼梯困难, 下蹲站立困难, 屈曲伸直疼痛, 髌骨周围压痛, 内侧副韧带压痛, 外侧副韧带压痛62例, 关节肿胀伴积液16例, 关节畸形13例, 可见膝关节变形, 体症主要有:股四头肌萎缩, 过伸或过屈痛, 浮髌试验阳性, 关节周围或间隙压痛。X线检查:显示膝关节不同程度的骨质增生, 关节间隙变窄或内外侧关节间隙不对称等退行性改变。
排除标准: (1) 对于不符合膝关节骨关节炎诊断标准。 (2) 合并有心血管、脑血管等其他系统疾病。 (3) 膝关节肿瘤、结核及感染性关节炎。 (4) 有关节游离体及半月板损伤。 (5) 对氨基葡萄糖及臭氧过敏者。
治疗方法:所有患者口服盐酸氨基葡萄糖胶囊, 750 mg/次, 2次/d, 4周1个疗程, 治疗3个疗程。膝关节注射治疗:0.5%利多卡因注射液10~20 m L+30%~40%浓度臭氧注射10 m L, 1次/周, 4次1个疗程, 连续3个疗程。治疗过程中停用其他止痛药物。经过3个疗程治疗后, 随访6~12个月。
疗效判定标准: (1) 优:膝关节的疼痛明显减轻或消失, 膝关节活动灵活, 上下楼梯方便, 屈伸活动自如, 困、胀、沉感觉消失。 (2) 良:膝关节疼痛减轻, 膝关节活动尚可, 上下楼梯无痛苦, 屈伸改善, 困、胀、沉感觉减轻。 (3) 差:膝关节疼痛时轻时重, 关节活动障碍, 上下楼梯困难, 其他症状无改善。
统计学分析:用SPSS 13.0统计软件进行分析, 计量资料采用组间比较采用配对t检验, P<0.05为差异有统计学意义。
结果
200例患者均完成3个疗程的正规治疗, 治疗后随访6~12个月, 平均9个月。其中经过治疗后优162例 (81%) , 良34例 (17%) , 差4例 (2%) , 总有效率98%。
讨论
膝关节骨关节炎的发生主要因为人体载荷传导异常[4], 由胶原纤维断裂、软骨损伤及细胞合成蛋白多糖减少或溶酶体基质软化等因素引起。病理改变主要为局限性, 进行性关节软骨破坏及关节边缘的骨赘形成, 同时本病的发生还与关节的应力负荷关系密切, 肥胖患者发病率高, 女性发病率高于男性, 有可能与内分泌雌激素及骨质疏松有关。
氨基葡萄糖为天然的氨基单糖, 是人体关节软骨基质中合成蛋白聚糖所必需的重要成分, 有明显改善膝关节关节液的合成和关节软化作用, 具有保护关节软骨及减缓关节退化和抗炎止痛作用, 能明显减轻膝关节炎的不适症状, 可改善关节软骨的代谢, 提高关节软骨的修复能力, 保护损伤的关节软骨, 还可阻断骨关节炎的病程进展抑制关节变形, 修复关节软骨。臭氧具有强氧化、强镇痛、抗炎、抗水肿、清除自由基作用[5]。对膝关节的无菌性炎症和渗出、水肿能有明显的抑制作用, 同时在损伤的关节面和软骨形成保护, 消除致痛因子, 消除关节疼痛, 缓解膝关节的疼痛症状, 改善关节功能, 延缓膝关节的病理过程和疾病进程。因而兼具症状调控和结构调控效应。持续应用安全、有效、稳定。0.5%利多卡因10~20 m L+30%~40%浓度的臭氧注射治疗膝骨关节炎, 能促进膝关节周围的血液循环, 提高臭氧的作用效能, 减轻臭氧注射的不适感觉, 增加协同作用, 修复关节受损, 拮抗致痛因子的释放, 保护关节软骨和关节面, 扩张周围血管, 改善血液循环, 达到镇痛、抗炎、抗水肿及重塑作用。
参考文献
[1]中华风湿病学分会.OA诊治指南草案[J].中华风湿病学杂志, 2003, 7 (11) :702-704.
[2]刘英杰, 董彦, 刘利芳.骨性关节炎的分期治疗[J].中国临床康复, 2004, 8 (8) :1426-1427.
[3]孙刚, 张磊, 张洪美.膝骨性关节炎分级治疗的疗效分析[J].中国骨伤, 2004, 17 (6) :332-334.
[4]王亦璁.骨与关节损伤[M].北京:人民卫生出版社, 2003:932-933.
氨基葡萄糖 篇10
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2010年2月—2012年12月本院治疗的KOA患者92例, 患者诊断均符合美国风湿病学会 (ACR) 膝骨关节炎临床诊断标准[3], 经X线检查, 关节间隙变窄, 有骨赘, 排除患有风湿、类风湿性关节炎和其他关节炎、痛风等疾病的患者和伴有心、肝、肾、肺和造血系统严重原发性疾病患者。将患者随机分为治疗组和对照组, 各46例。其中治疗组男18例, 女28例;年龄46~72岁, 平均 (62.5±4.4) 岁;发病部位:左膝14例, 右膝18例, 双膝14例;病程2个月~7年, 平均 (5.0±1.2) 年;病情:轻度13例, 中度17例, 重度16例。对照组男19例, 女27例;年龄45~73岁, 平均 (61.8±4.6) 岁;发病部位:左膝15例, 右膝16例, 双膝15例;病程3个月~8年, 平均 (5.0±1.4) 年;病情:轻度12例, 中度16例, 重度18例。两组患者性别、年龄、发病部位、病程、病情比较差异无统计学意义 (P>0.05) , 具有可比性。
1.2 治疗方法
对照组患者关节腔内注射玻璃酸钠注射液 (山东博士伦福瑞达制药有限公司) 治疗, 患者取平卧位, 双膝放松, 整个操作过程保持无菌, 将患者髌骨从外向内推, 确定髌骨和股骨间的间隙为进针点, 常规消毒, 入针时有落空感, 回抽少数关节积液后, 再在此部位缓慢注入玻璃酸钠, 25mg/次, 注射完毕后轻柔活动关节5~6次, 使药液均匀扩散在关节腔内, 24h内避免剧烈运动, 1次/周, 连续注射5周。治疗组患者在对照组治疗的基础上口服氨基葡萄糖胶囊0.75g/粒 (香港澳美制药厂) , 1粒/次, 2次/d, 共服用5周。治疗5周后, 比较两组患者的临床效果、膝关节肿胀和疼痛消失时间及治疗前后视觉模拟 (VAS) 评分和膝关节关节镜 (Lysholm) 评分情况。
1.3 观察指标
患者的疼痛程度采用VAS评分法评估, 在纸上长划一条10cm直线, 一端为0, 另一端为10, 0端表示无痛, 10端表示剧痛, 中间部分表示不同程度的疼痛, 评估时让患者根据自我感觉画出代表疼痛的位置, 得分越高表示患者疼痛程度越高, 1~3分表示疼痛轻微, 可忍受;4~6分表示中度疼痛, 影响正常生活, 但尚能忍受;7~10分表示疼痛难忍。
膝关节功能采用膝关节Lysholm评分进行评估, 共涉及4项术前评分 (跛行、支撑、交锁、不稳定) 和4项术前评分 (疼痛、肿胀、爬楼梯、下蹲) , 得分越高说明膝关节功能越好。
1.4 临床疗效判定[4]
患者的临床效果按以下标准进行判断: (1) 治愈:患者治疗后膝关节疼痛、肿胀症状完全消失, 功能恢复正常; (2) 显效:膝关节疼痛、肿胀症状明显减轻, 功能明显恢复, 但还没恢复正常; (3) 有效:膝关节疼痛、肿胀症状有所减轻, 功能有好转; (4) 无效:治疗后膝关节症状和功能无变化。其中总有效率=治愈率+显效率+有效率。
1.5 统计学方法
采用SPSS17.0软件进行统计学处理, 计数资料采用χ2检验;计量资料以 (±s) 表示, 采用t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 治疗后两组患者的临床效果比较
治疗后治疗组患者的总有效率91.30%, 对照组患者的总有效率76.09%, 两组比较差异有统计学意义 (P<0.05) ;治疗组患者的治愈率34.78%, 高于对照组患者的23.91%, 差异有统计学意义 (P<0.05, 见表1) 。
2.2 治疗后两组患者临床症状消失时间比较
治疗组患者膝关节肿胀消失时间、疼痛消失时间均短于对照组患者, 差异有统计学意义 (P<0.05, 见表2) 。
2.3 两组患者治疗前后VAS评分和Lysholm评分比较
治疗前两组患者的VAS评分和Lysholm评分比较, 差异均无统计学意义 (P>0.05) ;治疗后治疗组患者的VAS评分低于对照组患者, Lysholm评分高于对照组患者, 差异有统计学意义 (P<0.05, 见表3) 。
3 讨论
研究发现, KOA的病理特点为关节腔变窄, 关节软骨自行平衡应力失调, 软骨中胶原纤维增加, 粘多糖和蛋白酶减少, 腔内关节滑液减少, 且软骨下骨组织的骨密度增加, 临床表现为膝关节疼痛、肿胀、关节交锁受限, 大大降低了患者的生活质量[5]。目前治疗KOA尚无根治药物, 临床上常用的非甾体抗炎药也只能暂时缓解患者疼痛。临床实践表明, 在膝骨关节内注射外源性玻璃酸钠能有效提高膝关节液的营养成分, 补充透明质酸的内源性不足, 并且能避免关节间的直接接触, 降低摩擦力, 起到润滑效果[6]。玻璃酸钠属体内生理活性物质, 是关节滑液和软骨的组成成分, 由滑膜β细胞分泌, 主要成分是大分子粘多糖, 具有营养关节液、抑制软骨炎症、修复软骨组织和润滑关节的作用[7]。临床试验表明, 注射玻璃酸钠对治疗中轻度KOA患者, 起效快, 临床效果较佳, 治疗作用持久, 但对于重度KOA患者效果欠佳[8]。本研究中对照组KOA患者采用单纯玻璃酸钠治疗, 结果表明, 对照组患者的总有效率仅为76.09%, 说明治疗效果不甚理想。氨基葡萄糖属氨基单糖, 是软骨的基本成分, 存在于机体内的所有结缔组织中, 其治疗KOA的主要作用机制可能是刺激软骨细胞合成蛋白多聚糖, 补充软骨基质丢失的蛋白多聚糖, 维持软骨基质基本形态, 还能降低溶酶体酶和弹性蛋白酶的释放, 阻碍软骨基质的破坏作用[9]。同时氨基葡萄糖还具有一定的抗炎作用, 从而起到止痛消肿的效果[10]。但有研究认为, 单纯口服氨基葡萄糖, 对治疗KOA的疗效欠理想, 尤其是远期效果不尽如人意。本研究治疗组患者采用氨基葡萄糖联合玻璃酸钠治疗, 治疗5周后临床总有效率高达91.30%, 显著高于对照组患者, 膝关节肿胀疼痛消失时间较对照组显著缩短, 且VAS评分显著低于对照组患者, Lysholm评分显著高于对照组患者。
综上所述, 氨基葡萄糖联合玻璃酸钠治疗KOA, 能显著改善膝关节肿胀疼痛等临床症状, 膝关节功能明显增强, 临床效果显著。
参考文献
[1] 孙瑛.实用关节炎诊断治疗学[M].北京:北京大学医学出版社, 2002:319.
[2] 夏玲, 王欢, 窦晓丽.膝骨性关节炎的非手术治疗现状[J].中国老年学杂志, 2011, 4 (31) :1941-1944.
[3] 中华医学会风湿病学分会.骨关节炎诊治指南 (草案) [J].中华风湿病学杂志, 2003, 11 (7) :702-704.
[4] 朱克林.玻璃酸钠联合氨基葡萄糖治疗膝骨性关节炎[J].中国当代医药, 2010, 17 (4) :42-43.
[5] 黄进贤, 张会昌, 尹志华, 等.双醋瑞因、硫酸氨基葡萄糖联合玻璃酸钠治疗膝骨关节炎的疗效[J].实用医学杂志, 2013, 29 (22) :3749-3751.
[6] 喻忠斌, 范建楠, 尹培荣.镜下清理术联合玻璃酸钠和氨基葡萄糖治疗膝骨关节炎[J].当代医学, 2009, 15 (6) :62-64.
[7] 梁楼峰, 谭宪湖, 蒋宗滨, 等.关节腔内注射玻璃酸钠与联合口服氨基葡萄糖治疗膝关节骨性关节炎的疗效比较[J].实用疼痛学杂志, 2010, 6 (6) :419-420.
[8] 李化光, 刘华, 杨新明, 等.透明质酸对人骨关节炎软骨细胞保护机制的探讨[J].实用医学杂志, 2012, 28 (7) :1040-1042.
[9] 韦隽.盐酸氨基葡萄糖联合玻璃酸钠关节腔注射治疗膝骨性关节炎效果观察[J].中国当代医药, 2013, 20 (20) :98-99.