血清载脂蛋白a（共7篇）
血清载脂蛋白a 篇1
慢性乙型肝炎患者发展到肝硬化甚至肝癌的危险性和血清HBVDNA水平呈显著相关[1], HBV颗粒可与血清中不同的脂蛋白成分结合, 影响疾病进展。肝脏是脂类代谢的重要器官, 当肝功能严重受损时就会发生脂类物质代谢异常[2]。该研究2008年12月—2009年12月期间测定血清APOA1水平, 并与HBVD-NA、ALT水平进行相关性分析, 旨在探讨血清APOA1在慢性乙肝病毒感染中的临床价值, 现报告如下。
1 对象与方法
1.1 研究对象
选择该院住院的慢性乙肝病毒感染者共377例, 其中慢性乙型肝炎233例, 肝硬化105例, 肝癌39例, 男性294例, 女性83例, 平均年龄 (47.5±14.15) 岁;诊断均符合中华医学会肝病学分会、感染病学分会2005年制定的“慢性乙型肝炎防治指南”[3]、中国抗癌协会肝癌专业委员会2000年制定的“原发性肝癌的临床诊断与分期标准”[4];所有患者近6个月内未服用抗病毒药;排除合并酒精性肝炎、自身免疫性肝病、遗传代谢性肝病等其他病因;无合并其他型病毒性肝炎、无合并糖尿病、冠心病、肾脏疾病等疾病。
1.2 检测方法
住院次日清晨空腹抽取静脉血, 测定血清APOA1及ALT, 采用免疫比浊法, 仪器使用型号TBA-120FR全自动生化分析仪。同时及时分离血清放置-70度, HBVDNA定量检测采用PCR-荧光探针法。记录3组患者APOA1水平、HBVDNA载量、ALT水平相关数据。
1.3 统计方法
该研究数据采用SPSS16.0软件进行分析, 计量资料因数据方差不齐, 采用非参数检验, 数据用Median (IQR) 表示。两两比较采用Mann-Whitney检验。
2 结果
随着疾病进展, APOA1水平、HBVDNA载量、ALT水平均逐渐下降, 肝癌组中位数最低, APOA1水平各组间比较差异均有统计学意义 (P<0.05) ;HBVDNA载量、ALT水平在慢性乙型肝炎组分别与肝硬化组及肝癌组比较, 差异有统计学意义 (P<0.05) , 但肝硬化组及肝癌组比较, 差异无统计学意义 (P>0.05) 。
APOA1与HBVDNA在肝硬化组中呈正相关 (P<0.05) , 而与ALT无相关性 (P>0.05) ;APOA1与ALT在肝癌组中呈正相关 (P<0.05) , 与HBVDNA无相关性 (P>0.05) ;APOA1与ALT、HB-VDNA在慢性乙型肝炎组无相关性 (P>0.05) 。见表1。
3 讨论
APOA1是高密度脂蛋白 (HDL) 的主要蛋白质成分, 是由肝细胞分泌, 具有重要的抗感染功能[5,6]。APOA1作为辅助因子激活卵磷脂胆固醇酰基转移酶 (LCAT) , 在胆固醇代谢中发挥重要作用。它主要识别HDL受体, 促使HDL与肝细胞膜的HDL受体结合, 然后被肝细胞摄取并逐渐降解。已确定病毒感染及炎症发生与血浆HDL和APOA1水平下降有关[7,8], 当肝功能受损时, 肝脏合成HDL的能力降低, 所以血清中HDL和APOA1也相应减少, 肝脏病理炎症活动度越严重, HDL和APOA1降低越明显, 所以HDL和APOA1也能很好地反映肝脏病理炎症活动度, 低水平APOA1意味严重的肝细胞损害。Norton[9]、Ai J[10]等研究显示APOA1水平与慢性乙型肝炎及肝癌有关[9]。该研究发现, 慢性乙型肝炎组、肝硬化组及肝癌组随着疾病进展, APOA1下降, 肝癌组中位数最低, 各组间比较差异有统计学意义 (P<0.05) , APOA1与ALT在肝癌组中呈正相关 (P<0.05) , 而在肝硬化组及慢性乙型肝炎组无相关性 (P>0.05) , 说明血清APOA1能较准确地反映肝功能损害的程度, 与肝脏严重程度密切相关, 这与文献报告基本一致[11,12]。
注:△与慢性乙型肝炎组比较, P<0.05。
已有详实的依据表明慢性乙肝病毒感染患者中HBVDNA水平与肝脏疾病的进展密切相关[13,14,15,16,17]。Ashraf[18]等研究发现血浆脂蛋白改变能作为评估HBV感染有价值的方法。有证据表明在肝炎活动过程中乙肝病毒抗原能够损害宿主细胞脂代谢, 诱导氧化应激[19], 血脂因合成障碍而降低。彭湃澜[20]等研究结果表明, 在HBVDNA阳性患者中, APOA1与HBVDNA之间呈线性正相关。但该研究发现, 在肝硬化组中, APOA1与HBV DNA呈正相关, 提示这组患者中APOA1与HBVDNA之间存在一定的联系, 但该慢性乙型肝炎组、肝癌组中APOA1与HBVDNA无相关性, 提示APOA1水平与HBVDNA的载量并无直接联系, 故认为该研究没有足够的证据支持APOA1水平与HBVDNA本身相关, 这与Wong等[21]的研究一致。
综上分析, APOA1能评估慢乙肝患者肝脏损害程度, APOA1明显下降时需警惕肝脏损害已达相当严重程度甚至有癌变可能。
该研究不足:APOA1除在肝脏合成外, 小肠也是其合成的器官, 且血脂代谢受多方面因素的影响, 如家族、年龄、饮食、生活习惯等, 该研究在选择病例时尚不能完全排除上述各种因素, 可能影响统计结果。另因该院无条件开展肝穿病理检查, 仅靠影像学及血清学检查来诊断肝硬化, 可能在慢性乙型肝炎组中存在一部分代偿期肝硬化, 而在肝癌组中不是所有病例在肝硬化基础上发展, 这样也可能影响统计结果。
血清载脂蛋白a 篇2
现医学界很多研究显示, apoCⅢ对脂的代谢以及代谢中部分酶或受体有着较大的影响, 同时也调节着人体内富甘油三酯脂蛋白 (triglyceride-richlipoprotein, TRL) 的分解及代谢[1]。笔者随机选取了2009年7月—2012年3月期间, 在该院进行健康体检的148名健康人群及高甘油三脂血症患者76例, 并对其血脂相关项目的检测结果进行回顾性分析, 现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
随机选取在该院进行健康体检的148名健康人群及高甘油三脂血症患者76例, 将其分为对照组和观察组。其中观察组中男女各74例, 对照组中男性36例, 女性40例, 并通过检测, 排出了肾病、糖尿病等疾病患者, 且对照组患者的血清胆固醇及血清甘油三酯指标都在正常范围之内。
1.2 检测方式
采用选择性溶解法对低密度脂蛋白-胆固醇 (LDL-C) 进行检测, 采用化学修饰酶法对高密度脂蛋白-胆固醇 (HDL-C) 进行检测, 采用透射比浊法对载脂蛋白CⅢ (apoCⅢ) 、载脂蛋白B (apoB) 及载脂蛋白Al (apoAl) 进行检测, 采用氧化酶法测定法对血清TG、CH指标进行检测。
1.3 统计方法
所有数据采用SPSS13.0软件进行统计分析, 进行t检验。
2 结果
观察组患者的血清中apoAl、apoAl/apoB指标明显低于对照组人群 (P<0.05) , 其它各项指标均明显高于对照组人群 (P<0.05) 。见表1。
而在观察组内, 患者的血清载脂蛋白CIII水平和血尿酸、总胆固醇呈正相关。见表2。
3 讨论
脂蛋白的载脂蛋白、脂蛋白受体和参与脂蛋白代谢的各类酶类不但在血浆脂蛋白的代谢过程中有重要的作用, 而且都能够对血浆脂蛋白和血脂水平产生影响。高甘油三酯血症是一种脂代谢紊乱疾病, 相关研究显示, 血TG升高是CHD及AS的独立危险因素, 大量作者报道载脂蛋白CIII水平与TG存在相关性[2]。载脂蛋白CIII是apoC家族中含量最丰富的载脂蛋白, 肝脏是其主要的合成脏器, 此外小肠也会生成部分该物质。载脂蛋白CIII又可分为apoCIII0、apoCIII1、apoCIII2 3类。笔者在该次实验中则测定了血清中载脂蛋白CIII的总和。当人体处于空腹或餐后运输脂蛋白时, 载脂蛋白CIII将发挥其转移媒介的功效, 但是高甘油三酯血症患者的机体中, 该过程将受到阻碍。该研究中, 高甘油三酯血症患者的血清中apoAl、apoAl/apoB指标有明显的降低, 其它各项指标均出现了显著上升, 这和相关研究结果相符。
若血浆的脂质浓度太高将会损伤人体的脏器, 所以加强对血脂的监测和治疗具有积极的意义。对载脂蛋白CIII进行检测能够直观地把握患者脂质的代谢状况, 对高甘油三酯血症及高血尿酸症等疾病的防治和预后具有积极的意义, 同时也为新药的研制提供了实验数据基础。
摘要：目的 对高甘油三酯血症患者血清载脂蛋白CⅢ含量进行分析。方法 随机选取2009年7月—2012年3月期间在该院进行健康体检的148名健康人群及高甘油三脂血症患者76例, 将其分为对照组和观察组。其中观察组中男女各74例, 对照组中男性36例, 女性40例。对两组人群的相关血清指标进行分析对比。结果 观察组患者的血清中apoAl、apoAl/apoB指标明显低于对照组人群 (P<0.05) , 其它各项指标均明显高于对照组人群。而在观察组内, 患者的血清载脂蛋白CIII水平和血尿酸、总胆固醇呈正相关。结论 对载脂蛋白CIII进行检测能够直观地把握患者脂质的代谢状况, 对高甘油三酯血症及高血尿酸症等疾病的防治和预后具有积极的意义, 同时也为新药的研制提供了实验数据基础。
关键词：高甘油三酯血症,血清,载脂蛋白CⅢ
参考文献
[1]张志泉, 俞娟, 陈连英, 等.高甘油三酯血症患者血清载脂蛋白CⅢ含量分析[J].南通大学学报 (医学版) , 2008, 28 (1) :30-32.
血清载脂蛋白a 篇3
关键词：妊娠期糖尿病,载脂蛋白A5,胰岛素抵抗
妊娠期糖尿病 (gestational diabetes mellitus, GDM) 是一类特殊阶段的糖尿病, 大多患者在产后一段时间可以恢复, 常发生在首次妊娠孕中、晚期, 而出现在妊娠早期的少见。孕妇会出现不同程度的糖代谢异常, 出现血糖偏高, 尿糖偏高, 其主要危害是影响母婴健康。妊娠期糖尿病的发生机制十分复杂, 至今未完全阐明, 本实验主要研究早期妊娠期糖尿病发生的机制, 我们发现血清载脂蛋白A5 (Apo A5) 水平与早期妊娠期糖尿病发生的关系密切。Apo A5是一种载脂蛋白, 近年研究与汉族人群2型糖尿病 (T2DM) 发生相关, 而控制血糖的胰岛素可通过Apo A5启动子发挥作用。我们对研究结果分析总结, 汇报如下。
1 对象与方法
1.1 研究对象
选择从2013年到2015年在我院妇产科经治的葡萄糖耐量试验诊断早期妊娠期糖尿病孕妇73例为研究对象, 设为EGDM组, 73例妊娠孕妇年龄在25-37岁, 孕龄在0~12孕周, 选择同期就诊, 孕龄相同的葡萄糖耐量正常的孕妇76例作为对照组。
1.2 葡萄糖耐量试验 (OGTT)
试验当日早晨空腹静脉取血后在5min之内饮入500ml含75g葡萄糖的糖水, 喝糖水后1h, 2h分别静脉取血一次, 并留取尿液做尿糖定性试验。整个试验不可喝咖啡、喝茶或进食, 应安静地坐在椅子上。
1.2.1 妊娠期糖尿病的诊断标准
空腹血糖>5.1 mmol/L或餐后1 h血糖值≥10.0 mmol/L或2 h血糖值≥8.5 mmol/L, 满足以上任意1项者, 可诊断妊娠期糖尿病。
1.2.2 实验室检测
妊娠早期孕妇早晨空腹抽静脉血, 提取上清2ml于-20℃冰箱保存。血清FBG, 餐后2 h血糖 (PBG) 采用全自动生化分析仪检测。糖化血红蛋白 (Hb Alc) 采用全自动糖化血红蛋白分析仪监测。空腹血清胰岛素 (FINS) 水平采用放射免疫计数仪测定。血清Apo A5水平采用双抗体夹心ELISA法检测。稳态模型的胰岛素抵抗指数 (HOMAIR) =[FINS (U/L) ×BG (mg d L) ]-1/22.5。
1.3 统计学方法
2 结果
2.1 两组临床资料比较
妊娠早期孕妇两组间的临床资料比较, 两组孕妇在年龄、孕周、体重指数BMI之间比较差异有统计学意义 (P<0.05) 见表1。
2.2 两组Apo A5比较
两组间血清Apo A5比较, 发现早期妊娠糖尿病孕妇Apo A5水平 (237.17±17.36) ng/m L, 明显高于正常早期妊娠孕妇组 (203.16±13.46) ng/m L, 具有显著差异有统计学意义 (P<0.01) 见表2。
2.3 Apo A5在早期妊娠糖尿病孕妇与胰岛素抵抗
为进一步验证早期妊娠糖尿病孕妇血清Apo A5与胰岛素抵抗是否存在统计学上的相关性, 我们对血清Apo A5水平与多因素进行Pearson相关分析, 结果发现血清Apo A5水平与FBG (r=0.817, P=0.013) , FINS (r=0.732, P=0.023) , HOMA-IR (r=0.621, P=0.032) , Hb Alc (r=0.637, P=0.035) , 与PBG无关。
3 讨论
在脂质代谢中载脂蛋白 (apolipoprotein, Apo) 发挥着至关重要的作用, 其结构的改变与合成通路发生异常将最终影响血脂代谢的结果, 导致血脂表达谱的改变, 诱发动脉粥样硬化等疾病发生[1]。在Apo家族中Apo A5是最近在酯类代谢中研究的热点, 最早发现于Apo A1/C3/A4基因簇中[2,3]。自从被发现以来, Apo A5已成为血脂与动脉粥样硬化研究的热点, 并已证实其可以影响血浆甘油三酯 (TG) 水平, Apo A5调节血浆TG水平的作用与Apo C3的作用相反, 还可影响血清高密度脂蛋白胆固醇 (HDL-C) 的代谢。Alborn等[4]通过利用双抗体夹心ELISA法检测正常人群和2型糖尿病患者血清Apo A5表达水平差异分析显示, 血清Apo A5表达水平在2型糖尿病患者中明显要高于正常对照人群组, 并与患者空腹血糖含量呈正相关。魏等[5]对于妊娠中、晚期发生、发现的糖尿病与血清Apo A5的相关研究发现, 糖尿病组孕妇较对照组, 血清Apo A5水平明显增高, 两组比较, 差异有统计学意义。
本文致力于研究早期妊娠期糖尿病患者血清Apo A5表达水平, 进一步探讨血清Apo A5与早期妊娠期糖尿病的关系, 发现血清Apo A5在早期妊娠糖尿病显著升高, 统计学分析提示血清Apo A5水平与早期妊娠期糖尿病的发生呈正相关。我们的结果说明血清Apo A5水平可反映孕妇胰岛素抵抗状态, 其可成为早期妊娠期糖尿病预测的重要指标之一。
综上所述, 我们在临床上可通过监测孕妇血清Apo A5表达水平, 将其升高列为早期妊娠期糖尿病危险因素之一, 积极干预及预防早期妊娠糖尿病分发生。这样可以有效早期防范妊娠期早期糖尿病的发生, 改善早期妊娠期糖尿病孕妇孕期机体糖代谢状态, 有利于胎儿生长发育。
参考文献
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血清载脂蛋白a 篇4
1 资料与方法
1.1 一般资料
脑梗死组:随机选择我院自2004年2月-2008年11月住院的脑梗死患者30例, 男18例, 女12例, 年龄48岁～73岁, 平均年龄61.3岁。均符合第四届全国脑血管病学术会议制定的诊断标准, 并均经头颅CT或和核磁共振 (MRI) 证实。其中伴原发性高血压11例, 糖尿病5例, 冠心病10例。根据梗死时间分急性期与恢复期2个组。
1.2 正常对照组
30名健康志愿者, 男17人, 女13人, 年龄46岁～70岁, 平均年龄58.7岁。经检查证实无脑血管病、糖尿病、冠心病及肝肾功能异常。
1.3 方法
采用上海荣盛生物制剂厂生产的试剂盒。血清LP (a) 检测方法为ELISA双抗体夹心法, 均严格按说明书进行操作。
1.4 统计学方法
检测数据以均数±标准差表示, 各组间采用t检验进行比较。
2 结果
脑梗死急性期和恢复期患者血清LP (a) 水平较对照组明显升高 (P<0.01) , 结果见表1。
3 讨论
LP (a) 是人类血浆中的一类特殊脂蛋白, 其特点是1分子的载脂蛋白apo (B) 以二硫键与1分子的apo (a) 相连, apo (a) 是高度糖化的亲水性蛋白质, 肽键长度很不一致, 分子大小呈明显多肽性, 是和低密度脂蛋白相似的一种脂蛋白, 其脂质主要为胆固醇, 蛋白成分除载脂蛋白B100[apo (B100) ]外, 还有仅存在于LP (a) 中的载脂蛋白 (a) [apo (a) ], 两者通过一个二硫键相连结。apo (a) 与纤维蛋白溶解酶原具有共同的抗原决定簇, 两者之间易起交叉反应, LP (a) 以剂量依赖性与纤维蛋白溶解酶原竞争结合位点。动脉粥样硬化损伤血管内皮细胞, 使胶原暴露, LP (a) 首先进入血栓形成部位, 与正常的纤溶酶原竞争结合位点, 并使其所含的胆固醇沉积在局部而促使脑梗死发生。本组资料显示脑梗死组 (无论急性期还是恢复期) 较对照组血清LP (a) 水平明显升高 (P<0.01) [1], 此结果一方面说明LP (a) 升高是脑梗死的危险因素, 同时也说明血清LP (a) 在脑梗死不同时期存在变化。急性期血清LP (a) 更高的原因可能为: (1) 应激反应所致; (2) LP (a) 升高是脑梗死的危险因素, 即脑梗死发生前血中LP (a) 水平已升高, 至脑梗死发生时, 血中水平达相对更高的水平; (3) 由于临床干预的作用, 恢复期较急性期水平下降[2]。正常的血管内皮功能对血管壁具有重要的保护作用, 内皮递质失衡可降低该作用, 使血管易致痉挛或促进动脉粥样硬化的发生发展。因此合理应用降血脂药物是防治脑梗死的有效手段, 也能有效地防止动脉粥样硬化的发生发展。
参考文献
血清载脂蛋白a 篇5
人载脂蛋白A-I(apolipoprotein A-I,apo A-I)是载脂蛋白A家族中的一种重要组分,主要作为高密度脂蛋白的配体参与胆固醇的逆向转运过程[6,7]。人载脂蛋白A-I主要在肝脏中进行合成与代谢,而apo A-I基因的表达主要受转录水平的调控,具有肝脏特异性[8]。这提示apo A-I启动子可能特异性地在肝细胞中启动外源基因的表达,从而实现肝病基因治疗的靶向性,同时降低基因治疗对非靶组织的毒副作用。
本研究通过PCR扩增apo A-I基因启动子序列,并将其克隆至绿色荧光表达载体p EGFP,构建肝靶向重组载体p AE。通过将重组质粒分别转染肝癌细胞株SMMC-7221和肺癌细胞株A549,以绿色荧光蛋白的表达为标志检测其转录活性的组织特异性。
1 资料与方法
1.1 材料
含有apo A-I启动子序列的载体p AI-W由美国贝勒医学院KAZUHIRO OKA副教授惠赠;绿色荧光报告载体p EGFP由本实验室构建及保存;人肝癌细胞株SMMC-7721由河南省医学科学研究所惠赠;人肺癌细胞株A549由本实验室保存;大肠杆菌TOP 10由郑州大学基础医学院赵国强教授惠赠。
T4 DNA连接酶、pfu DNA聚合酶购自Promega公司;Ex Gen500体外转染试剂,限制性内切酶Bam H I、Nhe I、Vsp I和Bgl II均购自Fermentas公司;Taq DNA聚合酶、DNA Marker和DNA琼脂糖凝胶回收试剂盒购自天根生化科技(北京)有限公司;DMEM培养基购自Hy Clone公司;胎牛血清购自海克隆生物化学制品(北京)有限公司;引物合成及测序均由北京赛百胜公司完成。
1.2 方法
1.2.1 肝靶向性重组质粒p AE的构建
根据文献[7]及Gen Bank收录的apo A-I启动子序列(Gen Bank登陆号J04066)设计PCR扩增引物。上游引物(U290):5'-GAATTAATAGGGGAAGGGGATGAGTG-3'(下划线表示Vsp I的识别序列);下游引物(D209):5'-CCCTAGCTAGCGAGAAGAAGGGCCTGGCTGA-3'(下划线表示Nhe I的识别序列)。以质粒p AI-W为模板进行PCR扩增,产物用酚抽提-乙醇沉淀的方法进行纯化。
将纯化的PCR产物及p EGFP载体分别用限制性内切酶Vsp I和Nhe I消化,目的片段以琼脂糖凝胶回收试剂盒回收后进行连接,将apo A-I启动子定向插入到GFP报告基因上游。重组质粒分别进行酶切、PCR鉴定,阳性克隆进行测序。
1.2.2 重组载体的转染
肝癌细胞SMMC-7721和肺癌细胞A549在含10%胎牛血清的DMEM培养基和37℃、5%二氧化碳条件下常规培养。转染前16 h按1.2×104个/孔接种于96孔板,培养过夜,细胞贴壁生长到50%~70%融合时,用体外转染试剂Ex Gen 500将纯化的p AE及对照质粒p EGFP分别转染肝癌细胞和肺癌细胞:将0.3μg DNA溶解在20μL 150 mmol/L的Na Cl中,涡旋混匀,加入0.99μL转染试剂迅速涡旋10 s,室温温育10 min后,将Ex Gen500/DNA混合物加入培养基中。转染48 h后,倒置荧光显微镜进行观察。
2 结果
2.1 a po A-I基因启动子的P CR扩增结果
以p AI-W质粒为模板进行PCR扩增,经0.7%琼脂糖凝胶电泳显示,见图1:在500 bp处有特异性目的片段,与预期值一致(498 bp),同时图中未见其它非特异性扩增条带出现。
2.2 肝靶向性真核表达载体p AE的鉴定
酶切鉴定,见图2:将质粒用Vsp I/Nhe I进行双酶切,出现预想的两条片段。Vsp I、Nhe I、Pst I进行单酶切鉴定,实验结果与预想结果相同,说明质粒构建成功。
PCR鉴定,见图3:根据p EGFP载体序列设计鉴定引物G1(5'-CGTCGCCGTCCAGCTCGACCAG-3')。以酶切验证阳性的重组质粒为模板,以引物G1和引物U290进行PCR扩增,PCR产物的琼脂糖凝胶电泳分析见图2:在600 bp处有特异性目的片段,与预期值一致(581 bp),同时图中未见其它非特异性扩增条带出现,表明含有apo A-I启动子序列正向克隆至载体p EGFP。
测序:经酶切及PCR验证的阳性克隆送北京赛百胜公司进行测序,测序结果见图4。测序结果与Gen Bank数据库中的序列完全一致。
2.3 a po A-I基因启动子转录活性鉴定
将重组目的质粒p AE转染细胞48 h后进行荧光显微观察,在SMMC-7721肝癌细胞中有明显的绿色荧光,A549肺癌细胞中没有绿色荧光。转染带有CMV启动子的p EGFP对照质粒48 h后,SMMC-7721和A549细胞都呈现出较强的绿色荧光。上述结果表明,apo A-I启动子能够特异性启动绿色荧光蛋白在肝癌细胞中表达,而在肺癌细胞中不表达。
3 讨论
人apo A-I基因位于11号染色体长臂末端,对apo A-I 5'端上游基因组DNA序列分析结果表明,该序列缺乏典型TATA box,仅在-30~-24 bp区域有TATA盒样结构;特征的GC box存在于-250~-199 bp区域,该区域的缺失能显著降低启动子的转录活性[9]。apo A-I基因的在肝脏中的特异性表达属于转录调节机制,主要受位于-256~-41 bp区域的三个不连续肝脏特异性增强子的调控(-214~-192bp,-169~-146 bp,以及-134~-119 bp)[10]。因此,在研究中我们选择-290~+209 bp区域的作为apo A-I启动子克隆目标。由于绿色荧光蛋白具有灵敏性高,检测方便等优点,因此我们将apo A-I启动子克隆至绿色荧光报告载体中进行启动子转录活性研究。细胞实验发现,apo A-I启动子调控的绿色荧光蛋白只在肝癌细胞SMMC-7221中表达,而在肺癌细胞A549中不表达,这表明apo A-I启动子具有较强的肝细胞组织特异性,为肝组织靶向性基因治疗奠定了实验基础。
基因治疗的一个重要研究方向就是肿瘤的基因治疗[11,12]。肝组织特异性的apo A-I启动子不仅能在肝癌细胞中被激活,同时也可以在肝细胞中被激活,因此在杀灭肝癌细胞的同时,也可能造成对正常组织的损伤,这将严重限制其在肿瘤基因治疗中的应用。对于这个问题可以采用一定方式解决。一种方法就是使治疗基因具有肿瘤特异性,例如在RNAi研究中,采用具有肿瘤特异性的人端粒酶逆转录酶m RNA作为靶标。另外,在下一步工作中,我们还将对apo A-I启动子进行肿瘤特异性修饰,使其成为肝肿瘤特异性的启动子,为进一步探索不同肿瘤的靶向基因治疗提供基础。
摘要：目的构建载脂蛋白A-I启动子调控的肝特异性真核表达载体。方法PCR扩增载脂蛋白A-I组织特异性启动子序列,将其亚克隆至绿色荧光真核表达载体中。将重组载体以及对照载体转染肝癌细胞株SMMC-7221和肺癌细胞株A549。结果载脂蛋白A-I启动子调控的绿色荧光蛋白在肝癌细胞中表达,而在肺癌细胞中没有表达。CMV启动子调控的绿色荧光蛋白在两种细胞株中都呈现高效表达。结论载脂蛋白A-I启动子调控的绿色荧光蛋白可以进行组织特异性表达,成功构建具有肝靶向性的真核表达载体。
关键词：apoA-I启动子,肝癌,绿色荧光蛋白,基因治疗
参考文献
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血清载脂蛋白a 篇6
关键词：急性心肌梗塞,血脂,载脂蛋白A,载脂蛋白B,诊断
近年来我国经济不断发展,人民生活饮食习惯不断改变,人口老龄化不断加剧,心血管疾病人数慢慢增加,急性心肌梗塞占很高的比例[1],其及早诊断治疗具有重要意义。人体动脉粥样硬化、血脂、脂蛋白代谢异常与缺乏载脂蛋白A或载脂蛋白B有密不可分的关系,因此,急性心肌梗塞诊断过程中分析血脂与载脂蛋白A、B具有重要意义[2,3]。本研究比较急性心肌梗塞患者及健康人的血脂与载脂蛋白A、B检测水平,现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择我院2012年12月～2013年12月收治的30例急性心肌梗塞患者作为为观察组,同期健康者30例为对照组。观察组男18例,女12例,年龄42～82岁,平均60.8±10.5岁;对照组男16例,女14例,年龄41～80岁,平均61.3±9.3岁;两组患者性别、年龄经统计学分析无显著性差异(P>0.05),具有可比性。所有患者经心超声、心电图等检查排除其他疾病。
1.2 方法
所有对象取血前1天禁高脂饮食,空腹12～13小时取静脉晨血,分离血清采用免疫透射比浊法测定载脂蛋白A(ApoA)、载脂蛋白B(ApoB);采用酶法测定甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC);磷钨酸镁沉淀法测定高密度脂蛋白(HDL)。
1.3 诊断标准
冠心病血脂改变的预测值[4,5]:TC>5.96mmol/L,TG>1.69mmol/L,HDL<1.Ommol/L,Apo A<100mg/天,ApoB<1 00mg/天。
1.4 统计方法
所有计量资料以均值加减标准差()表示,两组间均值比较采用独立样本t/t'检验,治疗前后自身对照均值比较采用配对t检验;所有计数资料以频数(f)表示,无序分类资料采用χ2检验,采用SPSS18.0进行统计分析。α=0.05。
2 结果
2.1 血清载脂蛋白
观察组ApoA明显低于对照组,ApoB及ApoA/ApoB均明显高于对照组,具有显著性差异(P<0.05)。见表1。
注:与对照组相比,①P<0.05
2.2 血脂
观察组高密度脂蛋白(HDL)、HDL/TC均明显低于对照组,甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)均明显高于对照组,具有显著性差异(P<0.05)。见表2。
注:与对照组相比,①P<0.05
3讨论
国内外相关研究表明,高密度脂蛋白能将外周组织过量的胆固醇转移到肝脏,并将其转化为脂肪酸,从而有效抵抗动脉粥样硬化[6]。高密度脂蛋白(HDL)降低最终导致冠心病。ApoA是HDL的重要组成部分,具有稳定脂蛋白结构,能结合运转脂质并激活卵凝脂胆固醇酰基转移酶活性;ApoB是极低密度脂蛋白的主要组成部分,ApoB/ApoA是判断冠心病的重要指标[7]。
本研究观察组ApoB/ApoA比值为0.94±0.23mg/天,明显高于对照组的0.65±0.13mg/天,具有显著性差异(P<0.05);可见测定ApoA、ApoB具有重要的临床诊断意义。观察组HDL/TC比值为0.19±0.05mmol/L,明显低于对照组的0.29±0.08mmol/L,具有显著性差异(P<0.05);检测血脂水平对判断急性心肌梗塞具有重要意义[8]。
综上所述,血脂与载脂蛋白A、B用于急性心肌梗塞临床诊断具有显著意义,值得临床推广。
参考文献
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血清载脂蛋白a 篇7
1 资料与方法
1.1 一般资料
本组病例选自2007年10月至2008年10月我院门诊和住院患者, 心肌梗死组68例, 男40例、女28例, 平均年龄 (67.2±10.2) 岁;冠心病 (非心肌梗死) 组72例, 男41例, 女31例, 平均年龄 (63.1±11.0) 岁;正常组90例, 男49例、女41例, 平均年龄 (64.1±0.9) 岁。3组在年龄、性别、吸烟史及冠心病其他危险因素等比较上, 差异无统计学意义 (P<0.05) 。
1.2 方法
1.2.1 检测方法
所有患者于晨7～8时空腹抽取肘静脉血, 用空白和含有1109mol/L枸橼酸钠的一次性定量硅化玻璃试管采取2mL、4mL静脉血, 离心 (3000rpm, 10min) 分离血清, 试剂盒为上海广慈高科技公司药盒。用酶联免疫双抗体夹心 (E L ISA) 法测定血清Lp (a) 。总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇用酶法测定上海生化制药厂药盒。
1.2.2 血清Lp (a) 结果分度
血清Lp (a) 浓度≥0.3g/L为高Lp (a) 水平, <0.3g/L为低Lp (a) 水平[2]。
1.2.3 观察内容
对心肌梗死组、冠心病组、正常组检测血清Lp (a) 值及血脂检测值进行比较。
1.2.4 统计学方法
使用SPSS 10.0统计软件包进行统计分析, 计量资料用均数标准差 (±s) 表示, 采用t检验处理数据。
2 结果
2.1 血清Lp (a) 结果和血脂结果比较 (表1)
注:血清Lp (a) 检测值比较:心肌梗死组、冠心病组与正常组比较, P<0.01
有显著差异性;心肌梗死组与冠心病组比较P>0.05无显著差异性。血脂检测值比较:心肌梗死组、冠心病组与正常组比较P<0.01有显著差异性;心肌梗死组与冠心病组比较P>0.05无显著差异性。
3 讨论
脂蛋白 (a) [Lp (a) ]作为一种特殊类型的低密度脂蛋白近年来已引起广泛关注, 由遗传决定, 不受饮食、性别和年龄的影响, 并与其他脂蛋白和白蛋白无关, 1963年由Berh发现并报道[3], LP (a) 的蛋白组成中apoB100、apoA和白蛋白分别约占65%、20%和15%, 与LDL相似, 但其糖类比LDL高数倍, 是所有脂蛋白含糖类最高的一种;电泳迁移率也比LDL快。Apo (a) 的多肽性主要是由遗传基因所控制, 使得LP (a) 与其它脂蛋白不同显示了高度遗传性。肝脏是LP (a) 合成的主要场所, 体内半衰期为38～55, 与LDL不一样, 它不是由VLDL转化而来, 也不能转化为其它脂蛋白, 系一类独立的脂蛋白。
通过3组病例检测结果进行比较, 可以看出血清Lp (a) 检测:心肌梗死组、冠心病组与正常组比较P<0.01有显著差异性;说明了血清Lp (a) 检测在临床应用中应高度重视通常提示动脉硬化程度较重, 可以引起急性冠脉事件, 所以在临床中对血清Lp (a) 检测是很有必要的, 可以对临床进行较强的指导意义。
参考文献
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