体细胞胚

体细胞胚（共7篇）

体细胞胚 篇1

植物的体细胞胚诱导已成为植物离体培养的方式之一, 该技术已成为植物快速繁育和研究植物胚胎发生原理以及植物遗传转化的重要方法。目前, 已有100多种植物培育出了体细胞胚。此种方法还使得一些珍稀和重要植物的产业化育苗得以实现。

1 体细胞胚的含义

体细胞胚包含三层含义: (1) 体细胞胚是组织培养的产物; (2) 体细胞胚起源于非合子细胞 (体细胞) ; (3) 体细胞胚的形成经历胚胎发育过程。

2 体细胞胚的诱导方式

植物体细胞胚诱导指通过与合子胚胎发生类似的途径产生新的植株的过程, 可划分为直接发生和间接发生。直接发生是指不经过愈伤组织, 直接由外植体产生的体细胞胚;间接发生是指需要经过愈伤组织生成体细胞胚, 或者由已形成的体细胞胚上再生成体细胞胚。据统计, 大部分植物, 尤其是木本植物大多由间接方式诱导植物体细胞胚。

3 体细胞胚诱导的影响因素

影响体细胞胚诱导的因素很多, 现主要探讨糖类、温度、激素对体细胞发生的影响。

3.1 糖类对体细胞胚诱导的影响

渗透压对诱导植物体细胞胚起着重要作用。不同植物的体细胞胚诱导需要不同的渗透压, 而且, 不同的渗透压会影响体细胞胚的发育, 使体细胞胚停留于不同的发育阶段。培养基的渗透压主要通过调节培养基中糖的种类和用量来实现。糖会影响体细胞胚发生的速度和生长量。目前, 经常用于调节培养基渗透压的糖类有葡萄糖和蔗糖, 而蔗糖是培养基中最常用的。有研究表明, 在培养基中, 约有1/4~2/5的蔗糖用于保持培养基的渗透压。而且, 糖类是体细胞胚碳源的主要来源之一。

3.2 温度对体细胞胚诱导的影响

适当的温度是体细胞胚发生必不可少的条件之一, 只有在一定的温度范围内, 体细胞胚才能正常的生长和繁殖, 温度过高或过低都会对体细胞胚的发生产生抑制作用。温度过低会使体细胞胚发育停滞, 形成温度伤害, 这可能是由于温度过低会导致细胞中的DNA合成停滞, 并影响细胞有丝分裂指数所致。

3.3 激素对体细胞胚发生的影响

激素在植物体细胞胚发生中扮演着非常重要的角色, 激素使用的恰当与否直接影响着体细胞胚诱导的成功与否。BA、NAA、2, 4-D、ABA等是植物体细胞胚诱导最为常用的外源激素, 内源激素和外源激素对植物体细胞胚诱导具有相互调节和促进作用, 在培养基中加入适当比例的外源激素可明显提高体细胞胚的质量和诱导频率。

4 结语

体细胞胚胎发生具有数量多、速度快、结构完整、再生率高等优点, 成为离体培养条件下植物细胞的又一个基本发育途径。体细胞胚的成功诱导使得植物品质和适应性得到了极大的提高, 为植物品种改良提供了新途径。

参考文献

[1]WILLIAMS E G, MAHESWARAN G.Somatic embryogenesis:factors influencing coordinated behaviour of cells as an embryogenic group[J].Ann Bot, 1986 (57) :443-462.

[2]陈丽娟, 周嘉运, 闭志强, 等.蔗糖浓度和激素对粉蕉离体快繁的影响[J].西南农业学报, 2001, 14 (2) :66-68.

[3]GUPTA P K, ULLMAN E S, IMMIS R.Forestry in the 21st Century-The biotechnology of somatic embryogenesis[J].Bio/Technology, 1993 (11) :454-459.

[4]齐力旺.落叶松等针叶树种体细胞胚胎发生的研究技术、现状与对策.中国林业科学研究院林业研究所所庆学术报告会报告文集[C].北京:中国林业科学研究院林业研究所, 2002:72-89.

体细胞胚 篇2

1.视盘 3.螺旋器 5.视杆 2.黄斑 4.壶腹嵴 6.视锥

（三）问答题:

1、角膜的组织结构有何特点？损伤后会产生哪些后果？

2、试述视网膜的组织结构及其三组神经元的相互关系？

3、比较视杆细胞和视锥细胞的异同？

（四）作业

下图为视网膜在高倍镜下的结构草图，请您在图上注明下列结构：色素上皮 层、视杆视锥层、外界膜、外核层、外网层、内核层、内网层、节细胞层、神经纤 维层、内界膜

――

四川大学八年制教案（Histology & Embryology）

Chapter 12 ENDOCRINE SYSTEM Objectives In this chapter, the following are examined: 1.The general structural characteristics of endocrine glands.2.Histological structure and function of thyroid gland.3.The division of adrenal gland.The structural characteristic and function of each zone of adrenal cortex.4.The structural characteristic and function of each cell type of pars distalis.5.The relationship between hypothalamus and adenohypophysis– the hypophyseal portal system.The structural characteristic of neurohypophysis, and the relationship with the hypothalamus.Section I Outline on Lecture

I.General characteristics 1.Glandular cells are arranged in cords, clusters, follicles, or reticula.2.Have no duct, rich in capillary 3.Hormones: The secretions of endocrine glands are called hormones.Type of hormone: •Nitrogenous hormonereceptors: •Nitrogenous hormones — receptors are in the cell membrane.•Steroid hormones — receptors are in the cytoplasm.•remote endocrine, paracrine and autocrine ――

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II.Thyroid 1.Capsule: LCT, septa, rich in capillary network 2.Parenchyma is composed of follicles and parafollicular cells.(1)Follicles •Consist of a simple epithelial sphere(range from squamous to low columnar)whose lumen contains acidophilic colloid(glycoprotein).•The function of follicular cells is to produce thyroid hormones.•The synthesizing process: Synthesis of thyroglobulin: ―by follicular cell

synthesize

―in RER

―in cell plasma in Golgi complex

release

―lumen of follicle Take in amino acids processed from vesicles Iodization(In Lumen of follicle): ―through I-peroxidase I2O ―thyroglobulin iodination

Reabsorption & decomposion: ―Follicular cells take up colloid by

pinocytosis(stimulated by thyrotropin);the pinocytotic vesicles fuse with lysosome.And then the iodinated thyroglobulin are broken by proteases in lysosome into T4(tetraiodothyronine, thyroxine)T3(triiodothyronine)Releasing: T4 & T3 are discharged into blood—

stimulate the rate of metabolism & development of bone and central nerve system.――

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Thyroid disorders: Hypothyroidism — Cretin(child)Myxedema(adult)Hyperthyroidism —

decrease body weight, asthenia, nervousness, eye protrusion, and accelerated heart rate.(2)Parafollicular cells •Location: They are found as part of the follicular epithelium or as isolated clusters between follicles.•Structure: Large, pale stain, silver stain(argyrophilic granules)•Secretion: Calcitonin(polypeptide)Stimulate osteoblast to produce new bone

Blood calcium level↓

2+ Inhibit absorption of Ca

III.Parathyroid gland 1.CT Capsule 2.Glandular cells •Chief cells(principal cells)are small polygonal cells with round nucleus and pale-staining cytoplasm.Secretion — parathyroid hormone(polypeptide)Stimulate osteocytes & osteoclasts to broken up bone matrix

blood Ca↑

Stimulate absorption of Ca from intestine and renal tubules 2+

2+ • Oxyphil cells are larger polygonal cells, their cytoplasm contains many mitochondria(acidophilic stain).Their function is not clear.Ⅳ.Adrenal gland DCT capsule Adrenal medulla(center)Adrenal cortex(periphery)Two concentric layers 1.Cortex 80%-90%

Three layers

zona glomerulosa zona fasciculata zona reticularis ――

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(1)Zona glomerulosa Immediately beneath the capsule — small cells are arranged in rounded or arched clusters surrounded by capillaries.Secretion: mineralocorticoids(aldosterone)— maintain electrolyte(Na , K)

+ + + and water balance(absorption of Na in distal tubules and collecting tubules + and excrete K).(2)Zona fasciculata Thick most layer —

straight cords with rich capillaries.Polygonal cells with a great number of lipid droplets(appear vacuous).Secretion: glucocorticoids(cortisol, corticosterone)—

Stimulate the metabolism of carbohydrates, proteins and lipids;Suppress the immune response(by destroying circulating lymphocytes).(3)Zona reticularis Innermost layer — irregular cords form an anastomosing network with rich capillaries.Smaller cells with lipofuscin pigment granules and lipid droplets.Secretion: androgen *All cells in cortex are steroid hormone-secreting cells(SER, mitochondria with tubular cristae, lipid droplets).2.Medulla Cells are in cords or clumps with sinusoidal capillaries.Large cells contain chromaffin granules(chromaffin cells).Two cells types: •Adrenaline-secreting cells –

adrenaline – heart rate increase, blood vessels dilatation •Noradrenaline-secreting cells –

noradrenaline –heart rate increase, blood vessels contract – blood pressure increase Ⅴ.Hypophysis(pituitary gland)It is in a cavity of the sphenoid bone(sella turcica).――

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Pars distalis Adenohypophysis

Pars tuberalis Pars intermedia Neurohypophysis

Pars nervosa

(Anterior lobe)

(Posterior lobe)

median eminence

Fundibulum

stem CT capsule(1)Pars distalis Glandular cells are in clusters and cords and rich in blood sinuses.HE: Chromophobes

Acidophils Chromophils

Basophils ①

Acidophils Contain acidophilic granules(two types)Somatotrophic cell: Produce growth hormone, GH — stimulate the growth of long bone Disorder: Young children—

hypofunction→

midget hyperfunction→

gigantism Adult — megalakria Mammotrophic cell: Secret mammotrophin→

stimulate development of breast and milk secretion ②

Basophils Contain basophilic granules(three types)•Thyrotrophic cell, TSH cell: Produce thyrotrophin(thyroid stimulating hormone, TSH)→

stimulate thyroid hormone synthesis, storage & release.•Gonadotrophic cell: ――

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—

Follicle stimulating hormone, FSH Female: promote development of ovarian follicles Male: stimulate Sertoli cells to synthesize androgen binding protein, ABP —

Luteinizing hormone, LH Female: stimulate ovulation & formation of corpus luteum Male: stimulate interstitial cell in testis to secret androgen •Corticotrophic cell, ACTH cell: Secret adrenocorticotrophin, ACTH —

promote zona fasciculata to secret glucocorticoids *Chromophobe cell: Many(50%);smaller, pale staining(2)Pars intermedia Degenerative part in human —

chromophobes, basophils(melanotroph)and follicles — secret melanocyte stimulating hormone, MSH —

promote formation of melanin in fish and amphibian(3)Pars tuberalis The cells are arranged in longitudinal cords separated by sinusoids.In normal condition, the cells of the pars tuberalis show no evidence of active secretion.(4)Blood supply — hypophyseal portal system The blood supply of adenohypophysis is come from *superior hypophyseal arteries that form a *primary capillary plexus in fundibulum.They then rejoin to form several *portal veins in pars tuberalis, which develop a *secondary capillary plexus in pars distalis.The two sets of capillary plexus and portal veins constitute hypophyseal portal system.This structure is of importance in regulating hypophyseal function.(5)Relationship of hypothalamus and adenohypophysis Releasing hormones(RH)Release inhibiting hormones(RIH)(hypothalamus)Primary capillary plexus Portal veins

hypophyseal portal system Secondary capillary plexus

release Venous sinus

into →

Pars distalis

secretion(Regulate

activity of glandular cells)

――

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2.Neurohypophysis(1)Structures • Unmyelinated nerve fibers from secretory neurons of supraoptic and paraventricular nuclei(SON and PVN)of hypothalamus.•Neuroglial cell(pituicyte)•Numerous blood sinuses •Herring bodies: Unmyelinated nerve fibers carry secretory granules into pars nervosa.There they form accumulations, known as Herring bodies.(2)Blood supply Inferior hypophyseal artery Sinusoidal capillaries(pars nervosa)Venous sinus(3)Relationship of hypothalamus and neurohypophysis Secretions(oxytocin and ADH)from SON and PVN:→

release into blood by unmyelinated nerve fibers to regulate remote targets.ADH(antidiuretic hormone)—

promotes distal & collecting tubules to absorb water→ —

stimulates contraction of the smooth muscles of uterine wall and

volume of urine decrease.Oxytocin promotes secretion of breast.Review Questions: 1.What are the general features of endocrine glands? 2.List the three histological cell types and five functional cell types of the adenohypophysis? 3.Structurally and functionally, how does the neurohypophysis differ from the adenohypophysis? 4.How does the hypothalamus regulate the activity of adenohypophysis? 5.What is hypophyseal portal system? 6.What hormones are secreted by the thyroid and how are they stored? 7.List the two major parenchymal cell types of the parathyroid gland.Which type secretes PTH? 8.Name the layers of the adrenal cortex and the hormones produced by each.9.What hormones are secreted by the adrenal medulla? 10.Describe the structures of steroid secreting cells.――

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主要英文单词：

hormone『』 target cell『』 follicle『』 pituicyte『（）』 parafollicular cell『』 zona glomerulosa『』 zona fasciculata『』 zona reticularis『』 chromaffin cell『』 chromophobe cell『』

激素

靶细胞 滤泡

垂体细胞 滤泡旁细胞 球状带 束状带 网状带 嗜铬细胞 嫌色细胞

体细胞胚 篇3

目前,肉羊胚胎移植工作在全国大部分养殖地区正如火如荼的进行,由此,给肉羊产业化的发展带来了契机,逐年增大纯种肉羊在我国本地羊群中所占的比例,可预见未来几年,我们在餐桌上就将见到颜色鲜美、口感好、脂肪含量低的高档羊肉进入到餐馆。近年来,新疆地区在肉羊胚胎生产及胚胎移植中的投入不断增大,在多地开展了肉羊胚胎移植工作,如:克拉玛依、昌吉、哈密、二师、三师和十师等地,开展了千枚或万枚胚胎移植工程。这些工程的逐年实施将给新疆本地肉羊发展和育种工作带来便利,迎来肉羊育种的曙光。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1试验动物来源本试验材料来源是克拉玛依市白碱滩区肉用羊研究所提供的萨福克、陶赛特、白萨福克和杜泊肉羊。选择繁育过1胎以上的成母羊,年龄段在3~5岁,发情周期正常,无生殖道疾病,膘情适中。

1.1.2主要药品和试剂常用消毒、药品有:新吉尔灭,500 ml/瓶(辽宁修正生物制药有限公司);75%酒精:100 ml/瓶(新疆佳宁八四消毒液制品有限公司);碘酒:500 ml/瓶(新疆佳宁八四消毒液制品有限公司)。

促卵泡素(FSH)400 mg/瓶(加拿大);氯前列烯醇(PG)0.2 mg/支(上海计划生育研究所);孕马血清促性腺激素(PMSG)1 000 IU/瓶(宁波三生药业股份有限公司);促黄体生成素(LH)200 IU/支(宁波三生药业股份有限公司);CIDR 20个/包(新西兰进口);冲胚液、胚胎保存液等为ICP公司;黄体酮注射液;麻醉药、解麻药和长效土霉素为国产。

1.1.3主要器材常用器材:恒温水浴锅、恒温台、实体显微镜、剪毛剪、止血钳、帕巾钳、手术刀柄和刀片、镊子、手术保定架、平皿(100 mm、35 mm)和四孔板、冲胚管、捡胚针、缝合针和缝合线、采精设备等。

1.2方法

1.2.1供体超数排卵供体羊采用CIDR+FSH+PMSG+LH法进行处理,FSH总剂量为12.2 ml,递减肌肉注射,每天2次,间隔12 h。放置CIDR阴道栓的第1天设置为0 d,第9~11 d开始肌肉注射FSH,分7次注射,共计注射剂量为12.2 ml,在FSH倒数第2次肌肉注射时,撤出CIDR栓并肌肉注射PMSG,移除CIDR后的24~48 h开始试情,如有发情立即静脉或肌肉注射LH,在发情后的6~8 h阴道输精或10~18 h后采用子宫角输精,在输精后的第6天,采取手术法取胚胎。在手术法取胚胎前的24 h,要给供体羊控食、控水,等待手术。

1.2.2受体同期发情处理受体羊为了降低成本一般是放置海绵栓,放置第1天为0 d,撤栓时间安排在供体羊移除CIDR栓前的6 h受体羊移除海绵栓,同时肌肉注射PMSG,24~48 h受体羊试情,并标记记号,记录发情日期,待供体冲胚日进行受体移植工作。

1.2.3胚胎移植二细胞期胚胎移植采用的是手术法移植,在受体羊后腿两侧芡窝部剃毛、消毒和脱碘,技术人员勾或夹出子宫角细端,另一技术员翻开找到输卵管伞部,并将移胚针从伞口插入输卵管5~12 mm处,将二细胞胚胎放置在此处,缝合后,消毒,待45~60 d时妊娠检查。

1.2.4试验结果进行X2检验。

2结果与分析

2.1不同肉羊品种对FSH超排效果的影响

4个不同肉羊品种经FSH超数排卵后,卵巢上红体数、卵泡数以及获得二细胞胚胎数、未受精数,详见表1。从表1中可以看出,4个不同肉羊品种,经超数排卵处理后,平均每只供体获得二细胞胚胎数为11.5枚,获得较好的效果。

注:同一上标表示差异不显著。

2.2不同肉羊品种二细胞胚胎受胎率

4个不同肉羊品种二细胞胚胎,经镜检分类,挑出分裂不好的胚胎,搭配正常二细胞胚胎,输卵管伞端移植,于45~60 d B超检查,怀孕阳性率平均达到62.3%。详见表2。

注:同一上标表示差异不显著,不同上标表示差异显著。

3讨论

3.1不同肉羊品种获得二细胞胚胎数分析

本试验中采用同一厂家的、同一型号的激素,并采取同样的激素处理剂量和方案,得到较好的结果。通过对不同品种试验得出的数据可知,本文所列四个肉羊品种中,平均获得可用二细胞期胚胎11.2枚,平均回收率85.2%,二细胞期胚胎位于输卵管伞端或壶腹部,胚胎集中分布,取卵时从宫管结合部打孔插入先穴式冲胚针,使用冲胚液较少,冲胚液回流好,胚胎回收率高,且易于捡胚操作。在这四个萨福克、陶赛特、白萨福克和杜泊肉羊品种中使用同一超排方案平均获得胚胎10.2、10.3、12.2和14.6枚。通过目测这四个肉羊品种体重均在60~80 kg,说明了基本相同体重的情况下,品种之间的差异不大。同时,因为这四个肉羊品种均为进口品种,且双羔率基本维持在5%~15%左右。从以上两个方面说明了体重悬殊不大和双羔率较低的供体肉羊,在同一超排方案下可以取得较好的胚胎生产效果。

3.2不同肉羊品种二细胞胚胎的移植受胎率

本试验中将获得的全部二细胞期胚胎用于移植研究,从得到的数据可以看出,二细胞期胚胎移植受胎率为62.3%,取得较好的受胎结果,可能与二细胞期胚胎正在处于细胞分裂的基数分裂期,细胞活动旺盛,不易损伤细胞;或二细胞期胚胎移植部位在输卵管壶腹部,更有利于二细胞期胚胎的继续发育[10]。但是二细胞期胚胎移植的成功率受到移植的二细胞期胚胎数和供、受体羊生殖生理周期的同步化程度密切相关[11]。与桑椹胚或囊胚移植相比,在胚胎移植时桑椹胚或囊胚直接移植到子宫角小弯,而二细胞期胚胎则直接被移植送至输卵管壶腹部,这样更有利于胚胎进一步发育,对随后的胚胎着床更为有利[12,13,14]。

体细胞胚 篇4

1 对象与方法

1.1 对象

连续选择2008年1月至2009年12月在我院接受胸部手术治疗原发性肺癌患者, 纳入标准: (1) 经临床、影像学和病理检查确诊的非小细胞肺癌患者; (2) 有手术适应证。 (3) 预期生存期>6个月。排除标准: (1) 术后发生严重合并症患者。 (2) 各重要脏器出现转移者。 (3) 合并有其他严重躯体性疾病。本文共入选共入选接受手术治疗非小细胞肺癌患者41例, 男25例, 女16例, 年龄44～80 (65.73±16.05) 岁。未手术组选择同期住院未手术同病患者37例, 男21例, 女16例, 年龄44～80 (66.25±15.83) 岁。对照组选择同期住院非肿瘤患者44例, 男26例, 女18例, 年龄44～80 (65.91±15.26) 岁, 3组年龄和性别分布接近, 具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 血清CEA检测方法

分别抽取空腹静脉血4mL, 分离血清后-20℃冷冻保存备用。CEA测定均用放射免疫法, 试剂为瑞典MajnabbeTerminal公司生产的CanAg试剂盒, 由固定人员操作。手术组3次采样时间分别是术前1d、术后1d和7d, 其它2组也分别入选后第1天、3天和10天。

1.2.2 统计学方法

使用SPSS 10.0分析软件对收集到的数据进行处理, 所有结果用 (±s) 表示, 用t检验进行组间显著性测定, P<0.05代表有统计学意义。

2 结果

3 组对象不同时间段外周血CEA浓度变化比较见表1。

注:与对照组比较:a P<0.05, 与未手术组比较:b P<0.05, 与第1次比较:c P<0.05

3 讨论

近年来肺癌的发病率及死亡率不断上升, 两项指标均在我国肿瘤流调报道中排名靠前, 非小细胞肺癌 (NSCLC) 占原发性肺癌患者70%～80%, 首诊时多为中、晚期, 各种治疗疗效不尽人意, 医学界一直在积极寻找理想肿瘤标志物, 以期早期诊断, 并监测患者疗效和病情进展情况。CEA是较早发现的肺癌标志物, 最早在1965年由加拿大学者Gold等从结肠腺和胎儿肠中提取, 其相对分子质量为18000, 属于糖蛋白分子, 因其在胚胎时可正常分泌而得名, 但因其特异性较低, 一般多与其他标志物联合检测才能明确肺癌临床诊断。近来的研究发现, 连续监测外周血CEA浓度更有实际意义, 特别是将其作为手术疗效、预后评估指标[1]。

我们连续选择一组近年来接受手术治疗的NSCLC患者为观察对象, 分别在术前1d、术后1d和7d取样, 结果表明, 手术组和未手术组各次CEA浓度值均明显高于于对照组, 同时手术组术后1d和7d血清CEA明显低于手术前检测值和未手术组同批次检测结果。这些数据提示外周血CEA表达不仅代表肿瘤存在宿主机体中, 手术切除病灶后, 其表达浓度也可随之发生变化, 可能与去掉分泌产生CEA的肿瘤实体细胞有关, 血液浓度下降常常意味着临床治疗有效, 国内其它同类观察[2,3]也有与我们接近的研究结果。

手术切除病灶可显著降低NSCLC患者外周血CEA表达水平现象促进了人们对肺癌发病机制的深入思考, 同时还为选择治疗疗效靶标带来了希望。

摘要：目的 观察非小细胞肺癌患者手术前后外周血癌胚抗原 (CEA) 表达动态变化。方法 连续选择接受手术治疗的非小细胞肺癌患者41例 (手术组) 、同期住院未手术治疗同病患者37例 (未手术组) 和同期住院非肿瘤患者44例为对照组。3组对象分别在不同时间段进行外周血癌胚抗原浓度测定, 手术组3次采样时间分别是术前1d、术后1d和7d, 其它2组也分别入选后第1天、3天和10天。结果 手术组和未手术组各次外周血CEA浓度值均明显高于于对照组, 而手术组术后1d和7d血清CEA明显低于手术前检测值和未手术组同批次检测结果 (P均<0.05～0.01) 。结论 非小细胞肺癌患者有明显外周血CEA高表达, 手术切除病灶可显著降低他们的血清CEA浓度。

关键词：肺癌/非小细胞,手术治疗,癌胚抗原/外周血,肿瘤血清标识物

参考文献

[1]杨婷, 杨勤.肺癌血清肿瘤标志物的研究进展[J].中国药物与临床, 2005, 5 (7) :489～491.

[2]朱登彦, 赵松.46例非小细胞肺癌患者手术前后肿瘤标志物的监测分析[J].中国老年学, 2009, 30 (9) :1285～1286.

体细胞胚 篇5

1 资料与方法

1.1 细胞模型建立

在知情同意和伦理学委员会批准情况下,采用保胎失败、自然流产的胎儿4例(14～18周),流产4h内送达实验室。取出椎间盘组织,D-Hanks液冲洗后。将椎间盘组织中的外层纤维环切除,保留内层纤维环和髓核组织。将组织剪至约1 mm3大小碎块后放入T25培养瓶中,加入含0.2%胶原酶和10%血清的改良Eagle培养基(dulbecco′s modification of eagle′s medium dulbecco/F-12,DMEM/F12)5～10 mL,放入培养箱中培养。每隔数小时用玻璃管吹打一次,当培养瓶中组织块消化成细胞悬液后,离心细胞,去除上清。加入DMEM/F12培养液清洗1次后,将细胞重悬于含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中;细胞计数,调整细胞密度至105/mL,按5 mL培养基/瓶接种,置于含95%空气、5%二氧化碳的37℃细胞培养箱中培养。待细胞长到80%～90%融合时进行传代,磷酸缓冲液(phosphate belanced solution,PBS)冲洗细胞1次,加入0.25%胰蛋白酶与0.01%乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetie acid,EDTA)1 mL,晃动数下后倒掉大部分液体,显微镜下监测见细胞突起回缩,细胞形态变圆即添加5 mL培养基终止消化,吸管轻柔吹打至细胞全部脱壁,细胞计数,4×105/瓶接种细胞,继续培养。

1.2形态学观察

将原代和传代后第3代细胞接种于24孔板中,待细胞融合弃去培养液后,PBS洗3次;4%多聚甲醛固定15 min,蒸馏水冲洗;分别以1%甲苯胺蓝染液(染料溶于0.1%的碳酸钠水溶液中)和2%碱性品红染液(染料溶于0.01 M的PBS中)染色10～30 min;乙醇洗去染色液,自然干燥。倒置显微镜观察。

1.3(reverse transcription poymerase dain reacyion,RT-PCR)检测细胞Ⅰ、Ⅱ型胶原的表达

a)引物设计:

b)逆转录:使用Trizol法从体外培养的第3代细胞中抽提核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)(步骤参考试剂说明书),以寡核苷酸T为引物逆转录为互补DNA(complementary DNA,CDNA)。具体步骤如下:PCR管中加入RNA与寡核苷酸T,70℃反应5 min后迅速插入冰水中,待液体冷却后加入其他试剂,进行如下反应:42℃60 min,95℃5 min,4℃5 min。体系稀释至50μL,-20℃保存。

c)PCR反应:PCR管中加入下列试剂,10 000rpm瞬时离心后进行反应。1.2%琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行鉴定。1×104/mL的密度接种于24孔板,培养2 d。倒掉培养基,PBS洗5min×3次。3∶1混合甲醇和乙酸固定,室温固定20～3 0min。PBS洗5 min×3次。2%马血清室温封闭30 min。吸干马血清,加入一抗(免抗人Ⅱ型胶原多克隆抗体,稀释度为1∶50),不加一抗的作为阴性对照,4℃过夜。PBST洗5 min×3次。加入二抗(cy3标记的羊抗免抗体,稀释度为1∶100),室温1 h。PBST洗5 min×3次。荧光显微镜下观察着色情况。

1.4免疫荧光检测细胞Ⅱ型胶原的表达

将第3代细胞以1×104/mL的密度接种于24孔板,培养2 d。倒掉培养基,PBS洗5min×3次。3∶1混合甲醇和乙酸固定,室温固定20～3 0min。PBS洗5 min×3次。2%马血清室温封闭30 min。吸干马血清,加入一抗(免抗人Ⅱ型胶原多克隆抗体,稀释度为1∶50),不加一抗的作为阴性对照,4℃过夜。PBST洗5 min×3次。加入二抗(cy3标记的羊抗免抗体,稀释度为1∶100),室温1 h。PBST洗5 min×3次。荧光显微镜下观察着色情况。

2 实验结果

2.1 人胚椎间盘的形态结构

4个月左右的胎儿椎间盘组织已经出现髓核与纤维环的组织学差异,椎间盘外层为环状的纤维环,不透明,白色;中间为胶冻样的髓核组织,半透明状,说明此时髓核和纤维环细胞分泌的细胞外基质已经存在差异,人胚髓核细胞已经具备了成体髓核细胞的一些特性(见图1a)。甲苯胺蓝和碱性品红对椎间盘髓核组织的染色结果表明,髓核的外层部分碱性品红着色较深,而内层部分则甲苯胺蓝着色较深。由于碱性品红容易对胶原染色,而甲苯胺蓝则对氨基葡聚糖染色。说明髓核中心的氨基葡聚糖等基质成分可能高于周围,这与正常成体髓核组织一致(见图1b)。高倍镜下观察发现取材部位的周边组织与中心相比,细胞体积较小、数量较多,无空泡样结构。髓核中心区域来源于脊索而周围则由间充质细胞发育而来,这些细胞差异可能与此相关(见图1c～1d)。

2.2 髓核细胞形态与细胞染色

原代培养的髓核细胞24 h便可贴壁,会有突起,细胞大小不一,形态不规则,有圆形、三角形、多边形及梭形等,但大多呈椭圆形(见图2a～2b),每13～14天传1代,传至3代后,细胞生长缓慢,15～20 d传一代,细胞的形状渐以梭形为主,胞质内偶见空泡,进行甲苯胺蓝染色后,胞质呈淡蓝色,细胞核呈蓝紫色,有3～5个核仁,碱性品红染色后整个细胞红染(见图2c～2d)。

2.3 人胚椎间盘髓核细胞的鉴定

2.3.1 RT-PCR检测人胚椎间盘髓核细胞表达Ⅰ、Ⅱ型胶原

RT-PCR的结果显示,我们培养的椎间盘髓核细胞表达Ⅰ型及Ⅱ型胶原,两者都具有较高的表达(见图3),提示细胞已经具有较高的分化状态。

2.3.2 免疫荧光细胞化学检测人胚椎间盘髓核细胞表达Ⅱ型胶原

Ⅱ型胶原免疫荧光细胞化学检测结果显示,细胞整个胞质着色(见图4),这与PCR的结果一致,即该细胞表达Ⅱ型胶原。

3 讨论

椎间盘分为髓核和纤维环,髓核细胞分泌含有大量的负电荷的Ⅱ型胶原和蛋白聚糖。这些细胞外基质可以吸附大量的水离子,从而使髓核呈现出半透明较柔软的性态。也正是这样的结构使来自上层的压力可以较均匀地向髓核周围的纤维环传导,而纤维环含有大量坚韧的Ⅰ型胶原纤维(与肌腱相似),并通过这种坚韧的物质与上下椎体相连。这样的结构既能够运动又可以承受较大的压力[2]。随着年龄的增长,髓核中亲水的蛋白聚糖和Ⅱ型胶原减少,疏水的Ⅰ型胶原增多,使得原本果冻样的髓核变硬,进而改变椎间盘的生物力学环境。上述改变进一步影响了髓核细胞的生物特性,导致椎间盘退变加剧,形成恶性循环,最终引发椎间盘退行性疾病[3]。由此不难发现,髓核细胞对于维持椎间盘的正常状态具有重要作用。因此,针对髓核细胞的研究将必然有助于椎间盘退变机制的阐明。

动物模型是各种疾病研究的重要途径,然而由于人是生物界少数直立行走的动物之一,因所受的生物力学环境的不同使得很多由动物模型得来的结论在人椎间盘退变研究中的意义受限。因此,椎间盘细胞的体外培养成为了研究椎间盘的重要手段此前的研究表明体外培养的成体椎间盘细胞较易发生去分化,难以维持稳定的实验环境。相反的,源自胚胎的的髓核细胞于体外环境中则可以较长时间维持其表型不变,且表型与正常髓核细胞很接近[4]。因此,本研究首先采用了胎龄4个月左右的人胚椎间盘髓核细胞建立椎间盘细胞体外培养模型。

人成体正常椎间盘髓核细胞来源受限是椎间盘发育和退变机制研究中最重要的瓶颈。一些学者认为3～4个月胎龄的人胚椎间盘髓核细胞可以作为正常的髓核细胞的模型[5]。在本研究中我们观察到胎龄4个月左右的胎儿椎间盘在大体形态上与健康的成体椎间盘相同,细胞外基质的分布与成体相似。对体外培养的髓核细胞染色、RT-PCR和免疫细胞化学检测显示,这些细胞表达Ⅱ型胶原、氨基葡聚糖等亲水的细胞外基质,证实其已具备成体椎间盘髓核细胞的类似的功能。此外人胚椎间盘髓核细胞活力好,可以在体外培养较长时间,增殖速度也较快,每13～14 d传一代,传至3代后,细胞生长缓慢,15～20 d传一代,4代后细胞分裂、增殖逐渐变慢,胞质中偶见空泡。3代之前我们没有发现细胞明显的老化或增殖减慢,且表型变化相对较小,所以在成体正常椎间盘髓核细胞难以获得的情况下,胚胎髓核细胞仍不失为一种较理想的正常椎间盘髓核细胞模型[6]。

本研究中我们取4个月左右胎龄的人椎间盘,去除了椎间盘的外层纤维环,对留下的髓核和一些内层纤维环的细胞进行培养,根据上述的发育过程,这些细胞应该包括脊索细胞和周围的软骨样细胞。体积较大是脊索细胞的主要特点[7],我们在原代培养过程中也看到了一些体积较大的细胞,但数量很少,说明我们原代培养的细胞中脊索细胞的比例较少。对人胚髓核的染色表明,此时组织的细胞外基质与软骨组织相同(大量的胶原和氨基葡聚糖)。体外培养细胞的染色、以及RT-PCR和免疫细胞化学检测表明此时的细胞表达糖胺多糖、Ⅱ型胶原等,说明此时的细胞已经基本具备了正常成体髓核细胞的表型,是基本发育成熟的椎间盘髓核细胞。

然而这些细胞与成体的椎间盘髓核细胞存在一些差别。首先从细胞类型上4～10岁以后的椎间盘髓核被认为是没有脊索细胞的[7],但胎龄4个月的椎间盘髓核内依然存在。形态上,正常成体的椎间盘髓核细胞以圆形为主,而胎龄4个月的椎间盘髓核细胞具有多形性,卵圆形为主[8]。细胞外基质表达方面,正常成体的椎间盘髓核细胞以表达Ⅰ型胶原纤维为主,而人胚椎间盘髓核细胞仍具有一定的Ⅰ型胶原表达[9]。尽管如此,我们认为人胚椎间盘髓核细胞模型的建立仍然为研究椎间盘生物学特性,阐明椎间盘疾病发病机理提供了一条有效途径。

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体细胞胚 篇6

关键词：晚期非小细胞肺癌,癌胚抗原,全身转移

在我国肺癌是最常见的恶性肿瘤之一, 可分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌 (Non-small cell lung cancer, NSCLC) , 其中非小细胞肺癌占80%以上, 且其恶性程度高、预后差[1,2]。随着肺癌流行病学的变化, 非鳞状细胞癌在相对年轻人群和不吸烟妇女中持续增加[3,4]。肺癌绝大部分是局部晚期或高级类型, 但是其相关转移及进展的机制尚未阐明。近年来, 有关肺癌肿瘤标志物的研究取得了一些进展, 不仅对部分胸部影像和病理等检查难以确诊的可疑肺癌的诊断有一定帮助, 而且对判断肺癌的治疗效果、预后及复发等情况也具有一定价值。研究表明, NSCLC患者的血清肿瘤标志物水平可以提供预后信息, 在现有可利用的肿瘤标志物中, CEA是一个明确的和长期的肿瘤标志物, 一直被广泛地用于临床实践中, 有研究发现其与NSCLC患者的预后存在一定的相关性[5,6]。之前的研究对血清CEA在肺癌的临床有效性进行了重要探索, 阐明了血清CEA用于诊断或治疗的作用[7,8,9]。确定了高血清CEA水平与IV期非小细胞肺癌脑转移的诊断时限显著相关[10]。但CEA在预测NSCLC患者全身转移能力的价值仍不十分明确, 本研究旨在阐明晚期非小细胞肺癌患者血清癌胚抗原水平和全身转移能力的关系, 为临床早期诊断和治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取于2012年3月-2014年1月来本院治疗的初治IV期NSCLC患者160例为研究对象, 诊断依据参照肺癌的诊断标准和第7版肺癌TNM分期诊断标准[11,12]。其中男86例, 女74例, 平均年龄 (59.31±12.71) 岁。研究指标包括年龄、身高、体重、性别、组织学分类、肿瘤分化、CEA水平、吸烟状况、骨转移、淋巴结转移、胸膜/积液转移、颈部转移、软组织转移、脑转移、全身转移得分及LN-调整全身转移得分。根据患者CEA水平将入组患者分为两组, 正常组 (CEA水平<5 ng/m L) 和高水平组 (CEA水平≥5 ng/m L) 。完全告知患者这项研究的性质, 所有入组患者均签署了知情同意书。

1.2 纳入标准

术后组织学或细胞学证实为IV期NSCLC;有详细的患者治疗前后血清CEA信息;进行全身代谢显像检查。

1.3 排除标准

术后组织学或细胞学证实为小细胞肺癌及继发性肺癌;术后组织学或细胞学证实为非IV期NSCLC;无患者治疗前后血清CEA信息;无全身转移性疾病;严重肝肾功能异常。

1.4 方法

所有患者均抽取清晨空腹血3 m L, 离心分离血清, 实验仪器为德国西门子CP全自动免疫化学发光仪, 试剂选用德国西门子公司生产的原装配套试剂。经全自动免疫化学发光仪器自动检测, 获得结果。全身代谢显像检查全身转移程度, 包括整个胸腹CT检查或磁共振成像 (MRI) 、脑CT检查。对中枢神经系统转移的检测, 优先进行大脑的核磁共振成像。脊柱MRI以精确地确定骨转移的区域。符合临床指征时进行胸腔或心包积液细胞学检查。对于反应性的区别或炎症的转移变化鉴别较难, 因此, 由经验丰富的核医学医师和放射科医师进行成像报告的解读。本研究参考Lee等[10]的方法对患者全身转移情况进行评估, 包括全身转移得分及LN-调整全身转移得分, 全身转移得分从1~6分, LN-调整全身转移得分从1~7分。

1.5统计学处理

采用统计学软件SPSS 17.0进行分析, 计量资料用 (±s) 表示, 采用t检验, 计数资料采用X2检验或Fisher精确检验, 采用单因素和多因素Logistic回归分析, 以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 入组患者的人口数据和肿瘤特征

患者年龄<65岁86例, ≥65岁74例;身高 (169.47±13.58) cm;体重 (63.37±10.24) kg;男86例, 女74例;组织学分类, 腺癌114例, 鳞状细胞癌32例, 大细胞癌7例, 其他7例;肿瘤高分化13例, 中分化82例, 低分化65例;CEA水平<5 ng/m L 72例, ≥5 ng/m L 88例;吸烟53例;骨转移84例;淋巴结转移90例;胸膜/积液转移74例;颈部转移88例;软组织转移3例;脑转移48例;全身转移得分1分40例, 2分47例, 3分43例, 4分21例, 5分8例, 6分1例;LN-调整全身转移得分1分8例, 2分37例, 3分48例, 4分41例, 5分17例, 6分8例, 7分1例。

2.2 不同CEA水平患者的临床参数和病理特征比较

不同CEA水平患者的性别、组织学分类、骨转移、淋巴结转移和脑转移比较差异具有统计学意义 (P<0.05) ;而年龄、肿瘤分化、吸烟状况、胸膜/积液转移、颈部转移和软组织转移比较差异无统计学意义 (P>0.05) , 见表1。

例

2.3 高CEA水平组患者的多因素分析

将单因素分析中P<0.05的变量纳入多因素Logistic回归分析, 结果表明组织学分类、骨转移和脑转移是影响患者高CEA水平的独立危险因素, 见表2。

2.4 根据LN-调整全身转移得分的CEA水平比较

血清CEA水平从LN-调整全身转移得分1分中的2.7 ng/m L上升至LN-调整全身转移得分7分中的374.1 ng/m L (P=0.003) 。低LN-调整全身转移得分 (评分1~3分) 与高LN-调整全身转移得分 (评分4~7分) 比较表现出CEA水平显著降低 (P<0.001) , 见表3。

ng/m L

2.5 不同CEA水平组患者全身转移得分和LN调整全身转移得分的比较

血清高CEA水平的比例从全身转移得分1中占37.5% (15/40) 上升至全身转移得分6中的100% (3/3) (P<0.001) 。血清高CEA水平的比例从LN-调整全身转移得分1中占25.0% (2/8) 上升至LN-调整全身转移得分7中的100% (1/1) (P<0.001) , 见表4。

例

3 讨论

肺癌为最常见恶性肿瘤之一, 就诊时多为晚期, 目前临床上常将肺癌分为NSCLC、小细胞肺癌 (SCLC) 两大类, 其中以前者最为常见[13,14]。目前, 诊断研究已成为研究热点。本研究表明, 高血清CEA水平可能在非小细胞肺癌四阶段成为增加全身转移潜能的更好的替代标记。研究探讨了增加转移潜能的可能性与异常血清CEA水平的关系[15,16]。然而, 尚无临床研究证实是否晚期非小细胞肺癌患者全身转移潜能与异常血清CEA水平相关。鉴于CEA的特征, 癌症转移可以与增加的血清CEA水平有关, CEA的功能可能是作为一种黏附因子和趋化因子[17]。研究表明, CEA可以激活Kupffer细胞并刺激白介素-1、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α, 从而促进肿瘤细胞血管内皮细胞黏附诱导入侵的黏附分子, 还可以促进肿瘤的转移[15,16,17]。目前的研究表明异常血清CEA水平增加肿瘤的转移潜能。

肿瘤转移程度分类是依据全身转移区域和转移总面积得分为基础, 结果表明, 不同CEA水平患者的性别、组织学分类、骨转移、淋巴结转移和脑转移比较差异具有统计学意义;而年龄、肿瘤分化、吸烟状况、胸膜/积液转移、颈部转移和软组织转移比较无统计学差异。血清CEA水平从LN-调整全身转移得分1分中的2.7 ng/m L上升至LN-调整全身转移得分7分中的374.1 ng/m L。低LN-调整全身转移得分 (评分1~3分) 与高LN-调整全身转移得分 (评分4~7分) 比较表现出CEA水平显著降低。血清高CEA水平的比例从全身转移得分1分中占37.5%上升至全身转移得分6中的100%。血清高CEA水平的比例从LN-调整全身转移得分1分中占25.0%上升至LN-调整全身转移得分7分中的100%。单因素分析结果表明, 性别、组织学分类、骨转移、淋巴结转移和脑转移是影响患者高CEA水平的危险因素;多因素Logistic回归分析表明, 组织学分类、骨转移和脑转移是影响患者高CEA水平的独立危险因素。

虽然有关血清CEA的预后和预测价值已有多项研究报道, 几乎未见转移模式与血清CEA水平有关的研究。本研究的主要结论是高血清CEA水平可能在IV期非小细胞肺癌增加全身转移潜能, 最初诊断作为可靠的指示性标志物。此外, 对转移性淋巴结状态进行了评价, 血清高CEA水平与骨转移、脑转移、淋巴结转移和肺转移显著相关。大量的最近研制的CEA肿瘤疫苗现在处于不同的发展阶段, 需要进一步的研究, 以确定这些疫苗在癌症治疗中的最终角色[6]。

体细胞胚 篇7

促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)是一种造血生长因子,与其受体(erythropoietin receptor,EPOR)结合可促进红系祖细胞的产生、分化和成熟。近年来,随着研究的深入发现血管内皮细胞表面也表达EPO受体[1],EPO对体外培养内皮细胞具有促增殖作用,EPO可能是一种新型促血管生成因子[2],为此本实验通过观察重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,r Hu EPO)对培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)及鸡胚尿囊绒毛膜(chorioallantoic membrane,CAM)血管生成的影响,探讨其促血管生成效应,为进一步研究其作用机制提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

rHuEPO(山东阿华生物药业有限公司生产,2000 u/支,国药准字S20030021);血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)(Sigma公司);免疫组织化学试剂盒及兔抗人Ⅷ因子相关抗原(factorⅧ-related antigen,Ⅷ-R Ag)(福州迈新生物技术有限公司);基质胶(美国Becton-Dickinson公司);种鸡蛋(湖北省农科院禽蛋育种中心);微孔滤膜(上海华美生物工程公司,孔径0.45μm)。

1.2 方法

1.2.1内皮细胞分离培养、鉴定及管腔结构的形成从临床无菌收集新鲜人脐带,采用0.1%Ⅰ型胶原酶和0.25%胰蛋白酶按1∶1双酶灌注消化法分离HUVEC[3]。细胞培养于含10%新生胎牛血清、双抗(青霉素100 u/m L,链霉素100μg/m L)的DMEM培养液中,37℃、5%二氧化碳混合空气的培养箱培养,每2天左右换液1次,约6 d经0.25%胰蛋白酶、0.01%EDTA消化后传代。采用形态学观察及Ⅷ因子相关抗原(factorⅧ-related antigen,Ⅷ-RAg)免疫组织化学方法进行内皮细胞鉴定。取第4~6代细胞进行实验。HUVEC三维培养模型参考宋长城[4]等方法加以改进,用无血清DMEM培养基稀释基质胶至1 g/L,以每孔120μL包被预冷的24孔板,37℃孵育4 h使基质聚合成胶。每孔接种5×104/100μL细胞,分别加入含NS、VEGF和r Hu EPO(终浓度分别为0.9%、10 ng/ml、20 u/m L)无血清DMEM培养液,每组设5孔。常规培养细胞36 h后,倒置显微镜下每孔随机选取5个视野并照相,记录形成管状结构的数目,采用Image Tools 3.0图像分析软件进行分析,以形成管状结构的数量表示。

1.2.2 CAM模型制作及微血管计数CAM模型制作参考有关文献[5]并加以改进。以直径为6 mm的圆形微孔滤膜为载体(121℃、20 min高压灭菌)。孵蛋第10天加样,分别吸取0.9%NS、10 ng/m L VEGF和20 u/m L r Hu EPO 15μL加到载体上,每组10胚,3d后取出孵蛋,将甲醇和丙酮(1∶1)混合固定液加入到实验区域原位固定15 min后将载体连同其周围的CAM剪下,将其平铺于载玻片上,风干,数码相机照相。解剖显微镜下以相同放大倍数计数血管,以实验部位边缘(即微孔滤膜载体边缘)1 mm范围内为一级血管,以实验部位边缘5 mm处为二级血管。凡属趋向性生长的血管,即以载体为中心发出,与滤膜半径的夹角小于45°者均予计数,而穿行、绕行的血管则不算在内[6]。

1.3 数据处理

采用SPSS 10.0统计软件进行分析,所有资料以均数±标准差表示,统计学处理采用单因素方差分析,P<0.05为差异有显著性。

2 结果

2.1 r Hu EP O促进体外培养HUVEC形成管腔结构作用

计数各处理组管腔结构数目,进行统计分析,结果显示NS对照组、VEGF阳性对照组和r Hu EPO组管腔结构数目分别为(0.5±0.1)、(28.3±0.6)和(16.1±0.4)。与NS对照组相比,r Hu EPO组与VEGF阳性对照组在倒置显微镜下均可见内皮细胞排列成管腔结构数目明显增多(P<0.05),但r Hu EPO作用效果不如VEGF(P<0.05),见图1。

2.2 r Hu EP O在CAM上的促血管生成作用

各处理组鸡胚CAM上载体周围均可见呈放射状走行的微血管,似车辐。计数各处理组CAM载体周围的一、二级血管数进行统计分析,见附表,结果显示r Hu EPO组与VEGF阳性对照组CAM血管数比NS组明显增加(P<0.05),同样,在诱导CAM血管生成过程中r Hu EPO作用效果较VEGF有所不及(P<0.05),见图2。

注:1)与NS组比较,P<0.052)与VEGF组比较,P<0.05

3 讨论

EPO是一种造血生长因子。以往认为EPO在体内主要作用是与红系祖细胞膜表面特异性EPOR结合从而刺激其增殖与分化。然而有文献报道[1]血管内皮细胞表面也有EPO受体表达,提示EPO与血管内皮细胞之间存在相互作用。作者在前期实验研究中发现r Hu EPO对体外培养内皮细胞具有明显促增殖作用,而且这种促增殖作用与其剂量有关,当剂量为20 u/m L时作用最明显。本研究表明,当r Hu EPO剂量为20 u/m L时具有较明显的促血管生成活性,在体内能促进CAM的血管生成,在体外能促进培养的HUVEC形成管腔结构。r Hu EPO这种促血管生成能力在HEESCHEN等人[7]的小鼠后腿缺血模型和CARLINI等人[8]培养的鼠主动脉环促进新血管生成实验中也得到了证实,说明EPO可能是一种新型促血管生成因子。在其促血管生成作用效果上,在本实验条件下作者还观察到r Hu EPO在CAM模型与培养细胞模型上的作用均弱于VEGF,在这一点与JAQUET等人[9]报道不符,他们认为在促进血管生成效果上EPO作用等同于VEGF,这可能与实验材料、方法及剂量的选择有关,因此,EPO促血管生成作用是否等同于VEGF,还需要做进一步研究。目前已知VEGF是最重要的血管生成调控因子之一,其通过与血管内皮细胞表面特殊受体相结合可刺激血管内皮细胞的增殖和迁移,促进血管构建及生成[10~11],从目前实验结果及相关报道[12]中作者发现EPO也可诱导内皮细胞增殖、基质金属蛋白酶产生及管腔形成,其促血管生成的作用机制是否与VEGF相同或有其他不同作用机制尚需进一步探讨。

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