移植性lewis肺癌（精选7篇）
移植性lewis肺癌 篇1
肿瘤新生血管生成是对实体瘤生长、侵袭和转移具有决定性的一个重要因素。调气消积汤是由柴胡、黄芩、人参、半夏、炙甘草、生姜、大枣、生牡蛎、莪术、白花蛇舌草、天门冬等11味药物组成, 是在小柴胡汤原方基础上加味而来, 是临床治疗肺癌的有效方剂。本实验采用SABC免疫组化方法检测调气消积汤对Lewis肺癌的肿瘤组织微血管密度和MMP-9蛋白表达的影响, 以探讨调气消积汤对肿瘤血管生成的影响及作用机制。
1实验材料
1.1 实验动物与瘤株
近交系C57BL/6J小鼠50只, 均为雌性, 鼠龄10周, 体重 (20±2) g, 清洁级, 由中国医学科学院实验动物研究所提供, 许可证编号:SCXK (京) 2004-0001。Lewis肺癌细胞株:中国医科大学免疫实验室提供。
1.2 实验药物
调气消积汤由柴胡10g、黄芩15g、人参10g、半夏15g、炙甘草10g、生姜10g、大枣4枚 (10g) 、天门冬15g、生牡蛎30g、莪术15g、白花蛇舌草20g等组成, 水煎浓缩至1g/ml, 4℃冰箱保存, 用前稀释至所需浓度。注射用顺铂 (DDP) :10mg/支, 齐鲁制药 (海南) 有限公司生产, 每日给药前用蒸馏水配制成1mg/ml药液。
1.3 实验仪器
CIAS-1000型细胞图像分析仪:北京大恒图像视觉有限公司;UV-3000紫外分光光度计;Chemi Imager 5500凝胶自动成像及分析系统。
1.4 实验试剂
兔抗 CD34多克隆抗体、兔抗MMP-9多克隆抗体、浓缩型SABC (兔IgG) 免疫组化试剂盒 (包括5%BSA封闭液、二抗、SABC) 、DAB显色试剂盒、抗体修复液等:均为武汉博士德生物工程有限公司产品。
2实验方法
2.1 造模[1]
-100℃液氮保存的Lewis瘤株, 于37℃水浴中复苏, 然后接种于C57BL/6J小鼠腹腔;9天后, 无菌条件下操作, 取荷瘤小鼠腹水, 经生理盐水洗涤后, 调整细胞浓度至约2×106个/ml的瘤细胞悬液, 台盼蓝染色观察记录活细胞数 (>95%) ;在每只小鼠右腋窝皮下接种瘤细胞0.2ml, 共接种48只。
2.2 分组及给药
接种5天后, 待移植瘤长至直径0.3～0.5cm时, 选取荷瘤成功的小鼠40只, 随机分为荷瘤对照组 (MG) 、调气消积汤组 (TG) 、顺铂组 (DG) 、综合组 (调气消积汤+顺铂组) (ZG) , 每组10只。各组均在接种5天后晨起空腹开始给药。TG组和ZG组分别予相当于含生药16.5g/kg的调气消积汤0.4ml;MG、DG组分别予饮用水0.4ml;每日1次, 连续12天。DG和ZG组予顺铂注射液0.13ml;MG、TG组分别予生理盐水0.13ml注射;隔日1次, 共3天。
2.3 实验观察指标及检测方法
2.3.1 移植瘤微血管密度 (MVD) 的检测
采用SABC免疫组化方法。结果判定:微血管密度 (MVD) 的测定采用Weidner改进式方法[2]。记录5个视野内的微血管数, 取其均数为微血管密度 (MVD) 值。
2.3.2 移植瘤基质金属蛋白酶9 (MMP-9) 含量的检测
用SABC免疫组化方法。结果判定:参照Mattern改进式方法判定结果[3]。MMP-9阳性细胞判断:染为棕色者为阳性, 部位在肿瘤细胞的胞浆中。阳性染色深度:未见染色为0分 (-) , 轻度染色为1～2分 (+, 染成浅黄色) , 中度染色为3～4 分 (++, 染成棕黄色) , 深度染色为5～6 (+++, 染成棕褐色) 。
2.4 统计学处理
使用SPSS13.0统计软件进行处理, 计量资料用undefined表示, 组间比较采用方差分析 (One-Way ANOVA) , 方差齐时选用LSD法, 方差不齐时选Dunnett’s法。
3结果
与荷瘤组比较 ★P<0.05, ★★P<0.01
4讨论
目前对肺癌的病因病机的认识, 主要有“正气虚损学说”、“邪毒侵肺论”和“痰湿内聚论”。无论哪种原因, 最终均导致肺的宣降功能失司, 气机不畅而发病。《伤寒论》中的小柴胡汤是中医和解少阳的著名代表方, 其主要作用是调畅气机。调气消积汤是在小柴胡汤原方基础上加清热解毒的白花蛇舌草, 活血化瘀的莪术, 重镇安神、软坚散结的生牡蛎以及益气养阴润肺的天门冬组成。方中有7味药均归肺经, 诸药合用, 主要作用于脾、胃、肺、肝、胆, 从而达到调畅气机之目的。另外, 从现代药理学的角度来看, 调气消积汤方中大多数单味药都具有确切的抗癌功效[4]。
1971年美国的Folkman系统地提出了肿瘤血管生成假说, 认为“肿瘤生长依赖于血管生成”, 这是对肿瘤血管生成最重要的认识[5]。上世纪90年代发现新实体肿瘤的发生、发展、侵袭、转移及复发等每一步都需要持续的肿瘤新生血管[6]。研究发现, 肿瘤微血管密度 (microvascular density, MVD) 被认为是预测肿瘤转移、复发和预后的一项重要指标, 是衡量肿瘤血管生成活性或强度的重要定量指标之一[7] 。本研究结果显示调气消积汤组、顺铂组、综合组均能明显降低移植瘤组织微血管密度;其中综合组抑制移植瘤微血管密度的作用最强;调气消积汤组MVD与顺铂组相当。表明调气消积汤明显减低移植瘤组织及其间质的微血管密度, 从而切断肿瘤营养来源, 抑制肿瘤细胞的生长;与顺铂联合应用抑制血管生成作用明显增强。
MMP-9的主要功能是降解细胞外基质和基底膜, 造成一种有利于新生血管形成的微环境。MMP-9高表达的肿瘤在侵袭转移中突破各种屏障的能力较高, 在介导肿瘤的新生血管形成发挥着很重要的作用。近些年有学者发现MMP-9与肺癌的浸润和转移有关[8]。本研究发现调气消积汤组、顺铂组及综合组MMP-9蛋白的表达均比荷瘤对照组明显减低, 表明调气消积汤能减少MMP-9蛋白的表达, 保护基底膜的完整性, 对阻断新生血管形成、抑制肿瘤细胞生长起重要作用。
参考文献
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移植性lewis肺癌 篇2
1 材料
1.1药物
杨梅树皮: 浙江省永嘉县潘坑森森农业开发场提供; 杨梅树皮氯仿萃取物的制备: 取干燥清洁的杨梅树皮药材1 000g,剪碎,置于蒸馏烧瓶中,加3 000 m L80% 乙醇,80 ℃ 水浴回流提取2 次,每次2 小时,合并2 次提取液,过滤,滤液减压浓缩,回收乙醇,干燥,得醇提物。醇提物加水热溶后用1. 6 倍量氯仿萃取2 次,合并萃取液,分别于旋转蒸发仪上80 ℃ 回收溶剂,真空减压干燥至恒重,得氯仿萃取物。1 000g杨梅树皮中氯仿萃取物的量为26. 6 g,即杨梅树皮氯仿萃取物的得率为2. 66% 。注射用环磷酰胺( CTX) :山西普德药业股份有限公司生产,0. 2 g/支,批号: 04121001。
1.2动物及瘤株
C 57 BL/6J小鼠,清洁级,雌性,体质量18~22 g,由上海斯莱克实验动物中心提供,动物合格证号:2007-000539595,饲养于浙江省中医药研究院实验动物房内,实验动物使用许可证:SYXK(浙)2009-0122。小鼠Lewis肺癌瘤株:中科院上海药物所引进,本实验室液氮保存。
1.3试剂
无水乙醇、氯仿: 均为分析纯,由成都市科龙化工试剂厂生产; 小鼠TNF - αELISA试剂盒、小鼠MMP - 9ELISA试剂盒、小鼠TIMP - 1 ELISA试剂盒: 均由武汉博士德生物工程有限公司生产。
2 方法
2.1模型制备及分组给药
取生长良好的Lewis肺癌小鼠2 只,剥取瘤块,匀浆制成1 × 107·m L- 1浓度的细胞悬液,分别接种于50 只雌性C 57BL/6J小鼠的右腋皮下,0. 2 m L/只。次日随机分组、称重。设杨梅树皮氯仿萃取物高剂量组( 13. 2 g生药/kg) 、杨梅树皮氯仿萃取物中剂量组( 6. 6 g生药/kg) 、杨梅树皮氯仿萃取物低剂量组( 3. 3 g生药/kg) 、环磷酰胺( CTX) 阳性对照组( 30 mg/kg × 3) 及模型对照组( 30m L / kg) ,除CTX阳性对照组在实验第3、6、9 天腹腔注射外,其余各组动物每天1 次,连续灌胃12 天。
2.2观察指标测定
2.2.1瘤重及抑瘤率测定
停药次日处死动物,剥取实体瘤称瘤重,计算抑瘤率( % ) 。
2.2.2血清TNF-α、MMP-9、TIMP-1含量测定
停药次日,股动脉取血,分离血清,用ELISA法测定TNF- α、MMP - 9、TIMP - 1 含量。具体操作如下: 稀释血清及标准品分别加入到酶标板中,37 ℃ 反应90min; 弃去酶标板中液体,加入生物素标记抗体,37 ℃ 反应60min,0. 01M TBS洗涤3 次; 加ABC,37 ℃ 反应30min,0. 01M TBS洗涤5 次;加入TMB,37 ℃ 反应20 ~ 30min; 加入TMB终止液,用酶标仪在450 nm测定OD值,根据标准曲线求得TNF - α、MMP- 9、TIMP - 1 含量。
2.3统计方法
采用SPSS17. 0 版统计软件进行单因素方差分析。
3 结果
3.1各组小鼠瘤重及抑瘤率测定
结果见表1。
(±s)
与模型组比较*P<0.05,**P<0.01
3.2各组小鼠血清TNF - α、MMP - 9、TIMP - 1 含量测定
结果见表2。
(±s,n=10)
与模型组比较*P<0.05,**P<0.01
4讨论
杨梅树皮资源在我国极为丰富,经过修剪丢弃的杨梅树枝可做为长期大量的植物来源。杨梅树皮味苦、性温,具有散瘀止血、止痛之功效,民间用于治疗跌打损伤、骨折、痢疾、胃和十二指肠溃疡、牙痛等[4]。现在药理研究证实,杨梅树皮提取物具有多种生物学活性,其中抗肿瘤活性是一大亮点。徐容容等[5]发现杨梅素、杨梅苷对人肝癌细胞( Hep G2) 、人膀胱癌细胞( YTS - 1) 、小鼠黑色素瘤细胞( B16) 、人前列腺癌细胞( PC - 3) 等均有良好的抑制作用和诱导肿瘤细胞凋亡作用。张莉静等[6]报道杨梅树皮提取物及其大孔吸附树脂洗脱物、杨梅素单体化合物体外对人宫颈癌He La细胞、人黑色素瘤A375 - S2 细胞、人乳腺癌MCF -7 细胞和人肝癌Hep G2细胞均具有明显的细胞毒作用,杨梅素明显抑制He La细胞的增殖,通过激活Caspase途径诱导He La细胞调亡。
本研究结果表明杨梅树皮氯仿萃取物对C 57BL/6J小鼠Lewis肺癌有较好的抑制作用,且能明显增高血清TNF -α、TIMP - 1 表达,降低MMP - 9 表达。TNF - α、MMP - 9、TIMP - 1 是与肿瘤生长密切相关的蛋白。TNF - α 有广泛的生物学活性,其抗肿瘤作用显著,能使血管丰富的肿瘤发生明显坏死和生长抑制,对癌细胞有增殖抑制和细胞毒作用[7,8]。MMPs是降解细胞外基质( ECM) 最重要的酶类,MMP - 9 是MMPs中分子量最大的酶,可降解ECM及基底膜的主要结构蛋白IV型胶原,还能降解Ⅰ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ、Ⅺ型胶原以及纤连蛋白和层粘连蛋白,因而被认为几乎可降解ECM的所有成分,从而促进癌细胞浸润血管基底膜并向周围正常组织侵袭,与肿瘤的扩散和转移密切相关,MMP - 9增高可促进肿瘤转移[9,10]。TIMP - 1 作为MMP - 9 抑制剂则与肿瘤转移负相关。本实验结果表明杨梅树皮氯仿萃取物有较好的抗肺癌活性,可能通过上调TNF - α、TIMP - 1 表达,下调MMP - 9 表达来延缓肺癌细胞的生长和转移。该研究结果将为杨梅树皮抗肺癌的临床应用提供实验依据,亦为杨梅树皮资源的可持续开发利用提供新途径。
摘要：目的:观察杨梅树皮氯仿萃取物对C 57BL/6J小鼠Lewis肺癌的抑制作用及对肿瘤坏死因子(TNF-α)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响。方法:建立C 57BL/6J小鼠Lewis肺癌模型,分别设杨梅树皮氯仿萃取物高剂量组(13.2g生药/kg)、中剂量组(6.6 g生药/kg)、低剂量组(3.3 g生药/kg)、环磷酰胺(CTX)阳性对照组(30 mg/kg×3)及模型对照组(水30 m L/kg),给药12天后处死动物,称瘤重,计算抑瘤率(%);ELISA法测定血清TNF-α、MMP-9、TIMP-1含量。结果:杨梅树皮氯仿萃取物对C57BL/6J小鼠Lewis肺癌有一定的抑制作用,抑瘤率在16.3%~41.6%,其中高、中剂量组的瘤重与模型组比较有显著性差异(P<0.05~0.01);同时能明显增高血清TNF-α、TIMP-1表达,降低MMP-9表达。结论:杨梅树皮氯仿萃取物对C 57BL/6J小鼠Lewis肺癌有较好的抑制作用,且能上调TNF-α、TIMP-1表达,下调MMP-9表达。
关键词：Lewis肺癌,@杨梅树皮氯仿萃取物,TNF-α,MMP-9,TIMP-1,小鼠
参考文献
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移植性lewis肺癌 篇3
1 资料与方法
1.1 试剂与药品
吲哚美辛、二甲基亚砜 (DMSO) 购自Sigma公司, RPMI 1640培养基粉剂及胎牛血清均购于Gibco公司。
1.2 实验动物及细胞
Lewis小鼠肺癌细胞株购自美国典型培养物保藏中心 (ATCC) , SPF级C57小鼠购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司。
2 方法
2.1 细胞培养与接种
首先将Lewis细胞株用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基培养, 当细胞贴壁长满单层后用0.25%胰蛋白酶消化, 将培养液吹打混匀, 1000rpm×5min离心, 收集细胞用无菌PBS稀释, 在显微镜下计数后将浓度调整至1×106~7/ml, 取0.2ml细胞悬液接种于C57小鼠右侧腋后线皮下, 观察肿瘤的生长, 待体积达1000mm3左右时移植至小鼠右侧腋窝附近皮下。
2.2 造模与分组
选择生长良好、瘤体无破溃的荷瘤小鼠, 断颈法处死, 在超净工作台内完整剥离瘤体, 用无菌生理盐水清洗血渍, 清除中心坏死组织, 充分匀浆以制备瘤细胞悬液, 加生理盐水调整细胞悬液浓度至1×106~7/ml。每只小鼠取0.2ml悬液接种于右侧腋后线皮下, 构建荷瘤小鼠22只 (接种操作在30min内完成) 。10d后肿瘤体积达到100~200mm3时, 将建立好的小鼠模型随机分为吲哚美辛干预组和生理盐水对照组, 吲哚美辛干预组16只小鼠, 每天以吲哚美辛灌胃;生理盐水对照组6只, 每天以生理盐水灌胃。其中, 吲哚美辛干预组又分为高剂量组和低剂量组, 低剂量组每天以吲哚美辛2mg/kg灌胃, 高剂量组每天以吲哚美辛4mg/kg灌胃。观察各组小鼠的出瘤时间、给药前后瘤体的大小及变化, 同时观察给药前后各组小鼠的整体状况, 如饮食量、体重、皮肤色泽、反应灵敏度及活动能力等。
2.3 给药剂量与方法
分组当天开始灌胃给药, 每天1次, 连续16天 (给药剂量采用人与动物剂量换算法确定) 。吲哚美辛干预组:吲哚美辛分别按2mg/kg/d和4mg/kg/d灌胃给药;生理盐水对照组:生理盐水每天0.2ml/10g灌胃。
2.4 计算方法
每四天测量一次, 具体方法为用药前后用毫米游标卡尺测量肿瘤长、宽最大垂直直径, 并按如下公式计算肿瘤体积:肿瘤体积 (mm3) = (肿瘤长径×肿瘤短径2) /2, 同时绘制各组小鼠肿瘤生长曲线。用药结束后两天断颈法处死小鼠, 分离瘤体并称重, 通过下列公式计算两组肿瘤抑制率:肿瘤抑制率%= (1―吲哚美辛干预组平均瘤重/生理盐水对照组平均瘤重) ×100%。
2.5 统计学分析
所有计量资料用均数±标准差 (±s) 表示, 采用SPSS 17.0统计软件进行数据分析。采用两独立样本t检验进行比较分析。计数资料用Pearson卡方检验分析, P<0.05表示差异有统计学意义。
3 结果
3.1 一般情况观察
造模前各组小鼠一般状况良好, 生理盐水对照组与吲哚美辛干预组小鼠平均体重分别为 (17.67±1.48) g、 (17.72±0.89) g, 两组初始体重无统计学差异 (P>0.05) , 具有可比性。实验过程中动态观察发现生理盐水对照组小鼠进食、饮水情况基本正常, 但反应较为迟钝, 活动状况较植瘤前明显减少;吲哚美辛干预组小鼠反应较生理盐水对照组灵敏, 饮水、进食及活动等状况良好。实验完成时22只小鼠均存活, 但吲哚美辛组小鼠有粪便中带血及轻度腹泻的情况。
3.2 各组肿瘤体积动态变化
吲哚美辛干预组﹑生理盐水对照组C57小鼠Lewis肺癌移植瘤的体积变化情况见表1和图1。从表1和图1可以看出, 自用药后第4天起, 生理盐水对照组肿瘤体积大于吲哚美辛干预组, 且统计结果表明差异有显著性 (P<0.05) ;从表2及图2可以看出, 吲哚美辛低剂量组与高剂量组肿瘤体积比较无统计学差异 (P>0.05) 。
注:与生理盐水对照组比较, *P<0.05
注:吲哚美辛低剂量组与高剂量比较, P>0.05
3.3 肿瘤抑制率
吲哚美辛干预组与生理盐水对照组对C57小鼠Lewis肺癌移植瘤生长抑制作用, 结果见图3及表3。结果表明, 吲哚美辛干预组肿瘤瘤重较生理盐水对照组轻, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。吲哚美辛干预组的肿瘤平均抑制率为12.6%, 其中吲哚美辛低剂量组、吲哚美辛高剂量组的肿瘤平均抑制率分别为13.3%、11.9%。吲哚美辛高剂量组的肿瘤平均抑制率和肿瘤重量与低剂量组相比较, 差异均无统计学意义 (P>0.05) 。
注:与生理盐水对照组比较, *P<0.05
4 讨论
在专家、学者多年的不断努力之下, 恶性肿瘤的治疗已经取得了若大的进步, 并有了一定的疗效, 但对恶性肿瘤的整体治愈率依然存在一定的差异[3]。目前对于加强恶性肿瘤的临床和基础研究, 最现实的意义就是寻找有效的治疗方法和经济实用的治疗药物[4]。研究发现, 很多肿瘤的发生、发展与慢性炎症有着紧密的联系。炎症反应就像一把双刃剑, 除了可以引起抗肿瘤反应之外, 更多的是促进了肿瘤细胞的增殖、转移和肿瘤血管的生成。研究表明, 肿瘤细胞的增殖、坏死和凋亡可刺激局部微环境内的巨噬细胞释放炎症介质, 进而刺激内皮细胞产生趋化因子、细胞因子、黏附分子及生长因子等, 吸引更多的巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、肥大细胞和中性粒细胞的聚集, 其将释放各种生长因子、基质金属蛋白水解酶和趋化因子等以促进内皮细胞增殖、迁移, 并水解组织间质成分, 从而促进组织重建、血管生成、肿瘤生长和转移, 研究者称之为炎症依赖性或炎症性血管生成[5,6]。炎性血管生成的理论为抗肿瘤生成提供了新的策略, 使用天然或合成的抗炎药物来抑制肿瘤血管新生, 从而抑制肿瘤的生长和转移成为了一个可行的途径。
吲哚美辛 (IN) 又称消炎痛, 是NSAIDs中常见的一种药物。本研究初步探索了吲哚美辛对荷Lewis肺癌小鼠肿瘤抑制的作用。本研究表明, 应用吲哚美辛后, 吲哚美辛干预组与生理盐水对照组相比, 肿瘤体积均有不同程度的缩小, 且差异具有显著的统计学意义 (P<0.05) ;然而, 吲哚美辛低剂量组与高剂量组相比, 小鼠肿瘤体积无明显差异 (P>0.05) 。对肿瘤抑制率的统计分析发现, 吲哚美辛干预组的肿瘤抑制率与生理盐水对照组比较有显著的统计学意义 (P<0.05) ;而吲哚美辛低剂量组与高剂量组相比, 肿瘤抑制率无明显差异 (P>0.05) 。上述结果表明, 应用吲哚美辛对小鼠Lewis肺癌肿瘤生长有明显的抑制作用, 而吲哚美辛低剂量组与高剂量组其肿瘤抑制作用无明显的差异。研究认为, 本文所涉及的吲哚美辛用药剂量是由人类用药剂量换算而来的, 吲哚美辛对肿瘤的抑制作用是否存在剂量依赖性, 以及其抑制肿瘤的最佳剂量仍需进一步研究探索。
本研究从生活中极为常见的非甾体类抗炎药物吲哚美辛出发, 以荷Lewis肺癌小鼠为研究对象, 初步证实了吲哚美辛具有显著的抗肿瘤作用。本研究结果为日后进一步研究联合抗炎药物抗肿瘤机制, 特别是对研究抗肿瘤血管生成等方面提供了大量的参考信息。
参考文献
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移植性lewis肺癌 篇4
1 资料与方法
1.1 一般资料
1.1.1 实验动物及瘤株
健康C57BL/6J小鼠50只,雌性,鼠龄6～8周,体重(20±2)g,由江苏省实验动物中心提供;Lewis肺癌细胞株(Lewis Lung carcinoma,3LL),由南京市凯基生物制品有限公司提供。
1.1.2 主要试剂
TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司),环磷酰胺(CP)(上海制药厂)。
1.2 实验方法
1.2.1 动物模型的建立[1,2]
复苏Lewis肺癌瘤株,接种于3只C57BL/6小鼠右腋窝皮下以保种,每10 d转种一次,连续2次。正式实验时,选取生长良好的Lewis肺癌组织,剪碎匀浆,按照肿瘤质量(g)与0.9%氯化钠注射液(ml)1:3匀浆制成细胞悬液,经0.2%台盼兰染色后计数活细胞数>95%,调整细胞浓度为1×106个/ml,取健康C57BL/6小鼠50只,每只小鼠右腋皮下接种0.2 ml细胞悬液。
1.2.2 受试药物的制备
人参瓜蒌莪术汤由黄芪30 g,人参10 g,全瓜蒌20 g,莪术30 g,蜈蚣6 g,龙葵30 g组成,购于湖北省中医院,经鉴定合格。按常规方法制成2 g/ml,4℃保存备用。
1.2.3 分组及用药
将50只小鼠随机分为5组,每组10只,分别为模型对照组(NS组),环磷酰胺对照组(CP组),人参瓜蒌莪术汤高剂量组(RGEH组)、中剂量组(RGE组)、低剂量组(RGEL组)。小鼠依法造模。接种次日起,模型对照组每日灌胃生理盐水0.4ml/只。环磷酰胺对照组按照60 mg/(kg·d)的给药量(容量为0.2 ml/10 g体重),灌饲环磷酰胺。人参瓜蒌莪术汤低、中、高剂量组分别按照15 g/(kg·d)、30 g/(kg·d)、60g/(kg·d)的给药量(容量为0.2 ml/10 g体重),灌饲人参瓜蒌莪术汤。连续20 d,第21天脱颈处死动物,采取标本。
1.2.4 抑瘤率
取瘤组织称重,并计算抑瘤率。抑瘤率=(1-实验组的平均瘤重/空白组的平均瘤重)×100%。
1.2.5 TUNEL法原位检测瘤组织细胞凋亡
按照试剂盒说明书进行操作。显微镜观察:细胞中有棕黄色颗粒并呈现为凋亡形态学特征时为阳性凋亡细胞(凋亡的重要形态改变为细胞固缩、核碎裂、固缩染色质脱落、形成凋亡小体)。每张切片在普通光镜高倍视野中计数2000个细胞,并计数阳性表达的凋亡细胞数,凋亡细胞所占百分数即为细胞凋亡指数(Apoptotic Index,AI)。
1.3统计学处理
所有检测结果以均数±标准差()表示。采用SPSS 15.0统计软件包进行单因素方差分析。
2 结果
2.1 人参瓜蒌莪术汤对小鼠Lewis肺癌瘤重及抑制率的影响,见表1。
注：*P<0.01
人参瓜蒌莪术汤能明显抑制小鼠Lewis肺癌。空白对照组的瘤重最重。人参瓜蒌莪术汤中剂量组瘤重最轻。低、中、高剂量组及环磷酰胺组瘤重与空白对照组相比均明显降低(P<0.01)。中剂量组抑瘤率可达47.88%。在不同浓度组间比较,中剂量组的抑制作用显著强于低剂量组(P<0.01),但随药物浓度的进一步增加,抑制作用反而显著下降。
2.2 人参瓜蒌莪术汤对小鼠Lewis肺癌组织细胞凋亡的影响,见表2。
注:*P<0.05,**P<0.01;与空白组相比△P<0.05,△△P<0.01
人参瓜萎莪术汤低、中、高剂量组均能明显诱导瘤组织细胞凋亡,与空白对照组相比差异非常显著(P<0.01)。人参瓜蒌莪术汤中、高剂量组诱导细胞凋亡作用强于环磷酰胺阳性对照组(P<0.05,P<0.01)。随药物浓度的进一步增加,人参瓜蒌莪术汤诱导瘤组织细胞凋亡作用有所增强。高剂量组诱导细胞凋亡作用显著高于低剂量组(P<0.01)。但高、中剂量组作用差异不明显(P>0.05)。
3 讨论
细胞凋亡亦称程序性细胞死亡,是一种由基因控制的,为维持内环境稳定的一种细胞自主性死亡过程。肿瘤不仅是增殖和分化异常的疾病,也是凋亡异常的疾病,凋亡调控机制失常而发生凋亡受阻可导致癌前病变细胞、癌细胞克隆性扩增和癌细胞转移的发生。细胞凋亡对肿瘤的发生、发展起到了负调控作用。因此,细胞凋亡在肿瘤治疗中具有重要意义,以诱导肿瘤细胞凋亡为主的治疗方法已成为肿瘤治疗的新途径,也是评估抗肿瘤药物疗效的一项重要指标[3]。
TUNEL法,即脱氧核昔酸末端转移酶(TdT)介导的核诗酸(dUTP)缺口末端标记法,是一种分子生物学与免疫组织化学相结合原位检测凋亡细胞DNA片段的方法,因其灵敏可靠、简便易行而被广泛用于细胞凋亡的研究[4]。其原理是:凋亡过程中基因组DNA断裂可产生许多低分子量的DNA片断,出现DNA断端。用末端转移酶将带有生物素标记的dUTP与其断端连接,再用免疫组化显示,于普通显微镜下即能观察凋亡细胞[5]。
人参瓜蒌莪术汤是依据中医络脉络病理论[6,7],针对肺癌“脏虚络痹毒结”的病机[8],以补肺益气、祛痰化瘀、清热解毒、通络消瘤为基本大法,由黄芪、人参、全瓜蒌、莪术、蜈蚣、龙葵等组成的中药复方,经过长期的临床观察,该方对控制肺癌患者病灶、延长生存期具有良好的疗效,本研究初步证实人参瓜蒌莪术汤对小鼠Lewis肺癌具有明显抑制作用,并能明显提高瘤组织细胞凋亡指数,提示该复方抗肿瘤分子生物学机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关。
摘要：目的 探讨人参瓜蒌莪术汤对lewis肺癌模型小鼠的治疗作用及机制。方法 建立小鼠Lewis肺癌移植瘤模型,分为模型对照组(NS组),环磷酰胺对照组(CP组),人参瓜蒌莪术汤高剂量组(RGEH组)、中剂量组(RGE组)、低剂量组(RGEL组)。在计算抑瘤率的基础上,运用TUNEL法原位检测瘤组织细胞凋亡。结果 人参瓜蒌莪术汤对小鼠Lewis肺癌表现出明显的抑制作用,中剂量组效果最为明显,抑瘤率可达47.88%;人参瓜蒌莪术汤低、中、高剂量组均能明显诱导瘤组织细胞凋亡(P＜0.01)。中、高剂量组诱导细胞凋亡作用强于环磷酰胺阳性对照组(P＜0.05)。结论 人参瓜蒌莪术汤具有抑制小鼠Lewis肺癌生长的作用,其作用机制可能与诱导肿瘤组织细胞调亡有关。
关键词：人参瓜蒌莪术汤,肺癌,补肺通络解毒法,细胞凋亡
参考文献
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[7]邱幸凡.络脉络病理论及其临床意义.湖北中医杂志,2008,30 (6):22—23.
移植性lewis肺癌 篇5
1实验材料
1.1 实验药物
固本抑癌方 (煎剂) :由红豆杉 (粉末) 4g、黄芪20g、山药20g、薏米30g、党参15g等中药组成, 中药饮片均购自浙江省中医院中药房, 浸泡20分钟, 分别煎煮2次, 合并煎液, 浓缩, 使生药含量分别为0.7g/ml、1.4g/ml、2.8g/ml。阿霉素:浙江海正制药股份有限公司, 配制成1.0mg/ml的稀释液。
1.2 实验动物
C57BL小鼠, 雌雄各半, 体重 (20±2) g, 购自中国科学院上海实验动物中心, 合格证号:SCXK (沪) -2008-0005。荷Lewis肺癌的C57BL小鼠, 购自中国科学院上海实验动物中心, 合格证号:SCXK (沪) -2008-0005。
2实验方法
2.1 动物造模
将荷Lewis肺癌的C57BL小鼠脱颈处死, 置于75%乙醇浸泡15分钟, 于超净工作台中从小鼠皮下剥取瘤组织, 剔除纤维组织和坏死部分, 置于无菌器皿中, 将瘤组织剪成碎片, 于研磨器中加入4ml的生理盐水, 轻轻研磨成组织匀浆液, 200目滤网过滤, 制成单细胞悬液, 用吸管取少量悬液滴于玻璃计数板上, 台盼蓝染色, 双筒显微镜下计数瘤细胞, 生理盐水调整肿瘤细胞浓度为1×107/ml。用1ml的注射器取上述悬液0.2ml (含细胞数目2×106个) , 每只小鼠右前肢腋内皮下接种, 整个接种过程在30分钟内完成。
2.2 分组给药
确认C57BL小鼠皮下接种Lewis肺癌造模成功后, 取已成瘤者随机分为6组, 每组10只, 雌雄各5只。模型组:灌胃生理盐水;固本抑癌方低剂量组:灌胃低剂量 (14g/kg) 固本抑癌方中药煎剂;固本抑癌方中剂量组:灌胃中剂量 (28g/kg) 中药煎剂;固本抑癌方高剂量组:灌胃高剂量 (56g/kg) 中药煎剂;化疗组:腹腔注射阿霉素稀释液 (20mg/kg) ;化疗+中药组:灌胃中剂量 (28g/kg) 固本抑癌方中药煎剂, 同时腹腔注射阿霉素稀释液 (20mg/kg) 。灌胃每日1次, 腹腔注射隔日1次。共给药14天。
2.3 观察指标及测定
各组小鼠肿瘤组织kiss-1基因表达的检测:RT-PCR。电泳结果用Syngene凝胶成像分析系统进行扫描及灰度分析, 每一样本以待测指标和β-actin条带灰度的比值作为待测样本的基因相对表达量。
2.4 统计学处理
统计资料用SPSS13.0作统计学处理, 所有计量数据用均数±标准差表示, 多组间比较采用单因素方差分析, 组间两两比较采用LSD-t或Dunnetr's t检验, 各项指标间作直线相关分析。
3实验结果 见表1。
与模型组比较*P<0.05, **P<0.01;与化疗、中药各剂量组比较△P<0.05
4讨论
肿瘤转移是一个极其复杂的多步骤发展过程, 涉及到一系列肿瘤侵袭转移相关的溶解酶、生长因子等, 并涉及到机体免疫功能状况、肿瘤细胞生物学特性及其相互影响和相互作用, 整个过程受许多基因调控, 其中最重要的有肿瘤转移抑制基因kiss-1。kiss-1基因通过下列机制发挥抑制肿瘤转移的作用:①与其受体GPR54结合, 激活细胞内磷脂酶C (PKC) , 产生第二信使三磷酸肌醇 (IP3) 和甘油二酯 (DAG) , 二者促进钙离子释放和蛋白激酶C (PKC) 的活化[1]。而钙离子浓度增加可抑制肿瘤细胞的增殖, 诱导肿瘤细胞的分化和凋亡, 蛋白激酶C在调节细胞分化方面发挥重要作用;同时Kiss-1蛋白与其受体GPR54结合后可引起细胞局部黏附和纤维的大量形成, 从而抑制肿瘤转移;②研究者报道kiss-1基因对基质金属蛋白酶家族 (MMPs) 之一的MMP-9有负调节作用, 可减少细胞外基质的降解从而抑制癌细胞的浸润和转移[2];③通过Kiss-1蛋白上的SH-3配体参加转移级联反应, 从而拮抗SH-3在转移级联反应过程中发挥的细胞间信号传导和细胞骨架形成中的作用;④Ohtaki等[3]在体外实验证实kiss-1翻译的产物 (转移抑素) 可诱导细胞的过度黏附而有效地抑制黑色素瘤移行能力, 进而抑制其转移。
固本抑癌方是基于肿瘤转移理论, 结合现代药理研究, 根据祖国医学“肺为娇脏, 药宜轻平”的特点以及“金水相生, 培土生金”的治疗方法总结出来的经验方, 长期的临床总结显示, 该方对预防肺癌转移有很好的疗效。固本抑癌方以红豆杉为君, 味甘性平, 归肝肾二经, 《中华药海》记载具有滋肾通经功用;臣以黄芪、山药、薏米健脾益肾;佐以党参补肺健脾。纵观全方, 君臣佐使, 搭配合理, 药性缓和, 甘淡平补, 扶正兼有祛邪, 补而不助邪, 祛邪不伤正, 充分发挥正气的抗邪作用。现代药理实验证实:红豆杉提取物紫杉醇、巴卡亭III等通过影响微管的聚合和解聚的动力学变化, 抑制人黑色素瘤细胞的运动性以及增强细胞对明胶和层黏连蛋白的黏附性, 减少肿瘤细胞的血管增生, 发挥抗肿瘤浸润和转移的作用;对于迅速分裂的肿瘤细胞可冻结有丝分裂纺锤体, 从而使细胞有丝分裂停止在G期和M期, 阻止了癌细胞的快速繁殖直至死亡[4,5]。黄芪对T细胞功能及B淋巴细胞免疫功能具有明显的增强作用, 通过对机体的免疫调节, 诱导淋巴细胞产生IL-2和IFN, 直接或间接参与细胞因子网络和免疫系统的调控, 从而杀灭癌细胞或诱导某些肿瘤细胞凋亡[6];山药能增加血液白细胞和加强白细胞的吞噬作用, 能使小鼠的T细胞数量增加, 且能提高淋巴细胞转化功能, 增强免疫功能[7];薏苡仁的醇及丙酮等提取物对癌细胞具有明显抑制作用, 薏苡仁甲醇和α-单亚麻酯都具有抗肿瘤增效作用, 薏苡仁酯能明显提高荷瘤小鼠红细胞免疫功能[8];党参对机体具有“适应原”样作用, 既能增强机体对各种有害刺激的防御功能, 还可增强人体的物质代谢[9], 党参水煎醇沉剂对淋巴细胞增殖有明显刺激作用[10]。本文研究结果显示固本抑癌方中、高剂量可明显增加kiss-1的表达, 与化疗药合用, kiss-1的表达增加更显著。由此提示固本抑癌的作用机制之一是提高kiss-1表达。
摘要：目的:观察中药固本抑癌方对Lewis肺癌小鼠瘤组织kiss-1基因表达的影响。方法:以荷Lewis肺癌的近交系C57BL小鼠为模型, 分为模型对照组, 固本抑癌方低、中、高剂量组, 化疗组, 化疗+中药组, 分组给药14天后RT-PCR测定各组肿瘤细胞kiss-1基因的表达。结果:化疗+中药组, 化疗组, 以及中剂量、高剂量中药组均能提高肿瘤细胞kiss-1基因的表达 (P<0.05) , 且化疗+中药组与化疗组、中剂量组、高剂量组比较有统计学意义 (P<0.05) 。结论:固本抑癌方能提高瘤组织kiss-1基因的表达, 对肺癌转移具有一定的干扰抑制作用。
关键词：肺肿瘤/中医药疗法,@固本抑癌方/治疗应用,基因表达,小鼠
参考文献
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移植性lewis肺癌 篇6
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物及瘤株
健康C57BL/6J小鼠50只,雌性,鼠龄6~8周,体重(20±2)g,由江苏省实验动物中心提供;Lewis肺癌细胞株(Lewis lung cancer,3LL),由南京市凯基生物制品有限公司提供。
1.1.2 主要仪器与器材
超净工作台(7278825型,苏州净化设备有限公司),分析天平(BS110S型,美国SARTORIUS公司),自动酶标仪(WD-2102A型,北京市六一仪器厂)。
1.1.3 主要试剂
小鼠端粒酶ELISA试剂盒(德国Boehringer Mannheim公司),环磷酰胺(CP,上海制药厂)。
1.2 实验方法
1.2.1 动物模型的建立[4,5]
复苏Lewis肺癌瘤株,接种于3只C57BL/6 J小鼠右腋窝皮下以保种,每10天转种1次,连续2次。正式实验时,选取生长良好的Lewis肺癌组织,剪碎,匀浆,按照肿瘤重量(g)与生理盐水(ml)1∶3匀浆制成细胞悬液,经0.2%台盼蓝染色后计数活细胞数>95%,调整细胞浓度为1×106个/ml,取健康C57BL/6J小鼠50只,每只小鼠右腋皮下接种0.2 ml细胞悬液。
1.2.2 受试药物的制备
RGE由黄芪30 g、人参10 g、全瓜蒌20 g、莪术30 g、蜈蚣6 g、龙葵30 g组成,购于湖北省中医院,经鉴定合格。按常规方法制成2 g/ml,4℃保存备用。
1.2.3 分组及用药
将50只小鼠随机分为5组,每组10只,分别为模型对照组(NS组),环磷酰胺对照组(CP组),人参瓜蒌莪术汤高剂量组(RGEH组)、中剂量组(RGEM组)、低剂量组(RGEL组),小鼠依法造模。接种次日起,模型对照组每天以生理盐水灌胃,0.4 ml/只。环磷酰胺对照组按照60 mg/(kg·d的给药量(容量为0.2 ml/10 g体重),灌饲环磷酰胺。RGE低、中、高剂量组分别按照15 g/(kg·d)、30 g/(kg·d)、60 g/(kg·d)的给药量(容量为0.2 ml/10 g体重),灌饲RGE汤。连续20 d,第21天脱颈处死动物,采取标本。
1.2.4 抑瘤率
取瘤组织称重,并计算抑瘤率。抑瘤率=[1-(实验组的平均瘤重/空白组的平均瘤重)]×100%。
1.2.5 PCR-ELISA法检测瘤组织端粒酶活性
实验步骤按照试剂盒说明书进行,包括瘤组织中提取物的制备、考马斯亮蓝法检测样本蛋白浓度、端粒酶重复序列扩增(TRAP反应)、杂交及ELISA反应,使用酶标仪测定加入终止液后30 min内标本450 nm吸收值。
1.3 统计学处理
所有检测结果以均数±标准差(±s)表示,采用SPSS 15.0统计软件包进行单因素方差分析,P<0.05表示有显著性差异。
2 结果
2.1 RGE对小鼠Lewis肺癌瘤重及抑制率的影响
RGE低、中、高剂量组及环磷酰胺组瘤重与空白对照组相比,均明显降低(P<0.01)。中剂量组抑瘤率可达47.88%。在不同浓度组间比较,中剂量组的抑制作用显著强于低剂量组(P<0.01),但随药物浓度的进一步增加,抑制作用反而显著下降(P<0.01)。见表1。
与NS组比较,※※P<0.01
2.2 RGE对小鼠Lewis肺癌组织细胞端粒酶活性的影响
见表2。
与NS组比较,※※P<0.01;与CP组比较,★★P<0.01
RGE汤低、中、高剂量组均能明显降低瘤组织细胞端粒酶的活性(P<0.01)。中剂量组对端粒酶活性的抑制作用显著强于CP组(P<0.01)。中剂量组的抑制作用显著强于低剂量组(P<0.01),但随药物浓度的进一步增加,抑制作用并没有增强,反而明显下降(P<0.01)。
3 讨论
端粒酶是近年来肿瘤学领域的研究热点之一。端粒酶的过度活化可使染色体端粒长度处于一种动态平衡,细胞获得无限增殖的能力,即永生化,而导致肿瘤的发生[6,7]。许多研究表明端粒酶存在于85%~90%的肿瘤细胞中,几乎所有人肺癌细胞株及大多数肺癌组织中均有端粒酶的表达,而在正常的体细胞中则很少表达[8,9],端粒酶与恶性肿瘤之间有较高的相关性[10,11],端粒酶的激活可能是肿瘤形成和发展的共同途径,而端粒酶的抑制则可使表达此酶的恶性细胞恢复必死性,从而达到抗瘤的效果[12]。
本实验选用了国际公认的肺癌实验动物模型———小鼠Lewis肺癌移植瘤模型作为体内实验对象,该模型具有实验结果精确度高、易于重复的优点,在实验条件可控制的情况下,可以同一时间“制造”出一定数量、比较接近的带瘤动物,适宜于进行抗肿瘤药物筛选。而中医药学以整体思想体系为基础,重视宏观调控,中药复方具有多成分、多靶点的特点,体内实验也更能较全面地反映药物的作用。PCR-ELISA法是一种PCR定量方法,该方法通过在PCR扩增以后,在微孔板上借用酶联免疫吸附试验(ELISA)的原理,使用酶标抗体,进行固相杂交来实现定量,具有灵敏度高、特异性强、简便易行的特点,现已广泛应用于恶性肿瘤的端粒酶活性研究。
移植性lewis肺癌 篇7
1 材料与方法
1.1 药物与主要试剂
吉西他滨为江苏豪森药业股份有限公司产品,批号为140310;顺铂为江苏豪森药业股份有限公司产品,批号为150402;香菇多糖为江苏康缘药业股份有限公司产品,批号为150807;Lewis肺癌细胞购于中国科学院(上海)细胞库;胎牛血清为杭州四季青生物工程研究所产品;DMEM培养液购自上海一飞生物技术有限公司;0.25%胰酶为Hyclone公司产品;二甲基亚砜(DMSO)和噻唑蓝(MTT)试剂盒为Sigma公司产品。
1.2 细胞系及培养
在37°C、5%CO2的培养箱中,用含1%双抗(青霉素100 k U/L、链霉素100 k U/L),10%胎牛血清的DMEM培养基培养Lewis肺癌细胞株,2~3 d换液1次,倒置显微镜观察生长情况,当细胞密度达到70%~80%时用0.25%胰酶消化,以1∶3比例传代。取对数生长期细胞用于实验。
1.3 细胞增殖检测(MTT法)
取对数生长期的Lewis肺癌细胞调整浓度至5×104个细胞/m L,接种于96孔板,每孔180μL,置于37°C、5%CO2细胞培养箱中培养4 h,分为空白对照组(仅含培养基)、对照组(细胞+培养基)和各种不同浓度药物的实验组。实验组分单药组:将三种单药的7个不同浓度分别加在96孔板内,每孔加药量20μL,使吉西他滨的终浓度为0.5、1、2、5、8、10、12μg/m L,顺铂的终浓度为1、2、4、8、10、16、20μg/m L,香菇多糖的终浓度为50、100、150、200、250、300、400μg/m L;联合用药组分为吉西他滨+顺铂组、吉西他滨+顺铂+香菇多糖组,联合用药组中吉西他滨、顺铂和香菇多糖的终浓度与单用药组相同,按浓度梯度依次加药,每组设5个复孔,在CO2孵箱中培养24 h后吸去上清液,用PBS溶液漂洗3遍,加入200μL DMEM培养基,每孔中加0.5%MTT 20μL继续培养4 h后,将96孔板置于离心机中,1000 r/min离心5 min,小心吸取并弃上清液,加入180μL二甲基亚砜溶液充分溶解结晶,于自动酶标读数仪490 nm处测定各孔吸光度(A),并计抑制率及IC50[10]。实验重复3次,取平均值。
肿瘤细胞抑制率(IR)=[1-(给药组A值-空白组对照组A值)/(阴性对照组A值-空白对照组A值)]。联合用药对细胞增殖抑制率参照金氏公式判断[11]:Q=E(a+b)/(Ea+Eb-Ea×Eb),其中E(a+b)为两药合用的抑制率,Ea为A药单用的抑制率,Eb为B药单用的抑制率。0.85≤Q<1.15为两药相加作用(+),Q≥1.15为两药协同作用(++),0.55≤Q<0.85为两药拮抗作用(-),Q<0.55为明显拮抗作用(--)。
1.4 统计学方法
用SAS 9.3软件进行统计学分析,计量资料以均数±标准差(±s)表示,采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 三种药物单用对Lewis肺癌细胞株的抑制作用
实验结果表明吉西他滨、顺铂、香菇多糖三种药物单独使用对Lewis肺癌细胞均有不同程度的抑制作用,抑制率的大小呈剂量依赖性。其中吉西他滨和顺铂的作用较强,5μg/m L吉西他滨和10μg/m L顺铂对Lewis肺癌细胞24 h抑制率分别为(47.33±4.94)%和(45.31±2.06)%,而香菇多糖的作用相对较弱,需要较高的浓度才能产生明显的抑制率。吉西他滨、顺铂和香菇多糖作用24 h后对Lewis肺癌细胞株的IC50分别为4.40、10.97μg/m L和334.09μg/m L。见表1及图1~3。
2.2两种及三种药物联用对Lewis肺癌细胞株的抑制作用
吉西他滨和顺铂两药联用组作用24 h后对Lewis肺癌细胞株的抑制率明显高于单独用药组(P<0.05),通过计算Q值,低浓度的两组药物联用(吉西他滨浓度为0.5、1、2μg/m L,顺铂浓度为1、2、8μg/m L)表现为协同作用,当浓度增加后两组药物联用(吉西他滨浓度为5、8、10、12μg/m L,顺铂浓度为8、10、16、20μg/m L)表现为相加作用,见表2及图4。吉西他滨顺铂香菇多糖三药联用组中吉西他滨和顺铂的浓度与两药联用组一致,当香菇多糖的加药浓度为50、250、300、400μg/m L时,三药联用组的抑制率明显大于两药联用组(P<0.05),见表3及图4。
3 讨论
肺癌是我国常见恶性肿瘤,目前临床常用吉西他滨加顺铂(GP方案)治疗非小细胞肺癌,并取得较好疗效[12,13]。但化疗引起的不良反应较多,增加患者痛苦,导致患者生活质量下降,因此提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,减少化疗药物的不良反应有重要临床价值[14]。近年来,有研究人员将香菇多糖与吉西他滨和顺铂联用,用于对非小细胞肺癌的治疗,结果显示与GP方案比较,联用药物后有更好的疗效,能够明显改善患者生活质量,提高生存期,并可耐受其毒副作用[15,16]。
香菇多糖是从真菌香菇的子实体中分离到的β-1,3-葡聚糖,是一种具有抑制肿瘤和提高免疫功能的多糖类生物反应调节剂,通过非特异性激发激活宿主产生抗肿瘤免疫应答,以达到控制和杀灭肿瘤细胞的目的[17]。体外实验和临床报道显示其具有抗肿瘤和增强免疫功能的作用,目前临床应用已显示出了较好的疗效[18]。有体内实验采用MTT法考察香菇多糖对多种肿瘤细胞的细胞毒作用,研究结果表明香菇多糖对K-562、PC-3、Hep G2和A-549肿瘤细胞都具有一定的细胞毒性作用[19],因此可以认为香菇多糖以其对肿瘤细胞的毒性作用,杀伤抑制肿瘤细胞,达到治疗部分肿瘤的目的。本研究也得到了以上结论,实验结果提示吉西他滨、顺铂和香菇多糖对Lewis肺癌细胞均有一定的增殖抑制作用,两种或三种药物联用后对Lewis肺癌细胞株的抑制率显著增加。本研究还发现三药联用时,较低浓度的香菇多糖(100、150μg/m L)与吉西他滨和顺铂联用,对Lewis肺癌细胞的抑制作用没有显著性差异,而当香菇多糖的浓度增加至200μg/m L时,三药联用的抑制率明显高于吉西他滨和顺铂两组药物联用(P<0.05),且与250μg/m L香菇多糖联用后8μg/m L的吉西他滨和10μg/m L的顺铂能够达到10μg/m L的吉西他滨和16μg/m L的顺铂两药联用的效果,由此本研究认为香菇多糖抗肿瘤作用具有最佳量效关系,当与化疗药物联用时能够明显提高对肿瘤细胞的抑制率,且香菇多糖作为一种生物调节剂,可以通过免疫系统直接或间接增强机体的抗肿瘤效应[20]。
注:与单用药组比较,*P<0.05
注:与吉西他滨+顺铂组比较,*P<0.05
综上所述,三药联用具有明显的协同作用,可能与它们不同的抗肿瘤机制有关,三者联合应用可以通过互补而增强抗肿瘤效果。但由于香菇多糖属于中成药,含有多种成分且作用机制较为复杂,其机制在分子生物学方面尚未得到完全阐明,与常规化疗药物联用时的具体机制有待于进一步研究。
摘要：目的研究吉西他滨、顺铂、香菇多糖三种药物单独使用及联合使用对Lewis肺癌细胞株的增殖抑制作用。方法 分别使用不同浓度的吉西他滨(0.5、1、2、5、8、10、12μg/m L)、顺铂(1、2、4、8、10、16、20μg/m L)、香菇多糖(50、100、150、200、250、300、400μg/m L)单独及联合处理Lewis肺癌细胞株,24 h后MTT法测定细胞生长抑制作用,应用金氏公式进行联合用药分析。结果 吉西他滨、顺铂、香菇多糖对Lewis肺癌细胞均有不同程度的增殖抑制作用,两种或三种药物联用后对Lewis肺癌细胞株的抑制率显著增加,其中8μg/m L的吉西他滨与10μg/m L的顺铂和250μg/m L香菇多糖联用时,其抑制率近似于10μg/m L的吉西他滨和16μg/m L的顺铂两药联用;而当香菇多糖的浓度增加至200μg/m L时,三药联用的抑制率明显高于吉西他滨和顺铂两组药物联用(P<0.05)。结论 香菇多糖可增强吉西他滨和顺铂对Lewis肺癌细胞的增殖抑制作用,表现为协同效应,并且联用后能够减少常规化疗药物的用量。