放疗敏感性论文

放疗敏感性论文（精选3篇）

放疗敏感性论文 篇1

放射治疗已成为中晚期食管鳞癌的重要治疗方法之一, 但并不是所有食管癌患者均能取得较好的放疗效果。研究认为放射线诱导肿瘤细胞凋亡的强弱, 可以作为判定放射治疗敏感性的指标。Bcl-2基因是抑制细胞凋亡的重要基因之一, 笔者应用免疫组织化学方法检测Bcl-2基因在食管鳞癌中的表达, 以期明确其与食管鳞癌的放疗敏感性的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料

2008年4月至2011年2月南阳医专第一附属医院放疗科收治的诊断明确, 符合入选条件的食管鳞癌患者81例。其中男53例, 女28例;年龄34~72岁, 平均年龄49岁。病理类型均为鳞状细胞癌, 高分化7例, 中分化51例, 低分化23例;TNM分期Ⅰ期6例, Ⅱ期13例, Ⅲa41例, Ⅲb25例。

1.2 方法

放疗方法:所有患者前2/3疗程2.2Gy/次、2次/d、5次/周、共4周, 剂量达40Gy后缩野, 改为1.5Gy/次、2次/d、共2周, 总剂量为66~68Gy, 时间为37~40d, 两次间隔时间均≥6h。免疫组织化学:鼠抗Bcl-2单克隆抗体, 免疫组织化学SP检测试剂盒, DAB显色试剂盒, 均购自福建迈新生物技术公司。免疫组织化学染色严格按照SP试剂盒说明书进行, 用PBS代替一抗做阴性对照。

1.3 疗效评价

依据WHO肿瘤疗效评定标准[1], 完全缓解 (CR) :肿瘤病变完全消失, 部分缓解 (PR) :肿瘤体积减少一半以上, 没有新病变发生。无效 (NR) :无明显好转。

1.4 免疫组织化学结果判定

Bcl-2表达定位于肿瘤细胞膜或细胞浆, 呈棕黄色。无阳性表达为“-”, 阳性细胞<25%为“+”, 阳性细胞25~75为“++”, 阳性细胞>75%为“+++”。

1.5 统计学方法

采用SPSS13.0软件包进行列联表χ2检验, P<0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 Bcl-2在食管鳞癌中的表达

Bcl-2在食管鳞癌中的表达率为53.1% (43/81) 。Ki-67在不同分化程度及临床分期的食管鳞癌中表达差异均有统计学意义 (P<0.05, 表1) 。

2.2 Bcl-2在不同放疗敏感性食管癌中的表达

79例食管鳞癌患者, 经后程加速超分割放疗后, 完全缓解16例, 部分缓解55例, 无效10例。Bcl-2的表达程度与食管癌的放疗敏感性相关, 在不同放疗效果组的表达差异有统计学意义 (P<0.05, 表1) 。

3 讨论

Bcl-2基因是较早发现的凋亡抑制基因, 一旦被激活可导致Bcl-2表1 Bcl-2的表达蛋白的过度表达, 抑制细胞凋亡, 延长细胞生存周期, 导致肿瘤的发生。本研究发现, Bcl-2在食管鳞癌中的阳性率为53.1%, 表达程度在不同分化程度的肿瘤中表达差异有显著性意义, 在不同TNM分期的肿瘤中表达差异有显著性意义。提示Bcl-2的表达与食管鳞癌的发生、分化程度及TNM分期相关, 可作为判断预后的指标。

有研究发现, 放射线可通过产生氧自由基损伤DNA诱导细胞凋亡, 而Bcl-2可通过抗氧化途径阻止细胞凋亡, 其过度表达可能使肿瘤对放疗的敏感性降低[2]。本研究结果表明, Bcl-2在不同放疗效果的食管鳞癌组织中的表达程度不同, 放疗效果好的癌组织中Bcl-2低表达且表达强度较低, 放疗效果差的癌组织中Bcl-2高表达且表达强度较高, 差异有统计学意义。表明Bcl-2的表达与食管鳞癌放疗疗效呈负相关, 可依据表达程度预测放疗效果及调整放疗方法。

同时我们应该知道, 影响食管鳞癌放疗效果的因素是多方面的[3], 如果能更进一步研究Bcl-2及其它因素联合对食管鳞癌放疗的影响, 并进行针对处理可能有更重要的临床意义。

参考文献

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[3]刘晓航, 周良平.磁共振波谱成像在前列腺癌诊断和放疗中的研究进展[J].磁共振成像, 2010, 1 (2) :151-152.

放疗敏感性论文 篇2

1 早期快速反应基因5

IER5是慢动力早期反应基因家族成员之一,1999年最早由Williams等[8]发现并命名,其在众多动物中均有该基因的表达,人的IER5基因位于1号染色体1q25.3处,全长2369 bp,编号NM-016545,编码308个氨基酸,其蛋白质为核内蛋白。

1.1 IER5基因与细胞周期的关系

国内外多个研究组,通过外部刺激或施加化学物质后检测IER5基因表达水平的变化后发现,细胞中IER5基因表达均有增高,提示IER5基因参与了细胞周期的调节,影响细胞分裂与凋亡。Wu等[9]研究发现切除大鼠卵巢后,其子宫中的IER5基因表达降低,但对去势后大鼠注射雌二醇后,其子宫内的IER5基因表达水平出现再次升高。Okada等[10]在丙戊酸诱导神经管畸形的小鼠胚胎中,发现IER5基因表达升高。Ahn等[11]利用cDNA芯片技术对采集到的11例宫颈癌患者的肿瘤组织标本进行检测,发现有33个基因发生了2倍以上的上调,其中IER5基因上调倍数最高。Savitz等[12]在研究抑郁伴情绪障碍患者炎症和神经系统疾病相关基因差异表达中发现,其患者的血液中IER5基因表达水平上调。

基于以上结论,研究者们进一步围绕IER5基因在细胞增殖与凋亡的调控机制中所发挥的作用进行了假设与探究。Zeng等[13]在研究PSP诱导HL-60细胞的凋亡机制中发现,其凋亡过程可能是由上调I-ER5等早期转录因子介导的。Nakamura等[14]在研究IER5对抑制急性髓系白血病细胞增殖机制时发现,IER5过表达可使CDC25B表达减少,致使白血病祖细胞停滞于G2/M期。与此同时,该实验还发现,IER5降低CDC25B表达是通过其与CDC25B启动子结合后抑制转录因子NF-YB、p300来实现的。Ishikawa等[15]利用HeLa细胞系研究HSF1转录过程的影响因子时,其结果显示HSF1的转录激活需要IER5、PP2A/B的参与,且其过程为正反馈。该实验还提出,生长因子、热休克因子、电离辐射、化疗、细胞毒性和DNA损伤刺激诱导IER5的表达,是通过该基因对HSF1进行调控来实现的。但由于各研究实验间所研究对象和实验方法的不统一,IER5在不同类型细胞凋亡中的作用机制也不尽相同。对于IER5基因在宫颈癌细胞凋亡中的作用机制仍有待于进一步的探究。

1.2 IER5基因与辐射效应的关系

近年来,国内外研究者们已证实,IER5基因在多种恶性肿瘤细胞中与辐射效应关系密切。国内的Ding等[16,17]以及国外的Kis等[18]利用基因芯片筛选辐射敏感基因,双方均独立筛选到了同一个辐射诱导表达上调基因:IER5。其中Kis等[18]]利用基因芯片筛查技术对人纤维原细胞进行了IER5基因辐射效应关系的研究。他们发现当给予人纤维原细胞γ射线照射时,IER5基因表达出现上调,并且其表达与辐射剂量和时间之间具有时效和量效关系。由于IER5基因可能通过磷酸化和/或降解来发挥快速调节作用,所以把它归为DNA损伤反应组,表明其在细胞对有丝分裂信号和辐射做出反应的机制中发挥了至关重要的作用。

2 IER5基因与宫颈癌辐射敏感性的关系

虽然宫颈癌被认为是辐射敏感肿瘤,但是不同个体间的辐射敏感性却仍旧存在很大差异。因此,寻求影响宫颈癌辐射敏感性的作用机制成为了研究热点[19]。经过国内外学者的共同努力,对于辐射诱导IER5的转录调控机制已初步明朗。国内对于IER5基因增强辐射敏感性的研究主要集中于宫颈癌与肝癌,但其实验结果的准确性与可靠性仍有待于更多中心提供的RCT实验做进一步的验证。现主要围绕IER5基因对宫颈癌辐射敏感性的影响介绍如下:

丁库克等[20]用Real-time PCR技术分析60℃oγ射线照射正常人淋巴母细胞(AHH1)、宫颈癌细胞(HeLa)后IER5基因表达的影响。该实验分别从量效和时效的角度进行研究,从量效的角度看,两种细胞中IER5基因的相对表达量都随着剂量的增大表现出先增加后下降再上升的变化;从时效的角度看,AHH1细胞,对2 Gy的照射反应比10 Gy要快,而HeLa细胞,在两种照射剂量下的反应没有太大差异,且两种细胞都在接受照射2 h后出现基因表达的上升。该结果与之前Kis等[18]所得出的结果一致(即人纤维原细胞在经2 Gy辐射照射2 h后出现IER5基因表达的上升)。因此,笔者预测IER5基因有可能成为宫颈癌辐射损伤另一重要的分子生物学标志物,其对宫颈癌放疗的潜在应用价值不容忽视。

基于以上研究成果,有学者进一步利用小干扰RNA(siRNA)转染HeLa细胞和Real-time PCR测定IER5基因的抑制效果的方法,成功构建了特异性抑制IER5基因的IER5-siRNA-HeLa细胞系[21]。此后,Ding等[17]借助于IER5-siRNA-HeLa细胞系,进一步对IER5基因受辐射后影响细胞周期的机制进行了研究。对IER5敲低的IER5-siRNA-HeLa细胞系进行辐射结束后4 h,发现细胞开始于G2/M期发生阻滞,致使停留在S期的细胞比例增高。而S期细胞的辐射敏感性最低,因此,这一细胞周期的再分布使HeLa细胞对辐射的敏感性降低。反之,笔者推测提高IER5基因可增加宫颈癌细胞的辐射敏感性。

这项鼓舞人心的结果使得将IER5基因应用于增强宫颈癌放疗辐射敏感性成为可能,促使研究者们对宫颈癌细胞中辐射诱导IER5的转录调控机制做出进一步的探究,寻找转录调控机制的基因启动位点及作用通路。崔巍等[22]运用缺失体构建、定点突变、电泳迁移率实验(EMSA)及染色质免疫共沉淀(CHIP)等技术,以宫颈癌HeLa细胞为载体,对辐射诱导IER5的转录调控机制进行了研究,确定了IER5基因启动子区域、转录因子和结合位点,发现IER5基因启动子最可能的范围为-408～238 bp,其具有GCF和NFI两个转录因子。其中GCF的2个结合位点分别位于IER5基因启动子的-388～-382 bp和-274～-270 bp处;NFI的结合位点位于IER5基因启动子的-362～-357 bp。GCF对顺式作用元件起负性调节作用,NFI对顺式作用元件起正性调节作用。

辐射诱导IER5的转录调控机制已经初步得到证实,接下来,笔者将进一步研究如何通过给予宫颈癌放疗患者外源性特异性结合物,激活IER5基因转录通路,从而使癌细胞尽可能多地阻滞于辐射敏感期,即G2/M期,增强辐射敏感性,真正实现从实验室到临床应用的飞跃。

3 IER5联合宫颈癌放疗的研究前景与展望

近年来,随着医学分子生物学领域趋于成熟,放射生物学现已从细胞水平进入到大分子水平,从纯实验室过渡到临床初步应用阶段。对于治疗恶性肿瘤的研究也逐渐开始转向基因水平。基因治疗(包括修复替代体内细胞基因缺陷或通过导入某种基因使其过量表达而实现治疗疾病的目的)应运而生,并将可能成为继外科手术、放疗、化疗之后另一治疗恶性肿瘤新武器。目前,基因放疗(genetic radiotherapy)[23]的治疗模式(即先以基因治疗的方法靶向处理肿瘤细胞,增强其辐射敏感性后再联合放疗)已经成为了研究热点,并且越来越多的基因增敏剂逐渐进入了临床试验阶段[24]。

放疗敏感性论文 篇3

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2008年1月~2010年1月于我科行鼻咽部活体组织病理检查确诊为鼻咽癌,且未进行过放化疗及其他特殊治疗的患者,共计78例,6例患者因中途出院或其他原因未完成足够剂量的放射治疗,予以剔除,留取病理检查时所取标本,共计72例作为实验组。对照组取病理确诊为鼻咽部黏膜慢性炎症的标本,共计20例。所有患者均签署知情同意书。

实验组中男性43例,女性29例,年龄14~78岁,中位年龄为47.8岁,组织学类型中低分化鳞癌67例,其余类型5例。按照鼻咽癌2008年广州分期标准[3]分期,Ⅰ期12例、Ⅱ期25例、Ⅲ期27例、Ⅳ期8例。所有患者均于我院肿瘤科住院完成全程放射治疗(鼻咽部DT70-74Gy/35-37次,颈部淋巴结转移灶DT70-76Gy/35-38次),治疗完成3个月后复查颈部和鼻咽部癌肿消退情况,进行放疗后近期疗效评价:完全缓解(CR)共42例:肿瘤消失,鼻咽软组织基本恢复正常;部分缓解(PR)共17例,肿瘤消失≥50.0%,结构大部分恢复正常;微效(MR)共10例,肿瘤缩小<50.0%,结构大部分未正常;无变化(NC)共2例,肿瘤无明显缩小;进展(PD)肿瘤增大,共1例。癌肿消退50.0%以上,即CR和PR认为鼻咽癌放疗敏感者,共58例;癌肿消退小于50.0%,即MR、NC和PD为放疗不敏感者,共14例。

1.2 主要试剂

鼠抗人COX-2单克隆抗体工作液、鼠抗人Survivin单克隆抗体工作液均购自福州迈新生物技术开发有限公司。二抗及相应SP染色试剂盒购自北京中山生物技术公司。

1.3 免疫组化方法检测COX-2和Survivin

COX-2和Survivin的检测:采用SP法染色(参照迈新公司提供的SP试剂盒说明书进行免疫组化染色)。COX-2以胞质、Survivin以细胞核和(或)细胞质出现棕黄颗粒为阳性细胞。以福州迈新公司提供的已知COX-2阳性的结肠癌标本和Survivin阳性的淋巴结转移癌为阳性对照,PBS代替一抗作为阴性对照。由病理科专家在未知患者资料的情况下进行结果读取,选择5个高倍视野(×400),每个视野计数100个细胞。COX-2、Survivin阳性结果判定:以细胞内特定部位出现棕黄色或棕褐色颗粒,染色强度高于背景的非特异染色判定为阳性细胞。阳性细胞率=阳性细胞数/100×100%,≤5%为0分,≤25%为1分,≤50%为2分,>50%为3分。按染色强度记分:基本不着色为0分,染色呈淡黄色为1分,黄色为2分,棕黄色或棕褐色为3分。以阳性细胞百分率和染色强度两项记分相加综合评价COX-2、Survivin在鼻咽组织中的表达,以二者之和≥3分为阳性。

1.4 统计学处理

所有数据处理采用SPSS11.0软件进行。两组率的差别用卡方检验,以P<0.05为差异有显著性。同时计算COX-2、Survivin及联合COX-2和Survivin作为分子标志在预测鼻咽癌放疗敏感性中的灵敏度、特异度、Youden指数、准确度、阳性预测值和阴性预测值。

2 结果

2.1 COX-2、Survivin的表达

72例鼻咽癌组织中,COX-2阳性表达率为70.8%(51/72),放疗敏感组阳性75.9%(44/58),放疗不敏感组阳性率50.0%(7/14),对照组阳性率25.0%(5/20),差异具有显著性(P=0.000);切片上染色主要分布于癌细胞浸润灶、鼻咽癌角化珠和坏死灶周围,细胞染色主要位于癌细胞的细胞质,棕黄色颗粒弥漫性分布于整个胞质或沿核膜周边呈线性状分布。Survivin阳性表达率为73.6%(53/72),放疗敏感组阳性率77.6%(45/58),放疗不敏感组阳性57.1%(8/14),鼻咽炎组中无阳性表达,差异具有显著性(P=0.000);阳性表达信号位于肿瘤细胞核和细胞浆。对同一患者组织切片,COX-2和Survivin均为阳性表达率为表达率58.3%(42/72),放疗敏感组阳性率72.4%(42/58),放疗不敏感组阳性率14.3%(2/14),差异具有显著性(P=0.000)。

2.2 对COX-2和survivin作为预测鼻咽癌放疗敏感性分子标志的有效性评估

灵敏度为分子标记物正确预测该鼻咽癌患者对放疗敏感的能力,特异度为预测判断放疗不敏感的能力,Youden指数为正确预测鼻咽癌敏感性的真实性,指数越大,真实性越可靠;阳性预测值指阳性表达时,放疗敏感的可能性;阴性预测值指阴性表达时,放疗不敏感的可能性。

COX-2预测鼻咽癌放疗敏感性的灵敏度为75.9%(44/58),特异度为57.1%(8/14),Youden指数为0.33,准确度为72.2%(52/72),阳性预测值和阴性预测值分别为88.0%(44/50)和36.4%(8/22)。Survivin作为预测鼻咽癌放疗敏感性分子标志时的灵敏度为77.6%(45/58),特异度为42.9%(6/14),Youden指数为0.21,准确度为69.4%(50/72),阳性预测值和阴性预测值分别为83.3%(45/54)及33.3%(6/18)。联合COX-2和Survivin作为预测鼻咽癌放疗敏感性分子标志时的灵敏度为72.4%(42/58),特异度为85.7%(12/14),Youden指数为0.58,符合率(准确度)为72.2%(52/72),阳性预测值和阴性预测值分别为77.8%(42/54)及66.7%(12/18),见附表。

3 讨论

鼻咽癌大多对放射治疗较为敏感,治疗以放疗为主,同步放疗加化疗或靶向治疗可提高疗效,但由于放射量目前还难以达到个体化目标,鼻咽癌总体5年生存率仍徘徊在50.0%~60.0%。为了提高鼻咽癌的生存时间和生存质量,除了实现早期诊断,更应该依据患者肿瘤本身对射线或化疗药物敏感性的不同而制定个体化治疗方案,以提高整体治疗效果,减少副作用。因此,寻找一种快速、准确、灵敏的预测不同个体鼻咽癌患者对放疗是否敏感的指标,以根据其敏感性不同而采取不同的治疗方案的调整是十分必要的。

COX-2在肿瘤致病机制中被日渐广泛的关注,越来越多的研究提示COX-2在鼻咽癌的发生发展中发挥了独特的作用[4]。COX-2是一型诱导酶,在正常组织中无表达,只有在细胞因子、内毒素、白介素、肿瘤促进剂及癌基因等促分裂剂的刺激下才能在某些细胞内迅速表达,通过促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,促进肿瘤新生血管形成等机制参与多种肿瘤的发生和发展过程[5]。PENG等[6]的研究结果表明:COX-2的阳性表达率和鼻咽癌的的浸润程度及区域淋巴结转移有关。Survivin属于凋亡抑制蛋白家族的一个重要成员,它可以通过调节细胞分裂和细胞凋亡祈祷促进肿瘤发生和发展的作用。已有文献报道肿瘤患者中Survivin表达的增加是预后不良的重要指标,包括短生存期,高复发风险、局部淋巴结侵袭和转移[7,8]。也有研究[9]报道Survivin高表达者较无淋巴结转移者多,且Survivin高表达的鼻咽癌患者5年总生存率降低,预后较差,提示是预后不良的因素之一。

本研究结果表明,COX-2在鼻咽癌放疗敏感及不敏感组中均有表达,且高于鼻咽炎组,说明COX-2可能参与了鼻咽癌的发生;COX-2作为预测鼻咽癌放疗敏感性分子标志时的灵敏度为70.8%,特异度仅为57.1%。Survivin在鼻咽癌放疗敏感组阳性表达率明显的高表达,明显高于放疗不敏感组,对其能否作为鼻咽癌放疗敏感性预测的候选分子标志进行有效性评估发现,其敏感度和特异度分别为77.6%和42.9%,而Youden指数为0.21。因此,COX-2及Survivin在一定程度上为评价鼻咽癌的放射敏感性提供一种简单有效的分析依据。但是,进行分子标记筛查的主要目的是可以筛选出能够有效预测放疗不敏感的患者,通过对预测放疗为不敏感患者,加大放射量或辅以化疗,可以提高疗效,但是相对严重副反应的风险及患者的花费也在增加,所以对于筛选的分子指标需具有较高的特异性,单独检测COX-2及Survivin特异度均不高,单独应用一个分子标记具有一定的局限性。本研究联合检测Survivin和COX-2,Youden指数为0.58,特异性也从57.1%、42.9%提高到85.7%。由此可见,联合检测COX-2和Survivin可以较好的预测鼻咽癌患者的疗效,指导临床工作。

由于鼻咽癌是一种多基因疾病,利用单一或数个的标志作为判断放疗敏感性时往往受其他多个因素影响,如临床分期、体质和依从性等,本研究的初步实验结果由于选取病例随访时间仍不长,其远期预后资料判断仍未完成等因素,还不能真正达到临床实践的要求,但却为进一步的研究提出了有意义的线索,进一步的研究中,应用基因芯片、蛋白质芯片或蛋白质组学技术有目的地筛选更多有潜在临床价值的标志,获得更多的灵敏度和特异度都高的分子标志,建立临床实用的鼻咽癌早期诊断和放射敏感性预测的方法,实现鼻咽癌的早期诊断及个体化治疗。

参考文献

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