总生物碱

总生物碱（精选12篇）

总生物碱 篇1

伊贝母 (Fritillaria pallidiflora Schrenk) 系百合科贝母属伊贝母的干燥鳞茎, 是药用贝母之一[1]。主要分布于新疆伊犁河流域, 主产于伊宁、昭苏、霍城、尼勒克、博乐和精河等地, 目前在新疆伊犁、塔城、昌吉、石河子以及北京、河北、山东、甘肃、内蒙古、陕西、河南和吉林等省都有引种栽培。其鳞茎入药, 味苦、性寒, 有清热润肺、化痰止咳和散结等功能, 用于痰热咳嗽、咯痰带血和瘰疬疮疡肿毒[2]。由于伊贝母产量高、生物碱的含量在同类贝母中相对较高、抗病力强和药材价格低廉, 特别是其祛痰和镇咳等生理活性较川贝母略强, 近年来倍受人们的关注[3]。

生物碱是含负氧化态氮原子的环状化合物[4], 广泛存在于生物有机体中, 适量的生物碱对人体具有镇痛、消炎、降压、抑菌、抗氧化及抗癌等多种生理活性[5], 本课题旨在对伊贝母总生物碱的提取及抗氧化活性和抑菌活性的研究, 为伊贝母的开发利用提供依据。

1 试验材料与方法

1.1 试验材料

伊贝母Fritillaria pallidiflora Schrenk, 本药材购自兰州黄河药材市场, 由兰州理工大学生命科学与工程学院杨林教授鉴定。乳链球菌 (Streptococcus agalactiae) 、大肠杆菌 (Escherichia coli) 、地衣芽孢杆菌 (Bnfillu licheniformis) 、肺炎克雷伯 (Pneumonia crayresearch) 、金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus) 和绿脓杆菌 (Pseudomonas aeruginosa) , 兰州理工大学生命科学与工程学院提供。

1.2 试验仪器与试剂

ALC-110.4电子天平, 北京赛多利斯仪器系统有限公司;HH-2数显恒温水浴锅, 江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司;RE-5286A型旋转蒸发仪, 上海亚荣生化仪器厂;UV-9200紫外可见分光光度仪, 北京瑞利分析仪器公司;HPX-9082 MBE型恒温生化培养箱, 上海博迅实业有限公司医疗设备厂;SW-CJ-1F净化工作台, 苏净集团苏州安泰空气技术有限公司。

葡萄糖、乙醇、石油醚、乙醚、氨水、氯仿、硫酸、氢氧化钠、盐酸、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、水杨酸、双氧水、硫酸亚铁、六氰合铁酸钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、冰醋酸和氯化铁, 试剂均为分析纯;DPPH (Sigma公司) , 细菌培养基:牛肉膏0.3g, 蛋白胨1.0g, 琼脂粉1.5g, 氯化钠0.5g, 水100m L, p H值为7.0~7.2, 完全溶解后装入三角瓶中, 加塞并在棉塞外包一层报纸并用麻绳捆扎, 放入杀菌锅内121℃灭菌30min[5]。

1.3 伊贝母总生物碱的提取

1.3.1 提取

称取伊贝母干燥粉末, 乙醇水浴回流提取2次, 每次2h, 抽滤, 合并滤液, 减压回收乙醇得总浸膏, 加入蒸馏水悬浮总浸膏, 用2mol/L HCl调p H值至2~3, 静置过夜, 抽滤以除去鞣质及鞣酸盐类杂质, 滤液用1mol/L Na OH调p H值至10~11, 碱液用氯仿萃取3次, 合并萃取液, 真空干燥即得伊贝母总生物碱, 待用。

1.3.2 伊贝母总生物碱含量测定[6]

伊贝母总生物碱含量的测定采用两相滴定法。精密称取样品粉末约2g, 置具塞锥形瓶中, 以18%氨水2m L润湿1h, 加氯仿30m L, 超声提取3h, 提取2次, 过滤, 以相同溶剂15m L分3次洗涤残渣和滤纸, 合并滤液于锥形瓶中, 蒸干, 加50m L乙醇使其全部溶解, 蒸干, 残渣加乙醚5m L使溶解。精密加入硫酸 (0.01mol/L) 10m L, 摇匀, 加热使残渣完全溶解并除尽乙醚, 冷却。加蒸馏水15m L与甲基红指示剂2滴, 用氢氧化钠 (0.02mol/L) 滴定至黄色即为终点, 按下式计算总生物碱 (以西贝素计) 的含量。

1.4 抗氧化活性的测定

1.4.1 清除DPPH自由基活性的测定[7~8]

采用比色法测定对DPPH·的清除作用, 在同一具塞试管中加入2m L DPPH溶液 (0.025mg/m L) 和2m L不同浓度样品溶液, 摇匀, 室温避光静置30min, 用无水乙醇作参比溶液, 在517nm处测量吸光度值, 计算清除率, 得到清除率在一定浓度范围的回归方程, 通过线性方程计算IC50 (DPPH清除率为50%时所对应的样液浓度) 。配制不同浓度的VC溶液做为对照。样品对DPPH·的清除率 (E) 按如下公式计算:

式中:E为样液在DPPH·体系中的自由基清除率, %;A样品为加入样液后DPPH·溶液的吸光值;A对照为无水乙醇和样液混合后的吸光值:A空白为未加样液的DPPH·溶液的吸光值。

1.4.2清除羟基自由基活性的测定[9~10]

在10m L比色管中依次加入6mmol/L的硫酸亚铁水溶液1m L, 6mmol/L的水杨酸-乙醇溶1m L后, 将不同浓度的样液1m L分别加入比色管中, 然后加入0.1%的过氧化氢1m L, 用蒸馏水定容至刻度, 摇匀后于37℃水浴30min, 测510nm处的吸光度值, 计算清除率, 得到清除率在一定浓度范围的回归方程, 通过线性方程计算IC50 (羟基自由基清除率为50%时所对应的样液浓度) 。配制不同浓度的VC溶液做为对照。按下式计算清除率:

式中:E为表示清除率;A空白为表示空白对照液吸光值, 即只加入硫酸亚铁、水杨酸-乙醇和双氧水, 未加试样的吸光值;A样品为表示加入硫酸亚铁、水杨酸-乙醇、双氧水和加入相同体积的试样后的吸光值;A对照为表示加入硫酸亚铁、水杨酸-乙醇和加入相同体积的试样, 未加双氧水引发反应的吸光值, 即本底吸光值, 在计算中予以扣除。

1.4.3 还原力的测定[11]

分别精密吸取不同浓度的样液2.5m L于试管中, 加入p H值6.6的磷酸盐缓冲溶液2.5m L和1.0%的六氰合铁酸钾2.5m L, 混匀, 50℃恒温20min, 后快速冷却, 加入10%的乙酸2.5m L (如有沉淀离心除去) , 加10m L蒸馏水和0.1%的氯化铁2.5m L, 充分混匀静置10min, 700nm下测吸光值, 吸光值越大, 还原力越强。配制不同浓度的VC溶液做为对照。

1.5 伊贝母多糖的抑菌试验

1.5.1 培养基的制备

无菌条件下将适量培养基置于已灭菌的培养皿内至凝固, 每个皿的量相等。

1.5.2 菌种活化

无菌条件下, 将供试菌种接种于相应的试管斜面培养基上, 37℃恒温培养箱中培养24h后, 0~4℃冷藏室冷却备用。

1.5.3 菌液和滤纸片的制备[12]

将上述活化后的菌种用无菌生理盐水分别将其制成浓度为106~107cfu/m L菌液备用。选择吸水性强的滤纸, 用打孔器打成直径为6mm的圆形滤纸片, 灭菌后, 分别置于伊贝母多糖试液、无菌水和乙醇试剂中浸泡6h, 取出晾干备用。

1.5.3 抑菌效果的测定

吸取1.5m L的菌液平板涂布, 做成含菌平板。按无菌操作的要求将烘干并含有伊贝母多糖的滤纸片放入培养基表面相应位置, 每皿放5片, 其中3片为样品, 1片为无菌生理盐水做空白对照, 1片为阳性对照, 阳性药为青霉素和链球霉素。置于恒温培养箱中培养细菌36~37℃, 取出后测定抑菌圈直径, 比较抑菌效果。

2 结果与分析

2.1 伊贝母生物碱的含量测定

按1.3.2的方法测得生物碱的含量, 见表1。

由表1可知:伊贝母多糖的平均含量为0.23%。

2.2 伊贝母生物碱的抗氧化活性

2.2.1 伊贝母生物碱对羟基自由基的清除作用

伊贝母生物碱与VC对羟基自由基清除作用的试验结果如图1所示, 在0.10~0.35mg/m L有效浓度内, 随着伊贝母生物碱浓度的增加, 清除羟基自由基的作用逐渐增强。

由表2可知:伊贝母生物碱的IC50大于VC的IC50, 说明其对羟基自由基的清除能力比VC弱, 即伊贝母生物碱的抗氧化性小于VC。

2.2.2 伊贝母生物碱对DPPH自由基的清除作用

伊贝母生物碱与VC对DPPH自由基清除作用的试验结果如图2所示, 在0.03~0.15mg/m L有效浓度内, 随着伊贝母生物碱浓度的增加, 清除DPPH自由基的作用逐渐增强。

由表3可知:伊贝母生物碱的IC50大于VC的IC50, 说明其对DPPH自由基的清除能力比VC弱, 即伊贝母生物碱的抗氧化性小于VC。

2.2.3 伊贝母生物碱的还原力

试验结果表明伊贝母生物碱的还原能力不明显。

2.3 伊贝母生物碱的抑菌效果

由表4可知:伊贝母生物碱溶液对无乳链球菌、地衣芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌有抑菌作用, 而对大肠杆菌和肺炎克雷伯的抑菌作用不明显。

注:-表示无抑菌圈;+表示抑菌圈不明显;阳性对照无乳链球菌、地衣芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌用青霉素, 大肠杆菌、肺炎克雷伯和绿脓杆菌为革兰氏阴性菌用链球霉素。

注:-表示无抑菌圈;++表示有抑菌圈。

由表5可知:伊贝母生物碱对无乳链球菌、地衣芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌的最小抑菌浓度分别为5、5、10和10mg/m L。

3 结论

采用酸提碱沉的方法提取伊贝母生物碱, 测得生物碱的含量为0.23%。伊贝母生物碱对DPPH自由基和羟基自由基具有良好的清除能力, 且随着生物碱浓度的增大清除能力增强, 两者之间存在着量效关系;但还原能力不明显。同时伊贝母生物碱溶液对无乳链球菌、地衣芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌有抑菌作用, 且最小抑菌浓度分别为5、5、10和10mg/m L, 而对大肠杆菌、肺炎克雷伯抑菌作用不明显。

试验证明了伊贝母中含有一定量的生物碱, 并具有一定的抗氧化活性和抑菌活性, 这对于对伊贝母进行深加工、开发高附加值的保健品及药品, 具有一定的理论指导意义。

摘要：研究了伊贝母总生物碱的提取及体外抗氧化活性和抑菌活性。采用酸提碱沉的方法从伊贝母中提取总生物碱, 以VC为标样, 采用分光光度法测定了伊贝母生物碱溶液的总还原力, 羟基自由基 (·OH) 和DPPH自由基 (DPPH·) 的清除作用, 并采用滤纸片法测定了伊贝母生物碱的抑菌活性。结果表明:伊贝母总生物碱对羟基自由基 (·OH) 和DPPH自由基 (DPPH·) 具有良好的清除能力, 活性大小与生物碱的浓度呈明显的线性关系, 但还原能力不明显。伊贝母生物碱溶液对无乳链球菌、地衣芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌有抑菌作用, 且最小抑菌浓度 (MIC) 分别为5、5、10和10mg/mL, 而对大肠杆菌、肺炎克雷伯抑菌作用不明显。

关键词：伊贝母,总生物碱,提取,抗氧化活性,抑菌活性

参考文献

[1]黄恩盔, 李超生, 徐东铭.伊贝母生物碱成分的研究[J].中国中药杂志, 1990, 15 (9) :39-40.

[2]刘筱虹, 王佛华.伊贝母研究概况[J].河北中医药学报, 1997, 12 (4) :35-36.

[3]张鹏, 徐仿周, 吴继洲.贝母及其复方制剂中生物碱含量测定方法[J].医药导报, 2004, 23 (4) :272-273.

[4]吴立军.天然药物化学[M].北京:人民卫生出版社, 2006:352.

[5]吴丹, 巩江, 高昂, 等.食物中常见生物碱研究进展[J].宁夏农林科技, 2011, 52 (3) :63-64, 66.

[6]王曙, 徐小平, 李涛.川贝母与其他贝母类药材总生物碱和总皂苷的含量测定与比较[J].中国中药杂志, 2002, 27 (5) :342-344.

[7]张志国, 陈锦屏, 邵秀芝.红枣核类黄酮清除DPPH自由基活性研究[J].食品科学, 2007, 28 (2) :67-70.

[8]崔珏, 李超, 王乃馨, 等.大叶金花草总黄酮的抗氧化活性研究[J].中国食品添加剂, 2011, 4 (9) :117-120.

[9]谭萍, 方玉梅, 王毅红, 等.苦荞种子黄酮类化合物的抗氧化作用[J].贵州农业科学, 2009 (3) :30-32.

[10]Graf E., Eaton J.W..Antioxidant functions of phytic acid[J].Free Rad ical Bio Med, 1990 (8) :61-69.

[11]李利华.百合多糖的含量测定及抗氧化活性研究[J].湖北农业科学, 2011, 50 (14) :2954-2957.

[12]包怡红, 秦蕾.沙棘叶多糖的超声波辅助提取及抑菌作用研究[J].食品与发酵工业, 2010, 36 (5) :161-164.

总生物碱 篇2

初中生物总复习提纲

总复习一（七年级上）第一单元生物和生物圈

第二单元 生物和细胞

第三单元 生物圈中的绿色植物

总复习二(七年级下)第四单元 生物圈中的人

总复习三(八年级上)第五单元 生物圈中的其它生物

总复习四(八年级下)第七单元 生物圈中生命的延续和发展

第八单元 健康地生活

荐高中生物必修一教案[1](精选范文)荐生物的分类教案(精选范文)荐荐高初中二

生生

物物

全下

套册

教教

案

案

高考生物一轮总复习教学反思 篇3

【关键词】配子;基因;概率

一、某亲本产生的配子类型

有关某亲本产生的配子种类数和具体的基因型（不考虑变异），要点如下：

1.一个性原细胞和一个个体实际能产生的配子种类不同。

2.一个不同性别的性原细胞实际能产生的配子种类不同。

3.一个性原细胞可能产生的和实际能产生的配子种类不同。

4.注意配子基因型之间的连接符：如一个精原细胞可能产生的配子基因型可以写成“YR、Yr、yR、yr”、“YR和Yr和yR和yr”，不能写成“YR或Yr或yR或yr”;一个卵原细胞实际能产生的配子基因型可以写成“YR或Yr或yR或yr”，而不能写成“YR、Yr、yR、yr”、“YR和Yr和yR和yr”。

5.若某个体含n对等位基因（不是n对同源染色体），则这个个体的一个性原细胞实际能产生的配子有1种或2种，而一个性原细胞可能产生的配子、这个个体可能产生的和实际能产生的配子都为2n种。

二、当F2中出现9∶3∶3∶1或其变式试题时

具有两对等位基因的个体自交，只有在每对基因分别决定一对相对性状的情况下，后代才会出现9∶3∶3∶1的性状分离比。如果一对基因决定两对相对性状，或者一对相对性状受到两对基因的控制或影响，后代的性状分离比将是9∶3∶3∶1的变式，如9∶7、9∶3∶4、12∶3∶1、9∶6∶1、1∶4∶6∶4∶1等。

1.牢记两对亲本组合

F1双杂合个体自交，后代有4种表现型，9种基因型，16种组合方式。而亲本组合可以为“双显性纯合个体×双隐性纯合个体”，也可以为两种单显性纯合个体杂交。解题时，一定要根据F2的表现型及比例，判断出亲本属于哪一种杂交组合。

2.利用9种基因型求后代的表现型及比例

面对9∶3∶3∶1的变式试题，如果按照“已知后代表现型，推出后代的基因型种类，再判断表现型及比例”的思路解题，往往会漏写掉个别基因型的情况，导致分析不全的悲剧发生，而如果直接写出9种基因型及概率，不仅可以快速得出表现型及比例，还可以避免残缺不全的答案出现。

3.牢记结论——“亲本具有两对等位基因”

当某亲本自交后代出现9∶3∶3∶1或其变式时，该亲本一定是具有两对等位基因的个体，但不仅限于只有两对基因。牢记此结论，可使复杂的题目简单化。

三、有关基因的位置判断

面对设计方案来判断基因的位置这类题，学生往往无从下笔，即使看了答案也是一头雾水。判断多对基因是否位于同一对同源染色体上，往往先杂交再自交或测交;判断性状是受核基因控制还是受质基因控制，可以设计正反交实验;而比较困难的是判断基因在常染色体上还是在X染色体上，在X、Y染色体的同源区段还是仅位于X染色体上，解决这类题目最直接的思路就是引导学生想方设法去制造“隐性雌×纯合显性雄”这一杂交组合。

四、自交与自由交配

1.概率的计算

自交强调的是相同基因型个体之间的交配，自由交配强调的是群体中所有个体进行随机交配。以基因型为2/3AA、1/3Aa的植物群体为例，两亲本的概率都不为1，自由交配时，需要将两个亲本出现的概率都考虑进去相乘，而在自交中，亲本不为1的概率只能考虑一次（即相乘一次），这是因为自交中父本和母本都是同一植株，例如父本的基因型是Aa，则母本的基因型一定也是Aa。

2.自由交配解法的选择

自由交配的试题有三种解法，以基因型为2/3AA、1/3Aa的动物群体为例：

解法一：分别讨论♀2/3AA×♂2/3AA、♀2/3AA×♂1/3Aa、♀1/3Aa×♂2/3AA、♀1/3Aa×♂1/3Aa四种交配方式的情况后再合并。特别注意AA×Aa这对组合需考虑正反交两种情况。此解法适用于几乎所有自由交配类型的题目，但由于比较繁琐而不常用。

解法二：利用基因频率推算出A、a的基因频率分别为5/6、1/6，再根据遗传平衡定律，计算后代的基因型种类及比例。

解法三：算出群体产生雌（雄）配子的概率，再用棋盘法模拟受精作用进行运算。

注意：若群体产生雌雄配子的种类及比例相同，选择解法二或解法三都能快速得出答案;但如果由于某种特殊原因导致雌雄配子的概率不同时，选择解法三更为合适。比如：某基因型的植株花粉培育，求群体自由交配产生的后代表现型及比例时，可以直接用解法一逐一分析所有的杂交组合再合并，但比较繁琐。更简单的方法是，考虑到某基因型的植株花粉败育会导致雌雄配子的概率不同，选择解法三的思路，根据雌雄个体的基因型算出雌雄配子的概率，再结合棋盘法算出后代的表现型及比例。

【参考文献】

[1]李朝东.《锁定高考·一轮总复习生物》，宁夏人民教育出版社，2015年1月

[2]王朝银.《创新设计系列丛书·高考总复习生物》，陕西人民出版社，2012年2月

马钱子优化总生物碱的制备与评价 篇4

实验研究证实马钱子中的总生物碱为其主要有效成分,而总生物碱中又含有至少16种的生物碱成分[1],其中马钱子碱和士的宁为其主要成分,两者的含量分析多以单独进行[2,3],研究表明两者的总含量约占总生物碱的一半。其中,士的宁的毒性是马钱子碱的45～71倍[4,5],且药效学研究表明其在消肿止痛方面几乎没有活性[6],因此,本文利用的宁和马钱子碱在50%乙醇中溶解度相差悬殊的原理除去马钱子总生物碱中大部分士的宁,从而得到马钱子优化总生物碱,并进行了成分分析、安全性与药效评价,对于具有高度安全性的马钱子制剂的开发无疑具有重要的意义。

1 仪器与试药

1.1 仪器

日本岛津LC-20A高效液相色谱仪;AS1201自动进样器(大连依利特分析仪器有限公司);UV2800AH紫外分光光度计(优尼柯仪器有限公司);BS124S电子分析天平(德国赛多利斯公司);RE-52A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);循环水式真空泵,型号SHZ-D(Ⅲ)(巩义市予华仪器有限责任公司);PHS-3C PH计(上海雷磁公司);真空干燥箱,型号DZF-6020(上海精宏实验设备有限公司)。

1.2 试剂

本实验中所使用的马钱子为浙江中医药大学中药饮片厂生产(生产批号:20090219),经南京中医药大学蔡宝昌教授鉴定证实为马钱科植物马钱(Strychnos nux-vomica.L.)的干燥成熟种子;士的宁对照品(中国药品生物制品检定所),马钱子碱对照品(中国药品生物制品检定所);乙腈(色谱纯,美国TEDIA公司),其余试剂均为分析纯。

1.3 动物

ICR小鼠,许可证号:SCXK(苏)2007-0001,雌雄各半,体重18～22 g,购自扬州大学比较医学中心。

2 方法与结果

2.1 马钱子总生物碱的提取与纯化

称取生马钱子粉末50 g,过50目筛,以15倍量的70%乙醇回流提取半小时,共重复操作3次,合并3次所得滤液,用旋转蒸发仪将滤液真空干燥浓缩至干粉末状,取1 mol/L盐酸100 mL将粉末溶解,以4 000 r/min离心10 min,取得上清液,用40%NaOH将pH调整为12,用二氯甲烷萃取后合并二氯甲烷萃取液,真空干燥并精密称重,得到马钱子总生物碱,得率为(3.11±0.33)%(n=5)。

2.2 马钱子优化总生物碱的制备

称取马钱子总生物碱粉末共100 mg,用60 mL 50%乙醇将粉末溶解,置于真空干燥箱中浓缩,烧瓶内壁上可见大量白色结晶析出,取浓缩液水浴继续浓缩至原体积的8%后,4 000 r/min离心10 min,倒出上清液,4℃冰箱中静置过夜,4 000 r/min离心20 min后弃沉淀,取得上清液置于真空干燥箱中60℃真空过夜,精密称重,得到优化马钱子总生物碱,得率为(43.85±0.33)%(n=5)。

2.3 马钱子优化总生物碱的成分分析

2.3.1 酸性染料比色法测定纯度[7]

磷酸氢二钠1.681 8 g,磷酸二氢钠0.315 1 g,用水溶解,定容至100 mL得pH 7.2磷酸盐缓冲液。取pH 7.2的磷酸盐缓冲液,溶解溴麝香草酚蓝12.5 mg,定容至50 mL得显色液。

分别取马钱子优化总生物碱和马钱子碱适量,以氯仿定容,配制为0.10 mg/mL的氯仿溶液,制备供试液与对照品溶液。

取氯仿样品溶液和对照品溶液各0.5 mL至锥形瓶,60℃真空干燥,加入4 mL显色液,涡旋1 min,再加入6 mL氯仿,涡旋2 min,移至分液漏斗,静置4 h后将氯仿层放出,倒入比色皿中进行比色测定,检测到波长为416 nm,平行3份测定。另取0.5 mL氯仿作为空白对照,同法操作。以测得的马钱子碱计的总生物碱含量除以称重含量计算纯度(%)。结果表明,制得的马钱子优化总生物碱以马钱子碱计,其纯度为(100.66±1.84)%(n=3)。说明所制得的马钱子优化总生物碱的纯度很高。

2.3.2 HPLC法测定马钱子碱与士的宁的含量

根据王绚等[8]的研究比较结果,本实验选择高效液相色谱法(HPLC)来测定马钱子碱与士的宁的含量。

2.3.2. 1 色谱条件

Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相:pH 2.8酸水(含0.02 mol/L磷酸二氢钾与0.01 mol/L庚烷磺酸钠等量混合溶液,用10%磷酸调节pH到2.8)∶乙腈=76∶24,流速:1 mL/min,检测波长:264 nm,进样量:10μL,柱温:40℃。

2.3.2. 2 对照品溶液和供试品溶液的制备

按《中国药典》2010年版一部所述方法,各称取马钱子碱对照品10 mg、士的宁对照品10 mg,分别置于10 mL容量瓶中,加氯仿溶解定容。各取0.1 mL,用甲醇稀释至5 mL于同一5 mL容量瓶中,摇匀即得对照品溶液和供试品溶液,其中每1毫升含马钱子碱20μg和士的宁20μg。用氯仿将马钱子优化总生物碱溶解配制成10 mg/mL溶液,取适量用甲醇稀释、定容到25μg/mL,进样分析。按《中国药典》2010年版方法,以对照品和供试品相应色谱峰面积值,采用外标一点法进行定量。色谱见图1,测定结果见表1,可见优化后士的宁的含量显著下降,马钱子碱与士的宁的比例为2.7∶1。

A.对照品;B.马钱子总生物碱;C.马钱子优化总生物碱;1.马钱子碱;2.士的宁;3.马钱子碱氮氧化物

2.4 马钱子优化总生物碱的急性毒性研究

小鼠18～22 g,雌雄各半。受试药物为马钱子总生物碱和马钱子优化总生物碱,给药途径为尾静脉注射。通过预实验确定100%死亡组剂量Dm和0死亡组剂量Dn,马钱子优化总生物碱组在Dm(9 mg/kg)和Dn(1.575 mg/kg)的剂量范围内设4个剂量组,分别为2.161、3.087、4.410、6.300 mg/kg(剂量等比级数1∶0.7)。马钱子总生物碱组在Dm(1.60 mg/kg)和Dn(0.272 mg/kg)的剂量范围内设4个剂量组,分别为0.385,0.549,0.784,1.120 mg/kg(剂量等比级数1∶0.7)。每个剂量组10只小鼠。按Bliss法计算的实验结果见表2。可见,优化后马钱子总生物碱的毒性显著下降,LD50比优化前提高了4.8倍。

2.5 马钱子优化总生物碱的抗炎作用评价

精密称取马钱子总生物碱(马钱子碱与士的宁含量比为1∶2)、马钱子碱、优化马钱子总生物碱(马钱子碱与士的宁含量比为1.8∶1)适量,用含20%乙醇的PBS(pH=7.4)溶解,浓度为1 mg/mL。

2.5.1 分组

实验小鼠随机分为7组,每组10只。分别为空白对照组;阳性组(云南白药酊);马钱子总生物碱组;马钱子碱组;优化马钱子总生物碱高、中、低剂量组。

2.5.2 给药方案参照文献[9]

于小鼠右耳涂抹20μL二甲苯,左耳作为对照不涂二甲苯,30 min后,于各组小鼠左右两耳涂抹相应的受试药物,空白组给予含20%乙醇的PBS,给药组给予优化马钱子总生物碱,一共涂抹药物3次,每次为80μL,间隔10 min,最后1次给药40 min后将小鼠颈部脱臼处死,剪下左右两耳,用直径为6 mm的打孔器在左右两耳相同部位打下圆耳片并称重。结果见表3。

可见,马钱子优化总生物碱的有效剂量为6 mg/kg,马钱子优化总生物碱抑制耳肿胀的效果显著优于马钱子总生物碱。

3 讨论

本实验中显色液的pH值及吸收波长,对于用酸性染料比色法来测定总生物碱纯度时对测定结果有很大影响,此结论在前期已通过实验考察[6],并确定最佳的pH值为7.2,测定波长为416 nm。总生物碱纯度的测定结果表明马钱子优化总生物碱的纯度很高,接近100%。

注:与空白组比较,△P<0.05,△△P<0.01,△△△P<0.001;“-”表示无数据

士的宁已经被证明抗炎镇痛效果较弱且毒性较强,例如有文献证明非士的宁马钱子总生物碱才是抗关节炎的主要有效部位[10],因此将士的宁去除有利于减毒增效,但是要完全去除需要应用大孔吸附树脂上柱洗脱,周期长,效率低。前期研究表明马钱子碱和士的宁在50%乙醇中的溶解度分别为(455.40±0.03)和(1.60±0.03)mg/mL,溶解度相差近284倍,因此应用溶剂溶解分离就去除了绝大部分士的宁得到马钱子优化总生物碱,工艺简单,有利于推广应用。

药效学研究表明,与马钱子总生物碱相比,马钱子优化总生物碱经皮给药后对耳肿胀的抑制作用显著增强;而急性毒性试验结果也表明,静脉注射途径下,马钱子优化总生物碱的安全性提高了近5倍。这些试验结果均表明,马钱子优化总生物碱可以实现减毒增效,本研究结果与其一致。

参考文献

[1]蔡宝昌,吴皓,杨秀伟,等.马钱子中16个生物碱类化合物13CNMR谱的数据分析[J].药学学报,1994,29(1):44-48.

[2]张婷,陈军,王玮,等.马钱子碱脂质体在大鼠体内的药物动力学研究[J].中华中医药学刊,2012,28(1):69.

[3]邹龙,桂卉,黄世超,等.不同粒径马钱子粉体中士的宁在大鼠体内的药物动力学研究[J].中华中医药杂志,2009,24(12):1568.

[4]贾旋旋,李文,李俊松,等.马钱子的毒性研究进展[J].中国中药杂志,2009,34(18):2397-2399.

[5]于智敏,王克林,李海玉,等.常用有毒中药的毒性分析与配伍宜忌[M].北京:科学技术文献出版社,2005:59.

[6]Chen J,Wang X,Qu YG,et al.Analgesic and anti-inflammatory activityand pharmacokinetics of alkaloids from seeds of Strychnos nux-vomicaafter transdermal administration:Effect of changes in alkaloid composi-tion[J].Journal of Ethnopharmacology,2012,139(1):181-188.

[7]陈军,蔡宝昌,沈春云,等.马钱子总生物碱的含量测定[J].中药新药与临床药理,2007,18(6):468-471.

[8]王绚,陈军,蔡宝昌.马钱子体内外分析研究进展[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(13):258-262.

[9]胡巍,陈军,蔡宝昌,等.马钱子碱经皮给药的镇痛作用[J].中华中医药学刊,2008,26(2):385-386.

总生物碱 篇5

酸性染料比色法测定断肠草总生物碱的含量

建立了断肠草总生物碱含量的酸性染料比色测定法,并考察了各种因素对测定结果的影响.以溴甲酚绿作为测试用酸性染料,在总生物碱与其形成稳定络合物时间范围内,利用比色法测定了断肠草总生物碱的含量.此方法快速简便、准确易行.

作 者：陈志慧 宋光泉 周家容 CHEN Zhi-hui SONG Guang-quan ZHOU Jia-rong 作者单位：仲恺农业技术学院,化学与化工系,广东,广州,510225刊 名：江西农业大学学报 ISTIC PKU英文刊名：ACTA AGRICULTURAE UNIVERSITATIS JIANGXIENSIS年，卷(期)：28(3)分类号：Q949.776.3关键词：断肠草 总生物碱 酸性染料比色法

高三生物总复习课堂教学创新初探 篇6

【关键词】高三生物总复习 课堂教学 创新

随着新课标改革的深入发展，对生物学科的考试范围、考核目标以及生物试题进行了整改，因此，学校、老师、学生都加大了对于生物这门学科的关注。且高三时期是一个及其特殊的阶段，许多人都将高三看作是一次“跃龙门”的机会，对高考给予了非常高的重视。就如何提高高三生物总复习的效率成为摆在人们面前的一个亟待解决的问题。培养教师创新型的教学方法被证明是解决这一问题的主要手段，值得教育界诸多教师借鉴。

一、高三生物总复习课堂教学创新初探

1.教师观念的转变

很多生物老师不注重对生物课程的复习，没有给予足够的关注度，或是以无所谓的态度对待学生们的生物复习，将“学生”与“老师”之间的关联割裂开来①，看成是两个阶层的人。这种做法会严重打击学生复习生物的积极性，不利于学生复习效率的提高。教师应该及时树立创新教育的理念，改变传统的教育观为创新型教育观；积极与学生进行交流和沟通，将学生们看作是自己的朋友，创造民主平等的师生关系；在提高学生复习生物效率的同时还应该加强学生们创新精神和能力的培养，加强学生人生观、世界观、价值观的培养；将学生看作是真正的学习主体，充分调动学生复习生物的积极性和热情，鼓励学生多多参与有关于生物问题的探讨。例如，在进行“细胞的生命历程”专题复习中，可以以“衰老”这个话题作为专题复习的切入点，将学生们的注意力吸引过来，在讲述的过程中应该加强与学生们之间的交流，避免一味地讲述细胞增殖与细胞分化的理论知识。

2.教材的改变

现阶段我国学校中使用的教材是教育部统一规定的教材，教师应该根据本校的具体情况对教材内容进行调整，适当地删减及增加相关内容；应该注重研究高考说明，把握高考方向，尽量增加热点问题；同时应该抓住生物主干知识，对教材中的基础知识进行重组，形成一体化的知识链条，注重由“点”到“线”再由“线”到“面”的教学顺序。例如，笔者在进行生物专题第一阶段的复习时，发现教材中第一章是论述遗传因子的发现、第二章是讲述基因和染色体的关系、第三章是描述基因的本质、第四章讲的是基因的表达等内容，因此，笔者决定将这几章内容进行归纳整合，并取名为“探讨生物的遗传与进化”。这样的话就使得知识形成一个整体，更有利于学生们的理解与复习。

3.教师教学方法的改进

在很多学校，生物教师依旧沿袭老一套的教学方法，过分讲究“老师教、学生学”的教学模式②，不懂得从学生们的实际情况出发改进教学方法。教师应该积极促成学生的自主学习，为学生的生物复习创造轻松愉悦的氛围。例如，笔者在讲述“生物的遗传”这个专题时，首先是让学生们讨论这样一个问题：为什么每个人长得都不一样？进而激起学生的兴趣，一步步地将学生们引入“生物的遗传”这个话题当中去，再论述细胞的化学成分、细胞的结构以及功能，在此期间，插入讲述克隆羊多莉的故事，以活跃课堂气氛。

4.充分利用现代技术

创新教育不仅仅需要老师自身更进教学方法，不断提高自身的专业水平和教育素养，更应该加大教师对多媒体等先进技术的应用力度，充分利用身边一切可利用的资源，跟上时代发展的步伐，跟上教育改革的步伐，为学生们呈现生动、精彩的生物课程。笔者在这一方面做的还不错，拿“细胞的生命历程”这个专题的复习为例吧，笔者在讲述该专题的时候就会利用多媒体，将一个人从出生到成长再到死亡的历程以图片的形式展现出来，引出细胞增殖与细胞分化这个话题，进而探讨个体衰老与细胞衰老之间的关系。

二、在实行创新型高三生物总复习课堂教学时应该注重的几个问题

在进行高三生物总复习课堂教学创新初探过程中，还存在一些需要注意的问题，主要有以下几点：首先，应该关注每一个学生的实际情况。由于个体存在差异性，导致每一个人复习的进度都不一样，因此，教师应该掌握好上课的节奏，以大多数人的接受能力为准则实行授课。其次，还应该关注学生们的心理状态③。高三是一个特殊时期，很多学生都会产生紧张的心理，严重者甚至会出现一定的心理问题，因此对于高三的学生，老师不单单要对其进行基础知识的教授，更应该时时与学生进行谈话，积极引导学生，对学生进行心理上的疏导，对于部分严重者，应该向学校领导反映，建议学校聘请专业的心理教师对其进行开导，以减小学生的压力，保证学生拥有轻松愉悦的学习心情。

三、结语

生物高考是检验学生们对生物知识掌握程度的一种方式，对高三生物总复习课堂教学进行创新探讨，及时转变陈旧观念，改进落后的教学方法，并充分利用多媒体等先进技术。这样的话就有利于活跃课堂气氛，培养学生们的创新意识和能力，以帮助学生们摆脱低效的复习状态。要想提高生物的复习效率，不仅仅需要老师做出努力，学生们也应该积极配合。学生们要及时调整自身状态，转变生物复习观念，整合生物知识结构体系。

【注释】

①刘心红. 高三生物总复习课堂教学创新初探[D]. 宁德师專学报之自然科学版，2012，20（3）.

②吴燕. 怎样搞好高三生物总复习[J]. 复习指导，2011，25（11）.

③刘凯春. 论图表法在高三生物总复习中的运用[J]. 课堂教学，2012，16（14）.

总生物碱 篇7

本试验选择新疆地产洋金花种子为研究对象,以洋金花总生物碱为指标[10,11],阿托品为含测标准物质,使用紫外分光光度法进行测定。从实验室4种常用提取方法中,优选出最优提取方法。以乙醇浓度,提取时间、提取次数、料液比及pH为参数,运用正交试验法建立最优提取工艺[12,13,14,15]。通过对新疆地产洋金花种子进行系统的提取工艺研究,为拓展洋金花类药材的要用部位及后期其活性成分筛选奠定实验基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验仪器

DHG-9240电热恒温鼓风干燥箱(上海齐欣科学仪器有限公司)、Metter EL104电子分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司、P300超声提取器(天鹏电子新技术有限公司)、RE-2000A旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)、紫外分光光度仪(UV-2401PC)、水浴锅、圆底烧瓶、球形冷凝管、布氏漏斗、分液漏斗、容量瓶、烧杯、漏斗、量筒、胶头滴管和pH试纸等。

1.1.2 药材与试剂

洋金花种子于2012年9-10月采自新疆石河子南山,经石河子大学药学院谭勇教授鉴定为白花曼陀罗。除杂后得到种子部分,70℃烘干备用;硫酸阿托品(标准品)、溴甲酚绿、氢氧化钠、盐酸、邻苯二甲酸氢钾、氨水、氯仿、甲醇、乙醇等,均为化学纯。

1.2 方法

1.2.1 硫酸阿托品对照品溶液的配制

取103℃干燥至恒重的硫酸阿托品10 mg,精密称定,置100 mL量瓶中,加蒸馏水溶解定容到刻度,即得[16]。

1.2.2 0.5g·mL-1溴甲酚绿溶液的配制

精密称取溴甲酚绿50mg,邻苯二甲酸氢钾1.021g,加0.2mol·L-1氢氧化钠溶液6.0mL使溶解,再加水稀释至100mL,摇匀,必要时滤过,即得[17]。

1.2.3硫酸阿托品酸性染料分光光度法标准曲线的制备

精密量取硫酸阿托品对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL,分别置于5个分液漏斗中,各依次加0.500g·mL-1酸性染料溴甲酚绿溶液3mL,三氯甲烷10mL,用水补充至等体积,振摇提取2min,静置5min,分取三氯甲烷层溶液,再加入0.5g无水硫酸钠(脱水)[18,19],放置20min,取另一已精密加入三氯甲烷10.0mL的分液漏斗,精密加入水1.0mL,同法制成空白对照溶液,于波长420nm处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,以硫酸阿托品含量为横坐标作标准曲线,计算回归方程为y=0.472x-0.065 4,相关系数R2=0.999(见图1)。

1.2.4 四种提取方法优选

(1)冷浸法。种子3份,每份20g,粉碎,80%乙醇200mL,浸渍24h,抽滤,旋转蒸发仪回收溶剂,同法浸渍3次,合并浸膏,水浴蒸干,得干膏,合并3份,干燥称重得样品1,计算提取率。

(2)超声提取法。种子3份,每份20g,粉碎,80%乙醇200mL,超声提取,每次3h,抽滤,旋转蒸发仪回收溶剂,提取3次,合并浸膏,水浴蒸干,得干膏,合并3份,干燥称重得样品2,计算提取率。

(3)回流提取法。种子3份,每份20g,粉碎,80%乙醇200mL,水浴回流提取水浴3次,分别3、2、2h,抽滤,旋转蒸发仪回收溶剂,提取3次,合并浸膏,水浴蒸干,得干膏,合并3份,干燥称重得样品3,计算提取率。

(4)索氏提取法。种子3份,每份20g,粉碎,80%乙醇200mL,索氏提取,分别3、2、2h,水浴加热,抽滤,旋转蒸发仪回收溶剂,提取3次,合并浸膏,水浴蒸干,得干膏,合并3份,干燥称重得样品4,计算提取率。

1.2.5 4种提取方法提取总生物碱的定量测定

精密称取样品1、样品2、样品3、样品4各0.2g,加水10 mL使溶解,调节pH至2~3,滤过,滤液用氨水调pH至9~10,再用氯仿萃取4次,每次6mL,合并定容至25mL,即得供试品溶液1、2、3、4。于420nm波长处测定吸光度,计算总生物碱质量浓度及4种提取方法生物碱提取率。总生物碱提取率(%)=总生物碱质量浓度×25×干膏量/干膏取样量/药材量×100。

1.2.6 正交试验

采用L16(45)表格进行正交试验,以乙醇浓度、提取时间、提取次数、固液比及pH为考察因素,设计5因素4水平的正交试验。

2 结果与分析

2.1 洋金花种子中生物碱最佳提取方法的确定

采用4种提取方法提取洋金花种子提取物提取率和消耗比较及总生物碱提取率比较,由表1、表2可知,回流提取法对洋金花种子提取物的提取率最高,且总生物碱的提取率也是最高的,由此可以确定洋金花种子中生物碱的最佳提取方法为回流提取法。

2.2 正交试验结果

试验结果表明,第15组试验A4B3C2D4E1条件下洋金花种子中总生物碱提取率最高,即:无水乙醇回流提取,每次3h,提取2次,固液比为1∶25,pH为5。

由R值可知,对生物碱提取影响因素大小主次顺序为A>D>B>C>E,即乙醇浓度和固液比对洋金花种子中生物碱提取率影响较为显著。

3 结论与讨论

目前实验室采用的提取方法主要包括:回流法、浸渍法、超声法以及索氏提取法[9]。本试验通过对其进行比较,为更加充分、有效地提取洋金花种子中生物碱类化学成分提供了理论依据。通过对种子中提取得到总浸膏及总生物碱的重量进行分析,同时结合耗时、提取溶剂用量、实验仪器便捷等因素进行综合考虑,回流提取法得到种子的总生物碱最大提取率为1.98%,其次为索氏提取法,提取率为1.09%。

2014年李万林对陕西地产洋金花种子进行了生物碱及油脂的提取工艺研究[20],试验中采用索氏提取法进行提取,以时间、料液比、乙醇浓度为变量进行式验。本试验通过对多种提取方法进行比较,筛选出回流法为最优提取方法。通过增加提取次数、以pH为变量,使用紫外分光光度法进行检测,使试验结果更加全面、精准。

谈初中生物会考总复习 篇8

一、学习“会考纲要”, 明确考试方向

通过学习, 我们要深刻领会考试的指导思想、方式、范围、内容、重点及难度和比例。结业会考试题中, 易、中、难题的比例约为7:2:1, 也就是说有关基础知识和基本技能的考查比例占70%左右。从近两年的生物 (苏教版) 结业会考试题来看的确如此, 《2011年初中生物会考 (满分100分) 闭卷》考试试题中第一册内容占32%, 第二册占23%, 第三册占25%, 第四册占20%。《2012年初中生物会考 (满分100分) 闭卷》考试试题中第一册内容占30%, 第二册占28%, 第三册占20%, 第四册占22%。综合所知初中生物一、二册书的考试内容占56.5%, 第三、第四册考试内容占43.5%。由此我们可以看出, 初中生物四册书的内容都很重要。不少题目、内容直接或间接来自课本, 注重基础考查, 灵活性较强, 紧贴生活实践考查, 因此教师教学要通过学习, 明确复习的重点, 把握方向, 充分利用有限的时间, 以有效提高初中生物学总复习的教学质量为目的。

二、制定好计划, 分阶段复习

复习时, 我们要分几个阶段, 每个阶段的复习要达到什么目标, 向学生说明, 要求其能够自觉配合老师, 做到教与学同步。具体来说, 生物总复习计划分为三个阶段:第一阶段, 按课本章节复习为主, 要求学生在教师的引导下进一步加深对知识的理解以及对图示的理解, 形成知识的网络。在这个阶段中, 复习的容量大, 教师可以利用多媒体教学以节约时间, 提高复习效果。第二阶段, 查找学生在学习中存在的知识漏洞, 专题复习, 训练和培养学生解答选择题、分析说明题和实验题的能力。第三阶段, 综合训练及模拟测试。再次查漏补缺, 强化运用。

三、以课本复习为主, 抓住重点

生物会考的复习, 由于考试的要求不是很高, 而且时间有限, 只能选择重点进行复习。有些学生对生物的重视程度不够, 平时在生物学习上的时间较少, 有不少知识已经遗忘, 因此复习主要以课本章节为主, 教师应注重课本上的重点内容。在复习的过程中, 教师应注意抓住主干知识, 讲解要突出重点, 并在此基础上, 注意把相关的知识进行联系和比较, 从点到线到面, 尽可能形成知识的网络, 加深学生的理解和记忆。

四、指导学法, 主动学习

古人云:“授之以鱼, 不如授之以渔。”学生成绩的好坏在很大程度上取决于学习的方法、技巧和主动性。因此, 在复习时, 教师要在引导学生深刻理解教材中基础知识的同时向学生教授一些复习方法和解题技巧。如诵读记忆性有关内容时, 要多理解记忆, 少死记硬背;要多边读边回忆, 少有口无心;要多结合图形和图表, 少机械重复。又如, 在评讲选择题时, 教师应教给学生回忆法、直接解答法、淘汰排除法等解题方法, 这样不仅能提高学生的成绩, 还能充分发挥学生的自主性, 让学生积极、主动参与复习。

五、分层次指导学习, 制定目标

教师应针对不同层次的学生提出相应的要求, 帮助他们制定相应的目标。对于平时考试成绩较突出的学生, 帮助他们分析失分点在哪里, 着重加强这方面的训练;对于平时表现一般, 学习成绩中等的学生, 则要求他们加强选择题、填空题的训练, 激励他们向良好努力;对于学习兴趣低迷、考试成绩时常不及格的学生, 给他们鼓劲加油, 强化记忆性的基础知识, 配合复习同样能取得合格的成绩。

六、注重书本上的插图, 指导识图作答

从近两年的会考生物试题来看, 看图作答题占有相当大的比重, 这些图像直接或间接来自于课本。这些插图概括性强、生动直观, 是对课本内容的高度浓缩, 其优势是语言、文字无法比拟的。因此, 在复习过程中, 教师应重视对图像的复习, 指导学生看图释文、文图活用、读图解题, 使图文结合, 提高学生对图像的深刻理解和运用能力。

七、重视实验, 提高能力

生物学是一门以实验为基础的自然科学, 通过实践操作, 学生才能理解和巩固知识, 所以在平常教学中应重视学生实际动手操作能力的培养。对于那些实在无法开展的实验, 则通过播放相关实验视频, 让学生结合已有的知识, 理解实验的设计思路、原理、步骤, 学会对实验结果的预测、评价和作出合理的结论, 掌握科学探究的一般方法, 特别是怎样设计对照实验, 从而提高科学探究的能力和创新能力。

初中生物复习方法是多种多样的, 教师只要勤于钻研, 学习会考纲要明确考试方向, 注重紧扣课本知识, 抓住重点, 并运用多种教学手段, 对所教的学生分层次进行针对教学, 做到精讲精练, 充分调动学生的学习积极性, 就一定能做好会考的复习工作。

摘要：初中生物总复习时间紧, 任务重, 如何有效地复习, 充分利用有限的时间是关键。

关键词：生物,会考,复习方法

参考文献

[1]汪忠.新编生物学教学论.华东师范出版社, 2006.

如何提高生物总复习效率 篇9

一、思想上高度重视, 制定科学周密的复习计划

中考生物只占30分, 特别是现在又放在初三考, 学生对该科并不重视, 因此老师们应先强调这次考试的重要性, 明确告诉他们在高中没有一定的生物基础知识和基本技能, 将很难学好生物。这次复习不仅要帮助同学们顺利地通过中考大检阅, 更要帮助同学们将两年来所学的生物知识, 进行整理、归纳、补缺补漏, 为升入高中做好充分的准备。通过对学生的思想动员, 让学生端正学习态度, 保证学生以良好的心态进入总复习。我们学校在初三开始复习, 课时少 (每周一节课) , 战线长, 扣除期中、月考、节假日和学校的艺术节, 大概有16节的复习时间。如何短时间里复习好四本书, 这就需要我们制定好复习计划。我们的复习阶段一般可分为两轮, 每一轮的复习要达到什么目标、做什么、怎么做、时间安排、用何资料, 都要翔实。同时教师的计划在复习前, 要向学生说明, 让学生心中有数, 自觉地与老师配合, 做好教与学同步, 发挥共振的功效。

二、研读教材、标准和考试说明, 把握中考方向

1.研读教材、标准和考试说明。《生物课程标准》是中学生物教学的基本依据。教材是学生复习的根本, 任何复习资料都不能代替教材。因此, 在总复习中必须重视教材的阅读。阅读教材时, 要全面看教材内容, 如:教材上的基本原理和核心知识、有关习题、演示实验和探究实验及有关实验现象等。在看书过程中要画出重点和难点, 了解哪些知识属于记忆性内容, 哪些属于理解性内容, 哪些属于综合运用内容。同时还要做到知识间的相互联系。通过看教材, 让学生逐步建立起知识网络, 使学生做到心中有数。《考纲》规定了一个地区中考命题的范围、内容及具体要求, 我们应对考点进行分解和细化, 做到任务和目标明确, 这样就能提高复习备考的针对性, 有利于学生的自主学习, 同时也便于检测学习效果, 提高复习效率。因此, 生物总复习既要重视教材, 又要深入研究“两纲”。要对照近几年的全国各地的中考题, 找出考点和热点以及在教材中的落脚点, 把教材适当深化和提高, 使复习既全面, 又突出重点, 抓住热点。

2.针对考试模式, 研究中考生物试题。研究近几年的中考生物试题, 可发现其突出的特点之一是它的连续性和稳定性, 始终保持稳中有变的原则。某些重要的知识点和考点经常是变形后再考, 因此在生物总复习中, 必须认真研究历年的中考试题, 特别是近几年考题。把握考试趋势和试题变化, 少走弯路, 从而达到事半功倍的复习效果。

3.可利用复习材料进行系统复习、夯实基础, 这样系统性强, 便于理解、记忆, 基础打得牢固、扎实。 (1) 第一轮复习为“全面复习打基础”阶段, 要求:抓纲务本、夯实基础、全面复习、单元过关。初中生物学虽然只有四本书, 但专业术语多, 记忆的内容多, 知识点多而零散, 学生在复习时常常产生记忆困难, 此外一些容易混淆的概念, 也造成记忆困难。由于对知识记忆不清也影响了应用知识分析问题解决问题能力的培养。因此, 在中考复习中, 生物课还是要回归教材, 回归到基础知识上来。老师按课本的章、节内容帮助学生梳理知识、构建知识网络, 教师给出知识框架, 重难点、易错易混点则空出来, 让学生填写, 并在书上勾画出来, 使之加深印象。然后让学生及时背。最后利用《全品中考》一书上的范例与练习题练习。做到讲练结合, 避免只讲不练或只练不讲的做法, 尤其是后期复习, 要做到精讲精练。 (2) 第二轮复习为专题复习 (或归类复习) , 可按:专题一%科学探究;专题二%生物体的结构层次;专题三……等主题进行复习。这样的复习能使知识浓缩概括, 使繁杂的知识简单化, 零乱的知识条理化, 相互之间逻辑化。经过加工整理, 就可以用简单明了的公式、符号和图表等多种形式, 将知识纳入有机的体系之中。能使书本知识变成学生自己的, 既利于记忆储存, 又便于提取使用。

为了强化重点、难点及疑点、误点、弱点、考点, 精讲, 有必要做综合练习。由于生物学试题多以现实生活中的问题立意命题, 密切联系实际, 考查对知识的应用能力, 因此仅仅有了一定的基础知识, 并不意味着会应用、会解题, 所以进行模拟考试来训练是非常必要的。通过定时、定量和规范的模拟训练, 培养学生规范的考试习惯, 促进学生查缺补漏, 反思基础知识, 这有利于学生形成严谨、认真的答题习惯, 提高应试能力。但是, 大家应慎做模拟题, 可选做近2年的中考题, 以便进一步明确中考题目的命题思路和方式, 也可以检测一下学生对知识的掌握程度和在审题、解题的能力方面是否还有欠缺, 方便最后的复习巩固。

三、重视对学生复习方法指导, 提高复习效率

掌握必要的复习方法, 对提高复习效率很有帮助。概括起来, 生物中考复习中, 一般要使用到以下复习方法。

1.分析综合法。分析是把事物的整体分解成为各种属性, 各个部分、要素或阶段分别加以考虑的一种思维方法;综合则与之相反。如做光合作用实验时, 我们可以按照实验设计的内容将其分解成各个部分、各个要素加以考虑。比如说这些实验的过程与方法、对照类型、单一变量、结果与结论各是什么。

2.归纳概括法。对零散的知识点要进行概括和归纳。如:我们学过的生物类群主要有哪些?怎样对它们进行分类?

3.比较复习法。把有关的知识加以对比, 以确定它们之间的相同点和不同点。如植物细胞和动物细胞的结构、光合作用和呼吸作用, 复习这些内容时可以采用比较法。

4.联系实际法。把所学的知识与各种实际联系起来, 可以提高复习效率。例如, 复习光合作用与呼吸作用时, 可以联系生产实际 (为增大有机物净积累量, 可松土、适时灌溉、适当加大昼夜温差等) , 植物生长时要适当促进细胞呼吸, 而储存粮食时则要抑制细胞呼吸。

5.串连复习法。把几个相关知识点按照一定的逻辑顺序呈现出来。如花的结构、传粉的方式、果实和种子的形成等几个知识点就可以采用串联复习法构建一个知识网络。

6.图解法。不仅利用教材上的图解, 还要指导学生自编图解。这样可以使复杂知识简单化、条理化、网络化、直观化, 便于识记。如动物体的结构层次可用图解:细胞→组织→器官→系统→动物体;植物体的结构层次可用图解:细胞→组织→器官→植物体来复习。

7.识图法。这不仅有助于识记生物形态结构知识, 而且对各结构生理功能甚至对生命活动过程的识记都有帮助作用。

总之, 生物总复习时间紧, 任务重。教师要科学地安排复习时间, 运用恰当有效的复习方法, 正确处理好教材、新课程标准、“考纲”、练习题之间的相互关系。由于学生能力的提高离不开“双基”知识, 中考试题考查能力也离不开“双基”, 因此, 生物总复习仍然要在抓“双基”上狠下功夫, 想方设法地培养学生的各种能力, 同时训练学生对知识再加工的能力。还要认真分析、研究近几年的中考试题, 增强复习的针对性, 摸清中考试题涉及的考点、知识点、热点、特点以及变化趋势, 突出中考题的示范作用, 从而提高复习效率。

摘要：课堂是教师复习的主战场, 如何向四十分钟要质量, 是每一位教师的毕生追求。复习中既要减轻学生负担又要提高复习效率。

关键词：提高,生物总复习,效率

参考文献

[1]中华人民共和国教育部.初中生物新课程标准[M].北京:北京师范大学出版社, 2012.

[2]义务教育课程标准实验教科书[M].北京:人民教育出版社, 2006.

总生物碱 篇10

瑞香狼毒在西藏多个地市均有分布,其中那曲、 林芝( 波密) 、阿里( 日土、噶尔、普兰) 及昌都等地区危害较为严重。面对瑞香狼毒的危害,人们趋利避害,积极利用,早在1 300多年前瑞香狼毒根已被用来造纸,狼毒纸驱虫避鼠、久不变色[6]。随着有毒植物利用的多样化,也给瑞香狼毒的防控与利用诸多启发。王敏等[7,8]研究表明,瑞香狼毒总黄酮和总生物碱提取物均具有较强的抗肿瘤作用。由于不同生长阶段、生长环境和放牧强度下瑞香狼毒总黄酮含量可能不同[9,10],因此本研究对西藏瑞香狼毒不同物候期地上部分全草总黄酮和总生物碱含量进行测定,旨在为西藏瑞香狼毒药用开发与综合利用提供基础资料。

1材料与方法

1. 1植物样品

瑞香狼毒花前期、花期和花果期地上部分全草, 分别于2013年7—9月份采集于西藏自治区当雄县 ( 30°28'58″ ~ 72″N,91°06'28″ ~ 74″E) ,将植物样品阴干、粉碎、过40目筛,保存备用。

1.2主要仪器和试剂

电子分析天平( FA3204B) ,上海精科天美贸易有限公司生产; 旋转蒸发仪( EV311) ,北京莱伯泰科仪品有限公司生产; 荧光分光光度计( 930A) ,上海三科仪器有限公司生产; 电热恒温水浴锅 ( DK - 98 ⅡA) ,天津市泰斯特仪器有限公司生产; 数控超声波清洗器( KQ - 500DE) ,昆山市超声仪器有限公司生产; 芦丁标准品,上海融禾医药科技有限公司生产; 氢氧化钠、无水三氯化铝、无水甲醇、高氯酸、冰醋酸、氯仿、正丁醇等均为市售分析纯。

1.3方法

1. 3. 1荧光分光光度法测定总黄酮含量标准品溶液的制备: 精密称取10 mg芦丁,用10 m L无水甲醇溶解制成1 mg /m L标准贮备液。分别取贮备液5, 10,15,20,25 μL置于5 m L比色管中,加0. 01% 三氯化铝甲醇溶液0. 8 m L,以无水甲醇定容至刻度,摇匀,配制成系列标准工作溶液。

样品贮备溶液的制备: 准确称取0. 5 g样品置于带塞锥形瓶中,加入50 m L无水甲醇室温静置过夜, 超声提取40 min过滤,滤液加无 水甲醇定 容至50 m L,作样品贮备液。

列线性回归方程: 芦丁系列标准工作溶液配制完毕20 min后,在EX435 nm、EM490 nm条件下测定其荧光强度,列出线性回归方程。

样品溶液总黄酮含量测定: 样品溶液配制好20 min后,置工作曲线相同条件下测吸光度,代入线性回归方程即可求得样品溶液总黄酮含量。

1. 3. 2非水滴定法测定总生物碱含量总生物碱制备: 精密称取样品粉末50 g,工业乙醇热回流提取总浸膏。总浸膏转入蒸发皿,60 ℃蒸干后用1 mol/L稀盐酸溶解过滤,滤液碱性氯仿萃取得碱性氯仿部分生物碱。余液继续用碱性正丁醇萃取得碱性正丁醇部分生物碱,合并两部分生物碱作为总生物碱。

滴定: 总生物碱用30 m L无水冰醋酸溶解于锥形瓶中,滴加结晶紫指示剂4滴,以高氯酸标准液滴定至蓝色为终点,记录高氯酸体积V1; 同时做空白对照,记录消耗高氯酸体积V0。计算公式: 总生物碱 ( % ) = ( V1- V0) M/50 × 100% 。式中M为瑞香狼毒所含主要生物碱毫克当量数,计算样品总生物碱含量。

2结果(见表1)与分析

%

由表1可见,瑞香狼毒不同生长阶段中花果期总黄酮和总生物碱含量均最高,其次为花期,以花前期瑞香狼毒中总黄酮和总生物碱含量最低。

3讨论

瑞香狼毒通常以根茎为药用部分,研究表明,瑞香狼毒叶中总黄酮含量显著高于根部; 而且西藏高寒草地植被易破坏难修复,采挖瑞香狼毒根部对植被损害较大,开发利用意义不大。因此,本研究以地上部分总黄酮和总生物碱含量为研究对象,采用荧光分光光度法测定总黄酮含量简便易行,精确性较好[11]。 总生物碱含量测定时,以碱性氯仿和正丁醇两部分生物碱作为总生物碱,与一般以碱性氯仿部分生物碱作为总生物碱的作法不同,主要考虑到碱性正丁醇提取部分可能含有生物碱。虽然这种方法提取的总生物碱会混入更多杂质,但对滴定结果影响并不大。

毕凌霄等[9]研究表明,瑞香狼毒5— 9月份总黄酮含量呈先降低后升高的趋势,与本研究结果一致。 本研究中不同物候期总黄酮含量均显著偏低,主要由于西藏特殊的地理环境及植物采集地放牧强度较低所致。因此,采集当地放牧强度相对较高草场瑞香狼毒测定其总黄酮含量,并进行差异性分析是解决此问题的最佳方法。

4结论

西藏瑞香狼毒总黄酮和总生物碱含量花果期 > 花期 > 花前期。花果期西藏瑞香狼毒地上部分全草总黄酮和总生物碱含量相对较高,是药用开发利用的最佳时期,但对于总黄酮和总生物碱含量是否达到药用开发利用限值有待进一步研究。

摘要：为了研究西藏瑞香狼毒的药用开发与综合利用,试验采用荧光分光光度法和非水滴定法对西藏天然草原主要有毒植物瑞香狼毒不同物候期地上部分全草总黄酮和总生物碱含量进行测定。结果表明:瑞香狼毒花前期、花期和花果期总黄酮含量分别为0.410%、0.445%和0.471%;总生物碱含量分别为0.255%、0.308%和0.368%。说明瑞香狼毒总黄酮和总生物碱含量花果期>花期>花前期,花果期是瑞香狼毒药用开发的较好时期。

关键词：西藏,瑞香狼毒,总黄酮,总生物碱,含量测定

参考文献

[1]张平.瑞香狼毒的化学成分与药理作用研究进展[J].饲料博览,2012(9):49-51.

[2]纪亚君.青海天然草地有毒植物瑞香狼毒及其综合治理[J].青海畜牧兽医杂志,2003,33(4):35-36.

[3]窦洪举,李锋,侯勇跃.狼毒及瑞香狼毒的研究进展[J].畜牧与饲料科学,2013,34(11):43-47.

[4]王瑞亭.瑞香狼毒地上部分二氯甲烷提取物化学成分的研究[D].呼和浩特:内蒙古大学,2010.

[5]侯秀敏.青海天然草地主要毒草现状及防除对策[J].青海畜牧兽医杂志,2001,31(2):30-31.

[6]孙颖.传统瑞香狼毒藏纸造纸工艺研究现状[J].兰台世界,2013(5):70-71.

[7]王敏,贾正平,马骏,等.瑞香狼毒总黄酮提取物的抗肿瘤作用[J].中国中药杂志,2005,30(8):603-606.

[8]王敏,王学习,贾正平,等.瑞香狼毒总生物碱的抗肿瘤活性和机理研究[J].中药材,2010,33(12):1919-1922.

[9]毕凌霄,廖蓉苏.不同生长期瑞香狼毒和牛心朴子总黄酮含量研究[J].时珍国医国药,2010,21(10):2505-2507.

[10]郑宝江,胡海清.黑龙江省松嫩草地瑞香狼毒总黄酮含量的变化[J].东北林业大学学报,2006,34(4):59-60.

总生物碱 篇11

关键词：斜脉暗罗；总生物碱；紫外分光光度法；茎；叶；皮

中图分类号： R284.2文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）01-0263-02

收稿日期：2013-05-23

基金项目：江西省教育厅项目（编号：GJJ13678）；赣南医学院项目（编号：YB201218）。

作者简介：刘冰晶（1988—），男，云南昆明人，硕士，助教，从事中药化学研究。E-mail：974141690@qq.com。斜脉暗罗（Polyalthia plagioneura）属番荔枝科（Annonaceae）暗罗属（Polyalthia genus），系我国特有种，分布于云南、广东、广西南部及海南[1]，为海南优势种[2]。国内外学者从暗罗属20多种植物中得到了生物碱、萜类等多种类型化合物[3-4]，从斜脉暗罗中分离得到生物碱类化合物marcanine A和少量其他化合物[5-7]，但有关斜脉暗罗总生物碱含量的测定未见报道。本研究以小檗碱为对照品，在pH值为4.5的醋酸—醋酸钠缓冲溶液中，以溴甲酚绿为显色剂，在628 nm波长下，利用分光光度法测定斜脉暗罗总生物碱含量，为保护和合理利用药用植物资源斜脉暗罗提供科学依据。

1材料与方法

1.1仪器、试剂与材料

紫外可见分光光度计（尤尼柯UV-4802）；98-C-数显控温电热套（天津泰斯特）；索式提取器；电子天平；三氯甲烷（AR）；溴甲酚绿（AR）；小檗碱标准品（成都领航者生物）；pH值为4.5的醋酸-醋酸钠缓冲液；0.01 mol/L氢氧化钠溶液（用乙醇溶解）。

斜脉暗罗采自海南省昌江县霸王岭自然保护区，由海南师范大学生命科学学院钟琼芯教授鉴定为Polyalthia plagioneura，标本现藏于江西省脑血管药理重点实验室。

1.2 试验方法

参照刘冰晶等的方法[8-9]并进行改良。

1.2.1试验溶液配制用0.2 mol/L氢氧化钠滴加冰醋酸，调节pH值为4.5，即得醋酸—醋酸钠缓冲溶液；称取溴甲酚绿40 mg，加100 mL pH值为4.5的醋酸-醋酸钠缓冲溶液溶解，过滤，即得0.04%溴甲酚绿溶液。

1.2.2标准曲线的制作称取干燥至恒重的小檗碱对照品2 mg，置于100 mL容量瓶中，用三氯甲烷定容至100 mL，摇匀即得20 mg/L标准溶液。取小檗碱对照品溶液，显色后进行可见-紫外全波长扫描，结果表明对照品溶液在628 nm处有最大吸收峰。经多次重复，峰形一致且空白对照无干扰，故选择628 nm作为样品测定的波长。取标准溶液1.2、2.4、36、4.8、6.0、7.2 mL分别置于 20 mL 容量瓶中，用三氯甲烷稀释至10 mL，加入pH值為4.5的醋酸-醋酸钠缓冲液 5.0 mL 和0.04%溴甲酚绿溶液 2.0 mL，剧烈振摇5 min，静置 30 min；取下层液5 mL，加入 0.01 mol/L 氢氧化钠—乙醇溶液1.0 mL，摇匀，于628 nm处测吸光度。以小檗碱含量为横坐标，吸光度为纵坐标制作标准曲线。

1.2.3空白溶液的制备取10 mL三氯甲烷溶液于20 mL容量瓶中，加入5.0 mL醋酸—醋酸钠缓冲液和0.04%溴甲酚绿溶液2 mL，剧烈摇动5 min，然后静置30 min；取下层液 5 mL，加入0.01 mol/L氢氧化钠—乙醇溶液1.0 mL摇匀，作为空白溶液。

1.2.4斜脉暗罗总生物碱的提取分别准确称取斜脉暗罗茎0.5 g、叶0.25 g和皮0.5 g，用适量氨水湿润，密封放置 30 min，索式提取2 h，将提取液置于碘化铋钾溶液经薄层层析（TLC）至不显色为止，回收三氯甲烷，残留物放冷至室温，用三氯甲烷溶解并定容至20 mL；取0.2 mL于容量瓶中，加三氯甲烷定容至10 mL，混匀作为样品液；取10 mL样品液于3个20 mL容量瓶中，加入5.0 mL醋酸-醋酸钠缓冲液和 2 mL 0.04%溴甲酚绿溶液，剧烈摇动5 min，然后静置 30 min；取下层液5 mL，加0.01 mol/L氢氧化钠—乙醇溶液1.0 mL，摇匀，于628 nm处测吸光度，计算生物碱含量。试验重复3次。

2结果与分析

2.1标准曲线方程

经过统计处理，得到标准曲线回归方程为：D=0.008 2C+0.167 1，相关系数r=0.999 1，线性范围为2.0～12.0 mg/L。

2.2稳定性试验

取斜脉暗罗提取溶液0.2 mL，每隔10 min用分光光度计测定1次吸光度，结果（表1）表明，斜脉暗罗茎、叶、皮提取物在1 h内稳定，RSD值分别为2.140%、2.070%和0.379%。

3.3精密度试验

取同一批样品，进行6次平行试验，测定含量，斜脉暗罗茎、叶和皮提取物吸光度RSD值分别为0.385%、1.882%和0.412%，精密度良好（表2）。

3小结与讨论

以小檗碱为标准品，测定斜脉暗罗茎、叶和皮总生物碱分光含量分别为 0.267 1%、1.473 7%和0.790 8%。利用紫外分光光度法测定斜脉暗罗茎、叶、皮中总生物碱含量，操作简便快捷，灵敏度高，重现性好，测定结果准确可靠。该方法与重量法、滴定法等测定方法比较，克服了多次重复萃取所造成的误差；与液相色谱法比较，具有所用仪器简单、操作方便、耗时少的优点。本研究结果可为斜脉暗罗的开发利用提供科学依据。

nlc202309041845

参考文献：

[1]吴德邻. 海南及广东沿海岛屿植物名录[M]. 北京：科学出版社，1994：9-10.

[2]中国科学院中国植物志编辑委员会. 中国植物志：第2分册[M]. 北京：科学出版社，1979.

[3]Hasan C M，Mohammad A，Hossain A A.Rashid，clerodane diterpenoids from Polyalthia iongifolia var. pendulla[J]. Biochem Systematics and Ecology，1995，23（3）：331-332.

[4]Paarakh P M，Khosa R L.Phytoconstituents from the genus Polyalthia：a review[J]. Journal of Pharmacy Research，2009，2（4）：594-605.

[5]Liu B，Wang L，Chen G，et al. Isolation and crystal structure of marcanine A from Polyalthia plagioneura[J]. Molecules，2010，15（9）：6349-6356.

[6]Liu B，Chen G，Cen C，et al. 1-（5-Hydroxy-7-methoxy-2，2-dimethyl-2H-chromen-6-yl）ethan-1-one[J]. Acta Crystallographica Section E：Struct Rep Online，2010，66（6）：o1441.

[7]劉冰晶，陈光英，简蓝，等. 斜脉暗罗茎化学成分研究（Ⅰ）[J]. 中草药，2011，42（7）：1264-1266.

[8]蔡大可，李耿，彭绍忠，等. 酸性染料比色法测定痹痛消膏中乌头生物碱的含量[J]. 中药新药与临床药理，2007，18（1）：57-59.

[9]敖茂宏，刘海，吴明开. 酸性染料比色法测定不同产地流苏石斛中总生物碱的含量[J]. 江苏农业科学，2012，40（10）：282-283.王菊平，郑烈山，杨水彬. 热分解法测定碱式碳酸铜的组成[J]. 江苏农业科学，2014，42（1）：265-266.

总生物碱 篇12

关键词：山豆根配方颗粒,总生物碱,含量分析

山豆根配方颗粒与其药材一样, 具有清热解毒, 消肿利咽。用于火毒蕴结, 乳蛾喉痹, 咽喉肿痛等功效。山豆根药材总生物碱含量较高是评价质量的重要指标之一, 本试验以苦参碱为对照品, 建立了山豆根配方颗粒总生物碱含量的测定方法, 现报道如下。

1 仪器与材料

1.1 仪器

TU-1900型紫外分光光度计 (北京普析通用仪器有限公司) , FA2004电子天平 (上海恒平科学仪器公司) , pHS-25型酸度计 (上海精密科学仪器有限公司) 。

1.2 材料

溴百里酚蓝, 超纯水, 甲醇、氨水、氯仿、磷酸二氢钾、氢氧化钠、95%乙醇等试剂均为分析纯。

1.3 材料

山豆根配方颗粒 (南宁培力药业有限公司, 批号:A061024-01、A081082-01、A090706-01, A101276-01) , 苦参碱对照品 (中国药品生物制品检定所, 批号:110805-200508) , 溴百里酚蓝、甲醇、氨水、氯仿等试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液制备

精密称取干燥至恒重的苦参碱对照品适量, 用95%乙醇制成含536μg/mL苦参碱的对照品原液, 吸取1mL对照品原液, 用5%乙醇定容于25mL容量瓶中, 作为对照品稀释液。

2.2 供试品溶液制备

取山豆根配方颗粒0.5g, 研成粉末, 精密称量, 置具塞锥形瓶中, 精密加入氯仿:甲醇 (10∶10) 20mL, 氨液1.5mL, 密塞, 称量, 于70℃水浴回流加热4h后补重, 摇匀, 滤过, 取续滤液转移, 精密量取续滤液10mL, 挥干溶剂, 加甲醇溶解稀释, 转移于10mL容量瓶中至刻度, 摇匀, 吸取1mL, 蒸干溶剂, 用95%乙醇定容于10mL容量瓶中, 摇匀, 即得。

2.3 缓冲液及显色剂配制

吸取0.2mol/L磷酸二氢钾25mL, 0.1mol/L氢氧化钠39mL, 加水至100mL容量瓶中, 用pH酸度计校正至7.4作为缓冲液。精密称取溴百里酚蓝0.0250g, 加缓冲液至100mL容量瓶中配制成0.025%的显色剂。

2.4 线性关系考察

分别精密吸取苦参碱对照品原溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL于25mL容量瓶中, 分别吸取2mL, 分别置于具塞锥形瓶中。以加入2mL的95%乙醇为空白对照, 在413 nm波长处测定吸光度, 以吸光度Y为纵坐标, 测定浓度C为横坐标, 绘制标准曲线, 结果表明苦参碱测定浓度在4.29～21.4μg/mL范围内与吸光度呈良好的线性关系, 回归方程为Y=0.0230C+0.2275, r=0.9990。

2.5 精密度试验

精密对照品稀释液2mL, 按上述方法重复测定6次, 结果6组吸光度测定平均值为0.323, RSD为0.16%, 表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

精密吸取对照品稀释液2 mL, 测定吸光度, 每间隔1h测定1次, 吸光度RSD为1.05%, 表明显色后样品在6h内基本稳定。

2.7 重复性试验

取同一批号配方颗粒剂样品 (A101276-01) , 共6份, 按“2.2”项下方法制成供试品溶液, 取供试品溶液2mL, 按上述方法测定吸光度, 结果见表4, RSD为1.11%, 表明本方法重复性较好。

2.8 加样回收率试验

精密量取已测含量的配方颗粒样品6份, 精密加入苦参碱对照品适量, 按照供试品溶液制备方法进行操作, 测定吸光度, 计算回收率, 平均回收率为99.54%, RSD为2.17%。结果见表1。

2.9 样品测定

分别选取不同批次的山豆根配方颗粒, 按2.2法制备供试品溶液, 吸取供试品溶液2 mL, 测定吸光度, 以苦参碱计算, 得出供试品中总生物碱的含量, 结果见表2。

3 讨论

3.1 酸性染料比色法常用于制剂中生物碱的含量测定[1,2,3]。

试验中对缓冲液pH值的选择、溴百里酚蓝溶液加入量进行了测定, 确定pH=7.4缓冲液下, 苦参碱对照品与供试品在413 nm波长处有最大吸收。

3.2 总生物碱含量是评价山豆根药材质量的重要指标之一, 本试验以苦参碱为对照品, 对山豆根配方颗粒中总生物碱进行测定, 结果为较满意, 且方法快速、准确, 可用于山豆根配方颗粒质量控制。

参考文献

[1]杨帆, 陆娟, 刘春明, 等.山豆根总生物碱的超声提取工艺[J].安徽农业科学, 2011, 39 (29) :17869-17871.

[2]邓光辉, 胡炜, 刘榕城, 等.溴百里酚蓝比色法测定叶下珠生物碱的含量[J].时珍国医国药, 2009, 20 (5) :1193-1194.