细胞质流动

细胞质流动（共2篇）

细胞质流动 篇1

生物学实验是中学生物内容中最重要, 也是最富成长性的板块。通过实验教学可以培养学生的动手能力、科技创新能力, , 以及探索科学知识的方法技巧。。而中学生物实验材料的选择, 更是学生实验成功与否的关键。近年来, 我们对细胞质流动实验的材料使用摸索到了一定的经验, , 现就该实验的改进方案作一简单的归纳。

通常在中学生物细胞质流动观察实验中所使用的材料是黑藻。除此以外, 也可用万寿菊、、大白菜等。

一、以万寿菊 (臭芙蓉、高丽菊) 作实验材料

1. 用具

显微镜、载玻片、盖玻片、吸水纸、滴管、尖嘴镊子、小烧杯、、刀片、解剖针。

2. 步骤

⑴教师将事先插于小烧杯水中的万寿菊花枝放到实验台上。

⑵用镊子从万寿菊头状花序中取一未开放的管状花 (切记不能取开放的) , 将其放在载玻片中央, 用刀片切取中间的花冠筒部分, 长约1厘米。

⑶用滴管加2滴水于载玻片材料上, 然后用解剖针将花冠筒剖开, 使其内侧向上平展在水中, 盖上盖玻片, 制成临时水封装片。

⑷用吸水纸吸取多余的水, , 以盖玻片不漂浮于水上为宜 (一定不能悬浮于水面上) 。

3. 观察方法

⑴用低倍镜找出3个细胞排成一列的表皮毛细胞。

⑵换高倍镜观察单个表皮毛细胞, 特别是位于表皮毛顶端的细胞, 以细胞之内橙黄色的有色体作为参照物, 此时可清晰地看到细胞质的布朗运动。

二、以大白菜 (或黄芽白菜) 的幼苗幼叶作实验材料

1. 大白菜优于黑藻的几个特点

这里的用具、步骤及观察方法与上述以万寿菊作实验材料的基本相同。但大白菜与黑藻相比, 又具有以下几个特点:

⑴大白菜幼苗幼叶的表皮毛细胞体积较大, 而且细胞突起伸展在表皮之外, 细胞之间也互不重叠。尤其是叶缘部分, 表皮毛细胞更是多、粗且长, 因此, 可用刀片切取叶缘一小片, 即可制成临时水封装片。

⑵大白菜表皮毛细胞中的细胞质流动速度较快。在放大250倍的视野中, 就可以看到细胞质沿液泡周围作逆时针循环流动的现象, 特别是可以看到随着细胞质缓缓流动而流动的叶绿体, 就像静脉中血细胞随着血液的流动而流动一样。

⑶大白菜全国各地都有栽培, 取材方便。特别是9月份, 我国大部分地区正是大白菜幼苗生长的时期, 活体材料极易获得。

2. 具体观察方法的改进

以1%的葡萄糖水溶液代替上述步骤 (3) 中的水。因1%的葡萄糖水溶液既能使细胞充分吸水, 又可作为能源物质, 延长立体细胞的生活时间, 从而加快细胞质的流动速度和延长观察时间。

关键词：细胞质,流动实验,材料,步骤,观察方法,改进

细胞质流动 篇2

1 材料与方法

1.1 主要试剂

胎牛血清、淋巴细胞分离液, 购自中国医学科学院生物工程研究所;RPMI-1640培养基, 购自Gibco公司;氯化镉 (CdCl2) 等试剂, 均为分析纯。

1.2 细胞的分离与培养

试验动物为40～60日龄伊莎公鸡, 处死后无菌取脾脏制成单细胞悬液, 将细胞悬液缓慢加在淋巴细胞分离液之上, 使之形成分层, 2 000 r/min离心20 min;小心吸取中间悬浮细胞层, 并用不完全培养液洗2次, 台盼蓝排斥试验计算细胞存活率>95%, 再用完全培养液将细胞稀释成2×106/mL进行培养。试验组在培养体系中加入终浓度为10 μmol/L的CdCl2, 对照组加入相同体积的纯化水, 共同培养12, 24, 36, 48, 72 h后取出, 收集细胞。

1.3 淋巴细胞膜的制备

参照参考文献[4]采用低渗溶胞法提取淋巴细胞膜。

1.4 淋巴细胞膜膜流动性的测定

取新制备的淋巴细胞膜2 mL, 加入2×10-6 mol/L 四氢呋喃 (DPH) 标记液2 mL, 37 ℃温浴30 min;20 000 r/min离心40 min, 去除残留的标记液, 用pH值为7.4、浓度为10 mmol/L PBS洗涤1次。最后将样品悬浮在PBS中, 放在附有偏振附件的荧光分光光度计的样品池中 (激发波长为362 nm, 发射波长430 nm, 峡缝为10 nm, 将激发光和发射光固定在峰值位置) 进行如下偏振测量:将起偏器固定在0°位, 检偏器固定在0°位, 测偏振测量值IVV;将起偏器固定在0°位, 检偏器固定在90°位, 测偏振测量值IVH;将起偏器固定在90°位, 检偏器固定在0°位, 测偏振测量值IHV;将起偏器固定在90°位, 检偏器固定在90°位, 测偏振测量值IHH。利用公式计算:矫正因子G=IHV/IHH, 荧光偏振度P= (IVV-GIVH) / (IVV+GIVH) , 微黏度η=2P/ (1-P) 。

1.5 统计与分析

采用Excel 2007统计试验数据, 应用SAS for Windows 6.12软件进行方差分析, 比较2个试验组差异显著性, 结果以平均数±标准差表示。

2 结果

加镉组淋巴细胞膜微黏度及荧光偏振度增大, 随着染镉时间的延长, 微黏度及荧光偏振度也随之增大;加镉组与相同时间的对照组相比差异显著 (P<0.05) 或极显著 (P<0.01) , 见表1。

3 讨论

细胞膜流动性是指细胞膜具有类似于液体样容易流动的一种物理性质, 包括膜脂流动性和膜蛋白活动性。细胞膜流动性是细胞膜结构的基本特征, 合适的流动性是细胞膜正常功能的必要前提。膜流动性的改变将影响各种膜功能, 如膜上酶的活性、膜的转运功能、膜的信息传递功能、膜受体的功能及其表达等。

试验发现, 加镉组淋巴细胞膜微黏度及荧光偏振度增大, 随着染镉时间的延长, 膜微黏度及荧光偏振度也随之增大, 表明镉能够降低淋巴细胞膜流动性。镉为极性分子, Cd2+可与膜表面的负电荷基团结合, 影响膜表面的电荷密度和静负电荷的局部静电场, 并能渗入膜脂双层, 改变膜的介电常数, 从而导致膜流动性的改变。镉还是一种很强的脂质过氧化诱导剂, 可诱发细胞内自由基的产生, 引起淋巴细胞发生脂质过氧化[5], 脂质过氧化自由基及其终产物丙二醛 (MDA) 等可使细胞膜的流动性和通透性发生障碍, 引起细胞功能失调甚至破裂、死亡[6]。MDA还能进入膜水相, 与膜脂、膜蛋白上的氨基 (-NH2) 交联形成Schiffs碱, 增加膜的刚性, 导致膜流动性降低。M.A.Amoruso[7]报道, 镉在浓度为1～500 μmol/L的范围内可使人红细胞膜流动性下降, 表明镉可改变细胞膜的流动性。

注:与对照组同项目比较, 数据肩标*表示差异显著 (P<0.05) , **表示差异极显著 (P<0.01) 。

此外, 膜的流动性还受膜磷脂组成、胆固醇含量、唾液酸含量等因素的影响, 特别是胆固醇/磷脂的比例是膜流动性的重要调节因素。在进行镉染毒时, 众多因素共同影响膜的流动性, 但具体哪种机制占主要地位还需进一步研究。

参考文献

[1]薛飞群.兽药残留分析技术研究进展[J].中国家禽, 2008, 30 (11) :31-32.

[2]张陆, 宋春林, 徐世文, 等.铅、镉及铅镉联合胁迫致雏鸡红细胞膜的损伤[J].中国家禽, 2010, 32 (21) :20-23.

[3]周勇, 贺莉萍, 黄晓, 等.铅镉砷对小鼠免疫球蛋白和T淋巴细胞亚型的影响[J].毒理学杂志, 2010 (3) :32-34.

[4]马波, 李洪涛, 王君伟.北京鸭胸腺和法氏囊中淋巴细胞膜蛋白成分的初步比较[J].动物医学进展, 2002, 23 (5) :76-79.

[5]王巧红, 吕朝晖, 张利娜, 等.氧化应激在硒缺乏致鸡淋巴细胞DNA损伤中的作用[J].中国家禽, 2009, 31 (14) :14-17.

[6]张清俊, 丛建波, 王长振, 等.低功率微波辐射对抗氧化物酶活性及细胞膜流动性的影响[J].中华物理医学与康复杂志, 2007, 29 (2) :100.