脊髓缺血再灌注损伤（共11篇）
脊髓缺血再灌注损伤 篇1
内源性δ阿片受体(delta opioid receptor,DOR)对缺血缺氧损伤的心肌细胞具有保护作用，但其在脊髓缺血再灌注损伤(spinal cord ischemia reperfusion injury,SCIRI)中是否对缺血缺氧损伤的神经元产生保护作用尚无充分的分子生物学证据证实[1,2]。本实验通过建立新西兰大耳白兔SCIRI模型，观察缺血再灌注损伤对脊髓组织DORmRNA表达的影响。
1 材料与方法
1.1 主要试剂
PCR反应试剂(深圳匹基公司)；引物DOR、β-actin及3S Trizol总RNA提取试剂盒(上海博彩生物科技有限公司)；神经特异性烯醇化酶(neuronspecific enolase,NSE)试剂盒(美国USCNLIEF公司)；
1.2 动物模型的建立
24只健康新西兰大白兔(贵阳医学院实验动物中心提供)，雌雄不限，体重2-2.5 kg，按照随机数字表(单因素设计)分为分为4组，每组6只。假手术组(sham)为对照组，麻醉后仅进行手术操作，不阻断腹主动脉。实验组-l(简称E-l)，仅阻断腹主动脉45 min。实验组-2(简称E-2)，阻断腹主动脉45分钟，再灌注30分钟。实验组-3(简称E-3)，阻断腹主动脉45 min，再灌注60 min。采用左肾动脉下方腹主动脉夹闭法建立SCIRI模型。术中以生理盐水浸润的温纱垫覆盖腹腔脏器，直肠温度维持于36℃～37℃。
1.3 观察指标
E-l组于阻断腹主动脉45 min、E-2组于再灌注30 min、E-3组于再灌注60 min时间点自股静脉采血5 mL,5000 r/min离心后取上清液采用双抗体夹心ELISA法测定NSE浓度。各组采血后背部消毒铺巾，咬骨钳咬除棘突，打开L2-L5椎板暴露脊髓，取出并分离大小为0.3 cm×0.3 cm的脊髓组织采用实时荧光定量PCR检测DOR mRNA的表达变化。sham组采集标本作为对照。
1.4 统计学方法
采用SPSS16.0软件统计处理，计量资料以表示，组间比较采用χ2分析和q检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 血清NSE浓度变化
Sham组血清NSE浓度为5.42±0.69 ng/mL,E-l、2和3各组血清NSE浓度随着再灌注时间延长而逐渐升高，均明显高于Sham组，与Sham组比较差异均有统计学意义(P<0.01),E-l、2和3各组组间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。各组血清NSE浓度总体变化趋势为Sham<E-l<E-2<E-3。见附表。
2.2 DOR mRNA表达变化
E-l、2和3各组随着再灌注时间延长DOR mRNA表达逐渐降低，均明显低于Sham组，与Sham组比较差异均有统计学意义(P<0.01),E-l、2和3各组组间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。各组DOR mRNA表达总体变化趋势为Sham>E-l>E-2>E-3。见表1。E-l、2和3各组同时间点DOR mRNA表达与血清NSE浓度变化呈显著相关(γ=0.935、γ=0.987和γ=0.981,P<0.01)。见附表。
注:与Sham比较*P<0.01;与E-l比较★P<0.01;与E-2比较#P<0.01
3 讨论
研究发现，内源性阿片受体广泛分布于神经系统，DOR活化在改善脑组织耐受缺氧、缺血、过氧化损伤或谷氨酸浓度升高的微环境等所致的兴奋性毒性中可能发挥重要作用，DOR选择性配体还可介导细胞内储存钙的释放，并且调节各种蛋白激酶的活化[3,4]。
目前，DOR的药理作用研究主要集中在心血管系统，而SCIRI中DOR对神经元的保护作用研究较少。血清NSE水平是一种测定方法简便、特异性和敏感度高的神经元或神经细胞损伤标志，NSE特异地存在于神经元和神经内分泌细胞胞浆内，而外周神经中含量很少。SCIRI过程中，神经元细胞膜完整性破坏，NSE由胞内释放至胞外，通过血脊屏障进入循环[5,6]。研究表明，检测血中的NSE可以早期诊断并评价神经系统损伤的程度[7,8]。提示，监测外周血的NSE变化，可了解神经元损伤程度及其预后评估。本研究显示，阻断腹主动脉45分钟时血清NSE浓度已升高，随着再灌注时间延长，血清NSE浓度进一步升高，说明阻断腹主动脉45分钟后可引起神经元缺血性损伤，开放腹主动脉后进一步造成神经元再灌注损伤，提示脊髓血供恢复后神经元功能不但没有得到恢复，反而损伤加重，大量神经元受损坏死后释放NSE进入循环。与此同时，采用适时荧光定量RT-PCR法检测到缺血脊髓组织中DOR mRNA表达显著降低，缺血脊髓血液供应恢复后DOR mRNA表达进一步降低，且DOR mRNA表达变化与NSE变化显著相关，说明DOR活化与SCIRI的发生、发展有密切联系。SCIRI是胸降及胸腹主动脉瘤等手术过程中可能出现的并发症，对DOR的研究在临床治疗中具有重要的意义。
参考文献
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脊髓缺血再灌注损伤 篇2
1996年korsmeyer研究组首先克隆出Bid蛋白[1],Bid蛋白是Bcl-2家族中BH3亚家族成员之一,结构中只有一个BH3区域,具有促进细胞凋亡发生作用[2].目前尚无文献报道白介素-11预处理后Bid与大鼠肠道细胞凋亡的关系.本实验旨在通过模拟肠道缺血再灌注损伤,探讨Bid在肠粘膜细胞凋亡中的作用及其可能的.机制.
作 者：关洪亮 崔佑刚 赵广龙 作者单位：关洪亮,崔佑刚(佳木斯大学2006级研究生,黑龙江,佳木斯,154003)
赵广龙(佳木斯大学2007级研究生,黑龙江,佳木斯,154003)
脊髓缺血再灌注损伤 篇3
【关键词】 视网膜；再灌注损伤；基因，WTp53；基因，bax；基因，bcl-2；大鼠，Wistar
【中图分类号】R774.1 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2015）03-0248-02
视网膜缺血再灌注损伤是眼科常见的病理过程，严重影响病人视功能。其发生机制十分复杂，已成为近年眼科的研究热点之一。目前研究发现，视网膜缺血再灌注损伤中存在着神经细胞凋亡现象，且凋亡是视网膜神经细胞丢失的重要因素之一[1]。本實验通过建立大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型，研究凋亡相关基因野生型p53（WTp53）、bax和bcl-2的表达变化，探讨视网膜缺血再灌注损伤的发生机制。现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1动物及分组 健康无眼疾的Wistar大鼠（青岛市实验动物与动物实验中心提供）28只，体质量250～300 g，雌雄不拘，室温环境饲养。随机分为两组：正常组（4只）、缺血再灌注组（24只），其中缺 血再灌注组又分为再灌注后1、6、12、24、48和72 h等6个组，每组4只大鼠。
1.1.2主要试剂 兔抗大鼠WTp53、bax、bcl-2多抗（美国Santa Cruz生物技术公司生产），链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物（SABC）免疫组化试剂盒（武汉Boster生物工程公司）。
1.2 实验方法
1.2.1动物模型的建立 采用前房穿刺加压法建立大鼠缺血再灌注损伤模型，方法见文献[2]。
1.2.2标本的取材、固定与切片 分别于再灌注后1、6、12、24、48、72 h处死动物，摘除眼球，制作石蜡切片，方法见文献[2]。
1.2.3免疫组织化学染色 将标本的石蜡切片脱蜡至水，用蒸馏水新鲜配制体积分数0.03过氧化氢室温放置10 min，以灭活内源性过氧化氢酶，复合消化液室温浸浴10 min修复抗原，正常山羊血清室温 10 min封 闭非特异性抗原，加一抗（兔抗大鼠WTp53、bax、bcl-2多抗） 37 ℃孵育2 h， 加二抗（生物素化山羊抗兔IgG）37 ℃水浴20 min，SABC法染色，DAB显色，苏木精轻度复染，脱水、透明、封片。
1.2.4结果观察及数据处理 每只眼球取两张切片进行分析，应用双目光学显微镜（400倍）分别观察WTp53、Bax、Bcl-2蛋白表达（阳性染色呈棕黄色）。应用图像分析系统对免疫组化切片进行图像分析（每张切片取4个视野，以视神经为基准分别向两侧各取2个视野），对视网膜组织中WTp53和Bax蛋白表达进行相对定量。
2 结果
2.1WTp53蛋白的表达变化 正常大鼠视网膜中几乎无WTp53蛋白表达。WTp53蛋白于再灌注6 h开始在视网膜神经节细胞层少量表达，位于细胞核内，以后表达量逐渐增加，24 h达到高峰，此时除在神经节细胞层有强表达外，内核层也有散在的表达；48 h仍持续强表达； 72 h明 显下降，但仍较正常组为高。再灌注6、12、24、48、72 h的WTp53蛋白阳性表达结果与正常组比较，差异有显著性。见表1。
2.2 Bax蛋白的表达变化 正常大鼠视网膜中几乎无Bax蛋白表达。Bax蛋白于再灌注6 h开始在视网膜神经节细胞层有表达，位于细胞浆中，以后表达量逐渐增加，24 h达到高峰，此时除在神经节细胞层有强表达外，内核层也有散在表达；48 h已有所下降，但仍表达较强；72 h明显下降。再灌注6、12、24、48、72 h的Bax蛋白阳性表达结果与正常组比较，差异有显著性。见表1。
2.3Bcl-2蛋白的表达变化 正常组视网膜Bcl-2蛋白低表达于神经节细胞层、神经纤维层及内核层。缺血再灌注后各时间段表达差异无显著性。再灌注6、12、24、48、78 h的Bcl-2蛋白阳性表达结果与正常组比较，差异无显著性（ P gt；0.05）。见表1。
表1 视网膜缺血再灌注后不同时段WTp53、Bax、Bcl-2蛋白的表达变化（略）
脊髓缺血再灌注损伤 篇4
1 材料与方法
1.1 实验动物及分组
健康新西兰大白兔60只,体质量2.0~2.5 kg,4~6月龄,雌雄各半,由福建医科大学实验动物中心提供。随机分为A组(假手术组,n=8)、B组(缺血再灌注组,n=26)和C组(实验组,n=26)。
1.2 实验药物
依托咪酯注射用乳剂(ETOMIDATE)由德国贝朗公司提供,兔IL-6血清酶联免疫试剂盒由上海源叶生物有限公司提供。
1.3 实验方法
耳缘静脉注入3%戊巴比妥钠1.0 m L/kg麻醉,经口插入气管导管连接动物呼吸机机械通气,潮气量10~12 m L/kg,频率30~35次/min。监测心电图(ECG)、经皮脉搏氧饱和度(Sp O2)和直肠温度,右耳中央动脉穿刺监测有创动脉血压(MBP)。经腹正中切口入腹腔,暴露并分离腹主动脉、左肾动脉及双侧髂总动脉。B、C两组实验动物通过阻断左肾下腹主动脉建立脊髓缺血模型。实验组(C组)在腹主动脉阻断期间(30 min)经导管匀速泵入依托咪酯乳剂(总量3 mg/kg)直至腹主动脉开放。缺血再灌注组(B组)则泵入同等容积的脂肪乳。缓慢开放腹主动脉及双测髂总动脉,观察腹腔无出血,甲硝唑冲洗腹腔后逐层关腹。所有实验兔清醒后拔气管导管归笼饲养观察。
1.4 标本采集与指标测定
各组动物分别记录阻断前、阻断后5、10、15、20、25和30 min及复灌后5、10和15 min平均动脉压(MBP)和心率(HR)。
A组8只动物、B组和C组于复灌0 h和2 h分别取8只动物于麻醉后取侧卧位,背部正中切口暴露脊髓硬膜,分离出脊髓L4~6节段,剥离其表面的血,迅速称重,按质量比1∶4制备组织匀浆,置入-70℃冰箱保存,采用放射免疫分析方法分析测定脊髓组织内IL-6水平,分析步骤按试剂盒要求。
B组和C组各余下的10只动物,于复灌后48 h根据TARLOV评分标准(0级无可觉察的后肢活动;1级可觉察的微弱后肢活动,但无法对抗重力;2级后肢能对抗重力但无法站立;3级可站立但无法跳跃;4级后肢功能完全恢复,能正常跳跃)行动物神经行为学评分。神经行为学评分完毕,立即在麻醉下迅速取出实验动物L4~6节段脊髓组织,10%福尔马林浸泡固定48 h,石蜡包埋,沿脊髓横截面行连续切片,厚5μm,行HE染色,光镜下观察脊髓组织的病理形态学改变。在400倍光镜下的各脊髓切片中,随机选取1个前角,自该前角顶端至中央管作直线。沿该线连续采集3个视野,计数脊髓前角正常神经元的数目,累计L4~6节段的正常前角神经元总和。正常脊髓前角神经元标准:细胞呈多角形,胞浆染为红色,内有正常的尼氏体;胞核居中,呈圆形,轮廓清晰,核仁明显;胞体直径30~60μm。
1.5 统计学方法
计量资料以均数±标准差表示,采用方差分析进行比较,组间差异采用两两比较的q检验;组间脊髓前角正常神经元计数及神经功能评分采用非参数秩和检验(Kruskal-Wallis)进行比较。P<0.05认为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 一般情况
所有动物都顺利完成手术。各组血压和心率维持基本稳定。两组之间各时点MBP和HR比较差异无统计学意义(P>0.05)。
2.2 神经行为学评分
复灌后48 h,B组有9只动物评分0~1级,截瘫率为90%,C组中有3只评分0~1级,截瘫率为30%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。术后C组新西兰大白兔后肢神经功能评分明显高于B组(P<0.05),见表1。
注:与B组比较,P<0.05
2.3 脊髓前角正常神经元计数
脊髓组织切片发现,出现截瘫的动物脊髓组织广泛坏死,出血,正常神经元计数减少或缺失,剩余的神经元为核固缩或是核溶解,尼氏体模糊或消失(见图1);神经功能恢复较好的动物,可见到相对多的正常神经元,尼氏体存在(见图2)。C组L4~6节段脊髓组织前角正常神经元计数为10.5(4~11.5),多于B组的2.4(0~4.3),差异有统计学意义(P<0.05)。
2.4 脊髓组织IL-6水平变化
脊髓组织IL-6水平(见表2)。复灌后2 h,B、C两组脊髓组织内IL-6水平均高于复灌0 h(P<0.05);复灌后0 h和2 h,B组脊髓组织内IL-6水平均高于A、C两组(P<0.05),而复灌后0 h,C组与A组比较差异无统计学意义(P>0.05)。
注:1)与A组比较,P<0.05;2)与B组比较,P<0.05
3 讨论
目前对脊髓保护的研究通常采用兔作为缺血再灌注模型,而选择缺血时间长短不一。姚俊岩等[5,6]在ZIVIN经典模型的基础上进行了一定程度的改进,成功地建立了左肾下腹主动脉阻断的脊髓缺血再灌注损伤模型,确定此模型的脊髓耐受缺血的时限为30 min。本实验采用全身麻醉下兔肾下腹主动脉阻断的成功模型,在阻断期间局部灌注依托咪酯,从神经行为学、脊髓病理改变和炎症因子等指标判断其能否有效减轻脊髓缺血再灌注损伤。本实验结果表明,依托咪酯灌注组比脂肪乳灌注组有更好的神经功能转归,而且脊髓组织的病理学改变也与神经行为学评分结果相一致。
依托咪酯作为一种静脉麻醉药,已被证实对脑、脊髓等组织器官中的缺血再灌注损伤具有保护作用。但是这些研究都是基于全身用药方式,并通过测定全身的炎症反应来评价其对组织器官的保护作用。本研究改变传统给药方式,经股动脉置入导管,向腹主动脉阻断部位远端灌注一定剂量的依托咪酯乳剂,观察脊髓组织局部的炎症反应,能更准确地反应靶器官的损伤情况,结果更加真实可靠。本研究结果同时表明,行兔左肾动脉下腹主动脉阻断后,依托咪酯处理组与对照组血流动力学稳定,各时点平均动脉压和心率间差异均无统计学意义,表明经腹主动脉远端持续泵入依托咪酯乳剂(总量3 mg/kg)30 min对兔循环功能无明显影响,临床应用更具可行性。
白细胞介素-6(IL-6)是缺血再灌注损伤产生过程中的主要致炎性因子[7,8]。而致炎性因子的级联反应是缺血再灌注损伤时炎症反应的表现之一,因而可以通过IL-6水平预测缺血再灌注损伤中炎症级联反应的程度。本研究结果显示,腹主动脉阻断30 min,脊髓组织中IL-6的水平明显升高,且复灌后2 h的水平高于复灌即刻,提示脊髓组织缺血再灌注损伤可能与局部组织的炎症反应有关。
本研究经腹主动脉阻断远端持续泵入3 mg/kg依托咪酯乳剂,药物通过腹主动脉的分支腰动脉直接进入脊髓组织,在脊髓组织内直接发挥其灭活清除自由基、抑制MDA形成的作用,有效地抑制致炎因子的合成和释放,从而抑制致炎性细胞因子的级联放大反应,显著改善脊髓缺血再灌注后的神经损伤,降低截瘫率,起到对脊髓的保护作用。
综上所述,以3 mg/kg依托咪酯乳剂经腹主动脉灌注能有效减轻脊髓缺血再灌注损伤,其保护作用可能与抑制局部炎症反应有关。
摘要：目的 观察依托咪酯对兔缺血再灌注损伤脊髓的保护作用。方法 60只新西兰大白兔,随机分为3组:假手术组(A组,n=8)不阻断腹主动脉血流;缺血再灌注组(B组,n=26)阻断腹主动脉血流30 min;实验组(C组,n=26)经腹主动脉阻断远端持续泵注依托咪酯3 mg/kg。记录复灌48 h后兔神经行为学评分并取L4～6节段脊髓组织计数脊髓前角正常神经元。复灌0 h及2 h分别取L4～6节段脊髓组织测定IL-6水平。结果 复灌后48 h,C组截瘫率低于B组;C组脊髓前角正常神经元计数较B组增加。复灌后2 h,B、C两组脊髓组织内IL-6水平均高于复灌0 h。复灌后0 h和2 h,B组脊髓组织内IL-6水平均高于A、C两组;而复灌后0 h,C组与A组比较差异无统计学意义。结论 依托咪酯腹主动脉灌注可以减轻脊髓缺血再灌注损伤,可以抑制局部炎症反应。
关键词：依托咪酯,兔,脊髓,缺血再灌注损伤
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脊髓缺血再灌注损伤 篇5
[关键词] 心肌缺血再灌注损伤；信号通路；靶点；抑制剂
[中图分类号] R285 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2012）01-30-04
Progress in molecular mechanisms to repair myocardial ischemia-reperfusion injury and its inhibitor
OUYANG Yue1 ZHANG Jinghong1,2
1.Institute of Molecular Medicine,Huaqiao University,Quanzhou 362021,China;2.Molecular Medicine Engineering Research Center of Ministry of Education,Huaqiao University, Quanzhou 362021,China
[Abstract] At the present time,the incidence of ischemic heart disease has took the premier place of Primary heart disease.Among the rest,myocardial ischemia-reperfusion injury which accounts for about over 50%.for this reason, The development of the multi-target drugs to repair myocardial ischemia-reperfusion injury is of great value and significance on prevention and treatment of heart disease.Investigate the molecular mechanism of MIRI and develop inhibitors which against various targets involve with MIRI to regulate multiple signaling pathways,It provides a new idea for further elucidate the molecular mechanism of MIRI and develop related drugs.
[Key words] Myocardial ischemia-reperfusion injury;Signal passage;Target spot;Inhibitor
1960年，Jennings等[1]首次提出了心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia reperfusion injury，MIRI）的概念，并把这种在心肌缺血基础上恢复血流后组织损伤加重、甚至发生不可逆损伤的现象称为心肌缺血再灌注损伤。如何减轻MIRI已成为防治缺血性心脏病和临床心脏病介入性治疗的一个重要课题。其发病机制可能与氧自由基、钙超载、炎症反应、细胞凋亡、蛋白激酶途径等有关[2-3]，一些关键的调控分子包括细胞间粘附分子（intercellular adhesion molecule，ICAM）、一氧化氮合酶（NOS）、线粒体ATP敏感性钾通道（mitochondrial KATP channel，mitoKATP）和线粒体通透性转换孔（mitochondrial permeability transition pore，mPTP）等与其分子机制密切相关，目前研究的重点是通过激活再灌注损伤挽救激酶（reperfusion injury salvage kinase，RISK）途径、促进mitoKATP通道开放、抑制mPTP开放，从而减轻MIRI。近年来，新靶点层出不穷，围绕着这些新的靶点，新的药物抑制剂、小分子靶点抑制剂、中药单体抑制剂和中药复方抑制剂等也取得了长足的进展，并在实验动物模型上取得了一定的效果，现报道如下。
1 心肌缺血再灌注损伤的分子修复机制
1.1 抑制线粒体通透性转换孔的开放[4]
mPTP是位于线粒体内的一种非特异性通道，正常状态下和心肌缺血时，mPTP呈关闭状态并阻止小分子物质和水跨膜移动，在应激情况下其开放可导致水和溶质非选择性地进入线粒体内膜，使线粒体膜电位失衡，氧化磷酸化解偶联，导致ATP缺乏，线粒体肿胀和细胞死亡。许多研究证实在MIRI中，钙超载、氧化应激及各种信号级联通路最终都导致mPTP开放，使线粒体内膜间隙中的细胞色素C和凋亡诱导因子及释放到胞质中，从而启动细胞凋亡通路，导致心肌细胞凋亡。
1.2 激活线粒体ATP敏感性钾通道
心肌细胞中存在两种KATP通道，一种是位于线粒体上的线粒体KATP通道，另一种是位于心肌细胞表面的肌膜KATP通道。线粒体KATP通道开放剂能模拟缺血预处理所引起的心脏保护作用[5]。mitoKATP的开放一方面使线粒体膜去极化，降低线粒体外Ca2+内流的驱动力，减少Ca2+超载所引起的损伤，从而达到保护心肌缺血再灌注损伤的作用。另一方面mitoKATP的开放释放活性氧簇（ROS），增加NO释放量并激发链式激酶反应，使mitoKATP长时间保持开放状态，达到抑制MIRI的作用[6]。
1.3 激活RISK信号通路
如图1所示：Hausenloy等[7]首次将磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol-3-OH linase，PI3K）和细胞外信号调节蛋白激酶（extra-cellular signal-regulated protein kinase，ERK）两个信号通路合称为再灌注损伤挽救激酶信号通路，即RISK信号通路。该通路的调控包括以下两个方面：（1）PI3K-Akt信号通路。当上游信号刺激细胞膜表面时，PI3K将胞外信号传递给下游的靶蛋白Akt，并激活Akt使其从胞膜释放进入细胞质，活化的Akt主要通过促进糖原合成激酶-3β（GSK-3β）磷酸化使其失活，磷酸化eNOS促进内源性NO生成并激活雷帕霉素（mTOR）及其下游的p70S6K，最终作用于线粒体和钾离子通道，减少mPTP开放和增加钾离子通道开放进而发挥保护MIRI的作用[8]。（2）ERK主要由Ras/Raf/MEK/ERK等构成，药物与细胞膜上的受体酪氨酸激酶结合后，将信号传递给Ras，Ras发生膜转位并激活Raf，活化的Raf通过磷酸化激活ERK。ERK通过激活mitoKATP促使线粒体ATP敏感性钾通道开放并增加活性氧ROS生成，ROS可激活线粒体ERK和PKC同工酶PKCε。同时ROS还可激活线粒体ERK，进一步激活核糖体蛋白S6激酶（p70S6K）从而发挥保护MIRI的作用。见图1。
图1 药物通过RISK信号通路修复心肌缺血再灌注损伤的途径
2 心肌缺血再灌注损伤抑制剂的研究进展
目前，针对MIRI相关信号通路的靶点药物如表1所示。主要包括中药单体、中药复方、小分子抑制剂。其中小分子抑制剂的作用最为显著，但其缺点是作用靶点单一，且价格昂贵。而中药制剂可以通过调控GSK-3β、mTOR、PKC、mitoKATP、和mPTP等多靶点的调控作用修复MIRI。因此，从中药抑制剂中筛选MIRI信号通路相关的多靶点药物来修复MIRI将具有重要意义。下面对近年来发现的一些作用于MIRI相关靶点的抑制剂作一总结。
2.1 小分子靶点抑制剂
2.1.1 ATP敏感性钾通道开放剂和抑制剂 （1）线粒体ATP敏感性钾通道开放剂：尼克地尔（nicorandil，Nic）是目前唯一临床使用的有硝酸酯样作用的钾通道开放剂，一方面Nic通过激活线粒体KATP通道使线粒体内部去极化，降低线粒体的钙超载；另一方面激活KATP可抑制消耗细胞内ATP，减少释放乳酸脱氢酶并保存细胞内ATP，保护MIRI[20]。大量研究表明在心肌缺血初期，若给予激发线粒体ATP敏感性钾通道开放的药物（如吡那地尔、克罗卡林、二氮嗪），可减少梗死范围[21]。二氮嗪（diazoxide）是线粒体KATP通道特异性开放剂，mitoKATP通道开放伴随活性氧ROS生成的增加，可激活PKC，减少细胞凋亡，发挥保护MIRI的作用[22]。见图2。（2）心肌细胞膜ATP敏感性钾通道抑制剂：Vajda等[23]报道，与对照组相比，静脉注射选择性KATP抑制剂HMR1883的MIRI大鼠存活率显著提高。上述研究结果显示HMR1883（图2）对MIRI有一定抑制作用，但具体机制仍有待深入探讨。
2.1.2 mPTP抑制剂 Zhao等[24]发现环孢素A（cyclosporin A，CsA；图2）可阻止心肌缺血再灌注期间mPTP的开放。Xie等[25]将大鼠分为2组进行在体缺血再灌注，分别静脉注射给予CsA或空白溶剂，结果显示，相比于溶剂对照组，CsA组大鼠心肌梗死面积显著减少，提示CsA可能通过抑制mPTP的开放来保护MIRI，且证明mPTP在MIRI中起着至关重要的作用。
2.2 中药单体抑制剂
Yi等[26]证明人参总皂苷（TGS）在Langendorff离体大鼠心
肌缺血再灌注损伤模型中，能通过激活PI3K/Akt-eNOS信号通路调控PI3K、p-Akt、和p-eNOS等靶蛋白的活性，增加大鼠心脏冠脉流量，从而修复MIRI。Wang等[27]也发现人参皂苷Rb1单体在大鼠心肌缺血再灌注损伤模型中可通过激活PI3K-Akt信号转导通路调控p-Akt的表达，改善大鼠心肌缺血再灌注损伤。人参皂苷Re为人参三醇类皂苷，最近的研究表明其能通过下调ICAM-1的表达改善大鼠MIRI[28]。见图2。
2.3 中药复方抑制剂
关凤英等[12]的研究证实黄芪注射液能够改善心肌细胞再灌注损伤的细胞结构变化，减轻细胞损伤程度，对MIRI有一定的抑制作用，且线粒体ATP敏感钾通道抑制剂5-HD可减轻其对心肌损伤的保护作用，说明线粒体ATP敏感钾通道的激活可能是黄芪注射液修复MIRI的机制之一。
3 展望
综上所述，目前已对MIRI的分子机制进行了广泛研究，以其相关信号通路中的蛋白作为治疗靶点筛选各种抑制剂已成为新药研发的热点，也为MIRI的治疗提供了新思路。尽管已发现了一些针对MIRI相关靶点的抑制剂，并在MIRI的研究中取得了一定的进展，然而其作用靶点单一，且目前对其疗效、制剂、免疫抑制等方面仍存在许多问题，临床用药受到限制。因此，筛选多靶点、免疫抑制作用小的修复MIRI的药物成为迫切需要。而传统的天然药物抑制剂（中药单体和中药复方抑制剂）不仅对MIRI有很好的抑制作用，还兼有抗病毒，调节免疫和增强心功能等多方面的作用，同时具有副作用小、来源广泛、多靶点协同作用等优势。但目前已知的对MIRI具有良好药效的中药单体及中药复方尚少，因此仍需对MIRI的分子机制进行更深入、更广泛、更细致的研究，根据其相关作用靶点和作用途径开发有效的中药单体或中药复方制剂，为临床用药提供理论依据。
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肾缺血再灌注损伤的研究进展 篇6
1 氧自由基与脂质过氧化
自由基是指电子轨道上有不配对电子的原子、分子, 包括氧自由基 (OFR) 系列如超氧阴离子 (O2-) 、羟自由基 (·OH) 、过羟自由基等和脂质自由基系列如烷自由基、烷基自由基、脂质过氧化物自由基等。氧自由基的形成可分为外源性和内源性。外源性主要是指能进行氧化还原反应循环的酮类、硝基类等物质。此外, 药物氧化、吸烟、电离、光照、热辐射冲击和氧化谷肤甘肤的物质、环境污染等外源性因素均能在细胞内形成自由基。内源性主要是指生物体内代谢过程中产生的自由基。正常状态下生物体的能量主要来自电子传递系统。在电子传递过程中, 分子氧完全还原成水的同时释放能量, 如果还原不完全则形成氧自由基。人体摄取的氧是接受线粒体内细胞色素体系传递的电子, 大部分接受四个电子还原成水, 其中仅有1%-2%的氧接受一个电子后漏出 (称为单价泄漏) 形成氧自由基。此时产生的氧自由基很少, 且组织细胞内的超氧化物歧化酶 (SOD) 、过氧化氢酶 (CAT) 、谷肤甘肤过氧化氢酶 (GSH--Px) 和髓过氧化物酶等能迅速清除氧自由基, 故组织细胞内不会出现氧自由基的堆积[5]。动物实验己经证实, 在细胞缺血的极早期, 细胞氧化磷酸化能力减弱, ATP合成减少, 离子泵功能部分失效, 特别是Na+-K+-ATP酶功能减弱, 使大量Na+内流, K+外流, 细胞膜电位下降, 产生去极化, 从而造成电压依赖性Ca2+通道开放, 大量Ca2+内流, 细胞缺血同时导致兴奋性氨基酸如 (谷氨酸、天冬氨酸等) 在细胞间隙的大量蓄积, 而后者又加剧Ca2+内流和细胞膜去极化, 导致细胞内Ca2+超载, 氧自由基增多, 其具体机理为: (1) 缺血后的肾脏血管内皮细胞以及中性粒细胞是产生氧自由基的主要细胞, 而在细胞中线粒体又是产生氧自由基的主要部位, 其中黄嘌呤氧化酶所催化的反应是氧自由基的主要来源。在电子传递链中复合物I脱氢酶 (NADH脱氢酶) 和复合物I I I (辅酶Q-细胞色素C还原酶) 是氧自由基产生的主要位点。肾缺血时由于缺乏相关的原料物质和氧气, 线粒体氧化磷酸化脱藕联, 辅酶Q循环中不稳定的中间产物半醌阴离子可以快速而且非酶性催化地将单电子直接传递给O2, 致使经单电子还原生成超氧阴离子 (O2-) 增多, 而经接受4个电子与4个氢离子还原生成水减少, 同时在这种病理条件下, 细胞内PH值降低, O2-更容易岐化成H2O2。同时肾脏组织中存在着黄嘌呤氧化酶, 它在细胞内以黄嘌呤脱氢酶 (D型) 的形式合成, 正常情况下D型占总活性的90%以上, 次黄嘌呤在分子氧的参与下经黄嘌呤氧化酶催化生成尿酸和大量的氧自由基[6~7]。而此时, 肾脏组织细胞内的SOD, CAT, GSH-PX等氧自由基清除剂由于在缺血缺氧状态下生成减少、活力下降, 不能有效的清除氧自由基, 导致肾脏组织内氧自由基的大量堆积。 (2) 细胞内的Ca2+增高, 激活磷脂酶C和A2, 分解膜磷脂产生大量花生四烯酸 (AA) , 后者进一步分解, 不饱和脂肪酸经前列腺素合成酶催化生成烟酰胺腺嘌呤二核苷酸或磷酸烟酰胺腺嘌呤二核昔酸, 此过程中生成大量氧自由基;细胞内Ca2+超载, 激活Ca2+依赖的蛋白激酶, 使黄嘌呤脱氢酶转化为黄嘌呤氧化酶, 同时肾缺血时ATP的降解产物次黄嘌呤和黄嘌呤增多。在黄嘌呤氧化酶作用下, 次黄嘌呤转变为黄嘌呤进而转变为尿酸。这两步反应中, 都以O2为电子受体产生大量O2-和H2O2。 (3) 再灌注时由于细胞中线粒体破坏殆尽, 不能利用氧进行有氧氧化产生ATP, 血液再灌注突然带入的氧一方面在黄嘌呤氧化酶的作用下产生O2-, 另一方面使缺血期因氧耗竭而停滞的烷自由基向脂质过氧化物自由基反应得以延续, 产生新的自由基, 进一步攻击不饱和脂肪酸[8]。此外, 再灌注带入的Ca2+可提高黄嘌呤氧化酶的活性, 促进O2-迅速转化为·OH, 重新激发自由基连锁反应, 造成更多的损害。自由基具有很高的化学活性, 可快速攻击其他化合物的分子并产生更多的自由基, 自由基破坏膜结构中蛋白成分、引起膜脂质过氧化, 导致膜损伤、线粒体功能障碍、溶酶体破裂、细胞溶解和组织水肿等一系列损害作用, 称之为自由基连锁反应。近年来大量研究证实, 自由基连锁反应是导致肾缺血再灌注损伤的主要原因[9], 其具体损伤机制可概括为: (1) 对生物膜的损害。生物膜包括细胞膜、线粒体膜和溶酶体膜等, 内含有丰富的多不饱和脂肪酸, 氧自由基因为具有极强的氧化活性, 极易攻击多不饱和脂肪酸生成多种脂质过氧化物, 导致生物膜多不饱和脂肪酸蛋白质比例失调, 生物膜的流动性下降和通透性增高[10~11], 进而造成生物膜的功能障碍。细胞膜受损后细胞肿胀, 细胞完整性破坏, 功能部分或全部丧失。线粒体膜受氧自由基攻击后发生肿胀、溶解、ATP合成障碍。溶酶体受攻击后出现溶酶体溶解破裂, 引起细胞自溶。由于线粒体是产生氧自由基的主要细胞器, 所以线粒体膜较细胞膜和溶酶体膜受损更严重。 (2) 自由基增加引起的核酸损伤 (Oxydative DNA Lesions, ODL) , 可以导致DNA链的断裂、交联导致细胞正常功能受损, 最终细胞死亡。其可能的方式为:自由基攻击核酸碱基, 造成碱基的化学修饰;攻击核糖与碱基之间的糖苷键, 形成无嘌呤无嘧啶位点;攻击核糖与磷酸基团之间的磷酸键, 形成带有3'-OH末端或3'-磷酸末端的DNA断裂片段:攻击核糖, 形成3'-磷酸糖基末端;氧自由基可以导致DNA链间或DNA与蛋白质之间产生交联。 (3) 氧自由基可诱发细胞凋亡, 其途径可能有以下两条:氧自由基可导致细胞内线粒体、内质网膜Ca2+迁移和质膜Ca2+-ATP酶活性下降或失活而导致细胞浆内Ca2+浓度升高。激活Ca2+/Mg2+依赖性核酸内切酶, 导致DNA链的断裂。从而触发细胞凋亡。氧自由基可以影响与细胞凋亡有关的基因表达[12,13]。
2 Ca2+超载 (Calcium Overload)
细胞内Ca2+作为第二信使、代谢调节因子和膜稳定剂参与细胞膜生物电和胞内生化过程, 对修复基因转录核蛋白磷酸化和细胞凋亡过程均有影响, 在细胞正常机能活动中起重要作用。生理情况下, 细胞内的游离Ca2+浓度很低, 只有细胞外的1/10, 这依赖于细胞膜对Ca2+相对无通透性及细胞对Ca2+的主动排出来维持, 后一过程需消耗能量。多种转运系统参与了细胞的调节, 现己证实肾小管上皮细胞膜和细胞质内均存在钙的转运系统, 早期研究证实肾缺血再灌注损伤时可出现大量Ca2+内流, 且Ca2+内流的出现主要发生在恢复再灌注时。肾缺血后, 肾小管上皮细胞内Ca2+浓度明显升高, 从而使细胞内磷脂酶活力增加, 更多磷脂酶分解为游离脂肪酸, 另外Ca2+浓度增加使Ca2+-ATP酶活力增加, 从而消耗了更多ATP, Ca2+本身又可通过氧自由基途径造成组织损伤。缺血后再灌注期细胞内钙的变化与氧自由基的产生不同, 再灌注早期比缺血期有所减少, 这可能是与使Ca2+-ATP酶的活性一定程度恢复有关, 再灌注后期逐渐增高, 这可能是由于细胞膜结构的破坏所致。细胞内Ca2+超载的原因有以下几点: (1) 当肾缺血、缺氧时, 细胞氧化磷酸化能力减弱, ATP合成减少, 离子泵失效, 特别是Na+-K+泵功能的降低, 使大量的Na+内流, K+外流, 细胞膜电位下降产生去极化, 从而造成电压依赖性钙离子通道开放, 大量Ca2+内流; (2) 细胞缺血时, 由于K+和蛋白激酶C等作用, 兴奋性氨基酸、内皮素和NO等物质释放增多, 可使受体依赖性Ca2+通道开放, 也使大量Ca2+内流; (3) 胞内Ca2+增加, 可激活磷脂酶, 产生甘油二醋、前列腺素、三磷酸肌醇等物质, 协同兴奋性氨基酸代谢型受体激活配体操控性钙离子通道 (Recpter Operatedea Ca2+Channels, ROCC) , 使细胞内质网储存的Ca2+释放, 造成Ca2+超载; (4) 肾缺血、缺氧时, 产生大量的自由基, 使膜脂质过氧化, 损伤了脂质膜, 影响膜的通透性及离子转运, 引起Ca2+内流。钙超载主要是通过以下环节参与缺血再灌注损伤: (1) 激活膜结构中的钙依赖性磷脂酶, 破坏膜结构; (2) 干扰线粒体的氧化磷酸化偶联, 使能量代谢发生障碍; (3) 改变微管微丝的收缩作用和结构, 破坏细胞骨架, 最终导致细胞损伤; (4) 引发细胞调亡, 可能的机制:钙超载后激活Ca2+依赖性的核酸内切酶, 从而使双链DNA在核小体连接部位裂解, 形成DNA分块;钙超载可激活蛋白酶C, 使G蛋白磷酸化, G蛋白减少, 胞内CAMP增加, 导致细胞凋亡。钙超载与氧自由基的产生是肾IRI的重要因素, 二者相互影响, 协同作用, 导致肾IRI加重。细胞内产生过量的氧自由基可直接损伤细胞膜, 导致细胞膜通透性增加, Ca2+内流。而细胞内Ca2+浓度增高, 又可激活Ca2+依赖性蛋白酶, 后者可催化黄嘌呤脱氢酶转化为黄嘌呤氧化酶, 而黄嘌呤氧化酶在有氧条件下能促进次黄嘌呤分解为尿酸的同时产生大量的氧自由基。
3 激素、免疫调节
恢复缺血肾组织的血供后.常发现局部仍无血流经过, 产生这种无血流现象的机制目前认为系激素与免疫分子的作用导致肾微循环障碍、细胞肿胀等引起。激素主要有内皮素 (ET) 、儿茶酚胺、肾素-血管紧张素、前列腺素和一氧化氮等。ET、儿茶酚胺、血管紧张素Ⅱ等主要是通过收缩肾小动脉、降低肾小球滤过率发挥对肾功能的损害作用。实验发现ET与其受体亲和力随再灌注时相的延长而增加;ET受体拮抗剂可明显增加肾缺血再灌注后的肾皮质血流, 减轻肾功能损害及组织学改变。改善GFR。一氧化氮是左旋精氨酸 (L-arginine) 在一氧化氮合成酶 (NOS) 的作用下合成的。研究发现, NOS分为两大类, 即原生型NOS (constitutive NOS, CNOS) 和诱生型Nos (inducible Nos, i Nos) [14~15], NO在肾脏中的作用有直接和间接两种, 前者由c NOS介导, 而后者由i NOS介导[16~18]。肾缺血再灌注后, i NOS的表达上调, 使NO产生增加, 当肾局部NO浓度过高时, NO的间接作用 (即毒性作用) 表现明显, 从而对肾脏造成损伤。
4 细胞凋亡
鲍磊[19]研究显示证实神经细胞凋亡在脑缺血再灌注损伤中起十分重要的作用, Chatterjee等[20~21]发现肾IRI能激发较为广泛的细胞凋亡现象, 其病理变化主要表现为皮髓质交界部的肾小管发生细胞凋亡, 细胞凋亡在再灌注12h后逐渐下降, 至再灌注72h时尚可见到无核物质的凋亡小体, 最终被再生的肾小营上皮挤入管腔而排出, 并非被巨噬细胞吞噬清除。由此认为肾小管上皮凋亡是缺血再灌注后引起肾小管上皮细胞死亡的一个重要原因, 以控制肾小管上皮细胞的过度增殖.尽可能保证肾小管管腔免于堵塞而处于开放状态。
心肌缺血/再灌注损伤中的自噬 篇7
早在上世纪50年代, 自噬体 (autophagosome) 结构已被科学家Christiande Duve通过电镜观察到, 并首次提出了“自噬”的概念, 本意为自体吞噬 (self-eating) , 简称为自噬, 同时被称为Ⅱ型程序性细胞死亡。它是真核生物体内普遍存在的一种利用溶酶体清除受损、变性或衰老的长寿命蛋白和细胞器的现象[1]。
根据待降解物被运送到溶酶体的途径不同, 可将自噬分为:巨自噬 (macroautophagy) 、微自噬 (microautophagy) 、 (3) 分子伴侣介导的自噬 (chaperonemediated autophagy, CMA) 需要指出的是CMA的底物是可溶性蛋白质分子, 具有选择性, 而巨自噬和微自噬则不具有明显选择性。然而巨自噬是真核细胞内降解物质的主要方式之一, 其除了降解长寿命蛋白外, 也是唯一可以降解完整细胞器 (如线粒体) 的方式。如无特殊说明, 以下所述自噬均指巨自噬。自噬过程通常分为四步: (1) 分隔膜的形成; (2) 自噬体的形成; (3) 自噬溶酶体的形成; (4) 内容物的降解。
2 自噬体形成的分子机制
自噬过程包含一系列复杂步骤, 它的激活起始于自噬体的形成。该过程由一系列进化保守的蛋白 (Atg proteins) 调控。如今已知诱导自噬发生的通路有多种, 但多数仍不甚清楚, 下面以一种研究较为明确的通路为例说明自噬体形成的分子机制 (如图1) 。
Beclin-1 (ATG6) 是P13K复合体的一部分, 在自噬体形成的初期调控其他Atg蛋白在分隔膜定位。此外, Atg5-Atgl2和微管相关蛋白1轻链3 (microtubule associated protein 1 light chain 3, LC3) -磷脂酰乙醇胺 (phosphatidy lethanolamine, PE) 两个耦联系统在自噬体形成过程中也至关重要。Atgl2首先被Atg7激活 (类似E1酶) ;然后被转移至Atgl0 (类似E2酶) 。而Atgl2以赖氨酸残基与Atg5共价结合后, Atgl0则被释放。最后, Atg12-Atg5复合体以非共价结合方式再与Atg16作用, 进而通过募集LC3-PE来启动分隔膜的扩展延伸。另外, LC3前体合成后, 被半胱氨酸蛋白酶Atg4分裂成LC3-I。LC3-I再被Atg7活化后传递给E2酶样蛋白Atg3, 它可以促进LC3-I与PE共价结合形成LC3-PE复合体 (LC3-Ⅱ) 。Atg5-Atg12-Atg16复合体从成熟自噬体分离, 同时LC3-PE定位于自噬体内外膜上[2], 使之成为自噬体的标志分子, 而LC3-PE/LC3-I的比值增加, 也能表示自噬体产生。
3 心肌缺血/再灌注 (MI/R) 过程中的自噬
3.1 MI/R过程中可能的自噬诱导因素
3.1.1 饥饿状态
已有研究表明, m TOR (mammalian target of rapamycin) 是细胞内营养和能量水平的感受器, 对细胞的生长和功能表达具有重要的调控作用, 是自噬的负性调控分子, 可以抑制自噬的发生。而细胞的饥饿状态可以抑制m TOR[3], 从而诱发自噬。Hardie等[4]在实验中发现, 细胞在饥饿状态下增加了ATP的消耗而其生成减少, 使细胞内AMP/ATP的比值增加。此变化可诱导AMP激活的蛋白激酶 (AMP-activated protein kinase, AMPK) 活化[5]。AMPK可通过磷酸化TSC-2增强TSC-1/TSC-2复合体对m TOR的抑制作用, 最终产生自噬。
3.1.2 Bnip3的产生
在缺血环境下, Bnip3被诱导, 它是促细胞凋亡Bcl-2家族BH3-only亚家族成员之一, 与Bcl-2和Bcl-XL竞争结合Beclin-1, 并激活Beclin-1, 使其附着于游离膜上, 进而募集Atg12-Atg5-Atg16复合物和LC3, 最终可诱导自噬的发生。
3.1.3 钙离子浓度升高
众所周知, 缺血可以引起细胞膜钠钙交换通道开放, 导致细胞内钙离子浓度升高, 而有研究报道[6], 钙离子浓度增加可以诱导细胞产生自噬。
3.1.4 氧化应激
当再灌注后, 损伤线粒体可产生大量的活性氧自由基, 在氧化应激的状态下, 这些活性氧自由基可以造成由Bnip3调节的线粒体通透性转运通道 (mitochondrial permeability transition pore, m PTP) 开放并加重线粒体损伤, 同时损伤线粒体释放细胞色素C等促凋亡信号, 进而诱导自噬发生, 且Bnip3、m PTP开放和损伤线粒体均能独立诱导细胞自噬。
3.1.5 内质网应激 (ER stress)
MI/R过程中所致的细胞内各种应激状态可以导致错误折叠蛋白聚集于内质网内, 称为内质网应激。当细胞启动内质网应激时, 细胞将同时启动未折叠蛋白反应 (unfold protein response, UPR) 来代偿。当错误折叠的蛋白聚集于内质网时, 可以活化真核起始因子2a (e IF2a) , 从而激活细胞产生自噬[7]。并且有研究者用衣霉素造成干酵母内质网应激成功诱导自噬[8]。
3.1.6 Beclin-1的调节:
在再灌注过程中, Beclin-1表达明显上调[9]。而如上文所述, Beclin-1可以结合到游离膜上, 募集Atg5-Atg12-Atg16复合物和LC3到分隔膜, 从而诱导自噬发生。
3.2 自噬在MI/R中的双重作用
然而对于自噬在MI/R中的作用是保护性的还是损伤性的目前仍无统一观点。比如, 在猪的慢性缺血性实验中, 自噬作用的增强伴随细胞凋亡的下降, 而在发生凋亡的细胞中发现自噬被抑制;Araki等还发现雷帕霉素、他汀类药物等能够有力的诱导自噬, 对抗MI/R损伤, 减小心肌梗死范围, 从而发挥保护作用;Hamacher-Brady等也在体外研究证实, 自噬在MI/R中可以清除Bnip3 (一种引起细胞凋亡的蛋白) 导致的功能不全的线粒体;而且经过短暂的轻度缺血预处理 (ischemic preconditioning, IPC) 能够减轻随后严重的缺血/再灌注损伤, 而且发现IPC诱发了细胞的自噬, 如果抑制自噬, 则IPC的保护作用就会消除[10]。
以上实验都说明了自噬在MI/R中起到了保护的作用。但与之相反的是一些研究也证实自噬在MI/R中可以促进细胞死亡[11]。如以3-MA或敲除Beclin-1来抑制自噬可减少I/R中心肌细胞的死亡。并且把自噬水平降低的Beclin-1+/-杂交小鼠 (一种自噬能力降低的小鼠) 与野生型小鼠比较, 再灌注阶段细胞凋亡率下降, 心肌梗死范围缩小[12]。为何自噬会在不同的实验中表现出如此相反的结果呢?又或者说, 何时表现出保护作用, 何时表现出损伤作用呢?Matsui等[13]曾总结出:在缺血阶段自噬起保护作用, 而在再灌注阶段自噬却是有害的。然而自噬对细胞作用究竟是保护还是损伤, 目前众学者并无统一结论。除Matsui等的推测外还存在以下几种假设。
一方面, 从细胞水平讲, 自噬的作用性质很可能与其诱发因素有关[14]。既然自噬是细胞在缺血缺氧等营养缺乏的因素下被诱导, 是机体自我调节而产生的一种效应, 那自噬发生的作用就是为了缓解营养危机, 从而保护细胞。但在非营养缺乏状态下自噬被异常激活, 那么就很有可能产生损害作用。比如在再灌注阶段营养危机解除, 自噬显然是通过其他因素激活的, 这就很有可能造成细胞损伤。
另一方面, 从分子角度讲, Bcl-2 (一种抗凋亡蛋白) 和Beclin-1的相互作用来影响自噬的作用性质[20]。由于Bcl-2本身是一种抗凋亡蛋白, 而Bcl-2可负性调节Beclin-1诱导的自噬。所以自噬的作用是损伤还是保护则取决于两者之间的平衡。理论上也就是说, Bcl-2的下调既能诱导凋亡同时还可以激活Beclin-1诱导的自噬。这或许可以解释Matsui在研究中的发现:再灌注过程中Beclin-1表达明显增多, Bcl-2和Beclin-1失衡, Bcl-2相对减少致使抗凋亡作用减弱, 而对细胞整体来说, 凋亡作用大于自噬的保护作用 (假设自噬起保护作用) 。此时总的表现是促进了细胞凋亡, 而自噬仅仅是伴随着细胞凋亡。
4 结语
总结目前的研究成果, 得到的结论是:急性或慢性心肌缺血中自噬均被诱导, 并且再灌注阶段自噬得到进一步加强;对于一定程度的缺血, 自噬可能主要起保护作用, 而当进入再灌注阶段, 由于自噬的过渡激活则可能起损伤作用, 并且可能会加速细胞死亡, 称为“自噬性死亡”或“Ⅱ型程序性死亡”。然而目前对触发自噬的各种因素及其机制并未完全了解, 参与调控自噬的通路也不甚清晰。虽然自噬在缺血/再灌注过程中的具体作用研究者更倾向于Matsui等提出的结论, 但仍有许多问题需要回答。如今自噬已成为治疗心脏缺血性疾病的新一潜在靶点, 且为预防缺血/再灌注损伤提供了新的治疗策略。相信在不远的将来, 自噬的研究成果将会真正造福人类健康。
摘要：自噬是真核生物体内普遍存在的一种利用溶酶体清除受损、变性或衰老的长寿命蛋白和细胞器的现象。根据细胞内物质运送到溶酶体的途径不同, 可将自噬分为巨自噬、微自噬和分子伴侣介导的自噬。自噬可以通过多种途径被激活, 但其具体机制仍不十分清楚。在心肌缺血/再灌注过程中, 自噬被明显激活, 而其起到的作用究竟是保护性的还是损伤性的目前并无统一结论。但可以肯定的是急性和慢性心肌缺血均可诱导自噬, 并且再灌注阶段自噬得到进一步加强。如今自噬已成为治疗心脏缺血性疾病的新一潜在靶点, 且为预防缺血/再灌注损伤提供了新的治疗策略。
脑缺血再灌注损伤的几点意见 篇8
1 神经元能量代谢障碍
大脑的血液供给量大, 虽然大脑的重量只有人体的五十分之一, 但是静止状态下, 大脑血流量占了心脏总输出量的五分之一, 而且大脑没有能源的储备, 为大脑提供糖分养料, 必须继续采取正确的方式为大脑维持生理机能。因此, 在人的大脑在非常脆弱的器官循环依赖。直接参与细胞信号转导, 能源, 养分循环, 微循环障碍, 脑缺血再灌注的影响造成代谢紊乱和损害大脑的功能。资料表明阻断沙土鼠的颈总动脉, 并清晰可见软脑膜微血管收缩, 血管周的微渗漏可能成为再灌注并缺血, 可以提高到以前的水平的脑膜。人的大脑缺氧是很脆弱的, 大脑的神经细胞的葡萄糖氧化时间的能源太长, 因此脑缺血可能提供给神经元不可逆的损害。
2 脑细胞死亡
大脑是脑细胞 (神经元) 是一种网络组织, 通过脑细胞之间的信号转导功能。大脑结构的基本结构是简单和明确的。换言之, 是由神经胶质细胞在大脑的神经元和支持神经元的单一的功能。神经胶质细胞包括星形胶质和雪旺氏细胞。星形胶质细胞因其形状与海星类似而得名, 它是脑屏障和血管内皮细胞的重要构成。而许旺氏细胞薄片包裹轴突构成髓鞘。髓鞘导电, 所以它的电缆性能良好, 提高了动作电位的传导速度, 可使脑细胞之间的信息传递处于超导状态。当髓鞘出现故障、损坏, 则记忆、心理活动的思维会大大降低。资料阐述对缺血性脑损伤的研究与脑细胞死亡具有密切的联系, 通过在脑缺血再灌注损伤和坏死的细胞死亡的神经细胞, 尤其是延迟性神经元坏死。脑缺血再灌注损伤后, 大脑缺血, 脑神经元的死亡和灌注时间的相关性。大鼠脑缺血再灌注脑细胞的主要位置死后, 主要分布在缺血区, 在中间的缺血区脑细胞坏死, 随着缺血时间的增加, 在缺血细胞损伤, 坏死也逐渐增加, 在一个动态的细胞损伤演化机制和过程的脑细胞死亡, 过量产生的自由基和钙超载。对脑部缺血再灌注过程中的脑细胞的自由基损伤, 导致自由基的产生量大, 脂质过氧化的作用;中枢系统中含有不饱和脂肪酸, 易产生脂质过氧化, 脂质和蛋白质大分子交联;也可能使基地羟化, 核酸酸和染色体导致的神经元损伤甚至死亡的脑细胞。脑缺血再灌注损伤神经元的自由基可能与以下机制相关:大脑内毛细血管受损, 血液到达不了细胞, 细胞因缺少养分而受损。脑保护屏障遭到破坏。不饱和脂肪酸过度氧化致使细胞膜脂质、磷脂降解残缺。细胞膜通透性加大, 增大了细胞间钠离子、钙离子及较大分子的通过率。由于线粒体损伤扰动能量产生;溶酶体裂放出许多的可溶性酶, 致使神经细胞自己溶解。大量析出激动性氨基酸, 加速脑部神经元的坏死, 阻止干扰型氨基酸的生成, 导致大脑细胞结构的不可逆破坏。
3 线粒体功能障碍
线粒体膜由两层组成, 外膜光滑, 内膜向内折叠, 两层之间空腔, 线粒体是由中心基质。基质包含了所有的酶和三羧酸, 内膜有呼吸链酶和ATP酶。线粒体可以提供细胞生命活动形式, 是主要的氧化磷酸化和ATP制造工厂, 线粒体是以电子转移和磷酸氧化进行, 大脑缺血后, 产生大量大分子自由基和钙离子超载, 致使线粒体造成伤害。线粒体受损导致了呼吸系统呼吸障碍, 从而减少了ATP的合成, 能源供应减少, 脑细胞可能产生DNA障碍。大鼠试验研究表明[2], 脑缺血的早期, 在CA1区内锥体细胞减少, 细胞色素C氧化酶减少, 缺血再灌注时, 线粒体RNA和线粒体DNA氨基酸降低, 将影响到呼吸系统功能。此外, 线粒体磷脂膜分解, 并刺激脑细胞内的氧化反应, 最后促进了线粒体损坏, 甚至消失。总之线粒体功能会大幅度降低, 可能降低细胞代谢, 导致迟发性神经元死亡。
4 多巴胺的毒性
因钙超载引起的各种因素在细胞缺血再灌注后, 可以增加多巴胺的释放。与此同时, 因为能源消耗枯竭, 钠、钾离子活性减少, 细胞内钙离子依赖性钠离子浓度的变化, 未参与多巴胺转运蛋白质, 多巴胺的释放, 导致脑细胞外多巴胺积累。多巴胺和神经损伤, 其代谢产物提高氨基酸的兴奋性导致脑神经元凋亡。
5 讨论
在许多实验中研究脑部缺血再灌注损伤的大鼠, 其动物模型可以复制。大鼠实验模型常用的为:颈动脉缝合引流模型, 四血管阻断模型, 三血管阻断模型 (阻断两侧颈总动脉及基底动脉) , 颈动脉闭塞模型等。这些模式各有其优缺点, 要根据情况来选择。颈动脉引流对于循环, 呼吸系统影响较小, 手术方式是直视下, 可有效控制血流流速。动脉闭塞方法不必要开颅, 手术造成的创伤较小, 损伤的程度也较小, 适合生物的期后生存, 它的缺点是由于移动位置, 动物重量, 病灶深度和尼龙线粗细尺寸等各种因素的影响, 大脑中动脉的病灶部分块的位置, 导致在不同的实验模型的成功率, 脑梗死面积, 蛛网膜下腔大量出血, 动物早期死亡率, 不同种类动物的发病率等都难以确定。四血管阻断模型其优点是病理变化明确, 缺点是手术造成伤害较大。两侧颈总动脉闭塞模型手术方法简单, 但因为有两侧椎动脉进行供血, 使其代偿性增大, 使脑血流量有效性降低, 此方法对脑缺血损伤的试验不能进行。因血压低会导致心脏, 肾脏和全身器官缺血, 这样不利于脑缺血再灌注损伤的试验。
参考文献
[1]陈清棠.临床神经病学[M].1版.北京:科学技术出版社, 2000:178.
内质网应激与心肌缺血再灌注损伤 篇9
I/R的发生主要与氧自由基损伤、细胞内钙超载等作用有关[1]。
1.1 氧自由基损伤
当心肌细胞缺血(氧)时,抗氧化酶(如SOD、GSH-PX和CAT)和氧化剂(如VitE和A)系统清除氧自由基(oxygen free radical,OFR)的功能就会降低或丧失,OFR就会大量产生,从而造成心肌细胞损伤。
1.2 细胞内Ca2+超载
细胞内Ca2+超载在I/R的发病中起主要作用,细胞内Ca2+平衡紊乱后,心肌细胞内Ca2+超载,主要发生在再灌注期[2]。钙超载时激活蛋白酶和Ca2+依赖性磷脂酶,破坏生物膜的完整性,还可抑制线粒体ATP的合成,使得大量Ca2+以磷酸钙的形式聚集在线粒体中,破坏了线粒体的氧化磷酸化功能,从而导致酸中毒和心律失常等的发生。细胞内大量的OFR可直接损伤细胞膜,导致其通透性增加,引起钙超载;钙超载又激活Ca2+依赖性蛋白酶,后者催化黄嘌呤脱氢酶转化为黄嘌呤氧化酶,在有氧情况下黄嘌呤氧化酶能促进黄嘌呤分解为尿酸,同时产生大量的OFR[3]。因此,在I/R发生后,OFR和Ca2+超载两者相互促进形成恶性循环,加重心肌细胞损伤。
2 内质网应激
内质网应激是指由于某种原因导致细胞内质网内稳态失衡、生理功能发生紊乱的一种病理过程。但凡影响ER功能的因素都可以引起ERS。
3 心肌缺血再灌注诱导内质网应激
I/R过程中的氧自由基损伤、细胞内Ca2+超载等均可引起ER功能障碍,触发ERS反应。
3.1 内质网应激介导的保护效应
目前已发现未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)可缓解ERS。
3.1.1 未折叠蛋白反应
蛋白质的不正确折叠引发的内质网应激反应称未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)。它是一种适应性反应,可维持细胞内稳态。已知哺乳动物细胞中,能够感知ER腔内未折叠蛋白聚集的感受器主要为3种ER感应蛋白,即IRE-1(type-1 ER transmembrane protein kinase),ATF-6(activating transcription factor 6)和PERK(pancreatic Eif-2 kinase,pancreatic ER kinase)。正常情况下,这3种蛋白的ER腔内侧都与葡萄糖调节蛋白GRP78(glucose-regulated protein78)结合而无活性,当ER内环境发生改变,使腔内未折叠/错误折叠蛋白大量聚集时,GRP78马上与这3种蛋白解离而与未折叠/错误折叠蛋白结合使其正确折叠,同时活化PERK,IRE1,ATF6而触发UPR。
未折叠蛋白反应的三条通路:当UPR发生时,首先出现蛋白质合成下调,PERK自身聚合、自我磷酸化激活,进而磷酸化真核细胞翻译起始因子2α(eukaryotic initiation factor 2 alpha,eIF2α),使之不能结合GTP,阻止了起始蛋氨酸-RNA与核糖体结合,翻译启动受阻,减少蛋白质合成,缓解ERS。PERK是一个丝氨酸/苏氨酸跨膜蛋白激酶。在应激细胞中,作为UPR的第一步,PERK首先活化,然后活化的PERK磷酸化位于翻译启始复合物elF2-GTP-MettRNAiMet elF2α上的51位丝氨酸,抑制复合物中GDP和GTP的交换,从而抑制蛋白的翻译与合成。同时增强mRNA翻译,包括ATF4。ATF4是一个在启动子中可促进反式激活基因编码C/EBP-ATF元件的转录因子,包括GRP78,CHOP,STC2,ERO1和几个致炎因素。
ATF6是一个90kDa跨膜蛋白质。与其它内质网应激受体相比,ATF6在高尔基体被蛋白酶分解成活性的ATF-6转录因子,从而诱发ERS相关蛋白质的表达,这可进一步促进ER内未折叠/错误折叠蛋白质正确折叠、调节Ca2+稳态等,恢复细胞正常功能。
IRE-1的活化被认为是UPR的第三步。与PERK类似,在GRP78结合后IRE1发生低聚反应和反式自磷酸化反应,激活XBP-1mRNA,并在tRNA连接酶的作用下,使剪切后的XBP-1mRNA片段相互连接形成一个新的mRNA,然后XBP-1蛋白进入细胞核,形成异源二聚体,从而增强自身和其他ERS相关蛋白的表达。
3.1.2 内质网相关降解
ERAD是真核细胞内蛋白质质量控制的重要途径,当ERS持续存在或过强,凋亡酶合成就会增多,并激活凋亡酶级联反应诱发ERAD,去除受损细胞。
3.2 内质网应激介导的细胞凋亡
3.2.1 氧化应激
I/R时,由于体内抗氧化酶类和抗氧化剂被大量消耗,使OFR清除不足,再加上OFR大量产生,最终使OFR增多。增多的OFR既可损伤ER膜,影响细胞内环境稳定;又直接作用于ER内的功能蛋白,破坏ER内环境稳态,同时大量自由基也使ER内Ca2+释放,细胞内Ca2+超载,造成ER损伤。
3.2.2 Ca2+超载
ER有3种受体通道调节Ca2+浓度:钙泵向ER内摄取Ca2+,莱恩索受体(ryanodine receptor,RyR)释放Ca2+作用和三磷酸肌醇受体(IP3 receptor,IP3R)通道。通过膜上的Ca2+-ATP酶(sarco/endoplasmic reticulum Ca2+-ATPase,SERCA)等通过磷酸化作用调节受体通道对Ca2+摄取或通透状态。已有研究证明,I/R时SERCA表达水平下调,心肌对SERCA的作用也明显降低,影响及Ca2+通道,增加Ca2+外流、减少Ca2+摄取,造成细胞内Ca2+超载,反过来诱发ERS,加重I/R损伤。
3.2.3 心肌细胞能量代谢障碍
心肌缺血(氧)影响了线粒体的能量产物,使细胞膜通透性增加,细胞内水肿,加重Ca2+超载;同时也影响了那些内质网分子伴侣的正常生理功能。I/R后,因为合成ATP的物质大量丢失,使ATP合成减慢,引起细胞能量代谢加重,上述因素可共同作用诱发ERS。
3.2.4 心肌细胞凋亡
ERS诱发的细胞凋亡有三种途径:CHOP(C/EBP homologous protein)表达、JNK(cJUN NH2-terminal kinases,JNK)的激活通路和ER特有的半胱氨酸蛋白酶caspase12通路。CHOP/GADD153蛋白与JNK是联系内质网应激与细胞凋亡的重要中间信号分子,Caspase蛋白水解酶是执行细胞凋亡作用的终末分子[4]。CHOP/GADD153的转录上调是UPR中诱导凋亡的主要途径[5,6]。研究发现,内质网应激发生时,会激活JNK,从而使caspase-12活化,最终引起细胞凋亡。ERS激活IRE1/ASK1/JNK的同时可造成DNA损伤[7],进一步引起凋亡。ERS可通过多种途径激活Caspase-12,最终使细胞凋亡。
ERS是一种复杂的生理病理过程,涉及多种信号反应通路和多种基因的表达调控。近年来,ERS已经得到了越来越多的关注,随着对ERS研究的日益深入,必然会加强对心血管疾病的发生发展机理的认识。由于很多机制方面的研究目前尚未完全清楚,有待于更进一步探索。
摘要：心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)一直是临床研究的热门问题,与多种因素有关。一定程度的内质网应激(endoplasmicreticulum stress,ERS)可通过触发未折叠蛋白反应信号传导通路,激活ER分子伴侣等保护分子的表达,抵抗应激,保护细胞,若应激持续存在或过强,ERS则会启动细胞凋亡程序。本文主要就ERS与I/R之间的机制作一简要综述。
关键词：缺血/再灌注损伤,内质网应激,心肌
参考文献
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脊髓缺血再灌注损伤 篇10
【摘要】 目的：探讨血清转化生长因子-β1（TGF-β1）在肾缺血再灌注损伤患者中的表达规律及其与肾缺血再灌注损伤防治的关系。方法：收集我院收治的肾缺血再灌注损伤患者45例，招募健康志愿者22例，用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测其血清TGF-β1水平，结合患者临床资料进行分析。结果：所有患者肾缺血再灌注时TGF-β1水平明显高于健康人，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：肾缺血再灌注损伤患者血清TGF-β1水平明显升高，与肾功能呈负相关。临床上监测TGF-β1对判断缺血再灌注损伤患者的病情有较大应用价值。
【关键词】 缺血再灌注；血清转化生长因子-β1；表达规律
【中图分类号】 R692.5
【文献标识码】 A【文章编号】1044-5511(2011)09-0075-01
缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury, IRI)是指缺血的器官或组织在重新获得血流灌注或氧供后损伤进一步加重。目前临床上器官移植很难避免这一病理过程。肾脏是发生IRI常见的器官，必须采取有效措施防治肾脏IRI。由于IRI的发生机制目前并不清楚，因此减轻IRI的损伤是国内外医学上急需关注的重点。
转化生长因子-β1（TGF-β1)是一个具有多种生物学功能的细胞因子，对细胞增殖、分化、凋亡等过程具有重要的调控作用[1]。目前，TGF-β1在肾缺血再灌注损伤中的作用受到国内外研究学者的关注。本研究通过监测肾缺血再灌注损伤患者体内血清TGF-β1的表达水平，阐述TGF-β1与肾脏损伤的关系，探讨TGF-β1在肾缺血再灌注损伤防治中的价值。
1 资料与方法
1.1 一般资料
收集我院收治的45例肾缺血再灌注损伤患者为病例组，招募22名健康志愿者为对照粗。两组在性别，年龄，体重等方面无明显差异（P>0.05），具有可比性。
1.2 检测方法
所有患者在缺血时，再灌注1天、再灌注3天、再灌注5天和再灌注7天时采血；健康志愿者仅采集一次血液。采集的血液均为清晨空腹静脉血，采集量2~3ml，促凝管收集。采集血样后立即用离心机分离血清，以3000rpm，离心15分钟，将血清移入另一干燥的试管，置于-30℃冰箱冰冻保存，并于一周内检测。
采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测，试剂盒为美国LAD公司生产，严格按照试剂说明书操作，所有检测均为同一人进行，尽可能减少误差。
1.3 统计学处理
应用统计学软件进行分析，采用t检验，P<0.05为具有统计学差异。
2 结果
病例组45例患者在再灌注不同时间检测TGF-β1，各时间段TGF-β1均高于健康人，两组间的差异具有统计学意义（P<0.05），见表1。
表1 病例组TGF-β1水平与对照组比较（pg/ml）
3 讨论
近年来，器官移植已被广泛的应用于临床。然而，凡是涉及器官血管吻合必然会引起缺血-再灌注问题[1]。血液再灌注后若机体组织自身不能及时修复，极可能引起器官结构破坏及功能障碍，即缺血-再灌注损伤。目前的医疗水平和技术无法避免缺血再灌注损伤，因此如何减轻损伤程度及研究其发生机制已经成为国内外医学关注的热点。本文对肾缺血再灌注损伤患者血清TGF-β1进行检测，并与健康人进行比较，旨在探讨TGF-β1在肾缺血再灌注损伤防治中的临床价值。
研究结果显示，肾缺血再灌注损伤患者在缺血-再灌注的多个时间点，TGF-β1水平均明显高于健康人血清TGF-β1水平，说明TGF-β1与肾损伤具有一定相关性[2]。肾功能恢复时TGF-β1水平也逐渐恢复正常。由于TGF-β1这种细胞因子具有多种生物学功能，如刺激间充质起源的细胞、促进成骨细胞繁殖、抑制免疫活性细胞、抑制淋巴细胞分化与细胞因子产生等，TGF-β1在缺血-再灌注的研究中也越来越受到关注[3]。TGF-β1水平在一定程度上反映了肾损伤的程度，TGF-β1可能参与了肾损伤和修复过程，因此在防治肾缺血再灌注损伤中具有较高的应用价值。
参考文献
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[3] 李沽. 生长因子与急性肾功能衰竭. Urology and nephrology FMS, July, 2004, 24 (4): 108-109.
脊髓缺血再灌注损伤 篇11
1 资料与方法
1.1 一般资料
本文所需的研究对象为本院2012年3月~2013年3月期间心肌缺血患者, 其中随机抽取82例进行分析, 平均分成两组, 即常规组41例中, 男27例、女14例, 年龄28~61岁、平均年龄 (48.1±5.5) 岁;实验组41例中, 男25例、女16例, 年龄30~60岁、平均年龄 (48.0±5.2) 岁。两组实验对象在体重、身体状况、生活环境以及其他基本资料对比上, 差异无统计学意义 (P>0.05) , 具有可比性。
1.2 实验方法
常规组41例患者在连续缺血3 h再灌注2h, 实验组患者41例远端缺血后适应, 通过血压计对肢体加压形态缺血后灌注的方法, 具体为:血压计袖带压迫一侧肱动脉充气致缺血5 min, 再放气再灌注5 min后按序在另一上肢致缺血5 min再放气再灌注5 min, 左右上肢各自交替充气、放气致缺血、再灌注3个循环, 1次/d, 连续3日。随后在两组实验对象的正常状态、缺血3 h状态以及再灌注2h状态分别详细检查及记录其相关实验数据, 常规测量左室射血分数 (EF) 及计算实验对象的左室EF恢复值。所有患者均于静脉注射适量戊巴比妥钠[3,4] (批准文号:国药准字H31021725;生产单位:上海新亚药业有限公司;规格:0.1 g) 麻醉, 再予以气管插管连通呼吸机和血管闭塞器。
1.3 检测评价
运用能量心肌声学造影技术进行检测评价, 根据实验数据设置好设备的相关参数, 再由本院专业人士严格按照能量多普勒造影仪器的操作说明进行检测。然后再据其医院条件行TTC染色, 一般来说, 正常心肌染色呈蓝色, 危险心肌染色呈红色、坏死心肌染色呈白色, 将其染色组织拍片留底, 计算NA/RA值 (坏死区面积/危险区面积) 。
1.4 统计学方法
采用SPSS16.0软件进行数据分析, 计量资料用 (±s) 表示, 结果用t检验来统计, 计数资料用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组患者左室射血分数对比分析
在正常及缺血3 h状态时两组患者的左室射血分数对比差异无统计学意义 (P>0.05) , 再灌注2 h状态以及左室EF恢复值两组患者相比差异有统计学意义 (P<0.01) 。详情见表1。
2.2 两组患者缺血再灌注后NA/RA值对比分析
实验组患者缺血再灌注后坏死区与危险区面积比值显然低于常规组, 比较差异有统计学意义 (P<0.01) 。详情见表2。
3 讨论
随着医学的发展, 对于许多疾病的诊断评价都有许多的不同方式, 但是对于不同的患者不同的情况应该给予更好的诊断方式来达到诊断的准确性, 由此诊断评价威胁人类生命的安全隐患。尤其是心肌缺血再灌注损伤 (MIRI) , 通过大量临床事实证明, 缺血后适应对MIRI能够起到一定的保护效果, 其作用机制为心肌缺血或者再灌注时, 体内的腺苷受体被动激活, 间接致使G蛋白和磷脂酶C均被激活, 并最终导致蛋白激酶C磷酸化, 从而达到保护的效果。超声评价是通过注射或服用造影剂, 消除人体内杂物对超声波的干扰, 但是还要保证这些超声波对于检查其他不会受到影响, 从而有利于超声波的穿透, 然后通过二维或多普勒造影技术使其患者的心肌结构显示得清晰均匀。超声作为一种新型的影像学检查方法, 从而有利于医生的操作, 让患者在一种无疼痛感的环境下进行检查, 因此就减轻了患者的心理压力和紧张感[5]。对于疾病诊断评价有着积极作用, 要想评价诊治病症不只是单一的取决于医院的医生有多少经验或者是其他因素, 其实很重要的就是医院有什么更好、更科学、更安全、更便利的设备以及引进的先进技术。故超声评价可实时准确诊断患者缺血后适应对心肌坏死区和危险区的程度, 从而及时治疗以达保护作用, 对患者的康复极具积极意义, 值得推广。
参考文献
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