竞争检测（共4篇）
竞争检测 篇1
建设工程质量检测机构是提供检测和咨询服务的中介机构。从检测机构内部来看, 建设工程质量检测机构的中心任务是对工程建设的各种原材料和工程实体进行科学公正的检测, 真实反映质量情况, 用检测数据体现企业的服务质量, 以检测报告为工程建设的质量控制提供科学依据。其核心竞争力外部表现为检测机构在提供检测服务的过程中创造的客户价值, 内部表现为检测机构根据客户的需求与外部经营环境的变化而进行业务流程优化和资源整合的能力。
1建设工程质量检测机构核心竞争力构成要素分析
由于企业核心竞争力是企业在长期发展过程中逐渐形成的, 蕴涵于企业文化、融合于企业内质之中。企业要想真正培育和提升核心竞争力, 就必须要弄清核心竞争力的主要构成要素, 在此基础上结合自身的具体情况既要注意加强各具体要素的提升又要注意加强各组成要素的整合。本文认为建设工程质量检测机构的核心竞争力是主要包括检测机构的战略管理能力、组织管理能力、人力资源管理、创新能力、市场营销能力、检测技术能力、社会影响力等在内的复杂系统, 是各种能力整合后的外在表现。如下图所示:
2建设工程质检测机构核心竞争力作用分析
从建设工程质量检测机构的企业战略角度看, 核心竞争力是战略形成中层次最高、最持久的, 从而是企业战略的中心主题, 它决定了有效的战略活动领域;从检测机构未来成长角度看, 核心竞争力具有打开多种潜在市场、拓展新的行业领域的能力;从检测机构之间竞争角度看, 核心竞争力是检测机构持久竞争优势的来源和基础, 是检测机构独树一帜的能力;从客户角度看, 核心竞争力有助于实现客户最为看重的核心的、基本的和根本的利益, 而不是那些一般性的、短期限的好处。建设工程质量检测机构核心竞争力的作用主要通过以下五个方面体现出来:
(1) 决定检测机构的发展战略。
核心竞争力的培育促使公司高层管理人员超越部门利益的局限, 更多地从检测机构整体战略的角度考虑问题, 为建设工程质量检测机构的长远发展着想, 决定着检测机构的发展战略。
(2) 促使检测机构在一定时期内获得稳定的竞争优势。
核心竞争力的特性促使拥有核心竞争力的检测机构能够在一定时期内获得稳定的竞争优势。而且这种优势既不能通过交易获得, 难于被其他检测机构仿效, 并且还不会随检测技术人员的变动而转移。核心竞争力是工程质量检测机构的内在资源, 而稳定的竞争优势则是企业核心能力在市场上的外在表现。
(3) 使检测机构获得超额利润。
拥有核心竟争力的检测机构可以通过四种途径获得超额利润:首先, 拥有核心竞争力的检测机构能够凭借核心竞争力所产生的优势使检测机构以较低成本获得各种稀缺资源;其次, 由于抓住了竞争的关键环节, 对资源的配置也更有效率;再次, 通过构建学习型组织, 检测机构可以通过学习提高其效率, 使其有效地降低各种成本;最后, 核心竞争力能够为客户带来长期的、关键性利益, 检测机构通过为客户创造价值自身也分享到高于其他竞争对手的利润。
(4) 提高检测机构市场竞争位势。
市场竟争位势指的是企业的产品和服务在市场竞争中的地位和影响力, 它有助于企业取得比竞争对手更好的经营绩效。建设工程质量检测机构的核心竞争力支撑着检测机构过去、现在和未来的竞争优势, 决定了检测机构有效的战略活动区域, 并产生了检测机构特有的优势和生命线, 支持检测机构向更有生命力的新领域延伸。拥有核心竞争力的检测机构可以跳出低层次的价格竞争, 在检测项目创新、检测模式创新、技术创新上寻找突破, 能够获得参与竞争的资格和争取长久的竞争优势, 抢占知识经济和未来国际间竞争的制高点。高层次的竞争可以反过来强化检测机构核心竞争力的培育, 与之形成良性循环。
3建设工程质量检测机构核心竞争力提升策略
建设工程质量检测机构提升核心竞争力的最终目的在于能为客户提供超过其他检测机构更多的、更为高效的专业检测服务, 全方位满足客户需要。建设工程质量检测机构核心竞争力的提升应依据核心竞争力构成要素并结合实际情况展开:
(1) 以客户价值为导向, 通过提供个性化检测服务及持续创新提升核心竞争力。
由于检测市场的竞争日益激烈, 要想在激烈的竞争中扩大市场份额, 检测机构就要针对顾客的需求多样化并结合竞争对手的业务类型开发具有差异化、个性化的的检测业务项目。例如在没有开展地基基础工程检测、建筑节能检测、智能建筑检测、室内环境检测的地区开展以上业务就能避开哪些只开展常规检测的竟争对手实现差异化竞争对于那些工程处于偏僻地理位置, 远离城市的大型项目, 检测机构可以安排专人专车上门接受样品, 甚至设置临时定点接样室, 以满足客户个性化的需求。实行差异化竞争的同时还要保持持续创新, 只有创造别的检测机构无法取代的地位才能超越竞争对手最大限度地满足客户的需求, 从而创造更多的顾客价值。
(2) 培育优秀的企业文化, 推动建设工程质量检测机构核心竞争力提升。
企业文化是指企业在长期活动中形成的并且为企业成员普遍认可和遵循的具有本企业特色的群体意识和行为规范的总和, 以及体现企业群体意识与行为规范的规章制度和物质特色, 包括企业的宗旨、共同的理念、价值准则、道德规范和行为准则等等。先进企业的管理经验表明, 企业文化是一个企业的灵魂, 它能给企业注入活力, 给企业带来有形的与无形的、经济的与社会的双重效益, 是促进企业经营业绩与持续发展的有效手段和精神动力, 是提升企业核心竞争力的动力。目前我国多数建设工程质量检测机构刚刚脱离附属地位成为独立法人, 企业文化尚未形成, 核心竞争力的提升普遍缺乏企业文化的支撑。为了更好地实现顾客价值, 检测机构应该树立"以用户为中心 用户发展我发展 用户需要我追求"的经营理念, 建立适合本机构的企业文化, 紧密围绕检测工作实际, 提供具有自己特色的检测业务和服务, 促进检测机构核心竞争力的逐步提升。
(3) 通过重组联合、组建股份制检测集团提升检测机构核心竞争力。
目前, 我国的建设工程质量检测行业中普遍存在着小而全、低水平重复建设、技术含量不高的通病, 这远远不能适应当前开放的检测市场对检测机构综合能力的需求。我国的建设工程质量检测行业可以通过企业间的重组联合, 以兼并、收购、联合等形式培养一批具有一定规模、技术能力强大的工程质量检测集团。检测机构实行重组联合后, 可以使用统一的评价制度, 统一的管理技术, 统一的质量要求, 这将带动一些基础较差, 底子较薄的检测机构大踏步前进。兼并具有特色检测业务或关键技术的企业是提升建设工程质量检测机构核心竞争力的有效途径之一。检测机构通过组建股份制检测集团, 通过参股、控股方式将检测集团与一批检测机构紧密联系起来, 使集团各成员企业之间成为资产经营一体化的经济实体和经济利益的共同体, 充分发挥集团的整体优势和功能, 实现检测机构的规模化经营。最终实现提升检测机构核心竞争力, 促进我国检测行业的健康发展的目的。
摘要：首先阐述了建设工程质量检测机构核心竞争力构成要素, 其次分析了建设工程质量检测机构核心竞争力的作用, 在此基础上提出了我国建设工程质量检测机构核心竞争力提升策略。
关键词：质量检测,建设工程质量检测机构,核心竞争力
参考文献
[1]童利忠, 丁胜利.企业核心竞争力新论一理论与案例[M].人民邮电出版社, 2006, (3) .
[2]张新华, 范宪.识别、构建和保持企业核心竞争力[J].复旦学报社科版, 2002, (5) .
[3]李德建.浅谈建设工程检测室的质量管理[J].广东土木与建筑, 2005, (10) .
竞争检测 篇2
2013-2018年中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒市场竞争格局与投资战略研究报告
报告目录
第一部分 行业发展现状
第一章 甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业发展概述
第一节 甲型H1N1流感病毒检测试剂盒的相关知识
一、甲型H1N1流感病毒检测试剂盒的定义
二、甲型H1N1流感病毒检测试剂盒的特点
第二节 甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业发展成熟度
一、行业发展周期分析
二、行业中外市场成熟度对比
三、行业及其主要子行业成熟度分析
第三节 甲型H1N1流感病毒检测试剂盒市场特征分析
一、市场规模
二、产业关联度
三、影响需求的关键因素
四、国内和国际市场
五、主要竞争因素
六、生命周期
第二章 全球甲型H1N1流感病毒检测试剂盒市场发展分析
第一节 2008-2012年世界甲型H1N1流感病毒检测试剂盒产业发展综述
一、世界甲型H1N1流感病毒检测试剂盒产业特点分析
二、世界甲型H1N1流感病毒检测试剂盒主要厂家分析
三、世界甲型H1N1流感病毒检测试剂盒产业市场分析
第二节 2007-2012年世界甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业发展分析
一、2007-2012年世界甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业发展分析
二、2012年世界甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业发展分析 第三节 全球甲型H1N1流感病毒检测试剂盒市场分析
一、2011-2012年全球甲型H1N1流感病毒检测试剂盒需求分析
二、2011-2012年欧美甲型H1N1流感病毒检测试剂盒需求分析
三、2011-2012年中外甲型H1N1流感病毒检测试剂盒市场对比
第三章 我国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业发展现状
第一节 中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业发展状况
一、2011-2012年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业发展状况分析
二、2011-2012年中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业发展动态
三、2011-2012年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业经营业绩分析
四、2011-2012年我国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业发展热点
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第二节 中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒市场供需状况
一、2011-2012年中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业供给能力
二、2011-2012年中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒市场供给分析
三、2011-2012年中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒市场需求分析
四、2011-2012年中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒产品价格分析 第三节 我国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒市场分析
一、2010年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒市场分析
二、2011年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒市场分析
三、2012年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒市场的走向分析
第四章 甲型H1N1流感病毒检测试剂盒产业经济运行分析
第一节 2008-2012年中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒产业工业总产值分析
一、2008-2012年中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒产业工业总产值分析
二、不同规模企业工业总产值分析
三、不同所有制企业工业总产值比较
第二节 2008-2012年中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒产业市场销售收入分析
一、2008-2012年中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒产业市场总销售收入分析
二、不同规模企业总销售收入分析
三、不同所有制企业总销售收入比较
第三节 2008-2012年中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒产业产品成本费用分析
一、2008-2012年中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒产业成本费用总额分析
二、不同规模企业销售成本比较分析
三、不同所有制企业销售成本比较分析
第四节 2008-2012年中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒产业利润总额分析
一、2008-2012年中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒产业利润总额分析
二、不同规模企业利润总额比较分析
三、不同所有制企业利润总额比较分析
第五章 我国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒产业进出口分析
第一节 我国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒产品进口分析
一、2011年进口总量分析
二、2011年进口结构分析
三、2011年进口区域分析
第二节 我国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒产品出口分析
一、2011年出口总量分析
二、2011年出口结构分析 网 址：
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三、2011年出口区域分析
第三节 我国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒产品进出口预测
一、2011年进口分析
二、2011年出口分析
三、2013-2018年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒进口预测
四、2013-2018年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒出口预测
第六章 中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒市场供需分析
第一节 甲型H1N1流感病毒检测试剂盒市场需求规模分析
一、中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒总体市场规模分析
二、东北地区市场规模分析
三、华东地区市场规模分析
四、华中地区市场规模分析
五、华北地区市场规模分析
六、华南地区市场规模分析
七、西部地区市场规模分析
第二节 甲型H1N1流感病毒检测试剂盒市场需求特征分析
一、甲型H1N1流感病毒检测试剂盒消费群体的年龄特征分析
二、消费者关注的因素
三、市场需求潜力分析
第三节 甲型H1N1流感病毒检测试剂盒生产分析
一、甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业产量分析
二、甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业领先技术分析
三、甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业生产集中度分析 第四节 甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业经营绩效分析
一、行业营运情况分析
二、行业盈利指标分析
三、行业偿债能力分析
四、行业成长性分析
第二部分 行业竞争格局
第七章 甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业竞争格局分析
第一节 甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业历史竞争格局概况
一、甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业集中度分析
二、甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业竞争程度分析 第二节 中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业竞争结构分析
一、现有企业间竞争
二、潜在进入者分析
三、替代品威胁分析
四、供应商议价能力
五、客户议价能力
第三节 中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒产业研发力分析
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一、甲型H1N1流感病毒检测试剂盒产业研发重要性分析
二、中外甲型H1N1流感病毒检测试剂盒研发投入和运作方式对比
三、中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒研发力问题分析 第四节 中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒产业竞争状况
一、我国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业品类竞争现状
二、我国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒企业的竞争力分析
三、中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业并购重组状况
四、我国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业并购整合分析 第五节 甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业竞争格局分析
第八章 甲型H1N1流感病毒检测试剂盒企业竞争策略分析
第一节 甲型H1N1流感病毒检测试剂盒市场竞争策略分析
一、2011-2012年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒市场增长潜力分析
二、2011-2012年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒主要潜力品种分析
三、现有甲型H1N1流感病毒检测试剂盒产品竞争策略分析
四、潜力甲型H1N1流感病毒检测试剂盒品种竞争策略选择
五、典型企业产品竞争策略分析
第二节 甲型H1N1流感病毒检测试剂盒企业竞争策略分析
一、后危机对甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业竞争格局的影响
二、后危机后甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业竞争格局的变化
三、2013-2018年我国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒市场竞争趋势
四、2013-2018年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业竞争格局展望
五、2013-2018年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业竞争策略分析
六、2013-2018年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒企业竞争策略分析
第九章 甲型H1N1流感病毒检测试剂盒重点企业竞争分析
第一节 A
一、企业概况
二、竞争优势分析
三、2008-2012年经营状况
四、2013-2018年发展战略 第二节 B
一、企业概况
二、竞争优势分析
三、2008-2012年经营状况
四、2013-2018年发展战略 第三节 C
一、企业概况
二、竞争优势分析
三、2008-2012年经营状况
四、2013-2018年发展战略 第四节 D
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一、企业概况
二、竞争优势分析
三、2008-2012年经营状况
四、2013-2018年发展战略
略......第三部分 行业前景预测
第十章 甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业发展趋势分析
第一节 2013-2018年中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒市场趋势分析
一、2013-2018年我国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒发展趋势分析
二、2008-2012年我国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒市场趋势总结
三、2013-2018年我国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒市场发展空间 第二节 2013-2018年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒产业发展趋势分析
一、2013-2018年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒产业政策趋向
二、2013-2018年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒技术革新趋势
三、2013-2018年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒价格走势分析
四、2013-2018年国际环境对行业的影响
第十一章 未来甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业发展预测
第一节 未来甲型H1N1流感病毒检测试剂盒需求与消费预测
一、2013-2018年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒产品消费预测
二、2013-2018年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒市场规模预测
三、2013-2018年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业总产值预测
四、2013-2018年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业销售收入预测
五、2013-2018年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业总资产预测 第二节 2013-2018年中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业供需预测
一、2013-2018年中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒供给预测
二、2013-2018年中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒产量预测
三、2013-2018年中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒需求预测
四、2013-2018年中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒供需平衡预测
五、2013-2018年中国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒产品价格预测
六、2013-2018年主要甲型H1N1流感病毒检测试剂盒产品进出口预测
第四部分 投资战略研究
第十二章 甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业投资现状分析
第一节 2010-2012年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业投资情况分析
一、2010-2012年总体投资及结构
二、2010-2012年投资规模情况
三、2010-2012年投资增速情况
四、2010-2012年分行业投资分析
五、2010-2012年分地区投资分析
六、2010-2012年外商投资情况 网 址：
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第二节 2011-2012年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业投资情况分析
一、2011-2012年总体投资及结构
二、2011-2012年投资规模情况
三、2011-2012年投资增速情况
四、2011-2012年分行业投资分析
五、2011-2012年分地区投资分析
六、2011-2012年外商投资情况
第十三章 甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业投资环境分析
第一节 经济发展环境分析
一、2008-2012年我国宏观经济运行情况
二、2013-2018年我国宏观经济形势分析
三、2013-2018年投资趋势及其影响预测 第二节 政策法规环境分析
一、2011年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业政策环境分析
二、2011年国内宏观政策对其影响分析
三、2011年行业产业政策对其影响分析 第三节 技术发展环境分析
一、国内甲型H1N1流感病毒检测试剂盒技术现状
二、2011年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒技术发展分析
三、2013-2018年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒技术发展趋势分析 第四节 社会发展环境分析
一、国内社会环境发展现状
二、2011年社会环境发展分析
三、2013-2018年社会环境对行业的影响分析 第五节 中国医药卫生体制改革分析
一、医药卫生体制改革意义
二、医药卫生体制改革思想及目标
三、医药卫生体系与制度改革分析
四、医药卫生体系改革方向
五、医药卫生体制改革重点工作分析
六、医药卫生体制改革步骤分析
七、新医改8500亿的投向分析
八、新医改对甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业的影响分析
第十四章 甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业投资机会与风险
第一节 甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业投资效益分析
一、2008-2012年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业投资状况分析
二、2013-2018年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业投资效益分析
三、2013-2018年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业投资趋势预测
四、2013-2018年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业的投资方向
五、2013-2018年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业投资的建议
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六、新进入者应注意的障碍因素分析
第二节 影响甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业发展的主要因素
一、2013-2018年影响甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业运行的有利因素分析
二、2013-2018年影响甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业运行的稳定因素分析
三、2013-2018年影响甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业运行的不利因素分析
四、2013-2018年我国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业发展面临的挑战分析
五、2013-2018年我国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业发展面临的机遇分析
第三节 甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业投资风险及控制策略分析
一、2013-2018年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业市场风险及控制策略
二、2013-2018年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业政策风险及控制策略
三、2013-2018年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业经营风险及控制策略
四、2013-2018年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业技术风险及控制策略
五、2013-2018年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒同业竞争风险及控制策略
六、2013-2018年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业其他风险及控制策略
第十五章 甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业投资战略研究
第一节 甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业发展战略研究
一、战略综合规划
二、技术开发战略
三、业务组合战略
四、区域战略规划
五、产业战略规划
六、营销品牌战略
七、竞争战略规划
第二节 对我国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒品牌的战略思考
一、企业品牌的重要性
二、甲型H1N1流感病毒检测试剂盒实施品牌战略的意义
三、甲型H1N1流感病毒检测试剂盒企业品牌的现状分析
四、我国甲型H1N1流感病毒检测试剂盒企业的品牌战略
五、甲型H1N1流感病毒检测试剂盒品牌战略管理的策略 第三节 甲型H1N1流感病毒检测试剂盒企业经营管理策略 网 址：
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一、成本控制策略
二、定价策略
三、竞争策略
四、并购重组策略
五、营销策略
六、人力资源
七、财务管理
八、国际化策略
第四节 甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业投资战略研究
一、2011年医疗器械行业投资战略
二、2011年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业投资战略
三、2013-2018年甲型H1N1流感病毒检测试剂盒行业投资战略
四、2013-2018年细分行业投资战略
图表略…………
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竞争检测 篇3
关键词：透明质酸,竞争化学发光酶免疫分析,肝纤维化
透明质酸(hyaluronic acid,HA),又称玻璃酸、玻尿酸(hyaluronic acid,HA),是一种独特的线性大分子黏多糖,分子式为(C14H21NO11)n。通常将玻璃酸及其反离子所生成的离子对或盐统称为HA[1,2]。HA是肝脏细胞外基质中蛋白多糖的一个组成成分,它由肝内间质细胞合成,内皮细胞摄取降解少量小分子亦由肾小球滤过。HA在血清中的含量对判断肝病的严重程度、鉴别有无肝硬化及预测肝病预后均有一定意义[3,4,5]。因此,血清HA检测已被单独或与其他标志物检测共同作为非侵入肝纤维化检测指标[6]。
化学发光免疫分析法(chemiluminescence enzyme immunoassay,CLEIA)较既往的放射免疫分析法和酶联免疫吸附试验(ELISA)方法具有无放射性污染、灵敏度高、特异性强、操作快速简便及易于自动化等优点,已广泛用于临床免疫检测中[7]。本研究采用辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)催化鲁米诺-过氧化氢化学发光体系,通过对各种免疫反应条件的优化建立了竞争法人血清HA的CLEIA,并对其进行了方法学评价。
1 资料与方法
1.1 一般资料
随机选取60例解放军第三○二医院院确诊为肝纤维化患者的检测剩余血清,其中,男38例,女22例,年龄23～70岁,所有血清标本分离后于-80℃冻存。
1.2 仪器
化学发光检测仪为北京滨松光子技术有限公司BHP9507型,酶标仪为美国Thermo Labsystems MK3型。
1.3 试剂
人HA ELISA检测试剂盒购自美国RB(Rapidbio))公司,HA、牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)、鲁米诺、HRP、透明质酸结合蛋白(hyaluronic acid binding protein,HABP)及其单抗购自美国Sigma公司,其他常规化学试剂购自北京化学试剂公司。
1.4 方法
1.4.1 HA和BSA的偶联
应用改良后方法[8,9],偶联HA和BSA,制备透明质酸牛血清白蛋白(HA-BSA)用于包被,并保持其水溶性。
1.4.2 HABP的标记
应用改良过的碘酸盐氧化法[10],用HRP对HABP单克隆抗体进行标记,并保持单抗的免疫反应活性和酶的催化活性。
1.4.3 竞争法HA CLEIA检测方法的建立
经过抗体的包被、封闭、加HABP和待测样本或标准品、洗板、加二抗、洗板、加底物、上机读数等一系列步骤完成检测方法的建立,反应条件、标准品及反应液配制根据参考文献[11]介绍方法进行调整优化。
1.4.4 HA CLEIA检测方法的性能评估
按参考文献[11]所述方法,对检测方法的标准曲线与灵敏度、特异性、精密度、准确性、健全性、稳定性进行评估。
1.4.5 比对实验
对60例肝纤维化患者血清,应用CLEIA和ELISA方法同时进行检测,并对其相关性进行统计分析。
1.5 统计学方法
应用SPSS 13.0软件对所有数据进行统计分析。标准曲线绘制采用双对数回归法;灵敏度通过测定10个标准品零点(S0)浓度对应发光强度值,求出均值和标准偏差(standard deviation,SD),均值加2倍SD,代入线性方程,所得浓度即为灵敏度;精密度计算是对低、中、高两种不同浓度的质控血清,分别进行8孔平行测定,计算批内变异,将此操作重复10次,计算批间变异;回收率是在低于检测限的样品中加入HA,并测定其含量,并与加入量相比较,其结果用回收率表示;健全性通过回归分析计算;比对实验计数资料采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 HA CLEIA检测方法各种反应条件的确定
应用棋盘阵列的方法经过反复优化,最终确定了如下反应条件:(1)以HA-BSA浓度为6.5μg/mL碳酸盐缓冲液和1.5%BSA,分别对微孔板进行包被和封闭;(2)HABP加入浓度为56μg/mL,体积为50μL;(3)酶稀释度最终选定为1∶1000;(4)竞争反应时间为30 min,温度为37℃;(5)酶标抗体结合反应时间为30 min,温度为37℃;(6)检测时间确定为加入发光底物液避光反应10 min后。
2.2 HA CLEIA检测方法性能评估结果
2.2.1 标准曲线的确定
配制HA系列标准溶液浓度分别为25、50、100、200、400、800μg/L,并进行测定。以相对发光强度(Y)对HA浓度(X)做双对数图,得到校准曲线回归方程为lg Y=2.260-1.16lg X,r=0.9960。
2.2.2 灵敏度试验
经过5次重复测定,检测结果计算后得到最低检出限为6.12μg/L。
2.2.3 特异性试验
选择层粘连蛋白、Ⅳ胶原和前Ⅲ型胶原3种人血清中共存的常见肝纤维化标志物,分别以高于各个指标血清浓度正常值10～100倍浓度加标,检测值均低于最低检测限(6.12μg/L),确定与HA无交叉反应。
2.2.4 精密度试验
以高、中、低浓度质控血清,8孔平行进行10次重复测定,得出每次浓度值的批内差异和多次分析的批间变异,其相对标准偏差均小于<10%。
2.2.5 准确性试验
选择临床HA检测值低于下限的血清,分别加入10、500、1000μg/L的校准品,重复5次检测后计算,回收率分别为101.2%、95.6%和93.5%。
2.2.6 稳定性试验
将各种反应物分别置于4℃和37℃,在3、5、7 d后进行检测,结果进行统计分析后显示相关系数均>0.98,标准偏差均<9%。
2.2.7 健全性试验
用零标准品血清系列稀释高浓度定值血清(12 ng/mL),然后进行检测,用理论值和实际检测值做线性回归分析,r=0.9662,表明健全性良好。
2.3 比对实验结果
进行检验后,二者差异无统计学意义(P=0.62>0.05)。见表1。
注:ELISA:酶联免疫吸附试验;CLEIA:化学发光免疫分析法
3 讨论
乙型与丙型病毒性肝炎是引起肝纤维化最常见的病因。在我国,乙肝的发病率和绝对患病人数都很高,其所引发的肝纤维化最常见。肝纤维化发生时,肝脏沉积的纤维结缔组织包括细胞成分和细胞外间质两大部分。细胞外间质有胶原、非胶原性糖蛋白、蛋白多糖,三者统称为细胞外基质(ECM)。肝纤维化发展过程中,ECM合成量增多,分解减少。通过肝穿刺对肝组织进行活检仍是目前判断肝纤维化程度的“金标准”,但它具有创伤性,且由于肝硬化在全肝中的不均一性,穿刺活检也有其局限性。因此,众多的研究开始寻找血清纤维化标志物,而目前认为ECM及其代谢产物是首选的血清标志物[6],其中的HA是公认的较好的肝纤维化标志物,同时也可作为肝纤维化和肝硬化预后的指标[1,2,3,4],并已在临床上广泛应用。
微孔板CLEIA是基于ELISA方法发展而来了的一种新技术,其操作步骤基本与ELISA相同,只是在结果检测时将ELISA法的酶标仪换为化学发光仪,较适于在国内推广使用。该方法相比ELISA法其灵敏度与特异性提高了很多,在原理上与ELISA的最大区别在于,将原有的底物显色更换为H2O2-鲁米诺(luminol)发光体系。鲁米诺,又名发光氨,化学名为3-氨基邻苯二甲酰肼,常温下是一种黄色晶体或者米黄色粉末,是一种比较稳定的人工合成的有机化合物,其在碱性条件下是以单阴离子的形式存在,当体系内加入H2O2和HRP后,H2O2及其中间体过氧化氢阴离子、HRP中的Fe3+即与鲁米诺反应形成不稳定的中间体,该中间体是一种内过氧化物,此内过氧化物迅速衰变成一电子激发态的氨基酞酸盐阴离子,继而发出光束,其最大光强度产生于425 nm。
竞争检测 篇4
1 材料与方法
1.1 试验动物的选择、分组及饲养管理
选用围产期健康荷斯坦奶牛30头, 305d的产奶量平均为7436 kg (SD=1089) , 平均体重为637 kg (SD=71) 。预饲一周后进入试验期, 试验从产前第28d开始, 将奶牛随机分为三组 (每组10头) :C组为对照组, 饲喂NRC标准日粮 (能量摄入为营养需要量的100%) , H组饲喂NRC标准增加20%日粮 (能量摄入为营养需要量的80%组) , L组饲喂NRC标准减少20%日粮 (能量摄入为营养需要量的80%组) 。分娩后各组均按中国奶牛饲养标准 (2000) 配制相同日粮, 至产后第56d结束。
1.2 试剂与仪器
反转录酶 (AMV) , RNasin购自NEB公司;Taq DNA聚合酶、T4 DNA连接酶、限制性内切酶Eco R I、Hand III、Apa I、标准分子量DNA Marker DL-2000 (分子量为2000、1000、750、500、250、100bp) 、pMD18-T Vector均购自Ta Ka Ra公司;PMD-GH质粒由本院李家奎老师构建。PCR仪Tpersonal 2000型 (German) , 高速冷冻离心机MR18·22型 (日本日立) , TGL·16G高速台式离心机 (上海安亭离心机厂) , GeneQuant核酸浓度测定仪 (英国phar2macia Biotech, Ltd公司) , 电泳仪DY2Ⅲ型 (北京六一仪器厂) , 凝胶自动成像系统 (英国UVI公司) 。
1.3 肝脏活体样品的采集
分别于产前28d、14d及产后第1、14、28、56d, 在奶牛右侧第11~12肋间, 与髂结节中央至肩关节连线的交点上, 用长12~15cm, 内径3mm长注射针头的肝脏穿刺针, 按奶牛肝穿刺技术采取肝组织20~40mg, 用生理盐水漂洗后装入塑料瓶存于液氮中待测。
1.4 肝PC mR NA表达水平的测定竞争定量R T-PCR
1.4.1 RNA完整性的确定及定量
取采集的肝脏活体样品, 提取总RNA, 1.5%琼脂糖凝胶电泳确定其完整性后, 200倍稀释测定其浓度。
1.4.2 PC m RNA竞争模板的构建
提取牛肝脏基因组, 用PC引物扩出PC基因的DNA序列, 利用其中含有的一个内含子序列, 然后再插入一段从PMD-GH质粒上酶切下的212碱基片段来构建PCc DNA竞争模板。
1.4.3 PC竞争模板浓度的确定
在同一PCR反应管中加入固定剂量的PC基因c DNA, 竞争模板按10-n倍稀释, 每个梯度均用相同的PCR体系和PCR反应条件进行扩增, PCR产物在1.5%EB染色的琼脂糖凝胶上电泳。图像处理及灰度分析用TANNENG凝胶分析软件进行, 选择目的带与竞争模板带灰度相近的稀释倍数1为最终的竞争模板用量。
1.4.4 肝PC m RNA表达水平的测定
根据Genebank发表的牛PC基因序列, 设计扩增引物, 上游引物:5’-CCCCTG-GAGCGTG TGTTCGACTAC-3下游引物:5’-GGATGCC-GATGTAGCCCTG CAGGA-3’, 扩增PC基因m RNA片段大小为385bp, 扩增PC竞争模板DNA片断大小为678bp。根据测定的RNA浓度调整总RNA的体积, 使各组、每次的样品体系RNA量相同, 且均含相同量竞争模板。PCR反应体系为PCR扩增体系 (25μL) :PCc DNA模板1.0μL, PCDNA竞争模板1.0μL, 10×PCR Buffer 2.5μL, 5 U/μLTaq DNA聚合酶0.125μL, 10 mmol/L, dNTP Mixture 2.0μL, 2对上、下游引物各1.0μL, 灭菌双蒸馏水16.375μL。PCR反应条件:94℃预变性5min;94℃变性45s, 60℃退火45s, 72℃延伸45s, 30个循环;最后72℃延伸10min。取5μL PCR产物在1.5%EB染色的琼脂糖凝胶上电泳。图像处理及灰度分析用TAN-NONG凝胶分析软件进行, 根据PC和PC竞争模板PCR产物的面积比, 确定肝脏样品中PCm RNA表达水平。
1.5 数据处理
数据均以平均值±标准差表示, 用SPSS100软件进行分析, 组间差异显著性用ONE-WAY ANOVA (方差分析) 进行统计分析。
2 结果
2.1 肝总R NA提取的电泳结果
(如图1) 提取的总RNA有清晰、完整的三条带, A260/A280值为1.8, 符合试验纯度和逆转录要求。
M:DNA分子量标记DL2000;1、2、3:提取的总R NA
2.2不同能量摄入对奶牛肝脏PCmR NA表达水平的影响
结果见图2和表2。可见, 试验期内, L组奶牛PCm RNA丰度最高, H组最低, -14d~28d, 三组奶牛的PCm RNA丰度差异显著 (P<0.05) 或极显著 (P<0.01) , 产前1d和产后56d组间无差异, 分娩时各组PCm RNA丰度明显增加, 产后28d恢复到产前水平。
M:DNA Marker DL-2000 1-3:C组;4-6:H组;7-9:L组
3 讨论
3.1 奶牛肝PCmR NA丰度的测定方法
Greennfield等采用Northern印迹方法测定奶牛肝组织PCm RNA丰度。这些方法存在灵敏度低, 操作复杂, 环境要求苛刻, 需要采用对人体和环境有害的放射性物质进行标记。而定量RT-PCR方法与传统的RNA分析方法相比具有灵敏性高、特异性强及能对大量样本同时进行量化分析的优点。
竞争定量RT-PCR相对半定量PCR能消除管间及样本间的变异, 重复性好, 定量范围较广。因此广泛运用于细胞DNA、RNA以及病毒、细菌核酸的定量检测。本试验采用竞争定量RT-PCR检测奶牛肝PC m RNA的丰度, 通过对竞争模板浓度、循环数的确定, 使所建立的竞争定量PCR检测方法具有较好的重复性、稳定性、灵敏性, 确保实验结果可靠。由图2可见, 竞争模板 (扩增片段为678bp) 与目的基因 (扩增片段为385bp) 相差293bp, 既保证了竞争模板与目的模板扩增效率相同, 又保证扩增产物在电泳时能明显分开而利于检测。
3.2 对奶牛肝脏PC mR NA丰度的影响
试验期内, 低能组奶牛肝脏PC m RNA丰度最高, 高能组奶牛PCm RNA丰度最低, 产前14d~产后28d, 组间差异显著。尤其是分娩后1d~14d, 各组奶牛PC基因丰度均明显升高, 以低能组最为显著, 说明分娩时低能组奶牛糖异生增强, 与Greenfield的报道一致。
研究证实奶牛产前饲喂大量精料, 淀粉过瘤胃发酵, 血糖主要来自于肠道吸收, 肝糖异生减少, 导致产后肝脏对糖异生适应能力减弱, 糖异生关键酶活性降低。而低能组奶牛, 产前血糖主要来自糖异生, 肝脏适应能力强, 分娩后, 肝脏对糖异生适应能力增强, 且产前低能饲喂提高奶牛产后产后干物质摄入, 生糖先质丙酸供给充足, 上调PC基因表达, 进而提高糖异生速率。揭示产前低能饲喂奶牛促进围产期糖异生关键酶PCm RNA表达增加, 糖异生能力增强。糖异生速率除受PC的调控外, 糖异生关键酶磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 (PEPCK) 活性及底物 (生糖先质) 同时起到重要的控制作用, 因此有关不同能力摄入对围产期奶牛糖异生的影响, 尚需更深入的研究。
摘要：建立了奶牛肝PCmRNA丰度的竞争定量RT-PCR检测方法, 优化的PCR反应条件 (25μL) 为:60℃退火、30个循环数、1:1的PC cDNA与PC DNA竞争模板浓度比。同时应用该方法检测不同能量摄入对围产期奶牛肝PCmRNA丰度的影响, 结果表明:低能量日粮饲喂干奶期奶牛, 肝脏PC mRNA丰度升高, 而干奶期高能饲喂奶牛, 肝脏PC mRNA丰度降低。说明干奶期低能饲喂奶牛, 可以增强围产期奶牛的肝糖异生能力。
关键词：能量摄入,围产期奶牛,竞争定量RT-PCR,肝PCmRNA丰度
参考文献
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