网织红细胞分析模块

网织红细胞分析模块（共3篇）

网织红细胞分析模块 篇1

网织红细胞是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间不完全成熟的红细胞。在正常情况下, 晚幼红细胞脱核后平均需2 d才能发育成完全成熟的红细胞, 在此期间其胞质中尚存部分嗜碱性物质 (DNA, 核糖体) , 经碱性染料活体染色后, 能聚集成光镜下可见的深染颗粒, 颗粒多时联成网状结构, 故名网织红细胞 (Retic) 。20世纪80年代后期, 具有Retic计数功能的流式细胞分析仪开始问世, 但目前国内, 尤其是县级医院检验科Retic计数仍用手工操作。为了探索较好的Retic计数方法, 笔者选用了1%煌焦油蓝活体染色细胞, 用玻片法和试管法同时检查了129份标本, 现将结果报告如下。

1 标本来源

1.1 采集门诊成年男女末梢全血标本64份。

1.2 采集住院成年男女末梢全血标本65份。

1.3 门诊和住院成年男女末梢全血标本, 除年龄上控制在18～57岁这一段外, 其它检验结果和男女比例不作任何规定。

2 试剂及仪器

2.1 1%煌焦油蓝乙醇溶液:称取煌焦油蓝1.0 g加AR无水乙醇95 ml, 用水补足至100 ml, 混匀, 完全溶解后, 过滤, 置125 ml棕色磨口试剂瓶中备用。

2.2 1%煌焦油蓝盐水溶液:称取煌焦油蓝1.0 gAR柠檬酸三钠 (Na3C6HsO7·2H2O) 0.4 g, AR NaCl 0.68 g, 加水溶解至100 ml, 混匀, 过滤后, 贮存于125 ml棕色磨口瓶中, 备用。

2.3 37℃恒温水浴箱。

2.4 普通光学显微镜、载玻片、推片、康氏管。

3 方法

3.1 玻片法 于清洁玻片的一端, 滴加1滴1%煌焦油蓝乙醇染液, 使其自己挥发于, 形成一层薄膜, 取末梢全血1滴于煌焦油蓝的薄膜上, 迅速用推片的一角将血液和染料充分混匀。为防止挥发, 可将推玻片的一端覆盖在血液和煌焦油蓝的混合液上, 静置1～2 min, 用推玻片推成具有头、体、尾的薄片, 自然干燥后镜检。

3.2 试管法 于洁净的康氏管内加入1%的煌焦油蓝盐水液3滴, 取患者的末梢全血3滴, 混匀后, 置37℃水浴中15 min, 取出轻轻混匀, 取此液1小滴, 用推玻片制成具有头、体、尾的薄片, 自然干燥后镜检。

3.3 计数1000个RBC中含有Retic的多少, 最后按百分比报告, 如报告Retic的绝对值 (×109/L) , 将Retic的百分比代入下式中计算出结果即可。

4 结果

两种方法同时检测了129份标本的Retic的百分比, 玻片法Retic 0.000～0.499%18例, 占13.95% (18/129) ;Retic 0.500%～2.000%73例, 占56.59% (73/129) ;Retic>2.0%38例, 占29.46% (38/129) ;试管法镜检Retic 0.000～0.499%20例, 占15.50% (20/129) ;Retic0.5%～2.0%75例, 占58.14% (75/129) ;Retic>2.0%34例, 占26.36% (34/129) ;两法结果完全相符的84例, 占65.12% (84/129) 。两法经统计学处理, P>0.05, 差异无统计学意义。

5 讨论

5.1 Retic计数采用的染色方法为活体染色, 理论上讲, 细胞在人体环境37℃下, 染色的时间越长、着色越好, Retic检出率越高。本报告的结果表明, 用玻片法Retic经活体细胞染色后, 在室温静置1～2 min, 完全能够达到Retic检出的目的。与显微镜下Retic计数相比, 两法镜检没有什么区别。玻片法较试管法简单、省时, 试剂用量也少, 同时, 也不需要水浴恒温设备, 故更适用于基层医院检验科开展工作。

5.2 煌焦油蓝乙醇液一般在使用前临时制成薄膜和患者的活细胞染色镜检。笔者将染液提前2 h、4 h、8 h、24 h、48 h制成薄膜, 分别按上述要求染色患者的活细胞, 结果发现Retic检出率2 h薄片明显减少, 24 h的薄片影响结果的观察。此外, 笔者还将1%煌焦油蓝染液直接染色患者的活细胞, 2 min制成血片镜检, 显微镜下发现少部分RBC有轻度的皱缩现象, 但不影响结果的观察。

5.3 1%煌焦油蓝乙醇溶液配制时间超过3个月, 可出现少量沉淀, 过滤后, 仍可使用, 不影响结果的观察和检出率。笔者将此液配好后存放1年, 和新鲜配制的染液同时染色同一份标本, 结果Retic的检出率完全一致 (育法) 。

5.4 Retic显微镜计数时, 首先用低倍镜寻找分布比较均匀, RBC不太分散, 又不重叠的区域, 再用油镜检查。Retic较一般RBC略大, 故在涂片的尾部和两边分布较多, 计数时, 应兼顾这些区域。

5.5 Retic增多表示骨髓RBC系统增生旺盛, 多见于各种增生性贫血, 如溶血性贫血 (特别是急性溶血) 、急性大出血引起的失血性贫血。当缺铁性贫血和巨幼细胞性贫血治疗有效时, 可出现Retic短时间的大量增加, 以后恢复正常或稍高。Retic减少, 见于骨髓增生低下, 如再生碍障性贫血和某些溶血性贫血, 有再生障碍危象时 (如阵发性睡眠性血红蛋白尿) , 但也有少部分再生障碍性贫血Retic计数并不减少。

网织红细胞分析模块 篇2

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2011年1月至2013年1月我院收治的贫血患者95例作为对照组，所有患者均于清晨空腹抽静脉血，进行血液学、骨髓铁染色等各项试验指标的检查，其中男52例，女43例，年龄27～78岁，平均年龄48岁，病程0.75～7.5年，贫血种类包括：34例地中海贫血患者，确诊方法为血红蛋白电泳出现异常；29例缺铁性贫血患者，确诊方法为血清铁蛋白<14μg/L，且血清转铁蛋白受体<15%;32例肾病性贫血患者，确诊方法为有肾功能出现异常，有肾病病史，且促红细胞生成素降低。选择同期在我院体检且体检全血细胞计数正常的95例健康成人作为对照组，其中男53例，女42例，年龄25～77岁，平均年龄46岁。两组患者在性别、年龄、文化水平等方面无显著性差异，具有可比性。

1.2 试剂、仪器与样本采集[2]

检测血清铁蛋白（serum ferritin,SF）采用AXSYM全自动免疫分析仪（西门子公司，德国），试剂为原装试剂，检测各项血液学参数采用Sysmex XT-4000全自动血细胞分析仪（雅培公司，美国），各种试剂和配套全血质控物也来自雅培公司。样本采集：采集治疗组与对照组患者的新鲜静脉血各2 mL，采用乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）进行抗凝处理，将新鲜抗凝全血用于血常规、骨髓铁染色等各项检测分析，同时再采集2 mL静脉血进行离心，将血清分离后置于-20℃保存备用，注意各项检测均在2 h内完成。

1.3 检测方法

采用散射比浊法和放射免疫双抗体法测定SF和sTfR；采用全自动血细胞分析仪检测网织红细胞含量和Ret-He等；采用全自动高效液相层析法分析仪定量测定Hb；采用免疫荧光染色法，通过计算获得RetHe的结果。由于在反映网织红细胞成熟阶段的二维显示散点图上红细胞和网织红细胞分别对应不同分区的FSC，所以要找到Ret对应的Ret-y，并且利用公式进行计算，最终得到Ret-He的结果，计算公式为Ret-He:Ret-He=[5.5569@exp(0.001@Ret-y）]。

1.4 统计学处理

观察记录并比较两组所得到的数据，对其进行卡方检验，然后采用SPSS11.0软件来完成对数据的统计与处理。最终得P<0.05，即经统计学处理后其差异具有显著性，故具有统计学意义。

2 结果

2.1 确定正常参考值。

经过多组检验分析，Ret-He无性别差异和年龄差异，本研究选取了对照组95例同质健康成人，可以排除影响研究指标Ret-He的疾病和其他相关因素，根据医学参考值的定义制定了RetHe的正常参考值范围。根据百分位数法（95%）进行计算，最终确定Ret-He的正常参考值范围为27.83～36.31 pg。

2.2 稳定性评估。

选取低值23.5 pg、高值36.7 pg的两份标本进行稳定性考察，在低温保存后于相应时间点重复检测标本并观察其稳定性。结果显示，高值在初次测定48 h后略有上升，但变化的差异百分率仅为0.5%；低值在初次测定48 h后略有降低，但变化的差异百分率仅为0.4%。两组数据变化趋势都不显著，稳定性良好，所以低温保存两天内Ret-He的测定值均保持稳定。

2.3 网织红细胞血红蛋白含量对缺铁性贫血的诊断价值。

将各类常见贫血患者的Ret-He与对照组进行比较分析，正常人为30.05pg，缺铁性贫血患者为23.86pg，该组Ret-He低于正常健康人及其余两组，P<0.001，差异显著均有统计学意义；肾性贫血患者为31.34pg，该组Ret-He与正常健康人相比，P>0.1，无统计学意义；地中海贫血患者为29.79 pg，该组Ret-He与正常健康人相比，P>0.5，无统计学意义。

3 讨论

网织红细胞血红蛋白含量是全自动血液分析仪提供的一个报告参数，在<25 pg时是诊断IDA的最佳界值。网织红细胞的胞质内残存尚未完全排出的核糖核酸等嗜碱性物质，若用染料进行活体染色会被凝聚沉淀并着色，颗粒间形成网状结构，故称为网织红细胞。网织红细胞检测原理是染料可以与网织红细胞内的RNA结合，通过测量反应胞质内RNA含量和细胞体积大小可以组成一个反映网织红细胞成熟阶段的二维显示散点图，在该图中若为成熟红细胞，则荧光极少或没有，若为幼稚网织红细胞，则荧光越强。随着检验医学的不断发展和完善，采用网织红细胞来评价骨髓造血功能也为临床提供了更加丰富的诊断信息，给临床监测和治疗带来了新的研究方向，有着广阔的应用前景，值得临床推广。

摘要：目的 观察贫血患者的网织红细胞血红蛋白含量分析,并用于指导临床治疗。方法 回顾95例贫血患者的临床资料,与95例同质健康患者状况进行对比分析。结果 缺铁性贫血患者的Ret-He低于正常健康人及其余两组,差异显著均有统计学意义;而地中海贫血患者和肾性贫血患者与正常健康人相比无统计学意义。结论 Ret-He在贫血的鉴别和诊断中有重要的应用价值,值得临床推广。

关键词：贫血,网织红细胞,血红蛋白,含量分析

参考文献

[1]高绍华.网织红细胞血红蛋白含量在铁缺乏疾病诊断中的应用价值[J].中华使用诊断与治疗杂志,2011,23(10):1037-1039.

网织红细胞分析模块 篇3

1 资料与方法

1.1 临床资料

本次试验选用的患者均为2013年6月至2014年6月在我院进行治疗的60例贫血患者和60例正常的健康成人。实验组60例患者,其中男性患者25例,女性患者35例,年龄20到45岁之间,平均年龄33.21±3.11岁,Hb男性是25-100g/l,Hb女性是24-101g/l。其中急性失血患者是20例,慢性贫血患者是22例,溶血性贫血患者是10例,白血病患者是5例,再生障碍性贫血患者3例;对照组60例患者,其中男性患者26例,女性患者34例,年龄20到45岁之间,平均年龄32.55±3.23岁,Hb男性是120-160g/l,Hb女性是110-150g/l[1]。

1.2 仪器和试剂[2]

仪器:LH750血细胞分析仪;试剂:配套的网织红细胞试剂。

1.3 检测方法

全血标本使用乙二胺四乙酸二钾进行抗凝处理[3],在四个小时之内进行测定。

1.4 统计学处理

本次采用SPSS18.0统计学软件进行处理分析,计量资料采用t检验,组间对比采用X2检验,P<0.05为差异显著性,有统计学意义。

2. 结果

2.1 对照组网织红细胞的各项参数值大小结果

通过对对照组网织红细胞的各项参数值大小结果进行统计,我们发现RET(%)的范围是0.39-2.29;RET#的范围是0.025*109/L-0.074*109/L;IRF的范围是在0.22-0.55之间;MRV的范围是在99.5-125.9之间;MSCV的范围是在79.0-96.4之间;HLR(%)的范围是0.18-1.33之间;HLR#的范围是在0.015*109/L-0.055*109/L[4]。

2.2 实验组网织红细胞的各项参数值大小结果

通过对实验组网织红细胞的各项参数值大小结果进行统计,我们发现实验组的60例患者中,其中急性失血的20例患者中,RET(%)、RET#(*109/L、IRF、MRV、MSCV、HLR(%)以及HLR#的检测值分别是4.20、0.077、0.45、101.9、85.0、1.85以及0.045;慢性病贫血的22例患者中,RET(%)、RET#(*109/L)、IRF、MRV、MSCV、HLR(%)以及HLR#的检测值分别是2.81、0.065、0.33、104.9、84.2、0.90以及0.033;除此之外,溶血性贫血、白血病以及再生障碍性贫血的其他类患者的各项参数值大小都存在差异,其中RET(%)、RET#(*109/L)、IRF、HLR(%)以及HLR#这五项参数值大小存在较大的差异(P<0.05),有统计学意义。而MRV、MSCV这两项参数值没有显著性差异(P>0.05),不具有统计学意义。如下表所示:

3. 讨论

本文选取2013年6月至2014年6月在我院进行治疗的60例贫血患者和正常的健康成人,分别将其分为实验组和对照组,采用LH750血细胞分析仪检测患儿网织红细胞的各个参数,对其检测及其诊断结果进行对比,结果发现其中急性失血的20例患者中,RET(%)、RET#(*109/L)、IRF、MRV、MSCV、HLR(%)以及HLR#的检测值分别是4.20、0.077、0.45、101.9、85.0、1.85以及0.045;慢性病贫血的22例患者中,RET(%)、RET#(*109/L)、IRF、MRV、MSCV、HLR(%)以及HLR#的检测值分别是2.81、0.065、0.33、104.9、84.2、0.90以及0.033。这些数据表明急性失血、慢性病贫血、溶血性贫血、白血病以及再生障碍性贫血的其他类患者的各项参数值大小都存在差异,其中RET(%)、RET#(*109/L)、IRF、HLR(%)以及HLR#这五项参数值大小存在较大的差异(P<0.05),有统计学意义。而MRV、MSCV这两项参数值没有显著性差异(P>0.05),不具有统计学意义。这证明了网织红细胞的各个参数检测确定对于提高贫血患者的临床诊断有着很好的应用价值[5],值得在临床上推广应用。

参考文献

[1]沈利民,肖建美.LH750血细胞分析仪检测网织红细胞参数的应用评价[J].检验医学与临床,2009,06(23):2052-2053.

[2]胡志愿,郭璐娣,邓江群,马祥波,邓建欣,曾敬广.地中海贫血患者红细胞参数(MCV、RDW)网织红细胞参数变化及临床意义[J].中国煤炭工业医学杂志,2012,15(08):1152-1154.

[3]刘兵.地中海贫血患者网织红细胞参数检测的临床意义[J].中国医药指南,2013,11(32):466.

[4]陈新瑶,莫焕桐,江虹.Coulter LH750血细胞分析仪检测网织红细胞计数性能及其应用价值评价[J].中国临床新医学,2012,05(02):137-138.