大肠埃希菌耐药性分析（共7篇）
大肠埃希菌耐药性分析 篇1
大肠埃希菌是引起院内感染和社区感染的常见条件致病菌, 也是临床上最常见的耐药菌之一。近年来随着广谱抗菌药物广泛应用, 特别是第三代头孢菌素等不合理使用, 产ES-BLs的菌株日渐增多, 且对第三代头孢菌素等呈现多重耐药倾向[1]。随时监测大肠埃希菌产酶率和临床常用抗菌药物敏感性, 对该菌所致感染的预防和治疗尤为重要。本文进行了大肠埃希菌对临床常用种抗菌药物的敏感性和产酶率观察和分析。
1 材料与方法
1.1 菌株来源
陕西中医学院附属医院2007年7月~2008年6月就诊的门诊和住院患者的临床标本, 经常规生化鉴定或上海复星细菌鉴定仪鉴定。从中分离出大肠埃希菌36株。
1.2 试剂
M-H培养琼脂为英国Oxoid产品, 药敏纸片为法国梅里埃公司和英国Oxoid产品, 质控菌株ATCC25922ATCC700603购自西安驰宇医疗器械有限公司。
1.3 产ESBLs的测定
参照美国临床实验室标准委员会 (NC-CLS) 标准操作和判断结果[2]。具体方法分为初筛试验和双纸片增效确证试验。
1.4 药敏试验
采用K-B纸片扩散法。参照NCCLS标准操作和结果判断[2], 质控标准菌为ATCC25922 ATCC 700603。
2 结果
本文对36株大肠埃希菌进行了产酶的菌株的检测和10种抗菌药物的药敏检测, 共检出产酶27株, 检出率为75%。对10种抗菌药物耐药率见表1:
3 讨论
自1983年首次报告ESBLs以来, 国内外均有产ESBLs大肠埃希菌感染的报道, 只是国内外关于产ESBLs大肠埃希菌检出率报道有较大差别, 但是总的趋势为产ESBLs大肠埃希菌的检出率逐年增加[3]。本次检测了36株大肠埃希菌, 产酶率75%, 明显高于其它报道。表1结果显示产酶大肠埃希菌对氨苄西林、氨曲南、头孢唑啉等全部耐药, 对庆大霉素、环丙沙星耐药率高达到85.1%和92.6%。除亚胺培南对大肠埃希菌的敏感性最高为100%外, 头孢西丁对大肠埃希菌的耐药率较低。另外, 产酶大肠埃希菌对其它几种抗生素的耐药率均显著高于非产酶菌, 说明产酶大肠埃希菌存在多重耐药。因此, 治疗大肠埃希菌非产酶菌引起的感染, 经药敏试验可选用第二、三代的头孢菌素类或庆大霉素, 亚胺培南可作为我院临床治疗产ESBLs菌感染的最佳药物。本次统计结果菌株例数虽少, 但结果显示我院的ESBLs比例较其它地方报告要高, 且耐药情况较严重, 可能与抗生素用量比重增加, 未能严格掌握抗菌药物适应症, 临床用药不规范, 仅凭经验用药和不必要的预防用药等原因有关。应引起有关方面的重视。
参考文献
[1]石亚素, 童国忠, 林奇龙等.69株大肠埃希菌耐药性分析[J].中国卫生检验杂志, 2005, 15:739-740.
[2]NCCLS.Method for dilution antimicrobial susceptibility test for bacte-ria that aerobically[M].Approved standard-fifth edition, 2000.
[3]张征, 刘荣欣, 赵小洁等.产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的药敏分析[J].河北医药, 2005, 27:671-672.
大肠埃希菌感染及耐药性分析 篇2
为了解我院临床分离的大肠埃希菌对常用抗菌药物的耐药性, 及不同标本中大肠埃希菌的耐药性差异, 为临床提供诊断和用药的依据, 本文对我院2011年7月—2012年9月临床送检的血液、尿液、痰和其他标本进行鉴定和耐药性监测, 现报告如下。
1 材料与方法
1.1 菌株来源
360株大肠埃希菌均来自我院2011年7月—2012年9月临床各科所送的血液、尿液、痰和其他 (脓液、胆汁、胸腹水、各种穿刺液等) 标本, 分离于同一患者不同时间的细菌, 如果鉴定和药敏试验结果相同则只按1株计算。
1.2 仪器及材料
法国生物梅里埃公司ATB Expression半自动细菌分析系统, M-H琼脂平板、血琼脂平板、巧克力琼脂平板为广州迪景生物有限公司产品, 头孢他啶 (30μg) 、头孢他啶/克拉维酸 (30/10μg) 、头孢噻肟 (30μg) 、头孢噻肟/克拉维酸 (30/10μg) 纸片为英国Oxoid公司产品, 质控菌株大肠埃希菌ATCC25922和肺炎克雷伯菌ATCC700603由省临床检验中心提供。
1.3 方法
1.3.1 菌株的分离与鉴定
标本的分离培养严格按照《全国临床检验操作规程》要求进行。血培养把装有患者血液标本的快速血培养瓶放入快速血培养仪内, 阳性报警取出转种血平板;尿培养取10μL尿液标本划线接种于血平板上;痰培养将患者痰液分别接种于血平板和巧克力平板;其他标本则根据检测项目选择合理的培养基放置35℃二氧化碳培养箱培养24 h。对平板上灰白、光滑湿润、圆凸大的可疑菌落进行革兰染色, 镜下发现中等大小阴性杆菌, 接着做氧化酶实验结果为阴性后, 挑取纯菌落分别接种克氏双糖铁和相关的微量生化管, 其现象为发酵葡萄糖和乳糖产酸产气, 且IMVi C试验结果为 (++N-) 的菌落初步怀疑为大肠埃希菌。最后采用法国生物梅里埃公司ATB Expression鉴定系统及配套的药敏试剂进行鉴定, 严格按说明书操作。
1.3.2 ESBLs检测
按照美国临床实验室标准化委员会 (CLSI) [2]推荐的标准进行确认实验:采用头孢他啶与头孢他啶/克拉维酸和头孢噻肟与头孢噻肟/克拉维酸双纸片法, 抑菌环直径之差≥5 mm时判定为产ESBLs菌株[3]。
2 结果
2.1 菌株总数及分布
我院2011年7月—2012年9月临床各科共送血液、尿液、痰和其他 (脓液、胆汁、胸腹水、各种穿刺液等) 标本5 132份, 共分离出大肠埃希菌360株, 检出率为7.01%。按标本来源分为血液标本大肠埃希菌检出率为2.27%, 尿液标本为14.68%, 痰标本为8.11%, 其他标本 (包括脓液、胆汁、胸腹水、各种穿刺液等) 为11.53%。见表1。
2.2 大肠埃希菌对抗菌药物的耐药性
临床分离的360株大肠埃希菌对头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南、美洛培南均敏感, 对妥布霉素、替卡西林/克拉维酸、奈替米星、阿莫西林/克拉维酸、头孢西丁、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星的耐药率分别为34.2%、33.3%、30.6%、17.2%、15.3%、4.4%和3.3%;对其他抗菌药物耐药率较高, 均>40%。见表2。
产ESBLs菌株的分离率:从360株大肠埃希菌中分离出产ESBLs菌株91株, 占检出大肠埃希菌的25.28%。
3 讨论
大肠埃希菌广泛存在于人的肠道, 属于正常菌群, 在机体抵抗力下降或发生定位转移时, 成为一种条件致病菌, 可引起人体多个器官系统感染, 包括尿路感染、肺部感染、消化道感染、败血症及脑膜炎等[4]。大肠埃希菌在感染方面的重要性, 表现在各种感染标本中的高检出率上, 本组结果显示360株大肠埃希菌对21种常用抗菌药物的耐药率在50%以上的有8种, 耐药率>70%的有4种, 分别为阿莫西林、哌拉西林、头孢呋辛和头孢噻吩。360株大肠埃希菌中80株从患者尿液分离获得, 155株从患者痰液分离获得, 感染部位以泌尿道和呼吸道为主, 占65.28%。显示大肠埃希菌与其他条件致病菌一样, 主要引起泌尿系统和呼吸系统感染[5]。
由表2可以看出, 大肠埃希菌对阿莫西林、哌啦西林、头孢噻吩、二代头孢 (头孢呋辛) 、替卡西林耐药率较高, 均>60%, 其与这些抗菌药物长期大量使用有关。对抗菌机制不同的抗菌药物呈现多重耐药性, 分析是由于细菌携带编码ESBLs耐药基因的同时还带有其他作用机制抗菌药物的耐药基因, 表现为多重耐药现象, 即同时出现对氨基糖苷类、喹诺酮类、磺胺类等药物的耐药[6]。对阿莫西林/克拉维酸、头孢西丁、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星耐药率低, 不超过20%, 可作为经验用药首选。阿米卡星虽然敏感性高, 但因具有肾毒性、耳毒性, 使用时需慎重。尚未发现耐头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南、美洛培南菌株, 成为治疗大肠埃希菌引起感染的强有力抗生素。
本组360株大肠埃希菌中检出产ESBLs菌株91株, 检出率为25.28%, 大肠埃希菌是易产ESBLs的细菌, 产ESBLs的大肠埃希菌对青霉素类、头孢菌素类药物均耐药, 因此ESBLs检测非常必要[7]。对于大肠埃希菌感染, 临床需要加以警惕;特别是对于产ESBLs细菌感染需要高度警惕, 要常规进行ESBLs检测, 对产ESBLs的大肠埃希菌, 可选用酶抑制剂复合制剂 (派拉西林/他唑巴坦) 等进行治疗;严重感染者可选用碳青霉烯类, 如亚胺培南等。
综上所述, 大肠埃希菌是临床常见的病原菌, 近年来大肠埃希菌的感染增多, 其耐药性增加, 多重耐药现象严重, 且许多抗菌药物的敏感性逐年下降。因此, 应密切监测其耐药性动态变化, 对临床分离菌及时进行药敏试验, 并进行各种酶类检测, 筛选出各种特殊耐药株, 对指导临床正确选择抗菌药, 减少耐药株的产生, 有效控制该菌所致的各种感染及暴发流行, 都具有非常重要的意义。
参考文献
[1]刘学勇, 韩晓燕, 程洛青.105株大肠埃希菌的分布及耐药性分析[J].现代中西医结合杂志, 2009, 18 (10) :1163-1164.
[2]Clinical and Laboratory Standards Institute.Performance standards forsusceptibility testing;Nineteenth informational supplement[J].CLSIdocuments M100-S19.CLSI, 2009.
[3]黄红卫, 朱乐攀, 刘巧突, 等.2005年—2007年大肠埃希菌标本来源及耐药性监测[J].中国医疗前沿, 2008, 3 (8) :26-27.
[4]赵晓丽, 胡大春, 周玲, 等.产ESBLs大肠埃希菌的耐药性分析[J].中国感染控制杂志, 2009, 8 (6) :423-425.
[5]马玲, 吕惠伶, 热孜万.连续5年大肠埃希菌ESBLs监测及耐药性分析[J].检验医学与临床, 2009, 6 (17) :1464-1465.
[6]黄正洪.大肠埃希菌耐药性分析[J].吉林医学, 2012, 33 (11) :97-99.
大肠埃希菌耐药性分析 篇3
1材料与方法
1.1 菌株来源
从2010年1月-2010年12月本院临床送检的各类标本中分离出的大肠埃希菌。
1.2 细菌鉴定和药敏试验
采用Microscan Autoscan-4微生物分析仪对细菌进行鉴定和药敏试验。药敏试验判断标准和结果解释参照美国临床和实验室标准协会 (CLSI) 标准[1], 并定期用标准菌株进行药敏试验质量控制。大肠埃希菌ATCC25922由中国普通微生物菌种保藏中心提供。
1.3 超广谱β-内酰胺酶 (ESBLs) 检测
采用纸片扩散法, 操作按照CLSI 2008年版[1]进行。
1.4 统计学方法
数据由WHONET 5.4软件分析处理所得。采用SPSS 10.0软件包进行分析。计数资料以率 (%) 表示, 进行χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1 细菌分离结果
2010年我院从临床送检的各类标本中共分离出革兰阴性杆菌1484株, 其中大肠埃希菌556株 (37.47%) , 检出率第1;其余依次为肺炎克雷伯菌380株 (25.61%) ;铜绿假单胞菌338株 (22.78%) ;鲍曼不动杆菌166株 (11.19%) ;嗜麦芽窄食单胞菌44株 (2.96%) 。
2.2 ESBLs检测结果
556株大肠埃希菌中检出产ESBLs菌350株, 检出率为62.95%。
2.3 药敏试验结果
大肠埃希菌产酶株与非产酶株对常用抗菌药物的耐药率比较, 见表1。
3讨论
大肠埃希菌是肠道正常菌群, 可因入侵肠外组织及免疫力下降等因素而成为条件致病菌。据国内研究资料显示[2]:大肠埃希菌居各类临床分离菌的首位, 在肠杆菌科中居第1位。本次调查结果显示, 大肠埃希菌检出率居第1位, 占37.47%, 与文献报道一致。 其中产ESBLs (超广谱β-内酰胺酶) 占62.95% (350/556) , 远高于我院 2009 年40%的检出水平。也远高于江晓红[3]、廖新华[4]等的报道, 提示应深入调查产ESBLs检出率快速增长的原因, 及时合理的调整用药策略, 控制大肠埃希菌的感染, 降低产ESBLs大肠埃希菌株的发生率。
注:表中“-”表示未对此药物做药敏试验
表1显示, 产ESBLs大肠埃希菌对抗菌药物的耐药率明显高于非产ESBLs菌株;非产 ESBLs菌对哌拉西林/他唑巴坦、头孢呋辛、头孢西丁、头孢噻肟、头孢他啶、头孢曲松、头孢吡肟、氨曲南、阿米卡星、亚胺培南均较敏感, 耐药率<20.0%, 仍可作为临床上非产ESBLs菌株感染的治疗药物。产ESBLs 菌仅对亚胺培南、阿米卡星和哌拉西林/他唑巴坦敏感, 耐药率<10.0%;对头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南、氨苄西林/舒巴坦的耐药率>85.0%。实验结果表明, 产 ESBLs 菌和非产 ESBLs菌对抗菌药物的耐药率有很大的差别, ESBLs已成为细菌对β-内酰胺类抗生素产生耐药性的主要原因, 它能够水解青霉素、广谱及超广谱头孢菌素和单环β-内酰胺抗生素[5]。临床对于大肠埃希菌感染, 应结合药敏结果合理使用抗菌药物。
参考文献
[1]Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) .PerformanceStan-dards for Antimioroliial Susceptibility testing Standards:EighteenthInfor-mational Supplement[S].2008, M100-S18.
[2]罗宇鹏.某院2007-2009年大肠埃希菌临床分离株耐药性变化分析[J].现代临床医学, 2011, 37 (1) :68-69.
[3]江晓红.大肠埃希菌的临床分布及耐药性分析[J].中国实用医药, 2010, 5 (36) :162-163.
[4]廖新华, 王辉.大肠埃希菌感染临床分布及耐药性分析[J].实用中医药杂志, 2011, 27 (3) :196-197.
大肠埃希菌耐药性分析 篇4
关键词：大肠埃希菌,耐药性,研究
大肠埃希菌是引起社区和医院感染的重要的革兰阴性菌, 亦是主要的产生超广谱β-内酰胺酶 (ESBLs) 细菌之一, 是常见的多药耐药菌。产ESBLs细菌耐药谱广, 耐药程度严重, 容易在多种细菌中传播, 增加临床的抗感染治疗难度, 是医院感染重要的病原菌[1]。为了解本院大肠埃希菌的耐药性, 现将2008—2012年临床科室送检样本中分离出的大肠埃希菌进行耐药性分析。
1 材料与方法
1.1 材料
2008—2012年本院临床科室从送检样本中分离出大肠埃希菌1159株, 标本分别来自尿液、痰液、引流液和脓性分泌物等。
1.2 细菌分离与鉴定
按照《全国临床检验操作规程》进行细菌分离培养。菌株以Microscan autoscan-4细菌药敏分析仪鉴定。
1.3 药敏试验
使用Kirby-Bauer纸片琼脂扩散法, 以卫生部临检中心标准菌株大肠埃希菌 (ATCC25922) 作药敏质控菌。药敏试验结果判定标准按CLSI/NCCLS 2007年版为执行标准。
1.4 ESBLs检测方法
按CLSI推荐的标准纸片扩散法测定ESBLs, 采用头孢噻肟 (30μg) 及头孢噻肟/克拉维酸 (30μg/10μg) 组合、头孢他啶 (30μg) 及头孢他啶/克拉维酸 (30μg/10μg) 组合。任一组药敏试验的抑菌环直径相差≥5mm时判定ESBLs。
2 结果
2.1 2008—2012年大肠埃希菌的分离率变化
2008年大肠埃希菌的分离率最低, 2012年大肠埃希菌的分离率最高, 详见表1。
2.2 2008—2012年检测大肠埃希菌产ESBLs率变化
2008年大肠埃希菌产ESBLs率最低, 2012年大肠埃希菌产ESBLs率最高 (见表2) 。
2.3 2008—2012年大肠埃希菌对16种抗菌药物的体外药敏试验结果
2008—2012年, 阿米卡星的耐药率下降最快, 环丙沙星的耐药率上升最快, 详见表3。
3 讨论
从本院近5年的大肠埃希菌的耐药率分析看, 大肠埃希菌对常用的抗菌药物呈持续高水平耐药, 对青霉素类、第一、二代头孢菌素类、喹诺酮类及磺胺类均保持较高的耐药率。
肠科杆菌的细菌耐药性每年都在增加, 细菌中的耐药基因种类多样, 这是细菌多重耐药的原因。大肠埃希菌耐药菌株产ESBLs是其对ESBLs抗菌药物耐药的主要原因, 此机制造成的耐药占耐药菌株的80%[2]。ESBLs能够水解青霉素类和头孢菌素类抗生素而使细菌耐药, 大肠埃希菌对氨苄西林耐药率最高, 达77.1%;对头孢唑啉耐药率第二, 为66.5%, 对头孢呋辛耐药率为57.1%。ESBLs能够通过细菌质粒进行传播, 从而使耐药菌株不断产生, 耐药能力也越来越强。有酶抑制剂的青霉素类和头孢菌素类抗菌药物的耐药率明显的降低, 氨苄西林-舒巴坦的耐药率为40.3%, 头孢哌酮-舒巴坦的耐药率为1.4%, 哌拉西林-他唑巴坦的耐药率为1.6%, 这说明酶抑制剂使得ESBLs对β-内酰胺环的水解能力削弱, 增加了此类抗菌药物的抗菌作用[3]。在临床治疗产ESBLs菌感染的用药原则是:不能使用包括第三代头孢菌素类在内的β-内酰胺类抗菌药物, 启用碳青霉烯类抗菌药物如美罗培南、亚胺培南;头霉素类抗菌药物或ESBLs抑制剂抗菌药物[4]。本院5年来美罗培南的耐药率仅为1.9%, 能有效治疗大肠埃希菌感染, 特别是用于产ESBLs菌感染的抗菌药物。
喹诺酮类耐药率5年来都保持较高水平, 环丙沙星耐药率为51.2%, 左氧氟沙星耐药率为47.1%, 由于喹诺酮类药物的指南经验性治疗可用于肠道感染, 泌尿系统感染和社区获得性呼吸道感染, 使得近年来喹诺酮类抗菌药物大规模使用, 从而其耐药菌株逐渐增多, 耐药率也是居高不下。
氨基糖苷类的阿米卡星对大肠埃希菌保持较好的敏感性, 耐药率为20.3%, 原因主要是阿米卡星使用较少, 5年来的采购量仅有1000支。
大肠埃希菌是人体肠道的正常菌群, 只有在改变寄生部位、免疫力低下或者长期使用广谱抗菌药物等情况时成为条件致病菌, 继而引发各类型的细菌感染;产ESBLs细菌通过质粒传播, 介导耐药, 很容易在同种、甚至不同种细菌中传播, 成为医院感染的重要病原菌[5]。通过本院5年的大肠埃希菌的药敏试验数据来看, 大肠埃希菌对抗菌药物体外的抗菌活性变化不大, 常用的抗菌药物耐药率仍然呈持续高水平趋势, 耐药现象依然严峻。因此抗菌药物的合理应用十分重要。减少抗菌药物滥用, 依据药敏试验结果选用敏感的抗菌药物, 严格掌握抗菌药物的适应证等。本院通过开展抗菌药物临床应用专项整治活动, 执行抗菌药物分级管理制度, 分层次、分阶段的控制使用抗菌药物, 取得一定的成效。
注:“-”代表无
参考文献
[1] 汝玲.本院2006—2010年临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性分析[J].中国药房, 2012, 23 (30) :2841-2844.
[2] 刘立涛, 万莉红, 邵振俊, 等.Ⅰ类整合子介导大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌耐药机制的初步研究[J].中国抗生素杂志, 2012, 37 (2) :132-136.
[3] 杨娟, 周静.头孢哌酮/舒巴坦对346株革兰氏阴性杆菌抗菌活性的分析[J].中国医院用药评价与分析, 2010, 10 (5) :451-453.
[4] 张庆兰, 梁柱红.2005-2009年某院细菌分布及耐药性分析[J].药物流行病学杂志, 2011, 20 (5) :233-236.
大肠埃希菌耐药性分析 篇5
超广谱β-内酰胺酶通常定义是细菌质粒介导的可水解甲氧亚氨基β-内酰胺类抗生素 (例如头孢噻肟、头孢他啶、氨曲南等) 的酶[1], 此外还有多种定义, 方海俊等[2]定义为主要由大肠埃希菌与克雷伯菌属等肠杆菌产生;杨莉梅[2]定义为能够导致3代头孢与氨曲南的抑菌环缩小, 但未必属于耐药范围;黄永茂等[3]认为ESBLs虽然对β-内酰胺类抗生素耐药, 但是对碳青霉烯类药物十分敏感, 并且通常从普通的β-内酰胺基因 (SHV、TEM-1、TEM-2) 突变产生[4]。
2 超广谱β-内酰胺酶的检测
ESBLs的广泛流行和传播, 部分原因是因缺乏可靠的检测方法, 目前临床上使用的方法有很多, 包括纸片扩散法、E-test纸条、自动化系统测试、三维测试法、双纸片法、头孢硝噻吩竞争分析试验、等电聚焦电泳[5];一般来说ESBLs的检测包括筛选和确诊2个层次, 美国国家临床试验室标准化委员会[6]推荐了大肠埃希菌ESBLs初步筛选与表型确证试验;Jacoby等[7]提到产酶基因的检测方法, 包括DNA-DNA探针杂交、核苷酸序列分析、聚合酶链反应等。
3 产ESBLs大肠埃希菌耐药机制
大肠埃希菌的耐药机制主要包括降低细胞膜的通透性, 让抗生素难以进入细菌到达作用靶位;产生灭活酶和钝化酶, 能够使抗生素的作用降低从而失去效果;与作用靶位结合, 导致抗生素失效, 还有如主动外排系统等[8]。周惠庚等[9]近年来发现, ESBLs的耐药性和其质粒编码有着直接关系, 因为ESBLs是质粒编码的, 因此可以通过转化、结合与转导等形式在菌群间扩散耐药基因, 使原本敏感菌转变为耐药菌 (在同种和不同种菌群间均可进行转化) , 并且新产生的ESBLs菌通常为多重耐药菌。因此, 国内外学者普遍认为国第3代头孢菌素的过度滥用产生的选择性压力是导致产ESBLs大肠埃希菌大量增加的原因。
4 产ESBLs大肠埃希菌的分布
ESBLs基因型和检出率在各国均存在差异, 呈现一定的地域特征。根据谢小军等[10]学者调查, 不同国家和地区因临床使用抗生素的种类、数量不尽相同, 流行的ESBLs基因种类也不一样。龙军[11]等研究表明, 在美国、法国为主要流行种类为TEM型, 韩国和德国主要为SHV型, 台湾地区、日本、上海地区主要为CTX-M型。有资料显示[12], 我国产ESBLs大肠埃希菌的主要基因型为CTX-M, 其次是SHV和OXA型号。马丽君等[13,14]调查显示, 近几年来, 通过研究我国产ESBLs大肠埃希菌的阳性率流行病学, 发现浙江省大肠埃希菌ESBLs阳性率为32.1%, 上海为25.3%, 广州地区的大肠杆菌ESBLs阳性率仅为为13.4%。北京10所医院大肠埃希菌ESBLs阳性率为28.2%。抗生素特别是第3代头孢菌素的广泛和ESBLs的感染流行密切相关, 漆坚等[15]研究表明ESBLs的流行和头孢他啶消耗量成相性相关, 而减少头孢他啶的用量则能够降低产ESBLs菌的流行。因此避免滥用抗生素, 特别是第3代头孢菌素的滥用对避免感染发生十分重要。
5 预防对策和治疗
大肠埃希菌耐药性分析 篇6
关键词：产ESBLs大肠埃希菌,耐药性,合理用药
随着抗菌药物大量使用, 产超广谱β-内酰胺 (Extendspectrumβ-lactamasaes, ESBLs) 的菌株不断增加, 因其耐药性强、耐药谱广、易传播, 已成为重要的检测目标菌之一[1]。为此, 对本院2012年1-12月临床病区送检标本中分离的大肠埃希菌对临床常见抗菌药物的耐药性进行回顾性调查分析, 现报道如下。
1 资料与方法
1.1 菌株来源
2012年1-12月来自我院各病区标本分离的大肠埃希菌。
1.2 方法
菌株的鉴定与药敏采用VlTEK2eompaet型全自动细菌分析系统及配套GN鉴定卡和GN-13药敏卡, 质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853。
1.3 统计学方法
应用WHONET 5.6软件对菌株及药敏试验结果进行分析。
2 结果
2.1 大肠埃希菌在临床科室中分布以消化、内分泌科, 肾内、血液科和儿科为主。其中共分离产ESBLs大肠埃希菌146株, 占61.1%, ESBLs检出率以骨科、ICU、肾内/血液科、肿瘤内科为主。具体分布见表1。
2.2 产ESBLs与非产ESBLs大肠埃希菌对常见抗菌药物的耐药率结果显示:非产ESBLs大肠埃希菌对大多数抗菌药物敏感, 而产ESBLs大肠埃希菌耐药谱广, 对二代、三代头孢菌素、单环类、氨基糖苷类和喹诺酮类耐药率高, 但对头孢替坦、厄它培南、亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦敏感性高, 见表2。
3 讨论
大肠埃希菌是人和动物肠道中的正常栖居菌, 可以寄生在医患人员皮肤上, 引起院内传播, 也可以引起社区传播。在不断大量使用持续的各种β-内酰胺类抗菌药物的选择压力下, 致病菌不断更新其耐药本领, 以求“适者生存”, 产生的超广谱β-内酰胺酶已成为重要的广谱耐药介质引起全球关注, 耐药情况日益严峻。
药敏试验显示:产ESBLs大肠埃希菌对二代、三代头孢菌素耐药率>70%, 单环类抗菌药物耐药率>60%, 对氨基糖苷类和喹诺酮类耐药率均>40%。但对头孢替坦、厄它培南、亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦敏感性高, 根据我国抗菌药物临床应用管理办法, 针对产ESBLs大肠埃希菌, 停用二代、三代头孢菌素和单环类抗菌药物, 优先选用头霉素、β内酰胺酶抑制剂和碳氢酶烯类药物。美国CLSI标准指出[2], 产ESBLs细菌即使体外对第三代、第四代头孢菌素敏感, 也应视为耐药, 故我院分离的产ESBLs大肠埃希菌对头孢吡肟敏感, 但原则上不予使用。
本文结果显示:分离产ESBLs大肠埃希菌146株, 占61.1%, ESBLs检出率以ICU、肾内/血液科、肿瘤内科为主, 多数患者自身免疫能力低下, 抗生素使用率高, 动静脉置管多等, 这些都是引起产ESBLs菌株感染的重要因素。骨科检出率虽然高, 考虑到样本量少, 无特殊指导意义。对此, 我院感控科针对检出率高的科室制定加强消毒隔离措施: (1) 尽量缩短尿管、呼吸机、深静脉置管时间; (2) 提高洗手依从性, 减少交叉感染; (3) 提高无菌操作意识。
细菌的耐药性不断进展[3], 对最初分离敏感的细菌, 经3~4d三代头孢菌素的治疗后, 有可能发展为耐药, 因此对重复分离菌株应重复进行药敏试验。综上所述, 建议临床常规检测ESBL[4], 定期监测地区性产ESBLs菌株, 掌握本地区耐药菌特点, 避免不合理使用抗菌素, 以减少耐药细菌的产生, 必要时加强消毒隔离措施, 避免院内感染暴发。
参考文献
[1]吴学兵, 李苏华, 杨建华, 等.上海松江中心医院2007-2009年临床分离大肠埃希菌耐药性监测[J].中华临床医师杂志:电子版, 2011, 5 (5) :169-171.
[2]Clinical and Laboratory Standards Institute.Performance standards for antimicrobial susceptibility testing[M].Nineteenth informational supplement (M100-S19) .Wayne:CLSI, 2009.
[3]产超广谱β-内酰胺酶细菌感染防治专家委员会.产超广谱β-内酰胺酶细菌感染防治专家共识[J].中华实验和临床感染病杂志:电子版, 2010, 4 (2) :51-54.
大肠埃希菌耐药性分析 篇7
1材料与方法
1.1材料
1.1.1菌株来源108株大肠埃希菌,2013年分离自深圳龙华地区餐饮业从业人员,所有菌株由梅里埃公司VITEK-32全自动微生物分析鉴定仪鉴定。大肠埃希菌ATCC25922、阳性对照菌株均为本实验室保存。
1.1.2药敏纸片氨苄西林(AMP)、头孢唑啉(CEZ)、 阿莫西林/棒酸(AMC)、头孢呋辛(CXM)、头孢吡肟 (CPM)、头孢曲松(CRO)、亚胺培南(IMP)、头孢他啶 (CAZ)、头孢西丁(FOX)、头孢噻肟(CTX)、氨曲南 (AZT)、头孢他啶/克拉维酸(CAZ/Clav)、头孢噻肟/克拉维酸(CTX/Clav),英国Oxoid公司。
1.1.3仪器与试剂PCR仪(美国ABI公司)、凝胶成像系统(Biorad公司);细菌基因组DNA提取试剂盒、 PCR反应试剂(大连宝生物科技有限公司)。
1.2方法
1.2.1药物敏感试验采用纸片扩散法检测餐饮业从业人员携带的108株大肠埃希菌对9种常用 β-内酰胺类药物的敏感性,参照2011年CLSI标准判读结果,质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922。
1.2.2 ESBLs表型检测采用双纸片扩散法检测 β-内酰胺类药物耐药菌株的超广谱 β-内酰胺酶(ESBLs)。 以肺炎克雷伯菌ATCC7006O3作阳性对照,以大肠埃希菌ATCC25922作阴性对照。初筛试验:将受试菌株均匀涂布于MH琼脂平板,贴纸片CAZ、CTX、CRO、 AZT,37 ℃培养18~24 h。当抑菌圈直径满足以下任一条件:CAZ≤2 2mm,CRO≤25 mm,AZT、CTX≤27 mm, 疑似产ESBLs菌株,进一步做确证试验。确证试验:将受试菌株均匀涂布于MH琼脂平板,分别贴CAZ、CAZ/ Clav以及CTX、CTX/Clav 2组纸片,37℃培养18~24 h。 当复合制剂纸片的抑菌圈直径比单一抗生素纸片的抑菌圈直径≥5 mm时,判为产ESBLs菌。
1.2.3产ESBLs基因检测根据文献[1]设计产ESBLs基因TEM、SHV、OXA、CTX引物。见表1。按照细菌基因组DNA提取试剂盒说明书提取标本的DNA,PCR反应总体积为50 μl,引物各1 μl(20 μmol/L),DNA模板2 μl,Premix Tap25 μl,无菌双蒸水21 μl。循环参数: 94℃ 预变性5 min,94℃ 变性45 s,TEM、SHV、OXA、 CTX的退火温度依次为54、58、55和56℃,退火时间45 s,72℃延伸1 min,共35个循环;72℃再延伸7 min。PCR产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳,凝胶成像仪观察结果。
1.2.4 Ⅰ类整合酶基因及其可变区基因盒的扩增根据文献[2]设计Ⅰ类整合酶基因(int I1)及可变区基因盒的引物。见表1。PCR反应体系同上,循环参数:94℃预变性为5 min,94 ℃变性30 s,整合酶和基因盒的退火分别为55和54 ℃,时间30 s,72 ℃延伸1 min,共35个循环;72 ℃再延伸10 min。PCR产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳,凝胶成像仪观察结果。阳性PCR产物送公司测序 , 登陆NCBI网站 (http://cnbi.nlm.nih.gov),用BLAST比对分析测序结果。
1.2.5统计学分析用Graph Pad Prism5统计软件, Fisher精确概率法,比较产ESBLs株与非产ESBLs株的耐药率,以P<0.01为差异有统计学意义。
2结果
2.1药物敏感性深圳龙华地区餐饮业从业人员携带的108株大肠埃希菌对常用 β-内酰胺类药物耐药率见表2,最高为氨苄西林、最低为亚胺培南;有61.1% (66/108)对2种及2种以上 β-内酰胺类药物耐药。
2.2 ESBLs表型检测在 β-内酰胺类药物耐药菌株中,检出25株ESBLs阳性菌,检出率为37.9%(25/66)。 统计分析显示:25株产ESBLs菌对头孢呋辛、头孢吡肟、头孢曲松和头孢唑啉的耐药率与非产ESBLs菌的耐药率差异有统计学意义(均P<0.01),见表2。
2.3ESBLs基因检测在66株β-内酰胺类药物耐药菌中,ESBLs基因检出率为72.7%(48/66);其中TEM基因检出11株,SHV17株、CTX13株、OXA11株,其中2株菌同时携带SHV和CTX,1株携带TEM和CTX, 1株携带OXA和CTX。β-内酰胺酶相关基因的PCR产物电泳图见图1。
注:S—敏感,R—耐药。P 为 Fisher 确切概率法计算所得,表示产 ESBLs 菌株与非产 ESBLs 菌株耐药率比较。
注:M: 2000bp DNA Marker; P1、P2、P3、P4: 分 CTX、OXA、SHV、 TEM 阳性对照;1~3 号为 CTX 产物电泳图 ;4~6 号为 OXA 产物电泳图; 7~9 号为 SHV 产物电泳图;10~12 号为 TEM 产物电泳图
2.4 Ⅰ类整合子及其基因盒检测在深圳餐饮业从业人员携带的108株大肠埃希菌中,检出59株菌携带Ⅰ 类整合酶基因,检出率为54.63%(59/108),见图2。Ⅰ 类整合子基因盒检出率为79.7%(47/59),共检出7种类型的基因盒。见图3、表3。氨基糖苷类和甲氧苄啶类的耐药基因在数量上占优势,而超广谱 β-内酰胺酶基因CTX-M、OXA占32.2%(19/59)。
注:M: 2000bp DNA Marker;P:Ⅰ类整合酶基因阳性对照 N:阴性对照;1~9: 标本的Ⅰ类整合酶基因产物
注:M:2 000bp DNA Marker;A~G: 7 种不同类型的基因盒 PCR 产物
3讨论
细菌耐药现象已经成为全世界临床医生和微生物学家关注的问题。在我国由于人群和动物中广泛存在抗生素的不合理使用现象,健康人体内的正常菌群也可能出现耐药株,正常人群中肠道大肠埃希菌中的耐药株除引起携带者自身感染外,还可不断由肠道排出, 污染环境并在人群之间传播[3]。饮食行业从业人员是正常人群中的一个特殊群体,这个特殊群体对肠道病原菌的传播以及在肠道菌耐药性的传播中起着十分重要的作用。
本研究中,深圳龙华地区正常人群中餐饮业从业人员分离的肠道大肠埃希菌对常用 β-内酰胺类药物的耐药率为氨苄西林87.0%、阿莫西林/棒酸60.2%、头孢呋辛59.3%、头孢唑林50.9%、头孢曲松36.1%、头孢他啶34.3%、头孢西丁31.5%、头孢吡肟16.7%、亚胺培南11.1%;其中61.1%菌株对2种及2种以上药物耐药。国外关于正常人群中大肠埃希菌的耐药检测报道的数据一般低于本研究的结果[3,4,5],提示我国正常人群中大肠埃希菌的耐药性严重。
产 β-内酰胺类酶是细菌对 β-内酰胺类药物耐药的主要机制,该酶可由TEM、SHV、OXA、CTX等基因介导,该基因可存在于质粒或整合子上,易在细菌间转移,造成耐药性的广泛播散。本研究中检测的大肠埃希菌 β-内酰胺类酶的检出率为37.9%,ESBLs基因的检出率为72.7%(48/66),有的菌株同时携带SHV和CTX,或TEM和CTX,或OXA和CTX 2种基因,其中以TEM基因型为主。Ⅰ类整合子在该菌的检出率为54.6%,在Ⅰ类整合子阳性菌株中CTX-M、OXA的检出率为32.2%。同时在其携带的整合子中基因盒还检测到氨基糖苷类和甲氧苄啶类的耐药基因。提示该菌对其他类抗菌药物也存在耐药性,为多重耐药菌株。这与一些报道一致[7,8],因为携带ESBLs基因的质粒可同时携带氨基糖苷类、四环素、氯霉素、磺胺类和喹诺酮类等多种耐药基因,可介导细菌对多类抗菌药物的耐药。结果提示餐饮业从业人员携带的大肠埃希菌在 β-内酰胺类药物耐药性播散中具有潜在的危险。β-内酰胺类药物是临床常用的抗菌药物,细菌对该类药物的耐药, 严重影响该药的临床细菌性疾病的治疗。
耐药性在细菌与细菌间的水平传播,速度快,范围大,是细菌产生耐药性的重要原因。餐饮业从业人员是正常人群中的一个特殊群体,这个特殊群体对肠道病原菌的传播以及在肠道菌耐药性的传播中起着十分重要的作用。该群体携带的大肠埃希菌的耐药性有上升趋势,因此,对该群体携带的大肠埃希菌的耐药性监测非常必要,对控制细菌耐药性形成具有重要意义。