脑神经损伤机制

脑神经损伤机制（精选9篇）

脑神经损伤机制 篇1

周围神经损伤临床十分常见, 通常是由于周围神经受到牵拉、挤压或锐器切割等造成神经结构、功能受损甚至连续性中断等继而导致支配区域产生一系列相应功能障碍表现。

周围神经损伤后的诊疗已然普及, 然而损伤后功能的恢复却常不能令人满意.现研究认为周围神经损伤实质上是神经细胞的轴突损伤, 即整个神经细胞的部分损伤[1]。因而周围神经损伤后的功能恢复有赖于其轴突成功再生。成功再生应包括以下几点: (1) 损伤神经元胞体的存活和功能正常; (2) 损伤神经近段轴突芽生与延伸; (3) 再生轴突与效应器重新建立突触联系; (4) 神经再支配的靶器官的复原; (5) 轴浆运输恢复[2]。因此, 周围神经损伤修复的关键是:及时恢复神经干的连续性, 保护神经元, 同时还需努力促进轴突再生, 防止其所支配的效应器萎缩。正常的神经功能有赖于轴突的双向轴浆转运:一方面, 通过顺行转运的神经介质和神经营养因子刺激神经末梢和效应器, 保持所支配效应器活力与功能;另一方面, 通过逆行转运的神经营养因子及神经诱导因子, 从而促进神经轴突的再生和趋化、定向生长[3]。

周围神经损伤、断裂后胞体、轴突、效应器之间的信息联系通道被阻断, 胞体由于得不到效应器分泌的经轴浆逆行转运的神经营养因子而逐步趋向凋亡, 所以周围神经损伤后怎样保持神经元胞体结构和功能的正常, 对日后神经轴突的再生及最大程度恢复神经功能具有重要意义[4,5]。神经轴突断裂导致损伤平面以远轴突缺失了胞体的营养代谢, 所以损伤平面以远神经纤维最终全长发生溃变, 同时大量SCs分裂增殖重新排列形成Bungner氏带用来引导再生轴突延伸入终末效应器组织的这个过程称之为瓦勒溃变[6,7] (wallerian degeneration, WD) 。Wallefian溃变形成了一个十分适宜轴突再生的微环境[8~10]:充分被激活的SCs等生产并释放大量神经营养因子 (neurotrophic factors, NTF) 诸如NGF, BDNF, NT.3等、细胞因子、黏附分子等, 介入并引导细胞迁移、吞噬、分裂和增殖等活动用来保障和维持受损神经元的存活并促进轴突的再生。

周围神经损伤似乎仅仅局限于神经元的轴突部分, 但实际上, 神经细胞作为一个整体, 其功能的完全恢复涉及三个组成部分, 即轴突、胞体和神经末稍结构和功能的恢复。理论上讲, 周围神经受损或离断后, 只要神经元胞体存活, 就会发生再生反应。可是周围神经再生不等同于其支配的靶器官组织的结构功能恢复, 即有效再生。典型的周围神经的再生过程可概括为以下几点: (1) 周围神经损伤但神经元胞体存活导致神经元胞体经历逆行性反应后恢复功能, 启动近端轴突尖部的再生、出芽过程; (2) 胞体近端轴突的出芽与延伸, 以及近端再生轴突在合适的微环境和必要条件下, 长入相应远端雪旺氏细胞基膜管中, 并且一直延长至神经末梢, 最终重新与相应的末梢靶器官恢复建立突触联系, 重建其正常的结构特征和生理特征而最终成熟; (3) 神经重新支配的末梢靶器官逐步恢复因轴突断裂失神经支配而发生的结构变化。Sunderland将周围神经开始再生至功能恢复的时间划分为四个时项: (1) 初期延迟, 也就是指从神经元复原、近端轴突开始生长、芽生, 再生轴突抵达损伤区所需的时间。一般损伤部位距神经元胞体愈近, 损伤亦愈严重; (2) 损伤部位的延迟, 是指再生轴突进入损伤平面以下神经基膜管之前所需的时间; (3) 损伤平面以下轴突生长期, 是指再生轴突尖最终抵达周围神经末梢所耗费的时间, 主要受生长距离, 轴突尖生长速度的影响; (4) 功能恢复期, 即神经重新支配靶器官, 靶组织及其从失神经支配和被迫废用期恢复所需时间, 由于这段时间变异很大, 因此对神经再生过程的精确时间和准确程度的估计非常困难。

周围神经损伤临床非常多见, 属于常见创伤或其并发症。其损伤性质不同于一般的组织损伤[11], 它本质上归属于细胞损伤的范围, 神经束断裂后所有组成该神经束的神经纤维的神经元均发生细胞损伤, 同时导致神经轴突的连续性中断、神经的传导和支配作用丧失, 也就是自神经元胞体方向传来的指令性神经冲动不能传导至末梢靶细胞, 所有经由顺行轴浆运输系统运输的神经介质和营养靶细胞的物质亦不能继续运输至神经末梢, 导致神经丧失了对靶器官、靶细胞的支配功能和一切其他作用。末梢靶器官、靶细胞丧失神经支配后, 逐渐产生结构上和功能上失神经改变, 例如肌肉萎缩和纤维化、感觉小体变性消失、运动终板变性、坏死等。而且, 发自靶器官、靶细胞的向心性神经冲动不能到达胞体, 经逆行轴浆运输系统运输的、产自靶器官靶细胞、对神经元胞体有重要神经营养价值的因子也不能转运到达神经元胞体, 这些都对神经元的生存与功能的维持有着直接影响, 因此周围神经损伤后将导致整个神经元的损伤反应。由此我们可看出, 周围神经损伤后的第一要务就是及时地恢复神经干的连续性, 全力避免神经元死亡, 积极促进轴突再生, 有效防止效应器萎缩。近些年, 修复周围神经损伤的外科技术取得了很大程度发展;尤其是显微外科技术在周围神经损伤修复中的应用, 极大的促进和改善了神经吻合理念和技术。周围神经损伤后外科修复的主要目的就是准确的对接原本一束的或功能相同的神经束, 从而为再生轴突长入末梢靶器官创造最理想条件, 以达到功能的最佳恢复。

运动性轴突和肌肉运动终板必须重建联系, 再生的轴突才可能最终成熟;同理, 再生若要成功感觉性轴突与感觉末梢器官必须相连。错位的对接生长不能使再生的轴突成熟, 进而影响神经再生的质量。Brushart等 (1980) [12]利用辣根过氧化酶逆行追踪法研究坐骨神经断裂修复后的神经功能束对合情况, 结果:周围神经断裂后不管外膜缝合还是束膜缝合都发生了感觉纤维和运动纤维错误联接的情况, 如此必然产生轴突错误支配终末器官的可能性。故单纯采用显微外科精细缝合的方法完全解决周围神经断裂修复后恢复不佳的问题是不现实的。

周围神经损伤后的再生和修复问题, 始终是困扰临床外科工作者的一大难题, 周围神经损伤后能不能实现成功再生主要取决于是否具备适合其生长的再生微环境[13]。研究发现神经组织成分复杂, 其成分包含:纤维结缔组织、血管、神经外膜、内膜、束膜、雪旺氏细胞和轴突, 其中每一部分在神经正常功能中都承担不同作用, 它们对神经损伤后的反应各不相同, 都会发生各自独立的再生形式。周围神经受损后成功再生的首要条件就是保障神经胞体结构和功能的正常, 防止其发生不可逆变性, 使其维持在可生长状态, 其次就是诱导再生轴突延长穿越损伤区, 最后则是轴突生长锥长入效应器找到并识别靶器官, 重建完整轴突。而其中最为关键问题之一是如何提供一个有利的生长环境给损伤的周围神经, 以促进其充分再生和功能恢复[14]。直接进行神经吻合, 无论采取何种吻合方法, 均难以解决神经束的错对、神经束的遗漏 (断端的逃逸) 及吻合口的结缔组织、瘢痕增生。两断端神经功能束的完整准确对接是保证良好修复效果的关键所在。

周围神经损伤修复后其功能恢复的效果在很大程度上亦取决于新生轴突再生的速度、质量和轴突的定向生长, 现通过研究观察到神经营养因子和神经轴突诱向因子可提高新生轴突再生的速度、质量并促进轴突的定向生长。神经营养因子 (neurotrophicfa ctors, N TFs) 是由靶组织合成的、经轴浆逆向运输至神经元胞体、给神经元胞体提供营养支持、维持神经元细胞存活的多肽类物质[15], 体内起着营养神经元同时还有促进轴突生长的作用。此外, 神经营养因子还发挥着促进胚胎神经元的发育及成熟、保障成熟神经元的存活的作用。神经诱向因子由远端溃变的神经节段合成, 局部形成一个浓度梯度, 在一定的距离内发挥吸引作用而影响轴突的生长方向[16]。

综上所述, 我们可以看出周围神经损伤后其修复再生是一个十分浩大的系统工程, 机制复杂, 影响因素众多, 这其中保障受损神经元胞体的存活及科学的吻合方法对促进神经修复再生尤为重要, 相信随着人们对其机制的不断探索和了解, 必将为临床治疗提供更加可靠有效的依据。

脑神经损伤机制 篇2

疗方案： 现治疗除神经营养药外可采用中药增强改善神经受伤局部血液循环，并采用神经再生之药兴奋激活术后的神经细胞以支配下肢功能获得恢复。锻炼时需采用校形鞋保护好踝关节预防磨损性足畸形发生骨性磨损并发足外翻致重残。

在平时的护理中也可以给患者们多吃些食物，进行补充能量：

组织的形成离不开维生素C要形成结实强健的纤维环，维生素C是不可缺少的。日常应多补充维生素C含量多的食品：红薯、马铃薯、油菜花、青椒、青白萝卜叶、油菜、菜花、卷心菜、芹菜、草莓、甜柿子、柠檬、橘子。

维生素E有扩张血管、促进血流、消除肌肉紧张的作用，用于缓解疼痛。维生素E含量多的食品：鳝鱼、大豆、花生米、芝麻、杏仁、粗米、植物油。

脑神经损伤机制 篇3

关键词：脊髓损伤,神经源性膀胱,临床治疗,作用机制

神经源性膀胱(NB)尿道功能障碍是一类由神经病变或损害如脊髓损伤(SCI)引起的膀胱和(或)尿道的功能障碍性疾病,常伴有膀胱尿道功能协调性失常。神经源性膀胱尿道功能障碍可产生极其复杂的排尿症状,常见有排尿不畅、尿潴留等[1],由此诱发的泌尿系并发症也是导致患者死亡的重要原因,因此治疗SCI后NB必须控制泌尿系统并发症。目前临床对SCI后NB的治疗手段包括药物、手术、电刺激、磁刺激、康复训练等,传统针灸治疗也有一定疗效[2]。本文将对我院收治的脊髓损伤后神经源性膀胱患者的临床资料进行详细分析,现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2011年3月～2013年6月我院收治的脊髓损伤后神经源性膀胱患者70例,其中男38例,女32例,年龄38～76岁,平均56.7±1.2岁,病程2～15个月,平均8.5±2.6个月;完全性脊髓损伤31例,不完全性脊髓损伤39例。

1.2 纳入与排除标准

1.2.1 纳入标准

①经MRO及CT确定所有患者均符合《脊髓损伤审计学分类标准》[3]中的相关规定,生命体征稳定、神志清楚;②在脊髓休克期过后合并膀胱功能障碍;③家属知情并签署同意书。

1.2.2 排除标准

①合并全身性或泌尿系统疾病,尿道畸形、尿道损伤及膀胱颈梗阻;②合并心肺功能障碍、脑血管疾病等。

1.3 治疗方法

70例患者中,病情较轻者选择电、磁刺激治疗,病情较重及电、磁刺激治疗无效者采用手术治疗。对于逼尿肌发射较差的患者选择如下电刺激治疗方案:以SARS结合膀胱区及腰骶部相当于骶髓神经区,以一定参数模拟多种活动时的神经电活动,发挥控制膀胱尿道活动的作用。磁刺激治疗:通过一定强度、变化性磁场刺激使组织兴奋,使得组织内产生感应电流,促进排尿。手术治疗:根据损伤部位不同选择不同术式,对于逼尿肌乏力、膀胱容量大、尿道高压、尿潴留类患者可选择膀胱颈口电切术,纠正膀胱出口梗阻;对于顺应性交叉、膀胱容量小的患者可选择自体膀胱扩大手术或肠道膀胱扩大术式;对于膀胱残尿量大、存在肾积水、难治性压力尿失禁等患者可选择膀胱造瘘术;对于逼尿肌无反射的NB患者可选择腹直肌转位膀胱重建术或背阔肌转位膀胱重建术;术后针对患者的具体情况开展合适的康复锻炼,如膀胱功能训练,以进一步促进排尿反射形成。

1.4 观察指标

分别于治疗前后采用B超测定患者的平均膀胱容量、残余尿量、日均单次排尿量,并采用LUTS评分[4]评定患者的下尿路情况。

1.5 统计方法

计量资料以均值加减标准差表示,自身前后对照采用配对t检验,由SPSS 18.0统计软件进行统计分析。α=0.05。

2 结果

70例患者经治疗后,日均单次排尿量及膀胱容量均显著高于治疗前(P<0.01),残余尿量及LUTS评分均显著低于治疗前(P<0.01)。见表1。

注:与治疗前比较,(1)P<0.01

3 讨论

脊髓损伤后神经源性膀胱是医学上的一大难题,随着医学技术发展及进步,国内外在神经源性膀胱治疗方法及机制研究中也取得了很大进展[5]。神经源性膀胱十分复杂,不同形式神经源性膀胱的治疗方法不同,一般多建议采用综合治疗方案。在治疗前,首先要检查患者的尿动力学,找出患者症状的主要矛盾,从而对症选择合理的治疗方案;治疗中要以“低压储尿-控尿-低压排尿”为准则[6,7],在治疗的同时还要注意控制感染,减少早期、晚期并发症;此外,还有必要进行膀胱功能综合训练,改善和加强膀胱逼尿肌与括约肌间的协同作用,促进排尿反射形成。

3.1 手术治疗机制

手术治疗主要针对保守非手术治疗无法取得良好效果的患者,针对不同部位的损伤,手术方法也不尽相同,主要有膀胱扩大术、纠正膀胱出口梗阻手术、逼尿肌成形术及尿流改道术等[8,9]。手术治疗可纠正膀胱出口梗阻、降低出口阻力和尿道高压,还可扩大膀胱增加其安全容量,从而为膀胱在安全压力下储尿、排尿提供必要条件,降低上尿路受损风险。此外,手术治疗还可通过腹直肌、背阔肌的转位和收缩,增加腹压,促进排尿。

3.2 电、磁刺激治疗机制

刺激治疗主要以调节支配膀胱尿道的中枢神经及周边神经的抑制性和兴奋性来调节膀胱功能[10]。电刺激治疗常用于逼尿肌发射差的患者,直接电刺激膀胱区有利于增加逼尿肌反射,刺激骶神经区域并激活点位中枢神经反射,有助于恢复排尿功能;相关实验已证实电刺激能够促进膀胱收缩,增加内部压力和排尿量,最终促进膀胱排空。磁刺激则通过刺激盆底神经肛门直肠分支、下肢肌肉神经、阴部神经等来抑制逼尿肌活动过度,刺激S3传入神经根,激活脊髓抑制通道,具有微创、安全、无副作用等特点[11]。

3.3 小结

尺神经损伤的康复 讲稿 篇4

一、概述

腕部及肘部锐器伤，挤压伤，及牵拉伤(例如肘部肱骨内髁骨折，前臂尺桡双骨折，腕掌骨折都可以直接牵拉尺神经)是尺神经损伤最常见病因。

尺神经损伤的症状和体征表现为：①手的尺侧半面皮肤感觉障碍；②第1背侧骨间肌

和拇收肌萎缩最明显，其次是小鱼际肌群；③手指不能外展与内收，手指的夹力减弱或消失，小指常处于外展位，而且不能与环指并拢；④爪形手畸形，(掌指关节过伸，指间关节屈曲)；⑤尺神经损伤后，大部分手内在肌麻痹，因而阻力减弱，持物不稳，动作不灵活，对精细动作影响明显；⑥Froment征正常情况下，拇、示指做用力相捏动作时，由于手指内，外肌的协同作用，拇指指间关节和掌指关节均呈微屈位。当尺神经损伤后，拇收肌及拇短屈肌部分麻痹，因此，使拇指掌指关节屈掌力量减弱，此时再做拇、示指用力相捏动作时，拇长屈肌作用便代尝地加强，拇指便出现掌指关节过伸，指间关节屈曲，这现象称为Froment征(+)。

二、临床治疗原则

1．闭合性损伤可先行保守治疗3个月。

2．开放性损伤，或经保守治疗无效者，应手术探查。

3．爪形手畸形功能重建及矫形。手部爪形指畸形矫正与重建手术可归纳为两类：即动力型和静力型重建。

(1)动力型重建手术：利用前臂动力型移位代替骨问肌及蚓状肌的屈掌指关节伸指间关节功能。例如：中、环指浅屈肌腱移位代内在肌，控制掌指关节过伸。

(2)静力型重建手术：例如：掌指关节掌板关节囊紧缩术。其机制是通过手术紧缩掌板及关节囊使掌指关节被控制在微屈位，控制过伸，从而使指总伸肌腱的力量可传至两个指间关节，发挥伸指作用。但骨间肌的内收和外展功能不能恢复。

三、康复治疗要点

1．佩戴掌指关节阻挡夹板，预防环、小指爪形指畸形。

2．用视觉代偿，保护手尺侧缘皮肤感觉丧失区。

3．对神经恢复无望者，可考虑重建手内肌功能手术。

4．肌腱移位术后训练

(1)术后维持腕关节伸直30。位，掌指关节屈曲80。一90。位，指问关节伸直位，石膏固定5～6周；

(2)术后6周去除石膏，改用弹力带牵引的屈曲掌指关节的手夹板，在白天使用。晚上改用静力型屈曲掌指关节手夹板，避免掌指关节被动牵引，以致缝接部位松弛。一般维持至术后8～12周。

(3)早期练习避免掌指关节完全伸直，主动伸指间关节：

脑神经损伤机制 篇5

1 材料与方法

1.1 材料

雄性蒙古沙鼠(50~70g)由湘雅医学院基础医学院提供,NF-γB和P38MAPK蛋白多克隆抗体(北京鼎国生物),DAB显色试剂盒(武汉博士德生物),右丙亚胺纯粉(DEX,江苏奥赛康药业)。

1.2 方法

1.2.1 动物模型和干预方法

60只雄性蒙古沙鼠(50~70 g)随机分为3组,假手术组、IR组和治疗组,每组20只,其中10只在模型制作成功后1 h立刻处死,检测TBARS、ROS、NO及亚硝酸盐/硝酸盐变化。另外10只继续饲养,直到模型制作成功后6 d处死,检测神经元细胞存活/凋亡状态及NF-γB和P38MAPK蛋白表达情况。所有动物均正常饮水15 d,所谓正常饮水即实验者按动物实际需要给水。使用动脉栓塞法制作IR模型,用氨基甲酸乙酯(1300 mg/m L,腹膜注射)将蒙古沙鼠麻醉,仰卧位,颈部中线腹侧切口,暴露两侧颈总动脉,应用动脉夹对颈总动脉夹闭5 min。其中,假手术组除未行颈总动脉夹闭外其余接受与IR组相同治疗。治疗组在每只沙鼠麻醉前30 min经腹膜注射150 mg总量的DEX(商品名:奥诺先,江苏奥赛康药业有限公司提供),DEX稀释浓度为5~10 mg/m L。术后1 h,断头取脑,研磨脑组织备用。

1.2.2 TBAR S试验

按OHKAWA等[3]描述的方法利用测定TBARS(thiobarbituric acid reactive substances)含量,间接检测脑匀浆中脂质过氧化水平。

1.2.3 R OS和NO检测

按CAPANI等[4]描述的方法,在IR发生后1h,将大鼠沿脑中线切成两半,一半用来检测ROS,另外一半用来检测NO水平。

1.2.4 亚硝酸盐/硝酸盐测定

按GRISHAM等[5]描述的方法测定NO代谢终末产物的比例。

1.2.5 TUNEL染色检测神经元细胞的凋亡

IR模型制作成功6 d后,将动物麻醉后处死。去脑后将脑组织浸泡在4%的磷酸盐缓冲多聚甲醛溶液中24 h,并应用30%浓度的蔗糖溶液保护细胞72 h。沿海马背取下的冠状切面组织进行甲酚紫染色,每个动物在海马背侧进行3、4个切片并行CA1锥细胞层存活神经元的计数。只计数那些可见细胞核且细胞膜完整的神经细胞,最后取平均数,最终存活细胞数量以每毫米CA1区域细胞存活数量表示。同时,按GAVRIELI等[6]描述的方法以TUNEL方法检测切片细胞凋亡情况。

1.2.6 Western blot方法

按ZHANG[7]等描述的方法检测鼠脑中NF-γB和P38MAPK蛋白表达情况。

1.3 统计学分析

数据以均数±标准差表示,用SPSS 10.0软件进行统计,采用单因素方差分析,P<0.05为差异有显著性。

2 结果

2.1 脑组织氧化/抗氧化能力相关指标表达情况

与假手术组比,IR组NO下降,而ROS、TBARS及亚硝酸盐/硝酸盐明显升高;这些变化导致IR组细胞活力的明显下降,远远低于假手术组;而治疗组NO、ROS、TBARS及亚硝酸盐/硝酸盐均与假手术组无明显差别(P>0.05),细胞活力低于假手术组,但高于IR组。见表1。

2.2 TNUEL染色法观察的各组细胞凋亡情况

IR组细胞切片TNUEL染色较深,系细胞核内物质外漏到核外而被TNUEL染色,而假手术组和治疗组中TNUEL染色细胞较少。见图1。

2.3 Western blot方法观察的蛋白表达情况

IR组NF-γB和P38MAPK蛋白含量远高于假手术组,差异具有显著性(P<0.05),而治疗组NF-γB和P38MAPK蛋白含量也高于假手术组,但差异均无显著性(P>0.05),与IR组相比,治疗组NF-γB和P38MAPK蛋白含量均明显降低,差异具有显著性(P<0.05)。见图2、3。

注:1)与假手术组比,P<0.05;2)与IR组比,P<0.05

3 讨论

本研究发现IR可明显改变脑组织抗氧化/氧化的环境,造成NO和神经元细胞存活率下降,而ROS、TBARS及亚硝酸盐/硝酸盐明显升高,同时提高了脑组织中NF-γB和P38MAPK蛋白的表达,降低了神经细胞活力。另外,DEX预先处理过的蒙古沙鼠上述指标,均发生与IR组相反的变化。与IR组相比,DEX组NO和细胞存活率明显升高,而ROS、TBARS及亚硝酸盐/硝酸盐均明显降低,这种变化与NF-γB和P38MAPK蛋白表达下降是相关的。

自由基与肿瘤、衰老及心脑血管疾病密切相关,右丙亚胺最初被发现能螯合蒽环化疗药物-铁离子中的三价铁离子,从而降低由蒽环化疗药物-重金属触发的自由基反应,进而保护了分子大生物器,其中以保护心脏效果最为明显。最近研究还发现,DEX可抑制IR产生的自由基,从而保护血管内皮。HASINOFF等[8]用培养的新生鼠心肌细胞制作了IR损伤模型,发现细胞预先应用DEX处理后,可降低细胞乳酸脱氢酶的释放,降低心肌细胞的凋亡。RAMU等[9]用分离大鼠心脏制作IR模型,证实DEX在缺血前10 min通过灌注液灌注或在大鼠麻醉取心前30 min通过腹腔注射,再应用DEX预先干预,可以明显提高再灌注后的血液动力学恢复,并可降低细胞浆蛋白的氧化作用。本研究应用的方法按KIRINO文献[10]记录,可对海马区CA1区域产生神经元的破坏。本研究观察蒙古沙鼠CA1区域神经元发现,DEX确实可以保护CA1区域神经元的抗氧化能力,从而降低其凋亡率,这与前述的研究结果是相一致的。另外,笔者也发现,IR后的CA1区域神经元NF-γB和P38MAPK蛋白含量表达增加,而应用DEX后这种蛋白表达含量有所下降。NF-γB和P38MAPK是与应激相关的蛋白,其含量的下降表明DEX是通过降低NF-γB和P38MAPK的表达,阻碍相关的信号传导通路,引起相关自由基发生改变,从而提高神经细胞耐受IR的能力。本文仅阐述有限的自由基和有限的信号通路,且对信号通路的研究没有系统性。为了明确DEX在预防IR引起的自由基的变化及机制,需要进一步更全面的研究自由基种类及与自由基相关的信号。

摘要：目的 探讨脑缺血-再灌注(IR)蒙古沙鼠模型中脑神经元细胞的凋亡及相关自由基变化,并探讨这种变化与NF-γB和P38MAPK表达情况的关系。方法 60只雄性蒙古沙鼠(50～70 g)随机分为3组:假手术组、IR组和治疗组。其中,IR组应用动脉夹夹闭经总动脉5 min时间制作模型,而治疗组在IR之前通过腹膜注射的方法 给予总剂量为150 mg的DEX,并观察各组NO、ROS、TBARS、亚硝酸盐/硝酸盐、细胞凋亡和NF-γB及P38MAPK蛋白表达情况。结果 IR可以明显改变鼠脑内的抗氧化/氧化环境,造成脑组织中NO降低,而ROS、TBARS及亚硝酸盐/硝酸盐均明显升高,同时提高了脑组织中NF-γB和P38MAPK的表达,降低了神经细胞的活力。相反,预先应用DEX处理过的蒙古沙鼠,则在上述指标发生与IR组相反的变化。结论 DEX可以明显改善鼠脑内的抗氧化/氧化环境,使IR沙鼠脑内回复抗氧化/氧化平衡,提高细胞生存率,而这种变化可能与NF-γB和P38MAPK表达降低相关。

关键词：缺血-再灌注,右丙亚胺,P38MAPK,NF-γB,抗氧化/氧化

参考文献

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脑神经损伤机制 篇6

1 资料和方法

1.1 资料

本院在2008年4月~2010年6月期间接受的脑神经患者中随机选取55例, 气宗男性33例, 女性22例, 年龄基本在12~48岁之间。患者脑神经损伤的原因有很多种, 患者在接受治疗的过程中都存在脑脊液漏, 然后对部分患者进行了CT检查, 确定脑神经损伤的具体情况。

1.2 方法

观察组和对照组两组脑神经患者在接受治疗的过程中有采用的是改善微循环、营养神经药物或是针灸等治疗。其中观察组同时还采用了高压氧治疗, 首先让患者呼吸空气升压20min, 稳压期间吸氧25min持续三次, 然后在吸氧间呼吸舱内的空气为5min2次, 呼吸的空气减压为20min, 高压氧每天进行一次, 并持续20天。

2 结果

经最后观察, 对照组显效率为42%, 观察组显效率为68.87%, 具体如下表所示:

3 讨论

脑神经结构比较复杂, 尤其是颅底骨折要及时接受诊断和治疗, 颅底结构一旦骨折引起的脑神经损伤严重的情况就会威胁到患者的生命安全。本文研究的两组患者主要是颅段骨折造成的脑神经损伤, 脑神经局部有缺氧和缺血的症状, 也有血浆内大量的蛋白渗入到神经束间中等, 轻则是一次性的损伤, 早期治疗就会恢复健康, 重则会造成永久性的脑神经损伤。如果患者脑神经不出现神经纤维断裂的情况, 基本上在有效的治疗方法中就会很快的恢复。本文研究中观察组同时也采用了高压氧治疗, 促进患者血液循环和供氧, 这也是促使脑神经恢复健康的有效方式, 同时也会加快神经纤维生长的速度, 也使神经功能恢复正常。

脑神经损伤采用高压氧治疗的方式能够促进患者脑神经中的血氧弥散距离, 提高血氧的含量, 改善了神经细胞内外离子失衡的状态, 促进脑神经血液循环, 总之时脑神经细胞组织和血氧, 血液量等得到了提高。同时高压氧治疗方式还可以帮助患者脑神经在受到损害时, 存在的有害物质得到良好的改善, 并给予大量的营养补充, 利于神经脑细胞组织的生长和恢复, 促进神经稍膜的修复, 能及时改善脑神经出现的恶性循环, 确保脑神经恢复效果, 提高了患者的生存质量。高压氧治疗方式还可以促进神经毛细血管的再生, 而且在促进神经稍膜修复的同时还帮助了效应器的恢复。并且在脑神经损伤逐渐恢复的基础上高压氧治疗创造的有效环境也增加了血脑屏障的开放, 可以活化无效的神经元, 患者在脑神经损伤时容易缺血和血氧, 因此可以将这种状态逐渐转变, 活化, 促进患者脑神经代谢。

临床治疗效果的痊愈标准是患者脑神经功能完全恢复正常, 并经过一系列的电理检查确保患者已经脑神经已经恢复正常。如果好转就是脑神经部分已经处于良好的状态, 但是神经功能或是系统中还是存在一点异常和不良症状, 还需要继续留院观察。无效的治疗患者的脑神经没有一点恢复的迹象, 神经功能也正常恢复。在上述研究和分析过程中高压氧联合药物治疗效果要比单一的药物治疗效果好, 而且观察组患者脑神经痊愈达到了68.87%, 而对照组患者神经痊愈为42%, 相比具有明显的差异。其中单一的药物治疗对照组患者脑神经无效要达到27%左右, 而高压氧联合药物治疗无效为10.05%。由此可见, 高压氧联合药物临床治疗效果值得患者信赖, 应该得到推广, 提高患者的生存质量。

摘要：目的 主要观察高压氧联合药物治疗脑神经损伤早期效果。方法 从脑神经损伤患者中随机抽取55例, 并按照不同的损伤情况分为两组。一组是高压氧联合药物治疗为观察组选30例患者, 另一组是单纯药物治疗对照组选25例患者。然后观察组连续采用高压氧联合药物治疗20次, 对照组采用的是扩血管药物、营养神经药物等治疗药物, 最后半年之后两种治疗结果进行对比。结果 通过观察显示, 观察组的显效率为68.87%, 对照组的显效率为42%。结论 经分析研究, 高压氧联合药物的治疗效果比单一使用药物治疗效果好。

关键词：高压氧联合药物,脑神经损伤

参考文献

[1]袁邦清, 谭新民, 王守森, 王如密, 陈富勇.翼点入路开颅视神经管减压联合高压氧治疗视神经损伤16例[J].第四军医大学学报.2004 (10) .

[2]邱桂斌, 纪宇明, 周春晖, 孙松胜, 李万庆.高压氧联合手术治疗腰椎骨折合并脊髓损伤29例疗效分析[J].中华航海医学与高气压医学杂志.2010 (4) .

[3]殷明, 赵敏, 章建程, 陈锐勇, 方以群, 王文波.神经生长因子对脊髓减压病神经损伤的修复作用研究[J].海军医学杂志.2005 (4) .

周围神经损伤的治疗进展 篇7

1 神经吻合法

1.1 端端吻合

目前临床上常用的神经缝合方法主要有神经外膜缝合和束膜缝合。受到显微外科水平的影响, 前者多于后者, Hueter于18世纪80年代首先提出神经外膜缝合方法, 而神经束膜缝合由Bora于1967年首先使用, 二者各有优缺点, 外膜缝合对神经内部结构损伤小, 而束膜缝合的纤维对位较精确。李树学等[1]经临床实践观察, 利用端端缝合可促进神经再生及功能恢复。但神经束膜间缝合还有可能存在神经纤维外逸后的运动及感觉神经纤维的混淆, 降低了缝合的精确率[2]。Hakstianc首先用电极刺激神经断端的远近端神经束, 发现能有效的区分运动、感觉或混合神经[3]。国内朱家恺等[4]在术中也应用此方法, 但对低位神经损伤有较好临床效果, 而高位损伤则较差。并且, 神经束膜缝合还存在缝线过多导致的神经束间瘢痕反应从而影响神经再生等缺点。因此, 神经外膜与束膜缝合的优劣一直是学者们争议的焦点。

1.2 端侧吻合

此法是将受损神经的远侧断端缝合至邻近正常神经干侧壁上, 目的是使正常的神经干的轴突再生长入受损神经内, 恢复损伤神经的功能。胡孔和等[5]利用小腿游离皮瓣, 术中以端侧吻合方法行神经断端吻合, 术后观察结果显示皮瓣的感觉功能恢复良好, 证实端侧吻合方法同样具有良好的手术效果。但多数学者认为端侧吻合临床上的实际效果不如端端吻合法, 所以一般只有在神经大段缺损, 没有神经移植条件的情况下才应用[6]。

1.3 侧侧吻合

此法是切开受损神经及相邻神经的外膜及束膜, 待神经纤维外露后行部分束膜和外膜的缝合。原理和端侧吻合相似, 都是通过正常神经的再生轴芽的长入以达到使受损神经的功能有所恢复。修先伦等[7]利用大鼠的胫神经和腓总神经, 应用侧侧吻合法, 观察可见供体神经有侧芽长入伤侧神经干, 并且经过常规的神经检测方法检测发现, 吻合后的神经各项指标效果近似于自体神经移植, 但其作用机制目前还有待于进一步的研究。

2 神经套管桥接法

神经套管在神经损伤后应用广泛, 在神经缺损较少时可替代神经移植术, 避免自体神经移植所造成的不良后果, 还可应用于较长的神经缺损后暂时的神经保护。目前神经套管的材料非常多, 其中, 生物型材料和人工合成不可降解材料及生物可降解材料制成的导管应用最广泛。生物材料中, 以胎盘膜为代表, 其有较广泛的来源, 价格较低廉, 组织排异性小、并且术后可吸收, 应用前景好[8]。组织工程神经导管中, Aloe[9]研究发现, 使用纤维素/雪旺细胞基质制成的神经套管能够增强神经再生。还有一种应用较多的硅胶管套管, 经宋修竹等[10]通过动物实验证实, 使用硅胶套管桥接的大鼠坐骨神经, 离断间隙为5 mm, 功能恢复较好。李宝成[11]采用碱性成纤维细胞生长因子 (basic fibroblast growth factor, b FGF) 复合翻转静脉神经导管桥接周围神经缺损, 能明显促进周围神经的再生, 是一种较好的神经桥接修复方法。神经套管可以为神经损伤后建造一个适宜神经生长的再生室, 从而减少运动神经纤维的错长。

3 神经移植

3.1 自体神经移植

当神经缺损较短时可以应用上述的修复方法, 但当缺损较长时, 最适用神经移植术, 根据不同的修复手段可以分为吻合血管的和不吻合血管的神经移植;神经全干移植、电缆式移植和束间移植术[12]。但可供吻合血管的神经来源必定是有限的, 因而目前应用范围有限[13]。其中, 临床上最常用的还是自体不带血管的神经移植, 其手术操作简单, 易行。常利用腓肠神经和隐神经作为供体神经, 但当缺损长度过长时应用的效果也不甚理想。通常缺损长度不超过10 cm。当缺损超过10 cm时带血管的神经移植 (VNG) 方法就比较适用了。

3.2 异体神经移植

异体神经移植修复神经缺损, 避免了自体神经移植时供区的神经缺失所导致的副损伤, 且神经来源较多, 但主要问题是存在免疫排斥反应, 抑制免疫排斥是能否移植成功的关键, 因此, 近年来, 寻找更好的预处理方法是目前研究的方向之一。最近的研究则显示, 小剂量FK-506在不会对免疫系统起抑制作用的情况下可以促进神经再生, 随着技术水平的不断提高, 异体神经移植的应用前景将更加广泛。

3.3 异种神经移植

异种神经目前还没有报道称应用于人体, 因为术后会出现强烈的排斥反应, 导致修复效果很差。目前还不能有效地抑制免疫反应, 今后的应用前景仍有待于进一步观察。

4 组织工程法和基因工程

组织工程和基因治疗是最近的一门新兴学科, 随着分子生物学和细胞生物学的发展而产生的新技术, 二者以开发用于恢复、维持及提高受损伤组织和器官功能的生物学替代物为目标。雪旺细胞在周围神经损伤中起着重要的作用, 神经损伤后雪旺细胞大量的增殖, 可分泌多种神经营养因子促进神经的再生, 因而雪旺细胞在组织工程中被用作主要的种子细胞, 并且雪旺细胞也不发生明显的免疫反应并能长期存活。因此, 应用组织和基因工程方法通过制造雪旺细胞而长期供应神经营养因子, 临床应用前景广泛。Yang等[14]利用羊膜制成的神经导管中, 植入雪旺细胞, 创造神经生长的微环境, 使神经纤维轴突与远端相连, 当羊膜完全降解后, 高倍镜下观察, 修复后的大鼠坐骨神经与正常神经侧对比无明显的差异。刘勇等[15]发现, 移植后的h BDNF-GFP-NSCs (h BDNF和GFP双基因转染神经干细胞) 可分化为神经元和神经胶质细胞, 实验结果证实对大鼠视神经作用明显。但基因治疗目前还处于实验阶段, 部分种子细胞的作用机制还不清楚, 且实际应用临床问题很多, 相信经过不断的发展及提高, 组织工程及基因工程能为神经损伤后的修复提供更多的支持。

5 神经营养因子

神经营养因子是一类具有特殊的营养神经的蛋白质, 在神经损伤后可由雪旺细胞分泌合成, 可分为神经趋化因子、细胞因子、生长因子三类[16]。其中, 神经生长因子 (NGF) 最具神经营养因子的特性, 临床研究广泛并最深入, 具有多种生物学效应, 可促进或调节交感神经元的分化, 对中枢和周围神经元的发育、分化再生均有重要的调控作用[8]。Savignat等[17]证实, 聚合体薄膜NGF的运用可以影响挤伤后大鼠神经的退变和 (或) 再生过程。此外, 脑源性神经生长因子 (BDNF) 的临床作用也得到了广泛证实。神经营养素3、神经营养素4/5、神经营养素6和神经营养素7及睫状节神经营养因子、神经细胞分裂素等, 都还处于实验阶段。

周围神经损伤的临床分析 篇8

随着手工业及交通运输业的发展,周围神经损伤的患者越来越多。损伤的类型包括切割伤、撕脱伤、挤压伤以及外科手术造成的人为损伤。20世纪50年代显微外科技术的发展极大地提高了周围神经损伤修复的质量。

1 临床资料

1.1 一般资料

本组26例中男19例,女7例,年龄18～69岁,平均年龄43.5岁,外伤21例,非外伤5例。上肢18例,下肢8例。

1.2 临床表现及体征

伤口以远或病灶以远肢体疼痛麻木,关节功能障碍。

1.3 合并伤

合并骨折11例,合并知名血管断裂16例。

1.4 治疗

外伤患者均急诊手术,合并骨折患者先行内固定,后用显微外科技术修复神经,2例行神经移植术。非外伤患者做好术前准备后行手术治疗2例为肿瘤压迫坐骨神经,2例为巨大蔓状血管瘤卡压正中神经,均用显微外科技术行神经松解术。

2 结果

本组26例患者均取得满意效果,损伤以远的肢体功能恢复、疼痛、麻木症状明显改善。

3 讨论

3.1 早期诊断,准确定位

周围神经损伤的诊断主要根据临床表现:(1)感觉功能障碍,周围神经损伤后其感觉纤维分布的皮肤区域感觉减退或消失,皮肤的感觉纤维分布多是相互重叠的,但是每条神经在皮肤上有它单一分布区域,比如正中神经损伤后,食指中指末节感觉麻木,尺神经损伤后小指末节皮肤感觉麻木,桡神经损伤后,虎口背侧感觉麻木。(2)主动运动功能障碍。周围神经损伤后其所支配的肌肉瘫痪,肌张力消失,瘫痪的肌肉与其拮抗的肌肉之间失去平衡出现固定畸形。

3.2 显微外科技术修复神经

3.2.1 神经松解术

周围神经受到牵拉、压迫、磨损伤害使轴索发生溃变,神经干周围及神经束间瘢痕形成,使其传导功能发生障碍,必须手术松解这些损伤神经的因素,神经功能才有可能恢复。本组病例中有2例坐骨神经旁的肿瘤压迫坐骨神经,切除肿瘤,并用显微外科技术行坐骨神经外膜松解,手术取得满意效果。本组病例中还有2例右前臂包绕正中神经的蔓状血管瘤对正中神经造成嵌压,用显微外科技术行血管瘤切除并行正中神经外膜松解,取得满意效果。

3.2.2 神经移植术

神经的吻合需处于无张力的状态,以免吻合口撕裂,妨碍神经的再生,若神经有缺损<2cm可通过游离两端间的神经予以吻合,如间隙>2cm应考虑神经移植,取较细的皮神经,截成4段如电缆一样组合在一起移植[1]。本组病例中1例尺神经外伤缺如,取腓肠神经截成4段如电缆一样组合在一起移植,随访3个月取得满意效果。

3.2.3 神经缝合术

传统的神经缝合方法主要是神经外膜缝合法,随着显微外科技术的出现促进了神经束膜缝合的发展,神经干内运动束与感觉束未分开的部位选用神经外膜缝合术,神经干内运动束与感觉束已分开的部位选用神经束膜缝合术,但是神经干内感觉束和运动束区分有困难,故临床运用繁琐且不可靠。本组病例在显微镜下操作根据神经的形态结构看清神经外膜上的血管纹理,以及按血管的自然位置予以吻合,另外在显微镜下能去除神经断端部位的外膜,以减少外膜结缔组织长入神经干内形成瘢痕[2]。

参考文献

[1]王澍寰.手外科学[M].2版.北京:人民卫生出版社,1999:716-720.

脑神经损伤机制 篇9

1.1 NSCs的定义

Reynolds[1]等于1992年从小鼠纹状体分离出能在体外不断分裂增殖并具有多种分化潜能的细胞群, 第一次提出了神经干细胞的概念。1997年McKay[2]正式将神经干细胞的概念总结为:一类具有分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的能力, 能自我更新并足以提供大量脑组织细胞的细胞。

1.2 NSCs的来源

1.2.1 胚胎干细胞

胚胎干细胞是指当受精卵分离发育成囊胚时内细胞团的细胞, 它具有体外培养无限增殖、自我更新和多向分化的特性。1981年, Evans和Kaufman[3]首次成功分离小鼠胚胎干细胞, 而后国内外研究人员进行了大量的研究, 而且证明在体外, 胚胎干细胞能被诱导分化为机体几乎所有的细胞类型, 为胚胎干细胞向神经干细胞的诱导分化打下了基础。目前, 胚胎干细胞向神经细胞的诱导分化的方法主要有以下几种: (1) Bain[4]等在维甲酸或生长因子处理下, 悬浮培养形成胚状体, 由此得到神经前体细胞或者神经细胞。然后用免疫细胞化学方法证实其是神经细胞, 并且在基因转录水平也同样检测证实。另外, 有研究表明将胚胎干细胞通过该方法诱导分化得到的神经干细胞移植到视网膜下腔后, 神经干细胞进一步分化为神经元网络结构和神经胶质细胞[5]。该方法的缺点是神经干细胞的产物中可能并存其他细胞谱系。 (2) 胚胎干细胞与中胚层来源的基质细胞共培养系统。Nakayama[6]等将鼠胚胎干细胞与神经胶质细胞共同培养, 得到大量的神经干细胞。 (3) 利用碱性成纤维细胞生长因子选择性扩增神经前体细胞的培养体系。碱性成纤维细胞生长因子能够促进早期神经前体细胞的增殖, Okabe[7]等根据这一特性建立利用碱性成纤维细胞生长因子选择性扩增神经前体细胞的培养体系。该方法解决了Bain方法的缺点, 是目前胚胎干细胞诱导分化为神经干细胞公认的方法。胚胎干细胞因受伦理道德、法律、潜在致瘤性和组织相容性等问题困扰, 限制了胚胎干细胞的来源和应用。

1.2.2 成体神经组织来源的神经干细胞

成体神经干细胞存在于成人中枢神经系统内, 如海马齿状回的颗粒下层、侧脑室的室管膜下区、纹状体等部位。来自侧脑室室管膜下区的新生神经元可以远距离迁徙到达嗅球形成嘴侧迁移流[8,9]。成体神经干细胞在不同因素的刺激下, 可分化为不同类型的神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。不同部位来源的细胞进行增殖和分化需要的条件也不相同。如来自脑皮质的神经干/祖细胞在体外增殖、分化为神经元需要碱性成纤维细胞生长因子;而来自视网膜的神经干/祖细胞则不需要任何丝裂原。

1.2.3 成体非神经组织来源的神经干细胞

间充质干细胞具有分化成间质起源的任意组织的潜能, 包括向神经元样细胞、软骨、造血基质及骨等分化成熟的特征[10,11]。间充质干细胞不仅存在于骨髓中, 也可以从脐血、外周血中分离[12], 有研究者从脐带静脉内皮下层也分离出间充质干细胞[13]。Miller[14]等应用表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子2培养基, 从新生鼠和成年鼠的真皮细胞层内成功培养出NSCs。但是间充质干细胞定向诱导分化为神经干细胞缺点是:需要较高的条件, 往往分化为神经干细胞的比例很低, 脑内表达为神经细胞的数量较少, 致使间充质干细胞的研究仍只限于动物实验。优点是:其来源广泛, 不受伦理等问题的束缚, 所以仍是目前研究的热点。

1.3 NSCs的生物特性

NSCs的主要生物特性包括: (1) 多向分化潜能:神经干细胞可以向神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞分化。 (2) 自我更新:神经干细胞具有对称分裂及不对称分裂两种分裂方式。通过对称分裂产生两个干细胞或者2个祖细胞, 通过不对称分裂产生一个新的干细胞和一个祖细胞。 (3) 低免疫源性:神经干细胞是未分化的原始细胞, 不表达成熟的细胞抗原, 不被免疫系统识别。 (4) 组织融合性好:可以与宿主的神经组织良好融合, 并在宿主体内长期存活。

1.3 神经干细胞体内分化调控机制

目前绝大多数研究者认为NSCs的分化调控机制主要有两种:自身基因调控和外源性信号调控。基因调控是指NSCs自身的转录因子及其他功能蛋白对其发育的调控。许多转录因子参与了NSCs的增殖、分化过程。如bHLH (basic helix-loop-helix) 转录因子家族[15], 其中家族中的MASH-1 (mammalian aehaete-scute homolog-1) 基因的表达使干细胞向神经元前体细胞分化;Ngn1和Ngn2基因促使干细胞向神经元方向分化;Olig基因决定少突胶质细胞的分化;该家族还包括Mash1、NeuroD等因子。除此以外, 转录抑制因子N-coR (the nuclear receptor Co-repressor) 能抑制神经干细胞向胶质细胞分化[16];Notch基因抑制干细胞向神经元方向分化;Wnt[17]基因在NSCs增殖分化中也起重要调节作用。

外源性信号调控指微环境对NSCs发育的调控, 包括细胞因子、骨形态形成蛋白 (BMPs) 、微环境等多个方面。大量实验表明, 细胞因子如表皮生长因子 (EGF) 和成纤维细胞生长因子 (FGF) 都能维持神经干细胞的自我更新能力。其他神经因子如血小板生长因子 (PDGF) 、脑源性神经营养因子 (BDNF) 、白细胞介素 (IL-1) 、淋巴细胞抑制因子 (LIF) 均起协同调节作用。另一种就是骨形态形成蛋白 (BMPs) , BMPs在神经系统发育过程中发挥多种作用, 并对神经营养因子的作用产生影响。在胚胎早期, 可抑制细胞增生;在后期, 低浓度的BMPs促进神经细胞和星形胶质细胞的增生, 但在发育的所有时期, BMPs抑制少突胶质细胞的产生[18]。微环境指能对NSCs分化产生影响的周围结构成分。人们发现:促进血管内皮细胞增殖的因素可以促进神经元的增殖, 提示NSCs的发生与内皮细胞的发生也有一定关系;同时神经元的发生亦受到其他神经细胞的影响, 如来源于成人海马区的星形胶质细胞可以促进NSCs的增殖和分化[19];而来源于脊髓的星形胶质细胞并不能促进神经的发生, 进一步证明局部的微环境对NSCs的影响。自身基因调控和外源性信号调控相互作用, 共同调节控制干细胞的增殖和分化。

2 神经干细胞移植

2.1 神经干细胞移植的可行性

神经干细胞能够应用于研究视网膜缺血再灌注损伤, 主要与眼球的局部特点密不可分。 (1) 眼球的解剖结构清晰, 屈光物质透明, 眼球体积小、组织结构严密、与体循环相对分离等特点, 有利于操作、定位和观察。 (2) 眼球具有免疫赦免机制, 能诱导免疫偏离, 产生免疫耐受。眼球的免疫赦免使得视网膜下腔和玻璃体腔对外来基质的相对无反应状态都为神经干细胞移植治疗视网膜缺血再灌注损伤提供了免疫学基础。但是, 眼球的免疫赦免是相对的, 在移植过程中, 视网膜色素上皮细胞、小胶质细胞以及视网膜微血管内皮细胞等相关APC均参与了免疫排斥反应。使用免疫抑制剂和免疫耐受状态的产生可以有效地降低细胞移植后免疫排斥反应的发生[20]。

2.2 神经干细胞移植方式

目前, 神经干细胞移植视网膜主要通过两条途径实现:一是玻璃体腔移植, 一般将带有玻璃微型针头的微量注射器在角膜巩膜缘扁平部插入玻璃体腔, 抽出1.5μL左右的玻璃体, 再注入等体积的神经干细胞悬液。另一种方法是视网膜下腔移植, 通常是在光学显微镜下, 使用微型刀片在视网膜赤道部做一个小切口, 然后用带30号针头的微量注射器穿巩膜、脉络膜进入视网膜下腔, 注入3~4μL细胞悬液。由于移植的干细胞具有迁移整合能力, 通过上述两种方法, 细胞均可整合入视网膜, 但实验观察到视网膜下腔注射损伤较大, 且容易造成视网膜脱离。

2.3 神经干细胞移植后的作用

Nishida[21]等将大鼠海马来源的神经干细胞移植入机械性损伤的大鼠玻璃体腔内, 分别于1、2、4周做组织化学检查, 发现移植细胞已长入宿主视网膜, 并表达Map2ab、Map5、GFAP, 结果表明神经干细胞移植有助于修复损伤的视网膜。Suzuki[22]等将海马来源的神经干细胞移植入新生小鼠眼内, 发现移植细胞整合到宿主的神经节细胞层、内丛状层和内核层。免疫组化显示多数细胞能表达巢蛋白, 并表现出微管相关蛋白的免疫活性。证明神经干细胞能向神经元和星形胶质细胞分化, 同时也发现脑衍生神经生长因子 (BDNF) 能促进神经干细胞的分化和提高其成活率。Wang等[23]将NGF基因修饰的神经前体细胞移植到玻璃体腔和视网膜下腔, 观察其对视神经轴浆流中断视神经病变的治疗作用, 发现:NGF基因修饰的神经前体细胞注入玻璃体腔和视网膜下腔, 均能够表达NGF, 最长时间达1个月之久。在7d和15d分泌神经营养因子对损伤下的视网膜节细胞起到明显的保护作用。Dong等[24]用转化生长因子β3诱导海马来源的NSCs后移植入视网膜后发现部分细胞可表达成熟视网膜细胞标志。最近有学者将加强绿色荧光蛋白表达的海马祖细胞 (AHPCs) 通过玻璃体腔内注射移植到高压损伤眼, 免疫组织化学分析AHPCs在损伤的视网膜环境中存活并分化, 表达神经元和神经胶质标志。但是瞳孔对光反射和视网膜电流图分析在受体眼中未见分化出功能性产物。Tropepe等发现成年小鼠视网膜内存在NSCs, 打破了认为哺乳动物视网膜内不存在NSCs的传统观点。Chacko等[25]向出生2周大鼠视网膜下腔移植培养的来源于视网膜的NPC, 发现移植的细胞能与视网膜整合并表达感光细胞的标志物Opsin和Arrestin。较其他用于视网膜移植的干细胞而言, 来源于视网膜的NSCs一直处于视网膜的生长、发育环境中, 具有更大的向视网膜细胞分化的潜能。在国内, 柳浩然[26]等观察了神经干细胞移植能促进视神经损伤大鼠视网膜表达脑源性神经营养因子以及神经干细胞移植入视神经损伤大鼠玻璃体腔后可提高视网膜神经节细胞的存活率、对受损的节细胞具有一定的保护作用。同时研究发现NSCs移植入视神经损伤大鼠视网膜后作闪光视觉诱发电位显示, P1波幅显著下降, 1周内下降速度较快, 2周至4周下降幅度渐趋于平缓;P1波峰潜时逐步上升, 到4周时显示回落趋势, 说明髓鞘功能有开始恢复的迹象。闪光视觉诱发电位反映里视神经损伤及NSCs移植后的视神经传导功能的变化, 发现NSCs早期移植可减缓视网膜节细胞的凋亡, 有效促进损伤视神经传导功能的修复。最近Wang[27]等从人胚胎大脑皮层分离获得神经干细胞, 然后移植入出生后21d大鼠的玻璃体腔内, 并在出生后不同时间点检测大鼠的空间频率敏感度和亮度阈值。空间频率敏感度显示在出生后90d为 (0.54±0.04) 周期/度, 这个数字可以达到正常值的90% (0.6周期/度) , 亮度阈值为3.0对数单位;而未植入神经干细胞的大鼠在出生后90d仅为 (0.16±0.05) 周期/度, 亮度阈值仅0.6对数单位。在出生后150d和270d也空间频率敏感度可以达到 (0.49±0.05) 和 (0.22±0.02) 周期/度, 分别是正常值的82%和37%。实验证实人胚胎大脑皮层来源的神经干细胞能够有效地延缓大鼠视力的进一步恶化, 并且这种持续治疗作用可以达6个月。

3 问题及展望