血液质控物（精选3篇）
血液质控物 篇1
摘要：目的 评价血液分析仪质控物的性能。方法 用XS-1000i全自动血细胞分析仪对15瓶不同批号血液质控物e-CHECK的WBC、RBC、HGB、PLT的瓶内不精密度、偏倚进行测试, 并使用EXCEL、SPSS软件进行统计分析。结果 综合分析P值、质控物对瓶内不精密度和偏倚的要求, 所有批号的质控物都不合格, 过期1 021 d的血液质控物其PLT的偏倚达到3959.43%, RBC的偏倚为-33.64%。结论 为保证检测系统的完整性、有效性、准确性和稳定性, 不能使用超过保质期的质控物。
关键词：血液分析仪,血液质控物,评价研究
血细胞分析仪是各级医院临床检验实验室进行血细胞分析的必要设备之一[1], 血细胞分析是临床最常用的实验室检测指标, 其结果的准确性直接影响对患者的诊断和治疗[2]。按照ISO15189医学实验室-质量和能力的专用要求和《医疗机构临床试验室管理办法》的要求, 医疗机构临床实验室应建立完善的质量控制体系, 对开展的临床检验项目进行室内质量控制, 以保证检验结果达到预期的质量标准。在血液分析仪的室内质量控制方法中, 有商品质量控制物的室内质量控制法、室内质量控制的室间评价法和利用患者标本的质量控制, 三种方法互为补充。一般来说, 商品化的血液质控物均有定值, 在有效期内其成分相对比较稳定, 且易于购买, 因此使用商品质量控制物的室内质量控制法是监控血液分析仪的性能最常用的方法, 但商品化质控物效期短, 超过有效期的质控物会变得不稳定甚至变质。为了解有效期不同的质控物在血液分析仪上测定结果的差别, 探讨血液质控物使用的正确方法, 2014年8月12日~8月16日对商品化血液质控物进行验证, 观察各质控物的变化情况, 现将验证结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 材料
仪器与试剂:sysmex XS-1000i全自动血液分析仪 (系列号62718) , 质控物e-CHECK、CELLPACK、STROMATOLYSER-4 D L、S T R O M A T O L Y S E R-4 D S、S U L F O L Y S E R、CELLCLEAN, 均由深圳市诺迪盛医疗器材有限公司提供, Olympus显微镜 (型号:CX21) , 0.9%生理盐水, 四川科伦药业股份有限公司生产;瑞氏-姬姆萨染液, 珠海贝索生物技术有限公司生产。质控物e-CHECK共15瓶, 批号分别为40760805、33290805、32730805、32170805、31610805、31050805, 23590805、23030805、22470805、21910805、21350805、20790805、20230805, 13320805、12200805, 均由sysmex公司生产。
1.2 方法
1.2.1 全自动血液分析仪的校准和室内质控
使用sysmex XS-1000i全自动血液分析仪质控模式 (封闭模式) 检测, 该仪器每年由厂家指定的工程师校准2次, 各项检测数据均符合血液分析仪的要求, 连续半年室内质控的累积CV值为HGB:0.98%, PLT:3.64%, RBC:0.77%, WBC:1.85%, 均<CLIA’88推荐允许误差的1/6。
1.2.2 各批号质控物的检测
对每批质控物连续检测20次, 对过期天数最长的批号为12200805的质控物进行显微镜检查, 包括使用生理盐水对质控物进行稀释在显微镜下观察各种有形成分, 以及对质控物进行涂片、瑞氏染色, 在油镜下观察各种有形成分。
1.3 统计学方法
2 结果
各批号质控物的检测如表1所示, P>0.05的有WBC (质控物批号33290805、32170805) 、RBC (质控物批号32730805、32170805、31050805、23590805) 。瓶内不精密度 (CV1) 符合要求 (WBC≤3.0%, RBC≤1.5%, HGB≤1.5%, PLT≤4.0%) [3]的有:WBC (质控物批号40760805、33290805、32730805、32170805、31610805、31050805、23590805、22470805、21350805、12200808) 、RBC (质控物批号40760805、33290805、32730805、31610805、31050805、23590805、23030805、22470805、21910805、21350805、20230805、12200805) 、PLT (质控物批号40760805、33290805、23590805、21910805、12200805) 、HGB (质控物批号40760805、33290805、32730805、31610805、23590805、21910805、21350805、20230805、12200805) 。偏倚符合要求 (RBC≤1.7%, HGB≤1.8%, WBC≤5.6%, PLT≤5.9%) [3]的有:WBC (质控物批号40760805、33290805、32730805、32170805、31610805、31050805、12200805) 、RBC (质控物批号40760805、33290805、32730805、32170805、31610805、31050805、23590805、22470805) 、HGB (质控物批号40760805、33290805、32170805) 。综合P值、瓶内不精密度和偏倚的要求, 所有批号的质控物都不合格, 不能监控血液分析仪的性能。对于过期天数最长的批号为12200805的血液质控物, 在光学显微镜下只能见到白细胞和血小板, 未能见到完整的红细胞形态。通过对该血液质控物进行涂片、瑞氏染色, 也只能见到白细胞和血小板, 见不到完整的红细胞形态。在检测过程中还发现某些质控物的其他检测结果缺失, 如白细胞不分类、无血小板相关参数MPV、PCT、PDW、P-LCR等。
3 讨论
室内质量控制是实验室质量保证体系中的重要组成部分[4], 可监测和评价监测系统的精密度和稳定性, 也可间接评价检测结果的准确性[5], 在临床诊断和治疗中发挥更加重要的作用[6]。因此, 在使用血液分析仪进行血液常规检查时需要进行室内质量控制, 通过全血质控物来确认仪器的各项参数是否有偏倚, 从而检测血液分析仪在长期使用过程中的性能。
质控物是一种用于核查分析仪器或操作是否稳定的物质、设备或过程[7], 其目的是用于质量控制[8]。对于血液分析仪用的质控物, 成分与检测患者样本的基质相似或一样[9], 可以是新鲜人或动物的稳定化全血、人工材料 (如乳胶颗粒) 或是以上材料的混合物[10], 一般由红细胞、白细胞、血小板或相当于血小板大小的物质和等渗的防腐剂等组成[11]。在有效期内, 其外观、装量、瓶内均匀性、瓶间均匀性、生物安全性、稳定性、质控物的定值及范围均应符合国家标准。由于血液质控物有效期短, 且血细胞的寿命有限, 如红细胞的寿命是120 d, 血小板7~14 d, 中性粒细胞只有4~5 d[12], 虽然有效期内白细胞等有形成分的稳定性经处理后会大大增强, 但经过较长的时间, 质控物的检测值会有明显的变化, 有些项目随时间的增加而减少, 有些项目随时间的增加而增加[13], 如红细胞衰老、破坏形成红细胞碎片甚至溶解, 白细胞衰老死亡引起胞内的颗粒脱落、细胞核破碎、溶解等等, 这些物质会被血液分析仪误认为是血小板, 而导致血小板假性增高。从表1就可以看到, 变化最大的是血小板, 其次是红细胞, 随着时间的延长, 血小板的偏倚越来越大, 而红细胞出现负偏倚, 如:超过有效期1 021 d的质控物其血小板的偏倚达到3959.43%, 红细胞的偏倚为-33.64%。
在一般情况下, 如果仪器在检测质控后的结果超出了预期结果范围, 其原因可能是质控物的质量出现了问题:质控物处于有效期外或者在运输、储存过程中发生过冻结, 或者保存、使用不当 (如:在室温放置时间过长、混匀方式不当、颠倒放置等等) 使WBC、RBC发生损伤, 或者质控物受到污染等, 也可能是试剂质量或仪器使用方面出现了问题。因此, 为保证检测系统的完整性、有效性、准确性和稳定性, 推荐使用配套检测系统, 包括器材、仪器、试剂、质控物和校准品、供应品, 不使用超过保质期的试剂包括质控物[14]。即使在有效期内, 质控物的某个性能指标不在规定范围内、不和说明书相符, 说明质量控制物可能变质, 该质控物也要停止使用。
血液质控物 篇2
1 检测对象与仪器
1.1 检测时间
2009年1月～2010年6月。
1.2 检测对象
1.2.1 比重测定
待检库去白悬浮红细胞辫管血1U 100份、2U100份。
1.2.2 容量测定
成品库去白悬浮红细胞，规格为1U 160袋、2U 100袋。
上述血液均由采集合格的全血四联袋制备而成，血袋厂家为山东威高高分子制品股份有限公司，200 ml规格血袋批号为0911101,400 ml规格血袋批号为1002242。
1.3 检测仪器
1.3.1 梅特勒AB-S分析天平梅特勒-托利多仪器(上海有限公司)感量为0.01～0.1 mg。
1.3.2 JPT-20型架盘天平江苏常熟衡器厂制造，感量为1～1 000 g。
2 方法与步骤
2.1 确定比重
累计抽取待检库去白悬浮红细胞辫管血1U 100份、2U100份留于试管中。标记空试管和50 ml小烧杯各1个，用梅特勒AB-S分析天平分别称出其重量，再用移液器准确取1 ml去白悬浮红细胞放入空试管中称重，总重量减去空试管的重量，即得去白悬浮红细胞重量，用比重=重量/体积公式计算其比重，取其均值为准，经最终计算，我站去白悬浮红细胞比重为1.063 5 g/ml。
2.2 称重
用JPT架盘天平分别称取规格为1U、2U的去白悬浮红细胞的血袋的总重量。
2.3 容量计算
去白悬浮红细胞容量=(血袋总重量-空袋重量)/去白悬浮红细胞比重。
2.4 建立表头
打开Excel 2000电子表格，在新工作表的开始位置输入所做质控图的名称，然后合并居中。
2.5 建立表身
在工作表头下方的位置(A2～J2)分别输入检测数量血袋重量、血容量，在工作表A3位置向下方向依次输入检测数量或是对应的血液的献血条码号，在工作表B3下方的位置依次输入所称取血液的总重量;在工作表C3处输入去白悬浮红细胞实际容量测定公式即(B3-44)/1.063 5(去白悬浮红细胞比重按1.063 5 g/ml计算)，选中此数据向下拉，依次自动计算出所用血液的血容量。
2.6 输入数据
在D26处点击工具栏上的“粘贴函数(fx)”按钮，在函数分类项目中选“AVERAGE”，然后输入数据范围“C3:C102”，即可得到(均值);在E26处，同样点击工具栏上的“粘贴函数(fx)”按钮，在函数分类项中选“STDEV”，然后输入数据范围“C3:C102”，即可得到s(标准差);在F26处，输入公式即D28+(3*E28)，即可得到;在G26处，输入公式即D28-(3*E28)，即可得到;在H26处，输入公式即D28+(2*E28)，即可得到;在I26处，输入公式即D28-(2*E28)，即可得到;在J26处，输入公式即D28+E28，即可得到;在K26处，输入公式即D28-E28，即可得到。
2.7 绘制质控图
选择C3～C102的数据，点击工具栏插入图表的“图表向导”按钮，在“标准类型”框中选择“折线图”，在“子图表类型框”中任选一样式，然后按照操作提示的“下一步”继续操作，至图表选项“标题”菜单时，在“图表标题”一栏填写所做的质控项目如“去白悬浮红细胞容量检测质控图(6月份)”;在“分类X轴”一栏填写“检测数量或是对应献血码”;在“分类Y轴”一栏填写“血容量”，点击“下一步”即可完成图表的初步绘制。
2.8 编辑图表
将建立的质控框架图放置到所需的位置后双击纵坐标，编辑Y轴，在“刻度”中设置最大值()和最小值(，主要刻度单位s的数值以及分类交叉于最小值。
3 结果
(1)计算机按血液总重量自动计算出血容量，且依据选择的函数公式和选定的输入数据，自动计算出，自动绘制出去白悬浮红细胞容量控制的质控框架图。按上述方法同样可以绘制出规格为1U的去白悬浮红细胞容量控制的质控框架图(见图1)。
(2)质控框架图绘制完毕，在下次血容量检测时删除上次数据或是复制该质控图，输入血液总重量即可直观地发现其容量是否在控制范围内。
(3)该质控图可联机直接打印存档。
4 讨论
(1)质量管理的目的就是检测分析过程中的误差，控制与分析相关的各个环节，防止得出不可靠的结果。1951年LeverJennings将Shewhart控制图引进临床实验室，其逐渐成为室内质控工作中广泛采用的方法，用于分析中的质量管理控制，使实验室质控管理工作横向开展[1]。
(2)根据标准的制订原则，统一的血液制剂规格可以为临床治疗输注剂量提供可靠的参考依据[2]，但临床在应用中常会受到“缺斤少两”的质疑，主要原因是国标中对去白悬浮红细胞容量的标准没有充分量化，各地制备方法也未完全统一标准，且去白悬浮红细胞都是以单位U提供给临床的，这就使血站内部对去白悬浮红细胞的容量监控难于统一，因此，有必要对该标准作进一步的明确。
(3)去白悬浮红细胞容量测定易受献血者的血细胞比容、血液保存液种类、血浆制备规格等因素影响而波动很大。我市海拔高度为1 500～1 800米，属高海拔地区，陕西师范大学葛淼研究发现，随着海拔高度逐渐增大，健康中青年男性红细胞压积参考值(温氏法)逐渐增大[3]。采用过去《全血及成分血质量标准》标示量+10%的控制方法称重，操作性不强，误差较大，血液容量易超标，间接造成不必要的血液浪费。而采用Lever-Jennings质控图，对去白悬浮红细胞进行上下限的方法，控制血液容量，可以大大简化工作程序，一次定标，长年受益，既有效保证了血液质控抽检，也节约了血液资源，可谓一举两得。
(4)在具体工作中，对去白悬浮红细胞进行上下限的方法控制血液容量，我站长年保持在上下限范围内，非常稳定，这也进一步说明了该方法的可靠性。
(5)Lever-Jennings质控图作为国际公认的质控方法，已成为室内质控的“金标准”。笔者在实际工作中，多方查阅资料，未见其在血液容量控制方面应用的报道，经过本站一年多的实践应用，认为该方法简便易学，操作性强，值得推广。
参考文献
[1]叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程(第3版)[M].南京:东南大学大学出版社,2006.
[2]邱艳.全血成分血质量要求与血液标准化[M].北京:中国标准出版社,2003.
血液质控物 篇3
诊断细菌性阴道炎的传统方法是Amsel法[1], 此法操作繁琐、费时费力且易受多种因素的干扰, 目前已被唾液酸酶法所取代。 由于各生产厂家的试剂质量参差不齐, 甚至同一厂家不同批号之间试剂的稳定性也有差异, 因此, 必须采取严格的质控措施才能保证检测结果的准确性。 然而, 目前市面上尚无商品化的BV质控物, 故笔者研制出BV临界值室内质控物并建立了相应的质控程序, 经1 a的实际应用, 效果较好, 现报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1仪器
AT-1600 型全自动细菌性阴道病检测仪, 由广州江元医疗科技有限公司生产。
1.1.2 试剂
广州江元医疗科技有限公司生产的细菌性阴道病检测试剂盒 (唾液酸酶法) , 均在有效期内使用。
1.1.3 质控物配方材料
唾液酸酶原液、复合酶稳定剂、小牛血清白蛋白、叠氮钠均为美国SIGMA公司生产; 分装容器为一次性塑料离心管, 由江苏康健医疗用品有限公司生产, 规格为0.5 m L。
1.2 方法
1.2.1 质控物容器封闭方法
将0.5 m L规格的一次性塑料离心管用1%小牛血清白蛋白加至满管, 置于4 ℃ 冰箱中封闭24 h后, 弃掉管内液体, 置生物安全柜内自然晾干待用。
1.2.2 质控物制备方法及分装
用生理盐水将唾液酸酶原液稀释并加入若干浓度的复合酶稳定剂和防腐剂叠氮钠, 稀释至唾液酸酶浓度为7 U/m L并分装于封闭过的离心管中。
1.2.3 质控物保存方法
将分装好的自配BV临界值质控物分成3 组, 每组各365 管, 分别保存于室温、4 ℃、-20 ℃下备用。
1.2.4 质控物的检测
每日取各保存温度下的临界质控物各1 管作为样本, 同时取生理盐水作为阴性对照, 与日常标本一同上机检测, 连续测定365 d。 严格按照仪器操作说明书进行操作, 仪器自动判断结果。
1.2.5 室内质控程序
在南方惠侨检验信息系统上建立BV的室内质控程序及半定量质控图。 (1) 质控频率与浓度水平:每天1 次, 9:00 前完成;每次做临界值和阴性对照2 个水平, 阴性对照为无菌生理盐水。 (2) 质控结果转换规则:检测结果为“阴性”, 在检验信息系统中输入“0”;检测结果为“弱阳性”, 在检验信息系统中输入“1”;检测结果为“阳性”, 在检验信息系统中输入“2”;检测结果为“强阳性”, 在检验信息系统中输入“3”。 (3) 质控控制限设立:临界阳性质控的上失控线设为1.5, 下失控线设为0.5;阴性对照的上失控线设为0.5, 下失控线设为-0.5。 (4) 失控判断规则:超过上下失控线者均判为失控。
2 结果
2.1 质控物效能检测
用仪器配套检测试剂检验BV临界值质控物, 结果均为弱阳性, 可监测相应试剂的灵敏度;阴性对照结果全部为阴性, 可监测相应试剂的特异性。与预期效应一致。
2.2 质控物稳定性检测结果
在室温、4 ℃、-20 ℃ 3 种条件下各保存365 d后, 质控物外观均清亮、无沉淀、未发生混浊, 说明其防腐效果良好。 3 种保存条件下的质控物连续测定365 d, 监测过程中若出现失控, 经失控原因分析判定为该保存温度下质控物变质失效, 则不再继续监测此保存温度的质控物。 在室温、4℃、-20 ℃ 保存条件下, 分别可稳定220、310、365 d。 结果显示, BV临界值质控物在各温度条件下有较好的稳定性, 特别是在-20 ℃ 保存, 其稳定期可达1 a。
2.3 质控物实际应用结果
应用广州江元医疗科技有限公司生产的BV试剂, 在AT-1600 型全自动细菌性阴道病检测仪上检验BV临界值质控物, 检测结果根据质控转换规则输入南方检验信息系统的“质量控制图表”中, 系统自动形成半定量BV质控图, 以监测自配BV临界值质控物的失控与在控情况。 应用1 a来, BV阴性对照未出现失控记录 (如图1 所示) , BV临界值质控物在各温度下均失控2 次 (如图2 所示) , 根据失控程序分析其原因是同一批号试剂灵敏度下降引起, 更换不同批号试剂结果均在控。 由此可见, BV临界值质控物可起到监测相应试剂灵敏度及特异性的作用。
3 讨论
细菌性阴道炎 (BV) 是育龄妇女最常见的下生殖道感染性疾病, 且易复发[2], 其与早产、 输卵管炎等多种妇产科疾病密切相关[3]。 因此, BV的检查对妇产科疾病的防治具有重要意义。 唾液酸酶[4]是BV致病菌所产生的特异性酶之一, 其活性与病原菌数量呈正比, 检测唾液酸酶活性可了解病原体定居和繁殖的情况, 是近年来诊断细菌性阴道病的新方法。根据卫生部《医疗机构临床实验室管理办法规定, 医疗机构临床实验室应当对开展的临床检验项目进行室内质量控制, 绘制质量控制图。然而, 目前多数体液定性检测项目 (如BV、HCG等) 尚无商品化质控物, 无法满足实验室质量控制的需求[5]故笔者研制出BV临界值质控物并建立相应的质控程序。
本实验采用BV临界值质控品来评价检测试剂的敏感度, 用阴性质控品评价试剂的特异性。 根据试剂厂家提供的灵敏度分析, 唾液酸酶活性>7 Um L的试验结果应为阳性, 唾液酸酶活性<7 U/m L的试验结果应为阴性。 笔者配制的BV临界值质控物中唾液酸酶浓度为7 U/m L, 处于试验方法的临界值水平 , 可验证检测试剂的灵敏度。 临界值质控物配制的关键技术在于保证其稳定性, 可根据酶的特性加入复合酶稳定剂及叠氮钠防腐剂。 由于酶的含量较低特预先将塑料离心管进行封闭处理, 以防止质控物在保存过程中降解和被塑料离心管壁吸附[6]。 实验结果显示, 在室温、4 ℃、-20 ℃保存条件下, 笔者研制的BV临界值质控物分别可稳定220、310、365 d说明容器的预封闭处理对BV临界值质控物的稳定性起到了理想效果。 在实际临床应用中, 监测到BV临界值质控物在各温度下均失控2 次 (如图2 所示) 。 据分析, 失控原因是由于同一批号的试剂接近失效期致使其灵敏度下降所引起的, 经更换新批号试剂重测, 其结果均在控。 由此可见, BV临界值质控物和阴性质控物联合应用可起到监测相应试剂的灵敏度和特异性的作用。
本研究显示, BV临界值质控物分别在室温和4 ℃ 保存条件下于第221 天和第311 天监测时, 结果均为阴性, 而在-20 ℃ 保存条件下结果仍为弱阳性。 这可能是由于在-20 ℃ 下唾液酸酶的浓度可长时间保持稳定, 而在室温和4 ℃ 下其浓度引起缓慢下降所致。 可见, 不同保存温度可对BV临界值质控物的稳定性产生不同影响。 通过较长时间的应用与观察, 自制BV临界值质控物在-20 ℃ 保存条件下其稳定性最佳, 用此质控物与建立的相应质控程序作为BV质控物商品化之前的一个补充, 既符合室内质控工作的要求又具有经济效益, 有一定的临床应用价值。
参考文献
[1]Amsel R, Totten P A, Spiegel C A, et al.Nonspecific vaginitis:diagnostic criteria and microbial and epidemiologic associations[J].The American journal of medicine, 1983, 74 (1) :14-22.
[2]李玉杰.细菌性阴道病的治疗及护理[J].中国现代药物应用, 2009, 3 (5) :154.
[3]王冬, 王振红, 邸慧明, 等.胎儿纤维连接蛋白与细菌性阴道病和绒毛膜羊膜炎关系的研究[J].中华妇产科杂志, 1999, 34 (7) :399.
[4]Cauci S, Culhane J F, Di Santolo M, et al.Among pregnant women with bacterial vaginosis, the hydrolytic enzymes sialidase and prolidase are positively associated with interleukin-1β[J].American journal of obstetrics and gynecology, 2008, 198 (1) :132.e1-7.
[5]刘和录, 许瑞娜, 余素燕, 等.5种定性试验质控物的研制与应用[J].国际检验医学杂志, 2012, 33 (5) :589-590.