地龙注射液（精选6篇）
地龙注射液 篇1
地龙是我国重要的中药材之一。最早的中药学专著《神农本草经》中收载的67种动物药中就有蚯蚓。李时珍著《本草纲目》虫部42卷中用蚯蚓入药的处方有40多种。地龙注射液是取广地龙制备而成, 在临床上主要用于支气管哮喘所致的咳嗽、喘息。广地龙中含有丙氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸、赖氨酸等多种氨基酸[1], 可作为质量控制的重点之一。现阶段氨基酸分析中, 应用较广成果较好的是柱前衍生-高效液相色谱法[2,3]。本文选用2种不同的衍生剂 (6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯和2, 4-二硝基氟苯) 建立各自的氨基酸含量测定法 (以下称AQC法和DNFB法) , 为地龙注射液质量标准的研究和应用提供了依据。
1 仪器与试药
安捷伦1100s、1200s高效液相色谱仪 (VWD、DAD检测器) ;METTLER AG135电子天平;Binder ED-53电热干燥箱;IKA圆周振荡器;TW20恒温水浴箱。
地龙注射液 (广东博罗先锋药业有限公司提供) ;地龙注射液广地龙阴性制剂 (广东博罗先锋药业有限公司提供) ;丙氨酸、缬氨酸、盐酸赖氨酸、异亮氨酸和亮氨酸对照品 (中国药品生物制品检定所, 140624-200805) ;6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯 (AQC) 、AQC稀释液和p H8.8硼酸盐缓冲液 (均为Waters公司提供) ;2, 4-二硝基氟苯 (DNFB) 为生化试剂;乙腈为色谱纯, 水为超纯水, 其他试剂均为分析纯。
2 AQC方法与结果
2.1 色谱条件[4]
色谱柱:Waters Acc Q-Tag column 3.9mm×150mm;柱温:37℃;检测波长:248 nm;流动相A:取醋酸钠19.04 g, 加超纯水1000 m L溶解, 用50%磷酸溶液调节p H值至5.2, 加0.1%乙二胺四醋酸二钠溶液1.0mL, 加三乙胺2.37 mL, 用磷酸调节p H值至4.95;流动相B:乙腈-水 (3∶2) ;梯度洗脱 (0 min, 100%A;0.5 min, 98%A;15min, 93%A;19 min, 90%A;32～33 min, 67%A;34～37 min 0%A;38min, 100%A) ;流速:1.00 m L/min。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取丙氨酸对照品45 mg、缬氨酸对照品20 mg、盐酸赖氨酸对照品16 mg、异亮氨酸对照品15 mg及亮氨酸对照品30 mg, 置同一50 mL容量瓶中, 加少量0.6 mol/L溶液溶解, 用水稀释至刻度。精密量取0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0 mL, 置10 mL容量瓶中, 加水稀释至刻度, 制成5个浓度的对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
量取地龙注射液5 m L, 置100 m L容量瓶中, 加水稀释至刻度, 摇匀, 即得。
2.4 阴性样品溶液的制备
取地龙注射液广地龙阴性制剂, 按供试品溶液的制备方法制备阴性样品溶液。
2.5 衍生测定法[4]
精密量取对照品溶液与供试品溶液各10μL, 分别置0.4cm×5cm的小管中, 加p H8.8硼酸盐缓冲液70μL, 混匀, 加入衍生试剂AQC溶液 (AQC试剂1瓶加AQC稀释液1mL, 置55℃电热干燥箱中使溶解, 即得) 20μL, 混匀, 置55℃电热干燥箱中加热10 min, 取5μL注入液相色谱仪, 测定各氨基酸的含量。
A.对照品溶液;B.供试品溶液;C.阴性样品溶液;1.衍生剂 (AQC) ;3.丙氨酸;4.缬氨酸;5.盐酸赖氨酸;6.异亮氨酸;7.亮氨酸
2.6 干扰试验
分别取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液, 依法进行衍生测定, 记录色谱图, 阴性样品溶液在各氨基酸相同的保留时间处未见色谱峰, 见图1。
2.7 线性关系考察
取2.2项下对照品溶液, 按2.5项下方法衍生, 注入液相色谱仪, 记录色谱图, 以峰面积Y对浓度X (μg·mL-1) 进行线性回归计算, 各回归方程为:丙氨酸Y=13.962X+10.033, r=0.9997;缬氨酸Y=11.993X+9.711, r=0.9996;盐酸赖氨酸Y=4.086X+11.970, r=0.9994;异亮氨酸Y=11.387X-0.054, r=0.9998;亮氨酸Y=11.778X-24.929, r=0.9995。各氨基酸在相应的范围内线性关系良好。
2.8 精密度试验
取2.2项下对照品溶液, 按2.5项下方法衍生后, 连续进样测定6次, 各氨基酸峰面积的RSD为0.5%～1.3% (n=6) 。
2.9 稳定性试验
取衍生后的供试品溶液 (批号101001) , 分别在0、1、2、4、8、16h进样测定各氨基酸的峰面积, 其RSD为0.8%～1.3% (n=6) , 表明衍生后的供试品溶液在16h内稳定性良好。
2.1 0 重复性试验
取同一批号的地龙注射液 (批号101001) , 依法制备6份供试品溶液, 衍生后进样, 各氨基酸含量的RSD为0.7%～1.1% (n=6) 。
2.1 1 加样回收率试验
精密称取丙氨酸对照品约22mg、缬氨酸对照品15mg、盐酸赖氨酸对照品13mg、异亮氨酸对照品18mg及亮氨酸对照品22mg, 分别置50mL量瓶中, 加水溶解并稀释至刻度, 摇匀, 制成回收用对照品溶液。精密量取已知含量的地龙注射液 (批号101001) 2.5mL, 至100mL量瓶中, 再加入回收用对照品溶液各5mL, 加水稀释至刻度, 摇匀。按2.5项下方法衍生后测定, 计算回收率。结果见表1。
2.1 2 样品测定
取不同批号的地龙注射液, 依法测定, 按回归方程计算出各氨基酸的含量, 结果见表2。
3 DNFB方法与结果
3.1 色谱条件[5]
色谱柱:Kromasil C-18, 250mm×4.6mm, 5μm;柱温:40℃;检测波长:360nm;流动相A:N-N-二甲基甲酰胺—0.025mol/L醋酸钠 (1∶100, 用冰醋酸调节p H值至6.0) ;流动相B:乙腈;梯度洗脱 (0min, 90%A;60min, 57%A;70min, 90%A) ;流速:1.00m L/min。
3.2 对照品溶液的制备
精密称取丙氨酸对照品、缬氨酸对照品、异亮氨酸对照品、亮氨酸对照品及盐酸赖氨酸对照品各62.5mg, 置同一25mL容量瓶中, 加少量0.6mol/L溶液溶解, 用水稀释至刻度, 摇匀, 制成对照品母液。精密量取对照品母液0.5, 1.0, 2.0, 4.0, 8.0mL, 置10mL容量瓶中, 加水稀释至刻度, 连同对照品母液共制成6个浓度的对照品溶液。
3.3 供试品溶液的制备
直接取地龙注射液。
3.4 阴性样品溶液的制备
同2.4。
3.5 衍生测定法[5]
精密量取对照品溶液与供试品溶液各1mL, 分别置25mL量瓶中, 加入0.5mol/L碳酸氢钠溶液2mL与1%2, 4-二硝基氟苯的乙腈溶液2.5mL, 置60℃水浴中60min, 取出, 放冷至室温, 加p H7.0磷酸盐缓冲液 (取磷酸二氢钾0.68g, 加0.1mol/L氢氧化钠溶液29.1mL, 用水稀释至100mL) 至刻度, 摇匀, 滤过, 取10μL注入液相色谱仪, 测定各氨基酸的含量。
A.对照品溶液;B.供试品溶液;C.阴性样品溶液;1.衍生剂 (DNFB) ;2.丙氨酸;3.缬氨酸;4.异亮氨酸;5.亮氨酸;6.盐酸赖氨酸
3.6 干扰试验
分别取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液, 依法进行衍生测定, 记录色谱图, 阴性样品溶液在各氨基酸相同的保留时间处未见色谱峰, 见图2。
3.7 线性关系考察
取3.2项下对照品溶液, 按3.5项下方法衍生, 注入液相色谱仪, 记录色谱图, 以峰面积Y对浓度X (mg·mL-1) 进行线性回归计算, 各回归方程为:丙氨酸Y=1603.1X+0.3826, r=0.9999;缬氨酸Y=1053.8X+3.039, r=0.9999;异亮氨酸Y=780.55X-6.833, r=0.9998;亮氨酸Y=1633.9X+6.442, r=0.9999;盐酸赖氨酸Y=397.66X-5.819, r=0.9998。各氨基酸在相应的范围内线性关系良好。
3.8 精密度试验
取3.2项下对照品溶液, 按3.5项下方法衍生后, 连续进样测定6次, 各氨基酸峰面积的RSD为0.7%～1.2% (n=6) 。
3.9 稳定性试验
取衍生后的供试品溶液 (批号101001) , 分别在0、1、2、4、8、16h进样测定各氨基酸的峰面积, 其RSD为0.5%～1.1% (n=6) , 表明衍生后的供试品溶液在16h内稳定性良好。
3.1 0 重复性试验
取同一批号的地龙注射液 (批号101001) , 依法制备6份供试品溶液, 衍生后进样, 各氨基酸含量的RSD为0.4%～1.0% (n=6) 。
3.1 1 加样回收率试验
精密称取丙氨酸对照品约44mg、缬氨酸对照品28mg、异亮氨酸对照品35mg、亮氨酸对照品44mg及盐酸赖氨酸对照品28mg, 置50mL量瓶中, 加水溶解并稀释至刻度, 摇匀, 制成回收用对照品溶液。精密量取已知含量的地龙注射液 (批号101001) 0.5mL, 至25mL量瓶中, 再精密加入回收用对照品溶液0.5ml, 按3.5项下方法衍生后测定, 计算回收率, 结果见表3。
3.1 2 样品测定
取不同批号的地龙注射液, 依法测定, 按回归方程计算出各氨基酸的含量, 结果见表4。
4 讨论
地龙注射液现行标准[6]的含量测定法是采用薄层扫描法测定缬氨酸的含量。薄层色谱由于其定量准确度低、耗时长及仪器限制, 已逐渐被其他方法取代。而高效液相色谱法因其定量准确、重复性好、分析快速等优点, 应用越来越广泛, 技术也越来越成熟。采用柱前衍生高效液相色谱法测定地龙注射液的含量, 可以同时测定多个氨基酸, 既加强了质量控制, 又实现了准确度高的快速测定, 更有利于推广应用。
本文采用Waters公司的AQC法, 衍生反应速度快, 并可在35min内完成地龙注射液中多个氨基酸的分离测定, 是一种简便、高效的测定方法。另外由于使用的色谱柱和衍生试剂盒均来自Waters公司, 其准确度和重现性也大大提高。但也因此, AQC法的经济成本比其他方法要高一些, 甚至需要配备Waters公司的液相色谱仪, 这在一定程度上限制了其在中小型实验室的应用。
本文建立的另一种方法DNFB法也适用于地龙注射液中的氨基酸测定。与AQC法相比, 其同样色谱分离时间较短, 分析结果的准确性、重复性均较好。由于其不需要特殊指定的仪器、色谱柱和试剂, 应用起来更加方便、经济。DNFB法的主要缺点是衍生时间过长;衍生试剂DNFB熔点低, 室温下即熔融, 影响操作;使用不同填料的C18色谱柱可能会导致结果偏差等。
从测定结果看, AQC法和DNFB法可以得到较为一致的结果, 说明两种方法没有显著差异, 均可用于地龙注射液的氨基酸含量测定。实际应用中可以根据情况选择其中一种方法进行。另外, 对于工艺和质量相对稳定的样品, 可以将本文的标准曲线 (回归方程) 测定法改成外标法, 使用一个浓度相当的对照品溶液即可。
参考文献
[1]肖培根.新编中药志.第四卷[M].北京:化学工业出版社, 2002:56.
[2]莫炫永.不同产地半夏的氨基酸分析[J].药物分析杂志, 2010, 3 (1) :145.
[3]陈志维, 黎玉翠, 暴梅佳, 等.柱前衍生化高效液相色谱法测定猪胆粉结合胆酸中甘氨酸和牛磺酸的含量[J].药物分析杂志, 2010, 3 (2) :288.
[4]黄璐敏.HPLC法测定地龙注射液中主要氨基酸的含量[J].中国药师, 2010, 13 (11) :1613.
[5]莫结丽.肝欣泰注射液质量标准评价研究[D].广州:广州中医药大学, 2008.
[6]国家药品监督管理局标准.试行:WS-11340 (ZD-1340) [S].2002.
地龙药理作用研究进展 篇2
1解热镇痛
陈斌艳等通过实验研究发现地龙能够解热镇痛, 但机制尚不清楚, 有待进一步研究。
2提高免疫功能
郭建等通过实验可知, 地龙蛋白活性给药组和荷瘤对照组可知, 给药组小鼠脾脏质量和胸腺质量都有较为明显提高, 说明地龙活性蛋白具有增强小鼠免疫功能。 同时可知, 其能够促进巨噬细胞吞噬功能, 促进淋巴细胞的转化和增强B细胞反应。
3抗血栓
现代研究表明, 地龙中的纤维蛋白溶解酶、蚓激酶和蚓胶原酶均为溶栓有效成分。 地龙纤溶酶是一种糖蛋白, 属于丝氨酸蛋白酶。 其纤溶酶是一组同工酶, 因种属不同, 组成会有差异。 程牛亮等已经分离出三种纤维蛋白溶解酶并对其性质进行了研究, 测得纤溶酶Ⅰ、Ⅲ具有纤溶作用, 而后者还能激活纤溶酶原的作用。 蚓激酶也是地龙中提取的含酶复合物, 杨嘉树等提取出一种可在体外激活纤溶酶原的蛋白酶, 并完成质谱分析, 得出蚓激酶单体具有相似氨基酸组成, 但和人纤溶酶的氨基酸组成相比, 赖氨酸含量较低。 蚓激酶具有抗凝、降纤作用, 其具有较强溶栓作用, 成为目前较好的溶栓药物。 蚓胶原酶能偶降解陈旧性血栓, 是其独有的性质, 地龙胶原酶研究较少, 更多性质有待深入探讨。
4抗癌作用
据研究表明, 小分子量地龙肽能够显著提高NK细胞的杀伤活性和增强巨噬细胞活性, 进而增强吞噬功能。 杨丽群等研究表明, 地龙肽能够改变NK细胞活性, 地龙肽浓度越高, 其作用越强;有能够使巨噬细胞功能增强, 但其作用会随地龙肽浓度增加而减弱;地龙肽还可以调节免疫功能, 但机制研究尚不明确。
5促进伤口愈合作用
创面愈合的过程分为凝血期、炎症期、修复期、成熟期, 因此创面愈合是炎性细胞、表皮细胞、内皮细胞和成纤维细胞等共同作用的病理过程, 成纤维细胞合成和分泌的胶原物是创面组织的主要成分。 在创伤部位肉芽组织中含有肌纤维细胞, 能够分泌和合成胶原纤维, 从而促进伤口愈合, 其纤维母细胞胞浆内还含有肌微丝和致密斑, 能够收缩伤口创面, 减小创面积, 起到愈合作用。 张凤春等通过对大白兔背部创伤口收缩实验研究证明, 地龙提取物能够促进创面肉芽组织的生长, 从而起到促进创伤口愈合的作用。
6降压作用
肾素- 血管紧张素- 醛固酮系统 ( RAAS) 在调节血压方面发挥重要作用, 它由血管紧张素转化酶 ( ACE) 、血管紧张素Ⅱ等组成, 是血压调节的重要环节。 就近期降压作用研究显示, 降压作用可能是抑制血管紧张素转化酶, 阻止血管紧张素转化, 阻止血管紧张素与AT1的结合, 小动脉平滑肌舒张, 降低外周阻力, 同时醛固酮分泌减少, RAAS系统被阻断, 血压降低;另一方面, 当ACE受到抑制时, 缓激肽降解减少, 细胞膜上的磷脂酶A2得到激活, 促进PGI2合成, 血管便得到舒张, 使血压下降。 李淑兰等从地龙脂质中分离得到的类血小板活化因子 (PAF) 物质是地龙中重要的降压成分。 据研究表明, 地龙降压蛋白能够降低血浆、肾脏Ald的水平, 升高血浆、肾脏局部 ( 6- Keto- PGF1α) 含量, 从而抑制RAAS系统, 以起到降压作用。
7平喘
哮喘是多种炎症细胞和多种炎症介质参与的慢性过敏性气道炎症, 地龙是传统的平喘中药。 据报道, 通过大鼠和家兔的肺灌流实验表明, 地龙中提取的6- 羟基嘌呤能够对抗组胺和毛果芸香碱引起的支气管收缩, 从而起到平喘作用;林建海[等提取的地龙复方上清液, 对致敏性哮喘豚鼠进行腹腔注射, 研究结果表明, 该复方可以延缓哮喘发作时间和减轻发作程度, 间接证明地龙在其方中起到的平喘作用;哮喘发病机制相关报道提出, Th1/Th2的比例失衡是哮喘发病的重要机制, Th1型细胞因子减少或Th2分泌细胞因子的增加导致哮喘发病, Th1型细胞因子包括INF- γ, IL- 10, IL- 12等, Th2型细胞因子包括IL- 4, IL- 5, IL- 13等, 周明眉等通过小鼠注射地龙酸性成分, 能够抑制IL—5和IL- 13水平升高和IFN- γ 水平的降低, 从而在一定程度上调整了Th1/Th2的平衡, 起到了平喘的作用;
褚襄萍等通过对麻黄地龙不同比例对平喘作用机制的研究, 研究结果表明, 地龙对组胺引起的气管收缩具有较强的舒张作用, 相关研究报道, 地龙液可以保护支气管痉挛, 离体实验也表明, 地龙液能够解除组胺所致的支气管痉挛, 以起到平喘作用。
8抗菌
崔东波等通过对蚯蚓进行提取, 采用硫酸铵分级沉淀法, 再经过Sephadex G系列不同孔径凝胶进行分离纯化, 得到了一种抗菌活性肽, 该活性肽相对分子质量约为5500, 其对白色念球菌、大肠杆菌、酵母菌等均有抑制作用, 并且该抗菌肽具有较高的热稳定性。
9抗氧化
周亿金等通过构建超氧阴离子自由基和羟基自由基体系以及脂蛋白多不饱和脂肪酸 ( PUFA) 过氧化体系, 测定蚯蚓抗氧化提取物对成年小鼠按时灌胃, 测定血液和肝脏抗氧化活性及丙三醛 (MDA) 含量, 来检测蚯蚓抗氧话提取物在成年小鼠体内的抗氧化能力, 结果表明, 蚯蚓抗氧化提取物在体外自由基体系中具有较强的清除自由基的作用, 且以10倍稀释该提取物, 可降低体内脂质过氧化水平, 能够提高抗氧化酶的活性;武金霞等实验结果表明, 蚯蚓冻干粉能够降低血清中超氧化物歧化酶 ( SOD) 活力和丙二醛 ( MDA) 含量, 能够清除体外邻苯三酚反应系统产生超氧阴离子和抑制过氧化氢反应体系产生羟基自由基, 故表明, 蚯蚓冻干粉具有抗氧化活性。
10其他作用
被激活的HSC可以分泌多种细胞因子, 其中TGF- β1具有抑制肝细胞增殖、促进其产生细胞外基质、减少细胞外基质降解以及诱导肝细胞凋亡的作用, 蚯蚓提取物“ 地龙2号”能够抑制HSC的活化, 降低TGF- β1的表达, 从而起到了抗肝纤维化的作用。 王娟等通过对裸鼠人肝癌细胞移植瘤生长及CD44v6表达的研究, 结果表明, 蚯蚓纤溶酶能抑制肝癌细胞抗生长, 还能转移抗侵袭, 毒副作用不明显, 是肝癌治疗的辅助药;地龙成分实验表明, 其含药血清给药方式明显优于直接给药方式对HMC增殖的干预作用, 效果明显。 马艳春等通过检测, 地龙有效成分对体外培养的人肾小球系膜细胞 (HMC) 增殖具有抑制作用[21]。
展望
关于地龙的研究, 目前国内对地龙研究集中于地龙提取、分离等方面的研究, 多为小分子活性成分的研究, 目前国内研究部分药理作用机制, 并未清楚阐明各药理作用机制, 临床多用于血栓疾病, 但作用机理并未明确, 有待进一步研究。 因此加强地龙机理研究, 可以为临床应用提供理论依据。
摘要：简要分析了地龙药理作用研究进展。
地龙注射液 篇3
动物:日本大耳白兔24只, 4月龄, 雌雄各半, 体重2.0～2.5kg左右, 由佳木斯大学实验动物中心提供。药品:积雪草甙霜软膏由上海现代制药股份有限公司生产, 批号061004。鲜地龙原液制备:取鲜地龙, 吐泥, 洗净泥沙, 匀浆致细胞破碎 (显微镜下判断) , 放置24小时, 离心, 取上清液即为鲜地龙原液。
2 实验方法
2.1 建立动物模型
24只兔分为4组。每组6只, 除空白组6只外, 其余3组均按文献[1]所述方法建立兔耳增生性瘢痕动物实验模型。于每兔耳腹侧沿长轴避开可见血管, 切除兔耳全层皮肤 (1.5cm×1.5cm) 至软骨膜, 出血点以电凝止血, 创面裸露不予包扎。
2.2 给药方法
术后治疗组每日在创面敷以浸有鲜地龙匀浆的纱布, 对照组涂抹积雪草甙霜软膏;模型组在创面敷以浸有生理盐水的纱布。
2.3 标本取材及处理
于术后50天, 在静脉麻醉下, 分别用直径12mm环钻洞穿左右兔耳创面全层取下标本, 周边带有少许正常组织, 4%多聚甲醛固定, 石蜡包埋, 沿瘢痕凸起最高点纵行切片, HE染色及Masson染色。
2.4 指标观察方法
①肉眼观察瘢痕大小、质地、色泽;②成纤维细胞数密度:400倍光镜下观察瘢痕HE染色切片, 在瘢痕中央浅部、中央深部、两侧部各随机选取10个矩形视野 (0.0052mm2视野) , 目测计数并计算切片内单位面积成纤维细胞数量, 结果取均数;③胶原纤维的密度:Masson染色组织切片, 在瘢痕中央浅部、中央深部、两侧部各随机选取6个视野, 观察胶原纤维的密度。
2.5 统计学处理
采用t检验。
3 结果
3.1 肉眼观察
造模组:瘢痕组织厚于周边正常皮肤, 触及质地较硬, 颜色呈淡红色;积雪草甙霜组:瘢痕表皮趋于平伏, 体积减小, 触及质地变平变软, 颜色基本接近正常皮肤;地龙组:创面愈合快, 瘢痕较平坦, 体积与外形均变小, 质地变软, 颜色变浅为淡粉色, 基本接近正常皮肤。
3.2 镜下观察
空白对照组:可见纤维组织由无数纤维束组成, 纤维细胞排列整齐, 细胞为卵圆形, 细胞核位于细胞中央, 未见细胞变性、损坏, 细胞之间界限明显;模型对照组:纤维束排列极其不规则, 纵横交错, 可见弥漫性纤维细胞变性, 高倍镜下可见大部分细胞膜消失, 相互融合, 胞质疏松呈网状, 有的核仁被融合挤到一边;给药组:纤维束排列相对整齐, 细胞结构完整、清晰, 细胞内有散在的变性, 细胞核位于中央, 细胞之间界限比较清晰, 没有发生融合。阳性组:可见纤维束排列整齐, 细胞结构完整、清晰, 细胞接近卵圆形, 细胞核位于细胞中央, 细胞有散在的变性, 细胞之间界限明显。
3.3 地龙液对成纤维细胞和胶原纤维的影响 见表1。
与模型组比较*P<0.05, **P<0.01
4 结论
地龙是传统中药, 能治瘰疬溃烂, 口舌糜烂。临床上常用鲜地龙液外敷治疗创伤性溃疡、下肢溃疡、烧烫伤等疾病[2], 不仅能抗感染, 促进创面愈合, 且能抑制肉芽组织的过度增生, 促进肉芽组织上皮化, 使伤口愈合不留瘢痕或减少瘢痕的形成。本实验结果表明, 鲜地龙外敷对兔耳瘢痕形成有抑制作用, 可减少创面炎性反应, 促进创面愈合, 减少皮肤瘢痕的形成;减少瘢痕组织中的成纤维细胞数量和胶原含量, 减轻瘢痕纤维化程度, 使瘢痕软化、变小, 从而达到抑制瘢痕的作用。因瘢痕多见于局部, 对全身影响较小, 外敷给药途径方便, 药理作用直接快速, 故外敷给药更为常用。有望将其开发成为一种天然的外用抗瘢痕制剂。
参考文献
[1]李元荟.创伤研究动物模型:兔耳瘢痕模型的建立与应用.西安:第四军医大学出版社, 2005:85.
地龙注射液 篇4
关键词：地龙复方,药效学,炙麻黄,甘草,止咳,祛痰,平喘
哮喘是由气道炎性细胞和结构细胞 (如嗜酸粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞、平滑肌细胞、气道上皮细胞等) 及细胞组分 (cellular elements) 参与的气道慢性炎症性疾病[1]。古代医家多认为其病因为痰饮内伏、气因痰阻, 而致肺气宣降失常[2]。目前西医临床常规选用吸入性皮质类激素 (ICS) 治疗哮喘, 但长期使用吸入性皮质类激素可能会导致儿童和成人严重骨流失[3]。因此, 开发出新型安全有效的平喘药物是解决该类问题的重点。地龙是中医治疗哮喘的常用药, 在很多治疗哮喘的方剂中, 如五味地龙汤、地龙细辛汤等都含有地龙成分, 实践证实其具有较好的平喘作用。笔者经过前期实验证实地龙干粉具有良好的平喘止痉效果[4], 但单独使用地龙的抗炎、祛痰、止咳等效果不佳。地龙和麻黄为常用药对, 两药同用, 功擅宣肺平喘, 适用于痰浊阻塞气道之哮喘病的治疗。褚襄萍等[5]研究表明地龙和麻黄以3∶1比例使用时对离体平滑肌收缩有较好的抑制作用。《金匮要略》《伤寒论》等古籍中均表明麻黄和甘草配伍用药具有一定的利水消肿作用, 且现代研究[6]表明麻黄和甘草以2∶1比例配伍使用时有较好的抗炎作用。基于前期研究和文献调研, 参考中医药配伍理论, 初步拟定地龙复方由地龙、炙麻黄、甘草三味药物组成, 比例为6∶2∶1, 其中地龙通络平喘, 蜜麻黄润肺止咳, 甘草补气益中、祛痰止咳并调和药性。本实验通过比较地龙单方与复方在止咳、祛痰及对哮喘小鼠气道炎症方面的作用, 考察地龙复方在抗哮喘方面的作用效果, 现报道如下。
1 仪器与试剂
1.1 动物
昆明小鼠, 6周龄, 体重18~22g, 雌雄兼用, 购自广州中医药大学实验动物中心, 许可证号为SCXK (粤) 2013-0020;SPF级雌性Balb/c小鼠, 45只, 6周龄, 体重18~22g, 购自中山大学实验动物中心, 生产许可证号SCXK (粤) 2011-0029。
1.2 药物
炙麻黄、甘草购自广州采芝林药业, 地龙为赤子爱胜蚓 (Eisenia Foetida) 鲜品, 由本实验室提供;地塞米松 (0.75mg/片, 广东华南药业集团有限公司, 批号:130201) ;咳特灵片 (广州白云山制药总厂, 批号:1120444) 。
1.3 试剂
酚红 (sigma分装) 、氨水 (天津市百世红有限公司) 、碳酸氢钠 (成都科龙化工试剂厂) 、卵蛋白OVA (sigma公司) 、苏木素-伊红 (HE) 染液试剂盒 (南京建成研究所) 、小鼠白介素-4ELISA试剂盒 (博士德生物) 。
1.4 实验仪器
WH-2000超声波雾化器 (广东粤华医疗器械有限公司) ;759紫外-可见分光光度计 (上海菁华科技有限公司) ;EG1160型石蜡包埋机 (LEICA公司, 德国) ;RM2255切片机、TEC-2500病理组织漂烘仪 (LEICA公司, 德国) ;Bioquant-Osteo骨形态学图像分析系统 (BIOQUAN, USA) ;标准酶标仪 (Thermo公司) 。
2 方法
2.1 试药处理
地龙干燥全粉:取鲜地龙200g, 洗净, 吐泥24h后, 用55℃水烫死, 置于55℃恒温烘箱中烘干, 得干燥地龙 (产率为17.7%) , 采用超微粉碎机磨成细粉, 得地龙干燥全粉。
炙麻黄甘草浓缩液:取10g炙麻黄、5g甘草分别用100mL和50mL水浸泡过夜, 先将炙麻黄煎煮15min, 再与甘草混合继续煎煮15min, 过滤, 滤渣再加150mL水煎煮, 重复2次, 每次30min, 合并3次煎煮液, 旋转蒸发至200mL, 得炙麻黄甘草浓缩液 (相当于生药浓度0.05g/mL) 。
2.2 各组动物给药剂量 (见表1)
2.3 镇咳实验 (浓氨水引咳法) [7,8]
昆明种小鼠, 体重18~22g, 40只, 雌雄各半, 随机分为5组, 即空白对照组 (Nor) 、地龙组 (DL) 、炙麻黄甘草提取液组 (MG) 、地龙复方组 (DF) 、咳特灵片组 (KL) 。将小鼠置于1 000mL烧杯中, 采用超声波雾化器, 以0.5mL/min的速度将浓氨水喷入烧杯内, 持续喷雾15s, 通入浓氨水时开始观察和记录小鼠的咳嗽潜伏期和3min内咳嗽次数, 剔除喷雾3min内咳嗽次数少于10次及多于80次的小鼠。按照表1中的剂量给药, 连续灌胃给药5天后, 重复上述实验, 记录各组小鼠的咳嗽潜伏期 (小鼠发生第一次咳嗽反射的时间) 和3min内的咳嗽次数。
注:Nor:空白对照组;DL:地龙组;MG:炙麻黄甘草提取液组;DF:地龙复方组;KL:咳特灵片组。
2.4 小鼠祛痰实验 (小鼠酚红排泌法) [9]
昆明种小鼠, 体重18~22g, 40只, 雌雄各半, 分组方法同镇咳实验, 给药量亦相同, 各组小鼠连续给药5天后, 末次给药1.5h后腹腔注射1%酚红生理盐水, 30min后眼球放血处死小鼠, 剪开颈部皮肤, 分离气管, 在气管甲状软骨下端行气管插管并与注射器相连, 用0.8mL 5%NaHCO3溶液缓慢注入气管, 然后轻轻吸出, 反复灌洗3次, 合并灌洗液, 1 500r/min离心, 取上清, 采用分光光度计在545nm波长处检测吸收度 (A值) , 制备酚红标准曲线, 根据酚红标准曲线计算酚红浓度 (C) 。
2.5 小鼠平喘实验
2.5.1 过敏性哮喘模型建立[10,11]
取Balb/c小鼠48只, 随机分为6组, 即空白对照组 (Nor) 、过敏性哮喘模型组 (M) 、阳性药物 (地塞米松) 组 (DM) 、地龙组 (DL) 、炙麻黄甘草提取液组 (MG) 、地龙复方组 (DF) , 每组8只, 正常饲养7天后, 除Nor组小鼠腹腔注射0.2mL pH7.4的PBS溶液外, 其余各组小鼠均于第1、7、14天腹腔注射pH7.4的PBS溶液0.2mL (含有20μg OVA, 2mg AL (OH) 3凝胶) 致敏, 从第21天起, 除Nor组小鼠单独用等量的pH7.4PBS雾化外, 其余各组小鼠均采用2.5%OVA溶液雾化激发 (1.5mL/min, 30min/次, 3次/周, 连续3周) 。
2.5.2 给药剂量
Nor组、M组:1mL/kg pH7.4PBS, 其余各组按照表1中剂量给药。
2.5.3 肺泡灌洗液 (BALF) 分类计数
于最后一次雾化激发24h内, 放血处死小鼠, 收集血液, 气管插管后采用0.8mL PBS进行肺泡灌洗, 重复3次, 合并3次BALF, 3 000r/min离心10min, 收集上清液, 沉淀加1mL PBS重悬。采用血球计数板计白细胞总数, 取200μL涂片瑞士-吉姆萨染色后进行分类计数, 计200个细胞, 取下左肺, 保存于福尔马林溶液中。
2.5.4 气管及血管周围炎性浸润计分
左肺于福尔马林中固定24h后, 脱水、浸蜡、石蜡包埋、4μm切片后, 脱蜡至水, 按照试剂盒说明进行HE染色, 显微镜下对支气管进行炎性计分。计分标准为:0分:几乎没有炎性细胞;1分:存在少量炎性细胞;2分:存在一层炎性细胞;3分:存在2~4层炎性细胞;4分:存在4层以上炎性细胞, 每个肺部组织至少计10根支气管, 直径在10μm左右[12]。
2.5.5 BALF及血清中IL-4含量测定
将血清及BALF样本平衡至室温, 按照试剂盒说明进行测定。
2.6 统计学方法
采用SPSS18.0进行单因素方差分析, 样本多重比较采用LSD和Duncan进行两两比较, 所有计量数据均采用均数加减标准差 (±s) 表示。P<0.05为差异具有统计学意义。
3 结果
3.1 镇咳作用
各给药组小鼠咳嗽潜伏期均有不同程度的延长, 与阴性对照组比较差异具有统计学意义 (P<0.05) ;与地龙组、炙麻黄甘草提取液组比较, 地龙复方组小鼠咳嗽潜伏期明显延长, 差异具有统计学意义 (P<0.05) , 但与咳特灵组小鼠比较差异不具有统计学意义 (P>0.05) 。炙麻黄甘草提取液组、地龙组小鼠咳嗽次数与阴性对照组比较差异显著, 具有统计学意义 (P<0.05) , 两组之间比较并无统计学差异 (P>0.05) 。详见表2。
(±s)
注:与空白对照组比较, (1) P<0.05;与地龙复方组比较, (2) P<0.05。
3.2 祛痰作用
各给药组小鼠气道酚红排泌量均有不同程度的增加。与阴性对照组比较, 地龙组小鼠酚红排泌量增加效果不明显, 差异不具有统计学意义 (P>0.05) ;炙麻黄甘草提取液组、地龙复方组和咳特灵组小鼠酚红排泌量增加效果较为明显, 与对照组比较差异具有统计学意义 (P<0.05) ;与地龙复方组比较, 地龙组小鼠酚红排泌量较低, 差异具有统计学意义 (P<0.05) ;炙麻黄甘草提取液组、咳特灵组小鼠酚红排泌量比较差异不具有统计学意义 (P>0.05) 。见表3。
(±s)
注:与空白对照组比较, (1) P<0.05;与地龙复方组比较, (2) P<0.05。酚红标准曲线方程:Y=7.989 69X-0.09, r2=0.999 77。
3.3 BALF中细胞分类计数
各给药组与模型组小鼠BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞数、中性粒细胞数、淋巴细胞数均有不同程度的减少, 其中地龙复方组和地塞米松组小鼠细胞数量变化较为明显, 与其他组小鼠比较差异具有统计学意义 (P<0.05) 。地龙复方组和地塞米松组小鼠各细胞分类计数比较差异不具有统计学意义 (P>0.05) 。见表4。
(±s, 104个/mL)
注:与模型组比较, (1) P<0.05;与地塞米松组比较, (2) P<0.05;与空白对照组比较, (3) P<0.05。
3.4 血管及支气管周围炎性计分
图1结果表明, 地龙复方组小鼠支血管及支气管周围炎性计分与模型组比较差异显著, 具有统计学意义 (P<0.05) , 说明造模成功。各给药组小鼠血管及支气管周围炎性计分均较模型组有所减轻, 其中地塞米松组和地龙复方组小鼠改善最为明显。地龙复方组小鼠炎性计分与地塞米松组比较差异显著, 具有统计学意义 (P<0.05) , 见图2。
3.5 ELISA法测定小鼠血清及BALF中IL-4浓度
各给药组及空白对照组小鼠血清及BALF中IL-4含量与模型组比较均有不同程度的减少, 差异具有统计学意义 (P<0.05) 。与地塞米松组比较, 地龙复方组小鼠BALF中IL-4含量较高, 差异具有统计学意义 (P<0.05) , 但血清中IL-4含量差异不明显, 不具有统计学意义 (P>0.05) 。见表5。
4 讨论
地龙作为中医治疗哮喘的传统用药, 无论是复方还是单方入药都显示出一定的治疗效果。利红宇等[13]研究表明, 蛤粉制广地龙的止咳、祛痰、平喘效果最好, 净制广地龙有一定的平喘效果, 但止咳、祛痰效果不佳。吴世满[14]研究发现给予哮喘大鼠腹腔注射地龙注射液可缓解其支气管痉挛, 降低气道阻力, 改善肺功能。王文英等[15,16]研究表明五味地龙汤水煎液能延长豚鼠的哮喘潜伏期, 抑制平滑肌收缩, 减少肺溢流量, 减轻EOS浸润抗气道炎症。陈根生[17]采用麻桑地龙汤治疗小儿哮喘, 痊愈38例, 好转10例, 无效2例, 总有效率为96%。
地龙复方在止咳、祛痰、平喘方面均较单独使用地龙效果显著。地龙本身具有良好的平喘、止痉效果, 麻黄、甘草共煎液可抑制炎症渗出和炎性细胞吸附和聚集, 具有良好的抗炎作用[18]。复方中改麻黄为炙麻黄, 因其性温偏润, 辛散发汗作用较麻黄缓和, 并增强了润肺止咳之功, 以宣肺平喘止咳力胜, 麻黄和地龙两药同用, 其配伍关系为相反药对中的升降相反, 属于寒温并用之法, 还可抑制麻黄升高血压和引起心悸的副作用[19], 同时配合甘草以调和药性, 改善地龙本身的腥臭之气。
(±s, pg/mL)
注:与模型组比较, (1) P<0.05;与地塞米松组比较, (2) P<0.05;与空白对照组比较, (3) P<0.05。
地龙注射液 篇5
1 发病情况
天水市秦安县王窑乡某村养鸡约2万余只, 由于地处偏僻, 远离城镇, 加之当地群众生活较为困难, 无疫苗冷藏设备, 疫苗基本是现用现购。因此大部分养殖户不能按照程序及时给鸡接种新城疫疫苗, 新城疫或非典型性新城疫时有发生。鸡发病后除引起大量死亡外, 残存的病鸡大多发生“扭颈”症状, 群众称为拧脖子鸡。几乎所有的养殖户家中都有此类病鸡。
2 临床表现
新城疫扭颈病鸡主要发生于新城疫病后期的鸡群, 数量约占全群的1%~3%。“扭颈”病鸡在未受到外界因素干扰时, 头颈略向一侧歪斜, 而且饮食基本正常。一旦受到惊扰, 病鸡常常“扭颈”伏地旋转或头向一侧极力偏转, 其状十分痛苦。如果不予隔离或单独饲养, 在大群中病鸡经常受到其他鸡只或其他因素的惊扰, “扭颈”次数随之增加, 病情加重。另外受其他鸡只踩踏几率增加, 采食饮水受限, 死亡率增加。病鸡几乎丧失生产性能, 也无商品价值, 大多以死亡告终。
3 剖检变化
新城疫死亡鸡主要病变为喉头出血, 并有灰白色黏液;气管黏膜出血, 且刮之不去;嗉囊积液, 倒提时有大量液体流出;腺胃乳头、肌胃角质膜下有条状出血, 尤其十二指肠出血严重;盲肠扁桃体、直肠黏膜均有不同程度的出血。但时新城疫“扭颈”病鸡多不具备新城疫喉头、腺胃、十二指肠和直肠的出血性典型病变, 也少见嗉囊积液以及呼吸困难等表现。大部分“扭颈”病鸡十分消瘦, 剖检内脏萎缩, 尤其是肠管变细, 腺胃萎缩、乳头变小或消失, 偶见腺胃局部陈旧性溃疡病灶。
4 实验诊断
对具有典型临床症状的病鸡, 棉拭子采集喉气管和泄殖腔病料, 用石家庄市神九畜禽疾病防治及药物研究所研制生产的新城疫胶体金快速诊断试纸条诊断, 结果全部为新城疫阳性或弱阳性, 结合典型症状和病例剖检综合判断, 可初步确诊。
5 治疗方法及治疗效果
将“射干地龙颗粒”按每次1g/kg体重剂量, 用少量温开水稀释, 待药物晾凉后逐只喂服, 每日3次, 连喂7天。经上述方法治疗7天, 165只扭颈病鸡完全恢复的有122只, 治愈率达73.94% (122/165) ;症状减轻的35只, 好转率为21.21% (35/165) ;总有效率为95.15% (157/165) ;症状未改善或无效的8只, 无效率为4.85% (8/165) 。
6 典型病例
天水市某养鸡户共饲养罗曼褐商品代蛋鸡1231只, 70日龄时零星死亡增加, 每天死亡2~3只不等。病鸡粪便稀薄, 偶见绿色或蛋清样稀粪。个别鸡只单侧翅和腿瘫痪, 其中一次性从鸡群中隔离出31只歪头“扭颈”的病鸡单独饲养。病鸡主要表现为“扭颈”神经症状, 受到惊扰突然向后倒退, 倒地后头颈处地, 伏地旋转。稍久则可逐渐恢复, 甚至可以觅食。按上述方法确诊后, 遂将“射干地龙颗粒”按每次1g/kg体重剂量, 用少量温开水稀释后逐只喂服, 每日3次, 连喂7天。经治疗的31只扭颈病鸡完全恢复的有22只, 治愈率为70.97% (22/31) ;症状减轻的5只, 好转率为16.13% (5/31) ;症状未改善或无效的4只;无效率为12.90% (4/31) 。
7 体会
地龙膏治疗干槽症疼痛的临床研究 篇6
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择2013年1月—2014年1月我院口腔科门诊下颌阻生智齿拔除术后发生干槽症的患者60例, 随机分为2组, 观察组30例, 男18例, 女12例, 年龄18岁~33岁, 平均年龄 (25.6±3.5) 岁;对照组30例, 男20例, 女10例, 年龄18岁~32岁, 平均年龄 (24.2±3.1) 岁。2组一般资料差异无统计学意义 (P>0.05) 。
1.2 治疗方法
2组患者均给予轻柔搔刮牙槽窝, 3%双氧水和生理盐水交替冲洗牙槽窝。观察组于面部外贴地龙膏 (黔南州中医医院制剂科生产, 批准文号:黔药制字Z20130009) ;对照组放置3%愈创木酚海绵。2组患者疗程均为1周。
1.3 观察指标
(1) 临床疗效; (2) 疼痛评分:采用视觉模拟评分法 (VAS) 分别于治疗前、治疗后1, 3, 5, 7 d评价2组患者的疼痛情况。疼痛的评估采用VAS疼痛疗效指数 (EI) 。EI= (治疗前VAS疼痛测定值-治疗后VAS疼痛测定值) /治疗前VAS疼痛测定值×100%。
1.4 疗效判定标准
按4级评定标准进行, 治愈:EI≥95%;显效:70%≤EI<95%;有效:30%≤EI<70%;无效:EI<30%。总有效率= (治愈病例数+显效病例数+有效病例数) /总病例数×100%。
1.5 统计学方法
计量资料以均数±标准差 (±s) 表示, 采用t检验, 计数资料采用χ2检验, P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 2组临床疗效比较
观察组总有效率为93.33%, 对照组总有效率为76.67%, 2组比较差异有统计学意义 (P<0.05) 。见表1。
2.2 2组患者VAS评分比较
治疗前, 2组患者VAS评分比较差异无统计学意义 (P>0.05) ;治疗1, 3, 5, 7 d后, 观察组VAS评分分别与对照组比较, 差异均有统计学意义 (P<0.01) 。见表2。
2.3 2组患者EI指数比较
治疗1, 3, 5, 7 d后, 观察组EI指数分别与对照组比较, 差异均有统计学意义 (P<0.01) 。见表3。
2.4 2组止痛药使用情况比较
观察组止痛药使用病例数少于对照组 (P<0.01) 。见表4。
3 讨论
干槽症主要症状是局部激烈的疼痛, 如何解决病痛问题是口腔门诊研究的重要课题。临床上干槽症的止痛治疗手段主要包括利用无菌局麻药或生理盐水冲洗, 牙槽窝内放置覆盖物, 患者口服止痛药治疗等[1,2,3]。本文结果显示:观察组有效率为93.33%, 治愈率为56.67%;对照组分别为76.67%和30.00%, 2组总有效率比较, 差异有统计学意义。治疗1, 3, 5, 7 d, 2组患者EI指数比较, 观察组高于对照组 (P<0.01) , 且观察组止痛药使用病例数少于对照组 (P<0.01) 。提示地龙膏具有镇痛作用, 可有效降低前列腺素E2、5-羟色胺、组织胺的含量水平, 促进局部炎症的代谢, 达到止痛效果[4]。
参考文献
[1]蔡永海, 卢长涛.Gelatamp胶质银止血明胶海绵预防拔牙后并发症的临床研究[J].华西口腔医学杂志, 2008, 26 (5) :519-521.
[2]BlumIR.Contemporary views on drysocket (alveolar osteitis) :a clinical appraisal of standardization, aetiopathogenesis and management:a criticalreview[J].IntJOralMaxillofacSurg, 2002, 31 (3) :309-317.
[3]Meng W, Dong Y, Liu J, et al.A clinical evaluation of amlexanoxoral adhesive pellicles in the treatment of recurrent aphthousstomatitis and comparison with amlexanox oral tablets:a randomized, placebo controlled, blinded, multicenter clinical trial[J].Trials, 2009, 60 (4) :10-15.