THP-1巨噬细胞

THP-1巨噬细胞（精选4篇）

THP-1巨噬细胞 篇1

动脉粥样硬化 (AS) 的发生发展是一个极其复杂的病理生理过程, 血脂代谢紊乱与其密切相关, 血浆脂质水平升高可促使大量脂质尤其是胆固醇进入动脉壁, 最终导致AS病变形成。胆固醇逆转运 (RCT) 过程对机体具有抗AS的保护作用。SR-B1是一种高密度脂蛋白 (HDL) 生理性相关受体, 是第一个在分子水平上得到证实的HDL受体。已有研究证实, RCT过程中包括细胞胆固醇的流出等关键步骤均需SR- B的参与[1]。

肾素-血管紧张素系统 (RAS) 参与了AS的发生过程。血管紧张素Ⅱ (AngⅡ) 是RAS的主要活性成分, 是一种加速AS成的重要危险因子[2]。Wolf等[3]的研究首次发现, AngⅡ能下调近端肾小管细胞SR-B1的表达。有关AngⅡ对巨噬细胞SR-B1表达的影响尚未见报道。本研究拟以THP -1源性巨噬细胞为对象, 观察AngⅡ对THP-1源性巨噬细胞SR-B1表达的影响, 探讨AngⅡ促进AS的新机制。

1 材料与方法

1.1 材料

人THP-1单核细胞 (购自中科院上海细胞库) ;AngⅡ、佛波脂 (PMA) 均为美国Sigma公司产品;RPMI1640培养基、胰蛋白酶 (美国GIBCO/BRL公司) ;总RNA提取试剂盒 (Trizol) 美国Promega公司;SR-BI引物、β-actin引物 (内参) 大连宝生物有限公司;胎牛血清 (杭州四季青公司) ;兔抗人SR-B1多克隆抗体 (Santa Cruz公司) 。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养及分组

THP-1细胞用含有10%胎牛血清的RPMI - 1640培养液, 37 ℃、5% CO2 培养箱中静置培养, 在每次实验前用160 nmol/L PMA孵育THP - 1细胞36 h, 使其诱导分化成巨噬细胞。分组并计数, 实验共分5组, 即对照组 (AngⅡ0 nmol/L) 、AngⅡ10 nmol/L、AngⅡ100 nmol/L、AngⅡ1000 nmol/L、AngⅡ10000 nmol/L, 各组作用24 h后收集细胞, 用于SR-B1表达的检测。

1.2.2 RT-PCR法检测THP-1巨噬细胞SR-B1mRNA表达

Trizol法提取总RNA, SR-B1表达水平以目的mRNA与内参照人β-actin灰度值之比表示。引物序列由大连宝生物有限公司合。人THP-1巨噬细胞SR-B1引物序列, 上游引物:5’- ctgtgggtgagatcatgtgg -3’, 下游引物:5’- gttccacttgtccacgaggt -3’, 扩增片段191bp;人β-actin引物序列, 上游引物:5’- tgaacgggaagctcactgg-3’, 下游引物:5’- tccaccaccctgttgctgga -3’, 扩增片段为307bp。取各组细胞总RNA 2 μg反转录合成cDNA, 再取反转录产物1 μL进行PCR循环。反应结束后, 取反应产物5 μL进行2.0%琼脂糖凝胶电泳, 溴乙啶染色, UVP凝胶图像分析系统扫描摄图分析。

1.2.3 Western-blot蛋白印迹法检测THP-1巨噬细胞SR-B1蛋白表达

用细胞裂解液裂解细胞, 取总蛋白50 μg进行变性, SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。

1.3 统计学处理

实验数据以均数±标准差$(\overline{x}\pm s)$表示, 采用SPSS 13.0统计软件分析, 多重比较采用Bonferroni检验。

2 结 果

2.1 巨噬细胞的分化鉴定

细胞呈圆形、悬浮生长, 经160 nmol/ LPMA诱导分化36 h后, 细胞停止增殖, 由悬浮生长变为贴壁生长, 且伸展伪足, 呈巨噬细胞外形。

2.2 THP-1巨噬细胞SR-B1表达的检测

THP-1巨噬细胞与不同浓度AngⅡ (对照组0 、10 nmol/L、100 nmol/L、1 000 nmol/L、10 000 nmol/L) 孵育24 h后, RT-PCR检测THP-1巨噬细胞SR-B1mRNA 的表达。结果显示, 与对照组相比, AngⅡ使THP-1巨噬细胞SR-B1mRNA的表达下调, 且呈剂量依赖关系 (P<0.05) 。详见表1。

Western 印迹方法检测各组细胞SR-BI蛋白质的表达。结果显示, 与对照组相比, AngⅡ使THP-1巨噬细胞SR-B1蛋白质的表达下调, 且呈剂量依赖关系 (P<0.05) 。详见表2。

3 讨 论

冠心病是人类排列前位的主要致死原因, 国际著名的七国研究、美国弗莱明汉心脏研究和多危险因素干预试验 (MRFTI) 均证实血浆胆固醇水平的升高是冠心病发生率、死亡率增高的最重要危险因素。研究SR-B1缺失的小鼠发现, 不仅肝脏选择性摄取胆固醇降低, AS损伤加剧, 而且动物易发冠心病并伴随自发的心肌梗死、心力衰竭和死亡[4]。巨噬细胞SR- B1的表达对apoE- / -小鼠体内的动脉粥样硬化病变的进展有保护作用[5]。因此SR- B1的表达调控可能在AS的形成中起重要作用, 如何调控SR- B1成为人们关注的焦点。研究证实, SR-B1在肝脏细胞、类固醇激素生成细胞或巨噬细胞的表达可因给予雌激素, 过氧化物酶体增殖物活化受体拮抗剂、维生素E、多聚不饱和脂肪酸、胆固醇等而改变[6], 然而对AS的形成与发展起重要促进作用的AngⅡ是否对SR-B1表达有调控作用尚不清楚。

本实验显示, AngⅡ能显著抑制巨噬细胞SR-B1mRNA的表达, 并呈剂量依赖性 (P<0.05) 。同样AngⅡ能显著抑制巨噬细胞SR-B1蛋白的表达, 且呈剂量依赖性 (P<0.05) , 并且其蛋白表达水平同mRNA表达水平一致。

本研究结果显示, AngⅡ对THP - 1源性巨噬细胞SR-B1具有负性调控作用。因此AngⅡ促进AS的一个重要机制就是通过抑制SR-B1的表达, 从而使巨噬细胞胆固醇逆转运受阻, 导致动脉粥样硬化病变形成。

参考文献

[1] Acton SL, Kozarsky KF, Rigotti A.The HDL receptor SR-B1:A new therapeutic target for atherosclerosis [J].Molecular Medicine Today, 1999, 5:518- 524.

[2] Gorte K, Drexler H, Schieffer B.Rennin agiotensin systemn and atherosclerosis[J ].NePhrol Dial Transplant, 2004, 19 (4) :770-773.

[3]Wolf G, Wenezl U, Jablonski K, et al.AngioetnsinⅡdown-regu-lates SR-B1HDL receptor in proximal tublar cells[J].NePhrol Dial Transplant, 2005, 20 (6) :1222-1227.

[4]Trigatti B, Covey S, Rizvi A.Scavenger receptor class B type I in high-density lipoprotein metabolism, atherosclerosis and heart dis-ease:Lessons from gene-targeted mice[J].Biochem Soc Trans, 2004, 32P (t1) :116-120.

[5] Zhang W, Yancey PG, Su YR, et al.Inactivation of macrophage scavenger receptor class B type I promotes atherosclerotic lesion development in apolipoprotein E-deficient mice [J].Circulation, 2003, 108 (18) :2258-2263.

[6]Krieger M.Charting the fate of the“good cholesterol”:Identifica-tion and characterization of the high-density lipoprotein receptor SR-B1[J].Annu Rev Biochem, 1999, 68:523-558.

THP-1巨噬细胞 篇2

关键词：阿托伐他汀,基质金属蛋白酶-9,CD40,急性冠脉综合征,人单核巨噬细胞

炎症与免疫在动脉粥样硬化 (atherosclerosis, AS) 的发生发展中起重要作用, 炎症因子贯穿动脉粥样硬化的发生发展乃至斑块破裂的全过程[1,2]。在粥样斑块内巨噬细胞、T-淋巴细胞等炎症细胞表达白细胞分化抗原CD40及其配体CD40L, 相互作用可产生一系列免疫炎症反应, 包括促进黏附分子、细胞因子如基质金属蛋白酶-9 (MMP-9) 等物质, 促进AS的慢性炎症过程, 最终导致斑块的破裂, 引起一系列临床综合征[3]。近年来, 应用他汀类药物的大规模临床试验均已证实可减少冠心病临床事件及心血管病死亡率, 且所获得的益处与降胆固醇不成比例, 提示这可能与改善内皮功能、稳定斑块等调脂外作用有关[4]。本研究旨在体外观察他汀类药物对人单核/巨噬细胞 (THP-1细胞) MMP-9的表达是否存在抑制作用及其作用是否与CD40-CD40L信号通路有关, 进一步探讨他汀类药物的非调脂性抗AS作用的机制。

1 材料与方法

1.1 材料 人单核细胞系THP-1细胞购自中国科学院上海细胞中心;RPMI 1640培养基、无脂蛋白血清、胰蛋白酶、 Trizo试剂为Gibco公司产品;胎牛血清购自杭州四季青公司;反转录聚合酶链反应 (RT-PCR) 试剂盒及引物为大连宝生物有限公司产品;PCR Marker由上海申工生物公司合成;佛波酯、焦磷酸二乙酯 (DEPC) 、琼脂糖为美国Sigma公司; 羊抗人MMP-9抗体、兔抗羊IgG为Sant Cruz公司产品;阿托伐他汀 (立普妥) 由辉瑞公司惠赠;其他试剂均为进口或国产分析纯。

1.2 THP-细胞培养 THP-1细胞悬浮生长于含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中, 在37 ℃、5%CO2条件下培养。待细胞生长至接近融合时传代。2代~3代后THP-1细胞用于实验。诱导转化时加入佛波酯100 nmol/L, 诱导分化48 h, 以促使单核细胞分化成巨噬细胞。圆型、悬浮的单核细胞变为贴壁生长, 形态不规则, 伸处伪足, 即为巨噬细胞。调节细胞密度2×109/L用于实验, 加处理因素作用24 h, 收集细胞开始试验。

1.3 实验分组 对照组培养液不加干扰因素;氧化低密度脂蛋白 (ox-LDL, 80 mg/L) 组加入培养的THP-1细胞中孵育12 h;ox-LDL加不同浓度的阿托伐他汀组先加入不同浓度的阿托伐他汀 (1.250 μmol/L、2.50 μmol/L、5.00 μmol/L) 作用1 h, 再加入ox-LDL (80 mg/L) 与THP-1巨噬细胞共同孵育24 h。按Trizol试剂盒说明书提取总RNA, 将RNA在-70 ℃保存待测。然后进行反转录-聚合链反应。反应完毕后经紫外凝胶图像分析仪进行数据分析, 以目的基因mRNA扩增产物的光密度值与内参照GAPDH mRNA扩增产物的光密度值的比值作为mRNA表达的相对值。引物序列见表1。采用夹心酶联免疫吸附测定法 (ELISA) 测定MMP-9。

1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0统计软件进行单因素方差分析, 数据以均数±标准差$(\overline{x}\pm s)$表示, 多重比较采用SNK法, P<0.05为有统计学意义。

2 结 果

2.1 阿托伐他汀对THP-1细胞CD40 mRNA

表达的影响 当阿托伐他汀浓度分别为1.25 μmol/L、2.50 μmol/L、5.00 μmol/L时, THP-1细胞CD40 mRNA 的表达见图1。与对照组比较, ox-LDL组使CD40 mRNA的表达显著升高 (P<0.05) ;与ox-LDL组相比, 阿托伐他汀浓度为1.25 μmol/L、2.50 μmol/L、5.00 μmol/L时分别下调14%、43%、57%CD40 mRNA的表达 (P<0.05) 。详见表2。

注:1为对照组;2为ox-LDL组;3、4、5分别为ox-LDL加阿托伐他汀1.25 μmol/L、2.50 μmol/L、5.00 μmol/L组

2.2 阿托伐他汀对THP-1细胞MMP-9 mRNA

表达的影响 不同浓度阿托伐他汀作用24 h后THP-1细胞MMP-9 mRNA的表达见图2。与对照组比较, ox-LDL组使MMP-9 mRNA的表达显著升高 (P<0.05) ;与ox-LDL组相比, 阿托伐他汀浓度为1.25 μmol/L、2.50 μmol/L、5.00 μmol/L时分别下调21%、41%、64% MMP-9mRNA的表达 (P<0.05) 。详见表3。

注:1为对照组;2为ox-LDL组;3、4、5 分别为ox-LDL加阿托伐他汀浓度1.25 μmol/L、2.50 μmol/L、5.00 μmol/L组

2.3 阿托伐他汀对THP-1细胞MMP-9蛋白表达的影响

阿托伐他汀抑制THP-1细胞MMP-9蛋白表达, 其作用亦呈浓度依赖性。培养基上清液MMP-9的浓度随阿托伐他汀的浓度增加而减低。阿托伐他汀浓度1.25 μmol/L、2.50 μmol/L和5.00 μmol/L 时分别降低19%、43%和61%。详见表4。

3 讨 论

THP-1巨噬细胞 篇3

1 材料与方法

1.1 药物与试剂

鬼箭羽药材购自衡阳市药材公司, 经专家鉴定为卫矛科植物的嫩枝和翅状附属物。取鬼箭羽药材500 g加6倍水, 2 h/次, 煎煮2次, 浓缩至3.0 g/ml生药, 浸膏待用;THP-1细胞购自中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所细胞中心;RPMI-1640培养基购自Gibco公司;佛波酯购自sigma公司;TNF-α酶联免疫吸附试剂盒、IL-6酶联免疫吸附试剂盒均购自美国R&D公司。

1.2 脂蛋白的分离、氧化修饰及鉴定

健康人血浆购自衡阳市中心血站, 采用超速离心法制备低密度脂蛋 (LDL) , 然后用含10μmol/L Cu SO4的PBS溶液将LDL氧化修饰成oxLDL, 4℃保存。

1.3 细胞培养及分组

THP-1细胞用含有10%小牛血清RPMI 1640培养液, 在37℃、5%CO2培养箱中静置培养。培养基中加HEPES 10 mmol/L, 在每次实验前用160 nmol/L佛波酯处理24 h, 使其诱导分化成巨噬细胞。实验共分五组: (1) 对照组, 不加ox-LDL处理; (2) ox-LDL组50 mg/L ox-LDL处理24 h组; (3) 鬼箭羽1组:3μg/ml鬼箭羽和50 mg/L oxLDL共处理24 h组; (4) 鬼箭羽2组:10μg/ml鬼箭羽和50 mg/L ox-LDL共处理24 h组; (5) 鬼箭羽3组:30μg/ml鬼箭羽和50 mg/L ox-LDL共处理24 h组。

1.4 统计学方法

采用SPSS15.0统计软件对该研究的数据进行统计学的分析, 计量资料以均数±标准差 (±s) 表示, 组间比较采用方差分析和t检验, P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 不同浓度鬼箭羽对ox-LDL作用下THP-1巨噬细胞活力的影响, 见表1。

注:与对照组比较, aP<0.01;与ox-LDL组比较, bP<0.01

与对照组比较, ox-LDL组细胞活力明显受损 (P<0.01) , 不同浓度鬼箭羽组细胞活力较ox-LDL组有不同程度的增强, 且呈现浓度依赖性。

2.2 鬼箭羽对ox-LDL作用下THP-1巨噬细胞炎症因子分泌的影响

注:1为对照组;2为ox-LDL组;3为ox-LDL+3μg/ml鬼箭羽组;4为ox-LDL+10μg/ml鬼箭羽组;5为ox-LDL+30μg/ml鬼箭羽组。与对照组比较, aP<0.05;与ox-LDL组比较, bP<0.05

THP-1细胞经50 mg/L ox-LDL处理2 h后, 细胞培养上清液中的TNF-α、IL-6浓度增加, 与对照组比较差异有统计学意义 (P<0.05) , 而ox-LDL+不同浓度 (3、10、30μg/ml) 的鬼箭羽处理2 h后, TNF-α、IL-6浓度显著降低, 与oxLDL组比较差异均有统计学意义 (P<0.05) , 且呈现出浓度依赖性。

3 讨论

动脉硬化是一种炎症性疾病, 炎症反应贯穿了动脉硬化发生发展的全过程, 大量的炎症因子参与到这个过程中, 对动脉硬化的形成与发展发挥了重要的作用。TNF-α是一种由单核细胞分泌的炎症与免疫调节因子, 在AS病变中的表达明显增高, 提示其与AS及CHD的发生、发展密切相关。IL-6是一种多功能的前炎症因子, 能加速肝脏合成C-反应蛋白, 促使血管内皮细胞的活化和血管平滑肌细胞的增生。IL-6可促进血管内皮细胞粘附分子的表达与释放, 促使巨噬细胞对LDL的摄取, 促进动脉硬化的形成[1]。

鬼箭羽以卫矛之名始载于《神农本草经》, 现有的研究证明, 鬼箭羽提取物主要通过降低急性缺血模型大鼠血清CK、CK-MB、AST、LDH和MDA水平, 提高大鼠血清SOD、NO含量来改善心肌细胞耐缺氧的能力, 从而发挥防治心肌缺血的作用;另外鬼箭羽的提取物能够显著降低糖尿病小鼠的空腹血糖, 从而改善糖尿病小鼠由于血糖增高所引起的糖代谢紊乱。韩国学者研究报道, 鬼箭羽通过抑制IKKβ来减弱LPS诱导的RAW264.7细胞NF-κB的活化, 从而抑制i NOS的表达和NO的产生, 发挥抗炎的作用。鬼箭羽的提取物还具有清除活性氧自由基的作用, 可防止生物膜的脂质过氧化。在本研究中, 首次发现鬼箭羽能够显著降低50 mg/L ox-LDL诱发的THP-1源性巨噬细胞TNF-α、IL-6的释放, 并提高ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞细胞活力, 呈现浓度依赖性, 结果提示鬼箭羽可能通过抑制炎症因子的释放来发挥抗动脉粥样硬化的作用。至于鬼箭羽究竟通过何种信号通路发挥其抗炎作用, 以及鬼箭羽对于巨噬细胞胆固醇转运的影响, 作者将在后续的试验中继续研究。

摘要：目的 探讨鬼箭羽水溶成分对氧化型低密度脂蛋白 (ox-LDL) 诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症因子表达的影响。方法 将THP-1源性巨噬细胞分为五个组, 即对照组、ox-LDL组、鬼箭羽1组、鬼箭羽2组、鬼箭羽3组。MTT (噻唑蓝) 比色法检测THP-1细胞活力, 酶联免疫吸附法 (ELISA) 检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α (TNF-α) 、白细胞介素6 (IL-6) 的含量。结果 鬼箭羽能明显改善oxLDL作用下THP-1源性巨噬细胞的细胞活力, 抑制ox-LDL诱导的细胞炎症因子分泌, 并且呈现浓度依赖性, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。结论 鬼箭羽水溶成分抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症因子表达有关。

关键词：鬼箭羽,氧化型低密度脂蛋白,THP-1源性巨噬细胞,细胞活力,炎症因子

参考文献

THP-1巨噬细胞 篇4

1 材料和方法

1.1 材料

RPMI 1640培养基为GIBCO公司产品;ox-LDL购自羽易生物科技有限公司;胎牛血清购自杭州四季青科技有限公司;MDA、SOD、T-AOC和GSH-PX试剂盒为南京建成生物工程研究所产品;牛血清白蛋白、佛波酯(PMA)、油红O等均为Sigma公司产品;实验过程中所用水均为去离子三蒸水;枸杞多糖由宁夏乐杞生物科技公司提供。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养及分组

THP-1单核细胞用含100 U/ml青霉素、100μg/ml链霉素及10%小牛血清的RPMI 1640培养液,于37℃、5%CO2的培养箱中静置培养。将培养好的细胞用PBS洗涤3次,每次于37℃水浴箱中震荡10 min,然后以含0.2%BSA的无胎牛血清RPMI1640培养液稀释细胞密度为1×106/ml继续培养,并分为三组:(1)对照组:对细胞没有任何干预;(2)ox-LDL+PMA组:培养细胞中加入终浓度为0.5mg/L的PMA、100mg/L的ox-LDL;(3)枸杞多糖低剂量组:培养细胞中加入终浓度为0.5mg/L的PMA,100mg/L的ox-LDL,500mg/L枸杞多糖;(3)枸杞多糖低剂量组:培养细胞中加入终浓度为0.5mg/L的PMA,100mg/L的ox-LDL,500mg/L枸杞多糖;(4)枸杞多糖高剂量组:培养细胞中加入终浓度为0.5mg/L的PMA,100mg/L的ox-LDL,1000mg/L枸杞多糖;各组继续培养72h。

1.2.2 油红O染色和泡沫细胞的半定量

用橡皮刮子刮下培养的细胞,低速离心制成细胞悬液,涂于干净的被有1%明胶的玻片上,自然晾干,2.5%戊二醛固定3 h,然后2.5%重铬酸钾处理16 h,新鲜配制的1%油红O染色20 min,苏木素染2 min,1%HCl分色及返蓝,各步骤间均用双蒸水冲洗干净。显微镜下观察,细胞内脂质呈红色、细胞核呈蓝色的为泡沫细胞。400倍光镜下非重复计数100个细胞,计出泡沫细胞所占的百分比。

1.2.3 细胞内脂质过氧化产物含量的分析

用橡皮刮子刮下培养的细胞,PBS洗涤3次,重悬于0.5 ml磷酸钠缓冲液(pH 7.4,0.1 M)中,超声波裂解细胞1 min,按试剂盒要求用亚硝酸盐生成抑制法测定血浆的SOD、T-AOC活性[4],按夏奕明等方法测定GSH-PX活性[5],按TBA法测定MDA的含量[6]。

1.2.4 细胞内胆固醇积聚的分析

按文献[7]用荧光分光光度法测定各样品的胆固醇浓度,测定游离胆固醇时,反应液中省去胆固醇酯酶,胆固醇酯的含量用总胆固醇与游离胆固醇的差值获得。

1.3 统计学方法

各样本测值以平均值±标准差表示。定量资料行方差分析(ANOVA)及多样本均数的两两比较(LSD);定性资料行χ2检验分析。以统计学软件SPSS 11.0进行分析,P<0.05为差异有显著性。

2 结果

2.1 枸杞多糖对泡沫细胞中SOD、MDA、T-AOC及GSH-Px活性的影响

对照组和枸杞多糖低、高剂量组中MDA含量明显低于ox-LDL+PMA组,而SOD、T-AOC、GSH-Px活性又显著高于ox-LDL+PMA组(P<0.05),提示LBP在泡沫细胞形成中能显著增强抗氧化能力。

2.2 枸杞多糖对单核细胞源性泡沫细胞数量变化的影响

THP-1单核细胞与ox-LDL培养过程中,当被PMA激活时,油红O染色阳性的细胞显著高于对照组,达到3倍以上。但是当培养过程中加入枸杞多糖时,泡沫细胞的油红O染色阳性率降低,表明枸杞多糖有抑制了细胞泡沫化形成的作用,见表2。

注:*P<0.05 vs对照组;#P<0.05;##P<0.05 vs ox-LDL+PMA组

2.3 枸杞多糖对单核细胞源性泡沫细胞内胆固醇积聚的影响

经ox-LDL处理后单核细胞内TC、FC、CE含量均增加(P<0.05),枸杞多糖低、高剂量组可减少ox-LDL+PMA所致的单核细胞内TC、FC、CE的含量的增加(P<0.05),见表3。

注:*P<0.05;**P<0.001 vs对照组;#P<0.05;##P<0.05 vs ox-LDL+PMA组

3 讨论

动脉粥样硬化(AS)是心血管疾病的一个重要的特征性基础病变泡沫细胞的形成是AS发生的早期事件和关键环节[8],在AS过程中大部分泡沫细胞来自血液循环中迁移进入的巨噬细胞,中后期病变则以泡沫细胞为主要病理细胞成分,脂质在活性氧分子的作用下LDL被氧化形成ox-LDL,ox-LDL可被单核/巨噬细胞表面的清道夫受体摄取,促使细胞内胆固醇酯的积聚,最终导致泡沫细胞的形成[9]。本实验发现LBP可抑制或减轻泡沫细胞对胆固醇酯的积聚,同时,LBP可显著增加泡沫细胞的脂质过氧化程度,显著提高泡沫细胞中SOD、T-AOC、GSH-Px的活性,降低MDA的含量,维持机体氧化及抗氧化系统的动态平衡,从而使泡沫细胞免受自由基的侵害,表明LBP具有抗动脉粥样硬化的作用。

本文的初步研究表明,LBP具有抗动脉粥样硬化作用且其机制涉及降低血脂、清除自由基、提高机体抗氧化应激能力等,但其机制有待进一步研究。

摘要：目的 探讨枸杞多糖对THP-1单核细胞源性泡沫细胞形成和胆固醇脂流出的影响。方法 将THP-1单核细胞与氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)、佛波酯(PMA)、枸杞多糖共同培养,油红O染色检测泡沫细胞的形成,同时测定泡沫细胞中SOD、GSH-Px、T-AOC活性和MDA的含量,并检测枸杞多糖对单核细胞源性泡沫细胞胆固醇脂流出的影响,观察枸杞多糖对THP-1单核细胞泡沫化形成的影响及可能机制。结果 枸杞多糖抑制了ox-LDL和PMA激活的THP-1单核细胞内脂质过氧化产物的产生、胆固醇脂的积聚和泡沫细胞的形成。结论 枸杞多糖对泡沫细胞的形成和胆固醇脂流出有一定的抑制作用,其抗氧化作用是重要机制之一。

关键词：枸杞多糖,泡沫细胞,动脉粥样硬化

参考文献

[1]耿长山,丁雁.枸杞子有效成分LBP对小鼠T淋巴细胞的免疫增强作用[J].军事医学科学院院刊,1987,8(6):476~480.

[2]曹广文,杜平.枸杞多糖和白细胞介素-2对12月龄小鼠两种LAK细胞抗肿瘤活性调节作用[J].中华微生物学和免疫学杂志,1992,12(6):390~392.

[3]孙涛,郑竹虚.氧化应激与心血管疾病[J].四川医学,2006,27(6):580~582.

[4]王俊学,王国俊.苦参碱及氧化苦参碱的药理作用及临床应用[J].肝脏,2000,l5(2):116~117.

[5]Zeng X K,Dai J,Wang X,et al.Homocysteine mediated expression and secretion of monocyte chemoattractant protein-1and interleukin-8in human monocytes[J].Circulation Research,2003,9(3):311~321.

[6]王宗仁,郑瑾,马爱玲,等.中药芪丹通脉片对动脉粥样硬化大鼠主动脉内皮细胞及PAI21表达影响[J].第四军医大学学报,2004,25(14):1290~1293.

[7]蒋佩,严鹏科,莫中成,等.促进细胞内胆固醇流出抑制单核细胞源性泡沫细胞凋亡[J].中国病理生理杂志,2005,21(6):1041~1045.

[8]Plenz GAP.Differential Modulation of Caveolin-1Expression in Cells of the Vasculature by Statins[J].Circulation,2004,109(35):e7~e8.