组织型纤溶酶原激活物

组织型纤溶酶原激活物（精选7篇）

组织型纤溶酶原激活物 篇1

急性脑梗死是一种由脑动脉供血不足而引起的脑组织坏死疾病类型,多发于中老年群体,该症发病较为突然,常于睡眠或安静休息时突发,头痛眩晕、耳鸣、恶心呕吐、吞咽困难、口齿不清为其主要临床症状,严重者甚至发生昏迷不醒[1]。近几年,随着我国老龄化进程的不断加剧及生活饮食习惯的改变,急性脑梗死发病率呈不断上升趋势,严重威胁中老年群体身体健康及生活质量[2]。目前,早期静脉溶栓是治疗急性脑梗死的有效方法,对降低该病病死率与致残率、提高患者生存质量具有重要作用。有研究指出,重组组织型纤溶酶原激活剂用于急性脑梗死静脉溶栓治疗的疗效显著,可有效改善脑梗死患者神经功能,提高预后[3]。为证实上述观点,本研究特选取本院收治的70例急性脑梗死患者进行分组研究,并取得显著效果,现将研究结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 纳入与排除标准(1)纳入标准:符合急性脑梗死相关诊断标准者[4];发病时间未超过4.5h,且存在持续神经功能缺损超过1h;经CT检查未发生颅内出血;知情并自愿加入本研究者。(2)排除标准:纳入研究前近3个月内发生心肌梗死或脑卒中、头颅外伤;凝血功能异常者;合并有心、肾、肝等重要脏器功能严重异常者;48h内已使用肝素等抗凝治疗者。

1.2 一般资料

选取2015年1月—2016年2月巩义市人民医院收治的急性脑梗死患者70例,随机分为观察组与对照组,各35例。观察组中男20例,女15例;年龄44~83岁,平均年龄(62.3±5.6)岁;病程1.5~4.5h,平均病程(3.1±0.3)h。对照组中男21例,女14例;年龄45~84岁,平均年龄(63.2±5.6)岁;病程1.0~4.0h,平均病程(3.0±0.2)h。两组患者性别、年龄、病程比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。

1.3 治疗方法

1.3.1 对照组

对照组患者行常规治疗:给予阿司匹林抗凝、神经保护、改善脑细胞代谢、甘露醇脱水等治疗;制定不良反应防治措施预案。

1.3.2 观察组

观察组患者在对照组治疗基础上给予重组组织型纤溶酶原激活剂(德国勃林格殷格翰公司,批准文号S20110051)静脉溶栓治疗,最大剂量为90mg,标准使用剂量为0.9mg/kg,重组组织型纤溶酶原激活剂剂量的10%静脉注射,剩余90%使用0.9%氯化钠溶液稀释至0.2mg/ml后进行静脉滴注,于60min内滴注完毕。

1.4 观察指标

比较两组患者治疗前后神经功能、日常生活能力、不良反应发生情况。采用美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)[5]对两组治疗前、治疗1、7、14d后神经功能缺损程度进行评估,得分越高表明神经功能缺损越严重;采用Barthel指数(BI)[6]对两组患者治疗前、治疗后7、14、30d日常生活活动的功能状态进行评估,得分越高表明患者生活能力改善越为显著。

1.5 统计学方法

采用SPSS 18.0统计软件进行数据处理,计量资料以±s表示,采用t检验;计数资料采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者治疗前后NIHSS评分比较

治疗前两组患者NIHSS评分比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗1、7、14d观察组患者NIHSS评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05,见表1)。

2.2 两组患者治疗前后BI评分比较

治疗前两组患者BI评分比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后7、14、30d观察组患者BI评分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05,见表2)。

2.3 两组患者不良反应发生率比较两组患者不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05,见表3)。

3 讨论

急性脑梗死是多发于中老年人的心脑血管疾病类型,主要发病机制为脑部提供血液的动脉出现粥样硬化并形成血栓,致使血管腔狭窄甚至发生阻塞,进而导致脑供血不足,发生急性脑梗死,该病具有较高的致残率及病死率,严重影响患者生命健康及生存质量[7]。挽救缺血半暗带受损神经元、恢复缺血区血流灌注促使受损神经功能得到改善是有效治疗急性脑梗死的关键与目的。

有研究表明,尽早消除血栓、恢复再灌注可有效避免脑组织发生不可逆性坏死,进而提高患者生存质量,因此患者越早接触溶栓治疗,其临床疗效越为显著,且发生出血的风险越低[8]。临床上多采用阿替普酶对急性脑梗死患者进行静脉溶栓治疗,用药后可有效促使血栓溶解,疏通阻塞血管,治疗效果显著。也有研究表明,重组组织型纤溶酶原激活剂作为一种糖蛋白,与纤维蛋白具有较高亲和性,并通过与纤维蛋白结合后发挥其活性作用,诱导纤溶酶原转化为纤溶酶,对阻塞血块进行有效溶解的同时,对整个凝血系统各组分的系统性作用较为轻微,不会发生出血倾向,因此重组组织型纤溶酶原激活剂用于静脉溶栓治疗急性脑梗死患者可取得显著疗效[9,10]。

本研究结果显示,治疗前两组患者NIHSS评分、BI评分比较,无统计学差异;治疗1、7、14d观察组患者NIHSS评分低于对照组,治疗后7、14、30d观察组患者BI评分高于对照组,有统计学差异,表明重组组织型纤溶酶原激活物可有效改善急性脑梗死患者神经功能及日常生活能力,对提高患者治疗效果及预后质量具有显著作用。两组患者不良反应发生率比较,无统计学差异,表明采用重组组织型纤溶酶原激活物静脉溶栓治疗急性脑梗死,不良反应发生率较低,具有较高的安全性。

综上所述,重组组织型纤溶酶原激活物静脉溶栓治疗急性脑梗死疗效显著,能有效改善患者神经缺损功能及日常生活能力,且不会增加不良反应发生率,安全有效,具有一定临床价值,值得推广应用。

参考文献

[1]杨卓群.改进急救护理路径对急性脑梗死患者溶栓治疗效果的影响[J].齐齐哈尔医学院学报,2015,36(33):5120-5121.

[2]李君,屈泽暖,王献勇.r-t PA静脉溶栓治疗急性脑梗死的临床效果观察[J].中国临床实用医学,2016,34(1):80-81.

[3]张小倩,李瞿,何志义.影响急性脑梗死静脉rt-PA溶栓早期疗效的相关因素分析[J].实用药物与临床,2015,18(11):1335-1338.

[4]张志华.重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)静脉溶栓治疗急性脑梗死24例临床观察[J].中国医药指南,2015,13(34):106-107.

[5]郭舜源,陈波,史宗杰,等.伴心房颤动的急性脑梗死患者静脉溶栓的疗效[J].中华急诊医学杂志,2014,23(12):1314-1318.

[6]陈春燕,孙晓江,陆学胜.依达拉奉对于急性脑梗死溶栓患者MMP-9水平及出血性转化的影响[J].中国老年学杂志,2015,32(13):3788-3791.

[7]玄丽慧,张娴娴,易琼,等.低剂量重组组织型纤溶酶原激活剂静脉溶栓治疗急性脑梗死有效性及安全性研究[J].中华老年心脑血管病杂志,2013,15(10):1093-1095.

[8]景坚,徐亮,李军.重组组织型纤溶酶原激活剂对伴心房颤动急性脑梗死患者的疗效[J].中华老年心脑血管病杂志,2014,16(3):227-229.

[9]姚东陂,张锦丽,李玲,等.卒中单元联合重组组织型纤溶酶原激活剂静脉溶栓治疗脑梗死效果观察[J].解放军医药杂志,2013,25(4):25-27.

[10]陈春燕,陆学胜,孙晓江.重组组织型纤溶酶原激活物静脉溶栓治疗急性脑梗死的疗效[J].中国老年学杂志,2014,31(21):6053-6055.

组织型纤溶酶原激活物 篇2

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014年9月~2015年9月在湖州市中心医院确诊为急性肺损伤的患者44例。其中男32例,年龄16~74岁,平均(41.24±5.88)岁;女12例,年龄17~72岁,平均(40.83±5.65)岁。患者入组后根据电脑自动生成的随机数字表,从任意一行开始读取,入组患者读取数字后除以组别数,余数为1分为对照组,余数为0分为实验组,每组22例。对照组男15例,女7例;平均年龄(41.74±6.32)岁;呼吸道感染13例,车祸伤7例,挤压伤2例。实验组男17例,女5例;平均年龄(42.01±5.48)岁;呼吸道感染13例,车祸伤7例,挤压伤2例。两组性别组成、年龄分布和原发病等一般临床资料比较差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。诊断标准:诊断依据中华医学会呼吸病学分会制订的《急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征的诊断标准(草案)》[6]中关于急性肺损伤的诊断标准,并经X胸片及实验室检查确诊。排除标准:①既往无肺部疾病;②妊娠及哺乳期妇女;③临床资料不全。

1.2 方法

对照组给予吸氧、呼吸循环支持、抗感染、维持水电解质平衡、限制晶体输入、治疗原发病等常规对症治疗;实验组患者在对照组治疗的基础上给予注射用乌司他丁(商品名:天普洛安,购自广东天普生化医药股份有限公司,国药准字H19990134)10万U溶于100 m L的0.9%氯化钠溶液中,2次/d,静滴。两组患者均连续治疗5 d。

1.3 观察指标

1.3.1 血清指标采集

治疗前后,分别采集空腹12 h后静脉血5 m L,置于含有2%EDTA的抗凝管中,3000 r/min离心15 min,分离血清,采用临床检验科全自动酶标仪(奥地利anthos2010),严格按照试剂盒说明书进行操作,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中PAI-1、t-PA、AT-Ⅲ的水平。

1.3.2 血气分析

治疗前后,分别采集股动脉血2 m L,血气分析采用雷度ABL80血气分析仪,对PO2及氧合指数进行检测。

1.4 统计学方法

采用SPSS 17.0统计软件进行统计分析,计量资料采用均数±标准差(±s)表示,组间比较采用t检验,计数资料以百分率(%)表示,组间比较采用χ2检验,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组治疗前后血清PAI-1、t-PA水平比较

与治疗前比较,两组患者治疗后血清PAI-1、tPA水平明显降低(P<0.05),且实验组患者治疗后血清PAI-1、t-PA水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

注:与本组治疗前比较,*P<0.05;与对照组治疗后比较,#P<0.05;PAI-1:血清纤溶酶原激活物抑制剂-1;t-PA:组织型纤溶酶原激活剂

2.2 两组治疗前后血清AT-Ⅲ水平比较

与治疗前比较,两组患者治疗后血清AT-Ⅲ水平均明显升高(P<0.05),且实验组患者治疗后血清AT-Ⅲ水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

注:与本组治疗前比较,*P<0.05;与对照组治疗后比较,#P<0.05;AT-Ⅲ:抗凝血酶原Ⅲ

2.3 两组治疗前后血气分析结果比较

与治疗前比较,两组患者治疗后血气分析结果明显得到改善(P<0.05),且实验组患者治疗后动脉血PO2及氧合指数明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

注:与本组治疗前比较,*P<0.05;与对照组治疗后比较,#P<0.05;PO2:动脉血氧分压

3 讨论

急性肺损伤是由多种损伤原因导致的肺损害,其发展至严重阶段(氧合指数<200 g/L)被称为急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)。近年来,随着我国重症医学的不断发展,急性肺损伤的发病率及病死率不断上升,给患者带来很大的痛苦。急性肺损伤是一种渗出性病变,主要表现为进行性低氧血症和呼吸窘迫,其发生与严重感染、烧伤、严重创伤、急性重症胰腺炎等肺内外致病因素有关[7],急性肺损伤/ARDS的发病机制复杂,推测其因上述因素引发炎性反应介导的肺损伤,促进细胞程序性凋亡,使得凝血/纤溶系统失衡,氧化应激反应增强,导致肺泡液体清除异常的病理生理改变,出现肺水肿,引起气/血流比例失调和顽固的低氧血症[8]。PAI-1和t-PA的动态平衡决定了人体纤溶系统中的纤维活性。急性肺损伤患者纤溶功能检查发现t-PA与PAI-1抗原水平均增高[9],严重抑制t-PA活性,纤溶活性下降导致纤维蛋白在肺血管内外沉积,促进了肺透明膜和肺纤维化形成。因此监测t-PA、PAI的浓度有助于了解机体纤溶状况和病情进展。乌司他丁是提取自成年男性尿液中的糖蛋白,对于胰蛋白酶、粒细胞弹性蛋白酶、透明质酸酶、纤溶酶等均有较强的抑制作用,还能够抑制溶酶体释放,保持溶酶体膜稳定[10]。药理研究显示,乌司他丁能够减少氧自由基产生,降低促炎性细胞因子的生成释放,调节凝血功能和机体的免疫功能,抑制多种水解酶活性[11],在临床上主要应用于急性胰腺炎、急性弥散性血管内凝血、全身感染、全身炎症反应综合征等疾病的治疗。有研究认为[12],乌司他丁能有效治疗急性肺损伤,并且能缩短住院时间,显著改善预后效果,从而降低患者的病死率。所以,本研究通过观察患者治疗前后血清PAI-1、t-PA、AT-Ⅲ、动脉血PO2及氧合指数的变化,探讨乌司他丁对急性肺损伤患者的治疗效果及作用机制。

本研究结果发现,实验组患者的血清PAI-1、tPA水平与对照组比较明显降低(P<0.05),提示乌司他丁能够改善患者的纤溶系统功能,减轻病情。凝血/纤溶系统失衡是导致微血栓形成引起急性肺损伤发病的原因之一。PAI-1和t-PA是机体纤溶系统的关键物质,t-PA是一种丝氨酸蛋白酶,由血管内皮细胞产生并分泌,能够将纤溶酶原激活成为纤溶酶,启动纤溶系统,降低血液中纤维蛋白含量,发挥保持血液流动状态的作用[13];PAI-1是t-PA的抑制剂,来自于肺上皮细胞以及成纤维细胞,能够抑制t-PA活性,维持纤溶系统平衡[14]。当急性肺损伤发生时,肺组织血液处于高凝状态,影响纤溶系统功能,易形成肺血管微血栓,加重病情。曾有报道认为,急性肺损伤早期表现为PAI-1、t-PA升高,可以作为评估病情严重程度的监测指标[15]。

AT-Ⅲ是凝血酶及凝血相关因子蛋白酶的抑制剂,能够通过精氨酸-丝氨酸肽键与之结合,使酶形成复合物而灭活,发挥抗凝血作用[16]。AT-Ⅲ不仅具有抗凝作用,还具有抗炎作用。急性肺损伤发生时,血液处于高凝状态,大量消耗AT-Ⅲ抗凝,使得AT-Ⅲ水平下降[17]。有研究表明,急性肺损伤患者存在AT-Ⅲ水平的获得性缺乏,其水平下降程度与预后密切相关[18,19,20,21],表明乌司他丁能够提高患者抗凝系统功能,防止微小血栓形成,改善预后。

血气分析是临床用于诊断患者是否处于酸碱平衡失衡以及缺氧和缺氧程度等首选检验手段,在急性呼吸衰竭、外科手术、急慢性肺损伤等疾病发生发展过程中起至关重要的作用[22]。PO2正常值为10.64~13.3 k Pa(即80~100 mm Hg,1 mm Hg=0.133 k Pa),当患者机体PO2水平降低至60 mm Hg说明患者存在呼吸衰竭[23],<30 mm Hg时处于生命危险状态。氧合指数(Pa O2/Fi O2)参考值为400~500 mm Hg,其水平降低需要加大吸入氧浓度,水平<300 mm Hg提示肺呼吸功能障碍,因此PO2及氧合指数水平对急性肺损伤的治疗具有指导作用[24]。血气分析结果显示,与对照组比较,实验组患者动脉血的PO2及氧合指数明显升高(P<0.05),说明乌司他丁能够提高患者的治疗效果,这与乌司他丁改善凝血纤溶系统功能、抑制病情进展的作用密切相关。

本研究通过对44例急性肺损伤患者血清PAI-1、t-PA、AT-Ⅲ、动脉血PO2及氧合指数的检测结果进行分析,显示乌司他丁能够显著降低急性肺损伤患者血清PAI-1、t-PA水平,提高血清AT-Ⅲ水平、动脉血PO2及氧合指数,改善凝血纤溶系统功能,提高临床治疗效果,对临床有指导意义。接下来的研究将着重探讨乌司他丁治疗急性肺损伤的分子机制,进一步论证和分析本研究的结果。

摘要：目的 探讨乌司他丁对急性肺损伤患者血清纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)的影响。方法 收集湖州市中心医院2014年9月2015年9月收治的急性肺损伤患者44例,将其随机分为对照组和实验组,每组各22例。对照组患者给予常规对症治疗,实验组在对照组的基础上给予乌司他丁治疗,治疗结束后,对所有患者的PAI-1、t-PA、抗凝血酶原Ⅲ(AT-Ⅲ)、动脉血氧分压(PO2)及氧合指数进行检测。结果治疗后,与对照组比较,实验组血清PAI-1、t-PA水平显著降低(P<0.05),血清AT-Ⅲ水平显著升高(P<0.05),动脉PO2及氧合指数显著上升(P<0.05)。结论 乌司他丁能够显著降低急性肺损伤患者血清PAI-1、tPA水平,提高血清AT-Ⅲ水平、动脉血PO2及氧合指数,改善凝血纤溶系统功能,提高治疗效果,对临床有指导意义。

组织型纤溶酶原激活物 篇3

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 动物

纯种德国牧羊犬14只,雄性,体质35～40 kg。

1.1.2 主要试剂

质粒pSecTag 2B、感受态细胞E.Coli JM109、中国仓鼠卵巢细胞系由亚能生物技术(深圳)有限公司提供;限制性内切酶Hind III、Kpn I、BamHI和Xho I购自宝生物工程有限公司;VentDNA聚合酶和T4 DNA连接酶购自New England Biolabs公司;羊抗人t PA多克隆抗体、兔抗羊多克隆抗体、牛血清白蛋白、t PA ELISA检测试剂盒由晶美生物工程有限公司提供;全氟丙烷气体(Halocarbon-218)由广东佛山捷锐公司提供。

1.1.3 主要仪器

超声波发生器系宁波新芝生物科技有限公司产品;治疗性超声仪(US-700)系德国产品。

1.2 方法

1.2.1 基因质粒的构建和表达

根据3个EST序列及t PA基因序列设计3对引物将t PA的3段序列从3个EST克隆质粒中扩增出来,并且在3对引物末端分别引入酶切位点。分别用含有氨苄青霉素和氯霉素的LB培养基扩增培养3个EST克隆菌株,提取3个EST克隆质粒作为PCR扩增模板并扩增3条t PA片断,回收扩增产物并测序鉴定。质粒pSec Tag 2B和3条t PA片断t PA-1、t PA-2、t PA-3分别经Hind III和Xho I、Hind III和Kpn I、Kpn I和BamHI、BamHI和Xho I双酶切消化,经QIAGEN PCR Product Purification Kit纯化,T4 DNA连接酶14℃连接过夜,将连接产物转化E.Coli JM109感受态细胞,经含氨苄青霉素LB平板挑出抗性菌落,PCR检测重组质粒,提取重组质粒测序鉴定(如图1)。重组质粒经磷酸钙共沉淀法转染至CHO细胞,用间接免疫荧光法检测t PA表达。

1.2.2 一步法制备载基因白蛋白纳米粒

100 mg牛血清白蛋白加入5 m L双蒸水溶解,用0.1 NHCl调整pH值至5.5。将已构建的1 mg t PA质粒加入上述白蛋白溶液中,孵育30 min后在超声场的存在下缓慢滴入乙醇(乙醇∶水=2∶1),直至溶液出现乳白色并逐滴滴入0.5%的戊二醛溶液30μL,适当搅拌,室温下静置2 h。减压使残余的乙醇挥发,所得溶液17 000 r/min离心30 min以除去游离的白蛋白和多余的交联剂。沉淀用双蒸水重悬并用超声波(条件:180 W,固定频率20 kHz,30 s)分散成乳胶状,4℃下储存备用。取部分制备扫描电镜标本观察纳米粒形态、做包封率检测和凝胶阻滞实验,并用Zetasizer 3000仪测定粒径大小和表面Zeta电位。

1.2.3 氧-氟丙烷蔗糖白蛋白超声微泡的制备方法

无菌制备含10%蔗糖的5%(g/m)牛血清白蛋白液体10 m L;并置于有盖50 m L塑料离心管中,依次用氧气和氟碳气体饱和液体(流量:6 m L/min),约10 min,超声波发生器处理1 min(条件:180 W,固定频率20 kHz);将制备的微泡4℃下密闭保存备用。取部分显微镜观察微泡形态、测量大小并计数;Zetasizer 3000仪测定粒径大小和表面Zeta电位。

1.2.4 载基因白蛋白纳米微泡靶向超声造影剂制备

将一次制备的白蛋白纳米粒(含1 mg质粒)加至5m L白蛋白微泡中,加入50%戊二醛10μL溶液4℃下孵育2 h进行交联(戊二醛溶液终浓度为0.1%)。用生理盐水洗涤、离心、分层,离心速度200 r/min,1min,取上浮泡沫悬液即得载基因的白蛋白纳米微泡靶向超声造影剂(载体)。调整微泡浓度使10 m L靶向造影剂中含微泡0.8×109～1.8×109/m L,基因质粒含量为2 mg。4℃下保存备用。

1.2.5 载t PA基因白蛋白纳米微泡靶向超声治疗方法

实验组(n=7)于三尖瓣膜置换术后胸壁表面二维超声观察心脏显影。经静脉注入载t PA基因白蛋白纳米微泡剂10 m L,并观察到心脏显影明显增强后经胸前壁正对心脏前壁右室流出道局部超声照射30 min,并观察到将微泡击碎(二维超声观察),超声频率1 MHz,强度1.5 W/cm2。对照组(n=7)于常规体外循环下行三尖瓣机械瓣膜置换术后静脉输入10m L生理盐水并超声照射(条件同前)。术后给予抗生素预防伤口感染,常规饮食,各组均无抗凝治疗。动物于术前和观察结束后(4周)分别取血液检测D-二聚体含量并用ELISA法检测血t PA含量。

1.2.6 病理和免疫组织化学观察

观察期4周结束或动物死亡后,取其心脏,沿血流方向打开心腔观察血栓形成情况;取心房和心室肌壁尤其是左室前壁右室流出道局部靶向治疗处心肌组织,10%多聚甲醛固定,常规石蜡包埋,做HE染色和免疫组织化学间接法染色,观察病理改变、检测t PA抗原表达和转基因效果。免疫组织化学一抗为羊抗人t PA多克隆抗体;二抗为兔抗羊多克隆抗体,操作方法按试剂说明书进行,阳性反应细胞为细胞浆内黄褐色颗粒状沉淀。另取肝脏、肾脏和肺脏用上述方法检测,观察基因药物的组织分布和毒性。

1.3 统计学方法

用SPSS 13.0软件进行统计学分析,数据进行正态性检验后以均数±标准差表示,采用两组独立样本t检验,P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 p SecTag2B-tPA重组质粒的构建与表达

转染CHO细胞后免疫荧光反应结果如图2所示,加入荧光素标记t PA抗体后被转染的CHO细胞胞浆呈强阳性反应;未加荧光素标记t PA抗体被转染的CHO细胞胞浆呈阴性反应;一抗用荧光素标记β-catenin抗体取代后反应为阴性。

2.2 载tPA基因白蛋白纳米粒粒径、形态和包封率的测定

扫描电镜结果显示,白蛋白纳米粒球形、大小较均匀且分散良好。Zetasizer 3000仪粒度分析显示,白蛋白粒径大小呈正态分布,平均粒径为132.0 nm,最大粒径为152.4 nm,最小粒径为49.1 nm。多分散指数平均0.33(图3)。表面Zeta平均(31.32±41.42)m V。样品的包封率用紫外分光光度计进行检测,测量加入的总的质粒DNA含量。将包裹基因后的纳米溶液离心并测量上清液中游离质粒DNA,包封率(%)=(W总-W游)/W总×100%(W总:总的加入量;W游:上清液中质粒DNA测得量)。测定结果显示包封率平均为73.58%,符合实验要求。

2.3 凝胶阻滞分析和DNaseⅠ保护实验

0.9%琼脂糖凝胶电泳结果如图4所示,第1加样孔为分子量标记(Marker)。第2加样孔为质粒DNA,未经纳米粒包裹,可见明显条带。第3加样孔为经白蛋白纳米包裹后的质粒DNA,完全阻滞于加样孔中未能移动(DNA:白蛋白为1/100)。第4加样孔为质粒DNA经白蛋白纳米粒包裹并用DNaseⅠ消化后降解,电泳亦未见条带显现,表明纳米粒对质粒DNA具有保护作用。

2.4 超声微泡形态的物理特征

普通光学显微镜显示制备的糖蛋白超声微泡圆球形囊泡状,大小较一致,分散良好,直径最小0.9μm,最大9.8μm,95%以上微泡直径2～5μm,可满足微血管超声造影需求。含10%蔗糖的白蛋白微泡经4℃保存30 d形态学上未发生改变,且对热稳定性良好(40℃,30 min)。与白蛋白纳米粒交联后上述性状亦未发生明显变化(图5)。

2.5 超声显像和靶向治疗

实验组经静脉注入载t PA基因白蛋白纳米微泡剂10 m L,超声显像心脏靶组织,观察到与注射前相比相关脏器显影明显增强。经超声波治疗30 min后组织显像回复至注射前水平。对照组未见治疗前后超声影像变化(图6)。

2.6 术后各组动物状况

术后各组动物均观察28 d(4周)。对照组7只,其中1只于术后19 d死亡。观察期死亡动物的主要症状为食欲差、体重明显减轻、咳痰和呼吸困难等,心功能衰竭是主要死亡原因。实验组7只,存活时间均达到观察期4周,动物的一般情况良好,术后1周左右出现轻度食欲差和体重减轻,经治疗和调理后恢复正常。

2.7 心脏和其他脏器的病理学改变

大体:各组死亡和观察结束后处死的动物心脏心包膜局部均可见轻度黏连。沿血流方向切开心脏,见三尖瓣机械瓣膜缝合良好,无瓣周漏现象。对照组包括观察第19天死亡1只在内共7只动物机械瓣膜心房和心室表面有不同程度的血栓形成,血栓形成率为100%,死亡动物心脏血栓形成最为明显,从瓣环与瓣叶交界处开始沿瓣膜房室两面向瓣中央发展,阻碍瓣膜活动,并向上发展填充右房;向下发展,沿右室至肺动脉。实验组经靶向转染t PA质粒,7只动物心脏瓣膜表面及心腔内均未见血栓形成(图7、8),4周血栓抑制率100%,各组心肌肉眼上无明显改变。镜下:对照组心腔和瓣膜表面血栓均为混合性血栓,偶伴有轻度感染可见有炎症浸润和局部血栓溶解。死亡动物见轻度肺水肿和间质性肺炎性改变;肝、肾等有不同程度淤血,肝细胞周围型脂肪变性,肾近曲小管上皮细胞轻度水变性。实验组心脏和相应脏器未见明显异常。两组经超声处理的心肌组织心肌细胞体积轻度增大,细胞浆深染,细胞核增大。部分细胞胞浆可见空泡;其余未见明显异常。

2.8 心肌tPA抗原表达

超声靶向转染后4周可见局部心肌细胞表达t PA抗原阳性,这些心肌细胞呈散在分布,体积轻度增大,胞浆横纹减少,呈棕褐色细颗粒状,部分间质细胞和小血管壁可见弱的阳性反应(图9)。

2.9 血D-二聚体和tPA含量

靶向转基因前和术后4周血D-二聚体和t PA含量检测结果如附表所示,实验组于转基因后4周血液2项反应纤溶活性的指标均较转基因前、对照组术前和术后显著增高;实验组术前与对照组术前和术后相比差异均无统计学意义。

注:覮与对照组术前、术后及实验组术前比较,P<0.01

3 讨论

t PA是纤溶系统主要激活因子,是机体重要的抗凝成分。它由血管内皮细胞合成,在各种刺激尤其是纤维蛋白的作用下释放入血,作用于血浆素原使其转换为血浆素促进纤维蛋白降解[2]。人重组t PA作为生物制剂已应用于冠心病急性心肌梗死、脑栓死、肺梗死等的溶栓治疗[6]并取得了显著疗效,但由于价格昂贵未能广泛应用。这些研究成果使笔者设想构建真核t PA基因表达质粒并选择适当的载体将其转导机体细胞获得有效和持续t PA的产生,以达到长期抗凝和防止血栓形成的目标。笔者实验体系里,以3个EST克隆质粒为模板分别扩增3条t PA片断并将之克隆于质粒pSecTag 2B中构建成pSecTag 2B-t PA重组质粒,扩增后体外转染CHO细胞获得了t PA的高效表达。

白蛋白是近年来研究较多的一种纳米材料,它的生物相容性好,生物可降解,无免疫源性和细胞毒性,基因转移效率较高。它有精确的纳米结构、表面与内部可携带分子的特性,使之成为一种很好的DNA导入细胞的载体[7]。白蛋白纳米粒携载基因的方式包括表面静电吸附和物理包裹两种方式,具体在结合过程中采取哪种方式取决于载基因纳米粒的制备方法[8]。一步法是在白蛋白形成纳米粒前先与基因质粒混合,这种方法将基因物理包裹于白蛋白纳米粒中。其主要优点是携带被转基因量较高;药物缓释和转基因时间较长;具有较好的酶保护和防止体内DNA酶降解作用;容易设计成靶向载体,应用于体内研究或制备成纳米药物应用更具优越性。二步法:先制备白蛋白纳米粒并调整介质酸碱度使之表面含有较多正电荷,借助静电吸附原理将富含负电荷的质粒DNA吸附于表面携带。主要特点是制备过程温和简易,不易破坏DNA;纳米粒径均一,容易调整粒径大小,但载药量相对小,不释控,无酶保护作用,设计靶向载体较为复杂。笔者实验采取一步法制备载t PA基因质粒白蛋白纳米粒,扫描电镜和粒度分析结果显示,粒径132.0 nm左右,大小较均匀,分散性好;包封率73.58%;凝胶电泳分析显示具有较好的DNA酶保护作用,符合实验要求。

基因导入体内的方式多为将目的基因直接注射于靶组织,如心血管疾病多采用心肌内直接注射或心导管注入质粒DNA或腺病毒载体。笔者实验室曾构建了高表达t PA基因质粒并用外科涤纶缝线作为载体制备了基因缝线,直接缝合于心肌组织[9];用壳聚糖做原料制备了纳米t PA基因载体并直接注射于心肌均获得t PA的有效表达[10]。但这种方法存在有创性,限制其临床应用。自超声造影剂应用以来,在利用微泡增强超声显像的同时,还发现微泡具有靶向运载作用,可以靶向传输基因或药物,达到治疗疾病的目的,并可能建立一种安全、有效、无创的超声介导靶向传输系统[11]。超声靶向治疗的基本原理:声场内的超声波破坏微泡造影剂后,其产生的空化或机械效应可使靶细胞膜轻度可逆性损害和通透性增加,并致直径≤7 mm的微血管破裂,内皮细胞间隙增宽。靶基因可通过破裂的微血管和内皮细胞间隙到达组织细胞内。同时,利用超声波在特定时间和空间内击碎靶组织内的微泡,从而使细胞对基因或药物的摄入增强,达到在靶器官定向治疗的目的并降低了携带基因或药物的全身不良反应和毒性[12]。

目前,以白蛋白作为液膜的微泡研究较多,它具有无毒性、易于制备等优点,缺点是稳定性较差。有学者在制备超声微泡过程中在白蛋白液体中加入一定量(40%)蔗糖,结果发现微泡的热稳定性增强且存放时间明显延长,从未含蔗糖的16 d延长至含40%蔗糖的半年以上[12]。笔者实验体系中,发现40%的蔗糖白蛋白液体黏滞性强,制备时超声较困难且所需能量较大,容易导致微泡液温度增高;另外,高含量蔗糖的输入机体难以接受。为此,实验选择10%的蔗糖构成糖蛋白,不但避免上述情况发生且微泡的稳定性良好。惰性气体氟碳是目前最常用的制备超声微泡时使用的气体。有学者发现含全氟碳的微泡如果同时加入少量氧气会进一步增加微泡在血液中的稳定性,取得更强的心肌显影效果。根据超声微泡这些特性和靶向原理,实验使用蛋白交联剂戊二醛将构建的白蛋白纳米t PA基因质粒连接到制备的蔗糖白蛋白超声微泡表面,在超声场的存在下,将t PA基因质粒靶向导入心肌组织,获得了t PA基因的有效表达并有效预防了狗三尖瓣机械瓣膜置换术血栓的形成。在获得心肌靶组织表达t PA增强的同时,检测到血t PA含量增加以及D-二聚体含量增高,反应了t PA抗凝活性明显增强。

笔者的初步研究结果发现,采用超声触发破坏微泡造影剂的方式,可使载有基因质粒的白蛋白纳米粒靶向定位释放和靶基因的表达增强,这种方法是一种简易有效的靶向纳米基因转移新技术。虽然该方法使目的基因在体内实现高效、稳定、可调控的表达还有待进一步深入研究,但随着分子生物学和超声医学技术的不断发展,将为人类疾病防治的研究提供一种新的途径。

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组织型纤溶酶原激活物 篇4

本研究通过检测Hpa与uPA在子宫内膜腺癌组织中的表达情况及其与子宫内膜腺癌的临床病理特征的关系,探讨其与子宫内膜癌的发生、发展和转移的关系。

1 材料与方法

1.1 研究对象

标本随机选取中南大学湘雅医院2003～2007年妇科住院手术经病理证实的子宫内膜腺癌46例,患者术前均未进行任何化学药物治疗及放射治疗。患者年龄32～72岁(中位年龄52岁)。根据2000年国际妇科联盟(FIGO)手术病理-分期标准:Ⅰ期24例,Ⅱ期13例,Ⅲ期9例,Ⅲ期患者中淋巴结转移6例;病理分级G125例、G210例、G311例。另取因其他妇科疾病而手术切除或刮宫的子宫内膜标本54例作为对照组,其中正常子宫内膜16例,18例增生过长内膜,不典型增生子宫内膜20例。上述标本均经10%福尔马林固定,常规石蜡包埋,5μm连续切片,分别做HE和SP免疫组织化学染色。

1.2 实验试剂

即用型兔抗人多克隆抗体Hpa(BA1630)、即用型兔抗人多克隆抗体uPA(BA0405)、鼠抗兔SP二抗试剂盒购自武汉博士德生物技术有限公司;EDTA缓冲修复液购自北京中杉金桥生物技术公司。

1.3 研究方法

1.3.1 实验方法

玻片经清洁处理后再经多聚赖氨酸处理,于无尘处干燥或烤干备用。所有标本经10%的福尔马林液固定,常规石蜡包埋连续切片,厚4μm,其中1张行HE染色复查诊断,1张备用,其余2张分别用于Hpa和uPA免疫组化研究,贴附于经多聚赖氨酸处理的载玻片上,防至烤箱60℃干烤4 h,取出进行SP法染色,中性树胶封片后显微镜下观察切片,摄像。

1.3.2 设立对照

本实验免疫组化组织切片检测结果,阳性对照参考武汉博士德生物技术有限公司提供的已知阳性切片,阴性空白对照以PBS缓冲液代替一抗。

1.4 结果判定

Hpa和uPA染色阳性为胞浆呈清晰棕黄色颗粒。切片在400倍显微镜下选定10个视野,计算阳性细胞的百分数。表达阳性判定:胞浆染色阳性的细胞百分数小于5为阴性,5%～24%为(+),25%～50%为(++),大于50%为(+++)。

1.5 统计学分析

统计学分析均采用SPSS 13.0软件处理,计数资料采用χ2检验或组间χ2检验,P<0.05为差异有显著性。等级资料采用秩和检验。

2 结果

2.1 乙酰肝素酶(Hpa)的检测

子宫内膜腺癌组织中Hpa主要表达在腺体细胞的胞浆和胞膜,在不典型增生和正常子宫内膜的表达部位在腺体的胞浆中,偶见间质着色。在子宫内膜癌组织中Hpa的表达阳性率(54%)明显高于正常内膜(13%)、增生过长内膜(17%)和不典型增生内膜(25%)。Hpa的表达在子宫内膜癌组与正常内膜、增生过长及不典型增生组之间差异存在显著性(P<0.05),而在正常内膜与增生过长、不典型增生组之间差异无显著性(P>0.05)。46例子宫内膜癌中,Hpa阳性表达率与临床分期、癌灶肌层浸润深度和淋巴结转移密切相关(P<0.05),与病理分级无明显相关性(P>0.05)。见表1和图1～4。

注:覮采用等级秩和检验法

2.2 尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)的检测

uPA阳性细胞在各种子宫内膜组织中主要染色部位为细胞浆,血管内皮细胞、肿瘤基质细胞也有表达。结果显示uPA在子宫内膜癌组织中的表达(57%)明显高于正常内膜(13%),差异有显著性(P<0.005),在子宫内膜癌与增生过长内膜、不典型增生内膜间亦差异有显著性(P<0.05),而在正常内膜与增生过长、不典型增生组之间差异无显著性(P>0.05)。uPA与子宫内膜腺癌临床分期、癌灶肌层浸润深度、淋巴结转移密切相关(P<0.05),与病理分级无明显相关性(P>0.05)。见表2。

注:覮采用等级秩和检验法

2.3 乙酰肝素酶和尿激酶型纤溶酶原激活物在子宫内膜癌中的相关性

46例子宫内膜癌组织中有Hpa阳性病例中uPA阳性率为84%(21/25),其中有21例Hpa和uPA均为阳性表达,16例同时为阴性表达。配对四格表χ2检验显示:Hpa和uPA在子宫内膜癌中的表达无明显相关性(P>0.05)。见表2和图5～7。

注:χ2=1.000,P>0.05。

3 讨论

子宫内膜癌以来源于子宫内膜腺体的腺癌最常见,具有侵犯肌层和远处蔓延的潜能。癌症成为致命的疾病,不仅在于癌细胞的生长失去控制,而且也因其具有的侵蚀和转移能力。瘤细胞要发生转移,就必须同时破坏构成细胞外基质(ECM)的两种主要成分:结构蛋白和蛋白多糖。硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPG)作为细胞外基质(ECM)、基底膜(BM)和血管壁的主要成分之一,其降解对于肿瘤的侵袭和转移具有重要的促进作用。近来发现的乙酰肝素酶(Hpa)是一种能裂解ECM内蛋白多糖主要成分HSPG的内源性糖苷内切酶,研究表明抑制Hpa后可明显抑制肿瘤细胞的扩散与转移[2,3]。VLODAVSKY等[4]认为乙酰肝素酶通过直接、间接两种方式发挥促血管生成作用:(1)直接作用,乙酰肝素酶可直接作用于内皮细胞以生芽方式促进血管生成;(2)间接作用,通过血管内皮细胞释放HS-bFGF复合物和产生HS降解片段以促进bFGF活性来间接诱导血管生成反应。最近NADIR等[5]发现乙酰肝素酶在凝血系统的调节中也具有一定的作用。

本研究采用免疫组化的方法检测正常子宫内膜、增生过长子宫内膜、不典型增生子宫内膜及子宫内膜腺癌中Hpa的表达,结果显示,Hpa在四组中均有不同程度的表达。Hpa在子宫内膜癌组织中的表达以强阳性为主,其阳性表达率明显高于正常子宫内膜、增生过长内膜以及不典型增生子宫内膜中的表达,差异有显著性。提示Hpa可能与子宫内膜癌的发生有关。本研究Hpa与子宫内膜癌临床病理参数的相关性分析发现,随着肿瘤浸润深度的增加,Hpa在癌组织中表达的阳性率明显增高。结果表明Hpa的表达与患者的临床分期﹑肿瘤浸润深度﹑淋巴结转移密切相关,与WATANABE等[6]研究结果相符,提示Hpa可能在内膜癌的浸润和转移中起作用。国内外文献报道[7,8,9,10]乙酰肝素酶的高表达与多种恶性肿瘤的侵袭转移有关,如:胃癌、肺癌、卵巢癌和膀胱癌等。

本研究结果显示Hpa的表达与患者的病理分化程度无关,与临床上肿瘤的转移和分化程度有关的观点相矛盾,也与WATANABE等[6]研究结果不符,考虑可能一方面是子宫内膜癌的发生﹑发展是多基因﹑多阶段和多过程的相互作用的结果;另一方面本试验样本量偏少,实验方法和试剂的不同,在一定程度上均会影响实验的结果。

本实验uPA与子宫内膜癌临床病理因素的相关性分析发现,uPA的表达与患者的临床分期、肿瘤浸润深度和淋巴结转移密切相关。Ⅲ期患者内膜癌组织中uPA阳性率明显高于Ⅰ、Ⅱ期患者,差异有显著性(P<0.05)。这与MEMARZADEHS等[11]和GERSTEIN等[12]研究结果相一致。uPA激活纤溶酶降解细胞外基质中纤维连接蛋白、层黏蛋白和胶原等成分从而促进肿瘤的浸润转移[13]。最新研究MOREAU等[14]认为uPA系统在肿瘤调控中可能存在一个β-catenin(β链接素)调控机制,从而加强了癌细胞的侵袭能力。

Hpa和uPA是两种不同的酶类,均与肿瘤的侵袭和转移密切相关,两者都是通过降解细胞外基质成分促进肿瘤的转移,Hpa同时又可以通过降解细胞外基质导致结合在细胞外基质上的uPA的释放有关[15]。本实验两者相关性结果显示两者在内膜癌组织中的表达均升高,但无明显相关性,可能由于两者受多种因素的共同调节,其相关性和相互作用机制还有待于进一步的研究。

组织型纤溶酶原激活物 篇5

冠状动脉粥样硬化被认为是多因素共同作用的结果, 一种因素认为是中小型的损伤导致的平滑肌细胞增生和动脉粥样硬化[1];另一种因素认为是血栓纤维化或血栓形成后, 在某些促凝的情况下导致斑块破裂, 引起动脉狭窄[2]。目前有研究证实[3]纤溶酶原激活物抑制物 (PAI-1) 可以抑制尿激酶型纤溶酶原激活物 (uPA) 和组织型纤溶酶原激活物 (tPA) , 成为纤溶系统的重要抑制因子, 因此PAI-1与冠状动脉粥样硬化的相关性研究成为人们关注的焦点, 现就两者的相关性研究的进展情况进行综述。

1 PAI-1的基本特性

PAI-1是一种单链糖蛋白, 由379个氨基酸残基组成。其基因位于人类7号染色体上大小为12.3 kb。以活性态、底物态和潜在活性态3种形态存在。潜在活性态是大多PAI-1的体内存在形态, PAI-1在体内分布广泛, 脾脏和肝脏中的PAI-1的含量最高, 心脏和脑中PAI-1的含量较低, 血浆中PAI-1的含量极少, 只有3%~5%, 由于PAI-1具有清晨活性最高, 夜间活性最低的特点, 因此有人认为心梗易在清晨发生可能与此有关[4]。

2 PAI-1生物学特性

凝血系统和纤溶系统的动态平衡是血液正常流动的关键, 纤溶系统有纤溶酶、纤溶酶抑制物、PA、纤溶酶原和PAI等组成, 而PAI-1是纤溶系统调节活性的主要因子, 属于丝氨酸蛋白酶抑制物。PAI-1是纤溶酶原激活剂的抑制剂, 它的主要作用是促进血栓的形成, PAI-1和tPA形成复合物, 阻止纤溶酶原激活, 从而使纤维蛋白的降解减少, 发挥其促进血栓形成的生理作用。因此, 过多的PAI-1的释放将会导致血栓的发生, 许多研究表明, PAI-1是血栓发生的重要机制[5,6]。

3 PAI-1与冠状动脉粥样硬化的相关性

许多研究表明, PAI-1的含量与冠状动脉粥样硬化的发生和发展如高血压、肥胖、糖尿病等传统危险因素呈正相关。有研究证实, 冠心病患者的血浆PAI-1水平呈升高表现。PAI-1在冠心病合并高胰岛素血症患者冠状动脉粥样硬化的进展中也起着相当重要的作用[7]。有人对162例发生心肌梗塞前的患者进行研究, 也发现PAI-1的水平是升高的。因此认为[8], PAI-1可作为心梗第1次发作的独立危险因素。目前, 流行病学的研究亦表明血浆中高水平PAI-1可作为冠心病的独立危险因素。有报道, 发生粥样硬化的动脉管壁上PAI-1表达量增加, 且PAI-1表达量与动脉粥样硬化的严重程度具有明显相关性[9]。有人运用放射显影技术测定动脉粥样硬化中PAI-1的表达水平, 研究发现, 重度动脉粥样硬化PAI-1mRNA的水平较轻中度明显提高, 且差异有统计学意义[10]。另外, 据研究资料表明, 低纤溶水平在健康人有增加冠状动脉粥样硬化的风险, 血管壁中PAI-1mRNA主要在新生的内膜细胞表达增加, 说明PAI-1的基因表达增加主要与细胞增殖情况相关, 疾病早期, PAI-1主要在细胞外基质和内膜平滑肌细胞, 中期主要在纤维帽内平滑肌细胞, 所有的结果均表明, PAI-1与动脉粥样硬化的严重程度呈正相关[11,12,13]。

4 PAI-1的致病机制

目前认为PAI-1导致冠状动脉粥样硬化的机制主要有以下几个途径: (1) 纤溶系统的失衡:PAI-1是纤溶酶原激活物的抑制物, PAI-1的表达水平和活性的增加, 就会导致tPA的表达水平下降, 引起纤溶蛋白分解活性下降, 导致纤维蛋白沉积于血管壁, 长此以往, 微血栓的不断大量聚集, 最终引起冠状动脉粥样硬化的发生[14]。 (2) 管壁纤维化:由于PAI-1的持续高水平, 机体就会处于持续低纤溶, 成纤维细胞的入侵导致基质蛋白和胶原沉积, 最终使管壁纤维化和僵硬, 促进动脉粥样硬化的发生[15]。 (3) 基质沉积:高水平的PAI-1会使纤溶活性降低, 基质蛋白酶无法启动, 导致基质大量沉积, 内膜增厚, 引起管腔狭窄。

组织型纤溶酶原激活物 篇6

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集我院2007年6月—2008年6月已确诊为代谢综合征患者96例, 男40例, 女56例, 年龄40岁～75岁 (55.3岁±7.6岁) 。代谢综合征诊断标准:根据2005年国际糖尿病联盟 (IDF) 代谢综合征诊断标准。并根据其合并的代谢紊乱数目不同分为3组。MS1组31例, 男13例, 女18例, 为中心性肥胖加2种代谢紊乱;MS2组35例, 男15例, 女20例, 为中心性肥胖加3种代谢紊乱;MS3组30例, 男12例, 女18例, 为中心性肥胖加4种代谢紊乱。另外, 入选正常对照 (NC) 组50名, 男20名, 女30名, 年龄38岁～72岁 (52.6岁±7.9岁) , 即无代谢紊乱的同期我院体检的健康人作为对照。均排除急性心肌梗死、风湿、结核、感冒、肿瘤等急慢性炎症, 心、肝、肾功能及血常规均在正常范围内, 且最近1个月内未使用胰岛素。2周内未服用影响纤溶系统的药物及避孕药。各组患者的年龄、性别方面无统计学意义。

1.2 研究方法

临床资料收集:所有对象准确测量身高、体重、腰围;静息15 min后坐位测量右肱动脉血压, 连测两次取均值。标本采集:受试者均于清晨空腹8 h以上抽前臂静脉血10 mL, 分离血清, 取6 mL置于-70 ℃冰箱保存以备测定空腹胰岛素 (FINS) 、PAI-1;另4 mL用以测定空腹血糖 (FBG) 、血脂;胰岛素抵抗指数 (HOMA - IR) = (FBG×FINS) /22.5。

1.3 统计学处理

采用SPSS 13.0统计分析软件包。计量资料以均数±标准差$(\overline{x}\pm s)$表示, 对其中呈偏态分布的数据进行自然对数变换, 符合正态分布后进行统计运算, 两组间均数比较采用 t 检验, 多组间均数的比较采用单因素方差分析, 两两比较采用q检验。PAI-1与其他变量之间的关系采用直线相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 MS组与NC组临床特征比较 (见表1)

与NS组比较, 1) P<0.05, 2) P<0.01。注:SBP为收缩压;DBP为舒张压;TC为总胆固醇;TG为三酰甘油;LDL-C为低密度脂蛋白胆固醇;HDL-C为高密度脂蛋白胆固醇。

2.2 代谢综合征患者各组间临床特征比较 (见表2)

2.3 PAI-1与其他因素的相关分析

血浆PAI-1 分别与WC、SBP、DBP、TG、LDL-C、FINS、HOMA-IR呈正相关 (r=0.25、0.21、0.33、0.61、0.27、0.245、0.74, P<0.05) , 与HDL-C呈负相关 (r=-0.42, P<0.05) 。

3 讨 论

本研究显示:MS组与NC组比较WC、SBP、TG、LDL-C、PAI-1、HOMA-IR和FINS显著升高, HDL-C显著降低, 表明代谢综合征可通过胰岛素抵抗或中心性肥胖形成血栓前状态。且随着代谢紊乱的严重程度加重, 体内代谢紊乱和纤溶活性降低也发生相应改变。血中胰岛素水平增加, 胰岛素抵抗增强;MS2组和MS3组HOMA-IR较MS1组明显增高。胰岛素可直接作用于血管内皮、肝细胞、血管平滑肌细胞、脂肪细胞, 使PAI-1mRNA转录增加, 促进PAI-1的合成分泌。

血栓前状态是多种因素引起的止血、凝血、抗凝系统失调的一种病理过程。PAI-1对调节机体纤溶酶原活性的平衡起主要作用, 并且PAI-1活性的高低在调节机体纤溶过程中起了关键性作用[2]。血浆PAI-1分别与WC、血压、TG、LDL-C、FINS、HOMA-IR呈正相关, 与HDL-C呈负相关。生理情况下PAI-1由胰岛素、游离脂肪酸、慢性炎性反应刺激产生。高脂血症时脂肪酸与PAI-l基因调控序列的脂肪酸结合位点结合可引起PAI-1基因表达上调。脂肪组织目前已经被认为是炎性介质的来源, 肥大的脂肪细胞会释放出游离脂肪酸和各种细胞因子如肿瘤坏死因子 (TNF-α) 、血管黏附因子、PAI-1、IL-6、C反应蛋白 (CRP) 等。有研究发现肥胖患者体内TNF-α含量增加, 能抑制内皮细胞增生, 使内皮细胞分泌前列环素 (PGI2) 减少, 增加PAI-1活性, 从而导致纤溶活性低下。高血压使血流切应力改变, 长期作用下损伤内皮细胞增加PAI- 1分泌。PAI-1活性升高依赖于高胰岛素血症或胰岛素抵抗状态[3]。胰岛素抵抗影响血凝系统, 增加PAI-1水平, 损害纤溶系统。血浆PAI- 1水平增高引起纤溶活性降低, 导致纤维蛋白清除减少, 引起纤维蛋白沉积;同时, 纤维蛋白与血管壁结合, 刺激平滑肌细胞增殖而促进血栓形成。证实了血栓前状态是代谢综合征的一部分。有研究发现, IR状态、高胰岛素血症和高三酰甘油水平都可以刺激血浆PAI-1活性的升高, 而高血糖对PAI-1无直接作用[4] 。本研究也证实血糖与PAI-1无明显相关性。

MS患者存在胰岛素抵抗和血栓前状态, 使慢性炎症加重, 甚至导致血管病变发生, 因此对MS患者胰岛素抵抗和血栓前状态进行干预, 有助于保护血管内皮, 预防早期动脉硬化。

摘要：目的探讨代谢综合征 (MS) 与纤溶酶原激活物抑制剂1 (PAI-1) 之间的关系。方法将96例MS患者依其代谢紊乱数目分为MS1组、MS2组、MS3组, 并选择同期健康体检者50名作为对照组。比较各组间体重指数 (BMI) 、腰围 (WC) 、收缩压 (SBP) 、舒张压 (DBP) 、三酰甘油 (TG) 、总胆固醇 (TC) 、低密度脂蛋白胆固醇 (LDL-C) 、高密度脂蛋白胆固醇 (HDL-C) 、空腹血糖 (FBG) 、空腹胰岛素 (FINS) 以及PAI-1的变化;用稳态模式胰岛素抵抗指数 (H-IR) 评估胰岛素抵抗。分析PAI-1与各因素之间的相关性。结果随代谢紊乱程度的加重, BMI、WC、SBP、DBP、TG、LDL-C、PAI-1、FINS和HOMA-IR呈增高趋势, HDL-C呈下降趋势;血浆PAI-1分别与WC、SBP、DBP、TG、LDL-C、FINS、H-IR呈正相关 (r分别为0.25、0.21、0.33、0.61、0.27、0.25、0.74, P<0.05) , 与HDL-C呈负相关 (r=-0.42, P<0.05) 。结论MS患者存在IR和血栓前状态, 血栓前状态是代谢综合征相关组分之一。PAI-1参与了代谢综合征血栓前状态的形成。

关键词：溶酶原激活物抑制剂1,代谢综合征,体重指数

参考文献

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组织型纤溶酶原激活物 篇7

1资料与方法

1.1一般资料

将2014年3月-2015年3月我院救治的急性心肌梗死患者26例作为分析组对象,男患者14例,女患者12例,年龄在53-84岁之间,平均年龄在(69.5±3.5)岁,其中有明显诱发因素17例,无明显诱发因素9例。参照组为我院2013年2月-2014年2月救治的急性心肌梗死患者26例,男患者13例,女患者13例,年龄在51-81岁之间,平均年龄在(71.6±2.8)岁,其中有明显诱发因素15例,无明显诱发因素11例。两组患者在性别、年龄、诱发因素等基线资料上无显著差异,无统计学意义(P>0.05)。两组患者在治疗前均对本次研究知情,并签署同意治疗的知情同意书。

1.2诊断及入选、排除标准

1.2.1诊断标准所有患者在入院经检查诊断均符合中华医学会心血管病学分会颁布的《急性心肌梗死诊断和治疗指南》中的标准。

1.2.3入选标准患者胸痛时间>0.5h,使用硝酸甘油治疗后症状未发生改善;经心电图检查提示心肌梗死;患者从发病至入院时间<12h。排除有脑出血病史的患者,排除在3个月内发生心肌梗死病史的患者,排除近期进行过外科手术、有创伤病史的患者,排除有高血压、严重糖尿病、肝病史、肾病史的患者,排除妊娠期、哺乳期的女性患者,排除在现阶段使用抗凝剂的患者,排除感染性心内膜炎患者。

1.3方法

1.3.1治疗方法两组患者在确诊后均进行常规治疗,保证呼吸道通畅,防止出现呼吸道感染、尿路感染,消化道出血、肺栓塞等,保证摄入的营养平衡,防止电解质紊乱,调整血压和血糖。在常规治疗基础上,两组患者在进行溶栓治疗前进行身体检查。两组患者在溶栓前均口服阿司匹林300mg,皮下注射低分子肝素4100U。参照组患者使用尿激酶治疗,取150万U尿激酶(批准文号:国药准字H10920040,生产单位:南京南大药业有限责任公司,10万单位/支)一次性注射。分析组患者使用重组人组织型纤溶酶原激酶(批准文号:国药准字S20070023,生产单位:山东阿华生物药业有限公司,18mg/支),每18mg加20ml生理盐水注射,在注射30分钟后,再次给予上述药物剂量治疗。

1.3.2心功能检查在溶栓前及溶栓7d后为患者进行超声心动图检查,检查项目分别是左室射血分数(LEVF)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、舒张早期充盈峰速度(PE)、舒张早期与舒张晚期充盈峰速度比值(E/A)。

1.4观察指标

比较两组患者在治疗前后做实射血分数、左心室舒张末期内径、舒张早期充盈峰速度、舒张早期与舒张晚期充盈峰速度的比值等心功能指标,观察两组患者治疗后血管再通率及并发症发生情况。

1.5统计学处理

所有数据均采用SPSS17.0软件进行统计分析,计量资料应用平均值±标准差(±s),计量资料采用t检验,组间对比进行分析,计数资料采用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1两组患者溶栓前及溶栓7d后心功能指标比较

两组患者在溶栓前心功能各项指标无差异,不具有统计学意义(P>0.05),但溶栓7d后,分析组患者心功能各项指标变化显著,均高于参照组患者,与参照组患者比较差异显著,具有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2两组患者溶栓后血管再通率及并发症发生率比较

分析组患者的血管再通率明显高于参照组,具有显著差异,具有统计学意义(P<0.05)。而并发症发生率与参照组比较无显著差异,不具有统计学意义(P>0.05)。见表2。

注:两组溶栓前比较,P>0.05,两组溶栓后比较,P<0.05。

3讨论

重组人组织型纤溶酶原激酶是一种糖蛋白,能够激活纤溶酶原,成为纤溶酶,在机体的循环系统中只有与纤维蛋白结合后才能表现出活性,而纤维蛋白具有较高的亲和性[2]。在与纤维蛋白结合后,重组人组织型纤溶酶原激酶被激活,对纤溶酶原产生诱导作用后形成纤溶酶,能够溶解血块[3]。但对机体的凝血系统之产轻微的作用,但不会造成出血情况[4]。而且重组人组织型纤溶酶原激酶不具有抗原性,因此,在临床治疗中可以重复使用[5]。在药物应用的方向上,主要是急性心肌梗塞的溶栓治疗,血流不稳定的急性大面积肺栓塞、急性缺血性脑卒中等,但在应用时要根据患者的病情,针对性的使用药物治疗[6]。本研究针对我院在2014年3月-2015年3月救治的急性心肌梗塞患者26例使用注射用重组人组织型纤溶酶原激酶溶栓治疗的效果进行分析,与2013年2月-2014年2月我院使用尿激酶救治的急性心肌更塞患者26例的治疗效果比较,结果显示使用重组人组织型纤溶酶原激酶溶栓的效果要优于尿激酶。分析结果发现,尿激酶作为临床溶栓治疗的常用药物,是通过内源性纤维蛋白溶解系统起到的作用,使纤溶酶原转变为纤溶酶,促使血栓溶解,但在使用时要考虑患者的体重,大剂量的使用会增加出血,并且对冠状动脉的开通率不能达到理想的效果[7]。重组人组织型纤溶酶原激酶则是将基因技术融入其中,具有抗原性低、安全性高等特点,比尿激酶更具有使用价值。

综上所述,注射用重组人组织型纤溶酶原激酶溶栓是临床治疗中一种安全性较高的方法,具有较高的应用价值。

摘要：目的 分析注射用重组人组织型纤溶酶原激酶溶栓的临床效果。方法 将2014年3月-2015年3月我院救治的急性心肌梗死患者26例作为分析组对象,采用重组人组织型纤溶酶原激酶注射方式治疗,参照组对象为我院2013年2月-2014年2月采用尿激酶救治的急性心肌梗死患者26例,比较两组患者血管再通率、并发症发生率、心功能改善情况。结果 两组患者在溶栓前心功能各项指标及并发症发生率无显著差异(P>0.05),在溶栓7日后,分析组患者心功能指标明显优于参照组,且血管再通率88.5%明显高于参照组61.5%,与参照组比较差异显著(P<0.05),具有统计学意义(P<0.05)。结论 采用重组人组织型纤溶酶原激酶注射方式溶栓,能够提高血管的再通率,减少出血率,降低死亡率,是一种安全有效的溶栓方法。

关键词：注射,重组人组织型,纤溶酶原激酶,溶栓

参考文献

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