血清学调查（共9篇）
血清学调查 篇1
新城疫( Newcastle disease,ND) 是由新城疫病毒引起禽的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病。以高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征,具有很高的发病率和病死率,是危害养禽业的一种主要传染病。世界动物卫生组织( OIE)将其列为A类疫病,1999 年我国农业部发布的动物疫病病种目录中将其列为Ⅰ类疫病。新城疫病毒( NDV) 一直处于不断进化之中,目前已产生了多个不同的基因型,近年来从临床病例中所分离到的NDV毒株绝大多数属于基因Ⅶ型[1,2],而常用ND疫苗株La Sota的基因型为Ⅱ型。作为《国家中长期动物疫病防治规划( 2012—2020》中优先防治的5 种Ⅰ类动物疫病之一,免疫接种仍然是控制新城疫疫情的有效手段之一。为了解信阳地区土鸡群新城疫免疫抗体的水平,笔者对近1 年来采集的土鸡血清样本进行了新城疫抗体HI效价测定,以期为ND的有效防控提供参考。
1 材料与方法
1. 1 样品采集
2013 年3 月份至2014 年5 月份选择信阳部分地区10 个规模化的土鸡养殖场,采集土鸡翅静脉血样,采样比例在0. 5% 左右。
1. 2 诊断试剂和试验用红细胞
鸡新城疫血凝抑制( HI) 试验诊断抗原、阳性血清和阴性血清,购自青岛易邦生物工程有限公司; 试验用红细胞,采集自实验室饲养的未经疫苗免疫的健康鸡,并按照常规程序制备1% 的红细胞悬液。
1. 3 HI效价的判定及统计
HI抗体效价≥5 lb为免疫抗体合格,抗体合格率≥70% 为群体免疫合格。计算各养殖场鸡群抗体效价的平均值和标准差以及抗体的离散度( 变异系数= 标准差与平均值的比值) 。
2 结果
从检测结果来看,10 个鸡场ND免疫抗体群体合格率为100% ,蛋鸡场ND免疫抗体平均水平均高于青年鸡场。10 个鸡场抗体的变异系数值均在10 以上,离散度均相对较高,具体结果见表1。
3 讨论
信阳地区土鸡养殖有两种模式,一种是以养殖公鸡为主,养殖周期为4 ~ 5 个月,然后集中上市销售;另一种是以养殖母鸡为主,搭配少量公鸡,饲养周期较长,以生产销售土鸡蛋为主( 个别饲养环境较好的鸡场可进行种蛋销售或实行自繁自养) ,生产性能下降时母鸡全群淘汰。对于第1 种养殖模式的鸡场,新城疫免疫程序基本采取在7,21,65 日龄左右进行3 次弱毒疫苗免疫; 对于第2 种养殖模式的鸡场,其新城疫免疫程序除上述三次弱毒疫苗免疫外,还会在产蛋前以及300 日龄左右各进行1 次油苗免疫,产蛋期间每隔1. 5 个月左右进行1 次弱毒苗饮水免疫。但由于信阳土鸡养殖基本上是利用山林、竹林、板栗园、茶园等资源进行放养,鸡群在接种疫苗时可能存在漏免情况,且日龄越大漏免情况越严重。另外,养殖规模也主要集中在Ⅲ类( 2 000 ~ 10 000 只) 和Ⅳ类( ≤2 000 只) 高风险禽群,这势必对新城疫的有效防控造成不利影响。
有学者认为: 虽然在高抗体情况下同型疫苗和异型疫苗免疫鸡只死亡保护没有显著差异,但是攻毒后体内的病毒复制和病毒载量差异极显著,达10 ~100 倍,新城疫疫苗株与当前流行株之间的基因型和抗原性差异是引起免疫鸡群感染强毒的主要原因[2,3],并且有研究表明新城疫抗体效价与流行株感染排毒率之间存在明显的负相关[4],这是我国免疫鸡群发生非典型ND的最重要的原因。本次调查结果表明: 虽然大多数鸡场新城疫抗体的水平和整齐度较高,但在鸡群中仍然存在免疫不合格的个体,鸡群仍然存在感染流行强毒( Ⅶ) 和排毒的可能性。因此,做好疫苗接种( 采用Ⅶ流行毒株) 、免疫监测以及建立规范的生物安全措施,对于预防和控制新城疫具有重要的意义。
摘要：为了解信阳地区土鸡群中新城疫免疫抗体的水平,笔者采用HI试验方法对信阳地区10个土鸡养殖场的新城疫免疫抗体水平进行检测。结果表明:10个土鸡养殖场新城疫免疫抗体群体合格率为100%,而抗体离散度均相对较高,其变异系数值均在10%以上。
关键词：信阳地区,土鸡,新城疫,血清学调查,血凝抑制(HI)试验
参考文献
[1]吴延功,丁国义,宋翠平,等.新城疫的流行特点与防控措施[J].中国家禽,2012,34(5):5-7.
[2]刘秀梵,顺林.我国新城疫病毒的分子流行病学及新疫苗研制[J].中国家禽,2010,32(21):1-4.
[3]QIN Z M,TAN L T,XU H Y,et al.Pathotypical characterization and molecular epidemiology of Newcastle disease virus isolates from different hosts in China from 1996 to 2005[J].J Clin Microbiol,2008,46(2):601-611.
[4]刘海侠,胡顺林,彭大新.新城疫病毒HI抗体效价与流行株感染排毒之间的相关性[J].中国家禽,2012,34(10):20-22.
血清学调查 篇2
【关键词】医务人员；乙肝
【中图分类号】R512.62【文献标识码】A【文章编号】1044-5511（2011）11-0413-01
乙肝传播途径复杂，医务人员是感染乙肝病毒(HBV)危险性高的人群［1］,为了解乙型肝炎在医务人员中的感染情况和分布，对2009年820名医务人员的乙肝血清学标志物进行了检测和分析。
1对象和方法
1.1对象:共搜集11家医疗机构自愿检测的医务人员样本820份，其中男性154名，女性666名。年龄在19~67岁。
1.2方法:检测HBV5项血清学指标。采用上海科华生物工程股份有限公司生产的ELISA试剂盒，严格按说明和操作规程进行检测。
1.3统计学方法:采用spss15.0统计分析软件进行分析。
2结果
2.1 性别分布:820名医务人员中，HBsAg携带率为2.4％，其中：男性3.9％，女性2.1％，男性高于女性，差异无统计学意义(X2=1.69，P>0.05)。抗-HBs阳性率为47.8％，其中：男性47.4％，女性47.9％，男性低于女性，差异无统计学意义(X2=0.01，P>0.05)，见表l。
2.2 工龄分布 :"0~"工龄组的HBsAg携带率最低，抗-HBs阳性率最高。不同工龄组的HBsAg携带率差异无统计学意义(X2=4.26，P>0.05)。抗-HBs阳性率差异有统计学意义(X2=41.78，P<0.01)，见表2。
2.3 不同组别分布:临床组HBsAg携带率略高于非临床组，差异无统计学意义(X2=0.03，P>0.05)。临床组抗-HBs阳性率高于非临床组，差异有统计学意义(X2=4.68，P<0.05)，见表3。
2.4 疫苗接种情况 :未接种组HBsAg携带率高于接种或不详组，差异有统计学意义(X2=3.95，P<0.05) 。未接种组抗-HBs阳性率低于接种或不详组，差异有统计学意义(X2=15.59，P<0.01) ，见表4
3讨论
本次调查的医务人员HBsAg携带率为2.4％，低于卫生部2006年全国人群乙肝血清流行病学调查中15～59岁人群乙肝表面抗原携带率8.57％［2］。可能与本次调查为自愿调查有关，部分携带者已知道自己的感染情况而没有参加本次检测；也可能与医务人员的防护和专业知识、自我保护意思增加有关。本次调查医务人员HBsAg携带率于北京市医务人员0.83%［3］相比为高，可能是由于北京市自90年代以来推行医护人员乙肝疫苗免疫接种，而我区实行大力提倡、自愿接种的原则。本次调查显示，未接种组HBsAg携带率高于接种或不详组，抗-HBs阳性率低于接种或不详组，差異均有统计学意义。提示我们应进一步加强医务人员的乙型肝炎免疫预防。注射乙肝疫苗是控制乙肝传染的根本途径，抗-HBs是保护性抗体，它对HBV再次感染具有抵抗力。
分析显示，随着工龄增加HBsAg阳性率递增，临床组HBsAg携带率略高于非临床组，提示医院特别是直接接触病人的临床科室仍然是乙肝感染的高危场所。在抗HBsAb阳性率方面，临床组抗-HBs阳性率高于非临床组，也提示临床组乙肝感染的暴露机会增加。由于本次调查是方便样本，统计学结果只能为下一步研究提供线索，具体还需要结合我区的乙肝免疫策略等开展进一步的探索。
参考文献
［1］中华医学会肝病学分会，中华医学会感染病学分会．慢性乙型肝炎防治指南．巾华流行病学杂志，2006,27(1):79-88．
［2］卫生部．2006年全国人群乙肝血清流行病学调查结果．(2008-04-23)．http://www.Chinacdc.net.cn/n272442/n272530/n3246177/23316.html．
海南地区衣原体病血清学调查 篇3
衣原体病是由鹦鹉热衣原体引起羊、牛等多种动物的传染病.临床病理特征为流产、肺炎、肠炎、多发性关节炎和脑炎。衣原体为革兰氏阴性病原体, 是专性细胞内寄生, 能在鸡胚和易感的脊椎动物细胞内生长繁殖, 在自然界中传播很广泛[1]。主要通过性接触传播, 牛羊衣原体性流产常呈地方性流行, 本病没有明显的季节性, 但以冬春季节较多见, 遇降雪、降温、寒流等气候突变时流产率显著升高。母牛羊怀孕各期都可能发生流产, 以中后期居多。感染牛羊可长期带毒, 但以后直至流产都无明显症状, 对养殖业造成重大危害[2]。为摸清海南州牛羊衣原体病的感染情况, 笔者于2013年6月, 应用间接血凝试验 (IHA) 对海南州地区的牛羊随机抽样进行衣原体病血清学检测, 现将检测结果报告如下:
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 待检血清
无菌采集牛羊静脉血, 分离血清, 4℃冰箱保存, 待检。
1.1.2 诊断试剂
所用衣原体标准抗原, 标准阴性、阳性血清。均由青海省动物疫病预防控制中心提供。
1.1.3 仪器
96孔1100 V型血凝板, 微量振荡器、恒温箱、微量加样器等。
1.2 方法
1.2.1 加稀释液
在96孔1100 V型血凝板上每孔加稀释液75μl。
1.2.2 稀释待检血清
用微量加样器取待检血清25μl, 加入第1排第1孔, 并将塑咀插入孔底, 右手拇指轻压弹簧1~2次混匀 (避免产生过多的气泡) , 从该孔取出25μl移入第2孔, 混匀后取出25μl移入第3孔, 混匀后从第3孔取出25μl丢弃。此时第1排1~3孔待检血清的稀释度 (稀释倍数) 依次为:1:4⑴、1:8⑵、1:16⑶;其他待检血清、标准阴性、阳性血清均按上法稀释。
1.2.3 加抗原
被检血清各孔、阴性对照血清各孔、阳性对照血清各孔、稀释液对照孔均各加衣原体血凝抗原 (充分摇匀, 瓶底应无血球沉淀) 25μl, 血凝板置于微量振荡器上1~2min, 然后将血凝板放在白纸上观察各孔红血球是否混匀, 不出现血球沉淀为合格。盖上玻板, 37℃恒温箱静置1.5~2h判定结果, 也可延至翌日判定。
1.2.4 判定标准
对照孔各孔均成立的前提下, 被检血清1:16孔出现“﹢﹢”以上者为阳性, 1:4孔出现“﹢”者为阴性, 1:4孔“﹢﹢”1:16孔出现“﹢”以下者为可疑。
2 结果
检测牛血清共1202份, 阳性数91份, 阳性率为7.6%;检测羊血清共1732份, 阳性数63份, 阳性率为3.6%。详见表1、表2。
(%)
(%)
3 讨论
(1) 本次衣原体病血清学检测对海南州5县范围内天然放牧牦牛和藏系羊进行随机抽样, 检测结果表明, 海南地区牛羊群中在一定程度上存在衣原体病的感染, 而且牛衣原体病的平均阳性率 (7.6%) 高于羊的平均阳性率 (3.6%) , 尤其是同德县牛的阳性率高达11.4%, 笔者认为这与近几年牛羊频繁流产有一定关系。因此, 建议各级畜牧兽医主管部门和广大牧民群众应从思想上提高认识, 重视该病的防治工作。 (2) 据近几年的监测结果表明, 衣原体病在青海省范围内的牛羊中普遍感染情况。说明随着市场的活跃, 牲畜的流通频繁, 在县与县之间、村与村之间牲畜的流通串换, 导致疫源由外输入的现象存在。 (3) 建议通过血清学方法检测, 及时淘汰检出的阳性畜。对已污染的畜棚、环境用2%~5%来苏儿或20%苛性钠等有效消毒剂进行消毒, 力求从源头上控制和净化此病。 (4) 制定合理有效的防治措施。在衣原体病流行地区, 应制定疫苗免疫计划, 定期进行预防接种;加强牛羊衣原体流行病学调查, 建立疫情监测制度;加强检疫工作力度, 防止疫病传入。
参考文献
[1]陆承平.兽医微生物学[M].北京:中国农业出版社, 2001.378-382.
[2]张绍贤.家畜传染病学[M].北京:中国农业出版社, 1995.146-147.
[3]李世双.门源县西部地区牛羊衣原体病血清学调查[J].青海畜牧兽医杂志.2012. (6) :26.
[4]谢昌元.王光华等.青海省羊衣原体病综合防制措施[J].青海畜牧兽医杂志.2013 (3) :39-40.
血清学调查 篇4
【关键词】儿童；血清蛋白电泳；参考范围
【中图分类号】R446.1【文献标识码】A【文章编号】1044-5511（2011）10-0405-01
血清蛋白电泳已广泛应用于各临床实验室[1]。各室已初步建立了成人血清蛋白电泳的正常参考值，但儿童血清蛋白电泳的正常参考值未见报道，因此我们对延边地区健康儿童的血清蛋白电泳样本进行了检测，为本实验室建立儿童血清蛋白电泳的正常参考值提供了初步的依据，现总结如下。
1.资料与方法
1.1标本来源：1~7岁正常儿童体检者300例，平均年龄3.5岁，其中男144例，女156例，朝族155例、汉族145例无肝、肾、心、肺等主要脏器疾病，无遗传病史。18~50岁正常成人体检者320例，平均年龄34.0岁，其中男150例，女170例。早晨空腹抽取静脉血2ml，并在1h内分离血清，无溶血、黄疸和脂血。
方法：采用法国Sebia公司生产的Hydrasys型全自动电泳仪进行血清蛋白电泳测定，试剂为Sebia公司生產的配套试剂，严格按照仪器使用说明及试剂说明操作。用配套Phoresis rel 4.5.0-Scanner 电脑系统软件扫描得出结果。
统计学方法：采用均值t检验。
2.结.果
2.1健康儿童血清蛋白质区带的检测结果
根据300例健康儿童血清蛋白电泳得到5个蛋白成分的均值、标准差和正常参考值范围，用百分率（%）表示，所得到的值呈正态分布（见表1）。
表1健康儿童血清蛋白质区带的检测结果﹙ｘ±2SD﹚
2.2儿童与成人血清蛋白电泳各组分比较
本实验室所获得的健康儿童血清蛋白电泳正常参考值结果与本室成人血清蛋白电泳正
常参考值比较（见表2），除α1球蛋白检测值P＜0.05外，其他蛋白组分检测值均有显著性差异﹙P＜0.01﹚。
表2儿童与成人血清蛋白电泳各组分比较
2.3朝族与汉族儿童血清蛋白电泳检测结果比较
朝族与汉族儿童血清蛋白电泳正常参考值的比较（见表3），各蛋白组分无显著性差异
（P>0.05）。
表3 朝族与汉族儿童血清蛋白电泳检测结果比较
3讨论
血清蛋白电泳技术可以协助和鉴别诊断各种影响蛋白质生产、代谢、分泌的疾病以及帮助监视疾病的预后和治疗效果。本实验结果显示，儿童组与成人组血清蛋白电泳各组分检测值中，除α1球蛋白检测值P＜0.05外，其他蛋白组分检测值均有显著性差异﹙P＜0.01﹚。（见表2）儿童血清蛋白电泳正常参考值中白蛋白（Alb）的参考值明显高于成人对照组。白蛋白由肝实质细胞合成和分泌，是血清蛋白电泳中含量最多的蛋白质[2]。儿童因生长发育旺盛，处于正氮平衡，需要的蛋白质相对较成人多[3]，因此儿童血清中的白蛋白比成人要多，这与本实验结果相符。α1、α2、β、γ均属球蛋白，其中γ球蛋白的含量最多，γ球蛋白主要是免疫球蛋白，由单核吞噬系统合成[4]。正常儿童由于肝脏和免疫系统尚未发育完全，球蛋白浓度较低，因此正常儿童血清中的γ球蛋白比成人要少，这与本实验结果相符。血清蛋白电泳γ球蛋白区带中显示一种炎症介质就是C-反应蛋白。C-反应蛋白是一种急性时相反应蛋白，可引发对侵入细胞的免疫调理作用和吞噬作用，结合后的复合体具有对补体系统的激活作用，表现为炎症反应[6]。儿童在接触致病菌后常引起炎症反应，因此使用多种抗生素药物，这使儿童体内的蛋白质失衡，从而导致相关疾病的发生。
血清蛋白各组分正常参考值范围可能因地区、种族、检测方法、检测例数不同而有所变化[5]，本实验结果显示朝族与汉族儿童血清蛋白电泳正常参考值比较无显著性差异。（见表3）这可能与一个地区的不同民族之间有着相同的饮食习惯有关，但具体原因有待于进一步研究。各临床实验室的血清蛋白电泳的正常参考值普遍以该地区的健康成人为标准设立，没有专为儿童设立的正常参考值。儿童在疾病初期各蛋白组分降低不明显，这时如果用成人的血清蛋白电泳正常参考值来给儿童诊断疾病，这显然会误导临床儿科医师诊断疾病。因此我们要建立健康儿童的血清蛋白电泳正常参考值，对早期发现儿童蛋白质各组分的变化和儿童疾病的诊断、治疗有重要的临床价值。
参考文献
[1]石新慧,熊瑜琳,等.成人血清蛋白电泳正常参考值建立的初步探讨[J].感染、炎症、修复,2009,10(2):101-125.
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青海省禽白血病血清学调查 篇5
1 材料
1.1 血清样品
在青海省东部农业区的10个主要养鸡县开展调查, 每县抽样50只鸡, 共计抽样500份, 抽样兼顾规模场和散养户。采用翅静脉采血方法采集全血, 室温下静置1 h, 待全血凝固并析出血清后3 000 r/min离心20 min, 取上清液置于1.5 m L离心管中, -20℃保存待检。
1.2 仪器
酶标仪 (型号为MK3) , 美国热电公司产品;洗板机 (型号为Bio-rad1575) , 美国伯腾仪器有限公司产品;恒温培养箱 (型号为SHP-250) , 上海精宏实验设备有限公司产品;振荡器 (型号为WZ-2A) , 江苏金坛市恒丰仪器制造有限公司产品;eppendorf移液器 (5μL、50μL、200μL、1 000μL) , 德国艾本德股份公司产品。
1.3 试剂
禽白血病病毒抗原检测ELISA试剂盒 (批号为14-AK676) , 购自美国IDEXX公司。
2 方法
2.1 检测方法
采用ELISA法对血清样品进行禽白血病病毒p27抗原检测, 操作严格按试剂盒使用说明书进行。具体操作如下:1) 分别取100μL被检血清和阴、阳性对照样品, 加入已包被p27抗体的ELISA反应板中, 每份被检血清各加1孔, 阴、阳性对照各加2孔, 封板, 25℃孵育60 min;2) 弃去各孔液体, 用去离子水洗涤板孔 (350μL/孔) , 重复4次, 最后一次将液体拍干;3) 每孔加100μL酶标抗体, 封板, 25℃孵育60 min, 弃去各孔液体, 用去离子水洗涤板孔 (350μL/孔) , 重复4次, 最后1次将液体拍干;4) 每孔加100μL TMB底物液, 封板, 25℃孵育15 min, 每孔加100μL终止液终止反应;5) 酶标仪测各孔650 nm波长吸光值 (OD650值) 。
2.2 结果判定
阳性对照平均值 (PCX) 减去阴性对照平均值 (NCX) >0.2, NCX≤0.15试验有效。被检样品抗原的相对含量用样品与阳性对照比值 (S/P) 表示, 如S/P≤2.0, 样品判为阴性, 如S/P值>2.0判为阳性。
3 结果与分析
经检测, 500份鸡血清样品中检出禽白血病p27抗原阳性样品71份, 总阳性率为14.20%。其中, 规模场检测308份, 阳性50份, 阳性率16.23%, 散养户检测192份, 阳性21份, 阳性率10.94%。除湟中县未检出阳性样品外, 其余9个县都有阳性样品检出, 阳性率最高的是乐都县和西宁市郊, 均为26.00%, 具体检测结果见表1。
4 分析与讨论
对青海省10个主要养鸡县鸡群的ALV感染情况进行了监测, 结果显示青海省鸡群中ALV的感染率达到了14.20%, 除个别地区外, 各主要养鸡地区的鸡血清样品中都检出了ALV抗原阳性样品, 鸡群中都存在不同程度的ALV感染, 尤其是西宁市郊和乐都县的感染率达到了26.00%。从养殖方式来看, 规模养鸡场的感染率 (16.23%) 要明显高于散养户 (10.94%) 。调查表明:青海省鸡群中存在ALV的普遍感染, 且感染率比较高, 应引起广大养殖户和农牧业主管部门的高度重视, 强化监测和流行病学调查工作, 采取相应措施控制该病的发生和流行。
由于海拔、气候等自然条件的限制, 目前青海省家禽的饲养量还不大, 养殖方式还比较粗放, 主要集中分布在东部农业区的西宁、海东两市, 此次调查抽样涵盖了上述两市所辖10个县 (区) , 而且抽样兼顾规模场和散养户, 因此调查结果基本能代表青海省当前鸡群中ALV的感染状况。虽然青海省暂时还未将禽白血病纳入监测计划中, 但本次调查为今后大规模开展禽白血病的监测工作打下了良好的基础并提供了有效的数据支持。
p27抗原是ALV的衣壳蛋白, 氨基酸序列比较保守, 是ALV的主要特异性抗原, 在ALV的诊断方面具有重要的生物学意义[2]。此次调查只开展了鸡群中ALV的血清学检测, 而ALV共有10个亚型, 青海省鸡群中到底存在哪几种亚型的感染以及主要以哪种亚型感染为主等问题目前还不清楚, 要摸清ALV各亚型的感染和流行情况, 尚需要进一步开展病原学监测和分子流行病学调查, 分离鉴定ALV的血清型和基因型, 以确定青海ALV的主要流行亚型及其优势毒株。
由于禽白血病有垂直传播的特性, 先天感染的免疫耐受鸡是重要的传染源, 水平传播仅占次要的地位[1], 且目前对本病没有可以利用的疫苗和有效的治疗药物, 所以控制该病应主要采取以鸡场为单位对鸡群进行禽白血病的监测, 淘汰带毒的种鸡, 达到不断净化种群的目的。
参考文献
[1]陈溥言.兽医传染病学[M].北京:中国农业出版社, 2006.
[2]田克恭, 李明.动物疫病诊断技术——理论与应用[M].北京:中国农业出版社, 2014.
临床就诊犬布鲁氏菌病血清学调查 篇6
犬布鲁氏菌病是由布鲁氏菌侵入机体引起的传染变态反应性人畜共患传染病, 国内外均有犬感染该病的报道。
犬布鲁氏菌病的检测主要采用国际标准中规定的虎红平板凝集试验 (RBPT) 、试管凝集试验 (SAT) 和补体结合试验 (CFT) [1]。这些方法具有敏感性高、特异性强的特点。但由于试管凝集试验和补体结合试验操作繁琐、费时, 抗原、血清用量较大, 试管、吸管反复刷洗, 在标本量大的布鲁氏菌病监测中很不方便, 微量凝集试验也在不断改革发展并日臻完善。微量凝集试验检测布鲁氏菌病抗体最早见于1988年的文献, 方坚勇等用96孔V型血凝板、12号去针尖头接乳胶头为移液器, 进行微量试管凝集试验, 检测牛布鲁氏菌病抗体并进行卡方检验, 得出微量法和试管法的检出率准确性一致的结论[2,3]。
1.1 布鲁氏菌
1.1.1 布鲁氏菌简介
布鲁氏菌又叫布氏杆菌, 为革兰氏阴性短小杆菌, 初次分离时多呈球状、球杆状和卵圆形。专性需氧, 但许多菌株, 尤其是在初代分离培养时尚需5%～10%的二氧化碳。最适生长温度为37℃, 最适pH为6.6～7.4。该菌传代培养后渐呈短小杆状, 菌体无鞭毛, 不形成芽胞, 毒力菌株可有菲薄的荚膜。1985年世界卫生组织 (WHO) 布鲁氏菌病专家委员会将布鲁氏菌属分为6个种19个生物型[4], 即羊种 (生物型1～3) , 牛种 (生物型1～7.9) , 猪种 (生物型1～5) 及绵羊型副睾种, 沙林鼠种, 犬种 (各1个生物型) 。我国已分离到羊种、牛种、猪种、绵羊型副睾种和犬种各1个型。临床上以羊、牛、猪3种易感性最强, 羊种致病力最强。
1.1.2 流行情况
布鲁氏菌可引致多种动物和人的布鲁氏菌病, 细菌可经气溶胶传播, 是潜在的生物武器。一年四季均可发病, 流行区在发病高峰季节 (春末夏初) 可呈点状暴发。常呈地方性流行。病畜主要通过流产物、精液和乳汁排菌, 污染环境。羊、牛、猪的易感性最强。母畜比公畜, 成年畜比幼畜发病多。带菌动物尤其是病畜的流产胎儿、胎衣是主要传染源。以感染羊种布鲁氏菌、牛种布鲁氏菌最为严重。
本病流行于世界各地, 我国多见于东北、西北等牧区。该病于20世纪50～60年代在中国有较严重流行, 到20世纪90年代下降为0.01%。然而从1993年起布鲁氏菌病疫情出现了反弹, 人间布鲁氏菌病疫情回升幅度较大, 畜间布鲁氏菌病也呈上升情况。2003～2005年, 农业部对12个省市部分奶牛场的4108份乳样进行布鲁氏菌病检测, 从10个省检出203份阳性乳样, 阳性率达4.94%。
1.1.3 布鲁氏菌病的防控
我国推广"检疫、免疫、捕杀病畜"的综合性防治措施, 同时针对疾病流行的3个环节采取相应措施:非疫区以监测为主;稳定控制区以监测净化为主;控制区和疫区实行监测、扑杀和免疫相结合的方法。
免疫接种:疫情呈地方性流行的区域, 应采取免疫接种的方法。免疫接种范围内的牛、羊、猪、鹿等易感动物。根据当地疫情, 确定免疫对象。
检疫:异地调运的动物, 必须来自于非疫区, 应凭当地动物防疫监督机构出具的检疫合格证明调运。动物防疫监督机构要对调运的种用、乳用、役用动物进行实验室检测。检测合格后, 方可出具检疫合格证明。调入后应隔离饲养30d, 经当地动物防疫监督机构检疫合格后, 方可解除隔离。
人员防护:饲养员每年要定期进行健康检查。发现患有布鲁氏菌病的应调离岗位, 及时治疗。
防疫监督:布鲁氏菌病监测合格, 应为奶牛场、种畜场发放《动物防疫合格证》或审验合格的证明。动物防疫监督机构要加强辖区内奶牛场、种畜场的检疫净化情况的监督检查。鲜奶收购点 (站) 必须凭奶牛健康证明收购鲜奶。
1.2 布鲁氏菌病的检测方法
布鲁氏菌病常表现为慢性或隐性感染, 其诊断和检疫主要依靠血清学检查及变态反应。目前血清学检查是诊断布鲁氏菌病的常用方法[5-8], 主要有虎红平板凝集试验、试管凝集试验、酶联免疫吸附试验 (ELISA) 等。
1.2.1 虎红平板凝集试验
此法简便, 快速易行, 比较敏感, 适合于现场大批检疫时做筛选检查。但该法具有一定的假阳性, 所以不宜做最后诊断。
1.2.2 试管凝集试验
试管凝集试验自Wright建立以来一直是各国诊断布鲁氏菌病的常规血清学诊断方法, 在布鲁氏菌病的检测和控制规划中发挥了巨大的作用。试管凝集试验操作简便, 判定容易, 有广阔的应用前景, 我国将其列为动物布鲁氏菌病诊断的国家标准。然而, 《动物布鲁氏菌病诊断技术》 (GB/T18646～2002) 规定的方法是早些年根据当时的实验室仪器设备条件建立的, 随着实验仪器设备的发展与更新, 近年来认为试管凝集试验可以改进为微量法在96孔微量板上操作[9], 而且比传统的试管凝集试验具有许多优点。
1.2.3 酶联免疫吸附试验 (ELISA)
用ELISA检测标本中的抗原或抗体是20世纪70年代初创立的一项技术, 主要有间接ELISA试验和竞争ELISA试验。该技术具有灵敏度高、特异性强、自动化程度高、测定成本低等优点, 将酶联反应的高效性与免疫反应的特异性、高度专一性有机结合成为具有推广应用价值的技术[10]。Cav-leson等 (1976) 首次应用ELISA检测牛布鲁氏菌病抗体并发现其敏感性比试管凝集试验高10～100倍。谷登峰等 (1989) 建立了一种Dot-ELISA和单克隆抗体相结合的检测方法, 对10头健康牛和2个可疑奶牛场的15份奶牛血清进行快速诊断, 结果在传统的试管凝集试验均为阴性的情况下, ELISA阳性率为14.78%。证明该方法具有特异、敏感、实用的优点。
1.3 实验研究的目的、方法及预期目标
布鲁氏菌病是我国乙类传染病。布鲁氏菌病主要侵害机体淋巴系统和生殖系统, 家畜患病后可以发生胎膜发炎、不孕、不育、流产、睾丸炎、乳腺炎以及各种组织病变等。人感染后主要表现为波状热、多汗、关节痛、神经痛及肝、脾肿大、关节变形等, 病程较长且易复发。该病广泛分布于世界各地尤其是畜牧业发达的国家和地区。据调查, 全世界200多个国家和地区中已有170多个存在布鲁氏菌病疫情, 每年造成的损失高达数百亿美元[11]。
2 试验材料与方法
2.1 试验材料
收集100只前来天津农学院动物医院就诊的、需静脉采血检验的临床犬的血样。
2.1.1 主要仪器
移液器:北京雷勃尔离心机有限公司Y91921 20-200μl
北京雷勃尔离心机有限公司Y74797 10-100μl
北京雷勃尔离心机有限公司Y73441 100-1000μl
离心机:北京雷勃尔离心机有限公司LZD5-D
2.1.2 主要试剂
苯酚:天津市永大化学试剂有限公司批号:Z0110418
氯化钠注射液 (0.9%:吉林科伦康奈尔制药有限公司批号:S070737HZ
犬布鲁氏菌病虎红平板凝集试验抗原:中国兽医药品监察所批号:201001
犬布鲁氏菌病高免血清:中国兽医药品监察所批号:2011-3
犬布鲁氏菌病阳性血清:中国兽医药品监察所批号:2009-1
2.1.3 其他器械用品
酒精棉球、无齿镊子、2ml注射器、橡胶管、一次性使用塑料试管滴管、移液器枪头、载玻片、牙签、恒温箱、显微镜。
2.2 试验方法
2.2.1 样品采取
对来天津农学院动物医院检验室抽血化验的临床就诊犬利用无菌操作采集静脉血 (2～2.5ml) , 询问畜主患病犬的主要症状、年龄、性别、品种、繁育史并对收集的血样进行编号, 将数据记录于登记表。采集的血样立即用离心机 (3600r/min 2～3min) 离心, 吸取上层血清, -20°C冷冻保存。
2.2.2 虎红平板凝集试验
待测血清预处理:将冷冻过的待测血清放入恒温箱内10min左右, 使其解冻。
虎红平板凝集试验操作方法:用微量移液器分别取2滴犬布鲁氏菌病虎红平板凝集阳性抗原于载玻片上, 再分别取犬布鲁氏菌病阳性血清、犬布鲁氏菌病阴性血清各1滴与上述抗原混合, 并用牙签搅拌均匀 (见图1) 。于另一块载玻片上分别取3滴犬布鲁氏菌病虎红平板凝集阳性抗原, 将编号为001、002、003的待测血清各1滴与上述抗原混合, 用牙签搅拌均匀, 3-5min内观察结果 (见图2) 。以此类推, 继续进行编号004～100的待测血清的试验。
虎红平板凝集试验结果判定:在阳性血清与阳性抗原出现明显凝集颗粒, 阴性血清与阳性抗原之间仍均匀浑浊的前提下, 待测血清如与阳性抗原出现明显凝集颗粒, 则判为阳性;如均匀浑浊, 则判为阴性;介于二者之间则为可疑。
2.2.3 微量凝集试验
对虎红平板凝集试验呈阳性或可疑的血清抗体进行定量检测。
血清的稀释和加入抗原:准备好96孔板。第一孔加入115μl石炭酸生理盐水, 第二孔不加, 第三、四、五管各加入20μl, 第六、七孔不加, 第八孔加20μl。其中第六、七、八孔分别是阴性血清 (Abˉ) 、阳性血清 (Ab+) 、抗原对照组。用移液器吸四孔中吸取20μl加入第五孔, 第五孔混匀后弃去20μl。第六、七管分别加入20μl待测血清, 第八孔不加。这样从第二孔到第五孔血清稀释度分别为1:25、1:50、1:100、1:200。血清稀释后即可加入抗原。每孔加入20μl阳性抗原, 震荡均匀。见表1。
记录结果:将96孔板充分震荡后置于37°C～38°C恒温箱中恒温30min, 观察并记录结果。
微量凝集试验结果判定:根据各孔中上清液的透明度、抗原被凝集的程度及凝集块的形状, 来判定凝集反应的程度。
3 实验结果
3.1 虎红平板凝集试验结果:阳性血清0份 (0
100) , 可疑血清5份 (5/100) , 阴性血清95份。
3.2 微量凝集试验结果:阳性血清0份 (0/100) , 可
疑血清0份 (0/100) , 阴性血清100份。
4 讨论
4.1 对虎红平板凝集试验和微量凝集试验结果的分析
在100份临床就诊犬血清中, 应用虎红平板凝集试验测得可疑率为5%, 而微量凝集试验则无可疑病例, 由此可以从侧面反映出微量凝集试验与虎红平板凝集试验相比具有较好的敏感性和特异性。利用显微镜观察试验结果, 就免去了人为主观因素的影响, 对结果的判断更为准确和客观。
4.2 关于虎红平板凝集试验的准确性
布鲁氏菌诱导动物产生最多的抗体是IgG1, 其次为IgM抗体, 虎红平板凝集试验和微量凝集试验检测的主要是IgM抗体, 容易受到动物体内其它IgM抗体的干扰。虎红平板凝集试验特异性不高, 受试验温度、凝集时间相对较短和人为主观因素的影响, 不易准确判定结果。
4.3 关于微量凝集试验的准确性
微量凝集试验是我国布鲁氏菌病的法定检测判定方法, 但是该方法由于操作繁琐、费时, 不适于在牛、羊饲养场现场采用。而本实验采用的微量凝集试验在等比例减少了试验中各试剂的量之后, 可以在一定程度上缩短反应时间。
5 结论
100只随机抽样临床就诊犬的犬种布鲁氏菌感染率为0;微量凝集试验借助显微镜来观察结果, 可减小因肉眼观察带来的试验误差, 提高试验结果的准确性。
参考文献
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叶县5种常见鸡病血清学调查 篇7
1 材料与方法
1.1 检测样品
来自叶县23个规模养鸡场, 以1%的比例随机采集鸡血清样品1224份。
1.2 诊断试剂
传染性法氏囊病 (IBD) 和传染性喉气管炎 (ILT) 、禽流感 (AI) 、新城疫 (ND) 、鸡支原体病 (CD) 诊断抗原和阳性血清由青岛易邦生物工程有限公司提供, 诊断液在有效期内使用。
1.3 检测方法
禽流感 (AI) 、新城疫 (ND) 采用红细胞凝集试验 (HA) 和红细胞凝集抑制试验 (HI) , 传染性法氏囊病 (IBD) 、传染性喉气管炎 (ILT) 、支原体 (CD) 进行琼扩、平板凝集试验, 操作方法和判定标准按国家诊断技术规范和诊断液使用说明书进行。
2 结果
在叶县23个规模化鸡场共监测血清和带髓羽毛各1224份, 结果AI免疫合格率87.7%, ND免疫合格率79.5%, IBD阳性率46.5%, ILT阳性率为19.6%, CD阳性率为11.7%。
3 讨论
从监测结果来看, AI免疫效果好于ND, AI免疫抗体水平较高, 合格率达87.7%, 疫苗免疫效果显著;ND平均免疫合格率为79.5%, 但有些鸡场免疫抗体水平较低, 没有达到农业部≥70%的标准, 存在感染疫情的隐患。因此, 建议种鸡场定期开展免疫抗体监测, 对免疫抗体水平较低及合格率不达标的鸡群及时补免, 根据免疫抗体水平制定科学合理的免疫程序, 提高免疫质量。在做好禽流感强制免疫的同时, 加强对新城疫等其它禽病的防治工作。
IBD的血清检测结果对于免疫过的鸡群阳性率并不很高, 分析原因与免疫程序、疫苗质量和操作不规范有关系。应加强兽医卫生防疫措施, 提高雏鸡的免疫质量。根据同一日龄雏鸡对接种免疫敏感的不一致性, 最好进行两次免疫, 首免在20日龄左右, 二免在30日龄左右, 不要过早使用毒力较强的IBD活疫苗免疫, 引起免疫抑制或诱发IBD发生, 油乳剂灭活苗最好是囊源苗。应适时补充、修改免疫程序, 同一鸡场长期使用一个免疫程序对生产没有积极意义, 必须适时进行免疫程序修改。可以考虑适当提高鸡舍温度2~3℃, 避免各种应激。
ILT是一种急性的病毒病, 不仅会造成急性死亡, 而且会引起产蛋量下降, 因此该病应引起高度重视。本次调查ILT血清阳性率很低为19.6%。要加强通风, 保持合理的饲养密度, 及时清粪, 减少鸡舍中氨气和粉尘的含量。进雏前1~2d升高鸡舍温度, 可在一定程度上控制该病在雏鸡中过早的带毒。接种疫苗后在饮水中加入电解多维, 防止应激反应的产生;接种疫苗后4~7d对鸡舍每天进行一次带鸡消毒, 防止疫苗的扩散和毒力返强。
鸡支原体病感染严重, 这次检测的23个鸡场中, 鸡支原体病均有不同程度的感染, 平均阳性率为11.7%, 有些鸡场还很严重。鸡支原体病不仅引起产蛋下降、容易感染其它疫病, 主要是通过感染的卵直接传播雏鸡, 引起雏鸡发病死亡。应引起种鸡场的高度重视, 及时淘汰阳性病鸡, 定期开展疫病检测, 做好鸡支原体病的净化工作, 逐步建立健康鸡群。
不同规模的养鸡场免疫质量和疫病感染差异性较大。通过检测结果分析, 饲养管理规范, 防疫卫生制度健全的大型鸡场免疫效果可靠, ILT、CD鸡支原体病等条件病原菌的感染比较低;而规模较小、防疫卫生条件差的鸡场免疫抗体水平相对较低, 病原感染也比较严重。因此各级防检部门应加强对中小规模鸡场的监管力度, 采取有力措施, 督促指导养殖场开展科学防控;种鸡场要加强饲养管理, 采取疫苗免疫与检疫净化相结合的办法, 减少病原感染, 提高种鸡生产水平。
实验用兔弓形虫病血清学调查 篇8
在临床工作中以病原诊断作为弓形虫病的诊断依据存在很大困难, 故目前多采用免疫学诊断方法, 敏感性高和特异性强的血清学检测方法, 能够准确地检测出阳性兔和评定兔群的感染率, 但常用的IHA及ELISA等方法操作烦琐[4], 只停留在实验室阶段, 对基层的实验动物中心弓形虫病的检测带来诸多障碍。本研究制备的试纸条, 可用于快速简便的诊断, 以弥补基层检验设备的缺乏和技术力量的不足。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 试验血清
来自某实验动物中心的实验用兔。随机选取50只体重接近的实验用兔, 先对采血部位进行消毒, 用1次性注射器采血2ml于离心管中, 室温静置, 待血清分离或37℃1h后, 30000r/min离心5min。移取上层血清至另一离心管中, 编号, 作为待检血清, 4℃冰箱中保存备用。
1.1.2 试验仪器
针头、离心机、微量加样器、弓形虫试纸条等由金华职业技术学院动物医学研究所提供。
1.2 试验方法
1.2.1 IHA (反向间接血凝) 法
反应在96孔V型微量有机玻璃板上进行, 每块反应板设阴性血清、阳性血清、稀释液对照孔, 每孔加稀释液25u L。在1~10排的第1孔分别加入1~10号待检血清25u L, 在第11排的第1孔加入阳性对照血清25u L, 并分别倍比稀释至第8孔。在第12排的第1孔加入阴性对照血清25u L, 并分别倍比稀释至第6孔, 在第12排的第7~8孔做空白对照[5]。
冻干抗原按说明书要求稀释, 4冰箱内静置24h后, 将稀释抗原摇匀, 每孔加25u L, 然后将反应板置于微量振荡器上震荡30s, 于37温箱中作用1h。在阳性对照血清滴度不低于1:1024 (第5孔) 、阴性对照血清除第1孔允许存在前带现象 (+) 外, 其余各孔均为 (-) , 稀释液对照孔为 (-) 的前提下, 对被检血清进行判定。被检血清抗体滴度达到或超过1:64判为阳性。
1.2.2 试纸条法
以稀释液将待检血清按 (1:5) 稀释。检测时, 从加样孔滴加2~3滴待检血清稀释液, 同时, 以标准阳性血清和阴性血清设阳性对照和阴性对照。2~5min内观察结果。10min后观察结果无效。判定标准:检测区 (T带) 、质控区 (C带) 均出现红色为阳性;仅质控区 (C带) , 出现红色为阴性;T、C均未出现红色则试纸无效。
2 结果
IHA (反向间接血凝) 法检测结果及试纸条法检测结果 (见表1) 。
检测结果提示, 试验抽取的50只兔子样品中, 弓形虫感染的阳性率约7%, 且试纸条检测的灵敏度高于IHA, 表明用于快速检测的试纸条的作用是可以确认的。
3 讨论与小结
(1) 本次试验检出实验用兔的弓形虫感染率约7%, 略低于周永华等报道的8.7%的结果[3], 这可能与该动物中心良好的屏障系统与严格的生物安全控制措施有关, 但阳性兔的存在, 依然给实验用兔的疫病控制带来诸多障碍。 (2) 本次检测没有考虑抗体的滴度分布, 也没有进行病原分离, 病原检测有利于呈现抗体检测阳性而抗原检测阴性的状态, 依此判断虫体在体内的发育阶段及数量分布。 (3) 弓形虫血清学检测方法是多样的, 免疫层析技术是新近发展起来的体外诊断技术。具有简单快速, 操作简便, 无需特殊设备等优点。本次试验中应用的弓形虫快速检测试纸条的性能稳定, 与传统方法符合率高, 这对临床应用而言有着重要的作用, 对实验动物屏障系统的完善和生物安全控制有着积极的意义, 可以期待在将来发挥更加重要的作用。
参考文献
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福建省猪戊型肝炎血清学调查 篇9
1 材料与方法
1.1 试验材料
采集全省9个设区市共159份血清样品, 其中12个规模场, 116份血清;17个散养户, 43份血清。
1.2 试验试剂
戊型肝炎病毒抗体 (HEV-Ab) 酶联免疫诊断试剂盒 (北京万泰生物药业有限公司) , 双蒸水 (实验室自制) 。
1.3 试验仪器
Tecan酶标仪, Nichipet单道移液器, Transpette 8道移液器, Tecan 8道洗板机。
1.4 试验方法
采用两步夹心ELISA方法检测血清样品中戊型肝炎病毒抗体。主要步骤为:每孔加入50 uL样品稀释液, 分别在相应的孔中加入待测样品或阴阳性对照50 u L, 轻轻振荡摇匀。用封板膜封板, 置37℃温育30 min后, 用洗板机充分洗涤5次, 然后分别在相应孔中加入酶标二抗100 uL。封板, 置37℃温育30 min, 充分洗涤5次, 每孔加入显色A, B液各50 uL, 轻轻振荡混匀。封板, 置37℃温育15 min, 每孔加终止液50 uL, 轻轻振荡混匀, 在450 nm处测定OD值。
1.5 结果判定
阴性对照OD值应≤0.10;阳性对照OD值应≥0.80。阴性对照OD均值+0.12为临界值。样品OD值≥临界值为HEV抗体阳性;样品OD值<临界值为HEV抗体阴性。
2 试验结果
试验共检测猪血清样品159份, 阳性数106份, 阳性率66.7%, 其中规模猪场116份, 阳性数74份, 阳性率63.8%;散养户43份, 阳性数32份, 阳性率74.4%。见表1-表3。
3 讨论
1) 该试验检测猪HEV抗体阳性率为66.7%, 说明我省猪群自然感染HEV比例较高, HEV在我省猪群及其周边环境中广泛存在, 应引起高度重视。年龄和从业年限是影响感染率的最重要因素, 年龄的增长使得人群接触HEV污染物的机会和频率增加, 职业环境高HEV暴露随着从业年限的增加而使得人群HEV感染率上升。相关的从业人员在工作时应注意自身防护, 加强管理和防疫措施, 定期进行体检, 有条件的猪场可以进行HEV净化, 降低感染HEV的几率。
2) 散养户抗猪HEV-IgG阳性率为74.4%, 这与王灵岚等[9]对我省猪HEV感染情况研究结果71.31%非常接近。规模场抗猪HEV-IgG阳性率为63.8%, 略低于散养户, 这与规模场卫生条件较好, 防疫和管理制度比较完善有一定关系, 然而此次检测的12个养殖场全部存在HEV感染, 场阳性率达到100%, 这可能与此次采样场点少有一定的关系, 但也有力证明了HEV病毒在我省猪群中广泛存在。
3) 从检测样品HEV抗体阳性的地区分布来看, 全省除莆田市样品未检测到HEV抗体阳性以外, 其他设区市猪群都有不同程度HEV感染, 其中泉州、南平、漳州较高, 宁德较低。此次莆田市虽未检出阳性, 但由于样品数量较少, 因此, 这并不代表该市一定不存在阳性感染。
4) 此次调查采样数量偏少, 对猪的品种、猪群内不同日龄、不同地区的分布也未分类分析, 因此, 对猪群中HEV的系统性分布情况研究不够, 还待今后进一步调查分析。
参考文献
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