刺五加的现代研究

刺五加的现代研究（精选8篇）

刺五加的现代研究 篇1

刺五加为五加科植物刺五加Acan2thopanax senticosus (Rupr.etMaxim.) Harms 的干燥根及根茎, 商品名为五加参, 味辛、微苦、性温、无毒。刺五加具有益气健脾、补肾安神、益精壮骨的功效。本草纲目称刺五加为“本经上品”。说明刺五加的滋补保健作用是很确切的。自50年代以来, 国内外的研究人员对刺五加的化学成分、药理作用等进行了大量的研究, 验证了刺五加的活性物质及其良好的药理作用, 并分离得到了其中大部分有效成分。本文对其化学成分、药理作用简述如下。

1 化学成分

1.1 苷类

刺五加根和根茎中含有刺五加苷 A (Eleutheroside A, β-谷甾醇葡萄糖苷, 胡萝卜苷) 、刺五加苷B (Eleutheroside B, 丁香苷, Syrigin) 、Bl (Eleutheroside B1, 异秦皮啶葡萄糖苷) 、刺五加苷C (Eleutheroside C, 乙基半乳糖苷) 、刺五加苷D、E (Eleutheroside D, E, 紫丁香树脂酚二糖苷) 、刺五加苷F和G。其中刺五加苷D和刺五加苷E为立体异构体主要成分为酚苷类化合物。实验证明刺五加总苷是其生物活性成分之一。近些年对刺五加茎叶的研究不断深入, 从叶中分离得到齐墩果酸为配基的五加叶苷I、K、L和M 等, 研究表明齐墩果酸也存在于刺五加茎皮中。20 世纪80 年代末Shao 从叶中分得5 种新皂苷, 即刺五加苷A1 、A2 、A3 、D3 、A4 。吴立军等分得新的化合物刺五加酮 (Ciwujiatong) 和新刺五加 (necoiwuji2aphenol) , 并首次分得阿魏葡萄苷 (fereloyl2sucrose) 。

1.2 糖类

根含葡萄糖、蔗糖、碱溶性多糖、水溶性多糖、1-3α-D-葡萄糖吡喃糖 (Pyranoglucose) 及一些1 →2 与1 →4 连结的吡喃型己醛糖。

1.3 脂肪酸及醌类

刺五加含油酸甲脂、油酸乙脂、10, 13-十八碳二烯酸甲脂、10, 13-十八碳二烯酸乙脂、肉豆蔻酸、棕榈酸、9, 11-十八碳二烯酸、十六碳三烯酸。

1.3 微量元素及氨基酸

刺五加含有K、Na 、Mg、Si 等元素及Fe 、B、Sr 、Mn、Cu、Ni 、Mo 、Cr 、Bi 、Ti 等多种微量元素, 短柄五加茎中含16 种氨基酸, 其中7 种是人体必需的。

1.4 其它成分

根皮中含硬脂酸、β谷甾醇、芝麻素白桦脂酸、苦杏仁苷、蔗糖以及具有促性腺和细胞素作用的活性成分Liriodenchin 。

2 药理作用

长期应用刺五加证实其具有补中益气、坚筋骨、强智益脑的作用。与其他药配伍组方, 可“驱风湿、壮筋骨、顺气化痰、添精补髓、久服延年益老。”大量研究证实了刺五加具有与人参相似的功效, 有双向调节作用, 并补而不腻, 适合各年龄段人群应用。现代研究表明刺五加可增强机体非特异性防循能力, 具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、抗损伤及抗疲劳等作用。

2.1 对免疫功能的影响

刺五加浸膏有明显的增强炎性渗出细胞吞噬的效果, 刺五加多糖及有苷类成分均能明显提高细胞产生诱生干扰素的能力, 多糖具有多种生物活性, 是理想的免疫增强剂。

2.2 对有害刺激非特异性抵抗力的作用

动物实验研究表明刺五加给药组与对照组相比较, 小鼠平均可延长1/4的游泳时间, 证明刺五加提取物及苷类物质具有明显的抗疲劳作用, 其作用比人参强。

有试验证明, 小鼠腹腔注射刺五加水浸膏的水溶液能提高耐受低压缺氧的能力, 45～48℃时有降低死亡率的作用。表明刺五加可以用于治疗和预防冠状动脉缺氧引起的心绞痛等疾病。

对小鼠的抗寒实验证明, 有显著的抗寒功效, 同时刺五加有提高和加速冷适应能力的作用。

对大鼠蛋清性踝关节肿的实验证明刺五加有明显的抑制关节肿的作用, 可用于治疗和预防关节炎。

抑菌试验表明刺五加对白色葡萄球、菌奈瑟菌、大肠杆菌有一定的抑菌作用, 可用于葡萄球菌等引起的感染性疾病。试验还表明刺五加对理化因素引起的白细胞缺少症有显著的防治作用。

2.3 中枢神经系统的作用

刺五加有显著减少小鼠的自主活动, 并可显著延长异戊巴比妥钠引起的小鼠睡眠时间, 对抗防己毒素引起的小鼠惊厥有抑制作用, 说明刺五加对神经系统有镇静安神之功效。刺五加同时能改善大脑皮层的兴奋、抑制过程, 提高脑力劳动效能, 具有双向调节作用, 实验表明刺五加对神经系统的双向调节作用与用药时神经系统的功能状态和用药剂量大小有关。

2.4 对心血管系统的作用

对兔耳血管试验证明刺五加有显著的扩张血管的作用, 对小鼠心肌营养血流量的试验表明刺五加能显著增加小鼠心肌C5134的摄取能力, 起到增加心肌血流量的功效。

2.5 抗衰老作用

刺五加具有抗衰老作用, 大鼠口服刺五加2个月后, 细胞脂质氧化物含量降低, Na+-K+-ATP酶活性升高, 能降低大鼠肝、脑中过氧化脂质的水平, 提高血浆中SOD (超氧化物歧化酶) 的活性, 对缺血后再灌注脑内的过氧化脂质含量增加有保护作用。

2.6 抗辐射作用

刺五加能增加动物抵抗辐射的能力, 能延长受辐射大鼠的生存时间, 对红细胞遭受放射样物质侵害时有保护作用, 对造血系统放射损伤后小鼠的细胞结构的恢复有促进作用。

2.7 抗肿瘤作用

刺五加的提取物对动物实验性的移植瘤 (肉瘤180 、256 、艾氏腹水癌等) 药物诱发瘤均有一定的抑制作用, 同时能抑制癌瘤的转移。实验证实刺五加多糖对S180细胞磷脂酰肌醇 (PI) 转换有显著的抑制作用, 其抑制作用与剂量呈正相关性, 这可能是刺五加抑制肿瘤细胞增殖的作用机制之一。

综上所述, 说明刺五加药理作用广泛, 治疗、保健的功效显著, 近年来刺五加在国内外应用的范围越来越广, 需求用量也越来越大, 因此对该产品的综合开发是十分有前途的。

刺五加的现代研究 篇2

关键词：刺五加片 薄膜衣片 糖衣片 工艺

中图分类号：TQ461 文献标识码：A 文章编号：1674-098X（2016）04（c）-0053-02

刺五加片是由中药刺五加加工制成，具有益气健脾，补肾安神。用于脾肾阳虚所致体虚乏力，食欲不振，腰膝酸软，失眠多梦，可以改善心脑血液循环、调节中枢神经和内分泌系统的功能，治疗失眠、重症神经衰弱、更年期综合症等。

中药刺五加提取成浸膏后，为便于剂量、服用等原因一般都制成颗粒剂、片剂，而中药片剂易吸湿受潮污染而变质，所以，一般在制成素片后进行包衣。另外包衣后还可以达到控制药物在胃肠道的释放部位和释放速度；掩盖不良气味或苦味；避光防潮提高药物的稳定性；美化片剂的外观等目的。

而传统糖衣片包衣是把以蔗糖、滑石粉、明胶为主的多种辅料，附在药物的外层，这样使糖衣片有效成份不变的情况下增加重量，长期服用与药物治疗毫无关系的这些辅料会对人体造成极大危害，尤其是糖尿病患者。同时糖衣片包衣生产过程中会产生粉尘飞扬、污染环境，对操作人员也带来极大伤害，化胶、化糖、添加色素、晾片、物料存放等都需占用很大空间，而且生产工艺复杂，生产操作过程中大多靠包衣工人手感，经验观察控制质量，与GMP的目的完全相反。又因糖衣包衣过程中的变量较多，在糖衣片生产和存放过程中还经常出现裂片、霉点、花班、含量下降、吸湿性强、崩解超时、不易保存、晾片时间和生产时间长等缺陷，因此，改变糖衣包衣势在必行。

薄膜衣包衣几乎完善了糖衣包衣的缺点。薄膜衣指在片芯之外包一层薄的高分子聚合物衣，形成薄膜。在包衣过程中，包衣锅一直在负压状态下，不污染环境，不易产尘，生产过程全部处在可控状态下，符合GMP要求。为满足不同患者的病理需求，根据物料的不同性质，还可分别制成胃溶型、肠溶型、水不溶型，靶向制剂、控释、缓释等多种薄膜包衣物料，同时还拓宽了片剂药效在医疗临床上的应用范围。由于薄膜衣片无效成份少，体积相对较小，片型光滑、对妇女儿童患者吞咽更方便、更容易。薄膜衣片对忌糖患者和糖尿病患者都没有服用限制，扩大了病患者使用范围。薄膜衣包衣料是由高分子化合物构成，无毒无味，患者长期服用无明显不良反应病例显示。薄膜衣包衣较糖衣包衣不但具有生产周期短，不用糖，不用滑石粉，用料省，还具有避光、防潮、耐磨、掩味，且不易产生霉点、花斑、裂片，易于崩解等特点，从而也大大增强了药物的生物利用度、溶出度、药物保存的有效期。

因此，针对以上各种原因笔者对刺五加片进行了薄膜包衣试验，虽然薄膜衣包衣较糖衣包衣程序简单，但包衣过程仍有些复杂，包衣过程中可能会产生色差、衣膜粗糙、粘片、麻面等现象，这是因为包衣过程中仍然因为人、机、料、法、环各方面因素相互影响、相互作用。笔者此次主要是对刺五加片薄膜包衣的生产工艺及其与糖衣片的质量和稳定性进行比较。如果工艺也可行，那么可以节约人工、节约成本，为企业带来很大的经济效益。

1 原料及设备

刺五加片原辅料（哈尔滨仁皇药业股份有限公司提供），包衣锅（广东瑞琪包装机械有限公司），高压喷漆枪（河北远洋管道装备有限公司），崩解仪（天津精拓仪器科技有限公司），硬度仪（苏州南光电子科技有限公司），快速水分仪（深圳市冠亚电子科技有限公司），多功能恒温恒湿箱。

2 方案及实施

2.1 片芯

通过实验证明片芯要求较高，需达到崩解不能超过5 min，硬度大于4 kg压力。

2.2 薄膜衣包衣液

3%的羟丙基甲基纤维素HPMC、丙烯酸树脂、钛白粉、95%乙醇等。

2.3 薄膜衣与糖衣片的生产工艺

（1）薄膜衣。预热包衣锅到35 ℃左右，然后将合格的刺五加片片芯（打好的素片）置预热好的包衣锅内，转动包衣锅，同时调整喷枪口距离喷喷床约30 cm，至片芯达到40 ℃左右，开启空压机，打开喷枪，薄膜衣液喷于转动的片芯上，吹60 ℃热风使之干燥。喷雾要使片剂表面均匀，又能使形成的涂膜液迅速干燥，待片剂外观色泽均匀、完整光滑时停止喷雾，吹冷风20 min。共计约4 h完成。

（2）糖衣。配制各种包衣液，然后预热包衣锅到35 ℃左右，然后将合格的刺五加片片芯置包衣锅内，转动包衣锅，直至片芯达到40 ℃左右，先后分别包上隔离层、粉衣层、糖衣层、有色糖衣层、打光（用虫蜡），此生产过程约需12 h完成。

2.4 质量控制试验

（1）崩解度。依据药典一部附录[1]方法检测结果：水溶液中薄膜衣片的崩解时限为33 min，糖衣片为39 min；盐酸溶液中薄膜衣片为27 min，糖衣片为35 min。

（2）水分。依据药典一部附录[1]方法检测结果：薄膜衣片含水量为4.1%，糖衣片为4.5%。塑料瓶包装室温放置3个月后，薄膜衣片含水量为4.2%，糖衣片7.0%。

（3）硬度。依据药典一部附录[1]方法检测结果：刺五加薄膜衣片硬度为6.4 kg，糖衣片硬度为6.0 kg。在温度25 ℃/湿度60%放置3个月后，刺五加薄膜衣片硬度为6.2 kg，糖衣片硬度为5.6 kg。

（4）稳定性。将刺五加薄膜衣片和糖衣片在温度25 ℃/湿度60%和温度45 ℃/湿度80%的条件下分别放置3月结果如表1所示。

（5）抗热性。将薄膜衣片和糖衣片置于250 W红外灯下15 cm处加4Hcmpw，薄膜衣片表面无变化，崩解时间为49 min，糖衣片出现裂纹，且崩解不合格[2]。

3 结语

由以上试验得出结论，刺五加的薄膜包衣片基本不受贮存环境温、湿度影响，但对片芯的硬度、薄膜衣包衣液的浓度要求较高，在稳定性、水分含量、硬度、抗热性方面都比糖衣片高，故质量和稳定性都要比糖衣片强，因此，刺五加薄膜衣片生产工艺可行，可以批量生产。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典一部[M].北京：化学工业出版社，2000.

刺五加中药效成分的提取研究概况 篇3

刺五加根茎含有多种苷类及糖类, 如三萜类皂苷、木脂素苷、 鹅掌揪苷、异秦皮啶、芝麻脂素和多糖。其叶和花中含有黄酮, 果实含有水溶性多糖, 全株均含有挥发油。刺五加根和根茎中的主要成分为酚苷类化合物, 是主要的生物活性成分。下面分别总结了主要成分的提取方法:

1 总黄酮

马海涛, 王华[1]采用均匀设计方法, 应用紫外分光光度法测定了刺五加中总黄酮的含量, 最后确定以5 0 %的乙醇浓度、20倍量、 提取3次、30 min/次为最佳提取工艺。 郭文晶, 张守勤[2]等: 研究了从刺五加叶中超高压提取总黄酮的工艺条件。通过单因素试验确定了各影响因素的较优水平范围, 在此基础上采用均匀设计方法进一步优化出最优提取工艺参数为:压力485 MP a , 保压5 mi n , 乙醇体积分数4 0%, 固液质量体积比 ( 1 :5 0 ) g/ ml , 在此条件下刺五加叶中总黄酮的提取率可达7.76%, 比回流法和超声法分别提高了31%和11% , 提取时间分别只有二者的1/24和1/6。超高压提取时间短、 提取率高, 是一种全新的快速有效的提取方法。刘莹, 金礼吉, 徐永平等[3]以总黄酮提取率为考察指标, 通过单因素及正交实验考察机械化学法辅助提取刺五加总黄酮的主要影响因素, 确定最佳工艺条件;采用分光光度法测定总黄酮含量, 最佳工艺条件为:Na2CO3 /Na2B4O7助剂用量4% (W/W ) , 物料粒度 D95≤37 μm, 乙醇浓度为20% (V/V) , 料液比为1∶60 ( g:ml) 。该工艺条件下, 总黄酮提取率比热回流法提高13.2%。机械化学法辅助提取具有提取率高, 时间短, 无需加热, 乙醇用量少等特点, 是提取刺五加总黄酮的一种有效方法。

2 多糖

剌五加多糖只有较强的抗肿瘤作用和增强免疫作用, 刺五加多糖具有增强机体的体液和细胞免疫功能。袁学千等[4]以环磷酰胺100 mg/kg 制造出了免疫抑制小鼠模型, 实验结果表明单用刺五加多糖可明显增强小鼠脾脏和肠系膜淋巴细胞数目, 脾脏白髓总体积和淋巴皮质总体积也有所增加, 从而证实了刺五加多糖能使免疫器官细胞数目增加, 谢蜀生, 许士凯, 张文仁等[5]报道刺五加多糖能使小鼠分泌细胞显著增加刺五加多糖对免疫抑制及放射线引起的白细胞降低有明显的保护作用。剌五加多糖是理想的免疫增强剂, 它可以促进田胞、B细胞、NK细胞等细胞因子的产生。李芙蓉, 吕博[6]运用微波技术对刺五加用石油醚、乙醚除去脂溶性杂质, 用 80 %乙醇提取除去所含单糖、低聚糖及甙类等干扰性成份后 , 再运用微波技术用水提醇沉法制得刺五加粗多糖, 并采用苯酚-硫酸比色法对其多糖含量进行测定, 并对其含量进行了测定, 多糖含量为 5. 01 %。得到了较好的结果。孟庆繁, 于笑坤, 徐睦芸[7]等用热水浸提法提取刺五加多糖, 用乙醇对其分级沉淀, 当乙醇的体积为提取液的1倍时, 多糖沉淀量最大, 随着乙醇用量增加, 各级产物减少, 其多糖的总收率为原刺五加质量的0.54%.用邻苯三酚法及fenton体系测定各分级产物对O2-和-OH的抑制作用, 随着乙醇用量增加, 其产物的抗氧化能力增强, 当乙醇用量是提取液体积的6倍时, 其产物对O的清除率最大可达47.7%;当乙醇用量达4倍时, 其产物对·O H的清除率最大达68.2%。刺五加多糖对红细胞膜脂质过氧化的抑制作用随糖浓度的增加而加大, 当多糖浓度>4 g/L以上时, 不仅 H2O2对红细胞膜的氧化作用完全被抑制, 而且对红细胞膜产生还原作用。

3 异秦皮啶

陆兔林, 马新飞 , 毛春芹等[8]以异秦皮啶和甲醇浸出物为指标, 采用正交试验法, 对最佳提取工艺进行工艺参数考察。 结果以刺五加粗粉加12倍量的75%乙醇分3次回流提取, 每次2.0 h为最佳提取工艺, 该提取工艺合理, 生产实际操作简单, 适合于大规模生产。马新飞, 陆兔林, 殷放宙等[9]以异秦皮啶为指标, 采用高效液相色谱法进行分析测定, 考察不同溶剂、不同提取方式、不同水解方式对异秦皮啶提取率的影响。结果以刺五加药材粉末加甲醇回流提取, 硫酸水解, 以氯仿萃取可获得较高提取率, 表明不同溶剂、不同提取方式、不同水解方式对异秦皮啶的提取率有较大影响。袁昕蓉, 毕开顺, 李强[10]采用正交设计, 考察溶剂量、 提取时间和提取次数3个因素对游离异嗪皮啶含量的影响及水解时间、H2SO4浓度、H2SO4量对结合型异嗪皮啶含量的影响, 优化后的提取工艺为: 用12倍量甲醇, 提取6 0 min, 提取3次。水解工艺为10倍量, 15%硫酸, 水解2 h。

4 刺五加苷类

杜爱琴, 邹华彬, 袁久荣[11] 以刺五加总苷的相对含量为指标, 采用正交设计及紫外分光光度法确定最佳工艺及分析方法, 刺五加总苷含量快速测定条件为以质量分数为 75 %的乙醇做参比 , 测定波长 325 nm。刺五加总苷最佳提取条件为每60 g刺五加粗粉用质量分数为75%的乙醇溶液100 ml , 单次回流120 min , 提取2次 , 得膏率>4%, 该最佳条件乙醇用量与药典方法比较降低了52% , 回流时间缩短了8 h。项艳薇, 史十例, 李莉等以紫丁香苷为检测指标, 用水和不同浓度的乙醇为溶剂, 从刺五加药材中提取紫丁香苷, 并且考察影响水提刺五加的因素。结果以水提法和30%、50%乙醇提取率最高, 效果最佳。水提刺五加提取3次, 2.5 h/次, 效果最佳, 同时成本低, 简单易操作。

5 刺五加皂甙 ( Acantbepanax senticosus saponin, ASS )

众多研究表明, 刺五加叶皂甙 ( ASS) 具有对糖尿病的降糖作用及合并症的治疗作用, 抗肿瘤作用和对供体心脏的保护作用。在另一项ASSX实验性2型糖尿病大鼠Glp-1 和血糖的作用研究中, 应用放射免疫分析测定给予ASS后其空腹及口服葡萄糖后血浆中Glp-1和血糖变化。结果与正常组大鼠比较, ASS可使2型糖尿病大鼠空腹及 口服葡萄糖后Glp-1分泌升高、血糖水平降低。王玉琴, 郑清根据刺五加皂甙的理化性质, 采用分光光度法在不同提取剂、不同料液比、不同温度、不同时间下对刺五加提取液中皂甙含量进行测定, 最后确定刺五加皂甙提取的最佳条件为以75%乙醇为提取剂, 料液比为1:6, 温度为 80℃, 提取6 h。 刘忠英, 晏国全, 胡秀丽, 等用微波辅助提取法提取中药刺五加中总皂苷。利用正交实验, 考察了微波提取条件 (包括溶剂、微波辐射时间、提取压力和料液比) 对刺五加中总皂苷提取率的影响规律, 优化了最佳提取条件。结果:在所选因素水平下, 溶剂为70%乙醇、提取压力为700kPa、提取时间为10 min、料液比为1:30时, 刺五加中总皂苷提取效率最佳。与传统的索氏提取法进行了比较研究, 微波辅助提取效率可提高34%。结论:微波辅助提取法提取中药刺五加中总皂苷, 提取时间短, 提取效率高。

6 讨论

刺五加的现代研究 篇4

关键词：刺五加,心肌梗死,共聚焦,游离钙离子

刺五加(Acanthopanax Senticosus,AS)是一种传统中药,具有抗氧化和清除自由基的作用,广泛应用于风湿病、高血压、胃溃疡、肝炎以及缺血性心脏病[1,2]。有研究表明,AS能防止缺血再灌注室性心律失常的发生[3,4],并有效抑制急性心肌梗死大鼠的心室重构[5],但对心肌缺血损伤的保护作用及其机制尚不明确。进一步研究表明,AS能明显减少脑出血后神经细胞凋亡,提高Bcl-2表达水平,降低Bax表达水平,保护出血后神经细胞[6],而其对心肌缺血损伤细胞的凋亡相关机制尚未见报道。基于上述研究,本实验提出了AS对心肌缺血具有保护作用的机制可能与降低细胞内钙离子浓度和抑制缺血心肌细胞凋亡相关的假设,这将为进一步临床用药提供理论依据。

1 材料和方法

1.1 实验动物

雄性Wistar大鼠,体重180～250 g,40只,由哈尔滨医科大学实验动物中心提供。

1.2 药品和试剂

刺五加注射液(黑龙江乌苏里江制药有限公司,中国),羟乙基哌嗪乙硫磺酸(Sigma公司,美国),胶原酶Ⅱ(Sigma公司,美国),EGTA(Sigma公司,美国),牛血清白蛋白(Sigma公司,美国),Fluo-3/AM(Sigma公司,美国),TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(Roche公司,德国)。

1.3 方法

1.3.1 心肌缺血模型的制备[7]

戊巴比妥钠40 mg/kg麻醉固定雄性Wistar大鼠,记录标准Ⅱ导联心电图。沿胸骨左缘3～4肋间开胸,挤出心脏,在左冠状动脉前降支距左心耳下缘2 mm处穿线,15 min后取心电图正常鼠随机分为5组,每组8只,其中,假手术组,冠状动脉下穿线不结扎;模型组,结扎左冠状动脉前降支,模型制作成功大鼠以心电图ST段明显抬高,结扎线以下心肌变暗为缺血标志;高、中、低剂量(100、50、25 mg/kg)AS组,舌下静注AS注射液30 min,结扎左冠状动脉前降支;假手术组与模型组注射同等剂量的生理盐水。

1.3.2 血流动力学测定

结扎6 h后,戊巴比妥钠(40 mg/kg)麻醉大鼠,分离右侧颈总动脉,插入测压导管,并连接BL-420型多导生理仪,再将导管插入左心室。监测左心室舒张末压、左心室收缩压、左室内压上升(下降)最大速率。

1.3.3 心肌梗死面积测定

结扎6 h后取出大鼠心脏左室,将心肌均匀横切成5片,放入1%TTC磷酸缓冲液中,37℃水浴,避光染色10 min。心肌颜色白色为缺血区,红色为非缺血区,以缺血区心肌占左室质量比作为梗死面积百分率。

1.3.4 凋亡指数检测

采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数,按照试剂盒步骤操作,缺血心肌阳性细胞以双染确定,以阳性核染细胞数占总细胞核数之比计算凋亡指数。

1.3.5 细胞内游离钙离子浓度测定[8]

戊巴比妥钠麻醉后快速取出大鼠心脏,用充氧的冷台氏液冲洗,经主动脉接于Langendorff管离体灌流装置上,正常台氏液(NaCl 126 mmol/L,KCl5.4 mmol/L,HEPES 10 mmol/L,NaH2PO40.33 mmol/L,MgCl21.0 mmol/L,CaCl21.8 mmol/L,葡萄糖10 mmol/L,用NaOH调pH为7.4)灌流15 min左右,直至将血液冲洗干净,接着用无钙台氏液继续灌流,最后用含胶原酶Ⅱ(0.2 mg/mL)和BSA(0.2 mg/mL)的无钙台氏液进行循环消化,当心脏变软,将其放入装有5 ml KB液(谷氨酸70 mmol/L,牛磺酸15 mmol/L,KCl 30 mmol/L,KH2PO410 mmol/L,HEPES 10 mmol/L,Mg Cl20.5 mmol/L,葡萄糖10 mmol/L,EGTA 0.5 mmol/L,用KOH调pH为7.4)的试管中,置于4℃冰箱稳定1～2 h备用。取稳定好的细胞用10μmol/L Fluo-3/AM和0.03%Pluronic F-127在37℃恒温水浴中孵育45 min,然后用正常台氏液洗涤2次去除细胞外Fluo-3/AM。应用激光扫描共聚焦显微镜在氩离子激发波长为488 nm,发射波长为530 nm,物镜(40×)下实时监测细胞内[Ca2+]i浓度的变化,在Time series程序下对细胞XY平面进行扫描,计算细胞XY平面内平均荧光强度(fluorescent intensity,FI),以FI代表细胞内[Ca2+]i浓度,正常细胞[Ca2+]i浓度以F0表示,增加的[Ca2+]i浓度用FI/F0表示。

1.4 统计学分析

采用SPSS 10.0统计学软件进行数据分析,计量资料数据用均数±标准差(x±s)表示,组间比较采用方差分析,多组间的两两比较采用LSD-t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 刺五加对心肌缺血大鼠血流动力学的影响

与模型组相比,高剂量AS组能显著提高心肌梗死大鼠的左心室收缩压(P<0.05),说明高剂量AS能增强心肌收缩功能,且高剂量AS组左室内压上升(下降)最大速率明显升高(P<0.01),左心室舒张末压降低(P<0.05),说明高剂量AS能增加心肌的舒张功能,提示AS能够改善缺血心肌的心功能。见表1。

2.2 刺五加对缺血大鼠心肌梗死面积的影响

与假手术组比较,模型组大鼠心肌梗死面积明显增大(P<0.01)。给予AS后,高剂量AS组大鼠心肌梗死面积与模型组相比明显缩小(P<0.01)。见表2。

(±s)

注:与假手术组比较,**P<0.01;与模型组比较,#P<0.05,##P<0.01;1 mm Hg=0.133 k Pa

(±s,%)

注:与假手术组比较,**P<0.01;与模型组比较,#P<0.05

2.3 刺五加对急性心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡的影响

假手术组仅发现少量心肌细胞凋亡,心肌细胞核呈蓝色,模型组可见大量心肌细胞凋亡,凋亡的心肌细胞核呈深浅不一的棕褐色(图1,见封三)。与模型组比较,高剂量AS组心肌细胞凋亡明显减少(P<0.01),说明AS可以抑制急性心肌缺血大鼠的心肌细胞凋亡(图2,见封三)。

2.4 刺五加对KCl介导的大鼠心肌细胞[Ca2+]i浓度的影响

正常细胞[Ca2+]i浓度较低,为绿色;缺血细胞[Ca2+]i浓度较正常细胞升高,为蓝绿色;缺血细胞中加入60 mmol/L KCl,[Ca2+]i浓度显著升高,荧光强度增大;当高剂量AS组细胞加入KCl后,荧光强度值升高,但升高的幅度明显低于缺血+KCl组(图3,见封三)。与正常细胞比较,缺血细胞[Ca2+]i浓度显著增高(P<0.01);与单纯缺血细胞比较,单纯缺血细胞加入KCl后,[Ca2+]i浓度显著增高(P<0.01);与缺血+KCl比较,高剂量AS组细胞加入KCl后,[Ca2+]i浓度显著降低(P<0.01)(图4,见封三)。

3 讨论

急性心肌梗死首先会导致心肌细胞的损伤[9],持续的心肌缺血会导致心衰并伴随心律失常,容易引起死亡。急性心肌缺血的治疗核心是保护心肌和降低死亡率。AS被用于治疗脑缺血、冠心病有一定的疗效,而有关其对心肌的保护作用和机制尚未明确。本实验通过建立心肌缺血模型,研究AS的心肌保护作用及可能机制。

本实验研究结果显示,AS能缩小左冠状动脉前降支结扎大鼠的心肌梗死范围,这是一个最可靠的心肌保护指标,从而说明在大鼠模型中AS有心肌保护作用。AS能提高心肌梗死大鼠的左心室收缩压,升高左室内压上升(下降)最大速率,降低左心室舒张末期压,说明AS具有改善缺血心肌心功能的作用。

AS对心肌有保护作用,但其对心肌缺血的保护机制尚未明确。缺血能导致细胞凋亡,并引发基因反应[10]。本实验结果显示,AS对心肌缺血所引发的心肌细胞凋亡具有明显的抑制作用,说明AS对缺血心肌的保护作用部分可能是由于减少了心肌细胞的凋亡所引起的。[Ca2+]i浓度升高能导致细胞异常,比如收缩功能障碍和细胞凋亡[11]。本研究共聚焦结果显示,AS可以降低由KCl介导的缺血心肌细胞[Ca2+]i浓度,说明其心肌保护作用可能与减少心肌缺血时的细胞内钙超载有关。

刺五加的现代研究 篇5

1 实验材料与仪器

RI-100型软胶囊机成套设备, 胶体磨, 高效液相色谱仪, 515泵, 2487紫外检测器 (美国Water公司) , N-2000色谱工作站 (浙江大学) ;刺五加软胶囊 (石家庄市华新药业有限责任公司提供) ;紫丁香苷对照品 (中国药品生物制品检定所, 批号:111574-200201) 。

2 方法与结果

2.1 处方和制备工艺

处方:刺五加浸膏150g, 聚乙二醇400 305g, 甘油适量。

制备工艺:将处方量的聚乙二醇400水浴加热至35℃, 徐徐加入处方量的刺五加浸膏, 充分搅拌混合均匀, 加入适量甘油, 混匀, 胶体磨研匀, 即得内容物, 压制成软胶囊, 制成1 000粒, 即得。

2.2 制剂处方筛选

基质的选择:软胶囊常用的基质一般有油溶性和水溶性二种, 即植物油类和PEG400类等。根据刺五加浸膏在这两种基质中的溶散状况, 选用PEG400作为基本基质。

由于PEG400对明胶囊壳有硬化作用, 且软胶囊久置, 明胶囊壳易脱水硬化, 常加入一定量的甘油可防止上述情况。分别配制含甘油5%、10%、15%、20%的PEG400溶液, 制成软胶囊, 放置10天, 观察囊壳的性状, 结果如表1。

由表1可看出, 当甘油在PEG400中的浓度达到15%时, 囊壳的性状无硬化改变, 效果较好, 所以选用含甘油15%的PEG400溶液为基质。

主料与基质配比的考察:考虑到软胶囊的装量和患者服用方便, 选择装量范围为0.40～0.60g之间, 结果见表2。

由以上试验结果, 确定选用装量为0.5g作为刺五加软胶囊的装量。

软胶囊囊皮配比的确定:根据大生产的实际经验以及有关文献资料, 软胶囊的囊壳一般由明胶、甘油、水按照一定比例制成, 我们经过试验考察选择明胶-甘油-水 (100∶35∶100) 为囊壳的处方。

2.3 样品制备

按上述工艺制备三批样品, 质量稳定, 表明该工艺可行。

2.4 含量测定

(1) 色谱条件。色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水 (20∶80) 为流动相;检测波长为265nm。理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于2 000。

(2) 溶液的制备。取同一批样品内容物, 研匀, 取相当于2粒的量, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入甲醇25mL, 密塞, 称定重量, 超声处理 (功率250W, 频率33kHz) 10min, 放冷, 再称定重量, 用甲醇补足减失的重量, 摇匀, 滤过, 取续滤液, 作为供试品溶液。取紫丁香苷对照品适量, 精密称定, 加甲醇制成每1mL含80μg的溶液, 作为对照品溶液。

(3) 方法学考察。标准曲线考察:精密称取紫丁香苷对照品适量, 按照对照品溶液的制备方法制备对照品溶液 (每1mL含80μg) 。然后分别精密吸取2.5, 5, 10, 20, 40μL注入液相色谱仪, 测定峰面积。以进样量为纵坐标, 以峰面积为横坐标, 计算回归方程并得到紫丁香苷的标准曲线, 得线性方程Y=4.863 6E-06X-0.055 81, r=0.999 9。

稳定性考察:取同一批供试品溶液, 依含量测定方法分别在放置0、1、2、3、4、5h测定其紫丁香苷含量, 结果RSD为0.73%。表明紫丁香苷溶液稳定性符合要求。

重复性考察:取同一批样品6份, 精密称定, 依含量测定方法分别测定其紫丁香苷含量, 结果RSD为0.67%, 表明该方法的重复性符合要求。

回收率考察:精密称取已知紫丁香苷样品适量, 置具塞锥形瓶中, 分别精密加入同体积的紫丁香苷对照品溶液 (1mL含1.05mg) , 照供试品溶液的制备方法制备, 取续滤液, 即得。分别配制6份样品测定, 计算紫丁香苷的加样回收率, 结果平均含量97.92%, RSD为0.62%, 表明紫丁香苷含测方法的加样回收率符合要求。

(4) 含量测定。分别取3批样品内容物适量, 按供试品溶液制备方法制备溶液并进样测定, 测得3批样品中紫丁香苷的含量分别为1.12、1.20、1.15mg/粒。

3 讨论

上述质量研究结果表明, 我公司研制的刺五加软胶囊的质量均符合本品质量标准有关要求, 说明本产品质量可控, 各项指标的检验方法合理。

摘要：目的:研究刺五加软胶囊的制备工艺和含量测定方法。方法:确定制备工艺, 采用高效液相色谱法对制剂中紫丁香苷的含量进行测定。结果:制备工艺稳定, 平均加样回收率为97.92%, RSD为0.62%;含量测定重复性良好。结论:制备工艺可适用于大生产, 高效液相色谱法稳定可靠, 可用于该制剂的质量控制。

关键词：刺五加,软胶囊,制备工艺,含量测定

参考文献

刺五加的现代研究 篇6

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2010年4月～2012年4月辽宁中医药大学附属医院收治的老年抑郁障碍患者76例作为研究对象,均经临床确诊,将其随机分为观察组与对照组,各38例。观察组中男21例,女17例;年龄66～78岁,平均(69.54±8.32)岁;病程1～6年,平均(2.42±0.92)年。对照组中男22例,女16例;年龄63～81岁,平均(67.43±5.43)岁;病程0.5～5年,平均(2.54±0.53)年。两组患者一般情况如性别、年龄、病程等比较差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。

1.2 治疗方法

本次治疗采用随机双盲方法,试验设计者、实施者、患者本例及结果统计者均对于具体分组均未知。对照组患者使用氟西汀20 mg/d及以运动疗法为主的康复治疗(1次/d,30 min/次,每周5次),以6周为1个疗程,观察患者病情变化。观察组患者使用刺五加配伍栀子进行治疗:生理盐水250 mL内加入刺五加注射液60 mL,每天静脉滴注1次;栀子用水煎至300～500 mL,每日服用2次,以6周为1个疗程,观察患者病情变化。

1.3 观察指标及判定标准

1.3.1 抑郁评分及治疗效果

采用汉密尔顿抑郁量表(HAMD,17项)分别于治疗前以及治疗后1、2、3周时对患者进行评分,并按照HAMD量表减分率≥75%判断为痊愈、≥50%判断为显效,≥30%判断为有效,<30%判断为无效,总有效率=(痊愈例数+显效例数+有效例数)/总例数×100%。

1.3.2认知功能评分

采用Loewenstein认知功能评定表分析患者接受治疗前后的认知功能状态,观察两组差异。三个物品分类测试项评分为1～5分;两个定向测试项评分为1～8分,其余测试项目分值均为1～4分,总分115分,分值越高患者的认知功能越好。

1.3.3 活动状态和生活质量评分

采用卡氏行为状态评分表(KPS)评估患者接受治疗后的活动状态,总分100分,每10分为1个等级,得分越高,活动状态越好;采用生活质量核心量表(QLQ-C30)进行测评,包括躯体功能、心理功能、社会功能和总体生活质量,得分越高表示生活质量越好。

1.4 统计学方法

使用统计学软件SPSS 18.0对所得数据进行统计学分析,计量资料采用均数±标准差(x±s)表示,组间比较采用t检验,计数资料采用百分率表示,组间比较采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者抑郁评分及治疗效果比较

观察组患者接受治疗后的抑郁评分[(11.32±2.54)分]及治疗总有效率(94.74%)均明显优于对照组患者[(18.43±3.43)分,76.32%](P<0.05),见表1。

2.2 两组患者治疗前后认知功能评分比较

观察组与对照组组内治疗前后比较差异均有统计学意义(均P<0.05);观察组患者接受治疗后的认知功能评分[(94.32±16.54)分]明显高于对照组患者[(70.12±13.64)分(P<0.05),见表2。

2.3 两组患者治疗前后活动状态和生活质量评分比较

观察组与对照组组内治疗前后KPS评分、躯体功能、心理功能、社会功能评分比较差异均有统计学意义(均P<0.05);观察组患者接受治疗后的活动状态和生活质量评分明显高于对照组患者(P<0.05),见表3。

3 讨论

随着社会进步,人民生活水平不断升高,医疗服务措施也逐步提升,人类平均寿命逐渐延长。据世界卫生组织统计,中国老年例口所占比例正在急速增长,上海、北京等大型城市已经进入老龄化社会,至2025年我国大于65岁的老年人所占比例可达15%以上。由于年龄的增长,人体各个器官逐渐老化,功能逐渐降低,导致老年人群多伴有不同程度的躯体或者精神障碍[2]。流行病学调查显示65岁以上老年人情绪障碍发病率占12%～25%。在大于60岁或65岁的情感障碍患者中焦虑心境恶劣,抑郁是常见的症状[3]。

注:与对照组比较,t=2.324,*P=0.038;χ2=2.463,#P=0.039

注:与本组治疗前比较,*P<0.05;与对照组比较,#P<0.05

注:与本组治疗前比较,*P<0.05;与对照组比较,#P<0.05

老年期抑郁障碍是指首次发病在老年期,以持久的抑郁心境为基础,以焦虑症状为突出特点,主要表现情绪低落沮丧、行动迟缓以及躯体不适感[4]。老年期抑郁障碍是一个躯体功能障碍,更是一个社会问题,因此其治疗比青壮年抑郁障碍患者更为复杂。老年期抑郁障碍患者的主要临床表现为焦虑、抑郁和激越的混合状态,兴趣索然,精力下降,自我评价低,自杀观念和行为,心境昼夜节律改变。抑郁障碍可严重降低老年例的生活治疗,严重者甚至导致老年人的自残自杀行为,必须采取积极的治疗措施[5]。

抑郁症属中医“郁病”范畴,多因情志所伤或素体偏弱所致,除了对患者采取积极的心理疏导、安排充实的生活之外,必须采取药物治疗,使用刺五加配伍栀子治疗老年抑郁障碍是目前使用较多的一种全新的治疗方法[6]。刺五加自古即被视为具有填精益髓及抗衰老作用的良药,属于补气药,具有补虚扶弱的功效,可来预防或治疗体质虚弱之症候,滋补强壮,延年益寿[7]。栀子含黄酮类栀子素、果胶、鞣质、藏红花素等,具有镇静、降压等作用[8]。

本研究主要分析刺五加配伍栀子治疗老年抑郁障碍的临床疗效,观察组患者接受治疗后的抑郁评分为(11.32±2.54)分,治疗总有效率为94.74%,明显优于对照组患者的抑郁评分[(18.43±3.43)分]和治疗总有效率(76.32%),可见使用刺五加配伍栀子可以有效改善患者症状,提高治疗总有效率;观察组患者接受治疗后的认知功能评分[(94.32±16.54)分明显高于对照组患者的(70.12±13.64)分,可见使用刺五加配伍栀子可以有效提高患者的认知功能;观察组患者接受治疗后的活动状态和生活质量评分均明显高于对照组患者,可见使用刺五加配伍栀子可以有效改善患者的生活状态及生活质量,岑柏春[9]也用加味栀子豉汤证实了这一论点。

综上所述,对于老年抑郁障碍患者,采取刺五加配伍栀子治疗可以有效提高治疗效果及认知功能,减轻抑郁评分,改善患者的生活状态及质量,具有积极的临床意义,值得推广使用。

摘要：目的 分析刺五加配伍栀子治疗老年抑郁障碍的临床疗效。方法 选取2010年4月～2012年4月收治的老年抑郁障碍患者76例作为研究对象,将其随机分为观察组与对照组,各38例。对照组患者使用常规治疗,观察组患者使用刺五加配伍栀子治疗,以6周为1个疗程。比较两组患者的抑郁评分及治疗效果、认知功能评分、活动状态和生活质量评分差异。结果 观察组接受治疗后的抑郁评分及治疗效果均明显优于对照组(P<0.05);观察组接受治疗后的认知功能评分明显高于对照组(P<0.05);观察组接受治疗后的活动状态和生活质量评分明显高于对照组(P<0.05)。结论 刺五加配伍栀子治疗老年抑郁障碍可以有效降低患者的抑郁评分,提高治疗效果,改善患者认知功能、活动状态及生活质量。

关键词：刺五加,栀子,老年抑郁障碍

参考文献

[1]李士杰,陆德宝,张桂茹,等.艾司西酞普兰与文拉法辛治疗老年抑郁障碍的疗效比较[J].中国临床药学杂志,2012,21(1):30-31.

[2]张振兰,姚绍敏,王岚.认知行为干预对老年抑郁障碍自杀态度影响的研究[J].护士进修杂志,2012,27(18):1641-1642.

[3]朱喜红.舍曲林与帕罗西汀治疗老年期抑郁障碍的疗效对照[J].中国临床研究,2010,23(2):117-118.

[4]玄桂红,刘龙发.西酞普兰治疗老年抑郁障碍临床观察[J].吉林医学,2010,31(7):952-953.

[5]于素静,芦志娟,尹同燕.中医理论指导下的老年抑郁障碍护理[J].世界中西医结合杂志,2011,6(4):338-339.

[6]高雅,颜红.颜红教授治疗抑郁症经验[J].长春中医药大学学报,2012,28(1):57-58.

[7]张玉军,齐增平,王玉强,等.银杏与刺五加注射液联合治疗梗死后症的临床观察[J].山西医药杂志,2012,41(4):396-397.

[8]张超云,谢东霞,毛秉豫,等.栀子豉汤治疗抑郁症有效部位的筛选研究[J].中华中医药学刊,2011,29(11):2493-2494.

刺五加嫩枝扦插繁殖技术研究 篇7

我单位从2005年开始针对当时刺五加种子繁育关难以突破的情况, 开展了刺五加嫩枝扦插实验。通过五年来不断摸索, 掌握了刺五加嫩枝扦插繁殖的各个技术环节, 使刺五加嫩枝扦插生根成活率得到稳定和提高。总结几年来的试验情况, 结合2010年的试验情况, 就实际操作过程中必须注意和把握的环节提出来以便和广大读者交流。

1 实验目的

通过模拟刺五加野生环境, 利用促生根剂处理插穗, 选择不同时期、不同基质进行刺五加嫩枝扦插对比实验, 研究刺五加嫩枝扦插的最佳扦插时期和最佳基质, 掌握刺五加嫩枝扦插繁殖技术从采穗、处理、扦插、管理等全过程的各项技术指标, 达到规模化繁殖刺五加苗木的能力。

2 实验材料与处理方法及目的材料1、河沙、腐殖土、炉灰渣

处理方法:作床后用500倍液的多菌灵消毒。目的:防止扦插苗感染切口处腐烂。

材料2、塑料大棚、遮阴网

处理方法:面积160m2, 塑料大棚高度以人在内作业便为宜, 遮阴网用铁丝罩在塑料上方50cm处。

目的:塑料大棚用来保持空气的潮湿度, 遮阴网用来防止高温。材料3、微喷设备

处理方法:铺设于苗床内, 外与水源相接。

目的:作业时喷出雾化效果, 保持插穗叶面不断水珠, 防止扦插苗过度蒸发枯萎死亡。

材料4、插穗:选择当年新抽出处于半木质化的刺五加嫩茎, 每天早10:00之前采回。

处理方法:

a.选择髓心无虫害的嫩茎。

b.保留2个芽苞, 从底芽苞处用锋利的剪刀斜剪成长12-18cm的插穗。芽苞处营养贮存丰富, 易在此处生根。

c.顶端保留2个叶柄, 叶片剪去2/3, 减少水份蒸发。

d.剪后泡在50ppm的ABT生根粉溶液中6-8小时, 浸深以10cm为宜。

3 主要管理措施

3.1 每次扦插应在下午4:

00以后进行, 这时气温下降, 水分蒸发减少, 一晚上的时间可以使扦插苗与基质之间有个充份的适应过程。

3.2 扦插深度应在12 cm左右, 尽量使2个芽苞都在基质中, 有利于营养的贮藏, 促进生根。

3.3 扦插初期保证充足的水份

插穗主要是利用光和作用生成养份传导至根部促进生根, 刺五加扦插苗初期无根系, 只能靠水份维持其自身营养的需要。

3.4 扦插后至生根前每天尤其是上午10:

00-下午3:00之间高温时期, 一定要保持插穗叶面不断水珠, 防止扦插苗水份过度蒸发萎蔫而死。

3.5 每次喷水量以水珠布满叶面为宜, 设定喷水的间隔时间以每次喷完水后开始至叶面水珠完全蒸发完时为止。

3.6 扦插管理10天后, 喷水量、次数应该适量减少, 从而提高基质温度, 利于生根。

3.7 棚内最高温度要控制在32℃以内, 潮湿度控制在75%以上,

基质温度因前期喷水温度一般在20-22左右, 喷水量减少后基质温度可在24-26℃之间, 通过几年的观察对比得出刺五加扦插苗生根的最佳温度应保持在22-25℃之间。

4 试验结果分析

4.1 不同基质的对比试验证明在同一时期同一环境下, 不同基

质的生根率是不一样的, 河沙和腐殖土的生根率要明显高一些, 相对来讲腐殖土要稳定一些;炉灰渣不稳定, 生根率明显偏低。

4.2 不同时期的扦插对比实验表明刺五加嫩枝扦插的生根率随

时间的推后和刺五加木质化的加强而降低, 刺五加嫩枝扦插的最佳时间是在6月15日左右, 刺五加将处于半木质化状态时。

4.3 生根时间及生根方式的对比试验表明在同一环境下, 河沙的生根时间最短, 约15-20天左右, 且根系发达;

另外通过试验可以发现, 刺五加扦插苗在腐质土中生根方式以愈伤生根为主, 而在河沙这种基质中则以愈伤生根和皮刺生根两种方式并存。

5 结论

通过刺五加不同时期、不同基质的扦插对比观察试验, 我们掌握了刺五加嫩枝扦插的最佳时期在6月10日-6月20日, 刺五加插穗处于半木质化时;同时可以看出在相同的扦插环境和管理措施下, 河沙、腐殖土生根成活率及根系发达程度好于炉灰渣。河沙与腐殖土相比无显著差异。但腐殖土材料来源有局限性, 成本较高;而河沙则具有生根快、同期短、材料成本低取材方便的特点, 所以河沙是最适合推广的基质, 腐殖土次之。

综上所述, 刺五加嫩枝扦插繁殖只要控制好扦插时期、扦插基质、水分、温度、潮湿度等几个外在因素指标, 就能取得成功。

更正

特此更正!

摘要：本文围绕刺五加嫩枝扦插繁殖技术结合多年的实践经验提出自己观点, 对指导实际操作、解决频危药用植物刺五加资源现状具有重要的意义。

关键词：刺五加,嫩枝扦插,繁殖

参考文献

[1]史玉群.全光照喷雾嫩枝扦插育苗技术[M].北京:中国林业出版社, 2001.

[2]王涛.植物扦插繁殖技术[M].北京:北京科学技术出版社, 1989.

[3]臧润国, 祝宁.刺五加繁殖试验.生态科学, 1996.15 (2) :39-4.

[4][日]森下义郎, 大山浪雄著, 李云森译, 植物扦插理论与技术[M].北京:中国林业出版社.

[5]傅琳, 董文楚, 郑耀泉等.微灌工程技术指南[M].北京:水利电力出版社, 1998.

刺五加根的抗炎活性成分研究 篇8

关键词：刺五加根,化学成分,抗炎活性,一氧化氮

刺五加Acanthopanax senticosus(Rupr.et Maxim.)Harms为五加科五加属植物,别名五加皮、刺拐棒;刺五加含有酚苷类、黄酮类、脂肪酸类、多糖类及各种微量元素、氨基酸等化学成分;具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、抗损伤及抗疲劳作用,可治疗心脑血管疾病、糖尿病、神经衰弱、高脂血症、低血症等疾病[1,2,3,4,5,6,7]。本研究以脂多糖(LPS)和干扰素(IFN-γ)诱导的单核巨噬细胞RAW264.7作为细胞炎症模型,考察了刺五加根提取物对一氧化氮(NO)释放抑制活性,并从中分离得到7个化合物,经TLC与波谱解析鉴定为紫丁香苷、刺五加苷B1、刺五加苷E、芝麻素、胡萝卜苷、β-谷甾醇和香草酸。

1 仪器与试药

VARIAN 600 MR超导核磁共振波谱仪(TMS为内标,美国VARIAN公司),熔点仪(北京科仪电光仪器厂),酶联免疫检测仪(Model 3550 Microplate Reader,BIO-RAD)。凝胶Sephadex LH-20(美国GE公司),HPD100大孔吸附树脂(沧州宝恩吸附材料科技有限公司),ODS(50~70μm),实验所用试剂规格均为分析纯。RAW264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(ATCC TIB-71)购自上海中国科学院细胞库,脂多糖(美国Sigma公司)、干扰素-γ(美国Genzyme/Techne公司)。刺五加根购自贵州益佰制药股份有限公司,由苏州大学刘春宇教授鉴定为五加科植物刺五加A.senticosus Harms的干燥根。

2 方法与结果

2.1 NO释放抑制活性测定

RAW 264.7细胞浓度8×104个/m L,每孔100μL接种于96孔培养板,设立空白对照组、模型对照组、阳性对照组(100、30μg/m L)及给药组(100、30、10、3μg/m L),每个浓度设3个复孔,在5%CO2和37℃下培养24 h,加入LPS(终浓度为100 ng/m L),IFN-γ(终浓度为0.33 ng/m L),样品DMSO溶液(溶解样品的DMSO相对于培养基的含量<0.5%),培养24 h[8]。取上清液100μL,分别加入50μL Griess试剂A[1%的磺胺磷酸溶液(5%)]和Griess试剂B(0.1%的萘基乙烯基二胺),遮光反应10 min,用酶联免疫检测仪在570 nm下测定吸光度,计算NO生成抑制率。

2.2 提取分离

称取刺五加根1000 g,8000 m L 60%乙醇回流提取2 h,重复3次,合并提取液,浓缩至浸膏。将浸膏水溶解,滤纸过滤,滤液经HPD100大孔吸附树脂,依次以蒸馏水、20%乙醇、30%乙醇、75%乙醇洗脱。20%乙醇洗脱部位经硅胶柱层析;30%乙醇部分经硅胶柱层析、ODS柱层析、凝胶柱层析;75%乙醇部分经硅胶柱层析、ODS柱层析;最终分离得到7个化合物,化合物1(799 mg)、化合物2(8 mg)、化合物3(41 mg)、化合物4(13 mg)、化合物5(9 mg)、化合物6(10 mg)和化合物7(61 mg)。

2.3 刺五加提取物对巨噬细胞产生NO的影响

刺五加根60%乙醇提取物对LPS和IFN-γ诱导的单核巨噬细胞RAW264.7产生NO的抑制作用呈剂量依赖关系,浓度为100μg/m L,抑制率达到(59.96±4.57)%,浓度为30μg/m L,抑制率为(20.02±4.22)%,浓度为10μg/m L,抑制率为(8.81±5.29)%,浓度为3μg/m L,(6.36±3.52)%,n=3。阳性对照组浓度为100μg/m L,抑制率达到(94.73±2.05)%,浓度为30μg/m L,抑制率为(62.70±5.08)%,n=3。刺五加根60%乙醇提取物在浓度为100μg/m L时,与30μg/m L浓度的阳性对照组对NO产生的抑制能力相当。

2.4 化合物结构鉴定

将化合物1~7的波谱数据进行综合分析,并与参考文献、对照品比对,最终确定结构见图1。化合物1~7的性状与主要波谱数据归属如下:

化合物1:白色针晶(甲醇),mp 190.0~192.0℃。三氯化铁-铁氰化钾显色反应呈阳性,Molish反应呈阳性。1H-NMR(600 MHz,DMSO-d6),δ:6.69(1H,d,J=2.0 Hz,H-3),6.69(1H,d,J=2.0 Hz,H-5),6.44(1H,d,J=15.8 Hz,H-7),6.41(1H,d,J=15.8 Hz,H-8),4.07(2H,m,H-9),4.81(1H,d,J=7.9 Hz,glc-H-1'),3.17~3.55(6H,m),δ3.73(6H,s,2×OCH3)。13C-NMR(125 MHz,DMSO-d6),δ:134.4(C-1),153.25(C-2,6),105.0(C-3,5),133.1(C-4),129.0(C-7),130.7(C-8),61.4(C-9),103.1(C-1'),74.7(C-2'),77.8(C-3'),70.5(C-4'),77.1(C-5'),62.0(C-6'),56.9(2×OCH3)。上述波谱数据与文献[9]报道的紫丁香苷数据一致,与紫丁香苷对照品薄层比较,二者的薄层层析行为一致,且与对照品混合熔点不下降,鉴定化合物1为紫丁香苷。

化合物2:无色针晶(甲醇),mp 204.0~205.0℃。1H-NMR(600 MHz,DMSO-d6),δ:7.96(1H,d,J=9.5 Hz,H-4),7.13(1H,s,H-5),6.40(1H,d,J=9.5 Hz,H-3),5.16(1H,d,J=7.0 Hz,glc-H-1'),3.82(3H,s,OCH3),3.91(3H,s,OCH3)。13C-NMR(125 MHz,DMSO-d6),δ:159.8(C-2),114.7(C-3),144.4(C-4),105.5(C-5),149.4(C-6),141.6(C-7),140.2(C-8),142.4(C-9),114.5(C-10),102.1(C-1'),74.1(C-2'),77.5(C-3'),69.8(C-4'),76.5(C-5'),61.2(C-6'),56.5(OCH3),60.8(OCH3)。上述波谱数据与文献[10]报道的刺五加苷B1数据一致,鉴定化合物2为刺五加苷B1。

化合物3:白色粉末(甲醇),10%H2SO4试剂呈现蓝色,Molish反应呈阳性。1H-NMR(600 MHz,DMSO-d6),δ:6.62(4H,s,H-2',6',2'',6''),4.86(2H,d,J=5.4 Hz,glu-1,glu-1'),4.60(2H,d,J=4.0 Hz,H-7,7′),3.11(2H,m,H-8,8'),3.80,4.13(H-9,9'),3.81~4.16(12H,m),3.73(12H,s,4×OCH3)。13C-NMR(125 MHz,DMSO-d6),δ:53.6(C-1,5),85.1(C-2,6),71.3(C-4,8),133.7(C-1',1''),104.2(C-2',6',2'',6''),152.6(C-3',5',3'',5''),137.1(C-4',4''),102.7(glc-1',1''),74.2(glc-2',2''),76.5(glc-3',3''),69.9(glc-4',4''),77.2(glc-5',5''),60.9(glc-6',6''),56.4(4×OCH3)。上述波谱数据与文献[11]报道的刺五加苷E数据一致,与刺五加苷E对照品薄层比较,二者的薄层层析行为一致,且与对照品混合熔点不下降,鉴定化合物3为刺五加苷E。

化合物4:白色粉末(甲醇),Molish反应呈阳性。IR(KBr):3420,2937,2870,1465,1380,1105,1060 cm-1。与胡萝卜苷对照品薄层比较,二者的薄层层析行为一致,且与对照品混合熔点不下降,鉴定化合物4为胡萝卜苷。

化合物5:白色粉末。将其与β-谷甾醇对照品对照品薄层比较,二者的薄层层析行为一致,且与对照品混合熔点不下降,鉴定化合物5为β-谷甾醇。

化合物6:白色粉末。1H-NMR(600 MHz,DMSO-d6),δ:3.00(2H,m,H-8,8'),3.75(2H,dd,J=9.2,3.3 Hz,H-9a,9'a),4.11(2H,dd,J=8.8,6.6 Hz,H-9e,9e'),4.63(2H,d,J=4.0 Hz,H-7,7'),5.99(4H,s,2×OCH2O),6.92(2H,s,H-2,2'),6.83(2H,d,J=8.1 Hz,H-6,6'),6.87(2H,d,J=7.7 Hz,H-5,5')。13C-NMR(125 MHz,DMSO-d6),δ:147.4(C-4,4'),146.5(C-3,3'),135.5(C-1,1'),119.4(C-6,6'),108.0(C-5,5'),106.6(C-2,2'),84.9(C-7,7'),71.0(C-9,9'),53.7(C-8,8'),100.9(2×OCH2O)。上述波谱数据与文献[12]报道的芝麻素数据一致,鉴定化合物6为芝麻素。

化合物7:白色晶体(甲醇),mp 63.0~64℃。1H-NMR(600MHz,DMSO-d6),δ:6.82(1H,d,J=8.1 Hz,H-5),7.42(1H,m,H-2,6),3.78(3H,s,OCH3),δ9.86(1H,s,OH)。13C-NMR(125 MHz,DMSO-d6),δ:167.2(-COOH),151.0(C-4),147.1(C-3),123.4(C-6),121.5(C-1),114.9(C-2),112.6(C-5),55.5(OCH3)。上述波谱数据与文献[13]报道的香草酸数据一致,鉴定化合物7为香草酸。

3讨论

NO是从血管内皮发现的小分子,一氧化氮合酶(NOS)催化L-精氨酸产生的5个电子的氧化物;NO既兼有第二信使和神经递质的功能,又是效应分子,介导和调节多种生理和病理过程;急慢性炎症的发生均与NO有关系,抑制NO的生成被认定为治疗炎症疾病比较有前景的方法[14]。文献报道,刺五加水提物具有抗炎作用,可能通过抑制活化的巨噬细胞产生炎症介质发挥其抗炎功效[15]。巨噬细胞中含有诱导型NOS,在LPS、IFN-γ等刺激下诱导表达可以催化精氨酸产生NO。因此,采用LPS和IFN-γ诱导的单核巨噬细胞RAW264.7作为细胞炎症模型,考察刺五加醇提物对单核巨噬细胞RAW264.7产生NO的影响。实验结果表明,刺五加根的醇提物对LPS和IFN-γ诱导的单核巨噬细胞RAW264.7产生NO具有抑制作用,从中分离得到紫丁香苷、刺五加苷B1、刺五加苷E、芝麻素等苯丙素类成分。文献报道,芝麻素等苯丙素类成分具有抑制NO生成和抗炎的作用,此类化合物在抗感染、抗心血管疾病等方面具有显著的活性[16],与刺五加的功效、临床应用[1,2,3,4,5,6,7]比较一致。因此,此类化合物可能是刺五加的抗炎药效成分之一,对此类化合物的深入研究将有助于人类更深入地理解刺五加的药效物质基础。