结核分枝杆菌（共10篇）
结核分枝杆菌 篇1
对肺结核患者的抗结核治疗原则为早期、联用、适量、规律、全程, 了解结核患者对结核药物的敏感性, 选择合理的药物及剂量, 是非常必要的。同时结核患者的耐药状况也是不容忽视的, 为了解本市结核患者的耐药状况, 寻求有效、合理的治疗方案, 我们选择常规的9种药物-异烟肼 (INH) 、利福平 (RFP) 、链霉素 (SM) 、吡嗪酰胺 (PZA) 、乙胺丁醇 (EMB) 、对氨基水杨酸 (PAS) 、丙硫异烟胺 (1321TH) 、卡那霉素 (KM) 、卷曲霉素 (CPM) , 对临床分离出的结核分枝杆菌菌株进行药敏试验研究, 现将结果报告如下。
1资料与方法
1.1 资料
1.1.1 一般资料
本试验样本病例来自于大庆市疾病预防控制中心结核病防治科, 市第二人民医院, 龙凤区、萨尔图区、让胡路区疾病预防控制中心结核病防治科2010年-2012年门诊有低热、倦怠、食欲不振、咳嗽、咯痰及少量咯血等症状[1], 胸透X线摄片显示肺结核征象、两次痰标本涂片镜检抗酸杆菌阳性[2]。包括初治传染性肺结核患者和复治传染性肺结核患者。在患者进行抗结核治疗之前, 采集清晨第一口深咳痰盛无菌痰盒内送检[3]。
1.1.2 试剂
酸性罗氏培养基由杭州天和微生物试剂有限公司生产。结核分枝杆菌药敏培养基 (比例法) 由广州凯升生物科技有限公司生产。
1.2 方法
1.2.1 培养
取确诊肺结核患者的深咳痰1 ml加2%氢氧化钠2～4 ml, 室温30 min, 其间振荡2～3次, 促痰液化, 将液化后的痰液混匀, 用来菌的刻度毛细吸管取0.1 ml缓缓均匀地接种在酸性罗氏培养基斜面上, 每份痰液标本接种二次培养基, 接种完毕置37℃恒温培养箱内培养。
1.2.2 药敏试验
将所有培养出的阳性标本待测菌液制备成10～2 g/L和10～4 g/L菌悬液, 分别用22SWG标准接种环蘸取1环 (即0.01 ml) 的菌液, 用划线法将10～2 g/L菌悬液均匀接种分别含异烟肼 (INH) 、利福平 (RFP) 、链霉素 (SM) 、吡嗪酰胺 (PZA) 、乙胺丁醇 (EMB) 、对氨基水杨酸 (PAS) 、丙硫异烟胺 (1321TH) 、卡那霉素 (KM) 、卷曲霉素 (CPM) 药敏培养基表面, 将10～4 g/L菌悬液接种于对照培养基表面, 应注意是菌液尽可能均匀分散于培养基斜面。接种后培养基置于37℃培养, 4周后读菌落数, 计算耐药百分比, ≤1%为敏感, >1%为耐药。
耐药率 (%) =含药培养基上菌落数/对照培养基上菌落数×100%
2结果
结核分枝杆菌的耐药情况 在总共分离培养出的96株结核分枝杆菌中, 共有41株产生耐药, 来自初治肺结核患者的菌株为7株, 占17%, 来自复治肺病人的菌株为34株, 占82.9%, 结核病人总耐药率为42.7%, 其中耐多药菌株为29例, 占30.2%, 具体内容见表1。
3讨论
结核分枝杆菌本引起慢性传染性疾病, 可以累及全身各个器官, 其中以肺结核最为常见。在结核病防治工作中, 首先要积极开展对未受感染的新生儿、儿童和青少年 进行卡介苗接种。此外对结核病患者进行早期、联用、适量、规律、全程的科学抗结核治疗是唯一的原则。合理的抗结核药物治疗可以达到治愈结核病, 痰中带菌转阴性, 从而消除传染源。目前在许多国家和地区耐药结核病 (DR-TB) 特别是耐多药结核病 (MDR-TB) 的流行严重, 正在使搞结核治疗面临新的挑战。通过本次实验, 在筛选出的96株结核分枝杆菌对9种常规抗结核药物 (INH、RFP、SM、PZA、EMB、PAS、1321TH、KM、CPM) 总耐药率为42.7%, 其中耐多药结核分枝杆菌菌株占30.2%。从结果看出, 在国家防痨规划的抗结核治疗药物中RFP+INH占20.7%, RFP+INH+PZA占13.8%, EMB+RFP+INH+PZA占10.3%, SM +RFP+INH +PZA占6.9%, TH+INH占20.7%, EMB+INH占13.8%, SM+INH+ PZA占13.8%。
本试验结果显示, 在本市结核分枝杆菌对国家方案几种药物 (INH、RFP、 SM、EB、PAZ等) 都有不同程度的耐药, 并有逐渐向多耐药发展趋势。产生耐药情况的原因很复杂, 既有生物因素, 也存在着人为因素。在我们调查中发现, 在复治的传染性肺结核患者中, 大部分人都有未严格按照医嘱的要求坚持服药的情况, 主要原因是, 对药物的副作用耐受性差, 或惧怕药物的副作用, 不肯坚持足量足疗程, 在临床症状稍稳定时中断了服药, 或阶段性中断服药。所以在抗结核病治疗过程中, 做好宣传和监督作用, 让患者遵从医嘱的要求进行抗结核化疗是非常重要的。
摘要：目的 了解本市结核分枝杆菌耐药状况, 为选择更为有效、科学、合理的抗结核病药物治疗提供依据。方法 对本市区筛选初诊疼涂片阳性的患者, 在抗结核治疗前, 取经液化痰液接种于酸性罗氏培养基培养分离结核分枝杆菌, 然后接种于结核分枝杆菌药敏培养基 (比例法) 进行药敏试验。结果 96例药敏试验中, 结核分枝杆菌总耐药菌株为41例, 总耐药率为42.7%, 其中耐多药菌株29株, 耐药率为30.2%。结论 本市结核患者已出现耐药趋势, 且有向耐多药发展, 而在没有出现更有效新药替代已产生耐药的药物前, 必须坚持科学合理的抗结核病药物治疗原则, 从而减少传染性肺结核患者的复治。
关键词：结核分枝杆菌,药敏试验,抗结核病治疗,耐多药菌株
参考文献
[1]陆再英.内科学第7版北京人民卫生出版社, 2008.
[2]中国疾病预防控制中心.传染性肺结核诊断标准及处理原则.GB15987-1995.
[3]中国防痨协会.结核病诊断细菌学检验规程.北京:卫生部结核病控制中心, 1998.
结核分枝杆菌 篇2
非结核分枝杆菌是指结核分枝杆菌、牛分枝杆菌与麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌,原称为非典型分枝杆菌,是自然界广泛存在的一种条件致病菌,存在于水、土壤和气溶胶中,可导致免疫力低下的患者发生感染。尤其是注射部位易造成非结核分枝杆菌感染暴发，对患者健康造成危害，因此应采取以下措施加强防控。
一、加大对消毒供应中心、治疗室、检验科等医院感染重点部门的管理力度，贯彻落实《医院感染管理办法》、《消毒管理办法》等有关规定，健全制度，细化工作规范，确保医疗安全。
二、加强医疗用品的消毒灭菌工作。对耐高温、耐高湿的医疗器械、器具和用品应当首选压力蒸汽灭菌，尽量避免使用液体化学消毒剂进行浸泡灭菌。使用的消毒药械、一次性医疗器械、器具和用品应当符合国家有关规定。一次性使用的医疗器械、器具和用品不得重复使用。进入人体组织和无菌器官的相关医疗器械、器具及用品必须达到灭菌水平，接触皮肤、粘膜的相关医疗器械、器具及用品必须达到消毒水平。
三、规范使用医疗用水、无菌液体和液体化学消毒剂。各种抽吸的输注药液或者溶媒等开启后应当注明时间，规范使用，并避免患者共用。无菌液体开启后超过24小时不得使用。需要使用液体化学消毒剂时，要保证其使用方法、浓度、消毒时间等符合有关规定。同时加强对使用中的液体化学消毒剂的浓度监测。
四、加强医院感染监测工作。及时发现早期诊断感染病例，特别是医疗机构发生聚集性、难治性手术部位或注射部位感染时，应当及时进行非结核分枝杆菌的病原学检测及抗菌药物敏感性、耐药模式的监测，根据监测结果指导临床及时应用抗菌药物，有效控制非结核分枝杆菌医院感染。
五、加强对医务人员的培训。特别要加大对一线医务人员非结核分枝杆菌医院感染预防与控制措施的培训力度，强化防控意识，加大对消毒灭菌、无菌技术操作、手卫生及隔离等措施的落实力度，提高医务人员有效预防和控制医院感染的工作能力和处置能力，切实保障医疗安全。
结核分枝杆菌 篇3
【摘要】 目的：了解本地区结核分枝杆菌临床耐药性的特点以及对7种抗结核药物的药敏检测情况，为临床制定合理的治疗方案提供更多的参考依据。方法：对收集的广东顺德区555例结核患者的结核分枝杆菌用比例法对所用的7种药：异烟肼（INH，H）、乙胺丁醇（EMB，E）、链霉素（SM，S）、利福平（RFP，R）、阿米卡星（AKW，A）、左氧氟沙星（LOF，L）、对氨基水杨酸（PAS，P）进行敏感性试验，分析它们的耐药性。结果：总耐药率为33%，耐药频度由高到低依次为SM198%、INH128%、LOF86%、RFP45%、EMB36%、PAS31%、AKW14%。结论：本地结核菌的耐药性相比其他地区略偏高，应进一步加强对结核杆菌的耐药性监测以便为临床制定更合理的治疗方案提供参考依据。
【关键词】 结核分枝杆菌；耐药性；临床研究
【中图分类号】R521【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）12-0082-02
结核病是一种重大的传染病，严重威胁着人类的生命健康，同时也是死亡率最高的一种疾病[1]。随着耐药性结核病不断地呈现上升趋势，人类的生命安全正受到严重考验，中国结核病的总数位居世界前列，是严重的灾区。结核病的耐药性严重影响了我国在控制结核病方面的水平。对结核杆菌的耐药性检测，不仅可以为临床用药提供方向，还可以评价地区控制结核病的成功与否，同时也能够为未来用药指向正确的方向[2]。据此，收集的广东顺德区555例结核患者的结核分枝杆菌临床分离株进行药敏试验，分析本地结核菌的耐药性，为临床制定合理的治疗方案提供更多的理论参考依据，现将具体的情况报道如下。
3讨论
结核病是严重危害人民群众健康的呼吸道传染病。根据世界卫生组织的统计，我国是全球22个结核病流行严重的国家之一，同时也是全球27个耐多药结核病流行严重的国家之一。目前我国结核病年发病人数约为130万，占全球发病的14.3%，位居全球第2位。为了及时了解结核病的疫情和耐药基本情况，开展结核病耐药监测具有重要意义。根据2013年本地区的结核分枝杆菌药敏试验结果显示，我区结核病的总耐药率为33%（183/555），略高于全国27.8%的水平；总耐多药率为34%（19/555），远低于全国107%水平[3]，也明显低于全国第五次结核病流行病学抽样调查的耐多药率68%[4]的水平。这可能与不同地方菌株的耐药性不同有关。治疗管理不规范及患者治疗遗依从性差，长期被认为是最直接影响到结核病患者并使之产生耐药性的因素。结核菌对7种药物的耐药率（频度）由高到低依次为SM198%、INH128%、LOF86%、RFP45%、EMB36%、PAS31%、AKW14%。在四种一线抗结核药物中，以SM的耐药率最高，其次是INH、RFP，这和报道一致[5]，可能与早期的化疗方案是以SM、INH的组合为主，应用较普遍有关，因此在结控项目中已不再将SM应用于初治病人。至于RFP由于其抗菌谱广，在早期也曾是普遍单一使用，从而引起耐药性的增加。对于新药PAS以及AKW，它们的耐药性很低，较为敏感，提示在治疗中可以有选择性地选用这类药物。
坚持联合用药，合理选择用药和制定化疗方案是治疗耐多药结核病的重要原则[6]，在制定的方案中，应该至少包含两种以上的抗结核药物，在巩固期至少需要3种以上的药物，对于强化期，最好用5～6种药物。左氧氟沙星作为一种新型、高效率的抗菌素，不仅是广谱抗菌药物，同时还具备良好的抗结核作用，能够抑制DNA旋转酶A亚单位，以此来抑制细菌DNA的复制以及转录，从而达到抗菌作用。另外，左氧氟沙星与其他抗结核药之间没有出现交叉耐药，是目前医学上治疗耐多药结核的重要药物之一。从药敏结果可知，左氧氟沙星的耐药率较高，可能是由滥用氟喹诺酮类药物引起的，应引起足够的重视。阿米卡星在试管中对结核菌是一种高效杀菌药，通过观察，以阿米卡星联合左氧氟沙星组成的用药方案，协同效果好，而且在临床中副作用也很少，是治疗结核病的有效方案之一[7]。
综上所述，我区2013年结核病的总耐药率略高于全国278%水平。为减少和防止耐药结核病的发生，一方面在技术上要建立一种更快更准确的药敏试验方法，如引进全自动快速分枝杆菌培养鉴定药敏仪，为临床患者尽早提供合理的化疗方案；另一方面在管理上必需加强结核病患者归口管理，实行结核药物统一管理和推行全程督导化疗。
参考文献
[1] 朱长太，胡忠义.结核分枝杆菌耐药性检测技术进展[J].中华结核和呼吸杂志，2011，34（10）： 768-770.
[2] 吴龙章，潘美玉，刘欣，等. 结核分枝杆菌对对硝基苯甲酸耐药性的研究[J].中华结核和呼吸杂志，2011，34（2）： 117-119.
[3] 全国结核病流行病学抽样调查技术指导组.第四次全国结核病流行病学抽样调查报告[J].中华结核呼吸杂志，2002，25（1）：3-7.
[4] 全国第五次结核病流行病学抽样调查技术指导组.2010年全国第五次结核病流行病学抽样调查报告[J].中国防痨杂志，2012，34（8）：123-125.
[5] 钟球，钱明，李建伟，等.广东省WHO结核病耐药监测研究[J].中国防痨杂志，2001，23（1）：5-8.
[6] 王湘，张丽霞.2008-2010年结核分枝杆菌的耐药性分析[J].中华医院感染学杂志，2011，21（20）： 4394-4395.
[7]杨彩娥，王琰，雷红，等. 结核分枝杆菌利福平依赖株与耐药株的耐药状况比较[J]. 中国防痨杂志，2011，33（3）： 9.
（收稿日期：20140428）
【摘要】 目的：了解本地区结核分枝杆菌临床耐药性的特点以及对7种抗结核药物的药敏检测情况，为临床制定合理的治疗方案提供更多的参考依据。方法：对收集的广东顺德区555例结核患者的结核分枝杆菌用比例法对所用的7种药：异烟肼（INH，H）、乙胺丁醇（EMB，E）、链霉素（SM，S）、利福平（RFP，R）、阿米卡星（AKW，A）、左氧氟沙星（LOF，L）、对氨基水杨酸（PAS，P）进行敏感性试验，分析它们的耐药性。结果：总耐药率为33%，耐药频度由高到低依次为SM198%、INH128%、LOF86%、RFP45%、EMB36%、PAS31%、AKW14%。结论：本地结核菌的耐药性相比其他地区略偏高，应进一步加强对结核杆菌的耐药性监测以便为临床制定更合理的治疗方案提供参考依据。
【关键词】 结核分枝杆菌；耐药性；临床研究
【中图分类号】R521【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）12-0082-02
结核病是一种重大的传染病，严重威胁着人类的生命健康，同时也是死亡率最高的一种疾病[1]。随着耐药性结核病不断地呈现上升趋势，人类的生命安全正受到严重考验，中国结核病的总数位居世界前列，是严重的灾区。结核病的耐药性严重影响了我国在控制结核病方面的水平。对结核杆菌的耐药性检测，不仅可以为临床用药提供方向，还可以评价地区控制结核病的成功与否，同时也能够为未来用药指向正确的方向[2]。据此，收集的广东顺德区555例结核患者的结核分枝杆菌临床分离株进行药敏试验，分析本地结核菌的耐药性，为临床制定合理的治疗方案提供更多的理论参考依据，现将具体的情况报道如下。
3讨论
结核病是严重危害人民群众健康的呼吸道传染病。根据世界卫生组织的统计，我国是全球22个结核病流行严重的国家之一，同时也是全球27个耐多药结核病流行严重的国家之一。目前我国结核病年发病人数约为130万，占全球发病的14.3%，位居全球第2位。为了及时了解结核病的疫情和耐药基本情况，开展结核病耐药监测具有重要意义。根据2013年本地区的结核分枝杆菌药敏试验结果显示，我区结核病的总耐药率为33%（183/555），略高于全国27.8%的水平；总耐多药率为34%（19/555），远低于全国107%水平[3]，也明显低于全国第五次结核病流行病学抽样调查的耐多药率68%[4]的水平。这可能与不同地方菌株的耐药性不同有关。治疗管理不规范及患者治疗遗依从性差，长期被认为是最直接影响到结核病患者并使之产生耐药性的因素。结核菌对7种药物的耐药率（频度）由高到低依次为SM198%、INH128%、LOF86%、RFP45%、EMB36%、PAS31%、AKW14%。在四种一线抗结核药物中，以SM的耐药率最高，其次是INH、RFP，这和报道一致[5]，可能与早期的化疗方案是以SM、INH的组合为主，应用较普遍有关，因此在结控项目中已不再将SM应用于初治病人。至于RFP由于其抗菌谱广，在早期也曾是普遍单一使用，从而引起耐药性的增加。对于新药PAS以及AKW，它们的耐药性很低，较为敏感，提示在治疗中可以有选择性地选用这类药物。
坚持联合用药，合理选择用药和制定化疗方案是治疗耐多药结核病的重要原则[6]，在制定的方案中，应该至少包含两种以上的抗结核药物，在巩固期至少需要3种以上的药物，对于强化期，最好用5～6种药物。左氧氟沙星作为一种新型、高效率的抗菌素，不仅是广谱抗菌药物，同时还具备良好的抗结核作用，能够抑制DNA旋转酶A亚单位，以此来抑制细菌DNA的复制以及转录，从而达到抗菌作用。另外，左氧氟沙星与其他抗结核药之间没有出现交叉耐药，是目前医学上治疗耐多药结核的重要药物之一。从药敏结果可知，左氧氟沙星的耐药率较高，可能是由滥用氟喹诺酮类药物引起的，应引起足够的重视。阿米卡星在试管中对结核菌是一种高效杀菌药，通过观察，以阿米卡星联合左氧氟沙星组成的用药方案，协同效果好，而且在临床中副作用也很少，是治疗结核病的有效方案之一[7]。
综上所述，我区2013年结核病的总耐药率略高于全国278%水平。为减少和防止耐药结核病的发生，一方面在技术上要建立一种更快更准确的药敏试验方法，如引进全自动快速分枝杆菌培养鉴定药敏仪，为临床患者尽早提供合理的化疗方案；另一方面在管理上必需加强结核病患者归口管理，实行结核药物统一管理和推行全程督导化疗。
参考文献
[1] 朱长太，胡忠义.结核分枝杆菌耐药性检测技术进展[J].中华结核和呼吸杂志，2011，34（10）： 768-770.
[2] 吴龙章，潘美玉，刘欣，等. 结核分枝杆菌对对硝基苯甲酸耐药性的研究[J].中华结核和呼吸杂志，2011，34（2）： 117-119.
[3] 全国结核病流行病学抽样调查技术指导组.第四次全国结核病流行病学抽样调查报告[J].中华结核呼吸杂志，2002，25（1）：3-7.
[4] 全国第五次结核病流行病学抽样调查技术指导组.2010年全国第五次结核病流行病学抽样调查报告[J].中国防痨杂志，2012，34（8）：123-125.
[5] 钟球，钱明，李建伟，等.广东省WHO结核病耐药监测研究[J].中国防痨杂志，2001，23（1）：5-8.
[6] 王湘，张丽霞.2008-2010年结核分枝杆菌的耐药性分析[J].中华医院感染学杂志，2011，21（20）： 4394-4395.
[7]杨彩娥，王琰，雷红，等. 结核分枝杆菌利福平依赖株与耐药株的耐药状况比较[J]. 中国防痨杂志，2011，33（3）： 9.
（收稿日期：20140428）
【摘要】 目的：了解本地区结核分枝杆菌临床耐药性的特点以及对7种抗结核药物的药敏检测情况，为临床制定合理的治疗方案提供更多的参考依据。方法：对收集的广东顺德区555例结核患者的结核分枝杆菌用比例法对所用的7种药：异烟肼（INH，H）、乙胺丁醇（EMB，E）、链霉素（SM，S）、利福平（RFP，R）、阿米卡星（AKW，A）、左氧氟沙星（LOF，L）、对氨基水杨酸（PAS，P）进行敏感性试验，分析它们的耐药性。结果：总耐药率为33%，耐药频度由高到低依次为SM198%、INH128%、LOF86%、RFP45%、EMB36%、PAS31%、AKW14%。结论：本地结核菌的耐药性相比其他地区略偏高，应进一步加强对结核杆菌的耐药性监测以便为临床制定更合理的治疗方案提供参考依据。
【关键词】 结核分枝杆菌；耐药性；临床研究
【中图分类号】R521【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）12-0082-02
结核病是一种重大的传染病，严重威胁着人类的生命健康，同时也是死亡率最高的一种疾病[1]。随着耐药性结核病不断地呈现上升趋势，人类的生命安全正受到严重考验，中国结核病的总数位居世界前列，是严重的灾区。结核病的耐药性严重影响了我国在控制结核病方面的水平。对结核杆菌的耐药性检测，不仅可以为临床用药提供方向，还可以评价地区控制结核病的成功与否，同时也能够为未来用药指向正确的方向[2]。据此，收集的广东顺德区555例结核患者的结核分枝杆菌临床分离株进行药敏试验，分析本地结核菌的耐药性，为临床制定合理的治疗方案提供更多的理论参考依据，现将具体的情况报道如下。
3讨论
结核病是严重危害人民群众健康的呼吸道传染病。根据世界卫生组织的统计，我国是全球22个结核病流行严重的国家之一，同时也是全球27个耐多药结核病流行严重的国家之一。目前我国结核病年发病人数约为130万，占全球发病的14.3%，位居全球第2位。为了及时了解结核病的疫情和耐药基本情况，开展结核病耐药监测具有重要意义。根据2013年本地区的结核分枝杆菌药敏试验结果显示，我区结核病的总耐药率为33%（183/555），略高于全国27.8%的水平；总耐多药率为34%（19/555），远低于全国107%水平[3]，也明显低于全国第五次结核病流行病学抽样调查的耐多药率68%[4]的水平。这可能与不同地方菌株的耐药性不同有关。治疗管理不规范及患者治疗遗依从性差，长期被认为是最直接影响到结核病患者并使之产生耐药性的因素。结核菌对7种药物的耐药率（频度）由高到低依次为SM198%、INH128%、LOF86%、RFP45%、EMB36%、PAS31%、AKW14%。在四种一线抗结核药物中，以SM的耐药率最高，其次是INH、RFP，这和报道一致[5]，可能与早期的化疗方案是以SM、INH的组合为主，应用较普遍有关，因此在结控项目中已不再将SM应用于初治病人。至于RFP由于其抗菌谱广，在早期也曾是普遍单一使用，从而引起耐药性的增加。对于新药PAS以及AKW，它们的耐药性很低，较为敏感，提示在治疗中可以有选择性地选用这类药物。
坚持联合用药，合理选择用药和制定化疗方案是治疗耐多药结核病的重要原则[6]，在制定的方案中，应该至少包含两种以上的抗结核药物，在巩固期至少需要3种以上的药物，对于强化期，最好用5～6种药物。左氧氟沙星作为一种新型、高效率的抗菌素，不仅是广谱抗菌药物，同时还具备良好的抗结核作用，能够抑制DNA旋转酶A亚单位，以此来抑制细菌DNA的复制以及转录，从而达到抗菌作用。另外，左氧氟沙星与其他抗结核药之间没有出现交叉耐药，是目前医学上治疗耐多药结核的重要药物之一。从药敏结果可知，左氧氟沙星的耐药率较高，可能是由滥用氟喹诺酮类药物引起的，应引起足够的重视。阿米卡星在试管中对结核菌是一种高效杀菌药，通过观察，以阿米卡星联合左氧氟沙星组成的用药方案，协同效果好，而且在临床中副作用也很少，是治疗结核病的有效方案之一[7]。
综上所述，我区2013年结核病的总耐药率略高于全国278%水平。为减少和防止耐药结核病的发生，一方面在技术上要建立一种更快更准确的药敏试验方法，如引进全自动快速分枝杆菌培养鉴定药敏仪，为临床患者尽早提供合理的化疗方案；另一方面在管理上必需加强结核病患者归口管理，实行结核药物统一管理和推行全程督导化疗。
参考文献
[1] 朱长太，胡忠义.结核分枝杆菌耐药性检测技术进展[J].中华结核和呼吸杂志，2011，34（10）： 768-770.
[2] 吴龙章，潘美玉，刘欣，等. 结核分枝杆菌对对硝基苯甲酸耐药性的研究[J].中华结核和呼吸杂志，2011，34（2）： 117-119.
[3] 全国结核病流行病学抽样调查技术指导组.第四次全国结核病流行病学抽样调查报告[J].中华结核呼吸杂志，2002，25（1）：3-7.
[4] 全国第五次结核病流行病学抽样调查技术指导组.2010年全国第五次结核病流行病学抽样调查报告[J].中国防痨杂志，2012，34（8）：123-125.
[5] 钟球，钱明，李建伟，等.广东省WHO结核病耐药监测研究[J].中国防痨杂志，2001，23（1）：5-8.
[6] 王湘，张丽霞.2008-2010年结核分枝杆菌的耐药性分析[J].中华医院感染学杂志，2011，21（20）： 4394-4395.
[7]杨彩娥，王琰，雷红，等. 结核分枝杆菌利福平依赖株与耐药株的耐药状况比较[J]. 中国防痨杂志，2011，33（3）： 9.
结核分枝杆菌 篇4
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择我院2007年—2009年确诊肺结核患者98例, 均留取痰液, 抽取静脉血3 m L.
1.2 试剂
涂片染色采用萋尼抗酸染色法, 按照《全国临床检验操作规程》[1]第三版进行实验操作。血清结核抗体检测:采用上海奥普生物医药有限公司诊断药盒胶体金法, 严格按照操作说明进行操作。PCR全自动实时荧光定量仪 (由上海罗氏诊断产品有限公司提供) ;检测试剂盒和阴、阳性质控物由中山大学达安基因有限公司提供。
1.3 方法
痰液直接涂片抗酸染色, 在显微镜检下计数100个视野 (观察时间不少于4 m in) , 未发现抗酸杆菌者继续观察至300个视野, 仍未发现抗酸杆菌者报告抗酸菌阴性;镜检按100~300个视野见到1~3条抗酸杆菌为阳性。荧光定量PCR痰液标本处理:痰液根据不同性状, 加入4倍体积的4%N a O H液化30 m in, 取1 m L液化好的痰液离心, 再用生理盐水洗涤沉淀2次, 离心取沉淀加入50μL脱氧核糖核酸 (D N A) 提取液, 主要反应步骤为92℃2 m in预变性, 93℃5 s~57℃45 s复性, 37℃1s引物延伸, 40个循环。反应完毕后, 自动算出循环数 (CT值) 和病毒D N A含量。结核杆菌特异性抗体测定采用胶体金法, 采集血液离心取血清按照操作说明进行操作及阴阳性的判断。
1.4 统计学方法
采用χ2检验, P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
见表1.
χ2=100.64, P<0.01, 三种方法检测结核分枝杆菌阳性率比较有极显著差异。
3 讨论
3.1
结核分枝杆菌可导致全身性疾病, 特别是在发展中国家, 其发病率较高, 危害性极大, 结核病至今仍是世界上一个严重的公共卫生问题, 是一种较严重的传染病。近几年结核分枝杆菌的变异性较大, 对抗结核药物的耐药性增加, 从而使结核病的发病大幅度增高, 目前的疫情呈上升趋势。因此, 找到一种方便迅速、敏感性高、特异性强的检测方法, 对疾病的预防和早期诊断治疗尤为重要。
3.2
目前, 结核病的诊断方法很多, 抗酸染色涂片法是目前最广泛采用的方法之一, 该方法检测速度快, 价格低廉, 能检出含菌量较高的标本, 但对含菌量较低的标本检出率相对较低, 无法早期诊断结核病。
3.3
PCR是一种在体外由引物介导的特异D N A序列的酶促扩增技术的基因诊断方法, 荧光PCR检测主要是在一定的反应体系中通过首先查找到样本中结核分枝杆菌本身的基因, 进而对其基因上某特定区段进行体外快速复制增殖, 使其迅速被放大到巨大的信号量而能够被检测到。它的敏感性很高, 一般每毫升标本含1~100个细菌即可检出, 纯化的结核分枝杆菌D N A, 相当于1~20个结核分枝杆菌, 一般涂片法检测需细菌数每毫升5×103个才可检出, 标本中细菌数少于此数时不易获得阳性结果, 敏感性明显高于涂片法和血清学方法。PCR检测结核分枝杆菌D N A不受抗结核治疗的影响, 可以准确观察抗结核疗效, 早期诊断和治疗结核分枝杆菌菌血症。
3.4
本组血清学结核杆菌特异性抗体检测结果显示, 血清结核抗体测定对诊断活动性肺结核的敏感性为76.5%.血清结核抗体测定在临床实际应用中还存在假阳性和假阴性同题, 有文献报道, 血清学检测方法胶体金法的假阳性率为5.8%[2].本组98例肺结核病患者中23例血清结核抗体假阴性, 假阴性率为23.5%.我们探讨肺结核病患者出现假阴性可能与多种因素有关, 如:患者就诊时间、抗体检测时间、结核病变的轻重、患者个体的反应性差异等。
经过对比分析, 对于基层医院来说, 细菌学检验方法由于培养要求的时间过长, 即使经过改良的培养方法, 依然需要13 d~15 d的时间, 所以结核菌的培养对于基层医院来说不适合。而涂片染色镜检, 方法简单, 易于操作, 比较适合于基层医院, 由于其只能检出含菌量较高的标本, 检出率较低, 所以应该与其他方法联合使用, 来提高其检出率。PCR的方法虽然检出率较高, 特异性好, 但需要有特殊的仪器 (酶联免疫扩增仪) , 不易于基层医院的普及。血清学方法胶体金法, 由于操作简单, 检出率也相对较高, 对于出现的假阳性, 可以配合涂片法进行滤除。所以涂片法和血清学方法胶体金法配合使用, 可以达到快速诊断结核病的目的, 适合在基层医院开展。
参考文献
[1]叶应妩, 王毓三, 申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第3版.南京:东南大学出版社, 2006:726-727.
结核分枝杆菌 篇5
[关键词] 结核分枝杆菌 耐药 基因突变 katG 基因
[中图分类号] R378.911 [文献标识码] A [文章编号] 1009- 6019-(2011)02-08-03
结核病是由结核分枝杆菌感染引起的人类严重传染病，近年来由于耐多药结核菌的出现与扩 散以及艾滋病的广泛传播，造成结核病的广泛流行。据资料统计，全球已有600万人受到了 耐药结核分枝杆菌的感染，我国每年新发耐多药结核病患者12万例[1]。异烟肼(IN H)是临床常用的一线抗结核药物，国内外均已发现结核分枝杆菌对INH的耐药性日益严重 [2.3]。结核分枝杆菌对其耐药的分子机制涉及多个基因，其中主要是通过过氧化氢 酶-过氧化物酶的编码基因(katG)序列突变所致[3.4]。本实验通过聚合酶链反应- 限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法，对西安地区结核杆菌临床分离株耐INH与katG基 因突变的关系进行研究，建立快速检测结核分枝杆菌耐药性的方法。
1 材料与方法
1.1 标本来源 50株结核分枝杆菌临床分离株来源于西安市结核病医院， 已按常规进行药敏试验；结核分枝杆菌H37Rv标准株来源于中国疾病预防控制中心，由西安 市结核病医院细菌室培养并保存。
1.2 方法
1.2.1 DNA提取 采用北京TIANGEN公司细菌基因组提取试剂盒提取基因 组，－20℃保存备用。
1.2.2 PCR扩增 根据结核分支杆菌katG基因序列(GenBank：x68081)设 计引物，由于结核杆菌katG基因编码的315位氨基酸密码子最易于产生突变，因此，我们设 计针对结核杆菌katG基因进行PCR特异性扩增的引物1对，PCR产物覆盖katG基因的315位密码 子。设计扩增产物长度为193bp具体序列如下：正向引物：5′-GAGCAGATGGGCTTGGG-3′，反 向引物：5′-CGTCCTTGGCGGTGTATT-3′引物由北京奥科公司合成。在50霯反应体系中，DNA 模板5霯，上下游引物各1霯，ddH[2]O18霯，2×PCR MasterMix 25霯。PCR循 环参数如下94℃预变性3m分钟，94℃变性30秒，58℃退火30秒，72℃延伸1分钟，循环30次 ，最后72℃延伸5分钟。2%琼脂糖凝胶电泳检测PCR结果，在193bp处出现明显条带即为扩增 阳性。
1.2.3 PCR-RFLP分析 取7靗PCR产物，2.0靗10譌astDigest Green B uffer酶切缓冲液，1.5靗 Fast Digest enzyme限制性内切酶MspⅠ(MBI公司产品)，19.5 靗去离子水，混匀后置37℃保温5min。katG基因扩增片段经酶切消化后，行2%琼脂糖凝胶 电泳，无315位密码子突变的菌株被消化后可出现148bp片段。若发生突变，则增加1个酶切 位点，酶消化后电泳可见较小的128bp片段。
1.2.4 序列测定 挑选RFLP分析中泳动条带正常与异常的菌株各1例，取 其PCR扩增产物，送北京奥科生物技术有限责任公司进行序列测定。测序结果与H37Rv标准株 进行BLAST分析[5]。
2 结果
2.1 结核分枝杆菌临床分离株药敏试验 通过药敏表型检测发现，50株临 床分离结核分枝杆菌中5株为INH敏感株，45株为INH耐药株，其中9(20%)株对INH单耐药，15 (33.33%)株为耐多药，21(46.66%)株为多耐药。
2.2 PCR扩增 50株临床分离株及H37Rv标准株基因扩增后，H37Rv标准株和 50株临床分离株均得到长度为193bp的片段(图1)
1 50bp DNA Ladder；2～11 样本PCR产物；12 阴性对照
图1 katG基因PCR产物琼脂糖电泳图
Fig.1 Agarose gel electrophoresis of katG PCR products
2.3 RFLP分析 以H37Rv标准株为对照，5株敏感株与标准株一致，均被限 制性内切酶MspⅠ消化为3个较小片段，电泳可见1条条带，大小约为148bp，6bp和39bp片段 由于过小故不可见。45株耐药株中，14株与标准株一致，而有31株被MspⅠ消化成4个片段， 电泳可见1条条带，大小约为128bp，6bp、20bp、39bp片段由于过小故不可见。占全部耐药 菌株的68.88%(图2)。
1 50bp DNA Ladder；2 H37Rv标准株酶切结果；
3、4、7、8 野生型；5、6 突变型
图2 katG基因PCR产物RFLP分析
Fig.2 RFLP analyses of katG PCR products
2.4 序列测定 RFLP分析中出现异常泳动带的突变标本，其katG基因315位 氨基酸密码子第2位碱基发生点突变由AGC突变为ACC，与文献报道的突变位点一致。SSCP和R FLP分析中未见异常动带的标本，其序列比对与标准株相同。
3 讨论
INH是酰肼类化学合成药物，其抗结核作用主要是抑制结核菌DNA的合成，阻碍细菌细胞壁的 合成，同时也能抑制分枝菌酸(mycolic acid)的合成，使细菌丧失耐酸性、疏水性和增殖力 而死亡。
KatG基因位于结核分枝杆菌的染色体上，其表达的过氧化氢酶-过氧化物酶是一种既有过氧 化氢酶活性又有过氧化物酶活性的热稳定的酶，在INH作用中起关键作用。过氧化氢酶-过氧 化物酶可能在细胞内将INH氧化成异烟酸，成为烟酸的类似物，参与辅酶Ⅰ的合成，使其不 能起同工酶的作用，抑制细菌细胞壁分枝菌酸的合成。使保护分枝杆菌抵抗氧化和侵袭的屏 障受到损害。若KatG缺失或突变，使过氧化氢酶-过氧化物酶活性丧失或降低，阻止INH转换 成活性形式，就会导致耐INH。近年的研究表明，KatG基因完全缺失不是细菌耐药的主要原 因，KatG基因突变才是导致细菌产生耐药性主要分子机制。在耐药性相关的基因突变中，以 315位密码子突变的检出率最高[6、7]。
本研究采用PCR-RFLP等方法[8]，对西安地区结核分枝杆菌INH耐药基因KatG进行了 检测和分析。本研究结果显示，临床INH耐药现象已非常普遍，且耐多药株比例比较高，单 独只对INH耐药的菌株很少。50株临床分离株中，5株敏感株RFLP分析均与标准株一致，没有 发生变异。而45株INH耐药株中，有31株RFLP分析异常，结果提示其变异存在于KatG基因315 位密码子AGC→ACC类型突变。本次试验中45株耐药分离株中RFLP检测突变率为68.88%，与 文献报道略高[9]。本研究提示西安地区的结核杆菌临床分离株对INH耐药与KatG基 因突变有关，尤其是315位密码子的突变占了很大比例。经挑选特异菌株测序后证实，突变 发生在KatG基因315位密码子的第2位碱基，其突变形式为AGC(Ser)→ACC(Thr)，验证了RFLP 结果的可靠性。
传统的药敏试验对结核分枝杆菌的检测时间长(4～8周)，不能及时有效指导临床用药。DNA 测序操作复杂，成本较高。PCR-RFLP可分析特定基因位点的点突变，具有高度的特异性。本 次实验采用的方法简单易行，成本较低，并且显著缩短了实验周期(1～2天)，弥补了常规药 敏试验的不足，是快速鉴定结核分枝杆菌INH耐药性的有效工具。
4 参考文献
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结核分枝杆菌 篇6
近年来,分子诊断技术为结核杆菌检测开辟了一条新路,如环介导恒温扩增检测技术、RNA恒温扩增技术、基因芯片技术等。但这些技术的应用都是以获得高质量结核杆菌的DNA和RNA为前提,而结核分枝杆菌的mRNA半衰期极短,细胞壁脂质含量又很高且细胞壁裂解困难,这些加大了结核分枝杆菌RNA提取的难度[3]。本研究分别采用玻璃珠处理法、超声破碎法和甲醇裂解法对结核菌细胞壁处理后进行提取,探讨三种方法对结核分枝杆菌RNA提取的效果,以期获得一种简单、高效的结核分枝杆菌RNA提取方法。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
结核分枝杆菌H37Rv标准株(吉林市结核病防治研究所);Trizol试剂(Invitrogen);直径0.5mm玻璃珠(美国Sigma)。
1.2 试验方法
1.2.1 结核分枝杆菌菌悬液的制备
取H37Rv标准株,接种于改良罗氏培养基,37℃培养28~42d[4]。称取9份湿重约30mg的H37Rv标本,分别标记为玻璃珠法、超声波法和甲醇裂解法,每组设三个平行对照。
1.2.2 结核分枝杆菌总RNA的提取前处理
各加入1 m L Trizol后涡旋振荡混匀,分别用三种破壁方法进行前处理。玻珠法加玻珠0.2 g,静止5 min;超声波法先-80℃放置10 min,沸水速融后240 W超声波处理3次,每次3 min,间歇15 s;分别加入200μL氯仿,涡旋振荡1 min,冰置10 min。甲醇裂解法加入1 m L新配置的氯仿甲醇溶液(氯仿∶甲醇=3∶1),涡旋振荡1 min,冰置10 min[5]。
1.2.3 结核分枝杆菌总RNA的提取
4℃,12 000×g离心15 min,取上层水相加入等量的异丙醇混匀,-20℃静置1 h。4℃,10 000×g离心10 min弃上请,70%乙醇洗2次,干燥后加DEPC水溶解。
1.2.4 结核分枝杆菌总RNA鉴定
取5μL RNA样品进行1%的变性琼脂糖凝胶检测,判断RNA的完整性;并取1.5μLRNA样品用快速微量紫外测定仪测定RNA的浓度和纯度。
2 结果与讨论
2.1 结核分枝杆菌RNA的浓度和纯度检测
由表1可知,三种方法均能获得一定浓度的RNA。其中甲醇裂解法提取的RNA浓度最高,为115.05 ng/μL,其OD260/280值甲醇裂解法最好,在1.9~2.0,OD260/230在2.0~2.3,说明此法提取的样品中,蛋白质、盐类等基本去除干净。其次为玻璃珠法,超声波法提取的RNA浓度最低,可能是产生了热量影响了RNA得率。
2.2 结核分枝杆菌RNA的完整性检测
采用1%变性琼脂糖凝胶电泳对提取的结核分枝杆菌RNA进行完整性检测,图1中三种方法均看到了23SrRNA、16SrRNA和5SrRNA三条带,但超声法中条带发生弥散现象,说明高热量导致RNA降解;而甲醇裂解法条带更明亮清晰,且23S近乎16S条带浓度的2倍,说明RNA较完整,无降解现象。玻璃珠法虽不如甲醇法好,但也可用于结核杆菌RNA的提取。
Lane 1:甲醇裂解法;Lane 2:玻璃珠法;Lane 3:超声波法Lane 1:methanolysis method;Lane 2:glass bead method;Lane 3:ultrasonic disruption
3 结论
结核分枝杆菌由于其细胞壁脂质含量高,很难像其他细菌细胞一样用通用的裂解剂将结核分枝杆菌细胞快速裂解。本研究采用三种方法处理结核分枝杆菌细胞壁,并用Trizol进行RNA提取,结果超声波法由于产生较大热量影响了RNA得率和完整性,玻璃珠法虽不如甲醇裂解法好,但避免了甲醇的毒性。甲醇裂解细胞壁法提取的结核分枝杆菌RNA的得率明显高于其他两种方法,因为甲醇能迅速溶解脂质,瞬间穿透并破坏结核分枝杆菌的脂质细胞壁,使细胞质中的RNA释放[3]。因此,甲醇裂解法和玻璃珠法均可以用于RNA的提取,但甲醇裂解法更好。
摘要：分别采用玻璃珠处理法、超声破碎和甲醇裂解法对结核菌细胞壁处理后进行提取。结果表明:甲醇裂解法提取的RNA浓度和纯度较高,完整性也最好。玻璃株法次之,超声波法有降解。虽然三种方法提取的RNA都能直接用于下一步实验操作,但甲醇裂解法效果更好。
关键词：结核杆菌,RNA,提取
参考文献
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结核分枝杆菌 篇7
1 资料与方法
1.1 一般资料
本组18例NTM肺病患者均有完整的CT资料, 均经过临床及细菌学分离、培养、菌型鉴定而确诊, 符合我国关于非结核分枝杆菌肺病的诊断标准[1]。其中男10例, 女8例;年龄32~76岁, 平均48岁, 40岁以上14例。临床主要症状:咳嗽、咳痰12例, 咯血丝痰或咯血4例, 乏力10例, 低热8例, 盗汗7例, 消瘦2例, 胸痛1例。合并糖尿病2例、矽肺1例, 本组无合并艾滋病者。
1.2 CT检查方法
使用GE Prospeed FⅡ双螺旋和GE 64排Light speed VCT螺旋CT扫描机, 常规自肺尖至肺底螺旋扫描, 120 k V, 200 m As, 层厚5 mm。13例加HRCT扫描或重建:层厚1.0 mm或0.625 mm, 骨算法重建。
2 结果
2.1 NTM肺病CT表现
结节状影:本组18例均可见大小不等结节状影, 呈散在多发, 密度略高, 周边欠光整。其中<1 cm小结节共11例, 1~3 cm结节6例, >3 cm块状影1例, 可见晕征4例。另可见9例“树芽征”, 表现为直径2~4 mm的小叶中心密度增高结节影和与之相连的分支线状影, 状如树芽。
斑片状影:16例可见斑片状浸润影, 大小不等、形态不规则、境界欠清、密度不均, 其中中等密度的斑片影9例, 密度较低的磨玻璃影3例, 密度较高的斑片实变影4例, 其中可见支气管通气征4例。
支气管扩张:13例合并支气管扩张, 其中柱状扩张7例、囊状扩张4例、囊柱状混合型扩张2例, 未见静脉曲张样扩张。累及上叶8例, 其中左上肺舌段2例;累及右肺中叶3例, 下叶2例。
空洞:11例可见空洞, 薄壁空洞7例, 厚壁空洞4例, 内壁光整9例, 略毛糙2例, 未见偏心空洞, 1例洞内见少许液平。空洞<3 cm者9例, >3 cm者2例, 最大5 cm;多发空洞8例, 单发空洞3例, 空洞周边见浸润病灶的6例。
纤维条索影:11例可见纤维条索影, 长度>2 cm者较多, 粗细不均, 境界清楚, 密度较高, 走行较僵直。
胸膜病变:胸膜肥厚8例, 胸膜钙化1例, 只1例见少量胸水。
其他改变:小叶中心型肺气肿7例, 肺内病灶见有钙化的3例, 本组未见肺门及纵隔肿大淋巴结。
本组病例以多种病变共存, 上述3种以上主要病变混杂共存者共15例 (15/18) , 占83%;其中以结节或斑片状影、空洞、支气管扩张混杂共存者最多, 占72% (13/18) 。
2.2 NTM肺病影像分布特点
两肺多叶受累共16例, 上叶病变明显比下叶多, 累及上叶17例, 下叶2例, 右肺中叶受累3例, 左肺上叶舌段2例。
3 讨论
3.1 临床表现
临床主要症状为咳嗽、咳痰、低热和疲乏, 偶有咯血。NTM的毒力较结核菌低, 临床症状大多较轻, 有些患者可无明显临床症状和体征, 多在机体抵抗力低下时发病。其临床症状、影像表现和实验室检查都与肺结核十分相似, 如果只进行痰涂片及分枝杆菌的培养而忽视菌型鉴定, 极易误诊为肺结核, 有的患者因此长期按照肺结核进行抗结核药物治疗, 而NTM肺病对抗结核药物耐药非常常见, 治疗效果差而列为肺结核难治病例[2]。
3.2 影像特点
本组病例显示, NTM肺病CT影像主要表现为结节影、树芽征、斑片状影 (磨玻璃影、斑片实变影) 、空洞、支气管扩张及纤维条索影, 多种病变同时累及多个肺叶是该病的特点, 文献[3-4]报道结节、实变和支气管扩张同时存在提高了非结核分支杆菌肺部感染的可能性, 本组中以结节或斑片状影、空洞、支气管扩张混杂共存者最多, 占72% (13/18) , 上叶病变比下叶多, 本组上叶受累94% (17/18) , 上述所见与文献报道基本相同。
3.3 鉴别诊断
总结以上特点, 结合文献, NTM肺病与肺结核的鉴别要点: (1) NTM肺病以40岁以上男人多见, 肺结核患者年龄和性别无特殊关系;NTM肺病患者家庭接触史少, 人与人间的感染罕见, 而肺结核患者接触史较明显, 人群间感染为其特点。 (2) NTM肺病结节以<1 cm小结节较多, 散在多发, 分布不均, 少见弥漫性粟粒, 弥漫性粟粒更多见于肺结核;>3 cm以上的块状影亦少, 结节内少见钙化, 这一点, 与肺结核不同。弥漫性支气管扩张、右肺中叶及左上肺舌段支气管扩张多见于NTM肺病, 由普通细菌感染引起的支气管扩张以双肺下叶多见, 结核引起的支气管扩张多分布于上肺尖后段及下叶背段[5]。NTM肺病空洞性病变主要为多发薄壁空洞, 洞内少见液平, 空洞直径常比结核性空洞小, 本组50%以上空洞<3 cm, 所以较大、壁较厚的空洞更多见于结核性[6]。NTM肺病钙化、胸腔积液较肺结核少, 本组肺内钙化占17%, 胸腔积液只占6%, 且为少量。肺门及纵隔淋巴结肿大较少见[6,7], 本组均未见。 (3) 由于NTM的毒力较结核菌低, 病变要比活动性肺结核进展缓慢, 可维持多年不变或缓慢发展, 临床表现大多轻微, 而感染的时间较长, 所以容易出现影像表现严重而临床症状较轻的“影像临床背离”现象。
综上所述, NTM肺病具有一定特点, 但单从影像上难以和继发型肺结核区别, 当初次影像学表现为结节、斑片样影、空洞及支气管扩张等主要征象同时存在且累及多个肺叶时, 或难治性肺结核患者具备上述表现时, 应考虑到NTM肺病的可能, 应及早行痰培养及菌型鉴定以明确诊断。
摘要：目的:探讨非结核分枝杆菌肺病CT表现特点及其与肺结核病的鉴别要点。方法:回顾性分析经临床确诊的18例非结核分枝杆菌肺病的CT表现特点。结果:CT上最常见为结节影, 本组18例均可见;其次为斑片状影16例、支气管扩张13例、空洞及纤维索条各11例。以上病变均以多种形态混杂共存, 多数为两侧多叶散在分布, 双肺累及12例, 2个肺叶及以上受累16例;上叶比下叶多, 上叶受累17例。结论:非结核分枝杆菌肺病的CT主要表现结节影、斑片状影、支气管扩张、空洞及纤维条索, 影像表现具备一定特点, 但单从影像上和继发型肺结核鉴别困难, 多种性质病变同时累及多个肺叶是该病的特点, 当出现上述表现或临床规则抗结核治疗疗效欠佳时, 应考虑到非结核分支杆菌肺病的可能。
关键词：非结核分枝杆菌肺病,CT
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结核分枝杆菌耐多药研究进展 篇8
1 耐多药结核病现状
到20世纪90年代,结核病在全球呈上升趋势,WHO在1993年宣布结核病是一个全球性的紧急问题。非洲20个国家由于获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的蔓延,从1985年起,结核病患者以每年7.7%的速度递增[3];俄罗斯的结核发病率从1990年的34/10万上升到1993年的42.9/10万[4]。我国是全球22个结核病高负担国家之一,结核病患者数排世界第二,仅次于印度,每年新发病例占全球总数的16%[5].流行病学资料显示,结核病具有高患病率、高耐药率、高病死率、低递降率态势,自1882年Koch发现结核分枝杆菌以来,人类已对结核分枝杆菌的生物学特性、致病机制、耐药机制、临床诊疗和防控措施的研究取得了一定进展,但疫情的蔓延仍不容乐观。2007年—2008年我国结核分枝杆菌耐药性调查,总耐药率为8.32%,其中初治涂阳肺结核为5.71%,高于WHO估算的5.0%,复治涂阳肺结核为25.64%,接近WHO估算的26%[6],在我国防治耐多药结核分枝杆菌的做法,重点是从传染源、传播途径、易感人群三个环节展开,有报道显示,接触排菌的肺结核患者是呼吸道传播的主要途径,但近年来,随着环境污染和侵入性治疗手段的增多,加大了感染的概率[7];同时,抗结核药物方案的不合理应用,治疗管理不善、化疗被迫中断等又导致了耐药菌株的增多,易感人群增加,严重影响了结核病的控制。
2 耐多药结核病产生原因
抗结核药物在全球推广应用50多年来,使结核菌对抗结核药物产生了明显的耐药性。MDR-TB的产生分为获得性和原发性耐药,原发耐药在发达国家较低,多在5%~10%,发展中国家也平均不超过15%;而我国个别地区达66%[8]以上,原发耐药率普遍高于发展中国家,并有明显上升趋势。从已知的结核菌耐药株点位突变基因中,不同的MDR-TB是由广泛耐药的不同基因型菌株引起[9],人为的治疗不当或者依从性不好是产生获得性耐药的重要原因。我国第四次全国结核病流行病调查显示[10],耐单药占总耐药率27.8%,其中初始耐药达18.6%,获得性耐药46.5%;MDR-TB总耐药率为10.7%,其中新患者占7.6%,复治患者17.1%.Golanov等[4]报道:在肺结核患者中同时检出杆菌和L-型菌的耐药率显著高于单纯检出杆菌者,说明结核菌L-型可能是导致耐药率增加的原因之一。
3 耐多药结核病控制策略
WHO根据许多国家控制结核病的经验,提出现代结核病控制策略(directly observed treatment short-course,DOTS)。主题思想是政府的承诺、痰涂片显微镜检查、保证患者的正规治愈、建立持续不间断的免费抗结核药物供应系统、建立结核病的登记、报告和评价的监控系统,从预防MDR-TB的发生方面寻求快捷和最佳的治疗方案,做到早发现、早诊断、早治疗,着眼于多环节控制,阻止结核病的流行。具体作法是:(1)坚持合理化疗,防止乱用药物。(2)坚持规律治疗,贯彻全程治疗的原则,防止间断用药。(3)坚持既治又管,防止只治不管。(4)坚持初治彻底,防止初治变复治。(5)坚持耐药性监测的标准化、规范化、统一化,防止各自为政。
4 耐多药结核病的检测方法
4.1 痰厚涂片抗酸染色法。直接取痰涂片用萋纳抗酸染
色后镜检,抗酸杆菌检出率约30%~40%[11],此方法成本低,特异性差,现仍是国内多数医院检验的必备手段。
4.2 结核分枝杆菌分离培养。不同的检测系统的培养结
果均有差异,通常培养基氧化还原电势的改变可指示细菌的生长[12],检出率高、特异性强,缩短了培养鉴定时间,但仪器和试剂成本高,不易推广。
4.3 免疫学诊断技术。通过体液免疫和细胞免疫表达确
定是否感染结核病[13],适用于流行病学调查和结核病患者治疗效果观察。
4.4 分子水平检测技术聚合酶链反应、DNA探针和指
纹图谱、生物芯片等技术已实现了对基因和生物体信息的快速检测[14],是当今运用和未来发展的方向。
5 展望
5.1 政府重视,加强结核病防治服务体系的建设[15],制定
各级结核病防治人力资源发展计划,加强管理和医务人员的培训,提高各类人员的专业素质。
5.2 全面开展医疗机构与结核病防治机构合作[16],采用国
家制定的统一标准化治疗方案[17],提高患者治疗的依从性[18],确保患者做到全程规律性服药。
5.3 在检测方法学上,免疫学[19]和基因诊断技术[20]的发展
是结核病诊治的方向,但常规细菌学检查由于简便、快速、价廉,仍将是结核病实验诊断的重要手段,这需要标准化和规范化检测实验室的建立。
5.4 在新型疫苗的研制上,随着多药耐受的结核病以及
混合性感染结核病与艾滋病的危险性日益增加,应大力研制治疗性疫苗,为人类提供保护作用。
结核分枝杆菌 篇9
关键词：尘肺,结核,结核分枝杆菌,耐药
结核分枝杆菌耐药已成为临床治疗中的一个难题, 文献多有报到, 但尘肺结核患者的耐药情况报道的较少。回顾性分析铁岭市结核医院2009年1月至2010年12月住院的尘肺结核痰培养药敏结果病例64例, 将结果分析如下, 并与同期收集的单纯肺结核56例的痰培养药敏结果进行对比, 以对我市尘肺结核防治提供一些启示。
1 材料与方法
1.1 标本来源
64例尘肺结核患者均为男性, 年龄40～75岁, 其中初治19例, 复治45例。56例单纯肺结核, 男43例, 女13例, 年龄范围38～76岁, 其中初治16例, 复治40例。两组初、复治病例无显著性差异。
1.2 方法
采用美国BD公司的BACTEC MGIT960快速自动培养系统, 痰标本阳性菌株用对硝苯甲酸和噻吩222羧肼鉴别培养基进行结核与非结核分枝杆菌的初步菌型鉴定。尘肺结核组获得结核分枝杆菌64株;单纯肺结核组获得结核分枝杆菌56株。用改良的罗氏培养基采用绝对浓度法进行异烟肼 (INH) 、链霉素 (SM) 、利福平 (RFP) 、乙胺丁醇 (EMB) 、对氨基水杨酸钠 (PAS) 、丙硫异烟胺 (TH1321) 、丁胺卡那霉素 (AK) 进行体外药物敏感性测定。药品由中国疾病预防控制中心结核病临床防治中心国家参比实验室提供。每种药物分别用两种浓度测定, 低浓度耐药即判定为耐药。操作和结果判定均由有经验的专人负责。以上操作严格按照《结核病诊断实验室检验规程》[1]进行。
2 结果
两组药敏结果见表1。
尘肺组耐药46例 (72%) , 对照23例 (41%) , 两者耐药率比较, 差异有统计学意义 (χ2=11.6, P<0.01) ;尘肺组含耐多药40例 (62.5%) , 对照组20例 (35.7%) , 同样有统计学意义 (χ2=8.57, P<0.01) 。尘肺组64例中有耐药50株, 其中耐1种药5株, 耐2种药9株, 耐3种药13株, 耐4种药11株, 耐5种以上 (包括5种) 12株。两组对各种抗结核药物耐药率高低顺序相同, 依次为SM>RFP>INH>EMB>PAS>TH1321>AK。
3 讨论
经对我市结核病医院2009年1月至2010年12月临床分离的64株结核分枝杆菌进行药物敏感性试验, 说明结核分枝杆菌耐药是造成结核病难治疗的主要原因, 尘肺合并结核患者的耐药情况比单纯肺结核严重 (本组达72%) 。同时耐3种主要抗结核药物MS、RFP和INH的病例也高于单纯肺结核组。本组多耐药尘肺结核发生率高达62.5%, 这一数字高于2008年WHO发表的《第四次世界耐抗结核病药物报告》中我国20%～40%的总耐药率。说明尘肺合并结核患者耐药的严重性。须进一步加强肺结核病控制规划的落实, 有效控制传染源, 减少耐药结核分枝杆菌的产生和传播。
在临床治疗过程中, 对患者应定期进行药物敏感性测定, 不断优化化学治疗方案[2]。对一线抗结核药物耐药的患者, 应多使用丁胺卡那霉素, 丙硫异烟胺等二线抗结核药物, 采用早期、规律、适量、联合、全程的十字治疗方针, 以达到理想的治疗效果。
参考文献
[1]中国防痨协会专业委员会.结核病诊断实验室检验规程[M].北京:中国教育文化出版社, 2006:55-57.
结核分枝杆菌 篇10
1资料与方法
1.1 一般资料
所有患者均为我院2007年1月至2008年4月住院及门诊的痰结核分枝杆菌培养阳性的结核患者共100例, 其中男84例, 女16例;年龄 (17～84岁) , 平均46.5岁;共培养出100株结核分枝杆菌, 初治85株, 复治15株。
1.2 方法
按照中国防痨协会编审的《结核病诊断细菌学检验规程》[1]要求进行痰结核菌培养、药物敏感性测定及菌种鉴定。同时对链霉素 (SM) 、卡那霉素 (KM) 、异烟肼 (INH) 、利福平 (RFP) 、乙胺丁醇 (EMB) 、LVLX, 分别进行药物敏感试验。凡在低浓度含药培养基上生长20个菌落以上者或占培养基斜面1/4者为耐药, 其中LVLX的纯品粉为浙江新昌制药有限公司提供的。分别稀释成高低两种不同浓度 (μg/ml) :SM (10、100) ;KM (10、100) ;INH (1、10) ;RFP (50、250) ;EMB (5、50) ;LVLX (5、50) 。
2结果
100株结核分枝杆菌菌种鉴定结果:人型79株, 牛型21株;初治85株, 总耐药率23.3%, 分别是耐INH10例, 耐药率11.8%;耐RFP2例, 耐药率2.4%;耐EMB1%;耐KM1例, 耐药率1.1%;耐SM6例, 耐药率7%;耐LVLX为0。同时耐两种药物5例, 耐药率5.9%;同时耐3种药物为2例, 耐药率2.4%;同时耐INH、RFP占2%。复治15株, 总耐药率为67%。分别是耐INH34%;耐RFP33%;耐EMB为0;耐KM2%;耐SM33%;耐LVLX6%。同时耐两种抗痨药物24%;同时耐3种药物8%;同时耐4种药物2%;其中同时耐INH、RFP为13%。
3讨论
结核病仍是21世纪严重危害人类健康的公共卫生问题。移民、HIV感染和耐药是本世纪全球结核病控制面临的三大难题, 其中耐多药性将是对我国结核病的控制起限制性作用的重要因素之一。笔者对100株结核菌的耐药性进行分析, 初治患者的总耐药率为23.3%; 复治患者的耐药情况更加严重, 总耐药率达67%。其中以INH、RFP、SM的耐药率较高, 分别为34%、33%、33%。初治耐两种药物为6%, 复治患者同时耐两种抗痨药物达24%, 其中同时耐INH、RFP的菌株为14%。这些复治患者, 特别是同时耐INH、RFP的患者在临床治疗上十分棘手, 因此不断开发和应用有效的抗痨新药仍是结核控制工作的重要措施之一。目前最引人注目的主要是利福霉素和氟喹诺酮类, 尤为后者更为突出。LVLX是氧氟沙星的L型光学异构体, 其作用主要是通过抑制DNA旋转酶A亚单位, 从而抑制DNA的复制和转录达到抗菌作用。在培养基中LVLX对敏感菌及耐药菌的MIC为0.25～1 μg/ml, 对巨噬细胞中的结核分枝杆菌的MIC为0.5μg/ml, 所以LVLX对细胞内外的结核分枝杆菌均有抗菌活性[2]。
本药敏试验结果显示LVLX对初治85株结核分枝杆菌均敏感, 无出现耐药菌株;对复治患者的耐药率也仅为6%。根据陆宇等研究报告, 单次顿服LVLX300 mg的峰浓度为 (2.87±0.55) μg/ml, 这远超过结核分枝杆菌的MIC。且口服吸收迅速, 分布广泛, 持续作用时间长, 24 h血药浓度仍达 (0.21±0.07) μg/ml[2]。以上特点, 结合本药敏试验结果均支持LVLX的抗结核作用, 且耐药率低, 同时陆宇等将LVLX联合其它抗结核药物用于菌阳肺结核患者的治疗, 初复治各获得97%、82%痰菌阴转率, 97%、88%的病灶有效率, 和67%、37%空洞闭合率, 且未见严重的毒副作用[3]。
LVLX由于其作用机制不同于原有抗结核药, 所以无交叉耐药, 且具有良好的抗菌活性, 优良药物动力学和较高安全性, 以及LVLX与其它抗结核药物可能呈协同作用和较低耐药性, 使LVLX正逐步替代氧氟沙星而成为MDR-TB的有效治疗药物之一。对于不能耐受抗结核药物不良反应成年肺结核患者, 以及有肝肾功能异常的初治患者的治疗也提供了一个新方案, 但由于价格昂贵, 普遍使用将增加治疗费用。建议用于复治的患者。
摘要：目的通过体外药物敏感试验评价左氧氟沙星的抗结核作用。方法将左氧氟沙星纯品粉稀释成 (5、50) μg/ml高低两种浓度, 按常规行结核分枝杆菌的药物敏感试验, 凡在低浓度含药培养基上生长20个以上菌落或占培养基斜面1/4者为耐药。结果100株结核分枝杆菌, 初治85株耐左氧氟沙星为0;复治15株, 耐左氧氟沙星为6%。结论左氧氟沙星具有良好抗结核分枝杆菌的作用, 耐药率低, 安全性好, 可成为MDR-TB有效的治疗药物之一。
关键词：左氧氟沙星,结核分枝杆菌,药物敏感试验
参考文献
[1]中国防痨协会.结核病诊断细菌学检验规程.中国防痨杂志, 1996, 1:28-31.
[2]陆宇, 朱莉贞, 段连山, 等.氟喹诺酮类药物的抗结核作用.中华结核和呼吸杂志, 1999, 22:693-695.
[3]陆宇, 朱莉贞, 段连山, 等.左氧氟沙星的抗结核作用的研究.中华结核和呼吸杂志, 2000, 23:50-54.