支原体抗体

支原体抗体（共7篇）

支原体抗体 篇1

摘要：以灭活的支原体免疫高产母鸡, 用分离、匀浆的方法制备高效价卵黄抗体, 并应用间接血凝检测鸡卵黄中免疫球蛋白 (Immunoglobulin of egg yolk, IgY) 的活性。结果显示灭活的支原体能诱导鸡产生高效价的抗体, 且效价高达4.096×103, 经上述简单、实用的路线, 制备出了高纯度的IgY。卵黄是一种含量高、经济的特异性抗体源, 可为犊牛支原体肺炎的防治提供新的途径。

关键词：犊牛,支原体肺炎,免疫,卵黄,抗体

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验疫苗

犊牛支原体肺炎灭活苗, 由本实验室自制。

1.1.2 试验动物

石河子大学动物科技学院试验站的试验鸡, 供试鸡只为高产期、产蛋健康母鸡12只。10只进行免疫, 2只不免疫, 隔离饲养方式。

1.1.3 药品试剂

完全弗氏佐剂与不完全弗氏佐剂 (美国sigma公司) , 叠氮钠, 硫酸葡聚糖, CaCl2, 无水硫酸钠, Tris (三羟甲基胺基甲烷) , 三蒸水, 50%乙醇, EDTA (乙二胺四乙酸) , 碳酸氢钠, 绵羊红细胞, 阿氏液 (红细胞保存液) , 2.5%戊二醛, TBS (Tris缓冲盐水) , PBS (磷酸盐缓冲液) , 鞣酸, 0.2%碘液, 0.1%新洁尔灭, 75%酒精, 0.01%硫柳汞, 青霉素 (80万单位/瓶) , 链霉素 (100万单位/瓶) , 琼脂, 磷酸二氢钾, 磷酸氢二钠, 氯化钾, 氯化钠, 1%健康兔血清, 透析袋, V型反应板。

备注:阿氏液 (Alsever's Solution) 是一种红细胞保存液, 含有抗凝剂柠檬酸钠和细胞需要的养分葡萄糖。阿氏液配方是葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g, 加蒸馏水至100ml, 加热溶解后将pH值调到6.1, 经过69KPa, 15min的高压灭菌, 放置在4℃的环境内, 保存备用。

1.1.4 仪器设备

BHC-Ⅱ-A/B3型生物洁净安全柜, 苏净集团安泰公司;CR22E型日立高速冷冻离心机, HIMAC生产;MM-2型微量振荡器, 江苏金坛市医疗仪器厂;SW-CJ型-单人双面超净工作台, 苏净集团安泰公司;85-2型恒温磁力搅拌器, 江苏金坛市医疗仪器厂。

1.2 方法

1.2.1 抗原的制备

将牛支原体新疆分离株接种到牛支原体固体筛选培养基上进行复苏 (37℃, 8%CO2) , 3～5d后挑取单个菌落接种到液体培养基中以同样条件培养3～5d, 再将此菌液按照1:10比例加入到新配制的牛支原体液体培养基中于同一条件下进行扩大培养5～7d, 将收集到的液体培养物加入终浓度0.4%甲醛37℃灭活48h, 经1000rpm离心5min后上清液再以16000rpm离心30min弃上清, 将沉淀用0.1mol/LPBS洗涤2次后稀释成菌悬液, 将上述抗原悬液经超声波细胞破碎仪间断处理30min (80W) , 离心取上清, 用紫外分光光度计测定上清中蛋白浓度备用[1]。

1.2.2 鸡体的免疫方法

试验鸡分为2组, 注射疫苗的10只为A组, 不注射疫苗的2只为阴性对照组D组。所有的鸡只均编上号码。

(1) 基础免疫[2,3]:将制备的肺炎支原体抗原液与等体积完全弗氏佐剂充分乳化后, 经鸡双翼、胸腹部和背部皮下及肌肉多位点注射。基础免疫剂量为0.5mg/只。

(2) 加强免疫:在基础免疫后的15、30、45d后改为不完全弗氏佐剂进行3次加强免疫, 经鸡双翼、胸腹部和背部皮下及肌肉多位点注射。加强免疫剂量分别为1、1.5、2mg/只。

1.2.3 卵黄抗体蛋的收集

收集免疫前两天的鸡蛋, 收集免疫后所有鸡蛋, 并每15d为一组, 一直收集到第80d, 每次收集的鸡蛋上做组别、日期标记后放入4℃冰箱内保存。

1.2.4 卵黄分离和匀浆

将收集的蛋经清水冲洗干净后用0.2%碘液及0.1%新洁尔灭溶液各浸泡消毒15分钟, 取出用灭菌纱布擦干, 再用75%酒精擦拭1遍。无菌操作分离卵黄, 按1:1加pH 7.2的PBS液, 置组织捣碎机中10000r/min匀浆1min, 加硫柳汞 (终浓度0.01%) 、青霉素 (1000IU/ml) 、链霉素 (1000IU/ml) , 分装于100ml的无菌玻璃瓶中, 密封并写上标号。

1.2.5 卵黄抗体Ig Y效价的检测

IgY效价的检测采用间接血凝试验方法进行检测, IgY效价的检测步骤[4,5,6]:96V型反应板从第一孔开始至第18孔, 每孔滴加稀释液50μl, 吸取被检测液50μl加入第一孔, 充分混匀后从第一孔吸取50μl加入第二孔, 依次做对倍稀释至第18孔。第19孔滴加阳性血清作为阳性对照, 第20孔作阴性对照。每孔滴加1%敏化红细胞50μl, 震荡1min, 放入培养箱37℃培养, 30～90min后观察试验结果。

将检测效价最高的一组卵黄液进行卵黄抗体的提取, 在透析完全后, 用透析过后的纯液再做间接血凝检测 (方法同上) 。15ml粗提液中添加80万IU青霉素1ml, 100万IU链霉素1ml。无菌操作分装到灭菌的青霉素小瓶中, 每小瓶装提纯液4ml或者2ml, 密封, 放到4℃冰箱中保存使用。

1.2.6 卵黄抗体IgY的无菌检测

取制备的卵黄液在兔血琼脂平板上做四区划线接种置培养箱37℃培养24h, 观察血平板上是否有菌落生长。

1.2.7 卵黄抗体IgY的保存

在卵黄液中加入柳硫汞 (0.01%) 、青霉素1000IU/ml、链霉素1000IU/ml, 用蜡密封, 置4℃冰箱冷藏或-20℃冷冻保存备用。

2 结果与分析

2.1 抗犊牛支原体肺炎IgY的效价检测结果

试验组A卵黄犊牛支原体肺炎抗体 (IgY) 的效价检测结果见附表。

盐析法提取试验A组卵黄抗体IgY后的效价检测结果见附表, 结果表明:15 (从2d到15d) 的效价为1:13.6, 30 (从16d到30d) 的效价为1:460.8, 45 (从31d到45d) 的效价为1:960, 60 (从46d到60d) 的效价为1:1408, 75 (从61d到75d) 的效价为1:3584。

备注:从第0d开始收集蛋, 按照15d为一组的标准进行分组, 并以15d的最后1d作为组号即抗体检号。

2.2 抗犊牛支原体肺炎IgY的效价折线图

由附图可见, 试验A组61～75d的卵黄抗体效价最高为1:212 (1:4096) , 结果表明了试验A组抗犊牛支原体IgY效价的消长规律, 随免疫时间逐渐上升, 高效价出现在四免后, 最高效价可达4.096×103, 此后效价幅度变化不大, 但能保持在高效价水平上 (>104) 并维持1个月时间。

2.3 IgY的安全性检验

对6只健康兔和6只健康白鼠各分两组, 分别进行高免卵黄抗体口服、注射, 每只分别经口服或肌肉注射卵黄抗体液2ml, 观察1周, 发现所有试验动物健康无异常, 无过敏反应, 注射部位无炎症现象, 说明经过口服和肌肉注射后制备的卵黄抗体是安全的, 可以用于后续的治疗[7,8,9]。

3 讨论

3.1 免疫结果

本试验表明, 犊牛支原体肺炎弱毒活苗成功的免疫了产蛋母鸡, 制备了抗犊牛支原体肺炎的特异性IgY, 抗体效价随免疫时间逐渐上升, 尤其二免以后成倍增加, 高效价出现在四免后最高效价达4.096×103。此法制备IgY既简单, 又方便操作, 适合于实验室分析研究。

3.2 弗氏佐剂对卵黄抗体滴度的影响

佐剂是一种先于抗原或与抗原混合同时注入体内, 能非特异增强抗原的免疫原性或改变免疫反应类型, 而自身并无免疫原性, 不能引起免疫应答反应的物质。佐剂在免疫中的作用主要是提升机体免疫系统对抗原或免疫原的免疫应答反应, 包括增强免疫反应强度和反应的持久性。完全弗氏佐剂是一种油包水的乳浊液, 能够非常有效的诱导产生高滴度的抗体。完全弗氏佐剂中含结核分枝杆菌的细胞壁成分, 可以加强对抗原的抗体反应。佐剂活性来自于油滴中免疫原的持续释放, 并刺激局部免疫反应。为使IgY的滴度提升, 本试验对健康鸡注射了含有弗氏佐剂的支原体抗原, 结果表明能够提高抗体的滴度。

3.3 采用间接血凝检测IgY效价时的注意问题

本试验采用间接血凝试验方法进行IgY效价的检测。间接血凝试验是将可溶性抗原致敏于红细胞表面, 用以检测相应抗体, 在与相应抗体反应时出现肉眼可见凝聚。采用的红细胞常是绵阳红细胞, 因为其较易大量获取, 血凝图谱清晰, 制剂稳定, 且试验时固定一头羊采血为宜, 避免羊只的个体差异而影响检测结果。致敏方法有鞣酸法、双偶氮联苯胺法、戊二醛法、金属离子法、醛化红细胞法等, 可根据试验需求适宜选择。

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支原体抗体 篇2

实验室检测肺炎支原体IgM (MP-IgM) 是确诊MPP的有效手段, 本文比较几种常用检测方法的敏感性、特异性等指标, 不同条件的实验室可根据实际组合应用, 又尽可能减少成本。

1 材料与方法

1.1 仪器MK3洗板机和MK2型酶标仪。

1.2 材料 ①中澳合作北京美迪科技生物技术有限公司酶免法测定抗肺炎支原体 (IgM) 试剂盒;②美国ALTRUBIOMEDCAI INC快速检测肺炎支原体IgM金标免疫斑点检测卡;③首都儿科研所瞬间接血凝试剂;④富士瑞必欧株式会社赛乐迪亚一麦可Ⅱ明胶颗粒;⑤本院临床确诊MPP患者血清100份, 正常人血清100份。

1.3 方法 ①酶联免疫吸附试验 (ElISA) ;②金标免疫斑点法 (Dot-, DIM) ;③冷凝集试验 (CAT) ;④间接血凝试验 (IHA) ;⑤明胶颗粒凝集试验 (PLA) 。

2 结果

从表1得出冷凝集实验的真阳性 (TP) 、假阳性 (FP) 、真阴性 (TN) 、假阴性 (FN) 与其他四种方法有显著差异。

表2为五种方法的敏感度、特异度、准确度、阳性预测值 (+PV) 、阴性预测值 (-PV) 、阳性拟然比 (+LR) 和阴性拟然比 (-LR) 比较。

经过t检验, 冷凝集试验的敏感度、特异度和准确度均与其他方法差异有显著性 (P<0.05) ;其他四种方法差异没有显著性 (P>0.05) 。金标斑点法的阳性拟然比最高, 是确诊MMP的最好方法, 酶联免疫吸附试验次之;而酶联免疫吸附试验的阴性拟然比最高, 是否认该病的最好方法;间接血凝法、明胶颗粒凝集试验次之, 比较实用, 但明胶颗粒凝集试验操作简单、快速;冷凝集试验的临床诊断价值不大。

3 讨论

随着临床诊断技术的不断发展, 证实肺炎支原体是呼吸道及其他器官感染的重要病因之一, 发病率日益增加并有流行趋势, 临床重症病例和肺外并发症常有发生, 临床表现、X线征象均缺乏特异性, 且须与病毒性肝炎、军团菌肺炎相鉴别, 只能通过实验室检查分离病原体和血清学试验进行鉴别诊断、确诊。血清中特异性抗体可通过冷凝集试验 (CAT) 、问接血凝试验 (rI-IA) 、明胶颗粒凝集试验 (PLA) 、酶联免疫吸附试验 (ELISA) 、金标免疫斑点试验 (DIM) 等方法进行测定。

冷凝集试验 (CAT) 是根据支原体患者血清中有一种抗红细胞I抗原的抗体称红细胞凝集素, 能与自身或“O”型人的红细胞在0℃~4℃条件下发生凝集反应, 37℃时已凝集的红细胞呈可逆性完全分开。发病后2周, 约半数病例产生抗体, 红细胞冷凝集试验阳性, 滴定效价在1:32以上, 或恢复期效价4倍增加的临床意义大。但MMP轻症阳性率只有30%左右, 且50%左右正常人血清中有冷凝激素, 只是小于1:10, 有时大叶性肺炎也成阳性反应, 尤其是当患者有下列疾病时, 冷凝集试验亦有较高效价的阳性反应:流行性感冒、传染性单核细胞增多症、锥虫病、肝硬化、黑水热、重症贫血、骨髓瘤、热带性嗜酸粒细胞增高症、腮腺炎并发睾丸炎、疟疾、螺旋体病等。因CAT特异度和敏感度均为最低, 因此其临床诊断价值不大。

间接红细胞凝集反应 (IHA) 一般用绵羊红细胞以单宁酸处理, 再以MP抗原使之结合, 如加上抗体则可见红细胞凝集反应, 其抗原效价为32倍左右。统计学处理表明间接血凝试验在临床应用中仍具有较高使用价值。灵敏度、误诊率、阴性预测值较高, 而特异度、漏诊率、阳性预测值较低, 且价格低廉, 适合于发现病例。

富士明胶颗粒凝集法 (PLA) 是将肺炎支原体 (株) 细胞膜成分致敏人工明胶颗粒, 致敏粒子在与人血清中存在的肺炎支原体抗体发生凝集反应。操作简单、迅速, 并尽可能消除红细胞载体引起的非特异性凝集, 凝集图像清晰, 过夜后再判读不发生显著变化, 灵敏度l:320左右, 特异性强, 重复性好, 适合于早期诊断。

金标免疫斑点法 (DIM) 是根据金标免疫渗滤原理, 利用MP抗原采用免疫渗滤技术, 检测MP抗体, 黄疸、溶血无影响, 分泌物、粪便标本加生理盐水离心取上清可以检测。但是敏感度略低, 有漏诊的可能;阳性似然比最高, 而且操作简单快速, 是确诊MPP的最好方法。

酶联免疫吸附法 (ElISA) 具有特异、敏感和简便等优点, 已用于检查备种抗体或抗原。Franco等于1980年使用此技术检测可疑支原体肺炎患者血清中的特异性抗体, 并获得了满意结果。近年来, 采用弘一链捕获ELISA检测肺炎支原体特异抗体IgM在发病l周内即可检出。该方法的敏感度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比和阴性似然比均较好, 适合临床常规使用。

摘要：目的比较几种肺炎支原体IgM (MP-IgM) 检测方法的敏感性、特异性和准确度, 供不同条件的实验室根据实际组合应用。方法用酶联免疫吸附试验、金标斑点法、冷凝集试验、间接血凝试验、明胶颗粒凝集法五种方法同时检测确诊阳性标本和对照标本各100份。结果冷凝集试验与其他四种方法存在显著性差异。结论酶联免疫吸附试验敏感性最好, 金标斑点法特异性最好, 间接血凝法和明胶颗粒凝集法较实用, 冷凝集试验诊断意义不大。

支原体抗体 篇3

1 材料与方法

1.1 研究对象

选择2007年1月～2008年10月疑有呼吸道感染来我院抽血检查的412例患者。其中男215例,女197例;年龄最小为18个月,最大为67.0岁,平均(34.7±6.5)岁。实验分组:18个月～18岁为儿童和青少年组,18～67岁为成年人组,详细记录患者的性别、年龄及检测时间。

1.2 试剂与材料

被动(明胶)颗粒凝集试验(passive particle agglutinaton,PPA)试剂盒(Serodia-MycoⅡ),由日本富士瑞必欧株式会社提供。附带器具:25μL滴管2支,专用于滴加致敏粒子和未致敏粒子;U型微量反应板;移液器:1～40μL微量移液器1支,50～250μL移液器1支。

1.3 方法

1.3.1 检测方法

采用被动明胶颗粒凝集法,即被动凝集法:参照MP抗体诊断试剂盒说明书进行试样、阳性对照及阴性对照测定,室温下静置3 h后判定结果并准确记录。

1.3.2 阳性判定标准

试样与未致敏粒子(最终稀释倍数1∶20)的反应判为阴性(+),与致敏粒子(最终稀释倍数1∶40)的反应判为阳性(-),即最终滴度≥40为阳性。

1.4 统计学方法

所有资料均用SPSS 11.0统计软件进行处理,计数资料及率的比较采用χ2检验,P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2007年1月～2008年10月在我院作MP抗体检测的患者412例,其中2007年儿童和青少年组118例,阳性例数16例,阳性率13.55%,成年人组64例,阳性例数7例,阳性率10.93%,两组阳性率比较,儿童和青少年组较成年人组略高,差异无统计学意义(χ2=0.26,P>0.05);秋冬季儿童和青少年组阳性12例,占该组阳性例数的75.00%,成年人组4例,占该组阳性例数的57.14%,两组阳性率比较,儿童和青少年组较成年人组略高,差异无统计学意义(χ2=0.79,P>0.05)。2008年儿童和青少年157例,阳性例数28例,阳性率17.83%,成年人组73例,阳性例数9例,阳性率12.30%,两组阳性率比较,儿童和青少年组较成年人组略高,差异无统计学意义(χ2=1.12,P>0.05);秋冬季儿童和青少年组阳性18例,占该组阳性例数的64.28%,成年人组6例,占该组的66.66%,两组阳性率比较,儿童和青少年组较成年人组略高,差异无统计学意义(χ2=0.56,P>0.05)。不同年龄患者的血清标本中MP抗体的检测结果见表1。

注:1)儿童和青少年组与成人组比较,χ2=0.26,P>0.05;2)儿童和青少年组与成人组比较,χ2=0.79,P>0.05。

注:1)儿童和青少年组与成人组比较,χ2=1.12,P>0.05;2)儿童和青少年组与成人组比较,χ2=0.56,P>0.05。

3 讨论

MP是介于细菌与病毒之间,能独立生存的最小微生物。MP主要在气管、支气管和细支气管的上皮细胞内增殖,经过10～20 d的潜伏期即可发病,表现为头痛、发热并伴有无力和干咳等症状。它是儿童和成人社区获得性呼吸道感染的常见病原体,国内资料统计其发病率约占社区获得性肺炎的10%～30%[2]。MP由口、鼻分泌物经空气或飞沫传播,引起散发和小流行的呼吸道感染,集体生活可使交叉感染机会增多,主要见于儿童和青少年,现在发现成年人中亦常见,秋冬季节较多。支原体肺炎约占非细菌性肺炎的1/3以上,或各类肺炎的10%。有报道称除呼吸道感染外,肺炎支原体还可引起心肌炎、脑炎、肾炎、免疫性溶血性贫血等肺外疾病[3,4]。目前认为肺外表现的机制系免疫因素起主要作用。由于MP抗原与人体心、脑、肾等多种组织存在部分共同抗原,故感染后可产生相应组织的自身抗体,并形成免疫复合物,引起靶器官病变,从而出现MP感染的肺外表现。支原体肺炎的病理改变以间质性肺炎为主,如并发支气管肺炎,则称为原发性非典型性肺炎[1],2002～2003年在我国流行的非典型性肺炎(SARS)患者中,合并MP感染的比例很高[5]。反复MP感染还可刺激免疫细胞的增殖,最终引起气道高反应性和慢性炎症,并有可能进一步发展为哮喘[6]。因此,早期诊断MP感染具有重要意义。

MP的检测方法主要包括支原体分离培养、冷凝集试验、血清抗体检测、PCR检测和核酸检测等[7]。MP培养是诊断肺炎支原体感染的金标准,但费时、费力、不经济,在一般实验室难以开展。目前对MP感染的早期诊断主要依赖血清学试验检测MP-IgM类抗体[8]。本文采用被动明胶颗粒凝集法测定血清MP抗体滴度。

本文收集的数据显示:2007年,儿童和青少年组MP抗体阳性率为13.55%,成年人组为10.93%,以儿童和青少年组略高,差异无统计学意义(χ2=0.26,P>0.05);秋冬季儿童和青少年组MP抗体阳性例数占该组总阳性例数的75.00%,成年人组MP抗体阳性例数占该组总阳性例数的57.14%,两组阳性率比较,以儿童和青少年组略高,差异无统计学意义(χ2=0.79,P>0.05)。2008年,儿童和青少年组及成年人组的MP抗体阳性率分别为17.83%和12.30%,以儿童和青少年组略高,差异无统计学意义(χ2=1.12,P>0.05);秋冬季儿童和青少年组及成年人组MP抗体阳性例数分别占该组总阳性例数的64.28%和66.66%,两组阳性率比较,以儿童和青少年组略高,差异无统计学意义(χ2=0.56,P>0.05)。

根据以上2007～2008年广东茂名地区连续2年的检测结果分析,MP感染所致的肺炎有逐年增长趋势,尤其是儿童和青少年更容易感染,在成年人中亦不少见,并以秋冬季节居多,这一人群分布状况与国内相关报道一致[9],应该引起临床医生的高度重视。

笔者体会,本文采用的被动明胶颗粒凝集法能准确测定血清MP抗体滴度,敏感度高,操作简单,有利于MP感染的早期快速筛检和诊断,且该法费用低、可行性好,可以作为肺炎支原体感染的常规检测方法。

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支原体抗体 篇4

肺炎支原体是导致儿童呼吸道及肺炎的重要病原体,为了解儿童肺炎支原体感染状况,笔者对呼吸道感染儿童255例采用被动颗粒凝集法检测肺炎支原体抗体结果进行回顾性分析。现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料

2013年1~6月于我院就诊呼吸道感染儿童255例,男140例,女115例。年龄6个月~10岁。

1.2方法

采用被动颗粒凝集法检测肺炎支原体抗体,对检测结果进行统计分析。

2 结果

检测结果示:所有患儿中阳性78例(30.59%);男性患儿中阳性43例(30.71%);女性患儿中35例(30.43%)。

3 讨论

支原体为居细菌与病毒之间无细胞壁,可在无生命培基中生长繁殖的最小微生物,其形态多样,基本为球形,亦可呈球杆状或丝状[1],支原体于1898年发现,广泛存在于污水、土壤、脊椎动物、昆虫及人体内[2],感染人类的支原体约12~14种[3]。本调查表明,呼吸道感染儿童肺炎支原体检测阳性率为30.59%。张德文等[4]报道,急性呼吸道感染患儿采用被动颗粒凝集法测定肺炎支原体抗体,总阳性率32%(622/1 942),阳性率年龄分布,0~1岁24.1%,1~3岁36.9%,3~5岁38.1%,5~14岁26.9%。佘吉佳等[5]报道,急性呼吸道感染住院患儿支原体抗体冬季感染率为22.77%,总检出率为13.78%。顾群英[6]报道,呼吸道感染患儿采用体外被动凝集法检测血清肺炎支原体抗体阳性率为32.0%(1 805/5 640)。卢秋维等[7]报道,4535例呼吸道感染儿童采用被动凝集法检测儿童血清支原体抗体,总检出率为30.58%。李颖丰等[8]报道,对呼吸道感染儿童25 765例采用被动凝集法检测支原体抗体,抗体阳性8 664例,阳性率33.63%。此大量文献提示,肺炎支原体为儿童呼吸道感染常见病原体。

支原体抗体 篇5

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014年5月~2015年5月我院儿科门诊收治的90例疑似小儿肺炎支原体感染的患者作为研究对象, 所有患儿中, 男50例, 女40例, 年龄6.72±4.33岁, 病程3~20 (8.25±2.14) d, 其中, 春季发病15例, 夏季23例, 秋季20例, 冬季32例。所有患儿均出现高热、畏寒、咳嗽、咳痰、咽喉疼痛、呕吐、胸骨下疼痛等临床症状, 且一周内未接受过抗生素治疗。所有患儿或患儿家属对本次研究内容知情并签署知情同意书。

1.2 检测方法

采用被动凝集检测法:试剂选用产自日本富士的赛乐迪亚-麦克Ⅱ试剂盒进行肺炎支原体抗体的检测。首先, 在反应板的第1孔内将100μl血清稀释液加入, 自第2孔开始将25μl血清稀释液加入, 加至第12孔;接着, 将25μl待检血清加入第1孔, 将所有孔内进行对倍稀释;再将25μl未致敏因子加入第2孔, 25μl致敏因子加入第3~12孔稀释倍数 (1:40) 、 (1:80) … (1:20840) , 将其混匀后置于20~30℃的室内, 3h后观察检测结果, 判断抗体为阳性或阴性。

1.3 评定标准

观察被动凝集检测法的检测结果, 以抗体滴度≤1:40为阴性结果, 抗体滴度≥1:80为阳性结果。比较小儿肺炎支原体感染在不同性别、不同年龄、不同季节的阳性率是否存在差异。

1.4 统计学分析

采用SPSS 18.0软件包对所得的数据进行统计学分析, 计量资料采用±s表示, 组间比较采用t检验, 计数资料采用率表示, χ2检验, 检验标准α=0.05, P<0.05则具有统计学意义。

2 结果

2.1 肺炎支原体抗体在不同性别中的阳性率比较

检测结果显示, 90例患儿中, 肺炎支原体抗体阳性的有32例, 总阳性率35.6%。其中, 50例男性中有16例肺炎支原体抗体阳性, 男性阳性率32.1%;40例女性中有17例肺炎支原体抗体阳性, 阳性率42.5%, 女性患儿的肺炎支原体抗体阳性率显著高于男性患儿 (P<0.05) , 差异有统计学意义。

2.2 肺炎支原体抗体在不同季节中的阳性率比较

对比不同季节肺炎支原体抗体的阳性率分布, 肺炎支原体感染率最高的季节为冬季, 阳性率达50.1%, 而夏季肺炎支原体抗体的阳性率最低, 为21.7%, 两者相比差异有统计学意义 (P<0.05) ;而春、秋两季肺炎支原体抗体的阳性率差异不明显 (P>0.05) 。见表1。

2.3 肺炎支原体抗体在不同年龄段的阳性率比较

将患儿根据年龄进行分组, 分为3岁以下、3~5岁、5岁以上, 比较患儿不同年龄阶段感染肺炎支原体的阳性率, 3岁以下患儿组的阳性率为23.8%, 3~5岁组为50.0%, 6岁以上组的阳性率为66.7%, 可见三组不同年龄阶段患儿的肺炎支原体感染阳性率有所差异 (P<0.05) , 年龄越大则肺炎支原体感染阳性率越高。见表2。

3 讨论

小儿肺炎支原体感染主要的传播途径为呼吸道飞沫传播, 一年四季均可出现感染, 主要集中于秋冬季, 是临床常见的急性小儿肺炎。近年来, 小儿肺炎支原体感染的发病率呈现上升的趋势[4]。小儿肺炎支原体感染的发病机制目前尚未明确, 可能与自身免疫有关。临床表现为呼吸道感染症状, 即咳嗽、咳痰、发热等, 体温最高可达40℃, 表现为张弛热。小儿肺炎支原体感染不仅引起肺部感染, 还可导致肺外其它系统的感染, 包括神经系统、心血管系统、循环系统、泌尿系统等发生病变[5]。临床上治疗小儿肺炎支原体感染的主要方法, 是运用抗生素治疗, 但是肺炎支原体本身无细胞壁, 因此使用头孢类或单一的抗生素对其进行治疗时, 疗效不佳, 且对常规治疗肺炎的药物具有较高的耐压性。有文献报道, 选择阿奇霉素、罗红霉素等大环内酯类抗生素治疗小儿肺炎支原体感染, 治疗效果显著。而对肺炎支原体抗体进行检测, 明确诊断, 才能够选择正确的治疗方案进行治疗。被动凝集法是目前临床常用的实验方法, 通过检测肺炎支原体抗体, 辅助诊断小儿肺炎支原体感染。被动凝集法可以对肺炎支原体抗体中的初次感染Ig M抗体、再次感染Ig G抗体以及Ig A类抗体同时进行检测, 使检出率高于只检测单一类型抗体的检测方法, 且该检测方法操作简单、方便快捷, 无需依赖特殊检测仪器即可进行。

本次研究中, 针对90例小儿肺炎支原体感染患儿进行研究, 研究结果显示, 肺炎支原体抗体在不同性别、年龄、季节其阳性率分布具有显著差异。比较肺炎支原体抗体在不同性别中的阳性率, 结果显示, 90例患儿中, 肺炎支原体抗体阳性的有32例, 总阳性率35.6%。其中, 50例男性中有16例肺炎支原体抗体阳性, 男性阳性率32.1%;40例女性中有17例肺炎支原体抗体阳性, 阳性率42.5%, 女性患儿的肺炎支原体抗体阳性率显著高于男性患儿, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。对比不同季节肺炎支原体抗体的阳性率分布得出, 肺炎支原体感染率最高的季节为冬季, 阳性率达50.1%, 而夏季肺炎支原体抗体的阳性率最低, 为21.7%, 两者相比差异有统计学意义 (P<0.05) ;而春、秋季肺炎支原体抗体的阳性率差异不明显 (P>0.05) 。还有研究资料表明, 肺炎支原体感染不仅存在季节性, 且其季节性在不同地区具有较大差异。比较患儿不同年龄阶段感染肺炎支原体的阳性率, 结果显示, 3岁以下患儿组的阳性率23.8%, 3~5岁组为50.0%, 6岁以上组的阳性率为66.7%, 三组不同年龄阶段患儿的肺炎支原体感染阳性率有所差异 (P<0.05) , 可见, 肺炎支原体感染率可随着年龄的增长而上升, 感染率较高的年龄段多为学龄前期。

目前, 临床检测肺炎支原体的方法较多, 包括血清学检测、病菌培养法等。本次实验选取被动凝集法对肺炎支原体抗体进行检测, 检测结果显示阳性率较高, 因此, 临床实践中, 使用该检测方法进行检测, 不仅操作简单方便, 也能较好地为诊断及早期治疗提供临床依据, 具有推广的意义。

摘要：选取我院收治的90例疑似肺炎支原体感染的患儿, 采用被动凝集法检测肺炎支原体抗体, 分析比较不同性别、年龄、季节的阳性率。90例患儿中, 总阳性率35.6%。其中, 男性抗体阳性率为32.1%, 女性中抗体阳性率为42.5%, 男女比例差异明显 (P<0.05) ;夏季肺炎支原体抗体阳性率为21.7%, 冬季为50.1%, 两者差异明显 (P<0.05) , 春、秋季为33.3%及35.1%, 差异不明显 (P>0.05) ;3岁以下组的阳性率为23.8%, 35岁阳性率为50.0%, 5岁以上组阳性率66.7%, 可见年龄不同阳性率有所差异 (P<0.05) 。运用被动凝集法对肺炎支原体抗体进行检测, 对小儿肺炎支原体感染具有重要的诊断意义。

关键词：被动凝集法,肺炎支原体感染,肺炎支原体抗体,小儿肺炎

参考文献

[1]刘秀, 吴敏.85例小儿肺炎支原体感染临床及影像学分析报告[J].中国实用医药, 2011, 6 (19) :68-69.

[2]党秋菊, 崔家幸.小儿肺炎支原体肺炎合并粒细胞减少症28例[J].中华实用诊断与治疗杂志, 2011, 25 (7) :720-721.

[3]何泉.支原体感染肺外表现的临床分析[J].中华全科医学, 2013, 11 (9) :1352-1353.

[4]韦勇, 唐建英.被动凝集法检测肺炎支原体抗体在儿科的应用[J].国际检验医学杂志, 2010, 31 (10) :1148-1149.

[5]吴云刚, 小儿肺炎支原体肺炎临床特点及肺外表现分析[J].中华实用诊断与治疗杂志, 2014, 28 (9) :897-898.

支原体抗体 篇6

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择本院2012年2月-2013年1月收治的847例小儿呼吸道感染患者，其中男452例，女395例，年龄3个月～1岁43例，1～3岁287例，3～6岁308例，6～9岁121例，9～14岁88例，平均年龄（5.7±2.1）岁。所有患儿均有呼吸道症状，如发热、咳嗽、咳痰和咽痛等症状。

1.2方法

采取患儿静脉血2 ml,1 h内送至实验室，离心分离血清。注意患儿的血清应清亮、无溶血和脂浊。采用日本富士瑞必欧株式会社赛乐迪亚-麦可II试剂盒，即用被动凝集法测定肺炎支原体抗体，具体操作严格遵照试剂盒说明书执行。

1.3 结果判定

以血清稀释度1:10 240为终点，<1:40为阴性，>1:80为阳性。

1.4 统计学处理

采用SPSS 13.0软件对所得数据进行分析，计数资料比较采用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般情况

在受检的847份血清样本中，检测出肺炎支原体阳性数253例，阳性率29.87%。

2.2 性别差异在肺炎支原体感染中的结果

男性检测样本452例，阳性样本148例，阳性率32.74%；女性检测样本395例，阳性样本105例，阳性率26.58%，两者差异无统计学意义（P>0.05）。

2.3 年龄差异在肺炎支原体感染中的结果

将总数为847份，年龄跨度在3个月～14岁的样本分为五组。其中3个月～1岁为第一组，共43例，阳性样本6例，阳性率13.95%；1～3岁为第二组，共287例，阳性样本82例，阳性率28.57%；3～6岁为第三组，共308例，阳性样本117例，阳性率37.99%；6～9岁为第四组，共121例，阳性样本31例，阳性率25.62%；9～14岁为第五组，共88例，阳性样本17例，阳性率19.32%，各组间差异均有统计学意义（P<0.05）。见表1。

3 讨论

小儿因为免疫系统发育尚不完全[5]，所以呼吸道感染发生率高于成年人，其临床症状（咽痛、咳嗽、发热等）严重的影响着患儿的生活质量[6]。正常人和动物的呼吸道黏膜表面长期寄居着多种支原体，当人体局部免疫力下降时这些支原体即可致病。肺炎支原体是下呼吸道重要的致病性支原体，主要引起间质性肺炎，又称原发性非典型性肺炎，其引起的人类支原体肺炎约占非细菌性肺炎的50%左右。

肺炎支原体（MP）通过飞沫传播，在人群中具有普遍易感性，其中又以儿童和青少年多见。有关文献显示，MP感染有明显的流行年与非流行年的传染病特点，其每隔3～8年可在世界范围内出现一次流行高峰[7]。本组资料显示MP的传播具有年龄的差异，但无明显的性别差异，这与文献资料的结果一致[8]。

肺炎支原体主要引起体液免疫，细胞免疫也有作用。此外，肺炎支原体与人类心、肺、脑和肾等组织细胞具有共同抗原，可引起II型超敏反应，造成心肌炎、肾炎、脑膜炎等疾病。当肺炎支原体抗体IgG与相应抗原组成免疫复合物，又可引起III型超敏反应。这也是肺炎支原体引起严重肺外组织疾病的一个重要的原因。

肺炎支原体感染是继病毒、细菌感染后的第三位的小儿呼吸道感染病因，症状表现不具有较高的特征性但易伴发肺外组织或器官病变，因此，早期及时准确地诊断对于MP的感染具有重要意义。MP的检测方法有很多，可用被动颗粒凝集法、酶联免疫吸附法检测血清肺炎支原体IgM，或做冷凝集实验，PCR法、培养法检测患儿咽拭子标本肺炎支原体[9]。培养法与PCR技术准确度很高，但是由于培养要求高、周期长（2～3周），PCR技术则受限于设备以及操作要求而不被很多医院采用。而被动颗粒凝集法以其价廉、快速、便捷、准确度较高等优点受到众多医院的青睐，近年来，又出现了多种抗体联合检测的方法以提高肺炎支原体抗体的准确率[10]。

本次实验运用被动颗粒凝集法，对儿童血清样品进行检测，笔者发现大于3岁的儿童对MP的感染率较高，而小于一岁的儿童感染率较低，这与所得文献资料一致[11,12,13]。这可能是由于1岁以内婴幼儿虽然免疫系统尚未发育完善，但由于自身活动受限，与外界接触机会少，而且新生儿容易受到家长的保护，这也使得其暴露于MP的机会下降，而大于3岁的儿童与外界接触较多，暴露于MP的机会多且该年龄段儿童多群体活动并且清洁保护工作做的不够，易发生交叉感染有关。尤其是肺炎支原体感染具有2～3周的潜伏期，此期虽然感染症状不显著，但此时的患者或带菌者已具有传染性，因此，学校内较易发生流行性爆发，这一点也是值得引起广大关注的，幼儿园要注意清洁工作，预防出现疾病的流行。同时在本次研究中，笔者也注意到春冬季节，发病的患儿数较多，提示其发病可能与季节有关，有待进一步的研究。

应用被动凝集法作为临床常规检测肺炎支原体抗体的检查项目，早期诊断肺炎支原体感染，及时开始治疗并有效隔离患儿，是预防并防止儿童间交叉感染的有效手段及重要措施。

摘要：目的:研究支原体抗体检测对小儿呼吸道感染临床诊断的应用价值。方法:回顾性分析本院2012年2月-2013年1月患儿血清中肺炎支原体抗体的检测结果。结果:在847份样本中,共有253例样本检测出肺炎支原体抗体阳性,阳性率29.87%;其中男童肺炎支原体阳性检测率32.74%,女童肺炎支原体阳性检测率26.58%,两者差异无统计学意义(P>0.05)。在不同年龄组中,3～6岁组阳性率最高为37.99%,3个月～1岁组阳性率最低为13.95%,各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:肺炎支原体是小儿呼吸道感染的主要病原体,支原体抗体的检测在临床早期诊断中具有较高的价值。

支原体抗体 篇7

关键词：支原体抗体,大环内酯类抗生素,小儿呼吸道感染

呼吸道感染是小儿常见的呼吸系统疾病。近些年, 由于病菌耐药性的增强, 越来越多的报道显示, 小儿呼吸道感染有小范围内流行的趋势[1]。由于小儿免疫力低下, 呼吸道感染又常是引起小儿非典型性肺炎的主要原因, 严重时还可导致患儿全身器官的病变, 所以在临床中一定要对呼吸道感染加强重视, 积极寻求最有效的治疗方法。笔者通过对支原体抗体阳性率的检测, 评价大环内酯类抗生素治疗小儿呼吸道感染的效果。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2013年1月-2014年5月在我院收治的呼吸道感染的患儿108例, 均经病原检查确诊, 其中男60例, 女48例。将108例患儿随机分为观察组和对照组各54例。观察组男30例, 女24例;年龄1~12 (6.20±0.50) 岁;病程1~7 (3.80±0.30) d。对照组男30例, 女24例;年龄1~11 (6.30±0.35) 岁;病程1~9 (3.70±0.50) d。2组患儿性别、年龄、各个年龄阶段的构成等一般资料及支原体抗体检测阳性率比较差异无统计学意义 (P>0.05) , 具有可比性。

1.2 治疗方法

观察组采用克拉霉素片 (石药集团中诺药业 (石家庄) 有限公司生产, 国药准字:H20093439) 口服, 每次10~20 mg/kg, 每天2次。对照组采用红霉素治疗, 将20~40mg/kg红霉素 (湖南中南科伦药业有限公司生产, 国药准字:H43020028) 加入5%葡萄糖溶液500~1000ml中缓慢静脉滴注, 8~12h内滴完, 每天1次。治疗2周后比较2组临床疗效。

1.3检测方法

治疗完毕后取2组患儿的外周静脉血3.0ml送检验部门, 所取的血液标本在0.5h内送检, 采用人肺炎支原体抗体试剂盒 (购自上海劲马实验设备有限公司) 进行检测, 将不同稀释倍数的2组患儿的检出率进行比较。

1.4 疗效评价

参照小儿呼吸道感染治疗的相关评价标准。治愈:咳嗽、咯痰、胸闷等症状均消失, 相关检查 (实验室检查、病因学检查) 均正常;显效:临床症状基本消失, 相关检查有明显改善;有效:临床症状有一定改善, 实验室及病因学检查有所好转;无效:咳嗽、咯痰、胸闷等症状及实验室检查病因学检查基本无变化或好转, 甚至是加重。总有效率= (治愈+显效) /总例数×100%。支原体抗体的检测, 血清稀释倍数≤1∶40为阴性, 稀释倍数≥1∶80为阳性。

1.5 统计学方法

计数资料以率 (%) 表示, 组间比较采用χ2检验, P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 临床疗效

观察组总有效率为96.30%高于对照组的75.93%, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。见表1。

[例 (%) ]

注:与对照组比较, *P<0.05

2.2 支原体抗体检出率

治疗后观察组患儿不同稀释倍数的支原体抗体检测阳性率均低于对照组, 差异均有统计学意义 (P<0.05) 。见表2。

[例 (%) ]

注:与对照组比较, *P<0.05

3 讨论

呼吸道感染是临床最常见的一种疾病之一, 而小儿是呼吸道疾病的高发人群, 这主要与小儿免疫能力有关。小儿呼吸道感染最主要的临床表现是发热、咳嗽、咯痰等[2], X线胸片以较明显的肺部浸润阴影为主要表现, 而临床医师能够发现的有诊断意义的临床体征相对比较少, 小儿呼吸道感染严重时甚至会影响到患儿的生活质量[3]。较多的研究表明[4,5], 这种状况是由于小儿免疫状态相对较差导致的。所以在临床中应该对呼吸道感染加强重视, 做到早诊断、早治疗。

大环内酯类抗生素是一类窄谱的抗生素, 主要治疗革兰阳性球菌引起的感染性疾病, 并对衣原体、支原体等具有高度的敏感性。克拉霉素和红霉素都属于大环内酯类抗生素, 红霉素可以有效抑制蛋白质的合成, 尤其对革兰氏阳性菌有强的活性克拉霉素是红霉素的衍生物, 其优点是半衰期变长了, 并且降低了治疗中的不良的反应。本研究通过比较克拉霉素和红霉素的治疗效果发现, 服用克拉霉素的患儿大部分临床症状得到改善的时间显著短于红霉素治疗的患儿, 并且总有效率也较高, 同时不良反应显著减少。由此可知, 口服克拉霉素比静脉滴注红霉素对小儿的呼吸道感染疾病治疗效果更佳, 而且安全性较高。

相关研究表明支原体抗体与小儿呼吸道感染具有相关性。本结果显示口服克拉霉素治疗后的患儿支原体抗体检测阳性率显著降低, 患儿病情有很大程度改善, 从而证明支原体抗体的浓度与小儿呼吸道感染疾病的严重程度密切相关。通过对患儿治疗后体内支原体抗体浓度的检测, 客观地评价大环内酯类抗生素治疗小儿呼吸道感染的效果。

综上所述, 在小儿呼吸道感染的治疗中口服克拉霉素的疗效比静脉滴注红霉素的效果好, 并且临床安全性高, 而支原体抗体检测可客观评价大环内酯类抗生素治疗小儿呼吸道感染的效果, 对疾病的诊断价值较高, 具有非常高的临床意义, 值得临床推广应用。

参考文献

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