抑菌作用（通用12篇）
抑菌作用 篇1
甘氨酸 (Glycine) , 又名氨基乙酸 (C2H5NO2) , 在氨基酸中结构最简单, 为人体非必需氨基酸。甘氨酸为白色单斜晶系的晶体或白色性结晶粉末, 无臭、无毒、易溶于水[1], 甜度为蔗糖的0.8倍。大鼠口服半数致死量LD50是7.93 g/kg[2]。
目前, 谷氨酸钠 (味精) 和甘氨酸是全世界用量最大的调味品。甘氨酸因具有抗氧化作用而被添加到奶油、干酪、人造奶油中, 能延长保质期3~4倍, 在火腿、腊肠、鱼肉、花生酱等食品中添加1%~2%的甘氨酸能达到防臭和防腐的效果[3], 甘氨酸还用于配制运动员的营养饮料及其氨基酸食品, 食用添加甘氨酸的食品对人体胃液酸度的调节、肌肉活力的提高有一定作用[4,5,6,7]。
我国允许使用的防腐剂有30多种, 但安全无毒、经济实用、抑菌广泛并适用于各种食品的理想防腐剂仍然很少。甘氨酸来源丰富, 对动物的毒性很低, 同时几乎不对人体产生毒性, 因此可作为一种非特异性防腐剂。石春芝等[8]对甘氨酸的抑菌作用研究表明, 3%的甘氨酸对坚强芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌抑菌的作用非常明显, 甘氨酸与低级脂肪酸合并使用时对引起豆腐腐败的微生物有显著的抑菌作用。在席晓岚等人的研究报道中, 用4-硝基苯甲醛与甘氨酸反应合成Schiff碱, 抑菌试验结果表明, 该化合物对红色毛癣菌、孢子丝菌、白色念珠菌均有不同程度的抑菌活性作用[9]。
如何既防止食品的腐败变质, 又满足消费者对防腐剂安全无毒、经济有效的要求是目前研究的热点, 甘氨酸既具有防腐作用, 又有营养和改善食品风味等作用, 这样的天然防腐剂的研究和开发利用是食品科学工业的一个新方向。本文采用微量肉汤稀释法, 探究在不同浓度、p H值、时间的条件下甘氨酸对大肠杆菌 (E.coli) 和金黄色葡萄球菌 (Sa) 的最佳抑制条件, 扩展对甘氨酸抑菌作用的环境和条件的研究, 进一步了解甘氨酸的抑菌作用效果。
1 实验材料及方法
1.1 材料与仪器
金黄色葡萄球菌CICC 10384, 由广西中医药大学第一附属医院提供;大肠杆菌CICC 10419, 购于中国工业微生物菌种保藏中心;Mueller-Hinton Broth, 北京陆桥技术有限公司;琼脂, 国药集团化学试剂有限公司;甘氨酸, 分析级, 含量不少于99.0%, 天津市光复精细化工研究所。
752N紫外分光光度计, 上海仪电分析仪器有限公司;JJ200电子天平, 常熟市双杰测试仪器厂;LRH-250-S恒温培养箱, 韶关市泰宏医疗器械有限公司;DHG-9503A电热恒温鼓风干燥箱, 上海柏欣仪器设备厂;VS-840K-U洁净工作台, 苏净集团苏州安泰空气技术有限公司;YXQ-LS-50SII立式蒸汽压力灭菌柜, 上海博讯实业有限公司医疗设备厂;JB-3恒温定时搅拌器, 上海雷磁创益仪器仪表有限公司;XW-80A旋涡混合器, 江苏海门市麒麟医用仪器厂;DK-98-11电子调温万用炉, 天津市泰斯特仪器有限公司;TP8D300H移液枪, TOPSCIEN;Biotek Epoch全波长酶标仪。
1.2 实验方法
1.2.1 溶液制备
配制浓度为0.2 g/m L的甘氨酸溶液, 分别用醋酸缓冲液调节p H至4、5, 用磷酸盐缓冲液调节p H至6、7、8、9, 放入冰箱保存, 备用。
1.2.2 培养基的制备
MHB固体培养基:称取MHB培养基12.5 g, 加入琼脂7.5 g, 蒸馏水500 m L, 溶解, 分装, 煮至清澈透明, 121℃高压灭菌15 min, 备用。
MHB液体培养基:称取MHB培养基12.5 g, 加入蒸馏水500 m L, 溶解, 分装, 煮至清澈透明, 121℃高压灭菌15 min, 备用。
1.3 甘氨酸在不同浓度、p H值、时间下的抑菌作用
1.3.1 浓度对抑菌效果的影响
取洁净无菌的96孔板, 8列 (1~8) ×12行 (A~L) , p H=7的甘氨酸储备液和液体培养基、菌液。
96孔板1~8列加入顺序见表1, A~D行加入E.coli菌液, E~H行加入Sa菌液, 加入完毕后, 将96孔板放入恒温培养箱中, 培养温度为37℃, 14 h后取出, 用酶标仪测定OD620值, 计算抑菌率。
1.5.2 p H值对抑菌效果的影响
以1.5.1中对抑菌效果显著的最低浓度为最佳抑菌浓度, 参照表1在96孔板中加入p H值分别为5、6、7、8、9的该浓度甘氨酸储备液, 加入相应的无菌水、液体培养基和菌液, 放入37℃恒温培养箱中培养14 h后, 取出, 用酶标仪测定OD620值, 计算抑菌率。
1.5.3 抑菌时间对抑菌效果的影响
将1.5.2中抑菌效果最佳的处理再放回37℃恒温培养箱中培养, 每隔2h测定OD620值, 即记录14、16、18、20 h和22 h时, 在最佳抑菌浓度、最佳抑菌p H值条件下, 甘氨酸的抑菌率随时间的变化情况。
1.5.4 抑菌率计算方法
抑菌率按照公式 (1) 计算:
当实验OD值大于阳性对照OD值时, 抑菌率记为0.0%;当实验OD值小于阴性对照OD值时, 抑菌率记为100.0%。
2 实验结果与讨论
2.1 不同浓度甘氨酸的抑菌效果
浓度为0.5%、1.0%、1.5%、2.0%和2.5%的甘氨酸对E.coli的抑菌率分别为0.0%、37.4%、76.1%、100.0%和100.0%, 如图1所示。由图1可知, 随着甘氨酸浓度的增加, 对E.coli的抑制作用增强, 甘氨酸浓度到达2.0%后, 甘氨酸对E.coli的抑菌率达100%。甘氨酸浓度为0.5%时, 对E.coli没有抑菌作用, 甘氨酸属于氨基酸, 是E.coli良好的营养物质, 此时E.coli将甘氨酸作为营养物质吸收;浓度为1.0%时, 甘氨酸开始抑制E.coli, 当浓度到2.0%时, 抑菌率为100.0%, 抑菌效果最佳, 浓度升高到2.5%, 抑菌率同样为100%, 说明浓度达到2.0%后甘氨酸对E.coli都有很好的抑制作用。
测定浓度为0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%和3.0%的甘氨酸对Sa的抑制作用, 得到抑菌率分别为0.0%、0.0%、2.6%、55.9%、100.0%、100.0%, 如图2所示。由图2可知, 随着甘氨酸浓度的增加, 对Sa的抑制作用增强, 当甘氨酸浓度达到2.5%时, 甘氨酸对Sa的抑菌率达到100%。甘氨酸浓度为0.5%、1.0%时, 对Sa没有抑菌作用, 此时Sa以甘氨酸为营养物质;浓度为1.5%时, 甘氨酸开始对Sa产生抑制作用, 当浓度到2.5%时, 抑菌率为100.0%, 抑菌效果最佳, 浓度升高到3.0%, 抑菌率同样为100.0%, 说明当浓度到达2.5%时, 甘氨酸对Sa有很好的抑制作用。
甘氨酸可作为微生物的良好氮源, 对E.coli和Sa是营养物质, 因此甘氨酸浓度过低则无法很好地抑制E.coli和Sa的生长, 浓度过高则成本增加, 并且对于氨基酸含量丰富的食品, 添加的甘氨酸过量还可能会导致人体对营养吸收不平衡, 因此甘氨酸对E.coli的最佳抑制浓度应选择2.0%, 对Sa的最佳抑制浓度应选择2.5%。
2 2不同p H值甘氨酸的抑菌效果
设置浓度为2.0%, p H值分别为5、6、7、8和9的甘氨酸溶液, 测定其对E.coli的抑制作用效果, 抑菌率分别为95.2%、98.1%、100.0%、100.0%、96.7%, 如图3所示。由图3可知甘氨酸在p H 5~9范围内对E.coli都有良好的抑菌效果, 且抑菌率差异不明显, 表明甘氨酸在p H 5~9的范围内都有抑菌作用。
设置浓度为2.5%, p H值分别为5、6、7、8和9的甘氨酸溶液, 测定其对Sa的抑制作用效果, 抑菌率分别为100.0%、92.4%、98.1%、97.0%、86.9%, 如图4所示。由图4可知, 甘氨酸在p H 5~9的范围内对Sa都有较好的抑菌效果, 除p H=9的甘氨酸外, 其他甘氨酸抑菌均抑菌率超过90.0%, 且差异不明显, 表明甘氨酸在p H 5~8的范围内对Sa有良好抑菌作用, p H=9的甘氨酸抑菌效果稍差。
甘氨酸在p H值为5~9的范围内对E.coli的抑制率均达到95.0%以上, 对Sa的抑制率均达到85.0%以上, 表明甘氨酸在较宽的p H值范围内对E.coli和Sa有广泛的抑制作用。由图3可知, 甘氨酸在p H值为7或8时, 对E.coli的抑菌效果最佳, 由图4可知甘氨酸在p H为7时抑菌率为98.1%, p H值为8时为97.0%, p H为7比p H为8抑菌更好, 综合考虑, 甘氨酸对E.coli的最佳抑菌的p H应为7。由图4可知甘氨酸的p H值为5时对Sa的抑菌效果最佳, 因此甘氨酸对Sa的最佳抑菌p H为5。
2.3 不同时间甘氨酸的抑菌效果
选择甘氨酸浓度为2.0%, p H值为7, 设置14、16、18、20 h和22 h5个不同的培养时间, 测定甘氨酸对E.coli的抑制效果, 得到的抑菌率分别为100.0%、95.4%、100.0%、100.0%、98.3%, 如图5所示。由图5可知, 甘氨酸对E.coli的抑制作用随着培养时间的增加, 甘氨酸对E.coli的抑菌率没有明显变化, 即甘氨酸在5个培养时间里对E.coli都有良好的抑制效果, 且5个时间里的抑菌率差异不明显, 表明甘氨酸在14~22 h内对E.coli有良好的抑菌效果。
选择浓度为2.5%, p H值为5的甘氨酸, 设置14、16、18、20 h和22h 5个不同的培养时间, 测定甘氨酸对Sa的抑制效果, 得到的抑菌率分别为100.0%、100.0%、96.4%、91.1%、92.0%, 如图6所示。由图6可知, 甘氨酸对Sa的抑制作用随着培养时间的增加逐渐减弱, 当时间到16 h时, 抑菌率为100.0%, 16 h后抑菌率降低, 说明培养时间在16 h内甘氨酸对Sa的抑制效果很好。甘氨酸在设置的5个培养时间里对Sa都有良好的抑制效果, 并且五个时间里的抑菌率差异不明显, 表明甘氨酸在14~16 h内对Sa有良好的抑菌效果。
甘氨酸在较长的时间内对E.coli和Sa的抑制作用达到90.0%以上, 呈现出较好的抑菌效果, 表明甘氨酸能在较长的时间范围内起到良好的抑菌作用。
3 结论
通过测定不同浓度、p H值和时间的甘氨酸对E.coli和Sa这两种细菌的抑菌率, 确定甘氨酸浓度为2.0%, p H为7, 培养14~22 h时, 对E.coli的抑制作用最佳;甘氨酸浓度为2.5%, p H值为5, 培养时间在16 h内对Sa的抑制最佳。甘氨酸对E.coli和Sa都有较好的抑制作用。
对比不同浓度甘氨酸对E.coli和Sa的抑制作用, 较低的甘氨酸浓度即可抑制E.coli的生长繁殖, 说明E.coli对甘氨酸更为敏感。对比甘氨酸在p H值在5~9的范围内对E.coli和Sa的抑制作用, p H的变化对E.coli和Sa的抑制效果影响不大。对比培养时间对E.coli和Sa的抑制作用, 在22h内甘氨酸对E.coli的抑制效果变化较小, 在16 h后对Sa的抑制作用随着时间的延长而减弱, 说明甘氨酸对E.coli的抑制时间更为长久。
4 结语
大肠杆菌为革兰氏阴性菌, 金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌, 甘氨酸对这两种细菌都有良好的抑制作用, 并在较宽的p H值范围和时间范围内其抑菌率没有显著差异。
甘氨酸可作为一种安全无害的防腐剂应用于易被E.coli和Sa污染的食品中, 如米粉, 糕点。甘氨酸既具有防腐作用, 又具有营养和改善食品风味等作用, 其研究和开发利用有着广阔的前景。
摘要：甘氨酸可作为营养补充剂和调味剂应用于食品中, 还具有一定的抑菌效果。本文通过研究甘氨酸在不同的条件下对大肠杆菌 (Escherichia coli, 以下简称E.coli) 和金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus, 以下简称Sa) 的抑菌活性, 确定甘氨酸对这两种食品中常见的致病菌的最佳的抑制条件。用微量肉汤稀释法, 测定在不同的浓度、不同pH值、不同时间的条件下, 甘氨酸对E.coli和Sa的抑菌率, 确定最佳的抑菌条件。通过单因素实验研究表明甘氨酸对E.coli的最佳抑菌条件:浓度为2.0% (g/mL) , pH为7, 时间为20 h, 抑菌率为100%。甘氨酸对Sa的最佳抑菌条件:浓度为2.5% (g/mL) , pH为5, 时间为16 h, 抑菌率为100%。甘氨酸对Sa和E.coli均具有良好的抑制作用, 对E.coli的抑制效果更好。
关键词：甘氨酸,抑菌,微量肉汤稀释法
参考文献
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抑菌作用 篇2
目的研究复方大青叶注射液体外抑菌作用及抗内毒素作用.方法体外抑菌作用采用液体培养基连续稀释法测定复方大青叶的`最小抑菌浓度(MIC);抗内毒素作用采用细菌内毒素检查法.结果体外抑菌实验结果表明复方大青叶注射液对被测微生物的最小抑菌浓度为:金黄色葡萄球菌,MIC62 g・L-1;藤黄微球菌,MIC62 g・L-1;枯草芽孢杆菌,MIC62 g・L-1;大肠埃希菌,MIC125 g・L-1;变形杆菌,MIC125 g・L-1;新型隐球菌,MIC62 g・L-1;白假丝酵母菌,MIC125 g・L-1;啤酒酵母菌,MIC125 g・L-1.抗内毒素结果:复方大青叶注射液62 g・L-1即具有抗内毒素作用.结论复方大青叶注射液体外具有广谱抗菌作用,不仅对革兰阳性细菌有较强的抑菌作用,而且对某些真菌也有较强的抑菌作用;复方大青叶注射液有较强的抗内毒素活性.
作 者：周丽娜 袁波 苏昕 霍丽丽 李发美 ZHOU Li-na YUAN Bo SU Xin HUO Li-li LI Fa-mei 作者单位：周丽娜,苏昕,ZHOU Li-na,SU Xin(沈阳药科大学,制药工程学院,辽宁,沈阳,110016)
袁波,霍丽丽,李发美,YUAN Bo,HUO Li-li,LI Fa-mei(沈阳药科大学,药学院,辽宁,沈阳,110016)
宫炎平片体内、外抑菌作用研究 篇3
【关键词】宫炎平片；体外抑菌；体内抑菌；动物
【中图分类号】R285.5【文献标识码】A【文章编号】1044-5511（2011）11-0071-01
宫炎平片由地稔、两面针、当归、五指毛桃、穿破石等中药组成。具有清热利湿、祛瘀止痛、收埝止带。临床用于急、慢性盆腔炎见下腹胀痛、腰痛、带下增多、月经不调等属于湿热下注、瘀阻胞宫所致者。根据宫炎平片临床用于急、慢性盆腔炎，本文就抗菌作用实验报道如下。
1材料与方法
1.1 受试药物与试剂:宫炎平片由广东罗浮山药业有限公司提供（批号L08F010）；阿莫西林胶囊由香港联邦制药厂有限公司生产（批号16453）；培养基，营养肉汤，沙保氏培养液，1%葡萄糖肉汤，恒温培养箱，高压灭菌锅均由广州中医药大学基础学院细菌培养室按常规制备和提供。
1.2 菌种及实验动物 :金黄色葡萄球菌（26112）、乙型溶血性链球菌（32210）、丙型链球菌（32206）、卡他球菌、福氏志贺氏菌（51571）、大肠埃希氏菌（44113）、绿脓假单胞菌（10211）。卡他球菌由细菌检验室分离，白色念珠菌（98001）为广州市药品检定所惠赠；其余菌种均由北京中国药品生物制品检定所提供。KM雌性小鼠，18～22g，SPF级，♀，由广州中医药大学动物中心提供，合格证号0040459。
1．3 体外抑菌试验［1］: 试验选用可定量、敏感性较高的液体试管法进行。宫炎平片用营养肉汤配制成每ml含原药量0.20g、0.10g、……0.0008g，共九个药物浓度，每管总量1ml，热力灭菌。对乙型和丙型链球菌的试验尚需在灭菌药液中添加1%葡萄糖。对白色念珠菌的试验则应用沙保氏培养液配制药液。并设菌种对照管和药物对照管；菌种对照管为不含药物的培养基加试验菌；药物对照管为不加试验菌的药液。每排药液的各个浓度管及菌种对照管分别加入1：2000的试验菌液（8h培养物）0.1ml，37℃恒温箱培养18h观察结果。
1．4 体内抑菌试验［2］ 预试实验：取体重相近KM小鼠分别腹腔注射不同浓度的菌混悬液，即金黄色葡萄球菌（30亿/ml、20亿/ml、10亿/ml）、乙型溶血性链球菌（30亿/ml、20亿/ml、10亿/ml）、大肠肝菌（30亿/ml、20亿/ml、10亿/ml）溶液, 每浓度组8只，0.5 ml/只，观察动物在5天内的死亡情况。正式实验时选用引起小鼠超过70%死亡的菌液浓度进行感染。在预试验基础上，分别对以上三种菌液进行药物抗感染试验。各菌液设宫炎平高2080（mg.kg-1.d-1）、中（1040 mg.kg-1.d-1）、低（520 mg.kg-1.d-1）剂量组，阿莫西林胶囊（666.7mg.kg-1.d-1）阳性组及模型对照组。以预试实验时选定的使小鼠死亡率达70%以上的各菌液给各组小鼠腹腔注射造成感染，0.5ml/只。小鼠于注射菌液前3d以及注射菌液后5h，24h对宫炎平各剂量组、阳性组灌胃给药一次。模型对照组给予等容积的生理盐水。观察和统计5天内各组动物的死亡率。
1．5 統计学处理:用SPSS11.5进行T检验分析。
2 实验结果
2．1体外抑菌试验:表1结果显示，宫炎平片对所试菌种，主要是常引起泌尿生殖道感染的病原菌和条件致病菌，均有不同程度的抑菌作用。其中对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌和福氏志贺氏菌、绿脓假单胞菌的作用较强。
注：菌种对照，试验菌种均是生长正常；药物对照，无菌生长。
2．2 体内抑菌试验 表2结果显示：金葡菌浓度为30亿/ ml，乙链菌浓度为30亿/ml，大肠杆菌浓度为20亿/ml可致小鼠死亡率达70%以上。表3结果显示，宫炎平高、中、低剂量组对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、大肠肝菌感染小鼠均有预防和治疗作用，对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌效果明显，宫炎平高剂量组效果优于中、低剂量组。提示宫炎平具有明显的抗菌作用。
3 讨论
子宫内膜炎属于盆腔炎，多发于已婚育龄期妇女，近年来由于宫腔内侵入性操作增多等因素的影响，使得慢性子宫内膜炎的发病率呈上升趋势，已成为妇科的常见病之一。宫炎平片是用现代科学方法精制而成的一种纯中药制剂，功能清热利湿，祛瘀止痛，收敛止带，用于急慢性盆腔炎见下腹胀痛、腰痛、带下增多、月经不调等症属于湿热下注、瘀阻胞宫所致者，是创新有效的新一代妇科良药。本文仅在抗菌实验方面的报道。
现代医学认为，子宫内膜多发于经期、分娩、妇科手术后，发病与肌体免疫力和细菌感染有关, 在肌体抵抗力下降时, 感染致病菌而引起组织增生、粘连、脓肿、积水等病理性改变, 导致盆腔组织器官血液循环障碍，血液流变学异常，即血液处于浓、粘、凝、聚状态。慢性子宫内膜炎在中医学中属“崩漏”、“带下”、“痛经”、“癥瘕”、“妇人腹疼”等范畴，并认为本病由于经行、产后胞脉空虚，体质虚弱，邪毒乘虚内侵，湿浊热毒等蕴结下焦，与气血搏结，致气血瘀滞而发病。中医常采用活血化瘀、清热利湿、利湿止带、温经化瘀、活血通络、温阳化气、活血利水、行气导滞、破瘀消症等法。本文通过抗菌作用研究结果表明，体外明显抑制金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌，对福氏志贺氏菌和绿脓假单胞菌有一定抑制作用；体内明显抗金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌。表明宫炎平片对生殖系统常见菌具有较一定抑制作用。
参考文献
妇科活血止痛颗粒的体外抑菌作用 篇4
本实验所选用的妇科活血止痛颗粒是根据我国传统方剂处方加减制成的中药内服制剂，具有清热凉血、活血化瘀、消肿止痛的功效，临床上用于治疗盆腔炎引起的下腹痛、发热、阴道分泌物增多。为明确该药的治病机制，笔者参考有关文献[2,3,4,5]，观察本药提取物的体外抑菌作用，为其进一步研究和应用提供依据。
1 材料与方法
1.1 药物
妇科活血止痛颗粒（以下简称样品）；妇乐颗粒（以下简称对照药），江苏康缘药业股份有限公司生产（批准文号：国药准字Z32020223；批号：060804）。
1.2 菌株
金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]，大肠埃希菌[CMCC(B)44102]，铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104]，白色念珠菌[CM-CC(F)98001]，乙型溶血性链球菌[CMCC(B)32210]均由中国药品生物制品检定所提供。
1.3 培养基及试剂
营养肉汤培养基及真菌培养基由中国药品生物制品检定所生产。人血清蛋白（批号：200206015），西安瑞克生物制品有限公司生产。葡萄糖及酚红指示剂均为分析纯。
1.4 仪器
高压蒸汽灭菌器LDZX-40AI（上海申安医疗器械厂）；超净工作台YJ-1450（苏州净化设备厂）。
1.5 方法
1.5.1 供试液的制备
称取样品和对照药各10 g，分别加水20 ml，制成1∶2的供试液，以流通蒸汽灭菌30 min，备用。在100 m营养肉汤培养基中加入0.002 g酚红指示剂和5 g葡萄糖，制成葡萄糖酚红肉汤稀释液。
1.5.2 菌液的制备
接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，35°C下培养18 h；接种白色念珠菌的新鲜培养物至真菌培养基中，25°C下培养24 h；接种乙型溶血性链球菌的新鲜培养物至含5%人血清蛋白的营养肉汤培养基中，35°C下培养18 h。上述培养物均以0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释成10-5的菌液，备用。
1.5.3 最低抑菌浓度（MIC）的测定
采用双倍稀释法[6]。在无菌条件下，将样品和对照药供试液分别依次稀释成1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128的系列浓度，将上述浓度的药液依次加入小试管中，每管1 ml；并在每排中加1支小试管，内加稀释剂1 ml，作为阳性对照管。在每排小试管中加一种菌液，每管菌量均为0.1 ml，加乙型溶血性链球菌的小试管中再另加0.1 ml人血清蛋白，混合均匀，置35°C培养24～48 h，以48 h结果为准。小试管中液体由红变黄即说明有菌生长，菌未生长的试管中液体未变色。无菌生长的小试管中的最低药液浓度即为对该菌株的最低抑菌浓度。
2 结果
妇科活血止痛颗粒、妇乐颗粒的体外抑菌作用见表1、2。
由表2可见，妇科活血止痛颗粒对选取的5种实验菌株均有良好的抑制作用，对铜绿假单胞菌作用稍弱，总体上的体外抑菌效果优于妇乐颗粒。
3 讨论
本实验选择金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、乙型溶血性链球菌、白色念珠菌（作为真菌的代表菌），包含了盆腔炎的常见致病菌，又有革兰阳性菌、革兰阴性菌及真菌，既反映了临床情况，也考查了抗菌谱。
体外双倍稀释法抑菌实验，菌液浓度多采用10-3～10-5。本实验中，样品和对照药均为中药复方制剂，药液混浊，如果菌液浓度选择过高，其供试液浓度也须相应增大，但供试液浓度过大，则颜色较深而不利于观察结果。故选用10-5作为菌液实验浓度。而糖是多数细菌良好的碳源和能源，最容易吸收和利用的单糖是葡萄糖。细菌发酵葡萄糖会产酸，而酚红指示剂的变色范围在pH 6.8～8.4，故本实验在培养基中加入葡萄糖和酚红指示剂（遇酸由红变黄），以利于观察实验结果。
本实验所用妇科活血止痛颗粒主要用于治疗盆腔炎，所以选择功效与之相同的已上市药品妇乐颗粒作为对照药。经实验测得，妇乐颗粒对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、乙型溶血性链球菌、白色念珠菌的最低体外抑菌浓度分别为0.031 25、0.031 25、0.062 50、0.031 25、0.031 25 g/ml，妇科活血止痛颗粒对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、乙型溶血性链球菌、白色念珠菌的最低体外抑菌浓度分别为0.015 625、0.015 625、0.031 250、0.015 625、0.015 625 g/ml。由上述结果可以看出，妇科活血止痛颗粒的体外抑菌作用优于妇乐颗粒。此结果对于妇科活血止痛颗粒的临床应用和市场开发均有现实指导意义。
摘要：目的:考察妇科活血止痛颗粒的体外抑菌作用。方法:采用双倍稀释法,以妇乐颗粒为对照药,测定妇科活血止痛颗粒对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、乙型溶血性链球菌、白色念珠菌的体外最低抑菌浓度(MIC)。结果:妇科活血止痛颗粒对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、乙型溶血性链球菌、白色念珠菌的体外抑菌作用较强,对铜绿假单胞菌的体外抑菌作用稍弱。结论:妇科活血止痛颗粒对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、乙型溶血性链球菌、白色念珠菌均具有良好的体外抑菌作用,且效果优于妇乐颗粒。
关键词：妇科活血止痛颗粒,体外抑菌,试管双倍稀释法
参考文献
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光合作用和呼吸作用教案 篇5
二、考点分析
1、有关影响光合作用速率的几组曲线分析及生产上的应用
(1)光照强度
① 图象(如右图)
②关键点含义
光照强度：植物的光合作用强度在一定范围内是随着光照强度的增加，同化吸收CO2的速度也相应增加，但当光照强度达到一定时，光合作用的强度不再随着光照强度的增加而增强。
植物在进行光合作用的同时也在进行呼吸作用，当植物在某一光照强度条件下，进行光合作用所吸收的CO2与该温度条件下植物进行呼吸作用所释放的CO2量达到平衡时，这一光照强度就称为光补偿点，这时光合作用强度主要是受光反应产物的限制。
当光照强度增加到一定强度后，植物的光合作用强度不再增加时，这一光照强度就称为植物光合作用的光饱和点，此时的光合作用强度是受暗反应系统中酶的活性和CO2浓度的限制。
光补偿点在不同的植物是不一样的，主要与该植物的呼吸作用强度有关，与温度也有关系。一般阳生植物的光补偿点比阴生植物高。光饱和点也是阳生植物高于阴生植物。
所以在栽培农作物时，阳生植物必须种植在阳光充足的条件下才能提高光合作用效率，增加产量;而阴生植物应当种植在阴湿的条件下，才有利于生长发育，如果阴生植物光照强度大，蒸腾作用旺盛，植物体内因失水而不利于其生长发育，如人参、三七、胡椒等的栽培，就必须栽培于阴湿的条件下，才能获得较高的产量。
(2)光照面积
①图象(如右图)
②关键点含义
OA段表明随叶面积指数(叶面积指数= )的不断增大。光合作用实际量不断增大，A点为真正光合作用面积的饱和点，随叶面积指数的增大，真正光合作用不再增加，原因是有很多叶被遮挡在光补偿点以下。
OB段干物质量随真正光合作用增加而增加，而由于A点以后光合作用量不再增加，而叶片随叶面积指数的不断增加OC段呼吸量不断增加，所以干物质积累量不断降低，如BC段。
③应用
田间管理时，适当间苗、修剪，合理施肥、浇水，避免徒长。如果封行过早，使中下层叶子所受的光照往往在光补偿点以下，白白消耗有机物，造成不必要的浪费。
(3) CO2浓度和矿质元素
①图象(如右图)
②关键点含义
CO2是光合作用的原料，矿质元素直接或间接的影响光合作用，在一定范围内，随CO2和矿质元素的增多，光合作用速度逐渐提高，但到A点，即CO2和矿质元素达到饱和，光合作用不再随CO2和矿质元素浓度的提高而增加。但当CO2浓度升高到浓度很高时影响了植物的呼吸作用，而导致光合作用下降。矿质元素浓度在很高时，也会影响光合作用速度。如氮肥过多，会造成农作物徒长倒伏。矿质元素过高还会造成细胞质壁分离，影响细胞的吸水，从而影响农作物的生命活动。
③应用
“正其行，通其风”，温室内充CO2，即为提高CO2浓度、有利于增加产量。合理施肥可促进叶片面积增大，提高酶的合成率，增加光合作用速率。
(4)温度
①图象(如右图)
②关键点含义
②温度：植物所有的生活过程都受温度的影响，因为在一定的温度范围内，提高温度可以提高酶的活性，加快反应速度。
光合作用也不例外，在一定的温度范围内，在正常的光照强度下，提高温度会促进光合作用的进行。但提高温度也会促进呼吸作用。如图所示。
所以植物净光合作用的最适温度不一定就是植物体内真正光合作用的酶最适温度。
③应用
白天调到真正光合作用最适温度，以提高净光合作用;晚上适当降低温室的温度，以降低呼吸作用，所以保持一定的昼夜温差能保证植物有机物的积累。
(5)叶龄
①图象(如右图)
②关键点含义
OA段为幼叶，随幼叶的不断生长，叶面积不断增大，叶内叶绿体不断增多，叶绿素含量不断增加，光合作用速率不断增加。
AB段为壮叶，叶片的面积、叶绿体和叶绿素都处于稳定状态，光合速率也基本稳定。
BC段为老叶，随着叶龄的增加，叶片内叶绿素被破坏，光合速率也随之下降。
③应用
农作物、果树管理后期适当摘除老叶、残叶及茎叶蔬菜及时换新叶，都是根据其原理。又可降低其呼吸作用消耗有机物。
(6)多种因素的影响
①图象(如下图)
②关键点含义
P点时，限制光合速率的因素应为横坐标所表示的因子，随其因子的不断加强，光合速率不断提高。当到Q点时，横坐标所表示的因素，不再是影响光合速率的因子。要想提高光合速率，可采取适当提高图示的其他因子。
③应用
温室栽培时，在一定光照强度下，白天适当提高温度，增加光合作用中酶(特别是光反应酶)的活性，提高光合速率，同时适当充加CO2，进一步提高光合速率。当温度适宜时，可适当增加光照强度和CO2浓度，以提高光合速率。总之，可根据具体情况。通过增加光照强度、调节温度或增加CO2浓度来充分提高光合速率，以达到增产的目的。
2、影响呼吸作用的因素：
①温度：温度能影响呼吸作用，主要是影响呼吸酶的活性。一般而言，在一定的温度范围内，呼吸强度随着温度的升高而增强。如图曲线所示。根据温度对呼吸强度的影响原理，在生产实践上贮藏蔬菜和水果时应该降低温度，以减少呼吸消耗。温度降低的幅度以不破坏植物组织为标准，否则细胞受损，对病原微生物的抵抗力大减，也易腐烂损坏。
②氧气：氧气是植物正常呼吸的重要因子，氧气不足直接影响呼吸速度，也影响到呼吸的性质。绿色植物在完全缺氧条件下就进行无氧呼吸，大多数陆生植物根尖细胞的无氧呼吸产物是酒精和CO2。酒精对细胞有毒害作用，所以大多数陆生植物不能长期忍受无氧呼吸。在低氧条件下通常无氧呼吸与有氧呼吸都能发生，氧气的存在对无氧呼吸起抑制作用。有氧呼吸强度随氧浓度的增加而增强。关于无氧呼吸和有氧呼吸与氧浓度之间的关系用图中曲线来表示。微生物的无氧呼吸称为发酵，氧气对发酵有抑制作用。图中曲线也适用于对微生物的无氧呼吸和有氧呼吸的描述。根据氧对呼吸作用影响的原理，在贮存蔬菜、水果时适当地降低氧的浓度，如降得太低，植物组织就进行无氧呼吸，无氧呼吸的产物(如酒精)往往对细胞有一定的毒害作用，而影响蔬菜、水果的贮藏保鲜。
② CO2浓度：
增加 CO2的浓度对呼吸作用有明显的抑制效应。这可以从化学平衡的角度得到解释。据此原理，在蔬菜和水果的保鲜中，增加CO2的浓度也具有良好的保鲜效果。
3、光合作用和呼吸作用的有关计算
(1)根据光合作用或呼吸作用反应式进行有关物质的计算
(2)根据光合作用或呼吸作用反应式进行能量计算
(3)光合作用与呼吸作用的综合计算
在光下光合作用与呼吸作用同时进行：
总光合作用速率(真正光合作用速率)=净光合作用速率(表观光合作用速率)+呼吸作用速率
具体分析如下：(参考图表)
光合作用实际产氧量=实测的氧气释放量+呼吸作用耗氧量
光合作用实际二氧化碳消耗量=实测的二氧化碳消耗量+呼吸作用二氧化碳释放量
光合作用实际葡萄糖生产量=光合作用葡萄糖净产量+呼吸作用葡萄糖消耗量
特别提醒：
植物光合作用吸收的CO2(释放O2)的速率，代表植物总光合作用速率;植物光合作用制造的葡萄糖，代表植物光合作用实际葡萄糖生产量。
植物光下吸收的CO2(释放O2)的速率，代表植物净光合作用速率;植物光合作用积累的葡萄糖，代表植物光合作用葡萄糖净产量。
三、典例精讲
典例1.如图为植物光合作用强度随光照强度变化的坐标图，下列叙述中不正确的是
A.a点叶肉细胞产生ATP的细胞器只有线粒体
B.b点植物光合作用强度与细胞呼吸强度相等
C.已知某植物光合作用和细胞呼吸最适温度分别为25℃和30℃，如图表示该植物处于25℃环境中，则将温度提高到30℃ 时，a点上移，b点左移，d点下移
D.当植物缺镁时，b点将向右移
变式1-1.在右面曲线图中，有M.N、O、P、Q五个点，对它们的含义的叙述正确的是
①M点时，植物既进行光合作用，也进行呼吸作用，且光合作用强度
弱于呼吸作用强度
②N点时，植物体只进行呼吸作用;O点时，植物体的光合作用强度等于呼吸作用强度
③Q点时，光照强度不再是影响光合速率的主要因素
④P点前，影响光合速率的主要因素是光照强度
A.①② B.①③ C.③④ D.②④
变式1-2.分析下列甲、乙、丙图，说法正确的是
A.若图甲曲线表示的是阴生植物的光合速率受光强度的影响，则阳生植物的曲线与此比较，b点向左移，c点向右移
B.在光照强度相同时，t2℃植物净光合作用
C.若图丙代表两类色素的吸收光谱，则f代表胡萝卜素
D.用塑料大棚种植蔬菜时，应选用蓝紫色或红色的塑料大棚
典例2.下左图中曲线a表示水稻根有氧呼吸和无氧呼吸所释放的CO2总量的变化，曲线b表示有氧呼吸释放的CO2量的变化，则表示无氧呼吸释放的CO2量的变化是下图中的
变式2-1.右图表示的是某植物的非绿色器官呼吸时O2的吸收量和CO2的释放量之间的相互关系，其中线段XY=YZ，则在氧浓度为a时
A.有氧呼吸比无氧呼吸消耗的有机物多
B.有氧呼吸比无氧呼吸释放的能量多
C.有氧呼吸比无氧呼吸释放的二氧化碳多
D.有氧呼吸和无氧呼吸释放的能量相等
变式2-2.酵母菌是人类的第一种“家养微生物”。在一个固定容积的培养液中，单位时间内在不同的氧气浓度下，下图所示的酵母菌相关指标与实际不相符的是
A B C D
典例3.在两个相同密闭、透明玻璃室内各放置一盆相似的甲、乙两种植物幼苗，在充足的水分、光照和适宜的温度等条件下，用红外线测量仪定时测量玻璃内的CO2含量，结果如下表(假设实验期间光照、水分和温度等条件恒定不变)。下列有关分析，错误的是
A.在0～25min期间，甲和乙两种植物光合作用强度都逐渐减少
B.在0～25min期间，CO2含量逐渐降低是有氧呼吸减弱的结果
C.在0～25min期间，影响光合作用强度的主要因素是CO2含量
D.上表数据说明，乙植物比甲植物固定CO2的能力强
变式3-1.将某种绿色植物的叶片，放在特定的实验装置中，研究在10℃、20℃的温度条件下，分别置于5klx、10klx光照和黑暗条件下的光合作用和呼吸作用。结果如图所示。
对以上结果分析正确的是， 该叶片
①.呼吸速度在20℃下是10℃下的2倍②.在10℃、5klx的光照下，每小时光合作用产生的氧气量是3mg
③.在5klx光照下，10℃时积累的有机物比20℃时多④.在20℃、10klx光照下，每小时光合作用固定的CO2量约是13.9mg
A. ①② B. ③④ C. ①③ D. ②④
变式3-2.下表是一个生物兴趣小组同学对某种植物的叶片进行光合作用实验时测得的一组数据，下列选项下列选项是四位同学根据这组数据绘制的四种光照强度与光合作用吸收CO2总量的曲线，你认为正确的是
典例4.现将一C3植物放入一个密封的玻璃钟罩内培养，罩中养有以此植物为食的小动物，罩内的氧气用18O标记。给予光照若干天后，下列有关叙述正确的是
A. 18O 既能在植物体内的有机物中出现，也能在动物体的有机物中出现
B.该植物固定CO2用于合成有机物，CO2都要穿过3层膜性结构
C.在光学显微镜下，C3植物和C4植物的区别是：前者维管束鞘细胞中含有不含基粒的叶绿体
D.有氧呼吸第一阶段所释放能量都转移到2个ATP中去了
变式4-1.关于下图及其表述的含义的叙述，不正确的是
A.图a曲线表示玉米离体叶片光下利用14CO2进行光合作用时14C含量变化的情况
B.图b曲线表示酵母菌随氧气浓度增加产生CO2的浓度变化的情况
C.图c曲线表示生态因素对光合作用的影响情况
D.图d曲线表示小鼠由30℃→10℃环境耗氧气量变化情况
变式4-2.下列图文相符的有
A.图A表示小白鼠呼吸耗氧量与环境温度的关系
B.图B表示酵母菌代谢中CO2产生速率与O2浓度的关系
C.图C表示玉米(C4植物)植株一天内CO2吸收相对量随时间变化情况
D.图D表示番茄种子萌发(未长出绿叶)过程中干重变化
花盆 光 温度 水
甲 光亮处 20℃ 充足
乙 黑暗处 20℃ 少量
典例5.在开展生物学实践活动时，对照实验设计应遵循单一变量的原则.为了研究光对大豆生长的影响，某小组设计了如下实验：在两只花盆里分别种相同数量的大豆苗，并进行如右处理.在这一实验设计中，有一处不正确，需要改正为
A.乙花盆放在光亮处 B.甲花盆放在黑暗处
C.甲花盆的温度高于20℃ D.乙花盆浇充足的水
实验处理 30min内上浮
编号 叶圆片来源 叶圆片数(片) 自来水(mL) NaHC03(g) 叶圆片数(片)
1 A 10 40 0 2
2 B 10 40 1 6
3 C 10 40 3 4
4 D lO 40 5 5
变式5-1.某同学想探究二氧化碳浓度与光合速率的关系。他取A、B、C、D四株都有5片叶的小白菜，用直径lcm的打孔器打取小叶圆片各10片，并设法抽去气体使之下沉，置于光下。取100mL三角瓶4个，编号1～4，按下表操作(光照、温度相同且适宜)并记录结果。下列评价或修正不合理的是
A.自变量二氧化碳浓度的控制不严格 B.只要控制光照、温度相同即可
C.实验材料本身存在的差异会影响实验结果
D.制备的叶圆片投入三角瓶前应放黑暗处
变式5-2.下图表示研究NaHCO3溶液浓度影响光合作用速率的实验，下列说法错误的是( )
A.将整个装置放在光下，毛细管内的红色液滴会向左移动
B.将整个装置置于暗室，一段时间后检查红色液滴是否移动，可以证明光是光合作用的必要条件
C.当NaHCO3溶液浓度不变时，在B内加入少量蠕虫，对红色液滴移动不产生明显影响
D.为使对照更具说服力，应将伊尔藻置于蒸馏水中(不含NaHCO3) 的烧杯中
典例6.(20分)用某种大小相似的绿色植物叶片，分组进行实验：已知叶片实验前的重量，在不同温度下分别暗处理1小时，测其重量变化;立刻再光照1小时(光强度相同)，再测其重量变化。得到如下结果：
组别 一 二 三 四
温度 27℃ 28℃ 29℃ 30℃
暗处理后的重量变化(mg)_ -1 -2 -3 -4
光照后的重量变化(mg)_ +3 +3 +3 +2
_ 指与暗处理前的重量进行比较，“—”表示减少的重量值，“+”表示增加的重量值
请回答问题：
(1)暗处理时，随温度升高，叶片重量 ，其原因是
;光照时，叶片的重量变化没有类似或相反的规律，试分析原因
。
(2)假如叶片的重量变化都是光合作用所合成的有机物的量，则在28℃条件下每小时光合作用合成的有机物为 mg，氧气产生量最多的是第 组叶片。
(3)绿色植物叶绿素的合成是否与光照有关?某生物小组对此进行了探究。请利用玉米幼苗及其它用具设计并完成实验。
实验步骤：
①取生长状况一致的健康玉米幼苗若干，平均分为两组，分别标记为A、B;
②
③
实验结果和相关结论：
①
②
③
变式6-1.为了验证光质对叶片光合作用的影响，请用所提供的实验材料与用具，在给出的实验步骤的基础上，继续完成实验步骤的设计和预测实验结果，并对预测结果进行分析。
实验材料与用具：小烧杯三只、三棱镜、打孔器、注射器、40W灯泡、烧杯、富含CO2的NaHCO3稀溶液(为光合作用提供原料)、绿叶(如菠菜叶)(实验过程中光照和温度等条件适宜，空气中O2和CO2在水中的溶解量忽略不计)。
(一)实验步骤：
(1)取生长旺盛的绿叶，用直径为1cm的打孔器打出小圆形叶片30片(注意避开大的叶脉)
(2)将圆形叶片置于注射器内，并让注射器吸入清水，待排出注射器内残留的空气后，用手堵住注射器前端的小孔并缓缓拉动活塞，使小圆形叶片内的气体逸出。这一步骤可重复几次。
(3)将内部气体逸出的小圆形叶片，放入黑暗处盛有清水的烧杯中待用。(这样的叶片因为细胞间隙充满水，所以全都沉到水底。)
(4)
(5)
(6)
(二)预测结果并分析：
(三)结果及讨论： 若增强单色光光照强度，能否对实验结果产生影响?
试在下面同一坐标图中画出不同类型的单色光(光质)下，光照强度与光合作用强度的关系曲线来说明这个问题。
变式6-2.(20分)植物叶绿素的合成需要光照、适宜的温度和必要的矿质元素。下面提供250mL锥形瓶若干，80粒玉米种子(胚乳中可能含有镁离子)，以及其它实验用具。请设计实验验证叶绿素的合成所需的上述条件。
(一)试验目的(略)
(二)试验原理
.
(三)试验步骤：
(1)配置含有蔗糖、水、琼脂及植物必需的所有矿质元素的1号培养基和不含镁(其他成分和1号均相同)的2号培养基、调至适宜pH，备用：
(2)分组编号与处理：
分组
项目 甲 乙 丙 丁
培养基及处理
种子及处理
外界条件
(四)列表比较试验结果：
(五)请分析回答下列问题：
如果把在培养基中正常生长的幼苗移入盛有完全营养液的广口瓶中并在适宜的光照和温度条件下继续培养，一段时间后，如果幼叶又表现缺素症，造成这种现象的主要原因是：
典例7.(20分)实验是人们认识事物的基本手段，在实验过程中，不仅需要相应的知识、精密的仪器，还要注意运用科学的方法。
(1)为了探究种子萌发时进行的呼吸类型，某研究性学习小组设计了下列实验。请根据要求填空。
①实验目的： 。
②实验原理：种子萌发过程如果只进行有氧呼吸，则吸收的氧气量和放出的二氧化碳量相等;如果只进行无氧呼吸，则不吸收氧气，能放出二氧化碳;如果既有有氧呼吸又进行无氧呼吸，则吸收的氧气量小于放出的二氧化碳量。
③实验材料和用具：萌发的豌豆种子、带橡皮塞的玻璃钟罩两只、100mL烧杯4个、两根弯曲的其中带有红色液珠的刻度玻璃管、NaOH溶液、清水、凡士林。
④实验方法：将实验材料和用具按上图配置好实验装置，如想得到实验结论还必须同时设计另一个实验，请指出另一个实验应如何设计(绘装置图表示，并用简短的文字说明)
⑤实验结果及预测：
Ⅰ. ;
Ⅱ. ;
Ⅲ. 。
变式7-1.(20分)右图是一种可测定呼吸速率的密闭系统装置。
(1)关闭活塞，在适宜温度下，30分钟后，读取有色液滴向
(左/右)移动的距离。
(2)为了使测得的有色液滴移动数值更准确，必须进行校正。 校正装置的容器和小瓶中应分别放入
(3)生活中发现，受到机械损伤后的樱桃易烂。有人推测易烂与机械损伤引起樱桃呼吸速率升高有关。请结合测定呼吸速率实验装置，设计实验探究机械损伤能否引起樱桃呼吸速率升高。
①实验变量： 。
②实验假设： 。
③实验步骤：
第一步：按装置图中所示进行操作，30分钟后，记录有色液滴移动距离为a。
第二步： 。
第三步： 。
④预期结果及结论：
结果1：__________________，结论1：______________________________________________________;
结果2：__________________，结论2：______________________________________________________;
结果3：__________________，结论3：______________________________________________________。
变式7-2.(20分)将某绿色植物放在特定的实验装置内，研究温度对光合作用与呼吸作用的影响(其余的实验条件都是理想的)，实验以CO2的吸收量与释放量为指标。实验结果如下表所示。
温度(℃) 5 10 15 20 25 30 35
光照下吸收CO2(mg/h) 1.00 1.75 2.50 3.25 3.75 3.5 3.00
黑暗中释放CO2(mg/h) 0.50 0.75 1.00 1.50 2.25 3.00 3.50
(1) 昼夜不停地光照，温度在35℃时该植物能否生长?________________。
(2)昼夜不停地光照，该植物生长的最适宜温度是多少度?______________。
(3)每天交替进行12小时光照、12小时黑暗，温度均保持在10℃的条件下，该植物能否生长?为什么? ，________________________________________________。
(4)根据表中数据绘出光合作用吸收CO2量与温度之间
关系的曲线。
光合作用和呼吸作用专题备考训练参考答案：
典例1. C 变式1-1. C 变式1-2. B
典例2. B 变式2-1. B 变式2-2. D
典例3. B 变式3-1. C 变式3-2. C
典例4. A 变式4-1. B 变式4-2. B
典例5. D 变式5-1. B 变式5-2. B
典例6.(每空2分，共20分)
(1)下降 在暗处，叶片只进行呼吸作用，温度升高，酶的活性增强，分解有机物增多，叶片重量下降 光照时，温度升高，光合作用和呼吸作用都增强，但不成一定比例，而叶片重量变化是光合作用产生的有机物和呼吸作用消耗的有机物之差组成，故叶片重量增加没有一定规律。
(2)7 四
(3)实验步骤：②A组幼苗放在有光照的环境中，B组幼苗放在无光的黑暗环境中;
③置于其它条件相同且适宜的环境中培养一段时间，观察幼苗的颜色。
实验结果及相关结论：
①A变绿B不变，说明光是叶绿素合成的必备条件;
②A不变B变绿，说明叶绿素合成需要在无光条件下进行;
③A和B均变绿，说明叶绿素的合成与光照无关。
变式6-1.(20分)
(一)(4)取三只小烧杯，分别倒入20mL富含CO2的NaHCO3稀溶液。 并分别向3只小烧杯中各放入10片小圆形叶片。(2分)
(5)用40W灯泡照射，三棱镜色散形成红光、黄光、绿光分别作用于三只小烧杯。(2分)
(6)观察并记录 同一时间段内各实验装置中小圆形叶片浮起的数量(叶片全部浮起经历的时间)(2分)
(二)预测结果：单位时间内红光作用的小烧杯内的小圆形叶片浮起的数量最多，绿光作用的小烧杯内的小圆形叶片浮起的数量最少(4分)。
结果分析：因为绿叶中的色素吸收红光和蓝紫光的能力，吸收绿光的能力最弱(2分)。因此在红光照射时产生O2的速度最快，叶肉细胞间隙的O2增加最快，叶片上浮的速度也就最快，相反绿光照射的烧杯叶片上浮最慢(4分)
(三)结果讨论：能(2分) 曲线(4分)
变式6-2. (20分)
(二)植物叶绿素的合成需要光照、适宜的温度和必需的矿质元素。(2分)
(三)
分组
项目 甲 乙 丙 丁
培养基及处理 1号培养基，灭菌，冷却 1号培养基，灭菌，冷却 1号培养基，灭菌，冷却 2号培养基，灭菌，冷却
种子及处理 每组各加20粒玉米种子，清水浸泡，消毒，去胚乳
外界条件 充足光照，适宜温度(30℃) 充足光照，温度10℃(低温) 黑暗，适宜温度(30℃) 充足光照，适宜温度(30℃)
组别 甲 乙 丙 丁
幼苗颜色 绿色 黄绿色 黄色 黄色
(四)
(五)溶液中缺氧，抑制了有氧呼吸，吸收矿质元素减少。(2分)
典例7.(20分)(1)①探究种子萌发时所进行的呼吸类型
④如图。(说明：强调等量的种子，即用等量的清水代替NaOH，观察红色液滴的移动情况。)
⑤Ⅰ.装置一中的液滴左移，装置二的液滴不移动，则说明萌发的种子只进行有氧呼吸;
Ⅱ.装置一中的液滴不动，装置二中的液滴右移，则说明萌发的种子只进行无氧呼吸;
Ⅲ.装置一中的液滴左移，装置二中的液滴右移，则说明萌发的种子既进行有氧呼吸又进行无氧呼吸。
变式7-1.(20分)
⑴左 (2分)
⑵ 与实验组等量消毒的无活力(如加热后冷却)的樱桃(2分)
与实验组等量的20%NaOH(2分)
⑶ ①机械损伤(2分)
②机械损伤能引起樱桃呼吸速率升高(或机械损伤不能引起樱桃呼吸速率升高)(2分)
③ 第二步：向容器内加入与实验组等量消毒的受到机械损伤后的樱桃，其它处理及装置与实验组完全相同，记录相同时间内有色液滴移动距离为b (3分)
第三步：比较a、b数值的大小(1分)
④如果a
如果a=b，则说明机械损伤对樱桃呼吸速率没有影响;(2分)
如果a>b，则说明机械损伤能引起樱桃呼吸速率降低。(2分)
变式7-2.(20分)
(1)能
(2)25℃
(3)能。 12小时光照下积累的有机物比12小时黑暗中消耗的有机物多。
抑菌作用 篇6
关键词：香辛料；鲳鱼；保鲜；抑菌作用；复配试验
中图分类号：TS202.3；TS254.4文献标志码：A 文章编号：1002-1302（2014）11-0303-03
银鲳（Pampusargenteus）为鲈形目鲳亚目鲳科鲳属，是暖温性近海中下层鱼类，在中国沿海地区均有分布，因其生长快、个体大、肉质细嫩鲜美，有很高的经济价值。银鲳也极易受到微生物的作用，比一般的动物肉组织更容易腐败，所以采取适当措施以减缓鲳鱼腐败变质的速度，延长贮藏期，具有重要的研究意义和应用价值。
由于化学合成防腐剂对人体健康有一定影响，使得天然防腐剂的开发成为当前研究的热点。香辛料是我国常用的食品辅料，而且大多具有抑菌防腐作用和抗氧化作用[1]。郭红珍等从大蒜中提取的抑菌物质，对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、酵母菌等都有一定的抑制作用[2]；Menon等研究发现丁香精油对肉制品和奶酪中李斯特菌有较好的抑制作用[3]。目前对多种香辛料复配提取液的抑菌性研究并不多见，而且香辛料提取液很少应用于肉制品和水果，几乎没有应用于水产品的研究报道。本试验研究了香辛料提取物对银鲳常见腐败菌的抑菌作用，并对其在银鲳上的保鲜作用进行了初步的研究。
1材料与方法
1.1材料、试剂与仪器
银鲳、大蒜等购自泰州市农贸市场；丁香、桂皮、八角、甘草等购自泰州市海陵区瑞峰药店；大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌、沙门氏菌、假单胞菌由江苏农牧科技职业学院微生物实验室保存；腐败菌P1从腐败冰鲜银鲳中分离而得。
营养琼脂培养基、平板计数培养基购自北京陆桥技术有限责任公司；硫代巴比妥酸购自国药集团化学试剂有限公司；乙醇、无水碳酸钠、氢氧化钠、氯化钾、氧化镁等均为分析纯。
试验用的主要仪器为：SW-CJ-ZFD型超净工作台（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）、LDZX-30FA立式压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）、722型可见分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司）。
1.2试验方法
1.2.1香辛料中抑菌防腐物质的提取将5种香辛料原料干燥粉碎，各取50g，分别加入浓度为95%的乙醇溶液，原料与乙醇溶液料液比为1g∶8mL，用超声波辅助提取。提取条件为：温度为60℃、频率为40kHz、提取时间为1h，然后过滤，旋转蒸发仪浓缩（45～60℃）后定容至50mL，得到质量浓度为1g/mL的提取液作为母液，4℃储藏备用。
1.2.2菌悬液的制备供试菌种经斜面活化培养后，用无菌生理盐水洗脱，玻璃珠打散，制成菌悬液，调整菌悬液浓度在106～107CFU/mL，备用。
1.2.3香辛料提取液抑菌效果的测定滤纸片法[4-5]：将滤纸加工成直径6mm的圆形纸片，160℃条件下干热灭菌2h，放入各提取液中浸泡0.5h后晾干。取已调整浓度的各供试菌种菌悬液0.1mL在营养琼脂平板表面涂布均匀，放置1h后，将上述滤纸片贴在平板表面，每个平板内等距离贴3片，以95%乙醇溶液浸泡的濾纸片作为对照。将平皿置于37℃的条件下培养24h，每个平皿均设重复。培养结束后量取抑菌圈直径，以此评价提取液的抑菌效果。
1.2.4最小抑菌浓度（MIC）的测定选择抑菌效果较强的2种香辛料提取液，通过二倍稀释法[6]，使其抑菌提取液浓度依次为100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.563、0.781mg/mL等，分别移取2mL于无菌培养皿中，倒入营养琼脂培养基，充分混匀后冷却凝固，每个平板加入0.2mL菌悬液，涂布均匀，37℃培养，以完全无菌生长的浓度为提取液的最小抑菌浓度。
1.2.5提取液复配比的确定选择抑菌效果较好的2种香辛料提取液按不同体积比复配，以假单胞菌和银鲳鱼体中分离出的主要腐败菌为指示菌，通过测定MIC，确定最佳配比。
1.2.6复合保鲜液的保鲜效果测定将银鲳鱼片随机分成2组，分别在最佳复配保鲜液（保鲜组）和无菌蒸馏水（对照组）中浸泡30s，捞出沥干，薄膜袋分装，于（0±1）℃冷藏。保藏期间，定时取样测定细菌总数、挥发性盐基氮（TVB-N）值、硫代巴比妥酸（thiobarbituricacid，TBA）值，并进行感官评分。
1.2.7鱼肉鲜度检测方法感官检测参考海水鱼感官评定方法SC/T3103—2010中《鲜、冻鲳鱼》标准[7]，评定标准见表1；
TVB-N值的测定采用GB/T5009—2008中《半微量定氮法》[8]；细菌总数的测定按GB4789.2—2010《食品微生物学检验：菌落总数测定》的方法操作[9]；TBA值的测定按参照文献[10]的方法进行。
2结果与分析
2.1香辛料提取液的筛选
以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌、沙门氏菌、假单胞菌和从腐败冰鲜银鲳中分离而得的主要腐败细菌P1为指示菌进行了抑菌试验，结果表明5种香辛料都对供试菌表现出了一定的抑制作用，其中丁香、甘草提取液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、假单胞菌、腐败菌P1的抑制作用明显优于桂皮、大蒜、八角提取液；丁香对鱼体分离出的主要腐败菌P1的抑菌作用最强，其次是甘草（表2）。
2.2天然香辛料提取液的最小抑菌浓度（MIC）确定
nlc202309032133
从相关的文献中可知，海水鱼中的腐败菌以假单胞菌居多，因此本试验以假单胞菌和鲳鱼中分离出的主要腐败菌P1为指示菌，选择抑菌作用相对较强的丁香和甘草提取液，分别测定其最小抑菌浓度，以及不同复配比例抑菌提取液的最小抑菌浓度，结果见表3、表4。
从表3、表4中可以看出，2种香辛料的提取液在抑制银鲳主要腐败菌生长方面均有一定的作用。在抑制假单胞菌方面，丁香和甘草提取液的MIC均为12.5mg/mL；在抑制鲳鱼主要腐败菌方面，丁香提取液的抑菌作用优于甘草提取液。
从表5可以看出，丁香和甘草2种提取液混合后，随着二者体积比的不同，其最小抑菌浓度有一定变化，复合保鲜液的抑菌效果要优于单一提取液，说明2种香辛料抑菌成分之间存在着协同增效作用，这与张雁南等的研究是一致的[11]。复合保鲜液的最佳体积比为：V丁香∶V甘草=3∶2，此时对假单胞菌和腐败菌P1的最小抑菌浓度均为3.125mg/mL，复合保鲜液的抑菌能力有了很大的提高。比单一香辛料提取液的抑菌能力提高了75%。
2.3复合保鲜液对银鲳冷藏期间品质的影响
由图1可知，在整个贮藏过程中，银鲳鱼肉的新鲜度感官评分值逐渐下降，對照组下降明显快于保鲜组，说明复合香辛料的提取液在冰鲜银鲳上有一定的保鲜作用。在冷藏7d时，对照组的感官已经不可接受，表现为腐败严重，肉质松软，切面无光泽，并伴随着较大的臭味，而保鲜组在冷藏了13d的时候才开始出现腐败的迹象，保藏期延长了5d左右。
由图2可看出，复合香辛料提取液处理过的保鲜组，其菌落总数的增加速度也明显低于对照组，说明丁香-甘草的复合香辛料对银鲳鱼体中腐败菌生长有一定抑制作用。
TVB-N值反映了水产品的鲜度，由图3可以看出，对照组的银鲳鱼肉在保鲜7d时达到了235μg/g，而到9d时已经达到了410μg/g，已经完全腐败；而经过复合香辛料提取液处理过的银鲳鱼肉在9d时仍然维持在一级鲜度内[7]。
TBA值是评判脂肪氧化的良好指标，同时也是判断鱼肉品质的重要依据，广泛用于测定肉类和水产品脂肪氧化酸败程度。从图4可见，保鲜组和对照组TBA值变化差异明显。对照组TBA值在冷藏过程中明显上升，冷藏9d后达42.2μg/g，而保鲜组TBA值变化幅度不大，仅从初始的2.8μg/g升至10.0μg/g。由此看出，丁香-甘草复合香辛料提取液有很好的抗氧化作用，能延缓TBA值增大，延长保藏期。
3结论
综上所述，丁香和甘草提取液的抑菌效果最好，将2种提取液进行复配时，表现出一定的协同抑菌作用，当V丁香∶V甘草为3∶2时，对鱼体分离出的腐败菌P1的MIC为3.125mg/mL。丁香-甘草复合保鲜液在应用于鲳鱼保鲜方面有很明显抑菌和抗氧化作用，0℃下贮藏银鲳的货架期延长了5～6d，说明该天然保鲜液有良好的应用前景。
参考文献：
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[3]MenonKV，GargSR.InhibitoryeffectofcloveoilonListeriamonocytogenesinmeatandcheese[J].FoodMicrobiology，2001，18（6）：647-650.
[4]段江莲，徐建国.桑椹红色素抑菌作用的研究[J].食品科学，2007，28（10）：87-89.
[5]冯大伟，周家春.益生乳酸菌的纸片扩散法药敏性试验评价[J].微生物学通报，2010，37（3）：454-464.
[6]王海云，周涛.香辛料提取物对肉制品中常见致病菌的抑菌作用[J].食品科学，2009，30（21）：148-151.
[7]SC/T3103—2010鲜、冻鲳鱼[S].北京：中国农业出版社，2010.
[8]GB/T5009—2008食品理化检验：半微量定氮法[S].北京：中国标准出版社，2010.
[9]GB4789.2—2010食品微生物学检验：菌落总数测定[S].北京：中国标准出版社，2010.
[10]张苗苗.Nisin、溶菌酶及蜂胶应用于盐水鹅保鲜效果的研究[D].扬州：扬州大学，2009.
[11]张雁南，宁志亮，陈长武，等.丁香、甘草协同抑菌作用研究[J].食品科学，2010，31（21）：65-68.
花椒与野菊花抑菌作用比较研究 篇7
野菊花 (Dendranthema indicum) 为菊科多年生草本植物的干燥头状花序, 以色黄无梗、完整、苦辛、花未全开者为佳。野菊花生物活性强、清香怡人、价格低廉, 在药品、饮品、化妆品及保健品等多个领域均有广泛应用。野菊花含有挥发油、黄酮类、多糖、二萜类、酚酸等多种成分, 其中以黄酮类和挥发油居多[3]。其性苦味辛, 微寒, 归肺肝经, 具有泻火平肝、消肿解毒的功效, 可用于治疗疔疮痈肿、咽喉肿痛、头痛眩晕等病证[4]。
现代药理学研究表明, 花椒与野菊花提取物均具有多种药理作用, 花椒挥发油中含有多种烯烃类、醇类、酮类、酯类、环氧类等小分子物质, 具有抗肿瘤、抗炎、镇痛、抑菌、防腐等多种活性[5]。野菊花提取物具有抗病原微生物、抗炎、提高免疫、保护心血管系统、抗肿瘤等作用, 其水、醇提取物在体外对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌等多种细菌有明显抑制作用, 水提取物和挥发油还具有抗病毒活性, 但作用较弱[6,7]。中药提取物成分复杂, 作用机制多样, 副作用小, 不易使细菌产生耐药性[8]。本实验采用微量稀释法对花椒和野菊花提取物对金黄色葡萄球菌等五种细菌的体外抑制作用进行研究比较, 现报道如下。
1 材料与试剂
1.1 药材
花椒、野菊花均购自北京同仁堂 (亳州) 饮片有限责任公司, 阳性对照药物为庆大霉素。
1.2 菌株与试剂
金黄色葡萄球菌CMCC (B) 26003、大肠埃希菌CMCC (B) 44102、铜绿假单胞菌CMCC (B) 10104、MRSA (金黄色葡萄球菌耐甲氧西林株) 、肺炎克雷伯菌CMCC (B) 46117均由山东中医药大学微生物教研室提供。MH (B) 营养肉汤购自北京奥博星生物公司, 生产批号:20141110。
无水乙醇、蒸馏水、无水硫酸钠、圆底烧瓶、挥发油提取器、索氏提取器、螺旋冷凝管、烧杯、玻璃棒、滤纸等。
1.3 仪器与设备
调温电热套、旋转蒸发仪、恒温培养箱等。
2 方法
2.1 待测溶液制备
花椒与野菊花乙醇提取液制备:将2味中药分别捣碎, 取15g药品转移至索氏提取器中, 向圆底烧瓶中加入无水乙醇150mL (加入玻璃珠4~5粒) , 采用电热套加热, 使无水乙醇微沸, 并保持恒温。反复提取1h, 滤出提取液, 用旋转蒸发仪减压蒸馏, 得溶液60mL (原液浓度为0.25g/mL) 。
花椒挥发油制备:采用水蒸气蒸馏法, 将花椒捣碎, 取25g药品转移至圆底烧瓶, 加入250mL蒸馏水浸泡12h, 用挥发油提取器反复提取4.5h, 直至无明显液体滴下, 分离下层蒸馏水, 至油层上端距离0刻度线5mm处时, 静置1h, 打开活塞使油层下降至与0刻度线平齐, 读取挥发油量。经无水硫酸钠干燥, 得到淡黄色油滴样液体, 即为花椒挥发油[9]。取提取所得挥发油0.3mL, 用DMSO稀释10 倍备用, 使挥发油浓度为10% (体积比) 。
2.2 细菌培养基和实验菌液制备
MH (B) 营养肉汤分装后于121℃高压灭菌20min, 采用麦氏比浊法比浊, 以比浊管调整菌液浓度为1×106CFU/mL。
2.3最小抑菌浓度 (MIC) 测定
参照NCCLS标准, 采用微量稀释法进行测定。于96孔板中每孔加入培养基100μL, 然后在第1行中加入100μL药液, 从第1行中吸取100μL混合液加入第2行, 依次类推至第6行, 得到2、4、8、16、32、64倍稀释的梯度药物溶液, 第7行每孔加入庆大霉素10μL作为阳性对照, 第8行直接加入菌液作为阴性对照, 同时设立药物稀释梯度和培养基空白作为对照。每孔分别加入各菌液10μL, 37℃下培养24h, 每个药物重复测定3次。
3 结果
96孔板中阳性对照组中无细菌生长, 阴性对照组中有细菌生长, 说明本实验结果有效。由表1可见, 花椒醇提取物和野菊花醇提取物对金黄色葡萄球菌和MRSA的抑制作用较为明显, 最小抑菌浓度分别为31.25mg/mL、15.625mg/mL, 对大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌的抑制作用则不明显, 最小抑菌浓度分别为62.5mg/mL、31.25mg/mL。野菊花醇提物对五种细菌的抑制作用强于花椒醇提物。
由表2可见, 花椒挥发油的抑菌作用强于花椒醇提物、野菊花醇提物, 其对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的最小抑菌浓度为0.625% (体积比) , 对铜绿假单胞菌、MRSA的最小抑菌浓度为1.25% (体积比) 。
4 讨论
金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌均为医院常见感染致病菌, 可引起化脓性感染、尿路感染、肺炎、菌血症及败血症等, 若不能及时治疗, 可引发疾病, 严重威胁患者生命安全。近年来, 由于抗生素的广泛应用, 大量耐药性菌株出现, 使很多感染性疾病的治疗变得棘手[10]。
花椒醇提取物、野菊花醇提取物、花椒挥发油均具有抑菌作用。现代药理学研究表明, 野菊花的主要抑菌成分为挥发油, 其中樟脑、龙脑是重要成分[11]。花椒醇提物和野菊花醇提物对金黄色葡萄球菌、MRSA的抑制效果较好, 而对其他三种革兰氏阴性菌抑制效果较差, 这可能与两类细菌的细胞壁结构有关。革兰氏阳性菌的细胞壁是由厚而致密的肽聚糖和磷壁酸组成, 革兰氏阴性菌的细胞壁由少量肽聚糖组成, 由此可推测花椒和野菊花醇提物是通过破坏肽聚糖破坏细菌细胞壁, 进而抑制细菌生长。
本研究结果表明, 花椒挥发油的抑菌作用明显优于花椒醇提物, 这可能是由于不同提取方式获得的提取物有所不同, 对花椒的抑菌效果产生了影响[12]。本实验对花椒和野菊花进行了粗提, 对其提取物的抑菌作用进行了初步探讨, 但对其中发挥作用的具体成分仍不明确, 仍需进一步探索。
参考文献
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[5]邵红军, 程俊侠, 段玉峰.花椒挥发油化学成分生物活性及加工利用研究进展[J].食品科学, 2013 (13) :319-322.
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[8]江丽, 单萍萍, 申国庆, 等.中药对痤疮致病菌的体外抑菌活性实验研究[J].药学与临床研究, 2014 (4) :315-318.
[9]孟庆君, 李凤飞, 杨文江.不同提取方法对花椒提取物提取率和品质的影响[J].中国食品添加剂, 2011 (6) :113-117.
[10]方静, 王德, 周学琴.野菊花两种提取方式对5种常见细菌的抑菌效果的比较[J].数理医药学杂志, 2007, 20 (3) :368-369.
[11]张清华, 张玲.菊花化学成分及药理作用的研究进展[J].食品与药品, 2007 (2) :60-63.
野百合鳞茎提取物的抑菌作用 篇8
1 材料与方法
1.1 试验材料及供试菌株
野百合采自湖北省竹溪县, 兰州百合购自兰州当地。将鳞茎去泥洗净后阴干, 粉碎机粉碎后过筛, 待用。
枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis) 、金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus) 、蜡状芽孢杆菌 (Bacillus cereus) 为革兰氏阳性细菌, 沙门氏菌 (Salmonella) 、大肠杆菌 (Escherichia coli) 、产气杆菌 (Enterobacter aerogenes) 为革兰氏阴性细菌, 所有测试菌株均已活化。
1.2 抑菌活性的检测
称取百合干粉20 g, 加入200 m L甲醇, 采用超声波法在40℃下提取20 min, 重复提取3次。合并提取液后旋转蒸发浓缩至20 m L。采用纸片琼脂扩散法测定百合鳞茎提取液对6种细菌的抑菌活性。将细菌置入无菌水中制成菌悬液, 并控制菌液浓度为105CFU/100μL, 取0.1 m L菌液涂布于牛肉膏琼脂糖凝胶平板上。将滤纸片 (直径6 mm) 浸入百合鳞茎提取液1 h后放置于上述已涂布细菌的平板上, 每个处理重复3次, 倒置于恒温培养箱中37℃培养24 h, 测定抑菌圈大小, 同时设立甲醇为阴性对照, 头孢霉素 (100 mg/L) 为阳性对照。
1.3 数据统计分析
结果以“平均值±标准差”表示, 重复3次剂量-效应曲线、回归方程及F检验利用DPS7.0统计软件完成。
2 结果与分析
2.1 抑菌活性测定
两种百合鳞茎提取物对不同种类细菌均具有抑制活性, 且野百合的抑菌活性均强于兰州百合, 见表1。两种百合鳞茎提取物对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡状芽孢杆 (菌革兰氏阳性菌) 的抑制作用均高于对产气杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌 (革兰氏阴性菌) 的抑制作用 (见图1, 2) 。
2.2 百合鳞茎提取物剂量关系的测定
本研究对两种百合鳞茎提取物含量与抑菌作用之间进行了剂量-效应关系的测定 (图3, 4) 。在整个测试浓度范围内, 野百合鳞茎提取物的抑菌活性随浓度的增加而增强 (图3) 。当提取物在0.05~0.1 g/m L时, 其剂量-效应曲线斜率较大, 抑菌活性显著增强。当提取物浓度达到1.0 g/m L时, 野百合对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌的抑菌活性最强, 其次为蜡状芽孢杆菌, 之后依次为枯草芽孢杆菌、革兰氏阴性菌产气杆菌、沙门氏菌和大肠杆菌。
由图4可知, 在整个测试浓度范围内, 随兰州百合鳞茎提取物的含量增加, 其抑菌作用显著增强。提取物含量在0.25~0.75 g/m L浸膏时, 剂量-效应曲线斜率最大, 抑制效果变化明显。当提取物浓度为1.00 g/m L时, 兰州百合对对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌的抑菌活性最强, 其次为枯草芽孢杆, 之后依次为蜡状芽孢杆菌, 革兰氏阴性菌沙门氏菌、大肠杆菌和产气杆。
注:提取物浓度为0.1g/m L-1g/m L。
由表2可知, 两种百合鳞茎提取物含量与其对沙门氏菌、产气杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡状芽孢杆菌的抑制作用之间存在着自然指数线性相关关系, 而对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的抑制活性与两种百合的鳞茎提取物含量之间存在着自然对数线性相关关系。回归方程与原始数据的拟合度胶合, 经F检验, 回归方程具有显著统计意义 (P<0.05) 。
3 结论
野百合和兰州百合鳞茎提取物对测试的6种细菌均具有一定的抑制作用, 对革兰氏阴性细菌的抑制作用低于对革兰氏阳性细菌的抑制作用, 且野百合鳞茎提取物的抑菌活性均高于传统食用的兰州百合;百合鳞茎提取物的抑菌作用与提取物浓度之间存在明显的剂量-效应, 即百合鳞茎提取物的抑菌作用随着提取物浓度的升高而增强。
参考文献
[1]汪发缵, 唐进.中国植物志 (第14卷:百合科) [M].北京:科学出版社, 1980:159-165.
[2]中国农业科学院西北植物研究所.秦岭植物志[M].北京:科学出版社, 1976:313-318.
抑菌作用 篇9
关键词：大蒜,内生菌,尖孢镰刀菌,生物防治
植物内生菌 (Endophyte) 是指存活于健康植物组织内部, 而又不引发宿主植物表现出明显感染症状的微生物类群, 主要包括真菌、细菌和放线菌[1,2]。国内外关于内生菌的研究已经有100多年的历史, 在目前研究过的所有植物中均发现有内生菌, 对植物内生菌抑菌作用的研究也有相关报道[3,4,5,6,7]。大蒜 (Allium sativum L.) 是百合科葱属植物, 有“地里长出来的抗生素”的美称, 具有天然广谱抗菌特性[8]。崔北米等[9]对大蒜内生菌进行了初步研究, 分离得到的内生菌主要为细菌;谢永芳等[10]提取了大蒜内生菌抑菌蛋白, 并对抑菌作用进行了评价。尽管如此, 目前国内外对大蒜抗菌作用的研究主要集中在大蒜的提取物上, 对内生菌的研究相对较少。
尖孢镰刀菌 (Fusarium oxysporum) 是一种世界性分布的土传病原真菌, 寄主范围广泛, 可引起瓜类、茄科、香蕉、棉、豆科及花卉等100多种植物枯萎病的发生, 对农业生产危害极大。目前, 以生物防治为主导的综合防治措施已用于防治枯萎病的研究中[11]。该研究于2012年3~12月进行, 试验选取了两种不同产地的大蒜为材料进行内生菌的分离, 选取尖孢镰刀菌等作为试验菌种检测其代谢物的抑菌效果, 旨在为大蒜内生菌的研究和尖孢镰刀菌的生物防治提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料
供试大蒜 (Allium sativum L.) 分别产自广西来宾市武宣县花颜村及湖南张家界市武陵源区;尖孢镰刀菌 (Fusarium oxysporum, 编号30373) 与苹果黑腐皮壳菌 (Valsamali, 编号36137) 购于中国农业科学院中国农业微生物菌种保藏中心;大肠杆菌 (Escherichiacoli) 和四联球菌 (Micrococcus tetragenus) 为中央民族大学生物实验中心保存菌种。
分离试验培养基分别为牛肉膏蛋白胨培养基、PDA培养基及高氏Ⅰ号培养基;生理生化试验培养基为淀粉培养基、明胶培养基和葡萄糖蛋白胨水培养基。
1.2 方法
1.2.1 内生菌分离
将两种不同产地的健康白皮大蒜去皮, 用自来水冲洗10min, l%的次氯酸钠溶液浸泡10min, 75%的乙醇漂洗60s, 无菌生理盐水反复冲洗3次。取最后一次冲洗的无菌生理盐水分别涂布于试验所用的牛肉膏蛋白胨培养基、PDA培养基和高氏Ⅰ号培养基上, 28℃下培养1d。证实无菌后进行后续实验。
将经过表面消毒处理的大蒜样品与无菌生理盐水按比例 (W/W, 大蒜∶无菌生理盐水=1.0∶2.5) 混合, 碾碎后静置15min, 进行10倍梯度稀释, 得10-1、10-2及10-3浓度的提取液。取各梯度的提取液0.2 mL分别涂布在牛肉膏蛋白胨、PDA和高氏Ⅰ号培养基上, 28℃培养3d。分别挑取各平板上菌落细胞再接种于对应的新配制的培养基上, 28℃富集培养3d。
1.2.2 内生菌的抑菌效果评价
内生菌的代谢物制备。将分离得到的内生菌分别接种到新配制的对应的牛肉膏蛋白胨、PDA和高氏I号的液体培养基中, 28℃振荡培养12 h, 发酵液5 000r·min-1离心15min, 取上清液。
检测平板的制备:分别制备尖孢镰刀菌、苹果黑腐皮壳菌、大肠杆菌和四联球菌的菌悬液, 取0.2mL涂布接种于牛肉膏蛋白胨、PDA和高氏Ⅰ号平板上。
以直径为6 mm的无菌滤纸片吸附100μL发酵液, 放置于制备好并接种受试菌的平板上, 以100μL的无菌生理盐水作为空白对照。28℃培养24h, 观察并测量抑菌圈大小。
1.2.3 菌株鉴定
选取对尖孢镰刀菌具有较强抑菌效果的大蒜内生菌株进行革兰氏染色, 油镜下观察菌体形态。采用涂布法接种并观察菌落形态。对菌株进行淀粉水解、明胶水解和产酸能力 (甲基红试验) 鉴定。
2 结果与分析
2.1 内生菌分离
分别采用3种培养基对广西产和湖南产的大蒜进行内生菌的分离。由表1可以看出, 两种不同产地的大蒜中分离得到的大蒜内生菌数量和种类不同, 表明不同产地的大蒜内生菌的种类有差异, 其中广西产大蒜内生菌种类多。因为使用牛肉膏蛋白胨培养基从广西产大蒜中分离出较多细菌, 说明广西产大蒜所分离的内生菌中细菌为优势菌。
2.2 大蒜内生菌拮抗性分析
分别选取尖孢镰刀菌、苹果黑腐皮壳菌、大肠杆菌和四联球菌作为受试菌株, 采用滤纸片法对所分离的大蒜内生菌的代谢物进行拮抗性试验。结果表明, 分离出的内生菌对大肠杆菌、苹果黑腐皮壳菌和四联球菌均没有明显的抑制效果, 而对尖孢镰刀菌具有抑制作用。所分离的具有抑制作用的菌株来自广西产大蒜, 共筛选出5株大蒜内生菌的代谢产物对尖孢镰刀菌具有抑制效果的菌株, 分别命名为D-1、D-2、D-3、D-4、D-5, 采用滤纸片法检测抑菌效果。以抑菌圈直径≥6.5mm作为判断抑菌效果的标准, 分离的5株内生菌菌株对尖孢镰刀菌抑菌效果不同 (见表2) 。D-1菌株对尖孢镰刀菌的抑制效果最好, 抑菌圈直径为 (8.50±1.14) mm;其次为D-3和D-4菌株, 抑菌圈直径分别为 (7.67±0.42) mm和 (7.57±0.40) mm;D-2和D-5的抑菌圈直径分别为 (7.33±0.12) mm和 (7.13±0.12) mm, 与前3个菌株相比, 其抑菌效果相对较小。
2.3 大蒜内生菌的菌株鉴定分析
对拮抗性试验 (以尖孢镰刀菌为受试菌) 筛选出的5株大蒜内生菌进行革兰氏染色, 观察其细胞形态, 由图1可知, 5株菌株具有不同的个体形态和排列方式, 可以将其分为两类:杆菌 (D-1, D-3, D-5) 和球菌 (D-2, D-4) , 都属于革兰氏阳性菌, 其中D-1, D-3为芽孢杆菌。将5个菌株分别划线接种于牛肉膏蛋白胨培养基上, 37℃培养24h, 观察其群体生长特征, 可以看出5株菌株菌落形态不同, 其中D-2和D-4能够产生有颜色的代谢产物 (见图2) 。
对分离的5株大蒜内生菌分别进行淀粉水解、明胶水解及产酸能力 (甲基红试验) 等生理生化试验 (见图3) 。从图3中可以看出, 分离的5株内生菌株中, D-2、D-3和D-5具有淀粉水解环, 表现为阳性, 说明具有较强的产生淀粉酶能力, 而D-1、D-4不产生淀粉酶, 为阴性 (图3A) 。D-1、D-2和D-3产生明胶液化现象, 表现为阳性, 说明具有较强的产生明胶水解酶的能力, 而D-4明胶液化能力较弱, D-5不产生明胶水解酶, 为阴性 (图3B) 。图3C为甲基红试验结果, 结果表明, D-1、D-2和D-3具有较强的产酸能力, 而D-4和D-5产酸能力较弱。
从表2中可以看出, 广西产的大蒜中分离的对尖孢镰刀菌有抑制效果的5株内生菌具有不同的细胞形态和生理生化特征, 属于5种不同种类的菌种。
注:+表示为阳性, -表示为阴性。Note:+shows positive, -shows negative.
3 结论与讨论
该研究采用3种培养基从大蒜中成功地分离出了内生菌。在相同条件下, 广西产大蒜分离的内生菌数量高于湖南产大蒜。王坚等[12]研究发现, 生长在热带或亚热带地区的植物与生长在较干燥或寒冷环境下的植物相比, 前者中内生菌的数量和种类多。王娜娜[13]对拮抗性大蒜内生细菌的多样性及其促植物生长特性的研究也表明, 不同产地大蒜的内生菌种类存在差异。从广西产大蒜中分离得到的内生菌以内生细菌居多, 说明细菌是大蒜内生菌中的优势菌, 与崔北米等[9]的研究结果一致。该研究从大蒜中分离出了真菌与放线菌, 也说明大蒜中存在这两种类型菌。
通常认为植物内生细菌一个重要的生防机制是产生水解酶类, 这些水解酶与植物抗真菌能力有密切关系, 因为真菌细胞壁的主要组成成分是几丁质和葡聚糖。这些水解酶可以降解真菌的细胞壁或其它致病因子, 如毒素等, 以此达到防病效果[7,14,15]。以尖孢镰刀菌作为受试菌, 对从大蒜中分离出的内生菌的代谢物进行拮抗性试验, 分离出5株具有抑菌作用的菌株, 淀粉水解酶和明胶水解酶及产酸能力的试验表明, 分离到的5株内生菌中都有产生水解酶的能力, 其中D-2和D-3能够产生两种水解酶, 推断其抑制尖孢镰刀菌的生长, 可能与产生胞外水解酶类有关。谢永芳等[10]对大蒜内生菌抑菌蛋白的研究也表明, 大蒜内生菌可以产生具有抑菌作用的抑菌蛋白, 这些产生抑菌蛋白的内生菌可以水解明胶和淀粉, 与该研究结果一致。因此, 可以得出D-1, D-2和D-3菌株具有较强的产酸能力。已有研究认为植物抗菌内生菌产生的抗菌物质多种多样, 包括脂多肽、酮内酯、生物碱、炭疽菌酸、新型环肽抗生素、二萜化合物等及其一些抗菌酶类[14,16]。该研究所分离的内生菌的抑菌作用是否存在这些抗菌物质及其抑菌机制等还有待进一步研究。
抑菌作用 篇10
1材料
1.1试验菌株
大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门杆菌,均由瑞普 ( 天津) 生物药业有限公司微生态实验室保存。
1.2主要试剂
胃蛋白酶、胰蛋白酶,购自北京索莱宝科技有限公司。
2方法
2.1抗菌肽RP-07抑菌活性的测定
采用琼脂扩散法。以普通琼脂培养基活化培养菌株,然后将菌液浓度稀释至1 × 107cfu / m L。在无菌条件下,将20 m L加热融化的培养基加到培养皿中,使其均匀分布,当冷却到不烫手( 约45 ℃) 时,分别向每个培养皿中加入2 m L菌悬液,摇匀,凝固后用已消毒的打孔器打孔,剔除中间琼脂,然后用移液枪注入待测样品,置37 ℃恒温培养箱中培养15 h,观察各孔周围有无抑菌圈及抑菌圈大小。
2.2抗菌肽RP-07热稳定性的测定
将配制好的抗菌肽RP - 07溶液分装至5支试管中,分别于40,60,80,100 ℃水浴处理1,2 ,3,4 h; 同时以未处理的抗菌肽作为对照,然后采用琼脂扩散法检测对大肠杆菌的抑菌活性。
2.3不同pH值缓冲液对抗菌肽RP-07抑菌活性的影响
配制p H值为2. 0 ~ 10. 0的缓冲液,再用p H值为2. 0 ~ 10. 0的缓冲液配制抗菌肽RP - 07溶液,于37 ℃ 孵育30 min,采用琼脂扩散法检测其对大肠杆菌的抑菌活性,以p H值为2. 0 ~ 10. 0的缓冲液和未处理的抗菌肽作为对照。
2.4胃蛋白酶对抗菌肽RP-07稳定性的影响
人工胃液的制备: 分别取1 g、0. 125 g胃蛋白酶, 与1. 64 m L 1 mol/L的稀盐酸混合,以80 m L纯化水定容至100 m L备用[4]。取抗菌肽RP - 07,分别用不同浓度胃蛋白酶的人工胃液配制相应的0. 5 mg /m L抗菌肽溶液,置37 ℃恒温水浴锅中反应2 h,再放入70 ℃ 恒温水浴锅中作用10 min,使酶失活。采用琼脂扩散法测定抗菌肽RP - 07的抑菌活性,同时设未处理的抗菌肽RP - 07作为对照。
2.5胰蛋白酶对抗菌肽RP-07稳定性的影响
人工肠液的 制备: 取KH2PO40. 68 g,加水50 m L,用0. 4% 的Na OH调节p H值至6. 8,分别取1 g、0. 125 g胰蛋白酶,以适量水溶解,定容至100 m L即得。取抗菌肽RP - 07,分别用不同浓度胰蛋白酶的人工肠液配制相应的0. 5 mg /m L抗菌肽溶液,置37 ℃ 恒温水浴锅中反应2 h,再放入70 ℃ 恒温水浴锅中作用10 min,使酶失活。采用琼脂扩散法测定抗菌肽RP - 07的抑菌活性,同时设未处理的抗菌肽RP - 07作为对照。
3结果与分析
3.1抗菌肽RP-07抑菌活性的测定结果
抗菌肽浓度对抑菌效果有重要影响,其浓度与抑菌作用呈正相关关系,即浓度越大抑菌作用越强。 当抗菌肽浓度为0. 5 mg /m L时,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门杆菌的抑菌圈直径见表1和图1。
由表1可知,相同浓度抗菌肽RP - 07对不同细菌的抑菌活性不同,因此在抑制不同致病菌时其浓度也是不同的。
3.2抗菌肽RP-07热稳定性的测定(结果见图2)
由图2可知: 在相同温度条件下,抗菌肽RP - 07的抗菌活性随着时间的延长而略有下降; 在相同处理时间时,其抗菌活性随着温度的升高也在小幅度下降。该抗菌肽在100 ℃ 条件下处理4 h的损失率约为14. 3% ,说明抗菌肽RP - 07具有很好的热稳定性。
3.3不同pH值缓冲液对抗菌肽RP-07抑菌活性的影响(结果见图3)
由图3可知,当p H值在6. 0 ~ 8. 0的近中性环境中,抗菌肽RP - 07的抗菌肽活性最强,但在偏酸或偏碱的环境中对抗菌肽RP - 07活性的影响不是很大。
3.4胃蛋白酶对抗菌肽RP-07稳定性的影响(结果见图4)
由图4可知: 当胃蛋白酶浓度为1. 25 mg /m L时,处理2 h后抗菌肽RP - 07的抑菌活性略有降低; 而当胃蛋白酶浓度为10 mg /m L时,处理2 h后抗菌肽RP - 07的抑菌活性损失率为8. 92% 。说明抗菌肽RP - 07的抑菌活性会随着胃蛋白酶浓度的升高有一定损失,但整体上保持较好的抑菌活性,从而可以判断其对人工胃液具有较好的耐受性。
3.5胰蛋白酶对抗菌肽RP-07稳定性的影响(结果见图5)
由图5可知: 当胰蛋白酶浓度为1. 25 mg /m L时,处理2 h后抗菌肽RP - 07的抑菌活性略有降低; 而当胰蛋白酶浓度为10. 00 mg /m L时,处理2 h后抗菌肽RP - 07的抑菌活性损失率为12. 21% 。说明抗菌肽RP - 07的抑菌活性会随着胰蛋白酶浓度的升高有一定损失,但整体上保持较好的抑菌活性,从而可以判断其对人工肠液具有较好的耐受性。
4结论
抗菌肽RP - 07对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、 沙门杆菌有很好的杀菌活性,对其理化性质如温度、 p H值等进行研究,结果抗菌肽RP - 07具有很好的热稳定性,在碱性和酸性环境下活性也很强,对人工胃液和人工肠液都具有很好的耐受性。但对于耐受性的原理还需进一步研究,目前市场上陆续出现抗菌肽,其与益生菌、益生元、中药等的配合使用还需进一步探索。
与抗生素相比, 抗菌肽具有抗生素所没有的性质,本试验为抗菌肽的开发利用提供了参考,为抗菌肽饲料添加剂、抗菌肽微生态制剂研制提供了强有力的数据支持。
参考文献
[1]谭淑樱.鸡、鸭肠道抗菌肽的提取及部分生物学活性研究[D].合肥:安徽农业大学,2009.
[2]陈琛.微生物源抗菌肽研究概况[J].生物技术通报,2010(7):59-63.
[3]胡胜兰,李卫芬,孙建栋,等.蜜蜂肽Apidaecin突变体的体外稳定性[J].中国兽医学报,2013,33(8):1259-1262.
抑菌作用 篇11
体之间的关系作些浅谈。
一、学生主体
现代教育的特征是高扬人的主体性，追求人的全面发展，充分发挥每一个人的主观能动性，让学生主动地学，有个性地学，在参与中、活动中养成习惯，进而获得科学知识和能力。与传统的“教师中心论”相对,这叫“学生主体观”。学生主体观就是承认学生是学习的主人。这一观点体现了马克思主义关于人的发展的精神实质。主体性，是人的本质的最深层次，是全面发展的人的根本特征。主体性强的人，就是自觉能动性强的人，在客体面前有主动和自由的人。这一观点也是教育规律的体现。教育教学过程，根本上说是学生作为认识的主体，在教师指导下有目的地去获取知识和能力的过程。这是一个能动的反映过程。反映是学生的反映，思维是学生的思维，活动是学生的活动。满堂灌之所以为素质教育所不取，就在于它取消了学生能动地、自主地思考、探索、参与的资格。一句话，它取消了学生作为学习主体的资格。从不参与就不是主体的角度说，课堂教学中如果有一位学生心不在焉，那么教学对于他就是名存实亡的东西。所以主体观认为，学生作为课堂教学的主体要参与教学的全过程；要确保他们在整个教学活动中的主体地位。
在教学中，学生主体参与的原则主要是：①“引而不发”原则。《学记》上说：“道而弗牵，强而弗抑，开而弗达。”引导学生而不牵着学生走，策动学生而不推着学生走，让学生开动脑筋而不替他得出结论。②总体性原则。要求学生全员参与，全过程参与，全方位参与。从参与过程看，由身入，到心入，到神入。引而不发原则突出了教师的主导作用，是主体观的基础；总体性原则突出了学生主体的地位，是主体观的核心。
落实学生主体地位的关键在于课堂教学中学生有无具体的学习活动。具体的学习活动就是学生的学习实践。实践出真知，活动出成绩。只有具体活动，才能落实学生的主体地位。老师的讲解可多可少，但学生的活动不可或缺。
二、教师主导
在课堂教学中学生是学习的主体，但这个主体是在老师的主导之下存在的；落实学生主体的关键是学生的活动，但这些活动是在老师的指挥之下进行的。学生活动了没有，活动得效果如何，责任在教师。课堂教学中老师的主要责任不在讲，而在教学生学，教学生“动”。从这个意义上看老师的作用，传统的“传道、授业、解惑”应该再加上“导学”了。
“老师是统帅、是指挥”；“学生读不好，讨论不好，回答不好，都是老师指挥不到位”；“谁从上课讲到下课，学生就不懂了，谁从上课到下课都让学生学，学生就懂了”。因为：“你讲，跟难分辨他听没听，懂没懂，可是你让他自己学，然后回答，要做出来，这样一来就不容易产生差生了；”“过去上课，学生只负责听，听的效果如何，多数要等到单元或是期中考试时才能看出来，有的问题会一天天积累。现在则是课上的事情课上做，效率高了，效果好了，课后就不需要沉重的作业负担。”
老师的主要责任不在讲，也是知识传授的规律决定的。知识不是实物，知识的传授不像实物的传授那样是一种简单交接。知识的实质是经验。它必须经过个人的体验、加工、建构，将外在的知识（社会公有的知识）转化为自己内在的知识（个人的知识）。对于学生来说，老师讲懂的知识不是真懂，只有自己悟出的道理才是真懂。换句话说，老师只能讲“懂”，但不能讲“会”。
如何教学生动？一曰发动；二曰组织；三曰指导；四曰调控；五曰点拨。
1、发动。即动员学生进入学习状态。发动的方式多种多样：利用演讲，从情绪上调动学生；利用设疑，让学生进入“愤”“诽”状态；利用音乐、图像等创设情景，激活学生的思维；利用铺垫讲授，使学生接近问题等。在这些不同的发动方式中，“演讲”是最常用、也是最方便的方式了。只要有学生活动，就需要“演讲”——鼓动。有什么样的思想，就会有什么样的行动。学生没有活动意识，当然也没有活动欲望，所以当然动不起来——不愿动、不想动。不懂发动的老师，学生必然缺乏激情，课堂必然缺乏活力，学生的主体作用当然也不可能得到充分发挥。
2、组织。即进行组织教学。一是管理性组织，即指导、监督、惩罚、限定、奖励、操纵、安排、协调、维护等；目的在于促成课堂良好堂纪律和学习习惯的形成。二是指导性组织，即组织学生阅读、观察、实验、思考、讨论等，目的在于组织和实施具体的教学活动。组织教学要细致、周到。课堂组织常存在的问题主要有：（1）无组织意识，组组织行为。如走上讲台就讲，铃声一落就走；只顾自己“讲”，不管学生听不听；只管自己“指挥”，不管学生动不动。（2）指令软弱（声音小、无表情、怯懦等）、含混不明（如用“可以做某事”一类话语），组织效果差。（3）不关注学生的学习状态，对学生走神、磕睡等非学习活动或非正常学习活动视而不见。
3、指导。即在学生进行某项具体的学习活动时从学习内容、学习思路、学习方法等方面给以具体明确的引领，让学生能顺利进入学习状态。正如上面引用的洋思中学校长蔡林森的话：“老师是统帅、是指挥，指挥的艺术可以写一大本书”；“老师指挥就是教学方法的锦囊妙计”；“每一步都需要学生学，但每一步都离不开老师”；“学生读不好，讨论不好，回答不好，都是老师指挥不到位”。
4、调控。指根据学生的学习状况进行适时的调节，包括教学目标的调节、教学难度的调节、教学进度的调节、教学组织形式的调节、教学方法的调节等。调控是教师驾驭课堂所必需的教学机智。它有经验的积累，同志也是一种责任。有的同志眼看着原来的计划落空而无所适从，这是缺乏经验；有的同志看着原来的设计不合学情也不愿去变换设计，这是不负责任。
抑菌作用 篇12
1材料
1. 1菌株
宠物源大肠埃希菌( G5) ,由青海大学农牧学院动物医学系预防实验室提供。
1. 2供试药品
硫酸庆大霉素注射液[规格为10 mL: 0. 2 g,批准文号为兽药字( 2008 ) 270111505,批号为20110306],陕西秦东生物药业有限公司生产; 磺胺嘧啶钠注射液[规格为10 mL: 1 g,批准文号为兽药字( 2006) 040231634,批号为20110401],山西芮城大禹动物药品有限责任公司生产; 注射用青霉素钾[规格为160万U / 支,批准文号为兽药字( 2005) 160071253,批号为201062826],张家口科泰动物药业有限公司生产; 柴胡注射液[规格为2 g/10 mL,批准文号为兽药字( 2006) 270155137,批号为110102],西乡长江动物药品有限责任公司生产; 黄芪多糖注射液[规格为10 mL: 0. 2 g,批准文号为兽药字( 2006) 03001272,批号为1007013],河北远征药业有限公司生产。
将各种药物用适宜溶剂溶解,稀释后浓度为1 000 μg / mL,121 ℃ 高压蒸气灭菌20 min后置4 ℃ 冰箱中备用,使用期限为1周。
1. 3培养基
营养肉汤、营养琼脂,均按常规方法配制。
2方法
2. 1制备菌液
2. 1. 1菌种的培养复活菌种后,挑取新鲜培养的大肠埃希菌单个菌落3个,接种于3 mL的营养肉汤中,37 ℃培养24 h。
2. 1. 2菌液浓度的确定采用平皿表面计数法。吸取上述菌液1 mL,用生理盐水进行1 × 10- 1递度稀释,分别取1 ×10- 5,1 × 10- 6,1 × 10- 7,1 × 10- 8,1 × 10- 9,1 ×10- 105个稀释度的菌液各0. 1 mL,在5个营养琼脂平板上摊开,37 ℃培养24 h后计数,得1 × 10- 10稀释度的菌落数9个,则原菌液浓度为9 × 1010cfu / mL。临用前用营养肉汤稀释使最终菌液浓度为9 ×105cfu / mL。
2. 2单药最小抑菌浓度( MIC) 的测定
参照参考文献[3]。采用试管2倍稀释法分别测定硫酸庆大霉素注射液、磺胺嘧啶钠注射液、青霉素钾、柴胡注射液及黄芪多糖注射液5种抗菌药物对大肠埃希菌的MIC。
2. 3体外联合抑菌试验
采用棋盘法。根据测得的各药物单独对大肠埃希菌的MIC,以其中2种药物MIC的4,2,1,1/2,1/4倍分别进行联合[4]。结果判断依据: FIC指数= ( 甲药联合时的MIC/甲药单测时的MIC ) + ( 乙药联合时的MIC / 乙药单测时的MIC) ; FIC指数≤0. 5为协同作用;0.5
3结果
3. 1 MIC的测定结果
硫酸庆大霉素注射液、磺胺嘧啶钠注射液、青霉素注射液、柴胡注射液及黄芪多糖注射液这5种抗菌药物对大肠埃希菌的MIC分别为6,13,4,47,36 μg/mL。
3. 2体外联合抑菌试验( 结果见表1 ~ 6)
根据FIC计算公式得FIC = 1 + 0. 5 = 1. 5,说明硫酸庆大霉素注射液与柴胡注射液联合抑菌试验呈无关作用。
根据FIC计算公式得FIC = 0. 5 + 0. 5 = 1,说明硫酸庆大霉素注射液与黄芪多糖注射液联合抑菌试验呈相加作用。
注: - 表示无细菌生长,+ 表示有细菌生长; A为单药对照硫酸庆大霉素注射液,B为单药对照柴胡注射液。
注: - 表示无细菌生长,+ 表示有细菌生长; A为单药对照硫酸庆大霉素注射液,C为单药对照黄芪多糖注射液。
根据FIC计算公式得FIC =1 +1 =2,说明磺胺嘧啶钠注射液与柴胡注射液联合抑菌试验呈无关作用。
注: - 表示无细菌生长,+ 表示有细菌生长; B为单药对照柴胡注射液,D为单药对照磺胺嘧啶钠注射液。
注: - 表示无细菌生长,+ 表示有细菌生长; C为单药对照黄芪多糖注射液,D为单药对照磺胺嘧啶钠注射液。
根据FIC计算公式得FIC = 1 + 2 = 3,说明磺胺嘧啶钠注射液与黄芪多糖注射液联合抑菌试验呈颉颃作用。
根据FIC计算公式得FIC = 0. 5 + 0. 5 = 1,说明青霉素钾与柴胡注射液联合抑菌试验呈相加作用。
注: - 表示无细菌生长,+ 表示有细菌生长; B为单药对照柴胡注射液,E为单药对照青霉素钾。
根据FIC计算公式得FIC =0. 5 +0. 5 =1,说明青霉素钾与黄芪多糖注射液联合抑菌试验呈相加作用。
注: - 表示无细菌生长,+ 表示有细菌生长; C为单药对照黄芪多糖注射液,E为单药对照青霉素钾。
4讨论