生化测定（精选9篇）
生化测定 篇1
为提高福安水牛的生产性能, 充分发挥福安水牛的生产潜能, 需要对福安水牛进行多方面的研究, 迄今尚未见福安水牛血液生理生化指标方面的报道。血液生理生化指标不仅对动物疫病临床诊断具有重要的意义, 而且还能反映动物的生物学特性。为了给福安水牛今后的杂交改良、疫病防治及健康状况监测提供更全面的理论依据, 笔者对福安水牛生理生化指标进行了测定。
1 材料与方法
1.1 试验动物
选择福安水牛品种资源保护区临床健康的福安水牛公、母牛各10头。
1.2 试牛所处大气环境
环境温度为28℃, 相对湿度74%, 气压为100.12 kpa。
1.3 试验方法
按公母分为2个组, 每组10头。上午7:30-8:00颈静脉采血, 按所测指标要求, 用一次性自动定量颈静脉采血管接血。采后立即送到实验室处理待测。
1.4 测定项目
白细胞计数, 红细胞计数, 血红蛋白, 血小板计数, 红细胞压积, 平均红细胞体积, 平均血红蛋白含量, 平均血红蛋白浓度, 总蛋白。
1.5 生理指标的测定方法
1.5.1 体温 (T, ℃)
试牛保定3~5 min后, 用已校准的兽用体温直肠测温3~5 min的值。
1.5.2 呼吸频率 (次/min)
试牛保定5 min, 待呼吸平稳后, 用手放在牛鼻孔前感觉, 用眼观察鼻翼开张数, 并计呼吸次数, 每次3 min, 再换算为次/min。
1.5.3 心率 (HR, 次/min)
试牛保定3~5 min后, 在安静的条件下, 听诊心脏每分钟跳动次数, 听取两次取两次的平均值。第一次先试测。然后连续2 d测定该三项指标作为测定结果。
1.6 数据统计和处理方法
分别按年龄和性别分组, 各项指标的测定结果按公水牛和母水牛以及总体分组统计, 以样本数 (n) 、平均数 () 、标准差 (SD) 、最大值 (max) 和最小值 (min) 来表示。公水牛与母水牛的差异用t检验检测其显著性。按性别分组的以“平均数±标准差”表示统计结果, 进行单因素方差分析, 差异显著者在P<0.01水平上进行多重分析[1]。
2 结果与分析
2.1 福安水牛生理指标
福安水牛生理指标测定结果见表1, 可见福安水牛的呼吸频率、心率、体温都比滨湖水牛的都低[2]。
2.2 福安水牛血液生理生化指标
福安水牛9项血液生理生化指标的测定结果见表2, 福安水牛公水牛和母水牛9项生理生化指标对比见表3。
福安水牛的白细胞计数、血红蛋白比滨湖水牛略高, 但在《奶牛疾病学》[3]和《家畜生理学》[4]的正常值范围内 (见表4) ;福安水牛的红细胞数平均值 (5.35±4.02×1012/L) 较湖南所所测的3~14岁滨湖母水牛的值 (6.20±1.08×1012/L) 低, 也比广西农学院测定的3~15岁摩拉母水牛 (8.03±0.91×1012/L) 、尼里母水牛 (8.43±1.14×1012/L) 、3~9岁三元杂种水牛 (8.34±0.91×1012/L) 和广西本地母水牛 (7.71±0.72×1012/L) 低[5], 福安水牛母水牛的红细胞数平均值 (5.04±4.02×1012/L) 比上述五种母水牛都低;白细胞总数 (10.56±3.49×109/L) 比湖南滨湖母水牛 (9.6±2.2×109/L) 、摩拉水牛 (9.9±2.1×109/L) 高, 比尼里母水牛 (11.6±3.3×109/L) 、广西灵山当地母水牛 (13.8±3.8×109/L) 低;而福安母水牛的白细胞总数 (11.42±3.98×109/L) 比湖南滨湖母水牛、摩拉水牛、尼里母水牛高, 仅比广西灵山当地母水牛低。造成这些差异的原因是否与牛的品质或与环境等因素有关有待进一步探讨。福安水牛的总蛋白含量 (69.75±5.92 g/L) 比滨湖水牛 (69.20 g/L) 稍高, 比广西灵山当地水牛 (71.5g/L) 、凉山耗牛 (77.6 g/L) 、四川云南耗牛 (97.70±21.1 g/L) 低。在健康的情况下, 血液中蛋白质主要来自饲料蛋白质, 牛采食后, 经消化道消化水解而来[6]。从福安水牛的总蛋白含量来看, 可以说明试牛蛋白质摄食量偏少, 需要加强福安水牛蛋白质含量的摄入。其他血液生理生化常值难于查到同类的资料, 无法进行对比。
从表3中的数据可见, 福安水牛公水牛和母水牛的各项生理生化指标都非常相似, 通过t检验, 差异不显著 (P>0.05) 。这表明福安水牛的生理生化指标在性别上没有显著性差异, 无论是公水牛和母水牛都可以采用其总体指标作为判定福安水牛健康与否的标准。
由于该次指标测定的个体数有限, 可能存在一定的误差。对福安水牛首次进行生理生化测定的结果, 虽然不是很全面, 但也具有一定的代表性, 可供参考。
摘要：选择福安水牛品种资源保护区临床健康的福安水牛公、母牛各10头进行福安水牛生理生化指标的测定。结果表明:福安水牛的呼吸频率、心率、体温都比滨湖水牛的都低;福安水牛的白细胞计数、血红蛋白比滨湖水牛略高, 但在《奶牛疾病学》和《家畜生理学》的正常值范围内;福安水牛母水牛的红细胞数平均值比滨湖、摩拉、尼里、三元杂种、广西本地五种母水牛都低;福安水牛白细胞总数比湖南滨湖母水牛、摩拉水牛高, 比尼里母水牛、广西灵山当地母水牛低;而福安母水牛的白细胞总数仅比广西灵山当地水牛低。福安水牛的生理生化指标在性别上没有显著性差异。
关键词：福安水牛,生理生化指标,测定
参考文献
[1]白海涛.玉树耗牛12项血液生理生化指标的测定[J].青海畜牧兽医杂志, 2009, 39 (1) :8-11.
[2]杨炳壮, 梁贤威, 文秋燕, 等.杂交水牛不同生长阶段主要血液生理生化值指标的测定[J].中国草食动物, 2005, 25 (4) :23-25.
[3]威廉·C·雷布汉 (美) .奶牛疾病学[M].北京:中国农业大学出版社, 1994.
[4]南京农业大学.家畜生理学[M].北京:中国农业出版社, 2000:14-19.
[5]骆洪俊, 李德富, 宋小白, 等.广西本地水牛、尼里牛、么拉牛及三元杂种生理常值的测定[J].广西畜牧兽医, 1986 (2) :31-32.
[6]李德富.西林母水牛27项血液生理生化指标的测定[C].广西:第五届亚洲水牛大会论文集, 2006:175-177.
生化测定 篇2
中图分类号R446.8文献标识码A文章编号2075-2156(2009)04-0051-01
我科引进一台FH400全自动生化分析仪，在使用过程中。发现一些试验项目如果试剂顺序摆放不当，将对试验结果造成严重系统误差。现将结果报告如下，供同道参考。
1 材料与方法
①仪器：FH400全自动生化分析仪。②试剂：总胆汁酸检测试剂盒(TBA)(酶循环法)，总胆固醇检测试剂盒(TCH)液体双试剂(酶法)，甘油三酯检测试剂(TG)液体双试剂(酶法)，葡萄糖(GLU)液体双试剂(葡萄糖氧化酶法)，尿酸检测试剂盒(UA)检测试剂盒(酶法)，无机磷(P)检测试剂盒(紫外法)，镁(Mg)检测试剂盒(二甲苯胺兰法)，尿素检测试剂(Urea)检测试剂盒(GLDH－偶联酶法)，谷氨酸脱氢酶(GLDH)检测试剂盒(连速监测法)，均购于浙江伊利康生物技术有限公司。质量控制血清，购于Roche公司。方法：从病房送检标本中随机选取10份标本，按以下3种组合方式分别对10份标本进行测试，方法1：单独测定TBA、P、GLDH、Mg；方式2：按TCH、TG,TBA顺序测定；方式3：按GLU、UA、P顺序测定；方式4：按Urea、GLDH顺序测定，每次测定平行测定质量控制血清；方式5：按TG、Mg顺序测定，以上各种方式测试均先测定质量控制血清在控后才测定血清样本。
2 结果
总胆固醇检测试剂(酶法)，甘油三酯检测试剂(酶法)对总胆汁酸的测定产生严重正干扰，葡萄糖检测试剂(酶法)和尿酸检测试剂对无机磷测定产生严重正干扰，尿素检测试剂(GLDH－偶联酶法)对谷氨酸脱氢酶测定产生正干扰，甘油三酯检测试剂(酶法)对镁测定产生正干。
3 讨论
实验大鼠生化指标测定的影响因素 篇3
1 影响生化指标测定的实验动物环境因素
1.1 气候因素
1.1.1 温度
30 d喂养实验所用的大鼠属哺乳类动物中的恒温动物, 具有在一定的温度范围内保持体温恒定的生理调节功能, 气温过低时, 常导致性周期的推迟, 低温下育成的大鼠尾巴明显变短, 心脏、肝脏、肾脏变大。我国对大鼠屏障环境温度的要求是在20~26℃[1,2]。
1.1.2 湿度
空气的相对湿度对动物的体温调节有密切关系, 当温度较高时, 高湿影响动物体蒸发散热, 容易引起动物体的代谢紊乱, 使动物机体抵抗力下降, 发病率增加。我国对大鼠屏障环境湿度的要求在40%~70%[1,2]。
1.1.3 气流、风速、换气
气流的速度即风速有冷却动物体表, 促进散热的作用。风速的影响是单一因素, 在同温度、湿度复合的场合能表现出非常显著的差别, 动物室的理想风速是0.20 m/s。换气对于供给动物新鲜空气, 除去室内的恶臭物质是很重要的, 我国对大鼠屏障环境的换气次数要求为15次/h[1]。
1.2 物理及化学因素
1.2.1 粉尘
粉尘是指较长时间飘浮在空气中的固体微粒, 空气中的微生物也包括在内。实验动物室的粉尘可引起鼻咽喉炎、哮喘、发热、皮肤炎等过敏症状。我国对大鼠屏障环境空气洁净度的要求是要达到7级[1]。
1.2.2 臭气
动物室内的臭气主要有氨、硫化氢等物质, 这些气体对人体和动物均可产生直接危害, 使正常生理过程受影响。当氨浓度较高时, 会刺激动物的黏膜而引起流泪、咳嗽、急性肺水肿, 引起动物体质下降, 从而影响动物实验效果。我国动物室的氨浓度标准为14 mg/m3[1]。
1.2.3 噪音
噪音是喧闹的声音和不好听的声音的总称。动物能听到比人宽得多的音频, 动物长期接触噪音时, 听觉器官、神经系统与生殖生理系统均受到损害。我国动物室的噪音标准为60 d B以下[1]。
1.2.4 光照
光照对实验动物的生理机能有重要的调节作用, 一些文献报道了微波、射线、高功率毫米波均对大鼠血液生化指标有一定的影响[3,4,5], 而且光对实验动物的影响在生殖和行为上比较突出。所以在人工照明的条件下, 工作照度应控制在150~300 lx, 动物照度50~100 lx, 昼夜明暗交替时间为12∶10 h或10∶14 h[1]。
1.3 居住条件
1.3.1 笼具
笼架具的材料和结构不同, 其微环境也不同, 对动物实验结果的影响也有一定的差异。因此, 最好采用符合规格的无毒、耐腐蚀、耐高温、易清洗、消毒的材料制成的笼架具[1]。
1.3.2 垫料
垫料的使用是为了动物繁殖和保温、安乐及保持盒内的清洁, 垫料应选用吸湿性好、柔软舒适, 尘埃少, 无异味、无芳香类化学物质和其他污染, 不被动物采食[6], 并须经灭虫、消毒后使用。
2 影响生化指标测定的实验动物因素
实验动物的血液、器官和组织的化学成分及生化组成是相对稳定的, 但也因品种、品系、年龄、性别及生理状态等因素影响而在一定范围内变动[7]。而血液中的有机成分, 如胆红素、胆固醇、肌酸酐、尿素氮和尿素, 以及葡萄糖等皆为机体代谢产物, 且都有各自生理、病理及代谢过程中特定的作用。在溶血、肝实质细胞损伤、胆汁排泄及饥饿等状态下伴有胆红素增加。在肝细胞功能障碍及损伤时伴有血液胆固醇增加, 而实验动物不同品系之间也伴有差异。在肾脏病变时伴有机酸酐浓度下降, 而在肝细胞损伤及肾脏病变时也伴有血液尿素的增加。另外, 大鼠对营养成分反应敏感, 某种成分缺少, 往往造成异常, 必须提供全价营养的饲料, 大鼠还对饲料中有毒成分敏感[8]。大鼠胃容量小, 不耐饥饿, 要经常添加饲料, 不能长时间断料。大鼠无汗腺, 不耐高温, 高温易发生中暑死亡。大鼠对湿度、粉尘、氨气和硫化氢敏感, 易引起上呼吸道发炎, 导致肺组织坏死, 因此, 要保证室内换气, 动物密度不能过大, 要勤换垫料, 以保持动物室内空气清新。另外, 要特别注意下述几个方面的问题。
2.1 血液标本的保存
血液标本应具塞避光保存, 保存容器一般用玻璃、聚氯乙烯、聚四氟乙烯制品。低温下保存的样品不能在室温慢慢溶解, 而应放在25~37℃水浴中短时间快速溶解, 充分混匀, 恢复到室温校正总量。血液标本必须避免重复冻结溶解, 这样会使血液成分改变。需用血清的检验项目, 一般保存于4~6℃冰箱或冻结保存数天, 多数成分是比较稳定的, 但全血切勿冰凉, 因红细胞在冰点下受到物理作用的改变不可逆, 将引起溶血和影响结果[9,10]。
2.2 采血时间和部位
在实验检测指标中, 血液中的相关指标是必检指标, 因此血液样本采集的质量和数量直接影响实验结果[11], 一般动物实验中, 生化指标的检测应在禁食 (不禁水) 4~12 h后采血, 如血糖、血脂、游离脂肪酸, 肝功及肾功检查等;有些重复指标需在同一时间采血检查, 如血浆皮质醇、血清胆红素、白细胞等, 因为这些指标在一日之内的不同时间有生理性的高低波动。根据采血部位, 一般有静脉血, 毛细血管血, 动脉血等, 多数指标受其影响不大, 但也有一些指标会受影响, 如血糖, 血清乳酸[12,13]。
2.3 血液标本的溶血
由于红细胞内和血浆许多成分的含量是不同的, 溶血后许多生化检验项目都会受到影响, 如谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、酸性磷酸酶等, 细胞含量超过血浆十几倍乃至一百倍, 溶血后血清和血浆中这些成分就会显著升高[13]。
2.3.1 引起溶血常见的原因
在日常生化检测工作中, 一些物理或化学因素都可能引起标本的溶血, 如抽血负压过大、水浴温度过高、冰冻、冷藏温度过低;离心速度过高、速度过快、振荡过强或血液接触到表面活性剂、药物的毒副作用[14], 注射器或试管潮湿;动物取血时血液流经动物毛发;血液直接滴入试管的距离太高;抗凝剂使用不当等[15]。
2.3.2 其他因素对血液有关指标测定的影响
精神紧张会对一些检测结果有明显影响, 如使动物白细胞、血清胆固醇及儿茶酚胺水平升高。
3 结语
生化测定 篇4
[关键词] Biosen C-Line葡萄糖分析仪；全自动生化分析儀；血糖
[中图分类号] R446.11 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2012）04-156-02
糖尿病（diabetes mellitus，DM）是一组以慢性血葡萄糖（简称血糖）水平增高为特征的代谢性疾病，是由于胰岛素分泌不足和（或）作用缺陷所引起[1]。其患病率正随着人民生活水平的提高、人口老龄化以及生活方式的改变而迅速增加，已成为发达国家中继心血管病和肿瘤之后的第三大非传染性疾病，严重威胁人类健康。2010年新英格兰杂志报道称，中国20岁以上的2型糖尿病发病率达9.7%，约9 240万，1.48亿成人处于糖尿病前期[2]。大型医院糖尿病专科患者数量激增，及时、快速、准确地做多样本的血糖监测已成为临床急需的工作之一。近年来，临床多采用家用便携式血糖仪进行单个患者的顺序监测，存在检测时间长，大量样本检测不便的问题，对目前上市的可进行多样本血糖监测的小型葡萄糖监测仪的血糖值结果的可靠性一直存有争议。笔者所在科室通过研究小型葡萄糖监测仪——德国EKF公司的Biosen C-Line葡萄糖分析仪测量血糖值的差异性，为临床多样本监测血糖寻找便捷、准确的方法，同时也为临床选择合适、准确的血糖分析仪提供参考依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择2010年8～11月入住笔者所在科室的59例糖尿病患者（其诊断均符合1999年WHO糖尿病诊断标准），其中男35例，女24例；年龄最小4岁，最大79岁，平均（50.93±15.93）岁；病史最短1 d，最长30年，其中小于1个月者2例，其余57例的平均病史为（7.02±6.88）年；RCB范围为17.60%～47.70%，平均为（37.52±5.05）%。
1.2 工具
1.2.1 周围血测血糖工具 德国EKF公司的Biosen C-Line葡萄糖分析仪及其配套的试剂。
1.2.2 静脉血测血糖工具 罗氏P800全自动生化分析仪。
1.3 方法
采取方便抽样的方法随机选取参与研究的患者，并遵循知情同意的原则，每例患者在5 min内分别采集1个指血标本及1个静脉血标本。具体方法如下：由经过统一培训的本科室护士负责样本的收集，研究对象需禁食、禁水8 h以上。按照中国质检总局发布的血糖仪国家标准GB/T19634-2005规定，进行指测血糖样本的采集。护士先使患者手臂短暂下垂，用75%酒精消毒患者无名指，之后准备试纸、安装采血针，使皮肤待干，患者皮肤完全干燥后，用采血笔在指尖一侧刺破皮肤2～3 mm，手心向下，点刺处处于手指最低点，使血液自然流出。使用10 μL毛细管采集指血标本。采集标本后，将毛细管投入特制的反应试管中摇匀，即可开始检测。在5 min内再抽取同侧肘正中静脉血2 mL作为静脉血标本，注入生化试管。每个患者共收集2个标本。为了减少两种采血方法的时间间隔，护士在进行采集前先选好静脉血后再进行指血采集。指血血糖结果当时记录，静脉血在送至检验科离心后分离血清并进行测血糖，采集后3 h内得到结果。
1.4 统计学处理
所有数据资料应用SPSS11.5统计软件进行分析，两独立样本间采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
本研究共收集59个病例，生化分析仪检测血糖平均值为（9.94±4.00）mmol/L，Biosen C-Line葡萄糖分析仪测得的平均值为（10.76±3.90）mmol/L，两组比较差异无统计学意义（t=1.12，P=0.27）。
3 讨论
3.1 两种血糖检测方法检测血糖平均值间的比较无差异性
本研究结果显示两种血糖检测方法测得的血糖平均值间的比较差异无统计学意义（P＞0.05），故Biosen C-Line葡萄糖分析仪检测血糖结果具有可靠性，能够在临床上快速对多样本的血糖进行准确的监测，为医生、护士制定医疗和护理措施提供参考依据。
3.2 采血顺序
对于在研究中进行指血、静脉血的采集顺序，多数研究者并未明确说明，有的是采用随机的方法[3]，少数作者主张先行静脉血采集。而中国质检总局发布的血糖仪国家标准GB/T19634-2005中规定：在采集静脉血前5 min内，用血糖仪做手指血检查，两者时间间隔应少于10 min，否则无比较意义。
故笔者所在科室严格按照中国质检总局发布的血糖仪国家标准GB/T19634-2005规定进行标本采集。
3.3 标本质量要求
有研究显示自然流出的血液血糖测量值和静脉采血测定值比较差异无统计学意义[4]，因此笔者所在科室采集的均为自然流出的指血。指血血糖值即时出结果；静脉血即时送检验科离心、测定。笔者所在科室采用加惰性分离胶的真空采血管进行静脉血的采集，可保证血液生化在24 h的稳定性。
3.4 数据换算
血糖测定又与血细胞比容有关，故笔者分析资料时，在血细胞比容正常的前提下进行数据分析，从而保证了数据的可比性。
3.5 Biosen C-Line葡萄糖分析仪的优越性
采集静脉血用生化分析仪检测血糖是公认的金标准，但此方法采血量较多（2 mL左右），测试时间较长，不便于一日多次血糖的监测，也不适合多样本快速检测的要求，且费用较高，给患者带来一定的痛苦和经济负担。Biosen C-Line葡萄糖分析仪特点是价格低廉，操作简单易行，仅需血标本10 μL。操作者只需按键一次即可在40 s得到10个结果，每小时可连续检测80～120个血糖结果。与静脉血检测相比较痛苦小，检测迅速，能大大提高临床检测效率。笔者所在科室在规范采血方式下测得的数据表明两种血糖检测方法监测血糖平均值间的比较差别无统计学意义。由此结果可知，Biosen C-Line葡萄糖分析仪可对多样本血糖进行准确而快速的检测，可广泛应用于临床。但不规范的操作会导致血糖值的偏差，比如手指挤压指血值偏低[4]等，因此在临床操作时一定要按操作规范做，以保证结果的准确性。
[参考文献]
[1] 陆再英，钟南山.内科学[M].第7版.北京：人民卫生出版社，2008：770-793.
[2] Yang W，Lu J，Weng J.et al.Prevalence of diabetes among men and women in China[J].N Engl J Med，2010，362（12）：1090-1101.
[3] 韩春花.糖尿病患者静脉与手指血糖检测的比较[J].现代医药卫生，2009，25（21）：3263-3264.
[4] 刘桂玲.不同采血方法对快速血糖测定仪血糖测量值的影响[J].新乡医学院学报，2009，26（3）：294-295.
云南镇沅瓢鸡血液生化指标的测定 篇5
1 材料与方法
1. 1 试验动物
选择同批次出雏后的成年健康镇沅瓢鸡100 只( 公母各半,公鸡平均体重1 810. 33 g,母鸡平均体重1 513. 50 g) ,按照不同生长发育阶段设计饲料配方,并进行正常的免疫程序。
1. 2 测定项目及方法
试验鸡只空腹24 h,翅静脉采血2 ~ 3 m L,3 000 r / min离心15 min,取上清液,用全自动生物化学分析仪( 型号为TBA - 120) 测定血浆各项生化指标,测定项目包括血糖、尿酸、尿素、肌酐、三酰甘油、胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、球蛋白、白蛋白、白蛋白/球蛋白、总蛋白、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶共14 项指标,所测项目一并当天完成。
1. 3 数据的统计分析
采用Excel和SPSS 13. 0 软件进行统计分析,各项指标进行独立性t检验分析,结果以“平均数 ± 标准差”表示,P < 0. 05 表示差异显著,P < 0. 01 表示差异极显著。
2 结果与分析
2.1镇沅瓢鸡血浆有机物含量
见表1。
注: 公鸡和母鸡同行数据肩标大写字母不同表示差异极显著( P < 0. 01) ,小写字母不同表示差异显著( P < 0. 05) ,字母相同表示差异不显著( P > 0. 05) 。
由表1 可知,镇沅瓢鸡血浆有机物含量中三酰甘油和总蛋白含量公鸡均显著低于母鸡( P < 0. 05) ,尿酸含量公鸡极显著高于母鸡( P < 0. 01) ,而血糖、尿素、肌酐、胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、球蛋白、白蛋白、白蛋白/球蛋白等有机物含量公、母鸡之间差异不显著( P > 0. 05) ,其中白蛋白/球蛋白比值公、母鸡均小于1,这与白腹锦鸡[1]、红腹锦鸡和石鸡[5]、泰和乌骨鸡[6]一致,而蓝马鸡[7]、青海马鸡[8]、褐马鸡[9]、灰胸竹鸡[10]等白蛋白/球蛋白比值均大于1。研究表明,当动物营养不良时其血液总蛋白/白蛋白比值会降低[11],说明瓢鸡日粮中蛋白质含量较低,在人工饲喂过程中应提高饲料中的蛋白质含量。
2. 2 镇沅瓢鸡血浆酶活性
见表2。
由表2 可知: 镇沅瓢鸡血浆中谷丙转氨酶含量公鸡低于母鸡,但差异不显著( P > 0. 05) ; 碱性磷酸酶含量公、母鸡之间差异显著( P < 0. 05) 。
U·L-1
注: 公鸡和母鸡同行数据肩标字母不同表示差异显著( P <0. 05) ,字母相同表示差异不显著( P > 0. 05) 。
3 讨论与小结
血液是构成生命有机体内环境的重要组成部分,内环境的变化可导致血液组成成分或性质发生特征性的变化。动物血液的生理生化指标不仅能直接反映机体的健康状况,同时也是疾病诊断和监测的主要指标之一。因此,选择在动物健康状态下测定血液生化指标具有重大意义。
3. 1 血浆有机物含量的测定
血浆总蛋白是各种蛋白质的混合物,具有营养、运输、调节p H值、参与机体免疫以及凝血与抗凝血等作用,对维持机体内环境的代谢和平衡具有重要作用。血清总蛋白含量的多少是蛋白质代谢旺盛的直接体现。白蛋白能够快速补充体内蛋白质,修复受损组织细胞,保持细胞活力,全面提高机体免疫球蛋白的数量及活力,调整机体免疫功能,提高血清蛋白含量,改善微循环,进而增强抵抗力,即提高防病、抗病能力,提高消化系统食物的转化率,修复细胞组织等。免疫球蛋白是具有抗体活性的动物蛋白,主要存在于血浆中,也见于其他体液、组织和一些分泌液中。免疫球蛋白在机体受抗原,如病原体,刺激后产生,能够与抗原发生免疫反应,生成抗原- 抗体复合物,从而阻断病原体对机体的危害,使病原体失去致病作用。本试验结果表明,镇沅瓢鸡血浆中总蛋白含量公鸡显著低于母鸡( P < 0. 05) ,说明镇沅瓢鸡母鸡的机体蛋白质合成代谢能力旺盛,蛋白质利用率高,有利于小肠对营养物质的吸收,特别是产蛋母鸡因合成蛋白质的需要,进一步增强了对蛋白质的合成利用[12]。
三酰甘油是血液脂肪的组成成分之一,能够反映脂类的吸收和代谢状况,对于血脂疾病的诊断具有指导意义。本试验结果表明,镇沅瓢鸡血浆中三酰甘油含量母鸡显著高于公鸡( P < 0. 05) ,说明镇沅瓢鸡公鸡的脂肪分解能力较强,脂肪在体内沉积较少,而母鸡囤积脂肪能力较强。这与白腹锦鸡[1]、红腹锦鸡[5]和塞北乌骨鸡[4]一致。
尿酸是禽类蛋白质和嘌呤代谢的终产物,血中尿酸含量直接反映体内蛋白质的分解代谢水平。肝肾功能异常时,会引起家禽蛋白质代谢障碍,使血液中尿酸含量升高,引起家禽高尿酸血症,即痛风。本试验中,尿酸含量公鸡极显著高于母鸡( P < 0. 01) ,这与白腹锦鸡[1]不一致。说明在选择用尿酸作为镇沅瓢鸡健康状况的依据时,要充分考虑其性别之间的差异。
镇沅瓢鸡血浆有机物含量中,除上述3 项指标外其他各项生化指标公、母鸡之间均差异不显著( P >0. 05 ) ,说明在健康情况下这些指标是相对稳定的,在实践中可以通过测定这些血液生化指标作为疾病诊断的依据。
3. 2 血浆酶活性的测定
碱性磷酸酶是一种能水解多种类型磷脂的非特异性酶,广泛存在于动物血液和各种组织中,其活性反映了动物的生长状况及抗应激能力,对骨骼的形成、营养物质的吸收及运输具有重要作用,目前碱性磷酸酶已作为判断动物生长及健康的重要依据。
碱性磷酸酶合成于骨基质成熟阶段,通常机体血清中的碱性磷酸酶主要包括血清碱性磷酸酶( ALP)和骨特异性碱性磷酸酶( BALP) 。碱性磷酸酶与骨矿化密切相关,在碱性环境中骨矿化活跃,成骨细胞释放的血清碱性磷酸酶水解无机磷酸盐,进而降低焦磷酸盐浓度,有利于骨的矿化。骨骼钙化受阻时,成骨细胞非常活跃,合成大量碱性磷酸酶,使血清碱性磷酸酶含量明显升高。因此,碱性磷酸酶是骨骼形成的标志酶,是判断骨骼营养情况的敏感指标[13]。骨碱性磷酸酶是成骨细胞的一种细胞外酶,来自生长非常旺盛的骨骼,主要是在成骨过程中水解磷酸酶,为羟磷灰石的沉积提供磷酸,同时水解焦磷酸盐,解除其对骨盐形成的抑制作用,有利于成骨[14]。成骨细胞作为骨形成过程中的重要功能细胞,其增殖、分化和成熟与骨骼的正常生长发育密切相关。骨碱性磷酸酶是成骨细胞增殖停止初期的特征性产物,当骨基质矿物化开始后即减低。由于成骨细胞在骨形成阶段大量生成骨碱性磷酸酶,因此骨碱性磷酸酶是反映成骨细胞活性和骨形成总体状况的一项较好指标[15]。本试验结果表明,碱性磷酸酶含量母鸡显著高于公鸡( P < 0. 05) ,这与塞北乌骨鸡[12]一致,与褐马鸡[9]、灰胸竹鸡[10]不一致。说明镇沅瓢鸡和塞北乌骨鸡公鸡的抗应激能力较母鸡强,而灰胸竹鸡和褐马鸡公鸡的抗应激较母鸡弱。
血液生化指标反映了动物体内新陈代谢和生理机能状况,本试验通过测定镇沅瓢鸡血液生化指标不仅丰富了镇沅品种资源库的内容,还在一定程度上为镇沅瓢鸡的疾病诊断、营养标准的制订及种质资源的研究提供科学的理论依据,对镇沅瓢鸡的保护和疾病的防治具有重要作用。
摘要：为了从生化特性方面研究镇沅瓢鸡的种质特征,试验随机选取了成年镇沅瓢鸡100只为研究对象,对其14项血液生化指标进行了测定。结果表明:镇沅瓢鸡血浆有机物含量中三酰甘油和总蛋白含量公鸡均显著低于母鸡(P<0.05),尿酸含量公鸡极显著高于母鸡(P<0.01),血浆酶活性中碱性磷酸酶含量公鸡显著低于母鸡(P<0.05),其他各项血液生化指标公、母鸡之间差异不显著(P>0.05)。说明镇沅瓢鸡日粮中蛋白质含量较低,在饲喂过程中应注意提高饲料中的蛋白质含量,血液生化指标检测可以作为疾病诊断的依据。
生化测定 篇6
生化需氧量(BOD)是指在有氧存在的条件下,微生物分解水中的可氧化性物质所进行的生物化学反应中所消耗的溶解氧的量,以氧的mg/L表示,它是衡量水体受有机物污染程度的综合性重要指标之一。整个生化过程包括两个阶段:第一个阶段为碳化阶段,主要是微生物将有机物中的碳和氢氧化生成CO2和H2O,20℃下完成此阶段需要20d左右;第二个阶段为硝化阶段,是硝化细菌将含氮有机物和氨氧化生成亚硝酸盐和硝酸盐,20℃下完成此阶段需要100d左右[1]。水样经过5d的生物氧化,碳化阶段可完成大半,并开始进入硝化阶段。尤其对生活污水来说,5d的耗氧量相当于完全氧化分解耗氧量的70%,因此国内外普遍规定将水样在20±1℃培养5d,分别测定培养前后的溶解氧,二者之差即为BOD5值[2,3]。在水环境监测中,BOD5能相对表示微生物可氧化的有机污染物的含量,比较符合水体自然净化功能和大部分污水处理工艺路线的设计思想,是研究水样的可生化降解性和生化处理工艺动力学的重要参数[4]。因此,BOD的测定对水体污染控制和对水环境功能评价具有非常重要的意义。
2 稀释与接种法
生化需氧量的传统测定方法是稀释与接种法,是指水样经含有营养液的接种稀释水适度稀释后在20±1℃培养5d,测定培养前后水样中溶解氧的质量浓度,由二者之差计算每升样品所消耗的溶解氧量,表示为BOD5。该法是1913年由英国皇家污水处理委员会正式提出,美国公共卫生协会1936年将(20℃)5d生化需氧量稀释法定为水和废水的标准检验方法,从而形成了测定BOD5的标准稀释法,并为ISO/TC-147所推荐[5]。我国1987年将此方法颁布为水质分析方法标准GB7488-87,并由环境保护部于2009年修订后颁布为HJ505-2009标准[6]。
自从BOD5在国际上被确定为重要的水质有机污染指标和监测参数之一以来,许多研究人员和分析工作者对其测定方法一直在坚持不懈地研究和改进,截至目前国内外仍以稀释与接种法作为经典方法广泛应用于常规监测、比对实验、标样考核、仲裁分析等领域。然而,在实际工作中,稀释与接种法也有许多不足之处,如操作复杂、耗时耗力、精密度差、干扰性大、适用范围有限、不宜现场监测等[7,8]。
3 BOD快速测定方法
3.1 微生物传感器法
Verrismmen于1976年首先提出用氧电极接种污泥法测定BOD,为生物传感技术发展及BOD测定传感器的研制奠定了坚实的基础。1977年,Karube[9]等采用固定化技术研制成了第一台测定BOD的微生物传感器,Hikuma[10]等和Strand[11]等又分别用多孔醋酸纤维素膜固定酵母菌和活性污泥富集菌对其进行改进,延长了传感器的使用寿命。1983年日本的大谷芳亨研制出BOD的连续测定装置,用于测定营养型废水中的BOD,日本成为了世界上率先研制出BOD快速测定仪的国家,并在1990年颁布了微生物电极法工业标准(JISK3602—1990)。2000年,Chee[12]等和Koenig[13]等曾用溶解氧光纤维制成了BOD传感器。国内对BOD微生物传感器开展研究的主要有武汉病毒研究所的张先恩[14]、河北轻化工学院的孙裕生[15]、上海华东化工学院的李友荣[16]、上海复旦大学的邓家祺[17],以及华南理工化学工程所的阮复昌等[7],他们分别从BOD传感器、菌种筛选、微生物膜及测定电极系统等方法展开研究,为BOD微生物传感器在我国问世做出了突出贡献。我国于2002年颁布了微生物传感器快速测定法(HJ/T86-2002),BOD生物传感器也由此迈开了商业化的步伐[18]。
微生物传感器法测定BOD的原理是待测样品与空气以一定流量进入流通测量池内与微生物传感器接触,样品中溶解态可生化降解的有机物被菌膜中的微生物分解,使扩散到氧电极表面的氧减少,当样品中可生化降解的有机物向菌膜的扩散速度达到恒定时,扩散到氧电极表面上的氧也达到恒定并产生恒定电流,该电流与样品中可生化降解的有机物的差值及氧的减少量存在相关关系,据此计算出样品的BOD,再与BOD5标准样品对比换算得到样品的BOD5值[19]。与标准稀释法相比,微生物传感器法具有测定时间短、精度较高、重现性好等优点,但是当水样中对BOD有贡献的悬浮物含量较高或含有难生化降解的有机物时,测定结果会产生偏差,而且该方法不能用于含有高浓度氰化物、杀菌剂、农药类和游离氯等水样的测定。
3.2 测压法
测压法是将水样置于密闭的培养瓶中,并在瓶口处放置一个装有NaOH或KOH的小杯,当培养瓶内的氧被微生物消耗的同时,由微生物呼吸产生的与耗氧量的量相当的CO2气体被碱吸收,密闭系统的压力会降低,通过压力计测出其压降,即可求出水样的BOD5值。该法操作简便、节省人力和试剂、可直读BOD值、便于随时观查,而且仪器构造简单、性能相对稳定、比较适合于批量样品的测定。张爱丽[20,21]等对差压式直读BOD测定仪及其测试方法进行了改进,有效地提高了仪器的灵敏度和精密度,扩大了测定范围,并可连续测量,提高了仪器的使用效率。目前应用测压法测定BOD5的仪器型号较多,国外的主要有德国WTW公司生产的TS606-G/4-i和意大利生产的ET99724A BOD测定仪,国产仪器为江苏电分析仪器厂生产的890型微机BOD5测定仪[4]。
3.3 检压库仑法
检压库仑法测定BOD是指在特制装置中,微生物分解待测样品中的有机物,消耗其中的氧气而释放出CO2,释放出的CO2被吸收剂吸收,使瓶内的压力降低,消耗掉的氧气又由电解产生的氧气不断补充,使培养瓶内的压力始终保持平衡,根据微生物分解样品时的耗氧量可计算其BOD5值。该方法是将化学分析转化为物理量的测定,其操作过程变得更为简单。检压法是由西德Sierp最先提出[1],但仪器不够完善,Galdwell、Langelire和Gellman[22]等人又在Sierp装置的基础上进行了改进,采用瓦勃计测定BOD,结果证明该方法的灵敏度更高,测定范围更宽。Dillinghom[23]用纯葡萄糖溶液进行验证,也发现瓦勃式法比稀释法更为准确。
3.4 增温法
增温法就是在稀释接种法培养温度的基础上适当提高反应温度,激化微生物的活性,加快其分解作用,缩短水样培养时间,以达到快速测定样品中BOD的目的。张金华[24]根据BOD反映动力学原理,提出了应用增温法快速测定BOD5的培养时间的计算公式,并计算出高温条件下适合绝大多数水样的培养时间。他通过对增温法理论上的准确性和可行性,以及大量应用实例进行分析,证明增温法测定水样的BOD是可行的。Young[25]也认为样品在35℃培养2.5d的BOD值与20℃培养5d没有差别。
3.5 活性污泥曝气降解法
在温度为30～35℃,用活性污泥强制曝气降解样品2h,经重铬酸钾消解生物降解前、后的样品,测定生物降解前和生物降解后的化学需氧量,其差值即为BOD,可根据与标准方法的对比实验结果换算出样品的BOD5值。黄平路等[26]采用活性污泥曝气法测定地表水和工业废水中的BOD5,结果证明该方法具有操作简单、分析快捷、准确度和精密度高、测定范围宽、可及时提供监测结果等优点,但不易准确控制培养瓶内的空气流量,给体积定量造成困难,所以该方法在日常监测工作中尚未普及。
3.6 紫外曝气法
紫外(UV)曝气法是用紫外光对待测样品进行扫描,样品中的有机物对紫外光会产生吸收,不同种类和结构的有机物的∧max与ε也不同,而且水样中结构越复杂、毒性越大、越难降解的有机物产生的吸收值越大,ε也越大。UV曝气法测定BOD的过程主要包括生化处理池曝气、生物膜处理水样和污水排入河道后的实际模拟几个部分,其真实性比BOD5强,因此该方法测得的BOD值对评价各种水体有机污染的程度和污水处理效果,以及对相关处理设备运行参数的调整等方面都具有实际的指导意义[27]。
3.7 分光光度法
分光光度法是在传统的五日测定法基础上,采用I3--结晶紫-聚乙烯醇(PVA)体系测定5d前后培养水样中溶解氧的浓度,以碘酸钾为溶解氧标准溶液,与过量碘化钾反应生成单质碘,新生成的I3-与结晶紫在PVA存在下结合成的电中性离子缔合物在550nm处有最大吸收,采用光度法测定5d前后培养水样中的溶解氧,根据其变化量计算出BOD5值。沙鸥等[28,29]采用该方法对BOD5标准样品、葡萄糖-谷氨酸标准溶液和污水厂进出口水样进行测定,所得结果与国家标准方法测定结果一致,同时证明该法试剂用量少,分析误差小、测定灵敏度高,为环境水样中BOD5的测定提供了更为灵敏准确的方法。
3.8 近红外光谱法
近红外光谱法是以透射法采集水样的近红外光谱,利用水样中有机污染物在短波近红外区(800～1350nm)的吸收峰,与标准方法测定的BOD值建立相关关系曲线,测得样品的近红外光谱即可通过曲线计算出水样的BOD5值。近红外光谱法作为一种新的水质快速测定方法,不仅操作简便、测定速度快、不产生二次污染、适合现场检测,还具有与光纤技术结合构建大型、远距离、自动化、网络化的在线监测系统的潜力,但水中存在的杀菌剂、游离氯、藻类、硝化微生物等会使得测定结果产生偏差[30,31]。
3.9 重铬酸钾紫外光度法
重铬酸钾紫外光度法是指在规定的条件下,先用活性污泥降解待测样品,再经重铬酸钾消解生物降解前和生物降解后的样品,用紫外光扫描反应前后重铬酸钾的变化量,以求得生物降解前和生物降解后的化学需氧量,其差值即为BOD,再换算成BOD5值。谢炜平和刘敬等[32,33]研究证明用重铬酸钾紫外光度法测定水中的BOD5具有操作简单、经济实惠、精密度和准确度高、测定范围宽、适用面广等优点,是测定水体中有机物污染物的较好方法,但也存在一些缺点,如BOD实验的稳定性较差、软件设计不够灵活、打出的数据指示不详等,此法还有待改进。
3.10 坪台值法
坪台值法是指在驯化培养微生物的系统中,样品静态曝气一段时间,可生物降解的有机物完全被微生物群代谢吸收,当混合液的COD和滤出液对时间的曲线上出现稳定的坪台值时,二者之差即代表样品的BOD值。BOD坪台值虽有良好的重现性,但它仅适用于水样中有机物强度的测定,而与水样BOD5的测定不存在可比性[1]。
4 BOD在线监测仪
随着环保事业的不断发展和污水处理力度的加大,BOD在线监测仪的研发及普及应用已势在必行。目前为止,国内外均未制定BOD在线监测标准方法,市场上应用较多的主要有生物反应器法、微生物电极法和UV法三类[7]。
生物反应器法的测定原理是利用特殊的中空材料吸附大量的微生物,当待测水样进入反应器后,在搅拌条件下微生物迅速降解水样中的有机物,通过测定水样降解前和降解后的溶解氧,并与反应器的内置标准曲线对比计算得BOD值,多个反应器连续工作即可实现水样的在线监测。该种BOD在线监测仪的代表产品为北京北美仪器公司生产的BIOX-1010系列,可用以工业或城市污水BOD的在线连续测定。
微生物电极法与前面介绍的微生物传感器法原理相同,但在线监测仪的结构复杂,需要定期添加标准溶液和更换进液管路及微生物膜。我国生产的该类BOD快速测定仪不仅测量范围较宽,还可以实时在线准确监测,可达国际先进水平。
UV法是指在特定波长条件下,依据样品中有机物的光谱吸收强度与待测溶液浓度的相关关系来测定样品中有机物的含量。但采用该法所测定数据的重现性及其与BOD5的相关性依赖于水样的稳定性,而许多不稳定样品中的有机物在指定波长区间内没有吸收光谱,使得UV法很难精确测定BOD,所得数据只可以对水样进行定性判断。
5 结语
生化测定 篇7
1 材料与方法
1.1 样本采集于2007年9月在永昌肉用种羊场随机
*为通讯作者。
抽取甘肃现代肉羊新品种陶寒杂交羊 (DH) 、波寒杂交羊 (BH) 各10只及波德代 (B) 、无角陶塞特 (D) 和群中小尾寒羊 (H) 各5只进行血液生理生化的测定。
1.2 试验地点
血液生理指标的测定在永昌肉用种羊场完成, 生化指标在甘肃农业大学动物科学技术学院研究生实验室完成。
1.3 试验方法
1.3.1 P、R、T的测定方法:
在清晨安静时, 将随机抽取的羊只保定好, 待安静后进行体温测量, 测空腹直肠温度 (T) 5 min;呼吸频率 (R) 测定, 观察安静时每分钟的呼吸次数;脉搏 (P) 测定, 按住后股动脉脉搏测每分钟跳动的次数。
1.3.2 血样采集及预处理:
将羊保定好, 用酒精棉球在颈静脉处消毒后, 用一手指压迫颈静脉, 使其显露后, 用12号一次性注射针头采取血液10mL左右, 用10%的DETA-二钠抗凝, 冷藏保存。带回实验室, 分出1.5 mL左右全血用于生理指标的测定, 其余血样立即分离血浆, 用于生化指标的测定。
具体测定方法按照试剂盒 (南京建成生物工程研究所) 上的说明用分光光度计 (723型可见分光光度计 上海光谱仪器有限公司) 测定。
1.4 数据统计
采用SPSS11.5统计分析软件进行数据分析, 方差分析采用单因素方差分析法, LSD 法进行多重比较。
2 结果与分析
2.1 生理指标的测定结果与分析
甘肃肉羊新品种群体温测定比较中显示DH显著高于H (P﹤0.05) , BH显著高于H (P﹤0.05) , DH显著高于D (P﹤0.05) , BH显著高于B (P﹤0.05) 。呼吸测定比较中显示DH极显著高于H (P﹤0.01) , BH极显著高于H (P﹤0.05) 。脉搏测定比较中显示D显著高于DH (P﹤0.05) , B显著高于BH (P﹤0.05) 。红细胞测定比较中显示H显著高于DH (P﹤0.05) , H显著高于BH (P﹤0.05) , D极显著高于DH (P﹤0.01) , B极显著高于BH (P﹤0.01) 。白细胞比较中显示H显著高于DH (P﹤0.05) , H显著高于BH (P﹤0.05) , B极显著高于BH (P﹤0.01) 。血红蛋白测定比较中显示H显著高于DH (P﹤0.05) , H显著高于BH (P﹤0.05) , D极显著高于DH (P﹤0.01) , B显著高于BH (P﹤0.05) 。
2.2 生化指标的测定结果与分析
甘肃肉羊新品种群钙测定比较中显示H极显著高于DH (P﹤0.01) , H极显著高于BH (P﹤0.01) , D极显著高于DH (P﹤0.01) , B极显著高于BH (P﹤0.01) 。磷测定比较中显示D极显著高于DH (P﹤0.01) , B极显著高于BH (P﹤0.01) 。钾测定比较中显示H与DH、BH, D与DH, B与BH及DH与BH之间差异均不显著 (P﹥0.05) 。氯测定比较中显示H极显著高于DH (P﹤0.01) , H极显著高于BH (P﹤0.01) , D极显著高于DH (P﹤0.01) 。白蛋白测定比较中显示DH极显著高于H (P﹤0.01) , BH极显著高于H (P﹤0.01) , D极显著高于DH (P﹤0.01) , B显著高于BH (P﹤0.05) 。总蛋白测定比较中显示H极显著高于DH (P﹤0.01) , H极显著高于BH (P﹤0.01) , D极显著高于DH (P﹤0.01) , B极显著高于BH (P﹤0.01) 。
甘肃肉羊新品种群淀粉酶测定比较中显示D极显著高于DH (P﹤0.01) , B极显著高于BH (P﹤0.01) 。葡萄糖测定比较中显示H与DH、BH, D与DH, B与BH及DH与BH之间差异均不显著。碱性磷酸酶测定比较中显示DH极显著高于H (P﹤0.01) , BH极显著高于H (P﹤0.01) , D极显著高于DH (P﹤0.01) , B显著高于BH (P﹤0.05) 。酸性磷酸酶测定比较中显示D显著高于DH (P﹤0.05) , B显著高于BH (P﹤0.05) 。乳酸脱氢酶测定比较中显示DH极显著高于H (P﹤0.01) , BH极显著高于H (P﹤0.01) , DH极显著高于D (P﹤0.01) , B显著高于BH (P﹤0.05) 。谷丙转氨酶测定比较中显示H极显著高于DH (P﹤0.01) , H极显著高于BH (P﹤0.01) , DH极显著高于D (P﹤0.01) , DH极显著高于BH (P﹤0.01) 。谷草转氨酶测定比较中显示DH极显著高于H (P﹤0.01) , BH极显著高于H (P﹤0.01) , D显著高于DH (P﹤0.05) , BH显著高于DH (P﹤0.01) 。
3 讨论与结论
甘肃肉羊新品种群的体温及呼吸均在正常范围之内, 并且都高于当地饲养的小尾寒羊, 这说明其适应了永昌肉用种羊场的气候条件。测定血液中红细胞、白细胞的数量和血红蛋白的含量及血清中酶的含量和活性变化对疾病的鉴别诊断和遗传育种有一定的意义[2]。参阅健康绵羊血液参数 (卢宗藩, 1983) , 成年绵羊红细胞数为1 030万个/mm3 (950~1 110) ;白细胞数为7 800个/mm3 (5 300~10 300) , 血红蛋白数为10.9 g/100 mL (10~11.8) , 本试验测定的甘肃肉羊新品种群平均红、白细胞、血红蛋白数均在正常范围内。张才骏等[3,4]测定的青海民和小尾寒羊的血红蛋白含量 (107.9 g∕L) 和冯宇哲测定的引入青海省的特克赛尔羊的呼吸 (44.73±8.17) 次∕min, 脉搏 (87.69±9.96) 次∕min, 红细胞 (8.82±1.49) ×1012∕L [5]都高于本试验所测定的血红蛋白含量、呼吸、脉搏、红细胞等。可能原因随海拔高度的增加, 氧分压的降低, 红细胞、血红蛋白及呼吸频率要增加, 以增强血液的运氧功能来适应缺氧的生态环境。但红细胞D极显著高于DH (P﹤0.01) , B极显著高于BH (P﹤0.01) , B白细胞极显著高于BH (P﹤0.01) , 这可能与品种特性有关。
血液学参数、血清酶学指标、血清蛋白质水平和无机离子含量等生理生化指标是反映和影响羊只营养满足程度、新陈代谢状况、体内外环境平衡、机体健康生长发育及生产性能的综合因素[6]。正常的生理生化指标, 既能反映动物体内实质与外表性能之间的关系, 也能反映品种、性别、年龄、地区、不同外界环境及不同生理状况的特征。因此, 正确掌握实验动物血液生理生化成分的正常变动范围至为重要[7]。
绵羊正常的血清钙浓度 (3.91±0.17) mmol/L, 正常的磷浓度 (1.16±0.28) mmol/L[8]。甘肃肉羊新品种群测定的血钙水平为 (1.35±0.24) mmol/L, 血磷水平为 (1.29±0.22 ) mmol/L, 血钙低于正常值, 血磷在正常值范围内, 这说明在永昌县养羊钙磷比不合适, 在羊饲养管理中应重视营养配比, 适当的补充钙含量高的饲草料, 使羊只充分发挥其生产潜力, 提高经济效益。钙、磷元素是动物体内所必需的常量元素, 主要作用是作为骨骼、牙齿的基本构成成分——羟磷灰石。此外, 对维持体液的酸碱平衡、神经肌肉的活性、血液凝固机制等方面都有重要作用。与韩大勇 , 赵有璋 (2006) 波德代、陶赛特与蒙古羊的高代杂种血液生化指标比较的蒙古羊血清钙浓度为 (2.58±0.98) mmol∕L, 血清磷浓度为 (1.83±0.70) mmol/L相比, 都低于蒙古羊的含量, 也低于本试验所测定的纯种羊的含量, 原因还有待进一步研究。
在干旱地区测定比较绵羊钾含量的高低, 评定其对干旱缺水的适应程度[9]。本研究测定的血清钾含量在正常范围内, 表明甘肃肉羊新品种群已处于对当地的干旱高海拔地区的代谢适应性。测定中的白蛋白的平均值比韩大勇所测的蒙古羊 (37.26±5.48) mg∕mL均值高, 比雏继业等的河南小尾寒羊生理生化常值测定的白蛋白 (母羊35.2g∕L±3.30g∕L, 公羊36.0g∕L±2.4g∕L) 高, 这说明甘肃肉羊新品种群可以发挥该品种的产肉遗传潜力。
参阅韩大勇、赵有璋 (2006) 波德代、陶赛特与蒙古羊的高代杂种血液生化指标比较研究测定结果, 碱性磷酸酶 (AKP) 、酸性磷酸酶 (ACP) 、谷丙转氨酶 (GPT) 和谷草转氨酶 (GOP) 水平基本接近, 均在正常范围内。所测的葡萄糖与央金等澎波毛肉兼用型半细毛羊新品种群血液生理生化参数测定的葡萄糖 (2.63±0.46) mmol/L水平基本接近, 在正常范围内。而淀粉酶 (Amy) 与曾玉锋 (2005) 波德代品种肉羊杂交种改良效果的研究所测得的血清淀粉酶接近, 在正常范围内。乳酸脱氢酶 (LDH) 与当地小尾寒羊差异比较大, 这可能说明乳酸脱氢酶活性在不同的种群间变异较大, 但还需进一步深入探讨。绵羊品种的生理生化常值受品种、性别、年龄、季节性、环境条件等多因素的影响与制约[10]。本研究只是按常规要求测定了不同品种的主要常值, 在今后研究中, 还应考虑其它因素的影响, 进行性别、年龄、季节性、环境条件等多种因素的比较研究。目前, 许多指标的测定都仅仅选某一季节或时期, 难以全面反映其变化规律。本试验所测定的血液生理生化指标的变化规律还有待更深入的研究。
摘要：试验通过对波德代、陶赛特、小尾寒羊及甘肃现代肉羊新品种群的19项生理生化指标进行了测定。结果表明, 甘肃现代肉羊新品种群平均红、白细胞、血红蛋白数均在正常范围内, 血钙 (DH:1.35 mmol/L±0.24 mmol/L, BH:1.29 mmol/L±0.22 mmol/L) 低于正常值, 血磷 (DH:1.40 mmol/L±0.13 mmol/L, BH:1.67 mmol/L±0.48 mmol/L) 在正常值范围内, 血清钾含量 (DH:4.82 mmol/L±0.97 mmol/L, BH:4.72 mmol/L±1.09 mmol/L) 在正常范围内, 其他指标都在正常范围内或与正常值接近, 说明其对当地自然生态环境和饲养管理条件有良好的适应性, 可以发挥该品种的产肉遗传潜力。
关键词：新品种,生理指标,血液,生化指标,适应性
参考文献
[1]杨慈清.无角陶赛特羊与蒙古羊杂交效果研究[D].兰州:甘肃农业大学, 2002:45~46.
[2]南京农业大学.家畜生理学[M].北京:农业出版社, 1980.
[3]张才骏, 李清军, 刘鹏程, 等.引入民和县的小尾寒羊23项血液指标的测定[J].青海畜牧业, 1990 (3) :33~36.
[4]张才骏, 李清军, 刘文娟, 等.青海半细毛羊15项血液生理生化指标测定[J].青海畜牧兽医杂志, 1989 (3) :10~11.
[5]冯宇哲.引入青海省的德克塞尔羊的生理生化指标测定[J].青海畜牧兽医杂志, 2004, 34 (4) :9~10
[6]王玉琴, 赵有璋.波德代羊主要生理生化指标的测定和分析[J].甘肃畜牧兽医, 2003, 33 (3) :2~4.
[7]贺晓兴, 项可宁, 王松林, 等.畜牧兽医技术数据手册[M].长沙:湖南科学技术出版社, 1986:39.
[8]卢宗藩.家畜及实验动物生理生化参数[M].北京:农业出版社, 1983.
[9]赵有璋.现代中国养羊[M], 北京:金盾出版社, 2005.
生化测定 篇8
关键词：骨代谢,生化指标,妇科,骨密度(BMD),血骨钙素BGP,Ⅰ型前胶原羧基肽CICP,碱性磷酸酶ALP,尿吡啶酚PYD
多项临床资料显示,绝经后女性患骨质疏松的比例远远高于绝经前的女性。这是由于女性进入更年期后,卵巢萎缩,导致雌激素水平、孕酮水平的不断下降,从引起一系列生理、心理的变化,即使轻微的跌打损伤,也会给绝经后的女性带来巨大的骨折创伤。临床上反映妇女体内骨转换变化的指标较多,本文就对传统的检测方法与骨代谢酶免疫进行比较,表明酶免疫生化指标能更好得反映妇女体内的骨吸收过程,而为临床带来更大的便利。现对具体过程报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
严格按照随机化原则选择绝经前后的妇女各56例,对其进行体格检查,排除心、肾功能不全及服用雌、孕激素等可以引起骨代谢变化的药物者,分为A(绝经前组)、B(绝经后组)两组,A组观察对象月经周期正常,年龄分布为41～56岁,平均为(43±2)岁;B组对象绝经(包括自然绝经和手术绝经)时间>1年,年龄分布为48～60岁,平均为(57±4)岁。两组观察对象的基线信息经调整后,差异不具有统计学意义(P>0.05)。
1.2 方法
(1)采用双能X线吸收仪(美国NORLAND-XR-36型)测量所有研究对象的12～14腰椎、股骨颈和大转子部位的骨密度BMD(g cm2)[1];(2)所有对象接受检查前禁食至少10h,次晨抽取5mL静脉血,立即送检,同时取空腹第二次小便10mL置于棕色瓶中保存在-20℃环境中等待检测。检测时间不超过3个月。(3)各项指标的检测:用酶免疫法测定BGP、ALP、CICP,所用药盒为美国Metra公司生产[2],具体操作遵循说明书;Ca/Cr和HOP/Cr比值的检测通过尿液标本获得[3]。
1.3 统计学方法
Excel建立数据库,采用SPSS18.0统计学软件分析,计量资料以均数±标准差(χ—±s)表示,采用t检验。计数资料采用率表示,进行χ2检验。等级计量资料,采用非参数检验(Z检验)。相关分析采用直线相关解决。P<0.05为具有统计学意义。
2 结果
检测结果显示:绝经后组BGP低于绝经前组,差异具有统计学意义(P<0.05)、绝经后组CICP检测结果显著高于绝经前组(P<0.01)、两组骨密度检测前后下降幅度差异无统计学意义(P>0.05)、Ca/Cr和HOP/Cr比值的测定两组间差异无统计学意义,以上指标的变化见表1。相关性统计分析显示同组内BGP、CICP、ALP有相关性,尽管r值较小,但由假设检验知其差异具有统计学意义。
3 讨论
正常女性进入围绝经期后,最常见的表现就是月经紊乱,此期是女性后期生理、心理发生变化的一个极其重要的时期[4]。大多学者认为始基卵泡或者卵母细胞的耗尽是导致绝经的重要因素。在卵泡渐渐停止发育的同时,排卵的功能也逐渐下降直至丧失,伴随而来的就是孕激素和雌激素的逐渐下降[5]。尽管绝经后卵巢间质和肾上腺皮质尚能分泌雄激素(可转化为雌激素),但其补充作用无法改变雌激素下降的大局[6]。雌激素下降对骨骼的一个极其重要的影响就是容易引起骨质疏松,骨质疏松的发病过程较为缓慢,多发生于老年人群中[7]。相关资料显示,将近1/3的45岁以上妇女,均存在不同程度的骨质疏松,>75岁的则患病率升至90%以上[8]。骨质疏松常常表现为腰背痛、身长缩短、驼背以及骨折、呼吸功能下降,所引起的腰背痛在仰卧或者坐位时可有所缓解,站立时和夜间加重[9]。
生化测定 篇9
由于生化需氧量的测定要通过估计其BOD5值大小确定是否稀释、接种、稀释倍数为多少等来进行测定, 因而其结果不仅受水体有机物含量、溶解氧影响, 还受稀释水、取样体积、稀释倍数等的影响, 特别是稀释倍数影响较大, 如果加入标样, 其稀释倍数就会发生很大改变, 测定过程极为复杂, 测定结果也不一定准确, 因此在日常的样品分析过程中, 一般不要求做加标测定。为配合省站“水环境常规监测项目质量控制研究”, 特作此实验。
1 实验内容及具体要求
1.1 实验内容:
全程序空白和空白加标、标准样品和标准样品加标。
1.2具体要求:
数据不少于7组, 不能一天内完成测试7组数据, 至少测试3天;做2个空白加标, 其中一个的加标参考量按检出限 (2.0mg/L) 的3~4倍加入, 另一个按加标参考量按检出限的5~6倍加入;做2个标准样品加标, 其中一个的加标参考量按检出量的0.5倍加入, 另一个按加标参考量按检出量的1倍加入。
2实验方法
采用稀释与接种法 (GB/T 7488—1987) 。
3 实验仪器及试剂
3.1 仪器
恒温培养箱 (20±1℃) 、10L细口玻璃瓶、1000L量筒、玻璃搅棒、容积约300m L并带有磨口玻璃塞及钟形口的溶解氧瓶、虹吸管。
3.2 试剂
硫酸镁溶液、氯化钙溶液、氯化铁溶液、磷酸盐缓冲溶液、接种水及接种稀释水 (临用现配) , 各溶液配制方法参照《水和废水监测分析方法 (第四版) 》生化需氧量稀释接种法中配制方法;国家有证标准物质 (107±8 mg/L) 。
4 操作步骤
4.1 不经稀释水样的测定
对溶解氧含量高、有机物含量较少的样品如空白及空白加标 (1) , 可直接采用虹吸法将室温下混匀的水样转移入两个溶解氧瓶内, 转移过程中应注意不使气泡产生。其中一瓶随即测定溶解氧, 另一瓶瓶口进行水封后放入培养箱, 在20℃±1℃培养5d, 测定其溶解氧, 5d前后二者溶解氧之差即为BOD5值, 以氧的mg/L表示。
4.2 需经稀释水样的测定
有机物含量较高的样品, 需用接种稀释水将其稀释后再培养测定, 以保证其中有机物得到充分的分解。稀释时应根据实践经验, 大体估计其BOD5值, 选择适宜的稀释倍数, 稀释程度应使培养过程中所消耗的溶解氧大于2 mg/L, 而剩余溶解氧在1 mg/L以上。为避免水样酸碱性及有毒物等干扰, 使测定结果真实可靠, 本实验所需水样均采用标样配制而成。
按照选定的稀释比例, 用虹吸法沿筒壁先引入部分接种稀释水于1000 m L量筒中, 加入需要量的均匀水样, 再引入接种稀释水至需要量, 用带有橡胶板的玻璃棒小心上下搅匀, 搅动过程中应防止气泡产生, 然后按不经稀释水样的测定相同的操作步骤进行装瓶、测定5d前后溶解氧。同时用接种稀释水按相同方法做空白实验。
5 数据结果及可靠性检验
5.1 数据结果
5.2 可靠性检验
5.2.1 异常值检验
为判断所得数据的可靠性, 分别将各组所测数据从小到大排列, 记为X1、X2…X7, 指定α=1%, 进行Dixon双侧检验, 找出是否有异常值。其计算公式为D/=r7/= (x2-x1) / (x6-x1) 、D=r7= (x7-x6) / (x7-x2) 。各D及D/计算值如下:
查表得D~0.99 (7) =0.680, 各D及D/均小于D~0.99 (7) , 故各组数据均未检出高低端异常值, 因而所有测得数据在进行平均值、误差等计算中无需剔除。
5.2.2 准确度检验
准确度用以度量分析结果与真值之间的符合程度, 决定着分析结果的可靠性, 用绝对误差和相对误差表示。根据水质监测实验室质量控制指标———水样测定值的准确度允许差指标, BOD5浓度在3~100 mg/l时, 室内相对误差RE%≤±20%, 将各组测得数据最低值和最高值的相对误差分别记为RE%、RE/%通过计算各组数据的RE%并与之进行比较, 以判断所测数据的准确性。计算公式为:RE%=绝对误差/真值×100%= (测定值-真值) /真值×100%, 各RE%及RE/%计算值如下:
各组数据的相对误差RE%均小于±20%, 均在允许范围内, 说明所测数据较为准确。
通过异常值和准确度检验, 说明所测数据比较可靠, 由此得出的结论也具有可信性。
5.3 加标回收率计算
在测试样品中加入一定量标准物质测定其回收率是目前实验室常用的准确度评价方法之一, 将各组测得数据最低值和最高值的回收率分别记为P、P/, 运用公式P= (加标试样测定值-试样测定值) /加标量×100%进行计算。
6 结论
6.1 空白加标量为检出限的3~4倍, 空白加标回收率在99.4%~109.9%之间, 平均加标回收率为104.3%;加标量为检出限的5~6倍, 空白加标回收率在93.4%~105.6%之间, 平均加标回收率为99.1%。
6.2 标样加标量为检出量的0.5倍加入, 加标回收率在126.2%~142.0%之间, 平均加标回收率为131.8%;加标参考量按检出量的1倍加入, 加标回收率在83.6%~114.5%之间, 平均加标回收率为101.9%。
6.3 由以上实验结果可以看出, 空白加标量为检出限的3~4或5~6倍时加标回收率变化不大, 说明空白加标回收率受加标量的影响不大;标样加标量分别为检出量的0.5倍、1倍时加标回收率变化较大, 说明标样加标回收率受加标量的影响较大, 加标量为检出量的1倍时加标回收率较为理想。
参考文献
[1]《水和废水监测分析方法》编委会.水和废水监测分析方法 (第四版) [M].北京:中国环境科学出版社, 2002.
[2]云南省环境监测总站.“水环境常规监测项目质量控制研究”实验室分析注意事项.