抗炎免疫（共4篇）
抗炎免疫 篇1
板党为桔梗科党参属植物的干燥根, 也称“板桥党参” ( 因其生长在有“中国硒都”之称的湖北恩施板桥境内) , 简称“板党” (简称BCPA) 。研究表明, 板党有清除体内活性氧, 减少膜脂过氧化, 减少MDA的产生, 提高SOD、CAT的活力等药理作用[1]。本研究主要目的在于研究板党的抗炎及免疫作用, 为其临床应用和资源的开发提供实验依据。
1实验材料
1.1试剂和仪器
醋酸泼尼松由三九同达药业有限公司生产; 2, 4二硝基氯苯 (DNCB) 由上海试剂厂生产, 氢化可的松由扬州制药厂提供;角叉菜胶为Sigma产品。751型紫外分光光度计;DL-50型超级恒温器, TDL-5型低速台式离心机;TG328A型电子分析天平; RE-52型旋转蒸发器。
1.2实验动物
大鼠70只, 体重 (126.2±21.7) g, 昆明种小鼠120只, 体重 (19.1±2.1) g, 由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供, 常规饲养。
1.3板党提取物的制备
板党由恩施州中药材生产GAP (质量管理规范) 示范基地提供。板党醇提液:板党粗粉经乙醇回流提取3次后制成1g/mL醇提取液。板党水提液:板党水煎煮3次后, 过滤浓缩成1g/mL溶液。
2实验方法
2.1小鼠耳肿胀抑制实验[2]
将40只昆明种小鼠随机分为4组, 给药组分别ip水提液1.5g/kg和3.5g/kg, 阳性药组ip氢化可的松2.0mg/kg, 对照组ip等量生理盐水。给药40min后, 将每只小鼠右耳内外双侧均匀涂巴豆油致炎液0.05mL, 左耳作对照, 1h后处死并剪下双耳, 打孔器 (6mm) 取耳片, 分别精密称重, 计算抑制率。
2.2角叉菜胶致大鼠足肿胀实验 (参考文献[2,3] )
大鼠30只, 随机分成3组, 给药组分别ip醇提液1.5g/kg和3.5g/kg, 对照组ip等量生理盐水。40min后, 将1%角叉菜胶溶液0.15mL注入右后肢脚掌皮下, 用足容积测量器测量大鼠右后肢踝关节以下容积并记录致炎前后容积。
2.3大鼠棉球肉芽肿实验 (参考文献[2,4] )
大鼠40只, 随机分为4组, 乙醚浅麻, 手术第2天醇提液组和水提液组分别ip 0.5g/kg、 1.5g/kg, 阳性药组ip氢化可的松2.0mg/kg, 对照组ip等量生理盐水, 1次/d, 连用4天, 第5天处死大鼠, 将无菌棉球及肉芽组织取出, 置于60℃烤箱内进行干燥, 然后精密称重, 对肉芽组织重量及抑制率进行计算。
2.4小鼠碳粒廓清实验[5]
将40只昆明种小鼠, 随机分成4组, 给药组ig水提液20g/kg和40g/kg, 阳性药组ig醋酸泼尼松15mg/kg, 对照组ig等体积的生理盐水, 连用4天, 在最后一次给药1h后, 鼠尾iv印度墨水15mL/㎏, 分别在1min、6min时从小鼠眼静脉丛处吸取血液25μL, 用2.5mL 0.1%Na2CO3溶液进行溶解, 于650nm测定吸光度。采血后将小鼠立刻处死, 摘取其肝、脾脏, 称湿重, 按公式计算廓清指数K值和吞噬指数α值。
2.5DNCB致小鼠迟发型超敏反应实验[5]
将昆明种小鼠40只随机分成4组, 给药组ig水提液20g/㎏和40g/㎏, 阳性药组ig醋酸泼尼松15mg/kg, 对照组ig等体积的生理盐水, 颈背部sc7%DNCB丙酮溶液25μL致敏。不间断给药8天后, 用同一溶液45μL涂于右耳廓两面进行攻击, 将左耳廓用作对照, 24h后, 将其双耳剪下, 用6mm打孔器取耳片, 精确称重, 记录差值作为迟发型超敏反应的强度, 计算抑制率。
2.6数据分析
采用SPSS11.0分析软件处理实验数据。
3实验结果
(1) 板党水提液对巴豆油致小鼠耳肿胀的影响 (表1) 。
注:*p<0.05; **p<0.01。
(2) 板党醇提液对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响 (表2) 。
(3) 板党提取物对大鼠棉球肉芽肿的影响 (表3) 。
(4) 板党水提液对小鼠碳粒廓清功能的影响 (表4) 。
注:*p<0.05;**p<0.01。
注:*p<0.05;**p<0.01。
注:*p<0.05;**p<0.01。
(5) 板党水提液对DNCB致小鼠迟发型超敏反应的影响 (表5) 。
4讨论
炎症是机体组织受损伤时所发生的一系列保护性应答, 以局部血管为中心, 典型特征是红、肿、热、痛和功能障碍, 可参与清除异物和修补组织等。实验表明板党有较强的抗炎和免疫调节作用, 其抑制作用随剂量的增加而增强, 还能够显著抑制异物所致大鼠炎症的肉芽增生。板党水提液可提高小鼠碳粒廓清K值及α值, 表明能增强单核巨噬细胞的吞噬功能, 能明显抑制2, 4二硝基氯苯引起的小鼠迟发型超敏反应, 这可能与抑制了T淋巴细胞增殖成致敏淋巴细胞有关。富硒板党抗炎和免疫调节作用是否与根中含硒量也有一定的关系, 还有待于进一步深入研究。
注:*p<0.05;**p<0.01。
摘要：目的:探讨恩施地区板桥党参的抗炎和免疫作用。方法:抗炎实验采用巴豆油致小鼠耳廓肿胀等常规抗炎模型;免疫实验采用对小鼠体内碳粒廓清功能影响等方法。结果:板党提取物可明显抑制巴豆油致小鼠耳廊肿胀及角叉菜胶引起的大鼠足跖肿胀, 能显著抑制大鼠棉球肉芽肿的增重及2, 4二硝基氯苯 (DNCB) 致小鼠迟发型超敏反应 (DTH) , 增强吞噬功能。结论:板党有明显的抗炎和免疫调节作用。
关键词：板党,抗炎作用,免疫功能
参考文献
[1]肖本见, 陈国栋, 兰宗平.富硒板党地上部分对小鼠益智和低氧/复氧损伤的保护作用的研究[J].中药材, 2005, 28 (8) :688-690.
[2]H GERHARD VOGEL编, 杜冠华译.药理学实验指南—新药发现和药理学评价[M].北京:科学出版社, 2001:535, 536, 544, 583.
[3]徐叔云, 卞如濂, 陈修, 等.药理实验方法[M].第1版.北京:人民卫生出版社, 1982:934-934, 945-945.
[4]Li Y K.Methologyin Pharmacological Study on Chinese Ma-teria Medica[M].Shanghai:Shanghai Science ang TechnologyPress, 1991:155.
[5]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版社, 1993:271.
抗炎免疫 篇2
板青颗粒是治疗和预防畜禽温热性疾病的常用方剂。兽药生产厂家众多,临床应用广泛,如治疗猪流行性感冒、家禽温和型感冒等,疫苗免疫前添加板青颗粒能够提高抗体效价和群体抗体整齐度。但是一直缺乏现代药理学方面的研究资料。本试验针对板青颗粒的主要功效,并结合现代药理学研究方法,研究了板青颗粒的抗炎、镇痛及对机体免疫力的影响,初步探讨了板青颗粒治疗温热性疾病的相关机制,旨在为板青颗粒在临床上的进一步应用提供现代药理学依据。
1 材料与方法
1.1 试验动物
SPF级昆明小鼠,体重为18~22 g,雌雄各半,许可证号为SCXK(京)2011-0004,购自斯贝福(北京)实验动物科技有限公司。
1.2 主要药品
板蓝根、大青叶,购自保定万宝堂药店;阿莫西林肠溶片(批号为141008),购自沈阳奥吉娜药业有限公司。
1.3 主要试剂
大鼠抗小鼠CD4+(FITC)、大鼠抗小鼠CD8+(PE),购自Biolegend公司;伊文思兰,购自上海江莱生物科技有限公司;冰醋酸、二甲苯,购自天津市瑞金特化学品有限公司;印度墨水,购自北京索莱宝科技有限公司。
1.4 主要仪器
流式细胞仪(型号为NAVIOS),美国beckmancoulter公司生产;酶标仪(型号为UV9100),北京瑞利分析仪器公司生产;紫外双束分光光度计(型号为UV1705),购自岛津有限公司。
1.5 小鼠耳廓二甲苯致炎试验
取健康小鼠50只,随机分为5组,即A组为空白对照组、B组为板青颗粒低剂量组(5 g/kg)、C组为板青颗粒中剂量组(10 g/kg)、D组为板青颗粒高剂量组(20 g/kg)、E组为阳性对照组(阿司匹林0.5 g/kg),每组10只。连续灌胃3 d,空白对照组同步灌胃等量纯净水。末次给药1 h后,取50μL二甲苯均匀涂抹小鼠右耳两面致炎,左耳作对照。1 h后颈椎脱臼处死小鼠,沿耳廓基线剪下双耳,以直径为8 mm的打孔器于左右两耳相同部位冲出耳片,称重,两耳质量差值为肿胀度,各组与空白对照组比较,并进行t检验,同时计算肿胀抑制率[6]。计算公式:肿胀抑制率=(空白对照组肿胀度-给药组肿胀度)/空白对照肿胀度×100%。
1.6 小鼠腹腔毛细血管通透性试验
取健康小鼠50只,随机分为5组,即A组为空白对照组,B组为板青颗粒低剂量组(5 g/kg)、C组为板青颗粒中剂量组(10 g/kg)、D组为板青颗粒高剂量组(20 g/kg)、E组为阳性对照组(阿司匹林0.5 g/kg),每组10只。连续灌胃3 d,空白对照组同步灌胃等量纯净水。末次给药后1小时尾静脉注射1%伊文思兰生理盐水溶液0.01 mg/g,然后腹腔注射0.6%冰醋酸0.01 mg/g;20 min后脱臼处死小鼠,腹腔注射生理盐水3.0 m L,轻柔腹部;取腹腔液2.0 m L,4 000 r/min离心15 min;取上清液于590 nm波长处测定吸光度(OD)值,比较各试验组与空白对照组的OD值并进行t检验[7]。
1.7 小鼠扭体试验
取健康小鼠50只,随机分为5组,即A组为空白对照组、B组为板青颗粒低剂量组(5 g/kg)、C组为板青颗粒中剂量组(10 g/kg)、D组为板青颗粒高剂量组(20 g/kg)、E组为阳性对照组(阿司匹林0.5 g/kg),每组10只。末次给药后1小时于腹腔注射0.7%冰醋酸0.01 m L/g,记录小鼠开始扭体时间及15 min内扭体次数[8],并计算各药镇痛百分率及第一次扭体时间延长率。计算公式:镇痛百分率=(空白对照组扭体次数-给药组扭体次数)/空白对照组扭体次数×100%;第一次扭体时间延长率=(给药组第一次扭体时间-空白对照组第一次扭体时间)/空白对照组第一次扭体时间×100%,各组与空白对照组比较,并进行t检验。
1.8 小鼠碳粒廓清率试验
取健康小鼠40只,随机分为4组,即A组为空白对照组、B组为板青颗粒低剂量组(5 g/kg)、C组为板青颗粒中剂量组(10 g/kg)、D组为板青颗粒高剂量组(20 g/kg),每组10只。连续灌胃10 d,空白对照组同步灌胃等量纯净水。各组于末次给药后24小时时,按体重0.01 m L/g剂量给小鼠尾静脉注射1∶5比例稀释的碳素墨汁,立即计时。注射后2分钟(T1)、10分钟(T2)用微量吸管分别从小鼠框后静脉丛取血20μL。将取得的20μL血溶于2 m L 0.1%Na2CO3溶液中摇匀,并在650 nm波长处比色,测定OD值。根据测得的OD值(A1和A2)计算廓清指数(K)和校正廓清指数(α)。计算公式:,各组与空白对照组比较,并进行t检验。
1.9 小鼠血清NK细胞活性检测
取健康小鼠40只,随机分为4组,即A组为空白对照组、B组为板青颗粒低剂量组(5 g/kg)、C组为板青颗粒中剂量组(10 g/kg)、D组为板青颗粒高剂量组(20 g/kg),每组10只。空白对照组同步灌胃等量纯净水,连续灌胃10 d。末次给药后次日,眼球取血,采用ELISA方法测定小鼠血清NK细胞活性。
1.10小鼠外周血T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+检测
取健康小鼠40只,随机分为4组,即A组为空白对照组、B组为板青颗粒低剂量组(5 g/kg)、C组为板青颗粒中剂量组(10 g/kg)、D组为板青颗粒高剂量组(20 g/kg),每组10只。连续灌胃10 d,空白对照组同步灌胃等量纯净水。末次给药后次日,无菌抽取小鼠静脉血1 m L,用K3EDTA抗凝,采用流式细胞仪测定CD4+、CD8+T淋巴细胞数量。
2 结果与分析
2.1 板青颗粒对小鼠耳肿胀的影响
结果见表1。
注:与空白对照组比较,数据肩标*表示差异显著(P<0.05),**表示差异极显著(P<0.01)。
由表1可知:与空白对照组比较,板青颗粒低、中剂量组的肿胀度差异显著(P<0.05);高剂量组的肿胀度差异极显著(P<0.01)。板青颗粒组随着剂量的增加,对小鼠的耳肿胀抑制率逐渐增强,显示出明显的剂量-效应关系。表明板青颗粒能够明显抑制二甲苯所致的小鼠耳肿胀,抗炎作用显著且呈剂量依赖性。
2.2 板青颗粒对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响
结果见图1。
注:A组为空白对照组,B组为板青颗粒低剂量组,C组为板青颗粒中剂量组,D组为板青颗粒高剂量组,E组为阳性对照组;与A组比较,*表示差异显著(P<0.05),**表示差异极显著(P<0.01)。
由图1可知:板青颗粒低剂量组与空白对照组比较,差异不显著,没有统计学意义;板青颗粒中剂量组与空白对照组比较,差异显著(P<0.05);板青颗粒高剂量组、阳性对照组与空白对照组比较,差异极显著(P<0.01)。表明板青颗粒能够显著降低小鼠腹腔毛细血管通透性,抗炎作用显著且呈剂量依赖性。
2.3 板青颗粒对小鼠扭体反应的影响
结果见表2。
注:与空白对照组比较,数据肩标*表示差异显著(P<0.05),**表示差异极显著(P<0.01)。
由表2可知:板青颗粒低、中、高剂量组与空白对照组比较,扭体次数存在极显著差异(P<0.01);板青颗粒中、高剂量组组与空白对照组比较,第一次扭体时间存在极显著差异(P<0.01)。表明板青颗粒具有明显镇痛作用,并具有一定的剂量依赖性。
2.4 板青颗粒对小鼠碳粒廓清率的影响
结果见图2。
注:A组为空白对照组,B组为板青颗粒低剂量组,C组为板青颗粒中剂量组,D组为板青颗粒高剂量组。
由图2可知:应用板青颗粒后各组校正廓清指数与空白对照组比较均差异不显著,说明板青颗粒对小鼠单核细胞吞噬功能的影响不显著。
2.5 板青颗粒对小鼠血清NK细胞活性的影响
结果见图3。
注:A组为空白对照组,B组为板青颗粒低剂量组,C组为板青颗粒中剂量组,D组为板青颗粒高剂量组;与A组比较,*表示差异显著(P<0.05),**表示差异极显著(P<0.01)。
由图3可知,板青颗粒中剂量组与空白对照组比较差异极显著(P<0.01),板青颗粒高剂量组与空白对照组比较差异显著(P<0.05)。说明板青颗粒能够提高小鼠NK细胞活性,其中板青颗粒中剂量组效果最佳。
2.6 板青颗粒对小鼠外周血T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+的影响
结果见图4和288页彩图5。
注:A组为空白对照组,B组为板青颗粒低剂量组,C组为板青颗粒中剂量组,D组为板青颗粒高剂量组;与A组比较,*表示差异显著(P<0.05),**表示差异极显著(P<0.01)。
由图4和288页彩图5可知,板青颗粒低、中、高剂量组与空白对照组比较,CD4+/CD8+的比值显著升高,其中板青颗粒低、中剂量组差异极显著(P<0.01)。说明板青颗粒能够调节小鼠T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+的比值,具有提高小鼠细胞免疫功能作用。
3 讨论
本试验结果表明,板青颗粒对二甲苯引起的炎症反应有明显的抑制作用,可显著降低腹腔毛细血管通透性,具有较好的镇痛和增强细胞免疫功能的作用。板青颗粒抑制小鼠耳肿胀和降低毛细血管通透性的抗炎机制可能与抑制渗出物或组织水肿液中组胺、5-羟色胺等炎性介质的释放和减少毛细血管血浆蛋白渗出量,起到消肿的抗炎作用有关[9,10]。板青颗粒镇痛与抗炎机制也相关,疼痛是炎症的主要局部症状,炎症反应时释放的炎症介质如缓激肽等均有致痛作用,且前列腺素可增强这些物质的致痛作用。扭体法是筛选非甾体类抗炎药镇痛作用的一种敏感、简便、重复性好的方法[11]。醋酸引起的侵蚀性伤害性反应可能由腹腔p H值降低而直接刺激传入神经和炎症介质合成共同作用导致[12]。研究发现,板青颗粒在一定剂量范围内,对醋酸致小鼠扭体反应有良好的抑制作用,这可能与腹腔内毛细血管收缩、血管通透性增强,加速组胺、α-干扰素(TNF-α)等致炎因子释放有关[13]。板青颗粒调节机体免疫力主要表现为促进免疫细胞活性。应用板青颗粒后,小鼠体内NK细胞活性和外周血T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+比值显著提升[14,15],说明板青颗粒对机体免疫调节有促进作用。
板青颗粒是中兽医临床上用于治疗风热感冒、咽喉肿痛、热病发斑等温热性疾病的常用方剂,具有清热解毒、凉血的作用。由本试验结果可知,板青颗粒具有的抗炎、镇痛、提高免疫力的作用,但其具体的抗炎机制还需进一步研究。
注:图中数值为外周血T淋巴细胞亚群悬液CD4+T淋巴细胞与CD8+T淋巴细胞表达的比值。
摘要：为了研究板青颗粒的抗炎镇痛作用及其对免疫功能的影响,试验采用二甲苯小鼠耳廓肿胀法、冰醋酸小鼠腹腔注射法、小鼠扭体测数法、碳粒廓清法、流式细胞测数法等对其进行了研究。结果表明:板青颗粒可显著抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀,降低小鼠腹腔毛细血管通透性;能够延长第一次扭体时间,减少扭体次数;并能够提高NK细胞活性,升高外周血CD+4/CD+8比值。说明板青颗粒具有抗炎镇痛的作用,同时可以调节机体的免疫系统,并能够提高机体免疫功能。
抗炎免疫 篇3
1 三七的抗炎作用
始载三七的《本草纲目》中记载,“甘,微苦,温,无毒。止血,散血,定痛。金刃箭伤,跌扑杖疮,血出不止者,嚼烂涂,或为末掺之,其血即止。亦主吐血,衄血,下血,血痢,崩中,经水不止,产后恶血不下,血运,血痛,赤目疖肿处,咬蛇伤诸病”。根据这些记载,可以认为三七除具有止血作用,还具有抗炎作用,尤其是对炎症伴有血肿的急性期病症疗效确切。
三七对多种原因引起的血管通透性的增加有明显的抑制作用。王一菱等[1]的研究认为三七总皂甙通过抑制肥大细胞释放组织胺等活性物质,抗渗出,改变炎症早期的血管通透性而具抗炎作用。李淑惠等[2]发现三七叶皂甙剂量依赖性抑制角叉菜胶诱导大鼠气囊滑膜炎灌洗液中磷脂酶A2(PLA2)活性,降低灌洗液中前列环素E2(PGE2)含量,并同时降低灌洗液中白细胞数及蛋白含量,认为其具有良好的抗炎活性。陈剑鸿等[3]研究了三七总皂苷对内毒素损伤血管内皮细胞的炎症的抗炎作用,发现内毒素加三七总皂苷组与内毒素组相比,各指标均较内毒素组有不同程度降低,认为其具有抗炎作用。刘文娥等[4]建立恒河猴子宫内膜炎模型,探讨复方三七成分对恒河猴子宫内膜炎症所致异常出血,子宫内膜超微结构的影响。治疗组以复方三七成分灌胃治疗,模型组及空白对照组给予等量生理盐水,3个疗程后,在预测下一次月经来潮前1 d切取3组猴的子宫内膜,固定后置电镜下观察。结果电镜下空白组子宫内膜为正常分泌晚期图像;模型组间质内可见大量炎性细胞浸润,螺旋动脉扩张,内皮细胞线粒体广泛空泡样变;治疗组间质细胞有少量炎性细胞,螺旋动脉部分内皮细胞线粒体有空泡样变。认为复方三七成分可以促进螺旋动脉内皮细胞和平滑肌细胞的修复从而达到抗炎止血的作用。炎症因素可以明显促进泡沫细胞的生成,贾乙等[5]通过研究发现三七皂苷可通过其抗炎活性干预这一过程。在传统泡沫细胞形成模型基础上添加炎症刺激因素及三七皂苷,三七皂苷可以明显减少由炎症因素引起的脂质沉积的增加。
2 三七的免疫调节作用
2.1 三七的免疫增强作用
清代赵学敏《本草纲目拾遗》中说“三七补血第一”,认为三七有较强的补益功效。民间也多有以三七滋补的习惯。提示三七有一定的免疫增强的作用。
张文琦等[6]用纯化的三七根皂甙及叶皂甙给小鼠灌胃,连续7 d后,观察其对红细胞免疫功能的影响。结果表明三七皂甙能升高红细胞补体C3b受体花结率,提示其能增强机体红细胞免疫功能。周小玲等[7]研究发现三七能明显提高肺泡巨噬细胞及外周血中性粒细胞的吞噬率,降低外周血白细胞移行抑制指数,表明三七能提高大鼠的特异性和非特异性细胞免疫功能。孙云等[8]给D-半乳糖衰老模型小鼠连续灌服复方三七口服液,发现复方三七口服液能增加D-半乳糖实验性衰老模型小鼠脏器指数,加快碳粒廓清速率,增强淋巴细胞转化能力,明显提高血清超氧化物歧化酶水平并降低脂质过氧化物含量,提示复方三七口服液可增强免疫和抗氧化功能从而能延缓衰老。赵鹏等[9]以三七皂甙粉给小鼠连续灌胃后,显示三七皂甙能明显刺激小鼠的脾淋巴细胞增值、转化作用,促进小鼠迟发型变态反应作用,提高小鼠抗体生成细胞数,提高小鼠的血清溶血素水平,促进小鼠单核-巨噬细胞吞噬作用,增强小鼠的单核-腹腔巨噬细胞吞噬能力,提高小鼠NK细胞活性,说明三七皂甙具有增强免疫力作用。江源等[10]采用环磷酰胺皮下注射制作小鼠免疫低下模型,应用三七皂苷Rg1进行预防与治疗,观察其对免疫低下小鼠模型外周血白细胞总数、淋巴细胞百分率、脾指数、胸腺指数及刀豆球蛋白A(ConA)诱导的脾细胞增殖能力的影响,结果发现采用三七皂苷Rg1治疗或预先采用三七皂苷Rg1注射均可明显增强小鼠的免疫能力,对环磷酰胺有一定的拮抗作用。肖幸丰等[11]采用血清药理学方法观察脂多糖诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖、白细胞介素(IL)-2分泌,结果三七总皂苷含药血清能明显促进小鼠脾淋巴细胞增殖,表明对小鼠免疫系统具有一定的选择性调节作用,主要增强T细胞功能。
2.2 三七的免疫抑制作用
免疫系统的过度激活尤其是自身免疫的发生会导致多系统的损伤。三七可以通过抑制相应器官组织中炎性因子的含量抑制免疫反应对靶器官的损伤。
王勇等[12]研究提示烫伤后可致机体免疫紊乱,伤后早期巨噬细胞分泌过多的肿瘤坏死因子(TNF-α)、IL-1,体外运用三七总皂苷可抑制核因子(NF-κB)活性,干预NF-κB信号通路,降低TNF-α mRNA,从而控制烫伤后炎症反应。张林波等[13]建立帕金森病大鼠模型,采用三七皂甙Rg1纹状体内注射,检测处理后大鼠的神经行为、纹状体内炎性因子含量变化及脾细胞增殖反应。结果显示三七皂甙Rg1可明显减少模型大鼠的神经旋转行为,降低纹状体损毁侧TNF-α、IL-1β和IL-6含量,同时对脾细胞有增殖效应。结果表明三七皂甙Rg1可调整机体的免疫功能,降低免疫炎性反应对多巴胺能神经元的损伤。刘雅等[14]观察兔食饵性动脉粥样硬化(AS)形成过程中血清中IL-6、C-反应蛋白(CRP)、循环免疫复合物(CIC)水平的变化和三七总皂苷对这些免疫因子及动脉粥样斑块面积大小的影响。结果显示,AS模型组IL-6、CRP及CIC水平明显高于正常对照组;三七总皂苷组各时相点IL-6、CRP及 CIC水平显著低于AS模型组,主动脉斑块面积也较AS组明显降低;IL-6、CRP和CIC水平均与AS斑块面积呈显著正相关性。结果表明三七总皂苷可以通过抗炎和免疫抑制的途径发挥抗AS的作用。丁青等[15]研究了三七在子宫内膜细胞炎症过程中对NF-κBp65表达和活性变化及其TNF-α、IL-1β含量变化的影响。结果发现子宫内膜细胞炎症过程中细胞核内出现NF-κBp65的高水平表达,TNF-α、IL-1β的含量随炎症发展而逐渐上升,三七复合有效成分能有效降低炎症因子TNF-α、IL-1β的含量,降低NF-κBp65的转录及蛋白表达量,抑制NF-κBp65的核因子DNA结合活性。姚茹冰等[16,17]研究提示三七总皂苷可能通过抑制佐剂性关节炎大鼠血清和腹腔巨噬细胞分泌的炎症细胞因子TNF-α、IL-1β,对关节炎发挥治疗作用,并且与地塞米松相比,无抑制大鼠生长发育和减轻大鼠体质量的作用。
3 小 结
抗炎免疫 篇4
关键词：复方一枝蒿片,抗炎作用,免疫功能
复方一枝蒿片为江苏黄河药业股份有限公司研制、生产的新型中草药成品, 其主要成分为一枝蒿、板蓝根和大青叶, 按照维医理论, 其具有清除“乃孜来”, 解毒利咽, 用于“乃孜来”所致的感冒、发烧、咽喉肿痛的功效;在中医学中其具有解表祛风、凉血解毒的疗效。常用于邪毒所致的感冒发烧、咽喉肿痛、病毒性感冒见上述证候者。相对于复方一枝蒿颗粒, 该产品能够克服颗粒剂用辅料用量大、服用需用开水冲服、口味不佳等缺点。为了进一步开发复方一枝蒿片, 笔者对其进行了二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验, 毛细血管通透性试验以及对T淋巴细胞增殖影响的实验研究, 考察复方一枝蒿片对抗炎和免疫功能的影响, 以期为复方一枝蒿片的临床应用进一步提供理论依据和药理学参考。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器
光栅分光光度计 (722) :上海第三分析仪器厂;台式高速冷冻离心机 (5417R) :艾本德中国有限公司 (Eppendorf China Limited) ;电子分析天平 (AG-204) :瑞士Mettler Toledo公司;电热恒温培养箱 (DNP-9082) :上海精宏实验设备有限公司;酶标仪 (550) :BIO-RAD公司;倒置显微镜 (CKX31) :Olympus公司;洁净工作台 (SW-CJ) :上海屹明净化设备有限公司。
1.1.2 试药
抗病毒颗粒:四川光大制药有限公司;复方一枝蒿片:江苏黄河药业股份有限公司 (实验前用灭菌蒸馏水溶解配成所需浓度) ;二甲苯:国药集团化学试剂有限公司;冰醋酸:国药集团化学试剂有限公司;伊文思蓝, 西安化学试剂厂;Con A:Worthington公司;RPMI1640:美国英杰生命技术有限公司。
1.1.3动物
Balb/c小鼠300只, 雌雄兼半, 6~7周龄, 购自上海斯莱克动物公司。
1.2 方法
1.2.1 二甲苯致小鼠耳肿胀的研究
取6~7周龄Balb/c小鼠50只, 雌雄兼半, 随机分为空白对照组、模型组、复方一枝蒿片1.5、2.5、5.0 g/kg剂量组、抗病毒颗粒组, 空白对照组及模型组灌胃 (ig) 等容积蒸馏水, 其余各组灌胃 (ig) 受试药物, 1次/d, 连续5 d, 末次给药1.5 h后, 在小鼠右耳廓两面均匀涂抹20μl二甲苯, 左耳作对照[1]。30 min后脱颈处死小鼠, 用直径6 mm打孔器分别在左右耳对称部位打下圆形耳片, 精密称重, 计算肿胀度和肿胀抑制率[2]。肿胀度=左右耳片质量之差, 肿胀抑制率= (对照组肿胀度-绐药组肿胀度) /对照组肿胀度×100%。
1.2.2小鼠腹腔毛细血管通透性的研究
取6~7周龄Balb/c小鼠50只, 雌雄兼半, 分组、剂量设置及给药时间同2.1, 于末次给药后1.5 h, 每鼠尾静脉注入0.5%的伊文思蓝生理盐水溶液10 ml/kg, 并立即腹腔注射 (ip) 0.6%冰醋酸0.2 ml/只[2]。15 min后脱颈处死, 用6 ml生理盐水反复抽吸冲洗腹腔, 吸出冲洗液3 ml, 1000 r/min。离心10 min, 取上清液于590 nm处测定吸光度 (OD590) , 计算药物对炎性渗出的抑制率[3]。抑制率= (对照组OD590-给药组OD590) /对照组OD590×100%。
1.2.3 小鼠T和B淋巴细胞增殖作用的影响
1.2.3. 1 小鼠脾细胞悬液制备
用乙醚麻醉Balb/c小鼠, 昏迷后用大头钉将小鼠固定在无菌平板上, 用无菌剪刀、镊子剪开小鼠的腹部皮肤, 打开腹腔, 取脾脏;200目铜网研磨小鼠脾脏, 并同时用含RPMI1640 (完全) 培养基冲洗;1000 r/min常温下离心10 min, 弃上清;细胞沉淀用2 ml的红细胞裂解液悬浮, 吹打5 min使其充分地裂解, 加入8 ml的GKN缓冲液 (Na Cl 8 g, KCl 0.4 g, Na2HPO4·2H2O 1.77 g, Na H2PO4·H2O 0.69 g, 葡萄糖2 g, 酚红0.01 g, 溶于1000 ml双蒸水中) 使反应终止;1000 r/min常温下离心10 min, 弃上清;加入RPMI1640培养基10 ml, 清洗2次;RPMI1640培养基10 ml悬浮, 血球计数板计数, 调整细胞密度为3×106Cells/ml[4]。
1.2.3. 2 T淋巴细胞增殖实验
按照3×106Cells/ml细胞密度将细胞悬液加在96孔板中培养, 每孔150μl, 除细胞对照组外各实验组分别加入Con A (40 mg/L) 50μl和50μl不同浓度的复方一枝蒿片药液 (质量浓度梯度分别为:20 000、10 000、5000、2500、1250、625、312 mg/L) 、抗病毒颗粒药液 (质量浓度梯度同复方一枝蒿片药液浓度梯度) , 细胞对照组加RPMI1640培养液100μl, Con A对照加RPMI1640培养液50μl, 每组4个复孔, 轻轻地混匀后, 置于5%CO2、37℃孵箱中培养24 h;每孔加MTT (5 mg/ml母液) 溶液10μl, 轻轻地混匀, 继续培养4 h[5]。
在倒置显微镜下定期地观察96孔板细胞, 当有清晰可见的紫色沉淀产生时, 每一孔中加入150μl的DMSO (dimethyl sulfoxide) , 随后轻轻地摇动96孔板, 并将96孔板在室温下 (黑暗) 放置15 min;用多孔酶标测定仪于波长570 nm处测定吸光值OD570。计算各浓度药液对T淋巴细胞增殖的抑制率。T淋巴细胞增殖抑制率= (ODCon A对照组-OD给药组) /ODCon A对照组×100%。
1.3 统计学处理
使用SPSS 17.0软件进行数据分析, 数据用 (±s) 表示, 组间比较采用t检验, P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响
与模型组比较, 复方一枝蒿片2.5、5.0 g/kg剂量组对二甲苯致小鼠耳肿胀均有明显的抑制作用 (P<0.01) , 抗病毒颗粒组对二甲苯致小鼠耳肿胀有明显的抑制作用 (P<0.05) , 见表1。
*与模型组比较, P<0.01;#与模型组比较, P<0.05
2.2 小鼠腹腔毛细血管通透性研究
与模型组比较, 复方一枝蒿片1.5、2.5、5.0 g/kg剂量组及抗病毒颗粒组均可显著抑制冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的增高作用 (P<0.01或P<0.05) , 复方一枝蒿片的抑制作用随着浓度的增高而增长, 表明复方一枝蒿片的抑制作用具有浓度依赖性。见表2。
2.3 对小鼠T淋巴细胞增殖作用的研究
Con A诱导的对照组吸光度较细胞对照组有显著提高 (P<0.01) ;Con A诱导后各给药组较Con A对照组, 阳性对照组抗病毒颗粒在312~20 000 mg/L吸光度有显著降低 (P<0.01) ;供试品复方一枝蒿片在312~20 000 mg/L吸光度显著降低 (P<0.05) , 且随着浓度的增大对Con A诱导的T淋巴细胞增殖的抑制作用逐渐增强。见表3。
*与模型组比较, P<0.01;#与模型组比较, P<0.05
*与细胞对照组比较, P<0.05;#与Con A对照组比较, P<0.05;△与Con A对照组比较, P<0.01
3 讨论
复方一枝蒿片在维医和中医临床中主要用于防治感冒, 且具有良好的效果。其组方中一枝蒿总黄酮其有抗甲型流感病毒作用和抗菌、抗炎、调节机体免疫功能作用[6];大青叶水提物具有广谱抗菌、抗炎、免疫增强作用, 其有效单体可有效的抑制流感病毒在MDCK细胞中的增殖[7];板蓝根腺苷成分具有抗流感病毒、抗炎作用, 酸性和碱性部位可调节免疫功能[8,9]。
本课题组在前期研究工作中显示复方一枝蒿片剂能够明显抑制和杀灭金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌, 对乙型溶血性链球菌有一定的抑制和杀灭作用, 高剂量的复方一枝蒿片能使变形杆菌感染小鼠的死亡率显著下降, 表明复方一枝蒿片对感染的小鼠具有明显的保护作用, 在此基础上本文又对复方一枝蒿片的抗炎、免疫功能的影响进行实验研究, 研究结果显示, 复方一枝蒿片具有抗二甲苯所致急性炎症作用和抗冰醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的炎性渗出作用;可抑制Con A诱导的T淋巴细胞增殖, 这些试验为复方一枝蒿片的临床用于感冒的防治提供了理论依据。
参考文献
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[2]刘循, 刘燕, 姚华, 等.复方一枝蒿颗粒对小鼠抗炎和免疫功能的影响[J].中国实验方剂学杂志, 2012, 18 (13) :185-189.
[3]于瑞和, 刘丹娅.抗感利咽喷雾剂镇咳、抗炎、免疫增强作用的实验研究[J].中国中医药科技, 2011, 18 (5) :396.
[4]傅海英, 孙玉华, 胡正海, 等.复方一枝蒿颗粒的抗炎、抗菌作用和对免疫功能的影响[J].中药药理与临床, 2007, 23 (2) :64.
[5]王敏, 刘旭平, 张建勤, 等.黄芩苷对小鼠T、B淋巴细胞增殖的影响[J].江西医学院学报, 2007, 47 (5) :17.
[6]雍建平, 阿吉艾克拜尔·艾萨.一枝蒿酮酸酰胺衍生物的合成和抗A3, B型流感病毒和单纯Ⅰ, Ⅱ型疱疹病毒活性研究[J].有机化学, 2008, 10 (28) :180.
[7]刘钊, 杨占秋, 肖红.中药大青叶有效单体抗流感病毒作用[J].中南民族大学学报, 2009, 28 (3) :4.
[8]王建明, 潘晓云.板蓝根制剂中腺苷含量与抗炎作用相关性研究[J].时珍国医国药, 2011, 22 (5) :1269.