生物黄酮

生物黄酮（精选11篇）

生物黄酮 篇1

狼毒( Stellerachamaejasme) 又称断肠草、馒头花、 燕子花等,是瑞香科狼毒属多年生草本植物,广泛分布于我国东北各省及西南地区海拔2 300 ~ 4 200 m向阳山坡草地[1],为了与大戟科大戟属狼毒( Euphorbiafischeriana) 相区别,常称为瑞香狼毒。瑞香狼毒中含有香豆素、黄酮、甾醇类成分,是重要的药用植物, 也是严重危害畜牧业发展的有毒植物[2]。瑞香狼毒味苦、性平,具有袪痰、散结、杀虫和抗肿瘤的作用,在传统中医中被逐步开发利用[3]; 但是,瑞香狼毒是一种有毒植物,误食可引起家畜中毒甚至死亡,而且由于其根系发达、生命力顽强,导致牧草大幅减产,给草原畜牧业造成巨大损失。瑞香狼毒的大量生长被认为是草原( 场) 退化的标志。近年来,随着我国天然草原( 场) 退化不断加剧,瑞香狼毒顺势扩张,仅青海、甘肃和内蒙古3个省区分布面积在182. 81万hm2以上[4,5],对畜牧业的危害程度与日俱增,如何有效防控瑞香狼毒,降低其所致经济损失,并对其加以合理利用在当前显得尤为必要和迫切。

瑞香狼毒在西藏多个地市均有分布,其中那曲、 林芝( 波密) 、阿里( 日土、噶尔、普兰) 及昌都等地区危害较为严重。面对瑞香狼毒的危害,人们趋利避害,积极利用,早在1 300多年前瑞香狼毒根已被用来造纸,狼毒纸驱虫避鼠、久不变色[6]。随着有毒植物利用的多样化,也给瑞香狼毒的防控与利用诸多启发。王敏等[7,8]研究表明,瑞香狼毒总黄酮和总生物碱提取物均具有较强的抗肿瘤作用。由于不同生长阶段、生长环境和放牧强度下瑞香狼毒总黄酮含量可能不同[9,10],因此本研究对西藏瑞香狼毒不同物候期地上部分全草总黄酮和总生物碱含量进行测定,旨在为西藏瑞香狼毒药用开发与综合利用提供基础资料。

1材料与方法

1. 1植物样品

瑞香狼毒花前期、花期和花果期地上部分全草, 分别于2013年7—9月份采集于西藏自治区当雄县 ( 30°28'58″ ~ 72″N,91°06'28″ ~ 74″E) ,将植物样品阴干、粉碎、过40目筛,保存备用。

1.2主要仪器和试剂

电子分析天平( FA3204B) ,上海精科天美贸易有限公司生产; 旋转蒸发仪( EV311) ,北京莱伯泰科仪品有限公司生产; 荧光分光光度计( 930A) ,上海三科仪器有限公司生产; 电热恒温水浴锅 ( DK - 98 ⅡA) ,天津市泰斯特仪器有限公司生产; 数控超声波清洗器( KQ - 500DE) ,昆山市超声仪器有限公司生产; 芦丁标准品,上海融禾医药科技有限公司生产; 氢氧化钠、无水三氯化铝、无水甲醇、高氯酸、冰醋酸、氯仿、正丁醇等均为市售分析纯。

1.3方法

1. 3. 1荧光分光光度法测定总黄酮含量标准品溶液的制备: 精密称取10 mg芦丁,用10 m L无水甲醇溶解制成1 mg /m L标准贮备液。分别取贮备液5, 10,15,20,25 μL置于5 m L比色管中,加0. 01% 三氯化铝甲醇溶液0. 8 m L,以无水甲醇定容至刻度,摇匀,配制成系列标准工作溶液。

样品贮备溶液的制备: 准确称取0. 5 g样品置于带塞锥形瓶中,加入50 m L无水甲醇室温静置过夜, 超声提取40 min过滤,滤液加无 水甲醇定 容至50 m L,作样品贮备液。

列线性回归方程: 芦丁系列标准工作溶液配制完毕20 min后,在EX435 nm、EM490 nm条件下测定其荧光强度,列出线性回归方程。

样品溶液总黄酮含量测定: 样品溶液配制好20 min后,置工作曲线相同条件下测吸光度,代入线性回归方程即可求得样品溶液总黄酮含量。

1. 3. 2非水滴定法测定总生物碱含量总生物碱制备: 精密称取样品粉末50 g,工业乙醇热回流提取总浸膏。总浸膏转入蒸发皿,60 ℃蒸干后用1 mol/L稀盐酸溶解过滤,滤液碱性氯仿萃取得碱性氯仿部分生物碱。余液继续用碱性正丁醇萃取得碱性正丁醇部分生物碱,合并两部分生物碱作为总生物碱。

滴定: 总生物碱用30 m L无水冰醋酸溶解于锥形瓶中,滴加结晶紫指示剂4滴,以高氯酸标准液滴定至蓝色为终点,记录高氯酸体积V1; 同时做空白对照,记录消耗高氯酸体积V0。计算公式: 总生物碱 ( % ) = ( V1- V0) M/50 × 100% 。式中M为瑞香狼毒所含主要生物碱毫克当量数,计算样品总生物碱含量。

2结果(见表1)与分析

%

由表1可见,瑞香狼毒不同生长阶段中花果期总黄酮和总生物碱含量均最高,其次为花期,以花前期瑞香狼毒中总黄酮和总生物碱含量最低。

3讨论

瑞香狼毒通常以根茎为药用部分,研究表明,瑞香狼毒叶中总黄酮含量显著高于根部; 而且西藏高寒草地植被易破坏难修复,采挖瑞香狼毒根部对植被损害较大,开发利用意义不大。因此,本研究以地上部分总黄酮和总生物碱含量为研究对象,采用荧光分光光度法测定总黄酮含量简便易行,精确性较好[11]。 总生物碱含量测定时,以碱性氯仿和正丁醇两部分生物碱作为总生物碱,与一般以碱性氯仿部分生物碱作为总生物碱的作法不同,主要考虑到碱性正丁醇提取部分可能含有生物碱。虽然这种方法提取的总生物碱会混入更多杂质,但对滴定结果影响并不大。

毕凌霄等[9]研究表明,瑞香狼毒5— 9月份总黄酮含量呈先降低后升高的趋势,与本研究结果一致。 本研究中不同物候期总黄酮含量均显著偏低,主要由于西藏特殊的地理环境及植物采集地放牧强度较低所致。因此,采集当地放牧强度相对较高草场瑞香狼毒测定其总黄酮含量,并进行差异性分析是解决此问题的最佳方法。

4结论

西藏瑞香狼毒总黄酮和总生物碱含量花果期 > 花期 > 花前期。花果期西藏瑞香狼毒地上部分全草总黄酮和总生物碱含量相对较高,是药用开发利用的最佳时期,但对于总黄酮和总生物碱含量是否达到药用开发利用限值有待进一步研究。

摘要：为了研究西藏瑞香狼毒的药用开发与综合利用,试验采用荧光分光光度法和非水滴定法对西藏天然草原主要有毒植物瑞香狼毒不同物候期地上部分全草总黄酮和总生物碱含量进行测定。结果表明:瑞香狼毒花前期、花期和花果期总黄酮含量分别为0.410%、0.445%和0.471%;总生物碱含量分别为0.255%、0.308%和0.368%。说明瑞香狼毒总黄酮和总生物碱含量花果期>花期>花前期,花果期是瑞香狼毒药用开发的较好时期。

关键词：西藏,瑞香狼毒,总黄酮,总生物碱,含量测定

参考文献

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[2]纪亚君.青海天然草地有毒植物瑞香狼毒及其综合治理[J].青海畜牧兽医杂志,2003,33(4):35-36.

[3]窦洪举,李锋,侯勇跃.狼毒及瑞香狼毒的研究进展[J].畜牧与饲料科学,2013,34(11):43-47.

[4]王瑞亭.瑞香狼毒地上部分二氯甲烷提取物化学成分的研究[D].呼和浩特:内蒙古大学,2010.

[5]侯秀敏.青海天然草地主要毒草现状及防除对策[J].青海畜牧兽医杂志,2001,31(2):30-31.

[6]孙颖.传统瑞香狼毒藏纸造纸工艺研究现状[J].兰台世界,2013(5):70-71.

[7]王敏,贾正平,马骏,等.瑞香狼毒总黄酮提取物的抗肿瘤作用[J].中国中药杂志,2005,30(8):603-606.

[8]王敏,王学习,贾正平,等.瑞香狼毒总生物碱的抗肿瘤活性和机理研究[J].中药材,2010,33(12):1919-1922.

[9]毕凌霄,廖蓉苏.不同生长期瑞香狼毒和牛心朴子总黄酮含量研究[J].时珍国医国药,2010,21(10):2505-2507.

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[11]罗喜荣,黄静,杨军,等.荧光分光光度法测定瑞香狼毒中总黄酮的含量[J].安徽农业科学,2012,40(17):9260-9261.

生物黄酮 篇2

关键词：银杏；总黄酮；花粉；发酵饮料；含量测定；测定方法

中图分类号： TS201.2 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2015）10-0371-03

银杏是我国特有的珍稀植物，被称为植物界的“活化石”。银杏树浑身是宝，其果、叶、苗具有重要的食用、药用、观赏价值。目前，国内外利用银杏叶、银杏果提取物开发出多种药品、保健品。但是，关于银杏花粉的研究比较少，国内学者大多仅从生物学角度研究其形态特征、生长发育、基本化学成分、人工授粉等，关于银杏花粉产品开发及活性物质研究还比较欠缺。笔者以银杏花粉为原料，采用益生菌发酵技术，研制出银杏花粉益生菌发酵饮料，采用高效液相色谱法测定银杏花粉原料及發酵饮料中总黄酮的含量，旨在为开发利用银杏资源提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

银杏花粉采自山东省郯城县，干燥过100目筛。银杏花粉发酵饮料由笔者所在实验室自行研制。槲皮素、山柰酚、异鼠李素对照品（纯度≥98%）均购自山东省中药化学对照品/标准品工程技术研究中心。 甲醇为色谱级；浓盐酸、磷酸等均为分析纯。

1.2 仪器与设备

Mettler AE240电子分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司），1260高效液相色谱仪（美国Agilent公司）， Agilent 6520 Accurate-Mass Q-TOF LC/MS液相色谱-质谱联用系统（美国Agilent公司）， Milli-Q超纯水系统（美国Millipore公司），UV-160型紫外可见分光光度计（日本岛津公司），BK-120F 型超声波清洗器（济南巴克超声波科技有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 待测样品制备 参照王国霞等的方法[1]制备银杏花粉样品。精确吸取一定量的银杏花粉发酵饮料，加入一定量的浓盐酸、10 mL 100%甲醇，总体积为25 mL，闭塞后在天平上精确称质量，加人沸水浴中水解一定时间，快速冷却，再次称质量并用100%甲醇补足失质量，摇匀并过滤，用0.45 μm滤膜过滤滤液，作为供试品溶液。

1.3.2 对照品溶液制备 分别精确称取干燥至恒质量的槲皮素、山柰酚、异鼠李素对照品，加100%甲醇制成浓度分别为74、56、38 μg/mL的混标溶液，再用0.45 μm滤膜过滤，即为对照品储备液。将储备液稀释不同倍数各进样10 μL，按色谱条件测定，以峰面积和浓度进行线性回归，绘制标准曲线。

1.3.3 液相色谱检测条件 ZORBAX Eclipse XDB-C18柱，4.6 mm×150 mm，5 μm；甲醇-0.2%磷酸水溶液（50 ∶ 50）为流动相，流速：1.0 mL/min；检测波长：360 nm，柱温：35 ℃，进样量：10 μL。

1.3.4 样品测定及总黄酮计算 分别吸取各样品溶液10 μL，注入液相色谱仪。将色谱图中3种苷元的峰面积代入回归方程进行外标法定量，求出样品溶液浓度，再换算成样品含量。每个样品3次重复，取平均值。总黄酮含量计算公式[2]如下：总黄酮含量=槲皮素含量×2.51+山柰酚含量×2.64+异鼠李素含量×2.39。

1.3.5 质谱鉴定条件 检测模式：正离子模式；离子源：ESI（+）；雾化气温度：350 ℃；干燥气流速：10.0 L/min；雾化气压：30 psi（206.85 kPa）；毛细管电压：3 500 V；碎裂电压：175 V；Skimmer电压：65 V；八极射频电压：750 V；离子质量扫描范围：100～3 000 m/z。

2 结果与分析

2.1 标准曲线及相关系数

将混合对照品储备液稀释不同倍数各进样10 μL，以峰面积（Y）与溶液的浓度（X）进行线性回归分析，得到回归方程和相关系数（r2），分别为：

槲皮素：Y=38.102X-13.101，r2=0.999 9；

山柰酚：Y=37.515X+1.308 4，r2=0.999 7；

异鼠李素：Y=92.980X-34.230，r2=0.999 9。

混合对照品溶液的色谱图见图1，此色谱条件下3种对照品在13 min内得到良好的分离。

2.2 银杏花粉3种苷元的质谱鉴定结果

采用高效液相色谱法检测样品中的黄酮苷元，银杏花粉及其发酵饮料的色谱图分别如图2、图3所示，在混合对照品相同保留时间处均有出峰。

采用液质联用技术对银杏花粉样品中与对照品相同保留时间的组分进行分析，质谱图见图4。图4-A组分的保留时间与槲皮素对照品一致，[M+H]+分子量为303.049 6，与槲皮素对照品一致，故鉴定为槲皮素。图4-B组分的保留时间与山柰酚对照品一致，[M+H]+分子量为287.055 2，与山柰酚对照品一致，故鉴定为山柰酚。图4-C组分的保留时间与异鼠李素对照品一致，[M+H]+分子量为317.065 3，与异鼠李素对照品一致，故鉴定为异鼠李素。

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2.3 银杏花粉发酵饮料水解酸度、水解时间选择

选取3份银杏花粉发酵饮料，采用不同的盐酸浓度、时间进行供试品溶液制备，结果如表1所示。

张平安等在对银杏叶及其提取物进行酸水解时发现，用1.5 mol/L盐酸水解效果最好[2]。王国霞等采用25 mL水解液（V甲醇 ∶ V25%盐酸=4 ∶ 1）水解银杏花粉，水解时间为40 min，结果表明，银杏花粉郯城02的槲皮素、山柰酚、异鼠李素含量分别为0.33、7.83、0.10 mg/g，总黄酮含量为21.74 mg/g[1]。盐酸浓度过低时水解不充分，浓度过高时苷元容易降解；将发酵饮料冷冻干燥后测得的总黄酮为94.59 μg/mL，发酵饮料直接水解测定的总黄酮含量只有39.83 μg/mL。可见，发酵饮料直接加水解液水解的方法导致测定结果偏低。原因是发酵饮料中90%以上是水，而银杏花粉总黄酮的含量较低，加入25 mL水解液（V甲醇 ∶ V25%盐酸=4 ∶ 1）后，盐酸浓度被进一步稀释， 导致发酵饮料中的黄酮水解不充分。如果将发酵饮料冷冻干燥后测定固然结果比较准确，但是耗时耗力，成本较高。如表1所示，在一定量的银杏花粉发酵饮料中加入一定量的浓盐酸、10 mL 100%甲醇，总体积为25 mL，25 mL体系中的盐酸浓度分别为0.60、0.36 mol/L，分别水解30、40 min，结果表明，13.75 mL发酵饮料中加1.25 mL浓盐酸、10 mL 100%甲醇，水解40 min的总黄酮含量最高，为93.04 μg/mL，与发酵饮料冻干粉的测定结果非常接近。可见，采用此方法对包括银杏花粉发酵饮料在内的银杏花粉稀溶液進行水解，操作方法比较简单，同时测定结果比较准确。

2.4 高效液相色谱法与分光光度计法的比较

采用分光光度计测定总黄酮含量主要有紫外分光光度计法[3]、比色法[4] 2种方法。3种方法测定银杏花粉及其发酵饮料总黄酮含量见表2、表3。

由表2、表3可知，采用紫外分光光度计法测定银杏花粉的总黄酮含量是采用比色法的3.7～3.9倍，是采用高效液相色谱法的2.3～2.5倍。采用紫外分光光度计法测定发酵饮料的总黄酮含量是比色法的4.37倍，是高效液相色谱法的6.27倍。用乙酸乙酯提取发酵饮料后，采用3种方法测定的总黄酮含量均明显下降。紫外分光光度计法是利用黄酮类化合物在200～400 nm区域内有很强的吸收带，在258 nm处有1个最大吸收峰，在360 nm处也有1个肩峰。这使得利用紫外吸收作为评价黄酮含量指标成为可能。该方法简单，但易受底液、干扰组分、溶液浑浊、吸收池不干净的影响。从发酵饮料乙酸乙酯提取前后的巨大差异可知，此方法准确度最差，非黄酮组分对结果影响很大，导致测定结果偏高。比色法是当前测定总黄酮使用最为广泛的方法，以芸香苷为标准品，利用黄酮类化合物官能团中的3-或5-OH及邻二酚羟基与Al3+络合，形成黄色物质，再加入NaOH生成红色，在510 nm处有最大吸收峰，但此方法结果易受底液、干扰组分等的影响。郭亚健等研究结果显示，黄酮类成分黄芩苷、黄芩素、香蒲新苷、山柰酚、槲皮素、橙皮苷在500 nm左右处无吸收或吸收较弱，非黄酮类成分咖啡酸、原儿茶醛、绿原酸、原儿茶酸在波长500 nm左右处有最大吸收或吸收较强，香草醛、阿魏酸等也有一定吸收[5]。此方法专属性不强，有局限性，准确性较差。从液相检测结果可知，银杏花粉水解后的苷元主要是山柰酚，还有少量槲皮素、异鼠李素。本研究结果表明，山柰酚对照品在500 nm左右处几乎无吸收，槲皮素也只有较弱吸收，故比色法测定银杏花粉时结果偏低。由于发酵饮料成分比较复杂，颜色偏深，影响比色法测定，导致结果偏高。比色法不适合用于银杏花粉及其发酵饮料总黄酮含量的测定。采用高效液相色谱法测定银杏花粉发酵饮料总黄酮，用乙酸乙酯提取后的总黄酮含量下降较多，主要是因为提取不充分以及分离、回收提取液时的损耗较大。又因为采用高效液相色谱法时杂质组分及色泽对发酵饮料总黄酮测定结果几乎无影响，故只要将银杏花粉发酵饮料直接水解即可上机测定。

3 结论与讨论

本研究结果表明，紫外分光光度计法、比色法均不适用于银杏花粉及其发酵饮料的总黄酮测定，高效液相色谱法专一性强，杂质和色泽影响小，准确度、精确度高，适用于银杏花粉及其发酵饮料的总黄酮含量测定。采用高效液相色谱-质谱联用技术对水解液的3种苷元进行鉴定，3种苷元分别为槲皮素、山柰酚、异鼠李素。银杏花粉及其发酵饮料应采用不同的酸水解方式。发酵饮料的酸水解宜直接添加浓盐酸，以便提高水解液体系中的盐酸浓度，使水解更加充分。同时注意盐酸添加量也不宜过高，一方面过高盐酸含量会造成黄酮苷元的降解，另一方面也会变相稀释银杏花粉发酵饮料，导致其中低浓度的苷元不易检出。采用25 mL水解液体系盐酸浓度0.6 mol/L水解40 min比较合适。采用高效液相色谱法检测了银杏花粉及其发酵饮料的总黄酮含量。银杏花粉的总黄酮含量平均为21.40 mg/g，发酵饮料的总黄酮含量为93.04 μg/mL，此含量比培养液灭菌和接种前略低，主要原因可能是灭菌时的高温降解以及微生物生物转化的影响。

参考文献：

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生物黄酮 篇3

目前国内外己有不少关于黄酮羧酸类化合物的合成及生物活性的研究报道。黄酮羧酸类化合物具有特殊的药理活性, 如抗癌、解痉、抑制胃酸分泌、抗过敏、抗炎、抗病毒等活性[3,4,5,6,7]。因此, 本文对近年黄酮羧酸类化合物的合成和生物活性进行了总结和概述, 为进一步深入研究提供资料。

1 黄酮羧酸化合物的合成方法与生物活性

1.1 黄酮-3-羧酸类化合物的合成与生物活性

Hormi等合成了一系列黄酮-3-羧酸化合物, 合成路线如图1, 该路线由于反应原料不易得, 该路线并未得到广泛的推广[8]。

Cushman等合成了一系列黄酮-3-羧酸化合物, 并报道了它们的体外蛋白质酪氨酸激酶抑制活性, 为后续开发酪氨酸激酶抑制剂作为抗癌药物, 提供了思路, 合成路线如图2[9]。

1.2 黄酮-5-羧酸类化合物的合成与生物活性

黄酮-5-羧酸类化合物报道较少, Isola等报道了其合成方法[10]。

Nematollahi等通过硅分子建模和使用分子对接方法, 设计构建了5, 7-二羧基黄酮, 并作为幽门螺杆菌β-羟酰-酰基载体蛋白脱水酶抑制剂研究抗幽门螺杆菌活性[11]。

1.3 黄酮-6-羧酸类化合物的合成与生物活性

黄酮-6-羧酸衍生物报道较多, 其中也不乏一些黄酮二羧酸衍生物, 如黄酮-6, 8-二羧酸衍生物、黄酮-6, 4'-二羧酸衍生物等, 他们的合成方法都比较类似[5,6,7]。

黄酮-6-羧酸衍生物具有优良的生物活性, Doria等研究了黄酮-6-羧酸衍生物对鼠产生的亲细胞性抗体的抑制作用, 研究表明黄酮-6-羧酸衍生物具有抗过敏作用[5];Jurg等研究发现6-羧基黄酮衍生物具有抑制组胺引起的胃酸分泌过多等作用[4];Zwaagstra等研究发现6-羧基黄酮衍生物对哮喘发病过程中的炎症介质白三烯D4有抑制作用[6];温辉梁等研究了许多黄酮-6-羧酸化合物的合成、结构与抑菌活性[7]。

1.4 黄酮-7-羧酸类化合物的合成与生物活性

Gesson等合成了黄酮-7-羧酸类化合物, 并研究了其对白细胞介素-1 (IL-1) 、白细胞介素-6 (IL-6) 和肿瘤坏死因子 (TNF-a) 分泌物的抑制作用, 研究表明黄酮-7-羧酸类化合物对IL-1、IL-6具有很强的抑制作用, 可以用于治疗人畜的风湿类疾病, 如关节炎和类风湿性关节炎[12]。

1.5 黄酮-8-羧酸类化合物的合成与生物活性

黄酮-8-羧酸类化合物、黄酮-2'-羧酸类化合物和黄酮-4'-羧酸类化合物的合成类似黄酮-6-羧酸衍生物。

黄酮-8-羧酸类化合物对哮喘发病过程中的炎症介质白三烯D4也有抑制作用, 此外Inoue等研究了一系列3-甲基黄酮-8-羧酸衍生物的合成及活性, 结果表明该类物质具有扩张冠状血管, 增加冠脉血流量等活性, 可用来治疗心绞痛, 预防心肌梗塞的突发等冠心病。另外它还是M胆碱受体阻断药的中间体, 通过静脉注射治疗呼吸系统、泌尿系统及胃肠系统的各种疾病[13]。

1.6 黄酮-2'-羧酸类化合物的生物活性

Valenti等合成了一系列黄酮-2'-羧酸衍生物, 同时研究了它们的抗癌活性, 其中7-氟-黄酮-2'-羧酸能够显著的增加巨噬细胞的酶溶解性[3]。

另外, Shudo合成了一系列新的黄酮羧酸化合物, 并研究了其诱导恶性细胞 (如肿瘤细胞和白血病细胞) 的分化作用, 其中部分化合物的活性比维甲酸 (视黄酸) 的活性更强[14]。

1.7 黄酮-4'-羧酸类化合物的生物活性

Kagechika等的研究结果表明大多数黄酮-4'-羧酸衍生物是白血病细胞HL-60细胞分化的潜在诱导因素, 具有类维生素A的作用[15]。

Creuzet等对4'-羧基黄酮衍生物进行了活性活性, 研究表明该类化合物可用于预防及治疗由糖尿病引发的眼睛和神经方面的并发症, 作利尿剂效果也很好, 并且在治疗皮肤病及癌症等方面有潜在的用途[16]。

2 结论

本文对近些年来化学工作者们在合成黄酮羧酸类化合物这一领域里所取得的进展大致进行了报道。目前, 该类化合物在大量化学工作者的不断努力下已经得到了长足的发展, 发掘了许多具有多样生物活性的化合物。但是, 还没有该类化合物用于临床研究, 有待进一步开发, 合成更多多样性、生物活性更突出的黄酮羧酸类化合物。

摘要：天然的黄酮类化合物一般不具有羧基, 但在黄酮类化合物上引入羧基, 便具有特殊的生理活性, 这大大丰富了黄酮类化合物的家族, 拓展了黄酮类化合物的应用范围及提高黄酮类化合物的生理活性。文章综述了黄酮羧酸类化合物的合成方法及其生理活性进展。

大豆异黄酮技术研工艺研究分析 篇4

大豆异黄酮技术研工艺研究分析

尽管传统溶剂提取法具有耗时耗能，消耗大量溶剂，经济与环境成本均很高等不足，但由于操作简单，人员设备要求不高，目前依然在工业生产中普遍使用，但在传统提取方法中，活性成分的纯化方法，活性成分种类以及成分的化学变化等应成为进一步研究的重点。超声提取与传统工艺加热回流提取相比，具有省时、低温节能、提取率和产品纯度高的优点，但是超声波作用能断开碳—碳键，从而产生活性较强的自由基，破坏活性成分，降低提取物的稳定性。微波辅助提取法选择性高、操作时间短、溶剂消耗量少，但设备泄漏的微波辐射会给人体造成慢性损伤以及工业化还存在困难等问题需进一步研究。超临界CO2,流体萃取具有提取率高、产品纯度好、流程简单、能耗低、无有机溶剂残留等优点，但对设备要求较高。

大豆异黄酮是存在于大豆等豆科植物中的一类重要生物活性物质。近来研究发现，大豆异黄酮具有抗癌、防治动脉硬化、抗炎等多种药理作用。从大豆异黄酮中分离得到的染料木素，其结构与17-β雌二醇的结构相似，能与内源性雌激素受体结合，发挥雌激素效应，同时又没有雌二醇的副作用，被人们称为植物雌激素。大豆异黄酮是一种混合物，主要为两类：苷元及其葡萄糖苷。近年来国内外学者对大豆异黄酮的提取工艺进行了大量的研究，主要集中在传统溶剂加热提取，超声及微波辅助提取等。

服用大豆异黄酮，剂量有讲究 篇5

对于围绝经期综合征和Ⅰ型骨质疏松的治疗，传统上多采用雌激素或类似制剂，即所谓雌激素替代疗法。这一疗法对妇女的围绝经期综合征、骨质疏松及心血管疾病等的防治收到了肯定的效果，但长期使用雌激素可增加某些癌症的发病风险，如子宫癌、乳腺癌等。因此，目前主张用植物雌激素，即大豆异黄酮进行治疗。研究表明，大豆异黄酮可以发挥雌激素样的多种保健作用，但不具有雌激素的促癌作用和雌性化作用，不论男女，都可以用它来防治骨质疏松，降低血液中胆固醇含量，尤其是防癌和抗癌。

大豆异黄酮大多为天然大豆提取物，在市售产品种，它的有效成分含量一般以其三种游离型苷元的含量标明，即金雀异黄酮或染料木素、大豆苷元和大豆黄素。产品中以含前两种多，含后一种少，不过它们的吸收和在体内的作用相仿。譬如有的产品标明每丸含金雀异黄酮60毫克，而有的产品标明每丸含大豆苷元60毫克，它们的作用其实差不多。

不过，有的产品并不是用上述有效成分标明，而是用大豆异黄酮浸膏含量标明，每丸含大豆异黄酮可达150毫克。事实上，浸膏中上述三种苷元成分只占40%，也就是60毫克。还有一些产品中，除大豆异黄酮外，还包含了类黄酮，有时含量分别标明，有时只标明两者的总含量。对此，消费者购买时应予以注意。

生物黄酮 篇6

异黄酮衍生物2702是通过化学合成得到一种新的化合物。经初步筛选,具有一定的抗心肌缺氧缺血作用,有一定研发价值,该化合物在合成过程中使用了有机溶剂乙醇,乙酸乙酯,本实验对其剂残有机溶剂进行检查,建立了质控条件。结果表明本法分离度高、灵敏、准确而且方便。可用于异黄酮衍生物2702有机溶剂残留量的检测。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

Agilent6820气相色谱仪型(FID检测器,美国安捷伦公司), 样品(99.84%、自制),二甲基亚砜、乙醇、乙酸乙酯、甲苯(AR,北京化工厂)。

1.2 气相色谱条件

色谱柱:DB-WAX(30 m×0.45 mm×0.85 μm)(固定相为键合交联聚乙二醇)石英毛细管柱;程序升温:起始温度为40℃,保持5 min,然后以40℃/min的速率升至205℃,保持8 min。气化室温度为225℃,FID检测器为245℃;载气为高纯氮,流量为2.8 mL/min,柱头压力为3.5psi,分流比为19∶1,空气:330 mL/min,氢气:34 mL/min,辅助气:22 mL/min。

1.3 标准溶液配制

1.3.1 内标溶液

精密量取甲苯3 μL,置50 mL量瓶中,加二甲基亚砜稀释至刻度,摇匀,作为内标贮备液。

1.3.2 对照品溶液

精密量取乙酸乙酯10 μL,乙醇8 μL置50 mL量瓶中,加二甲基亚砜稀释至刻度,摇匀,作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液和内标贮备液各1 mL,置10 mL量瓶中,加二甲基亚砜稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。

1.4 样品溶液的制备

取样品200 mg,精密称定,置10 mL量瓶中,精密量取内标储备液1.0 mL,加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度,摇匀,即得供试品溶液。

2 结果与讨论

2.1 系统适应性试验

在上述气相色谱条件下,取乙醇、乙酸乙酯及甲苯适量,用二甲基亚砜稀释进样,同法将空白溶剂(二甲基亚砜)进样,溶剂对测定没有干扰。且乙醇、乙酸乙酯、甲苯能达到完全分离,色谱柱理论塔板数按各峰计算均大于5 000。

样品气相色谱图通过与对照色谱图比较,将色谱逢进行归属,保留时间tR=5.6,6.4,7.9 min色谱峰分别为乙酸乙酯、乙醇、甲苯色谱峰。

2.2 线性关系考察

分别精密量取 0.1,0.4,0.7,1.0,2.0,5.0,7.0 mL 标准贮备液,置10 mL量瓶中,加内标溶液1.0 mL,用DMSO稀释至刻度,摇匀。精密量取上述溶液1 μL,注入气相色谱仪,记录色谱图,以各溶液浓度C(μg/mL)为横坐标,对应峰峰面积与甲苯(内标)对应峰峰面积的比值(Y)进行线性回归。乙醇,乙酸乙酯回归方程分别为:y=0.081C-0.076 1,r=0.999 8;y=0.077 9C-0.002 9,r=0.999 9 。结果表明:乙酸乙酯在1.80～89.90 μg/mL范围内呈良好的线性关系; 乙醇在1.25～87.50 μg/mL范围内呈良好的线性关系。

2.3 灵敏度检测

将乙醇、乙酸乙酯用二甲基亚砜逐步稀释,直到检测峰高为基线噪音的3倍为止,结果乙醇的最低检测限为0.13 ng,乙酸乙酯的最低检测限为0.17 ng;检测峰高为基线噪音的10倍时,乙醇最低定量限为0.40 ng,乙酸乙酯的最低定量限为0.56 ng。

2.4 精密度试验

取对照品溶液1 μL,连续进样6针,以峰面积比值计算RSD。结果6次进样所得乙酸乙酯,乙醇峰面积与内标峰面积比值的RSD分别为0.94%、3.04%。

2.5 加样回收率

取样品200 mg,精密称定,置10 mL量瓶中,加内标储备液1 mL,加DMSO溶解并稀释至刻度,摇匀,作为样品溶液,另取同批号样品9份,每份约200 mg,精密称定,置10 mL量瓶中,分别加对照品储备液0.8 mL ,1.0 mL,1.2 mL,每个浓度制备3份,分别加内标储备液1.0 mL,加DMSO溶解并稀释至刻度,摇匀,作为加样回收溶液。分别取上述两种溶液各1 μL,注入气相色谱仪,记录色谱图,按内标法计算。乙酸乙酯回收率为96.19%～103.40% ,RSD: 2.26%;乙醇回收率为98.15%～105.07%,RSD: 2.83%。

2.6 样品中乙醇、乙酸乙酯残留量测定

取三批样品各200 mg,精密称定,置10 mL量瓶中,加内标储备液1.0 mL,加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度,摇匀,即得供试品溶液;分别取供试品溶液和对照溶液各1 μL,注入气相色谱仪,按内标法以峰面积计算样品中有机溶剂残留量,三批样品中含乙酸乙酯0.21%～0.29%;含乙醇0.06%～0.12%,(乙酸乙酯、乙醇药典规定的浓度限度均为0.5%)[1,2]。

3 结 论

本实验采用GC色谱法对异黄酮衍生物2702中有机溶剂残留进行测定,残留溶剂和内标物能达到有效分离,所选溶剂和内标均不干扰测定,本文建立的方法专属性强,线性响应好,灵敏度高,精密度和准确度好,适用于本品有机溶剂残留量的测定,测定结果符合药典规定要求。

为了减小进样误差,试验采用内标法,在筛选的内标物中,二氯甲烷、甲苯均能与乙酸乙酯和乙醇有效分离,且二氯甲烷、甲苯均为药典规定的有机残留溶剂中的二类溶剂,为限制使用溶剂,该方法的建立可为这四种溶剂测定提供帮助。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典2005年版二部附录.北京:化学工业出版社,2005:20

沙棘——黄酮之家 篇7

类黄酮是黄色系统色素的统称, 它的植物性化学物质的种类很多, 大致超过4000种, 几乎在所有的植物中都有这种生物活性物质, 只不过含量高低有区别。

类黄酮根据化学结构的不同, 可分为黄酮醇、黄酮、儿茶素、黄烷酮、异黄酮、花色苷等。这些活性物质, 在沙棘中几乎都有, 而且含量不低, 每100g中国沙棘果实中类黄酮达885.4mg;西藏沙棘果实中的类黄酮含量更高, 每100g含类黄酮1104.7mg, 令人感到不可思议。

摘自:http://www.shaji.cn

葛根总黄酮提取工艺 篇8

1 材料与方法

1.1 一般材料。

现在有葛根若干, 芦丁试剂若干。欲采用以下仪器对其进行试验:恒温水浴锅一个, 紫外分光光度计一个。

1.2 方法。

1.2.1测定标准曲线方程的方法。黄酮类物质在碱性介质以及硝酸铝的作用反应后, 所生成的物质呈黄色, 可以使用紫外计进行定量, 测出所含黄酮类物质的多少。将芦丁从120摄氏度减压并干燥, 直至恒重, 然后用精密仪器进行测量, 取出10毫克芦丁标准品, 用乙醇含量为百分之九十五的溶液进行溶解。将其定容至10毫升容器中, 再量取2.5毫升的溶液, 放置于25毫升的容器中。用乙醇含量为百分之九十五的溶液进行稀释, 并定容, 得到每毫升100微克的标准芦丁溶液。分别量取不等量的标准芦丁溶液, 将它们分别置于20毫升的试管中, 用乙醇含量为百分之九十五的溶液分别补充, 直到满5毫升为止, 然后加入AL (NO2) 3含量为百分之十的溶液0.5毫升, 然后加入硝酸侣含量为百分之十的溶液0.5毫升, 将混合后的溶液摇匀, 并放置大约六分钟, 再加入氢氧化钠含量为百分之四的溶液4毫升, 将再次混合的溶液摇匀, 然后放置十五到二十分钟左右。用以上第一个样品当作空白样, 并在一定范围内扫描其他样品, 并在506纳米处测定出一系列吸收度, 可以得出线性回归方程为:吸光度A=0.018436*质量浓度C, r2=0.999535。1.2.2注定总黄酮的提取率计算方法。首先, 用粉碎机将葛根进行粉碎, 制成粉状葛根, 用精密仪器称取粉状葛根适量, 并用相应量的乙醇按照所需条件, 进行一定时间的浸泡, 并对其进行过滤, 最后得到一定量的黄色滤液, 对所得滤液的体积进行测量。在506纳米处, 用光度计测定出一系列吸光度, 最后得出黄酮质量的浓度公式为C=吸光度A/0.018436。1.2.3单因素的正交试验方法。a.溶剂体积分数因素。用精密仪器, 称取20目的葛根粉10克, 固液比为1:6, 分别加入乙醇含量为百分之百、百分之九十五、百分之七十五、百分之五十、百分之三十的溶液, 固定温度为70摄氏度, 浸提时间为1小时, 测定不同乙醇体积分数, 并计算在此体积分数下黄酮的浸提率。b.提取时间因素。用精密仪器, 称取20目的葛根粉5克, 固液比为1:6, 加入乙醇含量为百分之九十五的溶液, 固定温度为70摄氏度, 浸提时间分别控制在30、60、90、120、150分钟, 计算不同时间内的黄酮浸提率。c.溶剂量因素。用精密仪器, 称取20目的葛根粉5克, 固液比分别设为1:4、1:6、1:8、1:10、1:12, 并按比例加入乙醇含量为百分之九十五的溶液, 固定温度为70摄氏度, 浸提时间设为90分钟, 计算在不同固液比下的黄酮浸提率。d.提取温度因素。用精密仪器, 称取20目的葛根粉5克, 固液比设为1比10, 并按比例加入乙醇含量为百分之九十五的溶液, 固定温度分别设为40、50、60、70、80摄氏度, 浸提时间设为90分钟, 计算在不同温度下的黄酮浸提率。e.固体粒度因素。用精密仪器, 称取2地区粉状葛要粉, 将目数分别设为20、40、60、80、100目, 固液比设为1比12, 并按比例加入乙醇含量为百分之九十五的溶液, 固定温度设为70摄氏度, 浸提时间设为90分钟, 计算在不同固体粒度下的黄酮浸提率。

2 结果

经过试验, 可以发现, 总黄酮的提取率在不同因素下受到的影响大小也有所不同, 具体结果见表1至表5。从表1可知, 在乙醇体积分数的单独因素下, 体积分数越大, 总黄酮的提取率越高, 而一旦其体积分数超过95%, 提取率则会随着乙醇体积分数的不断升高而下降。从表2可知, 在提取时间的单独因素下, 提取时间越长, 总黄酮的提取率则越高, 而当提取时间延长至90分钟后, 提取率则不再随提取时间的延长而有明显的增加。从表3可知, 在固液比为单独因素下, 溶剂用量越大, 总黄酮的提取率则越高, 而当葛根溶解到一定程度后, 这里为1比10mg/ml, 再增加溶剂量, 提取率则不再发生任何变化。从表4可知, 在提取温度为单独因素下, 提取温度越高, 总黄酮的提取率越高, 而当提取温度达到一定程度后, 这里为60摄氏度, 提取率便会随着提取温度的升高而开始下降。从表5可知, 在固体粒度为单独因素下, 提取粒度越小, 总黄酮的提取率越高, 而当粒度达到80目后, 提取率已达到最大值, 之后提取率便会随着粒度的减小而减小。

3 讨论

提取温度、时间、体积分数、固液比以及固体颗粒度, 对总黄酮的浸提率都有一定的影响, 而影响度从大到小依次为:粒度、体积分数、固液比、提取温度、提取时间。

提取葛根总黄酮的最优条件为:提取温度控制在80摄氏度, 提取时间控制在120分钟, 体积分数控制在70%, 固液比控制为1:12, 固体粒度为80目。

摘要：目的:寻找出一种提取率更高更好的方法, 有效地提高葛根的利用价值。方法:以乙醇为主要溶剂, 使用浸提法对葛根进行总黄酮的提取, 主要对溶剂的体积分数、提取所需时间、提取所需温度、固液比以及粉粒度等因素进行考察, 并在单独的因素中采用正交试验, 找出能够提取葛根总黄酮的最佳工艺。结果:提取温度、时间、粉粒度、固液比以及乙醇的体积分数都是影响葛根总黄酮提取率的关键因素。结论:提取葛根总黄酮的最佳工艺为:将提取温度控制为80摄氏度, 提取时间控制为120分钟, 乙醇的体积分数控制在百分之十, 固液比控制为1:12, 粉料度控制为80目。

关键词：葛根,总黄酮,提取工艺,正交试验

参考文献

[1]肜霖, 朱巍, 程志昆, 谢超等.刺梨总黄酮的提取、纯化及其在卷烟中的应用[J].湖北农业科学, 2011, (6) :116-118.

生物黄酮 篇9

1. 实验材料

(1) 实验动物

20只昆明种雌性小白鼠, 由内蒙古额济纳旗实验动物研究中心提供许可证号:[SCIK (蒙2009-0001) ]。饲料为该中心提供的固体颗粒全价饲料, 自由饮用自来水。

(2) 化学试剂

葛根素淀粉剂, 由陕西省安康市禾烨生物工程有限公司提供, 批号为050703, 纯度为99.70%;

异黄酮淀粉剂, 由陕西省禾烨麦迪森植物药业有限公司提供;

(3) 试剂与药品

固定液、H.E染色液、各浓度的乙醇、透明液、二甲苯、冰蜡酸、软石蜡、硬石蜡、0.5%盐酸酒精等。

(4) 主要仪器设备

金诺TD5002电子天平

XSZ-D2型倒置生物显微镜, 日本OLYMPUS倒置生物显微镜, XSP-16A型解剖显微镜, 日本OLYMPUS电子读数分析天平、GC-911-γ-放射免疫计数器、回旋式组织切片机, 恒温箱, 普通手术器械等。

(5) 数据分析

实验结果用 (平均值±标准差) 表示;两个样本均数比较用t检验。

2. 实验方法

此次实验用了20只雌性小白鼠, 分为四组。分别为:对照组, 实验1组 (葛根素组) , 实验2组 (低剂量异黄酮组) , 实验3组 (高剂量异黄酮组) , 每组5只。一窝的小白鼠尽量分到各组, 以避免遗传因素的影响。

给药方法:适应性饲养一周后, 28日龄起开始用灌胃器灌胃给药, 每天一次, 连续3周 (21天) 。对照组给于0.2毫升蒸馏水 (0.5毫克/毫升相当于5毫克/千克) , 实验1组给于0.2毫升葛根素溶液 (0.5毫克/毫升相当于5毫克/千克) 。实验2组给于0.2毫升低剂量异黄酮溶液 (0.5毫克/毫升相当于5毫克/千克) , 实验3组给于0.2毫升高剂量异黄酮溶液 (1毫克/毫升相当于10毫克/千克) 。

(1) 取材

给药结束后, 即50日龄时, 将各组全部小白鼠眼动脉采血致死法致死, 将死后小白鼠进行解剖, 取下连带乳腺组是的皮肤, 放入福尔马林固定液中固定24小时, 之后剥离取下乳腺组织, 用电子分析天平称重, 记录并作比较研究观察。

(2) 材料的制备

小白鼠处死后, 取乳腺称重, 进行统计处理;一侧制作乳腺标本, 观察乳腺发育情况;另一侧则制作切片观察。

二、分析与讨论

1. 对照组与实验组50日龄小白鼠体重的比较影响

下面数据是对照组与实验组小白鼠体重增重的比较影响。

结果表明:对照组小白鼠体重与实验组之间无显著性差异 (P>0.05) ;而从图1来看实验2组和实验3组对小白鼠体重有促进作用。

注:肩标中大写字母为小白鼠体重在对照组与实验组之间的比较, 相同字母表示无显著 (P>0.05) , 不相同字母表示显著 (P<0.05) 。

2. 对照组与实验组对小白鼠乳腺重量的比较影响

本次实验中测量了给药数天后对其乳腺重量的比较影响。对照组小白鼠乳腺的重量与实验1组之间有显著性差异 (P<0.05) , 对照组小白鼠乳腺重量与试验2组和试验3组之间无显著性差异 (P>0.05) 。

注:肩标中大写字母为小白鼠乳腺重量在照组与实验组之间的比较, 相同字母表示无显著 (P>0.05) , 不相同字母表示显著 (P<0.05) 。

3. 对照组与实验组对乳腺导管横切面数目的比较影响

本次实验中检测了对照组与实验组小白鼠乳腺组织切片中乳腺导管横切面数目及分布情况, 以其结果比较来观察实验组对小白鼠对乳腺导管发育的影响。其中对照组小白鼠乳腺导管横切面数目与实验1组之间有显著性差异 (P<0.05) , 对照组小白鼠乳腺导管横切面数目与实验2组和实验3组之间无显著性差异 (P〉0.05) ;结果见表3。

注:肩标中大写字母为小白鼠乳腺导管在对照组与实验组之间的比较, 相同字母表示无显著 (P>0.05) , 不相同字母表示显著 (P<0.05) 。

三、讨论

乳腺的发育主要受内分泌系统的调控和神经系统的参与调节, 雌激素被确定具有增长雌性第二性器官的有丝分裂活性能力。雌激素在乳腺发育中起着关键作用, 尤其性成熟阶段乳腺导管生成有赖于雌激素的刺激, 雌激素可显著增加乳腺导管的发育。孕酮激素则是雌激素与孕激素协同作用, 促进乳腺小叶腺细胞发育的基础, 在青春期和妊娠期雌激素与孕激素协同刺激乳腺小叶腺细胞的发育, 可显著增加乳腺细胞的孕酮受体数目。而葛根素的结构与体内的雌激素相似, 可以起到模拟、干扰双向调节内分泌水平的生理生化作用, 乳腺的发育主要受雌激素和孕酮的调控。

乳腺发育主要受下丘脑、垂体神经内分泌系统的调控, 促性腺激素、性激素及生长激素可促进乳腺发育;与其有关的激素主要有雌激素 (E) 、孕激素 (P) 、GH、AOH、PRL, 在妊娠后期, PL也促进乳腺发育。其中E在性成熟期的乳腺发育中起着关键作用, 它可刺激乳腺导管生长, 显著增加乳腺细胞的孕酮受体数目, 为妊娠期大量增殖乳腺腺泡发育奠定基础;P和PRL促进乳腺腺泡的生长, GH的主要生物作用是通过调节机体生长和组织代谢加强PRL促进乳腺腺泡生长作用。

本次实验研究分析:试验1组和试验2组对小白鼠乳腺导管有显著促进作用, 而试验3组对乳腺导管的发育却有抑制作用。乳腺导管数目减少有可能是因为高雌激素水平者, 对机体表现为抗雌激素活性。

对照组小白鼠体重与实验组之间无显著性差异 (P>0.05) ;实验1组的结果可能主要是因为葛根素在小白鼠体内没能达到植物雌激素激动剂的作用浓度, 对动物机体生长没有积极效应;可能对小白鼠的骨骼生长发育和肌肉生长没能显现出促进作用。实验2组和实验3组提高了小白鼠体内雌激素生物活性, 发挥其植物雌激素样作用, 积极影响了小白鼠机体生长。由此可见, 5毫克/千克剂量的葛根素药液对小白鼠体重增重无明显影响。而异黄酮药液对小白鼠体重有明显的增重作用, 这可能是因为发挥了植物激素的作用。众多研究表明, 大豆异黄酮能促进动物体内养分的重新分配, 提高蛋白质合成效率, 减少腹脂沉积, 改善畜禽胴体瘦肉率。一般认为适量的异黄酮植物雌激素能够促进动物生长。

四、结论

夏桑菊胶囊总黄酮的测定 篇10

【关键词】夏桑菊胶囊;总黄酮,含量测定

【中图分类号】R714.22【文献标识码】B【文章编号】1007-8517(2009)10-0001-01

夏桑菊胶囊是中药复方制剂,由夏枯草、野菊花、桑叶组成^[1]。具有清肝明目,疏风散热的作用。目前有报道^[2～3]用高效液相色谱法测定熊果酸的含量,其检测波长206-215nm,与流动相甲醇的吸收波长相近,影响了结果的准确性,且成本相对较高。为了有效控制本品的质量,本文采用紫外分光光度法对夏桑菊胶囊中的总黄酮进行含量测定,结果满意。

1仪器与材料

1.1仪器HP-8452A紫外-可见分光光度仪(美国惠普公司);HP化学工作站。

1.2材料芦丁对照品(批号10080-200508)由中国药品生物制品检定所提供,夏桑菊胶囊由广州粤华药业有限公司提供,所用试剂均为AR级。

2方法与结果

2.1总黄酮含量测定^[4]

2.1.1对照品溶液的制备精密称取在120 ℃减压干燥至恒重的芦丁对照品50 mg,置25 ml量瓶中,加甲醇适量,置水浴上微热使溶解,放冷,加甲醇至刻度,摇匀。精密量取10 ml,置于100 ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得(0.2 mg/ml)。

2.1.2样品溶液的制备取本品内容物0.25 g,精密称定,置50 ml锥形瓶中,加甲醇25 m,精密称定。超声处理(功率250 W,频率20 kHz)30min,放冷,精密称定,取甲醇补足至超声处理前的重量,摇匀,过滤,精密量取续滤液10ml,置100ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得。

2.1.3最大吸收波长的测定精密吸取芦丁对照品溶液、供试品溶液各3 ml,分别置于25 ml量瓶中,在200～600 nm波长范围内测定吸收光谱。结果芦丁对照品与供试品光谱可见光区吸收图谱基本一致,并且在270nm波长处有最大吸收。见图1。

2.1.4标准曲线的制备精密量取对照品溶液1.0 ml、2.0 ml、3.0 ml、4.0 ml、5.0 ml与6.0 ml,分别置25 ml量瓶中,各加水至6 ml,加5%亚硝酸钠溶液1 ml,摇匀,放置6 min,加10%硝酸铝溶液1 ml,摇匀,放置6分钟,加氢氧化钠试液10 ml,再加水至刻度,摇匀,放置15min,以相应的溶液为空白,在500 nm的波长处测定吸收度,以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标,绘制标准曲线。结果见表1。表明芦丁在8.12～48.72 (g/ml范围内具有良好的线性关系。

2.1.5夏桑菊胶囊总黄酮含量的测定精密量取3ml,置25ml量瓶中,照标准曲线制备项下的方法,自“加水至6ml”起依法测定吸收度,从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量(μg),计算,即得。分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液3ml,按正文方法进行测定,以外标一点法计算含量,结果见表2。

2.1.6精密度试验按2.1.4项下测定法对对照品溶液重复测定6次,结果见表3。

2.1.7重复性试验按供试品测定方法测定,对同一批样品重复测定5次,结果见表4。

2.1.8加样回收率试验精密称取已知含量的同一批号的样品125 mg,分别精密加入芦丁对照品各27.5 mg,按供试品溶液的制备方法制备及上述光谱条件测定,按下式计算回收率,结果见表5。回收率(%)=(测出的总量—样品中的含量)/加入对照品的量×100%

3讨论

夏桑菊颗粒是《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂(第十五册)收载的第11类中药,具有清肝明目、疏风散热,除湿痹,解疮毒之功效,适用于治疗风热感冒引起的目赤头痛,高血压,头晕耳鸣,咽喉肿痛,疔疮肿毒等症状。夏桑菊颗粒的原标准未收载有含量测定方法。为更好控制夏桑菊胶囊的质量,使疗效稳定,故新增了测定总黄酮的含量测定项。笔者在研究中发现测定夏桑菊胶囊总黄酮含量的紫外分光光度法与HPLC法比较有分离效果好、灵敏度高、准确性好等优点,可为夏桑菊胶囊药材质量标准的修订提供科学依据。推测原因^[5～6]可能是依据《中国药典》夏枯草项下熊果酸的含量测定条件采用HPLC法测定样品中熊果酸含量,虽经反复优化色谱条件,样品中熊果酸色谱峰仍未能达到基线分离,影响含量测定的准确性;其次,夏枯草、野菊花、桑叶3味药材中含有较多的黄酮,以总黄酮为主要控制指标,该法灵敏、可靠,稳定性好。

参考文献

[1]黄淑彰.HPLC法测定夏桑菊颗粒中熊果酸的含量[J].现代中药研究与实践,2004,18(3):33-35.

[2]李俊锋.HPLC法测定夏桑菊胶囊中熊果酸的含量[J].中医药导报,2008,14(10):65-66.

[3]张珊珊,彭艳梅,吴艳.HPLC法测定夏桑菊颗粒中蒙花苷含量研究[J].中医药导报,2007,13(04):79-80,97.

[4]周红英,李同德,苏雪慧,等.紫外分光光度法测定三种槐叶中芦丁的含量.泰山医学院学报,2004,25(4):29-281.

[5]林海禄,罗明标,刘云海,等.改进的HPLC法测定夏枯草中熊果酸的含量[J].食品科技,2005,(03):83-84,87.

山楂黄酮提取工艺研究 篇11

山楂果实中黄酮类化合物含量较高[2,3], 并含有其它有机酸等多种生物活性物质, 具有很高的综合利用价值。

据统计1995年全国山楂种植面积近达500余万亩, 总产量50余万吨, 但国内市场山楂鲜食和药用量总共尚不到产量的10%, 如何提高山楂利用率是山楂加工业发展必须解决的问题, 利用山楂果实提取黄酮和生理活性物质, 并对剩余物综合利用, 是解决问题的一个很好途径。

本实验采用单因素和正交实验法方法研究了乙醇回流提取和超声波辅助提取工艺条件对山楂黄酮提取效率的影响, 利用比色法测定含量, 得出最佳浸提工艺及相关工艺参数。

1 材料与方法

1.1 原料及试剂

山楂经哈尔滨商业大学药学院中药鉴定室鉴定为北山楂。

芦丁标准品 (中国药品生物制品鉴定所) 。

甲醇、乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、Na OH均为国产分析纯试剂反渗透水为哈尔滨商业大学食品学院制备。

1.2 仪器及设备

722紫外分光光度计 (上海精密科学仪器有限公司) ;索氏提取器 (上海第三分析仪器厂) ;DWF-100植物粉碎机 (河北省黄骅市科研器械厂) ;LXJ-64-01离心机 (北京医疗仪器修理厂) ;MALLO电子天平 (上海第二天平仪器厂) 。

1.3 方法

1.3.1 原料预处理:将干山楂果, 粉碎过20目筛, 105℃干燥2h, 备用。

1.3.2 芦丁标准液。精密称取芦丁15.0mg, 加甲醇溶解并定容至100 ml, 配制成150μg/ml的芦丁标准溶液, 作为对照品溶液。

1.3.3 标准曲线。分别精密吸取芦丁标准液0.00, 1.00, 2.00, 3.00, 4.00, 5.00ml相当于含芦丁0、150、300、450、600、750μg, 置于12.5ml比色管中, 加30%的乙醇补至5ml, 各加入5%亚硝酸钠溶液0.30ml, 摇匀后放置5min, 加入10%硝酸铝溶液0.3ml摇匀后放置6min, 加1.0mol/L Na OH溶液2.00ml, 用30%乙醇定容至刻度, 摇匀, 放置15 min, 以零管为空白。摇匀后用1cm的比色杯, 在510nm处波长处测定吸光度, 测3次取平均值, 经回归处理, 得标准曲线的回归方程和相关系数, Y=7.19×10-4×-3.31×10-2, 得出r=0.9879。绘制芦丁含量 (μg) 与吸光度的标准曲线, 结果表明, 芦丁浓度在150~750μg/ml范围内具良好的线性关系。

2 结果与讨论

2.1 乙醇回流提取单因素试验[l][2]

条件:将干山楂果, 粉碎过20目筛, 105℃干燥2h, 取山楂粉末1g, 置于回流提取器中, 回流提取3次, 合并提取液, 回收乙醇, 得山楂黄酮提取液, 定容至100ml, 测吸光度。

分别改变提取温度、乙醇浓度、料液比和提取时间进行单因素实验。

2.1.1 提取温度。

温度高低, 体现出分子无规则热运动的激烈程度, 随温度提高, 黄酮类化合物在乙醇溶液中的溶解度增加, 提取率提高, 但是温度过高时, 则杂质的溶出也会增加, 影响提取效率。

2.1.2 乙醇浓度。

随乙醇浓度的增加, 黄酮的提取率提高, 并呈现先急后缓的趋势。浓度也并非越大越好, 而有一个最佳值。在浓度为70%时, 提取最佳, 超过此值, 提取率增加不明显, 且增加成本。

2.1.3 料液比。

随料液比的增加, 提取率增加, 但当料液比 (质量:体积) >1:9时, 提取率增加缓慢, 增加液料比提取率变化不大, 这时黄酮类化合物的提取已经比较充分了。

2.1.4 提取时间。

在其它条件相同的前提下, 增加提取时间, 黄酮的提取率并不是一直增高, 当时间超过2h后, 提取率甚至有下降趋势, 这可能是黄酮提取物受氧化所致。因此将实验时间确定2.0h为最佳。

2.2 超声振荡法单因素试验[l][2]

条件:将干山楂果, 粉碎过20目筛, 105℃干燥2h, 取山楂粉末1g, 置于提取器中, 超声波辅助提取3次, 合并提取液, 回收乙醇, 得山楂黄酮提取液, 定容至100ml, 测吸光度。

分别改变超声波频率、作用时间、乙醇浓度和料液比进行单因素实验。

2.2.1 超声波频率。超声波频率增大, 作用增强, 提取率增加, 但并非一直增加, 其最佳值为40KHz。

2.2.2 超声波作用时间。随提取时间的增加, 黄酮的提取率呈正态分布, 时间超过15min后, 提取率有下降趋势。因为提取时间延长黄酮提取物也可能被氧化。最佳时间确定为15min。

2.2.3乙醇浓度。随乙醇浓度的增加, 黄酮的提取率也呈正态分布, 在浓度超过70%时, 提取率增加不明显, 确定乙纯浓度为70%。

2.2.4料液比。一般来讲, 料液比愈大提取率愈大。但当料液比超过40时, 提取率趋于稳定, 即一定比例的溶剂已将有效成分基本全部溶出。

2.3 正交实验的设计

正交法方法确定过程是在以上单因素实验的基础上, 设计了L9 (34) (表1) 的正交实验。四个因素为:超声波频率、乙醇质量分数、浸提时间、料液比。 (表2)

由正交实验结果可知, 山楂果肉粉末 (105℃干燥2h) 利用超声振荡辅助提取山楂黄酮的最佳提取条件A2B3C1D2为:

用体积是40倍于其重量的70%乙醇浸泡, 在频率为40 KHz的超声波下作用下提取15min, 为最佳提取工艺。

对以上数据进行方差分析 (置信度=95%) , 结果如下:

影响超声波辅助提取的诸因素中, 对提取效果的影响大小依次是:乙醇浓度>超声波频率>超声波作用时间>料液比。

2.4 验证试验

为进一步证实乙醇回流提取和超声波辅助提取山楂黄酮的可靠性和合理性, 我们对所优选的工艺条件作了验证试验。重复3次。考虑到生产成本, 确定乙醇回流提取的条件为, 乙醇浓度70%, 温度70℃, 作用时间2h, 料液比1:40;超声波辅助提取的正交试验的验证结果为, 4.203%, 4.312%, 4.410%, 平均为4.308%, 可见本试验所选择的工艺条件是适宜的。

3 结论

山楂黄酮的提取提供优选工艺参考如下:提取方法:乙醇浸提, 辅助超声波震荡。

工艺流程:山楂去核→干燥→粉碎→加乙醇溶液→超声震荡→过滤→浓缩→提纯。

取干燥山楂果粉2.5g, 加70%乙醇100ml超声3次, 每次15min, 间隔15min, 合并提取液, 回收乙醇, 得山楂黄酮提取液, 定容至100ml, 测吸光度。

工艺参数:溶剂:70%乙醇, 超声波频率:40KHz声波作用时间:15min。料液比:40倍。

超声波提取方法有操作简单、提取时间短、提取效率高, 纯度高、无需加热, 剩余物无有害残留, 可以综合利用等优点。

另外, 采用乙醇超声提取方法, 简便易行, 节约有机溶剂, 所用试剂对人体较为安全, 因此适于大规模生产, 剩余物以糖、果胶、蛋白质和纤维素等, 可以作为食品原料加以综合利用。

摘要：对山楂总黄酮含量的提取, 不同工艺影响很大。本文采用单因素和正交实验法方法研究不同工艺条件对山楂黄酮提取效率的影响, 得出最佳浸提工艺及相关工艺参数。

关键词：山楂黄酮,黄酮提取,超声波,乙醇

参考文献

[l]Zhang Y, Li H W, Zhang Y C, et al.Study on extraction meth-ods of flavonoida from hawhorn fruits and their deyermination[J].JOURNAL OF HAREIN MEDICAL UNIVERSITY (哈尔滨医科大学学报) 2001, 35 (3) :183-184.

[2]Zhou Q X, Gu M, Wang W X, et al.Deyermination on Com-paring of Flavones Extraction the different Mothods to Extract fromChinese Hawthorn Leaf[J]SUZHOU UNIVERSITY JOURNAL OFMEDICAL SCIENCE (苏州医学院学报) , 2002, 22 (2) , 164