抗体效价（精选7篇）
抗体效价 篇1
青霉素酶是能够分解β-内酰胺类抗生素的β-内酰胺环的酶制剂, 促使β-内酰胺类抗生素失活, 被广泛用于环境中残留青霉素的清除、医疗器械残留青霉素的清除等方面。当在生鲜牛奶中加入一定量的青霉素酶时, 会造成原本含有抗生素残留的牛奶变成了“无抗奶”。目前国际和国内均不允许该酶在牛奶中作为添加剂使用。另一方面, 青霉素酶的滥用也助长了牛奶生产中青霉素类抗生素的滥用, 加速了耐药菌的传播, 严重威胁人体健康。因此, 笔者通过免疫小鼠, 制备青霉素酶的抗体, 并采用间接ELISA方法对抗体进行检测, 为下一步检测方法的建立打基础。
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器
青霉素酶, 中国兽医药品监察所产品;牛血清白蛋白, 美国SIGMA公司产品;弗氏佐剂, 美国GIBCO品牌;羊抗鼠酶标二抗, 河南华美生物工程有限公司产品;550型酶标仪, 美国BIO-RAD公司产品;高速匀浆机, 美国BECKMAN公司产品。6周龄BALB/C小鼠购自郑州大学医学院。
1.2 小鼠免疫
用青霉素酶免疫6周龄BALB/C小鼠, 每组3只, 背部皮下分点注射。首次免疫加等体积的弗氏完全佐剂进行乳化[10 m L青霉素酶+90 m L磷酸盐缓冲液 (PBS) +100 m L佐剂], 间隔20 d进行第2次免疫, 二免改用弗氏不完全佐剂进行乳化, 第3次免疫后10 d对小鼠断尾采血, 分离血清。
1.3 青霉素酶抗体的检测
将青霉素酶包被酶标板 (10 m L青霉素酶溶解于10 m L碳酸盐包被液) , 37℃温箱内培养2 h, 然后用磷酸盐缓冲液洗3次, 每次3 min, 于吸水纸上拍干;用含0.1%牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液封闭, 37℃温箱内孵育1 h, 然后洗涤 (方法同上) ;将1∶100的血清进行倍比稀释, 同时设阴性对照 (小鼠的阴性血清) 和空白对照 (磷酸盐缓冲液) , 37℃温箱内培养30 min, 然后洗涤;加入1∶1 000的酶标二抗 (GAMIgG-HRP) , 37℃温箱内培养30 min;然后加底物液显色, 10 min后中止反应, 用酶标仪测OD450值。阴性对照OD值为N, 阳性OD值为P, 以P/N≥2.1且OD>0.2判为阳性。
2 结果与分析
间接酶联免疫吸附试验 (间接ELISA) 测定效价, 结果见表1。以P/N≥2.1且OD>0.2判为阳性, 结果3只小鼠的效价均达到1∶3 200。表明小鼠血清中产生了青霉素酶的抗体。
3 讨论
随着国家对食品安全问题的关注和部分乳制品企业2010年无抗奶目标的提出, 抗生素残留问题成为影响乳制品安全的重要因素之一。目前, 青霉素作为β-内酰胺类药物是治疗牛乳腺炎的首选药物, 是牛奶中最常见的残留抗生素。此外, 食用含有抗生素的牛奶会诱导机体内的某些条件致病菌产生耐药, 一旦患病同种抗生素很难奏效。因此, 世界各国对乳品中抗生素的残留非常重视, 无抗奶已成为发达国家奶制品原料的通用标准。但是有些企业对抗生素残留超标的牛乳采取降价收购的原则, 出于经济利益的驱动, 一些不法奶站为了谋求自己的经济利益, 人为地使用一些抗生素分解剂 (如青霉素酶等) 去降解牛乳中残留的抗生素, 生产人造“无抗奶”。为保障消费者的利益, 建立对“抗生素分解剂”的快速检测方法是十分必要的。与其他检测方法相比, 免疫学方法相对操作简单, 也有较高的灵敏度和准确性, 适合样品的大量筛选。试验将青霉素酶作为抗原, 将其免疫小鼠, 经效价检测, 发现小鼠体内产生了针对青霉素酶的抗体。该研究为青霉素酶检测方法的建立奠定了基础。
抗体效价 篇2
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 主要试验仪器
酶标仪:TECAN Sunrise 2酶标仪;洗板机:美国宝特Elx50自动洗板机;恒温培养箱:哈尔滨市东明医疗仪器厂生产。
1.1.2 试剂
蓝耳病抗体检测试剂盒均有北京天之泰生物科技有限公司提供。
1.1.3 样品
对我镇采集的猪血清进行抽检, 通过抗体检测, 测定免疫抗体效价。
1.1.4 疫苗
由中牧实业股份有限公司成都药剂厂生产的高致病性蓝耳病冻干苗。
1.2 试验方法
1.2.1 加样
添加阳性对照50μL到酶标板A1、B1孔;添加阴性对照50μL到酶标板C1、D1孔;取经稀释液200倍稀释的待测血清样品50μL到酶标板内;轻轻震荡均匀后, 贴上封板膜置于37℃中孵育1h。
1.2.2 添加酶标二抗
洗板3次, 每孔添加50μL酶标二抗, 震荡混匀后, 贴上封板膜置于37℃中孵育1h。
1.2.3 添加底物溶液
洗板3次, 每孔添加底物溶液50μL, 轻摇2s, 将酶标板置于黑暗条件下21℃作用10min。
1.2.4 显色
每孔添加50μL终止液, 混匀。30min内在450nm波长下读数。
1.3 判断标准
为确保试验有效, 阴性对照的平均吸光度应该小于0.3, 阳性对照的平均值和阴性对照的平均值之差大于0.15。
1.3.1 S/P值的计算
(待检样品的平均值-阴性对照的平均值) / (阳性对照的平均值-阴性对照的平均值) =S/P
1.3.2 判定标准
2 试验结果
3 小结
3.1本试验采用的进口ELISA试剂盒, 具有灵敏性高、特异性强、稳定性良好等特点, 使检测结果更加准确, 真实地反映出猪蓝耳抗体水平的高低。
3.2通过本试验检测结果可以知道我镇各养殖户都进行了猪蓝耳病的免疫, 免疫效果总体良好, 平均合格率达到了72%。但是免疫效果参差不齐, 大的规模场免疫效价和合格率均明显高于一般养殖场户, 合格率达到76.47%, 说明疫苗可以有效的预防本病的发生, 但是一般养殖户和散养户的合格率仅为69.7%, 说明免疫次数或程序存在一定问题。
抗体效价 篇3
关键词：新生儿溶血病,母婴血型不合,ABO血型,RhD血型,抗体效价
新生儿溶血病(hemolytic disease of newborn,HDN)是由于母婴血型不合,母体血液中含有针对胎儿或新生儿红细胞抗原免疫性抗体(IgG类),并通过胎盘绒毛膜进入胎儿血液循环,致敏胎儿而发生同种免疫引发溶血。在人类已经发现的血型系统中,ABO-HDN是以母婴ABO系统血型不合引起的,发病率最高,约占HDN总发病率的85.3%,病死率约为1.4%[1],其次为Rh血型系统,其他血型系统HDN较少见[2]。笔者将从2008年起对云浮市级医院就诊的ABO/RhD血型不合的孕妇血清进行IgG-A或IgG-B、抗-D效价测定,分析HDN与孕妇妊娠次数及年龄之间的关系,分析抗体效价与发生HDN的关联性,以便于对高危孕妇进行早期干预,有效预防HDN的发生或减少对胎儿的危害,对优生优育、提高胎儿生存质量具有重要意义[3]。
1 对象与方法
1.1 检测对象
选择云浮市市级医院门诊及住院孕妇,在妊娠早期10～16周选择孕妇ABO血型为O型,丈夫为A型或B型;孕妇为A型,丈夫为B型或AB型;孕妇为B型,丈夫为A型或AB型;共计380例。Rh血型系统孕妇为RhD阴性者8例。其中ABO血型系统孕妇1次妊娠者238例(62.63%),多次妊娠(2次及2次以上,包括有流产史)者142例(37.36%),孕妇年龄在21～40岁之间,其中分21～30岁年龄段(适龄产妇)和31～40岁年龄段(高龄产妇)两组。
1.2 试剂和仪器
ABO血型抗-A、抗-B及抗-D血型定型试剂(由长春博德生物技术有限责任公司提供);IgM-D筛选试剂(由上海血液生物医药有限责任公司提供);抗球蛋白试剂和2-巯基乙醇(2-Me,由上海血液生物医药有限责任公司提供);凝聚胺试剂盒(由长春博德生物技术有限责任公司提供);微柱凝胶检测卡(由长春博迅生物技术有限责任公司提供);ABO标准试剂红细胞由本站血型参比试验室自制;CCBY免疫微柱孵育器(由长春博迅生物技术有限责任公司提供);KA-2200离心机(日本KUBOT生产),OLYMPUS-CX21型生物显微镜(日本OLYMPUS生产)。
1.3 检测方法
1.3.1 输血规程
夫妇ABO/RhD血型检测严格按照《中国输血技术操作规程(血站部分)》执行。
1.3.2 微柱凝集法孕妇血清红细胞不规则抗体筛选及鉴定[4]
分别在3个微柱孔下标记Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,在反应池中分别加10μL5%相应筛检红细胞,再分别各加40μL待检血清,置微柱凝胶专用孵育器孵育(37℃,10 min);取出后置专用微柱凝胶离心机离心。观察结果:红细胞全部沉于微柱底部者为阴性,全部或部分红细胞滞留于微柱凝胶孔中者为阳性。如红细胞不规则抗体筛选阳性需进一步进行抗体鉴定,操作方法同上。自身抗体阳性的待检血样采用微柱凝胶自身抗体分型卡(AHG/IgG/C3d)进行抗体分型,操作方法同上。
1.3.3 IgG-A或IgG-B及抗-D抗体效价检测
参考具体文献[5]执行。
1.4 统计学处理
采用SAS 8.1统计软件进行统计学分析,计数资料采用χ2检验,P<0.05或<0.01均表示有统计学意义。
2 结果
2.1 孕妇血清IgG-A或IgG-B抗体效价测定
共检测380例ABO血型不合孕妇血清中的IgG-A或IgG-B抗体效价,其中孕妇为O型367例(96.7%),A型7例(1.8%),B型6例(1.5%)。在380例孕妇中检出IgG-A或IgG-B抗体效价≥1∶64者204例(53.6%),其中1次妊娠且年龄在21～30岁者94例(39.5%),多次妊娠且年龄在31～40岁者110例(77.4%),多次妊娠者IgG-A或IgG-B抗体效价≥1∶64者明显多于1次妊娠者(P<0.01);在31～40岁年龄段的孕妇IgG-A或IgG-B抗体效价≥1:64者明显多于21～30岁年龄段的孕妇(P<0.01),结果见表1、2。
注:两组比较,χ2=11.543,P<0.01
2.2 Rh系统抗-D效价检测
在8例RhD阴性孕妇中检出抗-D者5例(62.5%),抗-D效价≥l∶32者1例(12.5%),抗-D效价≥l∶64者2例(25.0%),抗-D效价≥l∶128者2例(25.0%)。
3 讨论
产前IgG型血型抗体的检测作为预防HDN的早期检查已备受重视。妊娠期间母婴的血液循环为各自独立的系统,血液有形成分一般是不相通的。但在妊娠期间难免有少许绒毛破损,可能会发生极少胎儿血液进入母体血液循环。当一次进入母体的血液达到1 ml以上时,就能致敏孕妇产生抗体。一旦致敏,再次妊娠时如果极少量的带有相应抗原的胎儿血液进入母体,回忆反应就会导致孕妇体内抗体迅速升高。5%～10%的孕妇在妊娠2个月时,在血液中可以找到胎儿红细胞;有10%～20%的胎儿红细胞进入母体量在0.1～30 ml。母婴血液互相渗透,会发生同种免疫应答,产生IgG类抗体,该类抗体可以自由通过胎膜屏障,进入到胎儿血液循环致敏胎儿红细胞,导致胎儿红细胞发生血管外溶血,引起胎儿或出生后HDN。而ABO、RhD血型系统引起的HDN最为常见。当孕妇血清中IgG-A或IgG-B抗体效价≥1∶64或RhD阴性孕妇血液中产生针对胎儿RhD抗原的抗-D抗体时,胎儿有可能发生HDN。临床通常以IgG-A或IgG-B抗体效价≥1∶64作为阳性指标,当IgG-A或IgG-B抗体效价≥1∶128时,新生儿发生HDN的几率增大,IgG-A或IgG-B抗体效价≥1∶512时,新生儿几乎100%的受害,因此,临床上要采取早期预防措施[6]。对孕妇为O型或RhD阴性,丈夫为A、B、AB型或RhD阳性者,在妊娠6个月时进行IgG抗体效价检测,凡抗体效价在1∶64以上即开始进行治疗,有效地预防了宫内发育迟缓,减少了流产或死胎的发生。但是有必要了解妊娠次数与年龄因素与发生HDN的风险关系,本次研究表明,多次妊娠的孕妇其产生IgG-A或IgG-B抗体效价≥1∶64者明显多于1次妊娠者,且年龄在31～40岁年龄段的孕妇其产生IgG-A或IgG-B抗体效价≥1∶64者明显多于21～30岁年龄段者,说明多次妊娠者及高龄产妇发生ABO-HDN的几率较高,应当对这些特征的孕妇定期进行IgG-A或IgG-B抗体效价检查,对IgG-A或IgG-B效价≥1∶64者早期采取有效的预防措施及产后的治疗措施。
由于我国汉族人群RhD阴性率为0.4%[7],因此Rh血型系统抗原引起的HDN相对ABO较少,但病情程度严重。Rh血型不合引起的HDN一般不发生于第一胎[6]。但多次妊娠,血型抗体产生的几率会增加,胎儿患病可能性也增大。本研究在8例RhD阴性孕妇血清中检出抗-D 5例(62.5%),4名孕妇有2次以上妊娠史,1名有输血史,因此产前RhD的常规检测是十分必要的,对首次妊娠检测出抗-D的孕妇应在产后72h内预防性注射免疫球蛋白,防止在下次妊娠时发生HDN。目前对HDN的预防,主要依赖于孕妇产前ABO/RhD血型鉴定及其抗体效价检测的血型血清学指标,因此,夫妇血型不合的孕妇产前抗体效价普查的意义显得格外重要。为围产期HDN的监测、预防、治疗提供了可靠依据,发现异常及时进行妊娠期干预治疗,可以有效地预防和减少HDN的发生率[9],对优生优育工作及提高人口素质有重要意义。
参考文献
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[4]李勇,杨贵贞.人类红细胞血型学实用理论与实验技术[M].北京:北京科学技术出版社,1999:139-157.
[5]田兆嵩.临床输血质量管理指南:技术性规程示例[M].北京:科学出版社,2011:255-257.
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抗体效价 篇4
花椒籽油中脂肪酸的主要成分是油酸、亚油酸和亚麻酸,其次是含量较低的软脂酸、硬脂酸和棕榈油酸,最后是微量组分十七碳烯酸,不含花生四烯酸[4],其中富含的 α - 亚麻酸是合成二十碳五烯酸( EPA) 和二十二碳六烯酸( DHA) 的前体物质,与大脑和视网膜的发育有关; 还可以增强机体免疫能力; 防治多种心脑血管疾病,并有抗炎、抗过敏、抗癌、抗衰老、抗抑郁及促进毛发生长等多种作用[5 -7]。用富含 α - 亚麻酸等化合物的花椒籽饲喂动物可以得到含n -3系多不饱和脂肪酸的肉制品和奶制品[8]。
花椒籽中油脂含量为27% ~ 31%,出油率为20% ~ 25% ,高于大豆、棉籽。除含丰富的油脂外,花椒籽脱脂后的饼粕中蛋白质含量在48% 以上,其氨基酸成分比较齐全[9 -10],且各种必需氨基酸的含量较高,与大豆相比,有些氨基酸含量较低,但可作为鸡、猪等畜禽的饲料与其他谷物混合使用。花椒籽油含有丰富的钙、镁、铁、锌及较高的锶、锰等机体必需的矿物质元素[6]。花椒籽中的香豆素使其具有芳香甜味,可增加雏鸡的适口性,使雏鸡的采食量提高[11]。花椒籽中含丰富的油脂、不饱和脂肪酸和蛋白质,是优质的能量饲料,可部分代替玉米,作为一种重要的原料添加到饲料中[12]。
谢红兵等[13 -14]研究发现: 适当添加花椒对肉鸡及肉雏鸡的生长、免疫等机能有促进作用; 花椒籽作为一种高能饲料添加原料,所含有的不饱和脂肪酸类,芳樟醇、柠檬烯等挥发油类,香豆素类,氨基酸及微量元素等多种物质与花椒化学成分相同[15]。本试验旨在通过研究花椒籽对肉雏鸡免疫器官指数及抗体生成的影响,为其生产应用提供数据支持。
1材料与方法
1. 1试验药品
花椒籽粉末,选自四川省汉源县,粉碎过40目筛; 盐酸小檗碱( 批号为20110205) ,购自石家庄正大鸿福牧业有限公司。
1. 2试验动物与分组
选择11日龄健康雄性青脚麻肉鸡( 以下简称肉鸡,由四川农业大学家禽育种场提供) 150只,随机分成空白对照组,药物对照组,试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组,每组设3个重复,每个重复10只鸡。空白对照组饲喂基础日粮; 药物对照组饲喂基础日粮+ 0. 2% 盐酸小檗碱; 试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组分别饲喂基础日粮+ 0. 5% 、1. 0% 、1. 5% 花椒籽粉,试验时间为42 d。基础日粮参照美国NRC( 1994年) 《家禽的营养需要量》配制,其组成及营养水平见表1。
注: 每千克维生素预混料含维生素A 54 000 000 IU,维生素B12 000 IU,维生素D310 800 000 IU,维生素B215 000 IU,维生素E 18 000 IU,维生素B67 000 IU,维生素K 35 000 IU,维生素B1230 mg, D - 泛酸钙25 000 IU,烟酸35 000 IU,叶酸500 mg,生物素500 mg; 每千克矿物质预混料含铜8. 0 mg,锌40 mg,锰60 mg,碘0. 35 g,硒0. 15 g。
1. 3饲养管理
试验鸡饲养于育雏舍内,自由采食、饮水,保持舍内空气新鲜,舍内温度在肉雏鸡7日龄为35 ℃左右, 以后每周下降2 ~3 ℃,直至常温。人工饲喂,最初几天,每隔4 h饲喂1次,每昼夜6次。以后随着日龄的增长逐渐减少,到第4周时每天饲喂4次。最初的1周雏鸡饮用温水,1周后饮用冷水。保证水的清洁和鸡舍内良好的环境卫生,并按照正常免疫流程进行免疫。免疫流程为: 5 d用新城疫疫苗+ 传染性支气管炎疫苗滴鼻点眼; 12 d用传染性法氏囊疫苗饮水并注射禽流感H5疫苗; 20 d再进行新城疫疫苗及传染性支气管炎疫苗滴鼻点眼。
1. 4样品采集
于1,14,28,42日龄每个重复中随机取3只雏鸡空腹称其体重,颈静脉放血处死,分离脾脏、胸腺、法氏囊并称重,计算免疫器官指数,计算公式: 免疫器官指数= 免疫器官重量( g) /动物体重( kg)[13]。
分别于1,14,28,42日龄每组随机抽取16只鸡, 经翅静脉采血,分离血清,进行血凝和血凝抑制试验, 测定其新城疫和禽流感H5抗体效价。
1. 5统计学分析
采用SPSS 17. 0软件中的ANOVA模块进行单因子方差分析和Duncan’s多重比较,以P <0. 05为显著水平,试验数据用平均数 ± 标准差表示。
2结果与分析
2. 1花椒籽对肉雏鸡免疫器官指数的影响( 结果见表2)
注: 同列数据肩标字母完全不同表示差异显著( P < 0. 05) ,含相同字母或无肩标表示差异不显著( P >0. 05) 。
由表2可知: 各组胸腺指数进行比较,1日龄时, 各组间差异不显著( P >0. 05) ; 14日龄时,试验Ⅱ组比空白对照组提高8. 79% ( P <0. 05) ; 28日龄时,各组间差异不显著( P >0. 05) ; 42日龄时,药物对照组和试验 Ⅱ 组分别比空白对照组提高11. 69%、 12. 95% ( P < 0. 05) 。各组法氏囊指数进行比较,1, 14日龄时,各组间差异不显著( P > 0. 05) ; 28日龄时,试验Ⅱ组比空白对照组提高13. 55%( P <0. 05) ; 42日龄时,试验 Ⅱ 组比空白对照组提高14. 04% ( P <0. 05) 。各组脾脏指数进行比较,1日龄时,各组间差异不显著( P >0. 05) ; 14日龄时,试验Ⅱ组比空白对照组提高15. 91% ( P < 0. 05) ; 28日龄时,试验 Ⅱ组与试验Ⅲ组分别比空白对照组提高18. 78% 、 20. 44% ( P < 0. 05) ; 42日龄时,药物对照组、试验Ⅱ组与试验Ⅲ组分别比空白对照组提高18. 75%、24. 48%、 16. 15% ( P < 0. 05) ,比试验Ⅰ组分别提高12. 87% 、 18. 32% 、10. 40% ( P < 0. 05) 。从以上结果可以看出, 花椒籽对肉鸡免疫器官有一定的促生长作用。
2. 2花椒籽对肉雏鸡抗体效价的影响( 见表3、 表4)
lb
注: 同列数据肩标字母完全不同表示差异显著( P < 0. 05) ,含相同字母或无肩标表示差异不显著( P >0. 05) 。
由表3可知: 1,14日龄时,各组间差异不显著( P >0. 05) ; 28日龄时,药物对照组、试验Ⅱ组与试验 Ⅲ组分别比空白对照组提高9. 93% 、15. 03% 、 12. 16% ( P < 0. 05) ; 42日龄时,试验Ⅱ组比空白对照组提高8. 23%( P <0. 05) 。
lb
注: 同列数据肩标字母完全不同表示差异显著( P < 0. 05) ,含相同字母或无肩标表示差异不显著( P >0. 05) 。
由表4可知: 1日龄时,各组间差异不显著( P > 0. 05) ; 14日龄时,试验Ⅱ组比空白对照组提高14. 13% ( P <0.05) ; 28日龄时,试验Ⅱ组比空白对照组、试验Ⅰ 组显著提高11.20%、6.68%; 试验Ⅲ组比空白对照组、 试验Ⅰ组提高9.83%、5.37%( P <0. 05) ; 42日龄时,药物对照组、试验Ⅱ组、试验Ⅲ组分别比空白对照组提高6. 22% 、6. 85% 、5. 46% ( P < 0. 05) 。
3讨论
胸腺、法氏囊和脾脏是肉鸡最重要的免疫器官, 参与全身的细胞免疫和体液免疫。胸腺是细胞免疫的中枢器官,是畜禽的一级淋巴器官及血液中淋巴细胞的主要来源,法氏囊属淋巴样上皮结构,是禽类特有的免疫器官,是血清抗体生成系统的细胞成长和分化部位,法氏囊分化生成大量的浆细胞和各种特异性的细胞,转移到脾脏、盲肠、扁桃体及其他淋巴组织中,参与体液免疫反应,从而产生抗体提高机体免疫力。脾脏则是禽类最大的外周免疫器官,产生大量的淋巴细胞,参与全身的细胞免疫和体液免疫[16]。A. Rivas等[17]研究发现,胸腺、脾脏及法氏囊的器官指数可用于评价雏鸡的免疫状态,这些免疫器官的绝对重量和相对重量越大,则说明机体的细胞免疫和体液免疫机能越强。本试验结果表明,添加适量花椒籽可有效提高肉雏鸡的免疫器官指数,在一定程度上增加免疫器官重量,表现出对机体免疫功能的增强效果。
饲喂花椒籽后新城疫抗体效价在28,42日龄时差异显著( P < 0. 05) ,而禽流感H5抗体效价在14, 28,42日龄差异显著( P < 0. 05) ,说明添加适量花椒籽可提高新城疫及禽流感H5抗体效价水平,并延长其抗体效价值的高峰期,从而起到提高动物抗病力的作用。
花椒籽具有提高动物机体免疫机能的作用,其原因可能是: 首先,机体的免疫功能与自由基的关系非常密切,花椒籽所含的 α - 亚麻酸具有清除自由基的功能,从而增强肉鸡的免疫功能[18]。另外,花椒籽含有多种花椒挥发油有效成分,有助于降低肠道微生物所产毒素的浓度,通过增加溶菌酶含量及巨噬细胞吞噬活性来增强机体的免疫能力。研究显示,花椒中含有大量的活性物质,对炭疽杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等革兰阳性菌及大肠杆菌、变形杆菌、霍乱弧菌等革兰阴性菌均有不同程度的抑制作用,从而提高机体抗病力[19]。与此同时,花椒籽中含有丰富的蛋白质、维生素及微量元素,丰富的蛋白质资源对于免疫器官的发育和抗体生成有重要作用[20]。这些物质的摄入可以促进机体及免疫器官的发育,使抗体效价升高,效价值延长,从而增强动物机体免疫力。
摘要：为了研究花椒籽对肉鸡免疫器官指数和抗体生成的影响,试验选用1日龄健康肉鸡150只,随机分成空白对照组,药物对照组,试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组,每组设3个重复,每个重复10只鸡。空白对照组饲喂基础日粮;药物对照组饲喂基础日粮+0.2%盐酸小檗碱;试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组分别饲喂基础日粮+0.5%、1.0%、1.5%花椒籽粉,试验时间为42 d。分别在1,14,28,42日龄剖杀试验鸡,计算免疫器官指数,同时检测血清中鸡新城疫(ND)和禽流感H5抗体效价。结果表明:试验Ⅱ组鸡的胸腺、法氏囊和脾脏指数分别在14,42日龄、28,42日龄、14,28,42日龄与空白对照组比较差异显著(P<0.05),其中脾脏指数在42日龄时与试验Ⅰ组比较差异显著(P<0.05);药物对照组在42日龄时的胸腺指数与空白对照组比较差异显著(P<0.05),脾脏指数与空白对照组和试验Ⅰ组比较差异显著(P<0.05);试验Ⅲ组的脾脏指数在28日龄时与空白对照组比较差异显著(P<0.05),在42日龄时与空白对照组和试验Ⅰ组比较差异显著(P<0.05)。饲喂花椒籽后新城疫抗体效价在28,42日龄时差异显著(P<0.05),禽流感H5抗体效价在14,28,42日龄时差异显著(P<0.05)。说明在日粮中添加花椒籽粉可以显著提高肉鸡的免疫器官指数,并提高肉鸡的免疫抗体效价,增强动物机体的免疫机能。
抗体效价 篇5
范文颖等[4]的研究表明, 新城疫或禽流感疫苗二免21 d后 (在有基础免疫的情况下) 卵黄抗体水平与血清抗体水平接近, 卵黄抗体水平直接反映了血清抗体水平的高低。在蛋禽疾病防治中, 为了及时掌握禽流感、新城疫、产蛋下降综合征等疫苗的免疫效果, 了解产蛋家禽抗体水平的高低, 以便制定正确的免疫程序, 临床上需要对免疫家禽的卵黄抗体水平进行多次监测。这在一定程度上避免了因采血测定血清抗体给家禽造成的应激反应, 不致引起家禽产蛋量的下降。应用血凝抑制试验 (HI试验) 检测禽蛋卵黄抗体水平是最简便、经济、准确的血清学检测方法。本试验随机检测了宁夏地区14个蛋鸡场140枚鸡蛋卵黄抗体效价, 为了解宁夏地区鸡新城疫的防治效果提供了试验数据。
1 材料与方法
1.1材料待检鸡蛋分别来自宁夏银川郊区、银南地区、银北地区等的14个蛋鸡场。Lasota IV系弱毒株由宁夏大学生物制品中心保存, 新城疫阳性血清购自北京华业寰宇化工有限公司, 阴性血清和鸡红细胞由本试验自制。
1.2方法
1.2.1鸡红细胞悬液的制备采集3只健康公鸡的血液与等体积阿氏液混合, 用p H 7.2 0.01 mol/L的PBS液洗涤3次, 每次均以1 000 r/min离心10 min, 用吸管吸去上清液和白细胞薄膜, 将沉淀的红细胞加PBS反复洗涤3次, 上述PBS配成体积分数为0.8%红细胞悬液, 4℃保存, 现用现配。
1.2.2抗原制备非免疫受精种蛋置37℃恒温孵化箱中孵化至第10 d, 剔除死胚, 无菌条件下注入0.5%稀释的新城疫病毒Lasota IV系弱毒株0.2 m L于尿囊腔内, 蜡封。置37℃恒温孵化箱中, 72 h后收获病毒。尿囊液经2 800 r/min低速离心60 min后沉淀病毒, 沉淀物用p H7.2 0.01 mol/L PBS重悬, 置-20℃保存备用, 临用前解冻。
1.2.3血凝试验 (HA) 检测新城疫病毒的血凝效价在微量反应板的1~12孔均加入25μLPBS, 吸取25μL抗原加入第l孔, 混匀后从第1孔吸取25μL, 病毒液加入第2孔, 混匀后吸取25μl加入第3孔, 以此进行倍比稀释至第11孔, 从第11孔吸取25μL弃之, 每孔再加入25μL PBS, 每孔均加入25μL体积分数为1%鸡红细胞悬液, 振荡混匀后在室温 (20~25℃) 下静置40 min后观察结果。以100%凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价, 即为1个凝集单位。
1.2.4 4单位抗原的校正配制4单位抗原并进行校正, 向反应板的第2孔至第6孔加生理盐水25µL, 吸取4单位抗原25μL分别加入第1孔、第2孔中, 充分混合后吸出25μL至第3孔, 依次倍比稀释到第5孔, 弃去25μL, 再吸取1%红细胞悬液依次加入1~6孔, 每孔25μL, 振荡1分钟后室温静置30 min后观察结果, 如第1~3孔为完全凝集, 第4孔红细胞为50%沉淀, 第5孔为对照完全沉淀, 表明所配4单位抗原准确, 校正成立, 4单位抗原现配现用。
1.2.5鸡卵黄提取液的制备将被检鸡蛋消毒, 在气室端开窗, 弃净卵清, 只留卵黄, 搅开, 取2 m L卵黄, 于试管加等量的PBS, 混合后再按混合液的2倍量加入氯仿, 振匀, 见卵黄凝结成脑样为宜, 室温下静止1 h后, 1 500 r/min离心20 min, 吸出上清液-20℃保存备用备。
1.2.6血凝抑制 (HI) 试验在96孔微量反应板上, 每排第2~12孔各加入25μL稀释液, 每排第1孔和第2孔各加入25μL卵黄抗体上清液, 从第2~10孔开始进行倍比稀释, 第11孔为抗原对照, 第12孔为稀释液对照。另设1排1~11孔倍比稀释的阳性血清对照。然后在1~11孔各加入25μL 4单位抗原, 最后1排加入25μL稀释液, 充分震荡1 min后室温放置20~30 min, 每孔加入25μL配置好并充分混匀的0.8%红细胞悬液, 充分震荡后室温放置20~30 min后, 观察结果并读数。结果判定, 以完全抑制4单位抗原的卵黄抗体最高稀释倍数作为HI效价[5]。
2 结果与分析
2.1血凝试验结果对自制新城疫病毒抗原进行血凝试验, 不同时间3个批次的9份尿囊液HA血凝效价均值为8 log2, 结果如表1所示。
2.2 4单位抗原校正结果血凝试验测得新城役病毒HA效价平均为1:28, 则单位抗原为1:64, 四单位抗原校正结果显示, 前3孔为红细胞完全凝集, 第4孔为红细胞50%凝集, 第5孔为红细胞完全沉淀, 说明抗原校正成功。
2.3血凝抑制试验结果通过血凝抑制试验对宁夏地区鸡卵黄抗体进行检测, 结果显示各地区鸡卵黄体抗体效价均大于10 log2, 平均为10~13 log2之间, 结果如表2所示。
3 讨论
卵黄抗体是鸡受到外界特异性抗原的刺激后, 体内发生免疫应答反应, 产生免疫球蛋白, 并通过卵泡膜进入卵黄, 并在卵黄中大量蓄积, 形成卵黄抗体, 也称卵黄免疫球蛋白[6], 由于卵黄抗体的累积作用, 使卵黄中的抗体明显高于血清中的含量, 为雏鸡提供母源保护[7]。用特异的抗原多次免疫母禽后, 所产的蛋黄中针对抗原的抗体含量会明显增加, 特异的、高效价的卵黄抗体可以应用生物化学技术从蛋黄中提出[8]。卵黄抗体与哺乳动物初乳中的抗体一样, 都是由母体产生, 通过特殊机制从血液中转运而来。曹丹的[9]研究表明新城疫卵黄抗体与血清抗体间存在很高的相关性, 鸡新城疫疫苗免疫蛋鸡后不同时期血清抗体和卵黄抗体效价基本一致, 升降趋势相同。类似报道都证实卵黄抗体的检测可以很好地反映血清中的抗体[10,11,12]。卵黄抗体的检测方法更加简易, 还能避免采血时鸡群对的应激反应, 节省人力和时间。因此, 通过检测卵黄抗体也可以推测鸡群的免疫状况。
抗体效价 篇6
新生儿溶血病 (HND) 主要是指ABO血型系统和Rh系统的血溶, 最为常见的是ABO系统的血溶。本院用卡式微柱凝胶的方法对孕妇无规律抗体及其效价和新生儿溶血3项进行测试。本文选取了2010年1月至12月在本院检查及分娩的347例血型为“O”孕妇及其黄疸病发病的新生儿数据解析如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
研究样本:选取本院2010年347例Ig G抗A (B) 效价有不同程度增高的孕妇和他们的新生儿。母体Ig G抗A (B) 效价大于1∶64者被列为调查范围。仪器:美国德灵Xpand plus全自动生化仪;长春博研TD-3A型血型血清学用离心机;长春博研FYQ型免疫微柱孵育器;总胆红素试剂盒;抗A (B) 标准血清和标准红细胞 (吉林生物工程技术有限公司) ;微柱凝胶免疫反应检测卡 (长春博研) ;巯基乙醇浓缩液。
1.2 方法
孕妇检测:用卡式微柱凝胶的方法做与丈夫血型一致的血清IgG抗A (B) 效价检测和血清非特异性抗体检测。婴儿检测:用美国德灵Xpand plus全自动生化仪做血清总胆红素检测, 同时用微柱凝胶的方法对婴儿检测溶血3项 (直接抗人球蛋白检测、游离检测、放散检测) 。
1.3 HND判断标准
(1) 母婴ABO血型不合; (2) 检测中出现总胆红素增高现象; (3) 直接抗人球蛋白检测、游离检、放散检测, 测试结果出现阳性为确诊。
1.4 统计学处理
采用SPSS13.0软件对数据进行统计学处理, 计量资料采用χ2检验, 以P<0.05, 为有显著差异性, 提示有统计学意义。
2 结果
347例孕妇IgG抗体效价检结果和新生儿溶血病 (HND) 发病情况见表1。
经过查找病例资料, 347例孕妇均是第1胎且都是单胎, 在孕妇分娩前, 进行了降低血清IgG抗A (B) 效价的一系列治疗。确诊68例为HDN。检测孕妇人数与HND人数相比χ2=4.85, (P<0.05) 两组比较有显著统计学意义。
3 讨论
HND是我们临床中新生儿常见病之一, 很多原因都有可能引起新生儿溶血病HND, 包括同族免疫性、红细胞酶数量减少、红细胞膜残缺及外界感染等原因, 其中主要原因就是同族免疫性溶血 (母婴ABO系血型不合) , 孕妇的IgG血型抗体通过胎盘渗透引起的治中免疫性疾病, 会造成孕妇早产、流产、死胎、也经常导致新生儿贫血、黄疸、肝脾发育不完全和水肿等现象, 对HND的防治已经成为现代社会优生优育的重要措施之一[4]。临床实验证明, 新生儿溶血病是可以通过中西医等手段进行治疗的。
由表1可见, IgG效价和新生儿溶血病 (HND) 有着直接的关系, 孕妇的IgG效价增高, 新生儿的溶血病发病率也会随之增多, 孕妇IgG效价在1∶128～1∶256区间内HND发病百分比是10%, 孕妇IgG效价在1∶512～1∶1024区间内HND发病百分比是24%, 孕妇IgG效价在>1∶1024时HND发病百分比是63%。68例HND中A血型为64例约为94%B血型为4例约为6%, 全部是因为孕妇为O血型与ABO系血型不合照成的。在ABO系统中, O血型拥有IgG抗A (B) 的人数多于A型和B型, 并且A抗原要强于B抗原[5]。如果Rh阴性孕妇, 在生第1胎前, 输入过Rh阳性的血液制品, Rh系血型不合HND会发生在第1胎, 但大多数Rh系血型不合的溶血都发生在Rh阴性孕妇的Rh阳性的第2胎婴儿中。我院在1年内没有发现Rh系血型不和合引起的新生儿溶血病。另外347例新生儿中有279例未反生新生儿溶血病HND, 约占80%。这说明了, 不是所有Ig G较高孕妇的新生儿都会患有HND, 效价较高的Ig G抗A (B) 经过药物等手段的治疗是可以降低效价的, 但是要注意检查和治疗的及时性。在以往的母婴血型不合的诊断中是以监测孕妇血型抗体为主要参考, 结合B超, 胎心监护等方法, 根据监测结果来推敲是否存在母婴血型不合及HND的程度, 用观察指标这样方式推断病情, 不能够及时的确定病情发展程度, 可能造成误诊和误治。卡式微柱凝胶方法是应用凝胶颗粒空隙的分子筛, 只允许单个红细胞渗透通过的特性, 未发生凝集的红细胞经过离心机的作用沉至微柱的最底部, 这样一来就可以对母婴ABO系血型不合的情况立即确诊, 避免了没有必要的动态观察和预防性辅助治疗等麻烦, 同时还可以对脐带血进行ABO系血型溶血3项实验 (直接抗人球蛋白检测、游离检测、放散检测) , 准确的判断, 胎儿是否有HND现象发生程度, 尽早给胎儿进行宫内治疗, 对于该种方法的精准性和灵敏度业内都给与很好的评价[6]。
综上所述, 我们通过一系列的方式方法就进行检测孕妇IgG抗体效价, 得出的结论是新生儿溶血病HND与孕妇IgG抗体效价有着直接的关系, 新生儿溶血病HND主要原因是由孕妇IgG抗体引起的, 孕妇IgG抗体效价增高就会导致新生儿溶血病HND发病率的增多。
摘要：目的 研究孕妇IgG抗体效价与新生儿溶血病 (HND) 的关系。方法 选取本院2010年1月至12月347对夫妻血型不合的“O”型孕妇及其新生儿作为研究对象, 对孕妇IgG效价及新生儿血溶病 (HDN) 溶血3项指标进行微柱凝胶反映卡检测。结果 347例接受检查的孕妇中IgG抗体效价在1∶128～1∶256区间的有206例 (59%) ;在1∶256～1∶1024区间的有109例 (31%) ;IgG效价>1∶1024的有32例 (10%) ;新生儿溶血病HND发病患儿为68例 (20%) 。孕妇IgG抗体效价与新生儿溶血病 (HND) 有统计学意义 (P<0.05) 。结论 HND主要原因是由于IgG抗体引起的, IgG抗体增高, HND的发病率也会随之增高。
关键词：IgG抗体,血型不合,新生儿溶血病 (HND)
参考文献
[1]张红旗, 龙永梅.孕妇免疫性抗A (B) 血型抗体效价与新生儿溶血病的关系[J].检验医学与临床, 2009, 6 (5) :69.
[2]马晓露.孕母血型抗体与新生儿ABO溶血病发生的相关性分析[J].中国实验诊断学, 2009, 13 (12) :90-92.[3]高小华, 胡永红, 陈小洁.两种方法检测孕妇产前血清中ABO血型IgG抗体效价的结果分析[J].广州医药, 2010, 41 (6) :50-51.
[4]柳爱华, 储穆庭.2537例孕妇ABO血型抗体效价检测结果及分析[J].现代预防医学, 2011, 38 (1) :55.
[5]夭荣平, 陈建伟, 张晓霞.1539例孕妇血清ABO抗体水平检测及分析[J].现代实用医学, 2011, 23 (10) :37-38.
抗体效价 篇7
新城疫 (ND) 是鸡和火鸡的急性高度接触性传染病, 属于副粘病毒科, 腮腺病毒属, 在临床上表现为呼吸困难、下痢、N机能紊乱、粘膜和浆膜出血等症状, 由于新城疫引起的疾病首先发现于印度尼西亚的爪哇和英国的新城, 并分离到病原, 故名为新城疫, 被OIE列为对畜禽危害最大的A类动物传染病之一, 在《中华人民共和国动物防疫法》和《中华人民共和国进出境动物一、二类传染病、寄生虫名录》中公布的一类传染病, 是我国法定预防控制和消灭的烈性传染病, 是影响国际动物及其产品贸易类疫病。
为更加有效地防制鸡新城疫等疾病的发生, 疫苗免疫对鸡群新城疫抗体效价检测常作为免疫效果评价的主要依据, 检测禽血清中抗鸡新城疫抗体的方法有多种, 包括中和试验、酶联免疫吸附 (ELISA) 试验、HA及HI试验等, 采用血凝和血凝抑制试验来测定鸡新城疫抗体, 现已成为一种快速准确的试验手段, 本次采用血凝抑制的方法抽取同德县牧草良种繁殖场刘某饲养的100只土鸡注射新城疫IV系苗后, 在20d内进行抽检, 评价该鸡群注射疫苗后抗体效价产生水平。以有效的预防和控制鸡新城疫病的发生。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 抽检鸡
同德县牧草良种繁殖场刘某饲养的100只土鸡注射新城疫IV系苗后, 在20d内抽样10只采血, 并分离血清。
1.1.2 试剂
浓缩抗原、生理盐水、aisever细胞保存液, 红细胞悬液、待检血清。
1.1.3 仪器
天平、离心机、恒温箱、冰箱、微型振荡器、微量移液器、吸头、96V孔型血凝反应板。
1.2 操作方法
1.2.1 鸡新城疫红细胞血凝 (HA) 试验
(1) 1%鸡红细胞悬液配制 采取健康成年鸡血液放入阿氏液内, 混合均匀, 吸取血液加入刻度离心管中, 经2000r/min离心4min, 用吸管吸出上清液和沉淀于红细胞上层白细胞薄膜, 在沉淀的红细胞加生理盐水充分混匀, 如此反复洗涤3次, 以2000r/min离心5min, 弃去上清液, 将离心后的细胞按刻度或吸取一定量, 加入生理盐水配成1%的红细胞悬液。
(2) (HA) 试验 在96V孔型微量血凝反应板上, 自第1孔至第12孔每孔加入50μL生理盐水, 之后在第1孔中加入抗原50μL, 充分混合后移出50μL至第2孔, 依次类推倍比稀释至第11孔, 吸取50μL弃去, 设12孔为红细胞对照。然后在每孔中各加入1%红细胞悬液50μL, 在微型振荡器上振荡1min, 放室温20℃30min, 待阴性对照孔红细胞全部沉淀后, 倾斜观察结果。
(3) 结果判定:以沿着倾斜面向下呈线状流动者为沉淀, 表明红细胞完全或不完全被病毒凝集 (+) 。如果孔底的红细胞铺平孔底凝成均匀薄层, 倾斜后红细胞不流动, 说明红细胞被病毒所凝集, (++++) 。第十二孔为血球对照应不凝集。
1.2.2 鸡新城疫红细胞微量血凝抑制 (HI) 试验
以微量法测试待检血清中的新城疫病毒血凝抑制抗体效价。
(1) 待检血清 10只待检鸡群编号登记, 用消毒过的干燥注射器翅V采血, 注入洁净干燥的试管内, 在室温静置或离心, 待血清析出后使用, 每只鸡更换一个注射器, 严禁交叉使用。
(2) 4个血凝单位抗原配制 根据鸡红细胞完全凝集的抗原最大稀释度为该抗原的血凝滴度, 计算出含4个血凝单位的抗原浓度, 按公式:抗原应稀释倍数=血凝滴度/4, 以生理盐水制出4个单位病毒, 置4~8℃保存, 待用。
(3) (HI) 微量法试验步骤 用移液器向每孔加50μL稀释液。第11孔和第12孔分别为4U病毒和待检血清对照。之后用移液器吸取被检血清50μL注入第1孔, 抽放6次后, 吸取50μL, 注入第2孔如此连续稀释至10孔, 并从10孔吸取50μL弃去, 每孔再加入已标定好的4个单位病毒液50μL, 第11孔为红细胞对照孔, 不加病毒, 置振荡器上振荡1~2 min, 放置18~22℃静置20min后每孔再加入0.1%红细胞悬液50μL, 放振荡器上振荡1~2min置22℃30 min, 待4个单位病毒已凝集红细胞观察结果。
(4) 结果判定:从表2结果看到, 以完全抑制凝集的血清最大稀释度为该血清的滴度, 既血凝抑制 (HI) 价。11孔的红细胞对照应为完全不凝集, 12孔病毒对照应为完全凝集。
2 结果与分析
2.1 新城疫病毒的血凝 (HA) 价
由表1结果可见, 该新城疫病毒的凝集价为1:64, 病毒抗原作为64/4=16倍的稀释液。
2.2 待检血清的新城疫病毒血凝抑制 (AI) 价
由表2可见, 第11孔为仅含稀释液和红细胞不凝集对照孔, 第12孔含稀释液, 病毒液和红细胞为凝集对照孔。各待测血清的10只鸡抗新城疫病毒血清血凝抑制平均值水平在4 (log2) , 说明该鸡群产生免疫抗体。
3 讨论