功能抗体（共8篇）
功能抗体 篇1
摘要：目的:比较CD44两株功能抗体HI313及HI44a的特性。方法:对HI313和HI44a进行亲和力检测和竞争抑制分析。结果:THP-1、KG1a细胞与HI313相对亲和力分别为0.180 2μg/mL和0.200 7μg/mL, 与HI44a的相对亲和力分别为0.525 1μg/mL和0.883 3μg/mL。HI44a与HI313识别不同抗原表位。结论:HI313、HI44a是两株具有高亲和力的小鼠抗人CD44功能抗体, 为后期基因工程改造和治疗性基因抗体的生产提供了选择。
关键词：CD44,白血病,抗体
近年来, 由于肿瘤干细胞被认为是肿瘤发生转移的一个重要因素, 而成为研究的一个热点, 研究表明CD44可能是肿瘤干细胞归巢的一个重要黏附分子而得到关注[1], HI313及HI44a同为协和干细胞公司研发的CD44的两株功能抗体。研究发现HI313具有体外抑制白血病细胞系NB4增殖的能力, 并证实了此作用与G0/G1期阻滞相关, 体外检测发现HI313对AML原始细胞有促分化作用[2]。CD44单克隆抗体HI44a (IgG2a) 能够有效诱导急性髓性白血病人M2-M5亚型细胞的分化及凋亡, 抑制白血病细胞系THP-1增殖, 并且诱导其凋亡[3]。本文对两株抗体进行了比较, 目的在于比较二者的特性, 为后期基因工程改造和治疗性基因抗体的生产提供选择。
1 材料与方法
1.1 材料
HI313、HI44a抗体由协和干细胞公司制备, 胰化蛋白胨、酵母提取物购于英国ΜNIPATH公司;琼脂糖购自Biowest;琼脂购自GIBCO分装;SDS购自AMRESCO分装;FBS (胎牛血清) 购自川页生物制品公司;氨苄青霉素购自上海生工生物工程有限公司。
1.2 方法
1.2.1 HI313与HI44a亲和力检测
分别取HI313、HI44a抗体纯品, 经1∶2倍稀释, 起始浓度为10 μg/mL, 至最低浓度为0.007 5 μg/mL;于上述各管中加入生长状态良好的KG1a或THP-1细胞, 浓度为5×105 个/管, 混匀, 避光孵育20 min, 加PBS洗1次;加入FITC标记的羊抗鼠免疫球蛋白抗体, 避光孵育20 min, 加PBS洗1次;PBS重悬细胞200 μL, FACS Calibur检测, 以Graph Pad Prism 5软件分析。
1.2.2 HI313与HI44a的竞争抑制分析
加入生长状态良好的KG1a细胞约106 个/管;按不同实验组加入HI313-FITC与HI44a-PE, 分先后不同顺序加入组、同时加入组、相应单独加入的阳性对照组、空白对照组, 共6组;混均避光孵育20 min后, 加PBS混匀, 洗1次;PBS重悬细胞200 μL, FACS Calibur检测, 以Graph Pad Prism 5软件分析。
2 结果
2.1 HI313与HI44a的亲和力
THP-1和KG1a均表达CD44抗原, THP-1和KG1a的CD44平均阳性率分别为57.80 % 和97.09 %, 是两株CD44表达水平差异较大的细胞系。根据这两株细胞系与不同浓度的HI313和HI44a反应测得的平均荧光强度, Graphpad作图, 可以得到IC50, 代表HI313与HI44a抗体的相对亲和力。通过THP-1和KG1a细胞检测的HI313相对亲和力分别为0.180 2 μg/mL和0.200 7 μg/mL, 相当于标准浓度单位为1.2 nM和1.34 nM (图1) 。HI44a的相对亲和力分别为0.525 1 μg/mL 和0.883 3 μg/mL, 相当于标准浓度单位为3.5 nM和5.89 nM (图2) 。
2.2 HI313与HI44a竞争抑制分析
实验结果可看出, HI44a与HI313虽同为抗人CD44单克隆抗体, 两者先后或同时与KG1a细胞作用后, 最先与细胞结合的那个抗体的结合率始终不发生变化。表明后加的抗体没有结合在先加的抗体表位上, 即HI44a与HI313识别不同抗原表位。
3 讨论
人CD44抗原是兼具黏附作用和信号传导作用的分子, 是一个潜在的优秀药物作用靶点。我们研制的HI44a和HI313是两株小鼠抗人CD44单克隆抗体, 2004年对于HI44a抗体的研究已有报道。对于治疗性抗体来说, 抗体的亲和力是一个重要参数, 抗体亲和力高, 有助于降低到达肿瘤部位抗体用量和降低不良反应。本文对HI313抗体进行了系统的研究, 首先从其亲和力入手, 通过两株CD44表达水平差异较大的细胞系:THP-1和KG1a进行平行实验, 得到了相似的结果, HI313的相对亲和力水平为1.2~1.34 nM, HI44a的相对亲和力水平为3.5~5.89 nM是一株具有相当高亲和力的抗体, 这是后续进行基因工程改造, 开发抗体药物的重要基础。
白血病难以治愈的另一个主要原因是由于存在只占0.01 %~4 %的白血病干细胞。白血病干细胞具有极强的自我更新能力, 寻找与自我更新相关的细胞表面标志物应该是研制针对肿瘤干细胞药物的重点方向。目前已知, 干细胞的自我更新需要特定的微环境, 其一系列的迁移定位活动都离不开细胞与胞外基质的相互作用。CD44是细胞表面的一种重要黏附分子, 参与很多细胞-胞外基质的相互作用[4]。研究发现一株抗CD44抗体H90可彻底治愈AML连续移植的NOD-SCID小鼠, 解决了经常发生的复发病人难以治愈的情况, 此过程中发现抗体除了抑制AML白血病细胞增殖外, 更为重要的是发现抗体可改变肿瘤干细胞途径阻止其归巢, 并且对正常的干细胞没有影响[5]。根据现有研究推测, 在选择性清除白血病干细胞, 阻止其归巢的方面, HI313、HI44a及H90可能具有类似的功能。
综上所述, 由于CD44分子本身的生物学功能特性, 决定了其可能成为一个治疗急性髓系白血病的优秀药物靶点, 现有研究表明HI313、HI44a是两株具有高亲和力的小鼠抗人CD44功能抗体, 我们还需进一步深入细致地研究比较HI313、HI44a抗体对于白血病治疗方面的可能途径和机制。
参考文献
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“抗原—抗体知识”盘点 篇2
关键词 抗原—抗体 知识 盘点
·G633.91
1 抗原（antigen）：是指一种能刺激人或动物机体产生抗体或致敏淋巴细胞，并能与这些产物在体内或体外发生特异性反应的物质。打个比方：抗原一般是侵入机体的病原微生物或者机体病变的、非正常的成分，是侵略者。
1.1 抗原包括免疫原性和反應原性。免疫原性又称为抗原性，是指能够刺激机体形成特异抗体或致敏淋巴细胞的能力。反应原性是指能与由它刺激所产生的抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应。具备免疫原性和反应原性两种能力的物质称为完全抗原，如病原体、异种动物血清等。只具有反应原性而没有免疫原性的物质，称为半抗原，如青霉素、磺胺等。半抗原没有免疫原性，不会引起免疫反应。但在某些特殊情况下，如果半抗原和大分子蛋白质结合以后，就获得了免疫原性而变成完全抗原，也就可以刺激免疫系统产生抗体和效应细胞。在青霉素进入体内后，如果其降解产物和组织蛋白结合，就获得了免疫原性，并刺激免疫系统产生抗青霉素抗体。当青霉素再次注射人体内时，抗青霉素抗体立即与青霉素结合，产生病理性免疫反应，出现皮疹或过敏性休克，甚至危及生命。
1.2 抗原的基本性质具有异物性、大分子性和特异性。
1.2.1 异物性：指进入机体组织内的抗原物质，必须与该机体组织细胞的成分不相同。抗原一般是指进入机体内的外来物质，如细菌、病毒、花粉等；抗原也可以是不同物种间的物质，如马的血清进入兔子的体内，马血清中的许多蛋白质就成为兔子的抗原物质；同种异体间的物质也可以成为抗原，如血型、移植免疫等；自体内的某些隔绝成分也可以成为抗原，如眼睛水晶体蛋白质、精细胞、甲状腺球蛋白等，在正常情况下，是固定在机体的某一部位，与产生抗体的细胞相隔绝，因此不会引起自体产生抗体。但当受到外伤或感染，这些成分进入血液时，就像异物一样也能引起自体产生抗体，这些对自体具有抗原性的物质称为自身抗原，所产生的抗体称为自身抗体。由于自身抗体与自身抗原发生反应，于是就引起自身免疫疾病，如过敏性眼炎、甲状腺炎等。机体其它自身组织的蛋白可因电离辐射、烧伤、某些化学药品和某些微生物等理化和生物因素的作用发生变性时，也可成为自身抗原，引起自身免疫疾病，如红斑狼疮病、白细胞减少病、慢性肝炎等。
1.2.2 大分子性：指构成抗原的物质通过是相对分子质量大于10000的大分子物质，分子量越大，抗原性越强。绝大多数蛋白质都是很好的抗原。为什么抗原物质都是大分子物质呢？这是因为大分子物质能够较长时间停留在机体内，有足够的时间和免疫细胞（主要是巨噬细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞）接触，引起免疫细胞作出反应。如果外来物质是小分子物质，将很快被机体排出体外，没有机会与免疫细胞接触，如大分子蛋白质经水解后成为小分子物质，就失了抗原性。
1.2.3 特异性：指一种抗原只能与相应的抗体或效应T细胞发生特异性结合。抗原的特异性是由分子表面的特定化学基因所决定的，这些化学基团称为抗原决定簇。抗原以抗原决定簇与相应淋巴细胞的抗原受体结合而激活淋巴细胞引起免疫应答。特异性取决于抗原物质表面具有的某些特定的化学基团，这些化学基团叫做抗原决定簇，它是免疫细胞识别抗原的重要依据。各种抗原的决定簇数目不同，如白喉类毒素有8个抗原决定簇，流感病毒有40多个抗原决定簇。抗原决定簇大多存在于抗原的表面，但也有隐藏在抗原内部的，如牛血清蛋白的抗原决定簇多于18个，但只有6个暴露在抗原表面。隐藏在抗原分子内部的抗原决定簇一般是无功能的。抗原分子在酶的作用下，使内部的抗原决定簇暴露出来，才能发挥抗原决定簇的作用。换言之，淋巴细胞表面的抗原识别受体通过识别抗原决定簇而区分“自身”与“异己”。
1.2.4 相对性：抗原特异性是相对的，为什么呢？因为自然界中存在许多共同抗原，这些抗原物质之间可能有共同的抗原决定簇，这种现象称为抗原交叉性或类属性。这些具有共同决定簇的抗原称为共同抗原或类属抗原。
2 抗体（antibody）： 机体在抗原物质刺激下，由B细胞分化成的浆细胞（效应B细胞）所产生的、可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白。打个比方：抗体是对付抗原的防御力量。因为有侵略者的入侵，才有抵抗侵略者的防御力量。19世纪末和20世纪初，科学家们在实验中发现，用细菌或其外毒素给动物注射，过一段时间后，该动物的血清中出现一些有防御作用的保护性成分。科学家们给这些血清成分起了不同的名称，如把能特异性中和外毒素毒性的成分称为抗毒素，把能使细菌发生特异性凝集的成分称为凝集素等。直到20世纪30年代，科学家们才把这些成分统一称为抗体。后来，科学家们又通过实验证实，抗体的化学本质是球蛋白。1964年，世界卫生组织举行专门会议，将具有抗体活性以及与抗体相关的球蛋白统称为免疫球蛋白（Ig）。如骨髓瘤蛋白，巨球蛋白血症、冷球蛋白血症等患者血清中存在的异常免疫球蛋白以及“正常人”天然存在的免疫球蛋白亚单位等。因而免疫球蛋白是结构及化学的概念，而抗体是生物学及功能的概念。可以说，所有抗体都是免疫球蛋白，但并非所有免疫球蛋白都是抗体。抗体的主要功能是与抗原（包括外来的和自身的）相结合，从而有效地清除侵入机体内的微生物、寄生虫等异物，中和它们所释放的毒素或清除某些自身抗原，使机体保持正常平衡，但有时也会对机体造成病理性损害，如抗双链DNA抗体、抗甲状腺球蛋白抗体等一些自身抗体的产生，对人体可造成危害。也就是说，抗体是机体受抗原刺激后产生的，并且能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。抗体主要分布于血清中，也分布于组织液及外分泌液中。
3 单克隆抗体（monoclonal antibody）即：单克隆抗体是由淋巴细胞瘤产生的：由一个B细胞分化增殖的子代细胞（浆细胞）产生的针对单一抗原决定簇的抗体，称为单克隆抗体。它最主要的优点在于化学性质单一，特异性强、灵敏度高、并可大量制备。
功能抗体 篇3
1 资料与方法
1.1一般资料
选择该院收治的糖尿病患者50例, 作为实验组, 男女比例为31∶19, 年龄在37~62岁之间, 平均年龄为 (48±5.62) 岁;同期选择健康体检者50例, 作为对照组, 男女比例28∶22, 年龄在40~65岁之间, 平均年龄为 (50±6.38) 岁;对照组体检者均已排除心脑血管疾病、肝肾疾病、糖尿病以及其他代谢性疾病。
1.2 诊断标准
实验组糖尿病患者的诊断标准与排除标准如下: 1诊断标准。空腹与餐后血糖检测, 血糖值均达到2001年世界卫生组织 (WHO) 颁布的关于糖尿病的诊断标准;患者均配合该研究, 询问病史及体格检查顺利完成。2排除标准。有糖尿病急性并发症;近期有手术史或较严重创伤史;存在有感染性疾病者;应用抗炎药物或免疫抑制剂者;有应激性高血糖、继发性糖尿病、1型糖尿病 (自身免疫性糖尿病) 或因其他自身免疫性疾病及内分泌疾病等因素导致的糖尿病者。
1.3 方法
1样本采集。两组均进行自身免疫抗体检测与肝肾功能检测, 受检者禁食8~12 h, 抽血前均停用药物1 d, 于第2天清晨空腹采集外周静脉血, 于抗凝管中混匀, 待血液凝固后分离血清。2仪器与试剂。自身免疫抗体检测应用条带酶免疫分析与免疫荧光法进行, 条带酶免疫分析时, 选择相配套适合的试剂盒。肝肾功能检测时, 选择某公司全自动生化分析仪, 根据肝肾功能检测指标的不同, 选择相对应试剂盒, BUN、CREA指标检测应用DiaSys (德赛) 试剂盒 , TBIL指标检测 , ALT、AST指标检测等均应用相适宜试剂盒等, 具体的检测步骤严格按照说明书进行[1]。
1.4 统计方法
计量资料以 (±s) 来表示, 计数资料用卡方 (χ2) 检验, 显著性检验采用t检验。
2 结果
2.1 自身免疫抗体阳性检出率分析
实验组50例糖尿病患者中, 自身免疫抗体阳性检出者27例, 占比54.00%, 作为实验A组, 自身免疫抗体阴性检出者23例, 占比46.00%, 作为实验B组;对照组自身免疫抗体检测均为阴性。实验组与对照组自身免疫抗体检测结果比差异有统计学意义 (P<0.05) 。
2.2 两组肝肾功能检测指标分析
通过对两组肝肾功能检测指标观察发现, 实验组肝肾功能指标较对照组相比, 均有明显的升高, 尤其是实验A组 (自身免疫抗体阳性者) 的CREA、ALT、AST、TBIL、BUN、TBA肝肾功能指标, 明显高于对照组, 组间比较差异具有统计学意义 (P<0.05) 。而实验A组与实验B组之间比较, 实验A组 (阳性组) 的TBA、CREA指标与实验B组 (阴性组) 比较差异有统计学意义 (P<0.05) , 见表1。
(±s)
3 讨论
随着人们饮食结构的不断改变, 中国糖尿病患者也呈逐年上升的趋势, 这种现象也引起了医学界的普遍重视, 各专家学者们期望通过对糖尿病的深入研究, 探寻主要的致病因素及其对身体的诸多危害, 从而采取积极、有效的措施, 从早期加强干预处理, 以控制病情, 提高糖尿病患者的生活质量。通过目前医学界对糖尿病的流行病学、血清学、病理学等多方面研究发现, 糖尿病的发病与自身免疫抗体有着极为密切的关系。若糖尿病患者自身免疫抗体检测呈阳性, 则表明患者大多存在自身免疫疾病, 自身免疫疾病主要指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病。而这些自身免疫性疾病很容易导致多器官损害, 往往累及关节、浆膜、皮肤、肾脏、中枢神经系统等等[2,3]。
在该研究中, 发现实验组糖尿病患者中, 自身免疫抗体检测阳性者伴有较为严重的肝、肾损害, 因此, 也证实了自身免疫抗体的存在的确会对多器官造成损害。临床上关于糖尿病伴有肝肾损害的报道也很多, 大多数专家学者认为, 糖尿病导致肝肾损害的机制可能与如下两点有关: 1糖尿病患者大多存在脂质代谢紊乱的现象, 而高血脂又容易对肝脏造成损伤, 因此便容易因脂质代谢紊乱引起糖尿病相关肝肾功能损害。2糖尿病患者大多有胰岛素相对不足或绝对不足的现象, 当患者长时间处于高血糖状态时, 容易造成大量肝糖原沉积, 而肝糖原沉积量太多, 容易使肝细胞肿胀、肝细胞代谢障碍, 最终引起肝肾组织损害[4]。
正常人群中抗胰岛细胞抗体 (1CA) 的阳性率仅仅是0.5%~1.7%左右, 而糖尿病患者抗胰岛细胞抗体阳性率却高达5%以及以上。抗胰岛素细胞抗体 (1CA) 属IgG免疫蛋白, 血清中ICA阳性说明有针对胰岛细胞的自身免疫反应存在, 这种反应的结果会导致b细胞的广泛破坏而促发糖尿病, 由此也提示糖尿病与自身免疫有关。此外, 糖尿病患者或其亲属常伴有其他自身免疫性疾病, 例如原发性甲状腺机能减退、慢性淋巴性甲状腺炎、重症肌无力、恶性贫血、原发性肾上腺皮质机能减退等疾病, 均与患者的自身免疫抗体阳性有着。因此, 若糖尿病患者并发自身免疫抗体疾病, 则容易在两病互相作用下, 加重肝肾功能损害, 给患者的生命安全带来威胁。因此, 也提示临床在诊治糖尿病时, 重视对患者自身免疫抗体与肝肾功能的检测, 规避因自身免疫抗体阳性导致的肝肾功能损害, 促进治疗效果[5,6]。
综上所述, 糖尿病自身免疫抗体阳性患者肝肾功能损伤程度, 明显比糖尿病自身免疫抗体阴性患者肝肾功能损伤程度要高, 提示自身免疫抗体阳性与糖尿病患者肝肾功能损害有密切关系。因此, 临床医生需提高对糖尿病患者自身免疫抗体与肝肾功能指标的检测, 做到早查出、早治疗, 以便能促进糖尿病患者的临床治疗效果, 并为进一步提高患者的生存率奠定基础。
参考文献
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功能抗体 篇4
1 育龄期及妊娠期妇女甲状腺自身抗体状况
育龄期、妊娠期及甲状腺功能紊乱者AT-Ab阳性率有一定的差异。研究表明, 约10%以上正常育龄妇女AT-Ab阳性, 有报道育龄妇女血清TPO-Ab阳性率为12.97%、TG-Ab阳性率为11.22%、TPO-Ab和TG-Ab阳性率为16.95%[1]。妊娠期TPO-Ab和TG-Ab随妊娠进程呈下降趋势, 分娩后反跳性增高[2];对1017例孕妇检测发现, TPO-Ab由妊娠早期8.4%降至晚期6.5%[3]。但也有报道妊娠期与非妊娠期AT-Ab无差别者, 如490例中晚期妊娠者TPO-Ab阳性率11.0%、TG-Ab阳性率13.1%, 而非妊娠者TPO-Ab阳性率9.5%、TG-Ab阳性率13.5%, 两组差异无统计学意义[4]。甲状腺功能异常孕妇AT-Ab阳性率较高, 如有研究表明甲状腺功能紊乱组孕妇TPO-Ab阳性率84%, 非紊乱组孕妇阳性率11.0%[5]。
2 甲状腺自身抗体与不孕和不良妊娠结局
2.1 不孕
多数学者认为不孕妇女TPO-Ab阳性率远高于健康妇女。Poppe等[6]发现子宫内膜异位症不孕者的TPO-Ab阳性率远高于生育功能正常者。Janssen等[7]发现多囊卵巢综合征不孕者TPO-Ab和TG-Ab阳性率远高于正常生育者。Poppe等[8]发现行人工辅助生殖技术 (ART) 妇女TPO-Ab阳性率达18%, 对照的同龄经产妇阳性率为8%, 差异有统计学意义。而Abalovich等[9]提出, 行ART的不孕妇女AT-Ab阳性率与未行ART的妇女差异无统计学意义。结论不一致可能与研究人群及不孕的原因不同有关。
2.2 自然流产
最早Stagnaro-Green等[10]在研究552例孕妇产后甲状腺炎患病情况时偶然发现AT-Ab与自然流产有关, 自然流产发生率TPO-Ab或TG-Ab阳性者为17%, 而阴性者仅8.4%。Bagis等[11]研究876例孕妇, 从孕12周至产后1年, AT-Ab阳性者占12.4%, 抗体阳性者50%有流产史, 抗体阴性者14.1%有流产史。Poppe等[12]研究234例不孕并第1次接受ART者, AT-Ab阳性率为14%, 抗体阳性组流产率53%, 抗体阴性组流产率23%。董丽等[13]研究认为, AT-Ab阳性孕妇流产率为62.5%, 明显高于整个研究对象18.3%的流产率。上述研究从不同方面说明, AT-Ab与自然流产有一定的关系, 抗体阳性孕妇自然流产危险性显著增加。也有研究不支持以上结果, 如Muller等[14]尽管发现TPO-Ab阳性组流产率 (33%) 稍高于TPO-Ab阴性组 (19%) , 但差异无统计学意义。
2.3 复发性自然流产 (RSA)
Dendrinos等[15]发现, RSA组AT-Ab阳性率为37%, 显著高于正常对照组13%。高金瑜等检测100例有RSA史的非孕健康妇女及100例有正常妊娠史、无不良妊娠史非孕健康妇女, 前者血清TPO-Ab和TG-Ab阳性率分别为28%和24%, 明显高于后者的6%和4%。玄英华等[16]对80例RSA患者与40例健康育龄妇女对照, RSA妇女AT-Ab总阳性率为33.8%, 明显高于正常妇女组10.0%;RSA组中TPO-Ab和TG-Ab阳性率分别为25.0%和18.8%, 均显著高于正常妇女组7.5%和5.0%。上述研究表明, RSA与AT-Ab有一定的关系, AT-Ab阳性、有RSA史的孕妇再次妊娠流产风险显著增高。
2.4 早产
Ghafoor等[17]评估1500例孕妇妊娠结局与TPO-Ab的关系时发现, TPO-Ab阳性孕妇26.8%早产, TPO-Ab阴性孕妇8%早产, 差异有统计学意义。Stagnaro-Green等[18]检测953例孕妇, TG-Ab阳性者, 发生孕周<32周早产的危险性增加2.5倍;而TPO-Ab阳性增加孕周<32周早产的危险性差异无统计学意义 (可能与样本量有关) 。上述研究提示, AT-Ab与早产相关, 但也有研究结论相反, 如Tierney等[19]发现自发性早产组的甲状腺功能和AT-Ab与足月组类似。AT-Ab与早产的因果关系有待研究证实。
2.5 其他不良妊娠结局
研究发现, AT-Ab与其他不良妊娠结局, 如死胎、子痫前期、低出生体重儿、智力发育缺陷等有关。Mecacci等[20]研究69例有早期胚胎丢失、胎儿死亡及子痫前期而甲状腺功能正常者, AT-Ab阳性率分别为37.9%、40.9%和33.3%, 高于对照组14.5%。Roti等[21]发现妊娠早期TPO-Ab阳性孕妇, 即使甲状腺功能在正常范围, 其胎儿亦有可能发生智力发育缺陷, 且其低出生体重儿发生率及妊娠期流产、早产发生率均有所上升。李元宾等[22]筛查1268例妊娠16~20周妇女获得甲状腺功能正常且TPO-Ab阳性者34例, 按1∶2比例选择同批甲状腺功能正常且TPO-Ab阴性的同孕龄妇女作对照, 结果显示TPO-Ab阳性母亲的后代智力评分和运动评分均明显低于对照组。
3 发病机制
虽然许多研究证实单纯AT-Ab阳性者与不良妊娠结局之间存在关联, 但其发病机制、与不良妊娠结局之间的因果关系尚不清楚。目前有3种假说。第1种假说———“潜在的甲状腺免疫功能异常”:AT-Ab升高者可能存在潜在的免疫功能异常, AT-Ab只是一种异常免疫状态标志, 流产或早产等不良妊娠并不直接和AT-Ab相关, 而异常的免疫状态可能导致不稳定的植入过程。第2种假说———“甲状腺激素亚临床阶段或轻微不足”:尽管甲状腺功能未表现异常, 但甲状腺可能已受损害, 仅处于亚临床阶段, 或甲状腺免疫异常人群有轻微的甲状腺激素不足, 尤其在妊娠对甲状腺激素需求增加的情况下, 轻微的甲状腺激素不足即可显示效应。尽管妊娠早期TPO-Ab阳性孕妇甲状腺功能在正常范围, 但随着孕周增加, 甲状腺功能状态会发生轻微的改变, 促甲状腺激素 (TSH) 升高, 游离甲状腺素呈现降低的趋势, 尽管这些指标测定值尚在目前认可的范围, 但就是这样的细微改变, 导致流产和早产的危险性明显增加[22]。第3种假说———“甲状腺抗体影响胎盘功能”:妊娠期胎儿细胞经胎盘转移到母体甲状腺的微嵌合状态, 可能导致甲状腺抗体对胎盘反应性增高, 出现胎盘功能降低, 或甲状腺抗体影响了胎盘激素, 如人绒毛膜促性腺激素及人绒毛膜促甲状腺激素, 甲状腺抗体可能通过对胎盘的直接作用而阻碍妊娠过程, 导致流产、死胎等不良妊娠结局[20,23]。鼠类实验模型中, 注射人TG的小鼠出现抗甲状腺抗体, 小鼠甲状腺无病理改变, 甲状腺功能正常, 但胚胎吸收率增加, 胎盘及胚胎重量减轻均较对照组明显;胎盘组织中发现抗体, 胚胎组织中未发现抗体, 推测抗体可能直接导致胎盘损害[24]。
4 防治
对AT-Ab阳性而甲状腺功能正常的妇女, 国外应用静脉注射免疫球蛋白, 泼尼松与阿司匹林联合, 以及应用左旋甲状腺素等治疗单纯的甲状腺自身免疫异常, 可提高妊娠率, 降低流产、早产和死胎风险。
Reznikoff-Etievant等[25]应用泼尼松与阿司匹林治疗妊娠成功率为84.6%, 用小剂量免疫球蛋白治疗妊娠成功率为95%。Stricker等[26]报道36例自身免疫因素导致的复发性流产, 其中53%AT-Ab阳性, 静脉注射免疫球蛋白, 用药26~30周妊娠成功率为95%, 用药10~12周妊娠成功率为75%, 明显高于拒绝用药组, 方法在准备妊娠2周内给予免疫球蛋白200mg/kg, 成功妊娠后同样剂量, 每月1次, 直到孕26~30周。
Vaquero等[27]比较16例自身免疫因素导致的RSA患者接受甲状腺片治疗和11例接受静脉注射免疫球蛋白治疗的效果, 有效率前者81%优于后者55%。Negro等[28]对115例TPO-Ab阳性孕妇中的57例给予左旋甲状腺素片, 另外58例未治疗, 并与甲状腺功能正常且抗体阴性的孕妇比较, 治疗组早产率低于未治疗组, 治疗组和抗体阴性组早产率类似, 剂量根据初始促甲状腺素水平或TPO-Ab滴度确定, 一旦开始要持续整个妊娠过程。高金瑜等对于AT-Ab阳性再次复查后仍然阳性者, 在准备妊娠前3个月开始使用泼尼松和阿司匹林治疗, 已取得数例成功的报道。
功能抗体 篇5
前期研究发现, 针对NCX α-2 重复序列 (815 TFASKVAATQDQYADASIGNVTGSN 839) 的抗体可以促进心脏收缩及舒张, 然而, 针对NCX α-1重复序列的抗体对心功能影响的研究至今仍未见报道。本研究用化学合成的α-1肽段主动免疫大鼠获得抗血清, 经亲和纯化后, 观察其对成年大鼠离体心脏心功能的影响。此外, 利用全细胞膜片钳技术, 观察了该抗体对心肌细胞钠-钙交换电流的效应。
1 材料与方法
1.1 实验动物
选取2月龄 (体重180 g ～220 g) 健康Wistar大鼠, 用于免疫和抗体制备;选取成年大鼠 (体重240 g～260 g) , 用于离体心功能观察及膜片钳实验。所用大鼠全部由山西医科大学实验动物中心提供。
1.2 药品与试剂
α-1 (117-137) 肽段 (钠-钙交换体第117-137位氨基酸残基, 其序列为SVIEVCGHNFTAGDLGPSTIV) 由西安美联生物科技有限公司合成, 经高压液相色谱和质谱分析, 合成肽纯度高于95%。牛磺酸、哇巴因、尼卡地平、L-谷氨酸、ethylene glycol-bis-N, N, N, N'-tetra acetate (EGTA) 购自美国Sigma公司;胶原酶P 购自德国Bochringer Mannhein 公司;IgGs亲和层析纯化试剂盒MAbTrap Kit购自瑞典Amersham Pharmacia Biotech公司;HEPES 购于北京化学试剂厂;其余均为国产分析纯产品。
1.3 仪器
酶标仪购自美国 Molecular Devices, BL-420生物信号采集处理系统购自成都泰盟科技有限公司, Axopatch 200B 膜片钳放大器购自美国 Axon Instruments。
1.4 抗体的制备及纯化
参照文献[5]方法。选取体重180 g～220 g的抗α-2抗体阴性、健康Wistar大鼠40只, 雌雄不限, 随机分为对照组 (n=15) 、免疫组 (n=25) 。首次免疫给予抗原溶液和等体积的福氏完全佐剂的混合物。以后每隔2周进行一次加强免疫。对照组除用等体积生理盐水溶液替代抗原溶液, 余同免疫组。各组均于首次免疫前1 天和每次免疫后1 周, 分离血清并用间接ELISA法检测抗体滴度。取高效价抗血清利用MAbTrap Kit对抗血清进行纯化;采用Bradford蛋白定量法测定抗体的浓度[6]。
1.5 离体心功能检测
选取健康成年Wistar大鼠, 腹腔注射戊巴比妥钠 (50 mg/kg) 麻醉, 开胸迅速取出心脏, 放入预先用100%氧饱和的4 ℃台氏液, 用眼科镊轻轻提起主动脉将心脏连至Langendorff灌流装置经主动脉逆行恒压灌注, 灌流液为100%氧饱和的台氏液。心脏灌注平衡30 min 后, 通过BL-420生物信号采集处理系统记录左心室各项心功能指标, 包括左心室发展压 (LVDP) 、左心室压最大上升速率 (+dp /dtmax) 及最大下降速率 (-dp/dtmax) 。
1.6 心室肌细胞分离
选用健康成年Wistar大鼠, 体重240 g～260 g, 腹腔注射戊巴比妥钠 (50 mg/kg) 麻醉后迅速开胸取出心脏, 心肌组织经酶解变软后, 用眼科剪剪下置于Kraftbrühe (KB) 液中, 150 μm的不锈钢筛网过滤后, 室温保存至少4 h后备用。
1.7 钠-钙交换电流 (INa/Ca) 的记录
取1～2滴细胞悬液加入置于倒置显微镜上的细胞池, 用含钙台氏液灌流30 min, 灌流速度为1 ml/min～2 ml/min。玻璃微电极用玻璃毛坯经微电极拉制仪 (Narrishage PP-83, Japan) 分两步拉制, 电极尖端充灌电极内液后, 电阻为2 MΩ～4 MΩ。镜下选择边缘整齐、表面光洁、横纹清晰、无收缩的细胞, 在25 ℃进行试验。利用三维微操纵器 (Narishige MO-203, Japan) 将电极轻轻移动至细胞表面, 施以负压使电极尖端和细胞膜之间产生高阻封接后, 补偿电极电容, 再以脉冲负压破膜, 进行膜电容补偿和串联电阻补偿后, 使用Axopatch 200A 膜片钳放大器和PCLAMP5.51 程序 (Axon Instruments, USA) 在电压钳模式下记录膜电流。数据分析采用pClamp9.0软件。
钠-钙交换交换电流 (INa/Ca) 按Kimura 等描述的方法测定[7]。在全细胞记录模式下, 维持电压-40 mV, 斜坡电压脉冲从-120 mV以90 mV/s 的速率去极化至+60 mV。在细胞外液中加入尼卡地平1 μmol/L, 哇巴因20 μmol/L, BaCl2 1.0 mmol /L的情况下, 利用Ni2+阻断前、后的电流差, 即可得到Ni2+敏感的INa/Ca。
1.8 统计学处理
计量资料采用均数±标准差
2 结 果
2.1 抗体滴度及纯化效果检测 (见图1)
ELISA检测表明, 在进行首次免疫前, 对照组和肽段免疫组大鼠血清抗体滴度都较低, 且两组之间组间无统计学意义, 表明血清背景低, 适合用于目的肽段的免疫。在第三次加强免疫后一周, 免疫组抗体滴度呈明显升高;而对照组抗体平均滴度与免疫前相比无统计学意义。
亲和纯化后的抗血清在进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) 时仅有一条带出现, 分子量160 kDa, 与IgG标准品相一致。用Bradford法测得抗α-1抗体浓度为1.0 mg/mL。
2.2 抗钠-钙交换体α-1 (117-137) 抗体对心功能的影响 (见图2)
Langendorff离体心脏灌流结果表明, 与对照组相比, 在浓度为10 nmol/L、20 nmol/L和40 nmol/L 时, 该抗体可剂量依赖性地降低离体灌流大鼠LVDP、+dP/dtmax和-dP/dtmax, 表明抗钠-钙交换体α-1抗体不仅降低心肌的收缩力和减慢心肌收缩速度, 而且可以减慢心肌舒张。
2.3 抗钠-钙交换体α-1 (117-137) 抗体对钠-钙交换电流 (INa/Ca) 的影响 (图3)
选取+50 mV 的外向电流和-100 mV 的内向电流作为观测指标, 待电流稳定后开始给药测定。结果表明, 在10 nmol/L、20 nmol/L和40 nmol/L时, 抗α-1 (117-137) 抗体可剂量依赖性地减小外向和内向钠-钙交换电流。
注:A:钠-钙交换外向电流;B:钠-钙交换内向电流
3 讨 论
迄今为止, 已发现多种膜功能蛋白的抗体, 包括促甲状腺素受体抗体和胰岛素样生长因子受体抗体等对相应膜蛋白的功能均表现为抑制效应[8,9]。NCX家族成员分子间α重复序列的高度保守性, 提示其对该转运体的离子转运功能具有重要作用。关于NCX的化学计量学研究表明, 在大多数情况下, NCX转运Na+和Ca2+的比例为3 Na+:1 Ca2+[1], 因此从电荷的角度考虑, NCX是一种生电性转运体, 其电流方向与Na+ 的转运方向相一致。利用这一特性通过记录钠-钙交换电流就可反映NCX功能的改变。本研究以在NCX分子中α-1肽段作为抗原获取抗体, 通过膜片钳实验研究发现, 抗钠-钙交换体α-1 (117-137) 抗体无论是对内向NCX电流 (前向模式, Ca2+外排) 还是外向NCX电流 (反向模式, Ca2+内入) , 均表现出不同程度的抑制作用。表明抗α-1 (117-137) 抗体是一种抑制性抗体, 同时也进一步佐证了α-1肽段是NCX发挥其功能的关键部位。
Ca2+是参与心肌收缩和舒张的关键因子, 在细胞膜和细胞器膜众多的钙转运系统中, NCX是一种重要的钙转运蛋白。在心肌组织, 它与L型Ca2+通道和肌膜钙泵共同组成了肌膜上的Ca2+转运系统, 但与后两者不同的是, NCX的离子转运具有双向性, 即存在前向模式 (Na+入胞, Ca2+外排) 和反向模式 (Ca2+入胞, Na+外排) 两种模式。在静息状态及动作电位大部分时间, NCX主要通过前向模式外排Ca2+, 在维持细胞Ca2+稳态过程中具有不可替代的作用;由反向NCX产生的Ca2+内入主要发生在动作电位极早期, 但关于其在生理情况下心肌钙瞬变和兴奋-收缩耦联过程中所起的作用仍存在争议[10]。本研究发现, 针对钠-钙交换体α-1重复序列的抗体对心脏收缩和舒张功能均表现为抑制效应, 且这一效应与抑制心肌钠-钙交换活动有关, 这就进一步支持NCX不仅通过前向模式外排Ca2+而参与心肌舒张, 还通过反向模式的NCX介导的Ca2+内入而参与心肌收缩, 从而为进一步阐明NCX在生理情况下心脏活动中的作用提供了实验依据。
研究表明, 在心力衰竭、缺血-再灌注损伤等病理状态下, NCX通过反向模式参与了心肌细胞钙超载及与此有关的心律失常的发生[11]。本研究所用的抗α-1重复序列抗体作为NCX的抑制性抗体, 有可能减轻心肌钙超载并可能对缺血-再灌注损伤具有潜在的治疗作用。关于其确切作用及机制, 尚需进一步研究。
摘要：目的 研究抗钠-钙交换体 (NCX) α-1 (117-137) 肽段抗体对离体灌流大鼠心脏活动的影响, 初步探讨其作用机制。方法 用合成的NCXα-1 (117-137) 重复序列肽段主动免疫大鼠获取抗体, 经纯化后通过Langendorff离体灌流装置观察其对心功能的效应;利用膜片钳系统观察抗体对单个心肌细胞钠-钙交换电流的影响。结果 免疫后大鼠体内抗α-1 (117-137) 抗血清滴度明显增加, 纯化后抗体浓度为1.0 mg/mL, 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳结果只显示一条带, 分子量与IgG标准品一致。在浓度为10 nmol/L2、0 nmol/L和40 nmol/L时, 该抗体可剂量依赖性地降低离体灌流心脏左室发展压 (LVDP) 、左室压最大上升/下降速率 (±dP/dtmax) 。进一步研究发现, 在10 nmol/L40 nmol/L浓度范围内, 抗NCXα-1抗体可剂量依赖性地抑制外向和内向钠-钙交换电流。结论 抗NCXα-1 (117-137) 抗体对心肌收缩和舒张均表现出抑制效应, 这一作用与其抑制钠-钙交换活动有关。
功能抗体 篇6
1 资料与方法
1.1 一般资料
收集该院妇科门诊共计100例妊娠期糖耐量异常孕妇, 再根据口服葡萄糖耐量试验结果分成二组, 妊娠期糖耐量受损组50人及妊娠糖尿病组50人。对照组为同期该院妇科门诊正常健康孕妇, 共50人。妊娠期糖耐量受损组平均年龄 (27.1±8.9) 岁, 孕周32.4±4.1;妊娠糖尿病组平均年龄 (28.3±7.5) 岁, 孕周31.9±5.1;对照组平均年龄 (26.8±7.9) 岁, 孕周33.1±2.8;3组人员年龄、孕周, 差异无统计学意义。所有研究对象均签定知情同意书, 保密知情书, 通过医院伦理道德委员会的批准、核实。
1.2 入选标准
(1) 就诊时临床资料, 治疗经过完整。 (2) 妊娠期糖耐量受损及妊娠糖尿病诊断符合中华医学会内分泌学分会关于妊娠期糖耐量受损及妊娠糖尿病的诊断与鉴别诊断[4]。
1.3 排除指标
(1) 入院时生命体征不平稳的患者。 (2) 入院有各种急性、慢性感染, 严重肝、肾功能不全, 恶性肿瘤, 自身免疫性疾病者、药物有过敏、恶性心律失常者及反复流产史者 (3) 有肥胖、糖尿病史、反复霉菌性阴道炎史
1.4 研究方法
患者来该院诊治时, 采集所有研究对象5 m L空腹静脉血, 抽血时间在凌晨8点。血样抗凝, 放入离心机内, 3000转/min, 离心10 min, 去除上清液, 取下层血浆, 置-15℃冷冻冰箱统一保存。用罗氏公司A180免疫分析仪检测TGAb、TPOAb。T3、T4、FT3、FT4、TSH含量用纳斯达化学检测仪。
1.5 评价标准
比较妊娠期糖耐量受损组、妊娠糖尿病组与对照组TGAb、TPOAb阳性率以及T3、T4、FT3、FT4、TSH水平。
1.6 统计方法
将资料录入SPSS18.0软件。所有计量资料符合正态分布, 采用均数±标准差 (x±s) 描述, 三组间比较采用ANOVA单因素方差分析, 方差齐者用L-S-D法检验, 方差不齐者用Game S-Howenll法。计数资料采频数描述, 用χ2检验法。P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 妊娠期糖耐量受损组、妊娠糖尿病组及对照组TGAb、TPOAb阳性率比较
妊娠期糖耐量受损组、妊娠糖尿病组及对照组TGAb、TPOAb阳性率分别为 (4%、3%) vs (11%、14%) vs (1%、1%) , 差异有统计学意义 (χ2=12.9、11.1, P<0.05) , 见表1。
2.2 妊娠期糖耐量受损组、妊娠糖尿病组及对照组T3、T4、FT3、FT4、TSH水平比较
妊娠期糖耐量受损组、妊娠糖尿病组及对照组T3、T4、FT3、FT4、TSH水平分别为 (3.14±0.32、175.3±36.5、4.5±0.56、7.5±1.5、1.56±1.06) VS (3.15±0.36、172.9±34.2、4.6±0.68、6.8±1.8、1.55±1.03VS (3.16±0.32、170.6±33.2、4.4±0.69、5.6±0.9、1.52±1.09) , 三组间FT4相比较, 差异有统计学意义 (F=5.9, P<0.05) , 三组间T3、T4、FT3、TSH水平相比较, 差异无统计学意义 (F=0.03、0.023、0.052、0.35, P>0.05) , 见表2。
3 讨论
甲状腺激素为氨基酸衍生物, 有促进新陈代谢和发育, 提高神经系统的兴奋性;呼吸, 心律加快, 产热增加。当人遭遇危险而情绪紧张时首先会刺激下丘脑释放促甲状腺激素释放激素, 血液中这一激素浓度的增高会作用于腺垂体促进其释放促甲状腺激素, 即提高血液中促甲状腺激素的含量, 促甲状腺激素进一步作用于甲状腺, 使其腺细胞分泌量增加, 即分泌大量的甲状腺激素。对于胎儿来说, 甲状腺激素是胎儿神经发育的必需激素, 研究指出[5]呆小症、胎儿神经系统发育异常都和甲状腺激素有关。在妊娠早、中、晚期, 甲状腺素主要来自于母亲。故孕妇在妊娠期间对胎儿提供充足的甲状腺素对胎儿生长非常重要。妊娠后导致体内运输激素的蛋白发生改变, 脑垂体前叶TSH和TRH共同作用引起甲状腺组织增生, 新生腺泡增多, 促使甲状腺素 (T3、T4) 合成, 刺激肝脏合成甲状腺结合球蛋白。研究[6]指出当TSH正常范围时, 低FT3、FT4血症可导致孕妇甲状腺功能减退的状态。该研究发现TSH在三组中均属于正常范围, FT4每组见有所差异, FT4含量随着糖耐量受损程度而变化, 以妊娠糖尿病组含量最低。可能与胰岛素分泌不足影响甲状腺素分泌有关[7]。目前研究指出低FT4血症可使胎儿的神经系统发育受到损害。
此外该研究还发现妊娠期糖耐量异常孕妇出现甲状腺自身抗体阳性比正常孕妇高, 可能是由于两种疾病有着共同的免疫学, 血清抗甲状腺球蛋白抗体和抗甲状腺过氧化物酶抗体可能共同参与糖尿病与甲状腺自身免疫疾病的发病机制, 两者互相影响[8]。研究[9,10]也证实了甲状腺自身抗体与习惯性流产、妊娠甲状腺功能减退更加威胁到母体及胎儿的健康。
综上所述, 妊娠期糖耐量异常孕妇甲状腺功能异常的风险较高, 对妊娠期糖耐量异常孕妇进行甲状腺自身抗体及甲状腺功能检测对孕妇有一定临床价值。
摘要：目的 探讨妊娠期糖耐量异常孕妇的甲状腺功能及甲状腺自身抗体的变化。方法 收集该院妇科门诊2013年4月—2014年8月共计100例妊娠期糖耐量异常孕妇, 再根据口服葡萄糖耐量试验结果分成二组, 妊娠期糖耐量受损组50人及妊娠糖尿病组50人。对照组为同期该院妇科门诊正常健康孕妇, 共50人。检测并比较TGAb、TPOAb、阳性率以及T3、T4、FT3、FT4、TSH。结果妊娠期糖耐量受损组、妊娠糖尿病组及对照组TGAb、TPOAb阳性率分别为 (4%、3%) vs (11%、14%) vs (1%、1%) , 差异有统计学意义 (χ2=12.9、11.1, P<0.05) ;妊娠期糖耐量受损组、妊娠糖尿病组及对照组T3、T4、FT3、FT4、TSH水平分别为 (3.14±0.32、175.3±36.5、4.5±0.56、7.5±1.5、1.56±1.06) VS (3.15±0.36、172.9±34.2、4.6±0.68、6.8±1.8、1.55±1.03) VS (3.16±0.32、170.6±33.2、4.4±0.69、5.6±0.9、1.52±1.09) , 三组间FT4差异有统计学意义 (F=5.9, P<0.05) , 三组间T3、T4、FT3、TSH水平差异无统计学意义 (F=0.03、0.023、0.052、0.35, P>0.05) 。结论 妊娠期糖耐量异常孕妇甲状腺功能异常的风险较高, 对妊娠期糖耐量异常孕妇进行甲状腺自身抗体及甲状腺功能检测对孕妇有一定临床价值。
关键词：妊娠期糖耐量异常,孕妇,甲状腺自身抗体,甲状腺功能
参考文献
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功能抗体 篇7
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取我院2008年10月~2010年10月收治的经临床判断为妊娠期糖尿病的高危孕妇90例(高危组),临床诊断为妊娠期糖尿病孕妇30例(糖尿病组),正常健康孕妇40例(对照组)。高危组孕妇经临床高危因素判断,主要指标包括肥胖、年龄、家族糖尿病史、反复霉菌性阴道炎、流产史、胎儿畸形及宫内死亡史等。90例高危组孕妇年龄(30.5±4.2)岁,孕周(27.3±4.4)周;妊娠糖尿病组30例孕妇均经口服糖耐量实验诊断,年龄(29.5±4.0)岁,孕周(26.8±4.8)周;对照组均为健康孕妇,年龄(28.8±4.3)岁,孕周(26.5±5.2)周。三组孕妇年龄、孕周等一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。
1.2 方法
全部孕妇均在知情同意的情况下,空腹采集静脉血液检测T3(三碘甲状腺原氨酸)、FT3(游离三碘甲状腺原氨酸)、T4(甲状腺素)、FT4(游离甲状腺素)、TSH(促甲状腺素)、TGAb(抗甲状腺球蛋白抗体),TPOAb(抗甲状腺过氧化物酶抗体)。其中,甲状腺抗体检测采用罗氏E170电化学发光免疫分析仪,T3、T4、FT3、FT4、TSH检测采用贝克曼DXI800微粒子化学发光分析仪,检测步骤完全按操作说明规范进行。其中抗体阳性标准为TGAb≥115 IU/ml,TPOAb≥34 IU/ml。
1.3 统计学处理
采用SPSS 17.0软件进行统计学分析,计量资料数据以均数±标准差表示,多组间的比较采用方差分析,多组间的两两比较采用t检验,计数资料采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 三组甲状腺自身抗体阳性情况比较
糖尿病组及高危组孕妇甲状腺自身抗体阳性率明显高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05),见表1。
注:与对照组比较,χ2=13.47,*P<0.05;χ2=12.19,#P<0.05
2.2 三组甲状腺功能指标比较
三组孕妇T3、T4、FT3、TSH无明显差异,但糖尿病组及高危组孕妇FT4水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),见表2。
注:与对照组比较,t=4.29,*P<0.05;t=3.17,#P<0.05
2.3 相关家族史与甲状腺功能异常的关系
高危组及糖尿病组孕妇120例中,同时有糖尿病及甲状腺疾病家族史的孕妇甲状腺自身抗体阳性率明显高于无家族史或仅有一种家族史的孕妇,差异有统计学意义。见表3。
注:A为无糖尿病及甲状腺疾病家族史,B为有糖尿病或甲状腺疾病家族史,C为有糖尿病和甲状腺疾病家族史;与A、B项比较,χ2=19.71、17.96,*P<0.05;与A、B项比较,χ2=18.23、16.34,#P<0.05
3 讨论
妊娠期糖尿病是指妊娠期间孕妇发生糖耐受异常,可能引起胎儿先天性畸形、死胎、羊水过多、早产、新生儿呼吸窘迫、孕妇感染等,严重影响母婴健康。其发病与妊娠期体内拮抗胰岛素的激素水平增高加之孕妇本身胰岛功能储备不足有关。妊娠期糖尿病的高危因素有:(1)肥胖,怀孕前体重指数在24以上应提高警惕。(2)年龄在30岁以上,尤其是35岁以上的孕妇。(3)有糖尿病家族史的孕妇。(4)妊娠期反复发生霉菌性阴道炎。(5)以前怀孕时出现过不明原因的反复自然流产、胎儿宫内死亡、胎儿畸形等情况。(6)曾患妊娠期糖尿病者[3,4]。
甲状腺激素是影响人体神经系统发育的重要激素,妊娠期甲状腺功能障碍严重影响患儿发育,妊娠期甲亢控制不良可导致流产、早产、先兆子痫、胎盘早剥等发生率增加,早产儿、胎儿宫内生长迟缓、足月小样儿等的危险性提高;此外母体的TSAb可以通过胎盘刺激胎儿的甲状腺引起胎儿或新生儿甲亢[5,6]。妊娠期母体甲减与妊娠高血压、胎盘剥离、自发性流产、胎儿窘迫、早产以及低出生体重儿的发生有关,有文献报道亚临床甲减可导致胎儿神经系统发育受损,尤其是胎儿脑发育的第一个阶段[7]。
对于妊娠期糖尿病对甲状腺功能的影响,有文献报道糖尿病孕妇甲状腺自身抗体阳性率及亚临床甲状腺功能减退发病率均高于健康孕妇[8],此外自身抗体可反映甲状腺自身免疫性疾病,其与习惯性流产、甲减等有直接关系,因此甲状腺抗体阳性是预测甲减、流产等的重要指标[9],本文糖尿病组及高危组孕妇甲状腺自身抗体阳性率(20.0%、18.8%)明显高于对照组(7.5%),与文献报道一致,提示本组妊娠糖尿病及高危孕妇发生甲状腺功能异常及妊娠意外的危险性较高,应注意防范。有学者研究发现妊娠中TSH基本正常时,血清FT4含量与糖耐量受损程度相关,随着受损程度加重,机体胰岛素分泌不足,出现糖代谢紊乱,进而影响甲状腺素的分泌[10],本文糖尿病组及高危组孕妇FT4水平明显低于对照组,可能与糖尿病及高危孕妇糖耐量受损有关。家族史是妊娠期糖尿病高危因素,本组妊娠糖尿病及高危组孕妇中,同时有糖尿病及甲状腺疾病家族史者,甲状腺自身抗体阳性率(50.0%、45.5%)明显高于仅有一种家族史(22.2%、16.7%)或无家族史者(13.3%、8.2%),提示有该两种疾病家族史的孕妇发生甲状腺免疫性疾病的危险性极高,严重威胁母婴健康。因此,在对糖尿病高危因素进行筛查的同时要注意甲状腺疾病背景,并及时进行抗体检测,以保证孕期安全。
参考文献
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功能抗体 篇8
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2013年1月-2015年7月在本院建册的单胎孕妇为研究对象, 针对甲状腺疾病高危人群进行了早孕期甲状腺疾病三联筛查, 高危因素包括: (1) 有甲状腺疾病个人史; (2) 有甲状腺疾病家族史; (3) 患甲状腺肿; (4) 症状或体征提示甲状腺功能亢进或甲状腺功能减退; (5) 并发1型糖尿病; (6) 并发其他自身免疫性疾病; (7) 不孕症; (8) 有头颈部放射治疗史; (9) 有流产和早产史[4]。所有筛查对象于妊娠6~12周采集空腹肘静脉血送检。收集分娩资料完整的SCH合并TPOAb阳性孕妇89例, 阴性309例, 纳入本次研究。
1.2 检测方法及判定标准
采用美国Beckman Coulter全自动电化学发光分析系统及其配套试剂检测血清TSH、FT4、TPOAb, 参照2011年美国甲状腺学会 (ATA) 《妊娠及产后甲状腺疾病诊治指南》并参考《中国妊娠和产后甲状腺疾病诊治指南》, 早孕期血清TSH参考值0.1~2.5 m IU/L, 以TSH>2.5 m IU/L、FT4在早孕期正常参考值范围 (0.58~1.64 ng/dl) 诊断为SCH[3,5]。TPOAb高于试剂盒上限 (>9 IU/ml) 为阳性。
1.3 分组
89例SCH/TPOAb阳性孕妇中65例接受了左旋甲状腺素片 (L-T4, 德国Merck KGaA公司, 规格50μg/片) 口服治疗, 用法如下:L-T4起始剂量根据TSH升高程度决定, TSH>2.5 mI U/L患者的起始剂量50μg/d, TSH≥8.0 mI U/L患者的起始剂量75μg/d, TSH≥10.0 m IU/L患者的起始剂量100μg/d。每四周定期监测患者甲状腺功能, 调整药物剂量, 使TSH维持在T1期0.1~2.5 m IU/L, T2期0.2~3.0 m IU/L, T3期0.3~3.0 m IU/L。该65例患者纳入TPOAb阳性治疗组, 其余24例因出现拒绝治疗或治疗间断 (自行停药时间≥2周) 未定期随诊纳入TPOAb阳性观察组。将SCH/TPOAb阴性孕妇309例设为TPOAb阴性对照组, 该组患者均未予以临床干预。另随机选取同期参与早孕期甲状腺疾病筛查结果正常的300例孕妇设为正常对照组。各组孕妇年龄、孕龄等一般资料比较差异均无统计学意义 (P>0.05) , 具有可比性。
1.4 观察指标
比较SCH/TPOAb阳性治疗组、TPOAb阳性观察组与SCH/TPOAb阴性对照组间, 及SCH/TPOAb阳性组、SCH/TPOAb阴性组与正常对照组间常见不良妊娠结局包括流产、早产、胎膜早破、妊娠期高血压疾病、妊娠期糖尿病 (gestational diabetes mellitus, GDM) 、胎儿生长受限 (fetal growth restriction, FGR) 、妊娠合并贫血、胎盘早剥、产后出血、新生儿甲减、围产儿死亡的差异。妊娠结局的判断标准参考《妇产科学》 (第8版) 教材[6]。
1.5 新生儿甲状腺疾病筛查
新生儿甲状腺疾病筛查方法为于新生儿出生72 h后, 足量喂奶6次以上, 采集足跟内侧或外侧血3滴于国产专用采血滤纸, 悬空平置, 自然干燥成深褐色, 置塑料袋内, 封口后于4℃冰箱保存, 递送北京市新生儿疾病筛查中心进行统一筛查。初期筛查时若TSH≥10 mI U/L则复查取静脉血, 血清TSH>9 mI U/L、FT4<0.6 ng/dl则诊断为新生儿甲减。
1.6 统计学处理
采用SPSS 18.0软件对所有数据进行统计学分析, 计数资料以率 (%) 和频数表示, 组间比较采用字2检验, 以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 SCH/TPOAb阳性治疗组、观察组与SCH/TPOAb阴性对照组妊娠结局比较
SCH/TPOAb阳性观察组发生流产、FGR风险较SCH/TPOAb阴性对照组升高, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。而接受L-T4治疗后的SCH/TPOAb阳性治疗组发生不良妊娠结局的风险与SCH/TPOAb阴性对照组比较, 差异均无统计学意义 (P>0.05) , 见表1。
2.2 SCH/TPOAb阳性组与正常对照组妊娠结局比较
相较于正常对照组, SCH/TPOAb阳性组发生流产、GDM、FGR风险更高, 差异均有统计学意义 (P<0.05) 。而SCH/TPOAb阴性组发生流产、妊娠期高血压疾病、GDM、FGR、产后出血的检出率虽高于正常对照组, 但差异无统计学意义 (P>0.05) , 见表2。
3 讨论
3.1 SCH合并TPOAb阳性对妊娠结局的影响
目前的研究认为妊娠期SCH增加早产、妊娠期高血压疾病特别是重度子痫前期、胎盘早剥、死产及后代智力降低等风险[7,8,9]。研究表明在碘充足地区, SCH主要病因是自身免疫性甲状腺疾病[10]。随着我国加碘食盐的普及, 免疫性甲状腺疾病日益受到重视。甲状腺过氧化物酶是参与甲状腺激素合成的主要酶类, 能诱导机体产生TPOAb, 后者参与介导自身免疫性甲状腺疾病的发生, 是预测和诊断自身免疫性甲状腺疾病的重要指标, 检测阳性通常提示甲状腺的淋巴细胞浸润和甲状腺细胞的破坏[11]。贺译平等[12]研究认为SCH增加早产、流产、妊娠期高血压疾病、GDM、贫血、低出生体质量儿的发生率, 且TPOAb阳性对于预测甲状腺功能异常和GDM发病风险具有重要临床意义。在本研究中, SCH/TPOAb阳性组流产、FGR、GDM的风险较正常孕妇有所增加, 而SCH/TPOAb阴性组与正常对照组比较未增加不良妊娠结局风险, 大致与文献相符。由于本研究样本量较少, SCH/TPOAb阳性组早产、胎膜早破、妊娠期高血压疾病、妊娠合并贫血、胎盘早剥、产后出血、围产儿死亡发生率虽高于正常对照组, 但比较差异无统计学意义, 尚需设计大样本的对照研究试验以进一步探讨。
3.2 SCH合并TPOAb阳性的治疗
刘小莲等[13]的研究表明SCH妇女其子代可出现短暂的甲状腺功能异常, 并较长时间表现有智力及体格发育滞后, 而经L-T4规范治疗使妊娠期甲状腺功能维持在TSH<2.5 m IU/L的妇女其子代的甲状腺功能、智力及体格发育与健康妇女子代无差异。鉴于SCH可增加不良妊娠结局及后代智力损害的风险, ATA指南推荐对TPOAb阳性的SCH患者应积极干预, 2012年《中国妊娠和产后甲状腺疾病诊治指南》推荐对于TPOAb阳性的SCH妊娠妇女给予L-T4治疗[3,5]。本研究中经L-T4规范治疗及监测后的SCH/TPOAb阳性患者, 其不良妊娠结局的风险相较SCH/TPOAb阴性患者差异无统计学意义, 而未治疗及治疗不充足的患者, 发生流产、胎儿生长受限风险较SCH/TPOAb阴性对照组均增高。同时发现即使73% (65/89) 的SCH/TPOAb阳性孕妇接受了充足的L-T4补充治疗, TPOAb阳性组不良妊娠结局的发病率仍高于正常对照组, 可能与临床干预时间偏晚有关, 也可能与本研究样本量少, 检出率存在偏倚有关。
综上所述, 由于SCH多无典型临床症状及体征, 隐匿发病, 诊断依赖实验室检查。基层妇幼机构对于具备高危因素的孕妇, 开展TSH+FT4+TPOAb三联筛查, 对孕早期诊断SCH合并TPOAb阳性的孕妇及时给予积极干预, 可能有助于改善不良妊娠结局。
摘要：目的:探讨妊娠亚临床甲状腺功能减退症 (subclinical hypothyroidism, SCH) 合并甲状腺过氧化物酶抗体 (thyroid peroxidase antibody, TPOAb) 阳性与不良妊娠结局的关系及治疗意义。方法:回顾性分析2013年1月-2015年7月本院筛选出的89例SCH/TPOAb阳性孕妇分娩资料, 患者中65例接受左旋甲状腺素片 (L-T4) 治疗, 纳入TPOAb阳性治疗组, 其余24例因出现拒绝治疗或治疗间断 (自行停药时间≥2周) 未定期随诊纳入TPOAb阳性观察组, 将SCH/TPOAb阴性孕妇309例设为TPOAb阴性对照组, 该组均未予以临床干预。另随机选取同期参与早孕期甲状腺疾病筛查结果正常的300例孕妇设为正常对照组。分别比较SCH/TPOAb阳性治疗组、阳性观察组、SCH/TPOAb阴性组、SCH/TPOAb阳性组及正常对照组间常见不良妊娠结局包括流产、早产、胎膜早破、妊娠期高血压疾病、妊娠期糖尿病、胎儿生长受限、妊娠合并贫血、胎盘早剥、产后出血、新生儿先天性甲状腺功能减退、围产儿死亡的差异。结果:SCH/TPOAb阳性组患者流产、妊娠期糖尿病、胎儿生长受限的风险较正常孕妇增加, 比较差异均有统计学意义 (P<0.05) ，而 SCH/TPOAb 阴性组与正常对照组相比未增加不良妊娠结局风险 (P>0.05) ，经 L-T4 规范治疗及监测后的 SCH/TPOAb 阳性患者，不良妊娠结局的风险比较 SCH/TPOAb 阴性患者差异均无统计学意义 (P>0.05) ，而未治疗及治疗不充足的患者 (TPOAb 阳性观察组 ) 发生流产、胎儿生长受限风险较 SCH/TPOAb 阴性对照组增高，比较差异均有统计学意义 (P<0.05) 。结论：早孕期开展 TSH+FT4+TPOAb 三联筛查，对早期诊断 SCH 合并 TPOAb 阳性的孕妇及时给予积极干预，可能有助于改善不良妊娠结局。较差异均有统计学意义 (P<0.05) , 而SCH/TPOAb阴性组与正常对照组相比未增加不良妊娠结局风险 (P>0.05) , 经L-T4规范治疗及监测后的SCH/TPOAb阳性患者, 不良妊娠结局的风险比较SCH/TPOAb阴性患者差异均无统计学意义 (P>0.05) , 而未治疗及治疗不充足的患者 (TPOAb阳性观察组) 发生流产、胎儿生长受限风险较SCH/TPOAb阴性对照组增高, 比较差异均有统计学意义 (P<0.05) 。结论:早孕期开展TSH+FT4+TPOAb三联筛查, 对早期诊断SCH合并TPOAb阳性的孕妇及时给予积极干预, 可能有助于改善不良妊娠结局。