抗体效价测定（精选7篇）
抗体效价测定 篇1
肺炎支原体感染也被称为原发性非典型性肺炎, 有起病较为缓慢、伴有发热、阵发性刺激性咳嗽、少量黏液性或黏液脓性痰 (偶有血痰) 等症状。肺部体征多不明显, 但易引起肺外多系统受累, 也可威胁生命或死亡。好发于儿童或青少年, 约占肺炎总数的15%~30%, 流行年可高达40%~60%[1];一般预后良好, 为自限性疾病。肺炎支原体感染属于儿科的常见疾病, 尤其是对患儿的呼吸道会造成严重的损害, 近些年来小儿肺炎支原体感染的发病率也在逐年出现上升的趋势。因为患儿年龄较小, 机体免疫力和抵抗力较差, 治疗不及时很容易导致病情的恶化加重, 危及患儿的生命安全[2]。因此对于小儿肺炎支原体感染的诊断就显得极为重要, 本次研究通过对2013年1月-2015年12月于笔者所在医院进行治疗的肺炎支原体感染患儿120例进行回顾性分析, 对所有患儿进行抗体效价测定和诊断性治疗。旨在对抗体效价测定及诊断性治疗在肺炎支原体感染诊治中的应用进行观察和分析。具体情况报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
对2013年1月-2015年12月于笔者所在医院进行治疗的肺炎支原体感染患儿120例进行回顾性分析, 对所有患儿进行抗体效价测定和诊断性治疗。其中男71例, 女49例, 年龄1~9岁, 平均 (4.3±2.1) 岁。
1.2 鉴别诊断
根据流行病发病的时间来看, 肺炎支原体感染多发于秋季, 以儿童、青年居多, 经常在小范围内进行流行[3]: (1) 通过对X线片的检查, 可以看清肺部的纹理, 肺实质可有多形态的浸润形, 以下叶多见, 也可呈斑点状、斑片状或均匀模糊阴影, 儿童经常会出现肺门淋巴结肿大, 有的患者还会出现胸腔积液; (2) 通过对血清病原抗体效价的检查, 分类没有明显的改变, 晚期白细胞与早期相似, 只有当患者再次感染时, 才会导致数值的升高。血涂片检查, 中性粒细胞碱性磷酸酶及四唑氮蓝染色, 一般较正常小儿或细菌性肺炎患儿低, 虽然白细胞总数高达15 000个/mm3, 但白细胞碱性磷酸酶指数仍明显降低。部分病儿血清冷凝集试验可为阳性; (3) 本病应与肺结核鉴别, 结核起病缓慢, 有结核接触史, 病变位于上肺野或下叶的背基底段, 短期内不消散, 痰中可查到结核菌, 红霉素治疗无效。轻症肺炎链球菌肺炎亦应鉴别, 肺炎链球菌肺炎起病急, 常有肺实变体征或胸部X线片改变, 痰中可查到肺炎链球菌, 青霉素治疗有效。少数患者可能会出现不经治疗就可自己康复的情况。
1.3 方法
1.3.1 抗体效价测定
因为人体内的肺炎支原体抗体可以和体外的致敏粒子产生被动凝集, 所以对抗体效价测定的诊断笔者通过采用被动凝集法测试肺炎支原体的抗体效价, 当肺炎支原体抗体效价测定结果大于1∶40时, 通过抗体效价测定检测为阳性[4]。
1.3.2 诊断性治疗
所有患儿服用希舒美进行治疗, 1次/d, 每次10 mg/ (kg·d) , 连续服用3~4 d。
1.4 疗效判定标准
将治疗效果分为显效、有效和无效三种[5]。 (1) 显效:经过X线片的检查, 肺部炎症消失, 所有临床症状均消失; (2) 有效:经过X线片检查, 肺部炎症减轻, 所有临床症状出现明显的好转; (3) 无效:经过X线片检查, 肺部炎症没有改变甚至有恶化加重的现象, 所有临床症状均未出现改变甚至有恶化加重的现象。总有效=显效+有效。
1.5 统计学处理
采用SPSS 18.0软件对数据进行统计学分析, 计量资料用 (±s) 表示, 比较用t检验, 计数资料以率 (%) 表示, 比较用X2检验, P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 抗体效价测定结果
120例患儿中通过抗体效价测定后有35例检测为阳性, 检测阳性率为29.2%, 有85例检测为阴性, 检测阴性率70.8%。
2.2 诊断性治疗的治疗效果
35例检测为阳性的患儿通过诊断性治疗后, 治疗总有效率为91.4%, 在85例通过抗体效价测定检测阴性的患儿治疗总有效率为70.6%, 阳性组总有效率高于阴性组, 差异有统计学意义 (P<0.05) , 具体见表1。
例 (%)
3 讨论
在肺炎支原体感染的诊断过程中, 由于原来的诊断方法有较大的局限性, 而且肺炎支原体感染后症状和体征的表现不一样, 病情有轻有重, 有时候会是无症状, 有时候又会有间质性肺炎, 发病比较缓慢, 肺部体征多不明显, 大龄儿在整个病程中肺部常无任何阳性体征。少数患者仅在一周末时出现肺部体征。这就使得肺炎支原体感染的临床症状呈现多样化的特点, 很容易导致误诊的情况发生。
目前认为, 本病有自限性, 少数病例不经治疗可自愈。根据相关研究, 本病的治疗方法主要有: (1) 一般治疗, 呼吸道隔离, 休息, 供给足量水分及营养。对症治疗:忌用水杨酸类药物以防溶血。一般选用具有缓慢而持久作用的解热镇痛药, 如对乙酰基酚、卡巴匹林钙、赖氨比林、柴胡等, 高热时辅以物理降温。化痰止咳。清除鼻内分泌物, 保持呼吸道通畅。必要时可雾化吸入。 (2) 抗菌治疗临床首选红霉素30~50 mg/ (kg·d) , 分4次口服, 成人1.5 g/d, 分3次口服, 疗程2~3周。大环内酯类新药, 如罗红霉素, 胃肠副作用少, 体液浓度高, 细胞穿透力强, 半衰期长, 用量小, 5~10 mg/ (kg·d) , 分2次口服。新药阿奇霉素胶囊首剂10 mg/ (kg·d) , 以后5 mg/ (kg·d) , 一次口服, 5 d为一疗程。因半衰期长, 停药后药效尚可持续1周。也有选用诺氟沙星或环丙沙星0.4 g/次, 2次/d, 疗程5~7 d。 (3) 中医中药治疗, 中医辨证, 肺炎属于温热病范畴中的“肺热喘咳”、“风温犯肺”等症。常用中药有:麻黄、杏仁、生石膏、甘草、寒水石、银花、连翘、苏子等。发热有汗可加黄芩, 或重用生石膏;发热无汗时可加鲜芦根;咳喘多痰加天竺黄、莱菔子等[6,7]。由于肺炎支原体感染每个患儿都有其自身的特点, 单纯的利用一种诊断方式具有很强的片面性, 所以本次研究通过对2013年1月-2015年12月于笔者所在医院进行治疗的肺炎支原体感染患儿120例进行回顾性分析, 对所有患儿进行抗体效价测定和诊断性治疗。发现120例患儿中通过抗体效价测定检测后有35例检测为阳性, 检测阳性率为29.2%, 35例检测为阳性的患儿通过诊断性治疗后, 治疗总有效率为91.4%, 在85例通过抗体效价测定检测后阴性的患儿的治疗总有效率为70.6%。
综上所述, 使用抗体效价测定及诊断性治疗在肺炎支原体感染诊治中效果显著, 可以有效的治疗肺炎支原体感染, 值得在临床上进一步的推广和使用。
摘要：目的:对抗体效价测定及诊断性治疗在肺炎支原体感染诊治中的应用予以分析和探讨。方法:对2013年1月-2015年12月于笔者所在医院进行治疗的肺炎支原体感染患儿120例进行回顾性分析, 对所有患儿进行抗体效价测定和诊断性治疗。对所有患儿的肺炎支原体抗体效价进行测定, 对检测结果进行记录和分析。对所有患儿经过诊断性治疗后的效果进行记录和分析。结果:120例患儿中通过抗体效价测定后有35例检测为阳性, 检测阳性率为29.2%, 35例检测为阳性的患儿通过诊断性治疗后, 治疗总有效率为91.4%, 在85例通过抗体效价测定后检测为阴性的患儿的治疗总有效率为70.6%。阳性组总有效率高于阴性组, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。结论:使用抗体效价测定及诊断性治疗在肺炎支原体感染诊治中效果显著, 可以有效的治疗肺炎支原体感染, 值得临床上进一步的推广和使用。
关键词：抗体效价测定,诊断性治疗,肺炎支原体感染
参考文献
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[7]万洋.支原体肺炎不同给药方法的疗效观察[J].现代诊断与治疗, 2012, 23 (11) :1857-1858.
抗体效价测定 篇2
1 资料与方法
1.1 一般资料
我院2009年10月—2010年10月孕产妇1100例, 年龄19～45岁。
1.2 试剂
0.8%A、B型标准红细胞;0.8%Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ筛检红细胞;ABO正反定型/Rh (D) 血型定型微柱凝胶卡 (共6个反应孔, 依次为A、B、D、ctl、Ac、Bc孔) ;低离子/抗人球蛋白微柱凝胶卡 (共6个反应孔, 可做两人份, 依次为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ孔) 。
1.3 仪器
达亚美微柱凝胶卡专用离心机 (转速1000r/min, 时间10 min已设置好) ;达亚美微柱凝胶卡专用保温孵育器 (37℃恒温, 15min已设置好) ;可调加样器 (1～50μl) 。
1.4 标本
采集被检者静脉血3ml, 置37℃水浴30min, 3000r/min 离心10min, 用吸管取血清备用后, 把红细胞配制成5%的红细胞悬液。
1.5 方法
1.5.1 鉴定夫妇ABO血型及Rh (D) 血型
将ABO正反定型/Rh (D) 血型定型微柱凝胶卡置专用离心机中1000 r/min离心4min, 撕去铝铂, 在Ac孔、Bc孔中加入相应的0.8%A、B型标准红细胞和被检者血清各50μl;在A孔、B孔、D孔、ctl孔中各加被检者5%的红细胞悬液10μl;置达亚美微柱凝胶卡专用离心机中离心后, 观察并记录血型结果。
1.5.2 筛查孕妇血液不规则抗体
将低离子/抗人球蛋白微柱凝胶卡置离心机中1000 r/min离心4min, 根据检测需要撕去铝铂, 在Ⅰ孔、Ⅱ孔、Ⅲ孔中加入相应的0.8%Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ筛检细胞50μl和孕妇血清各25μl, 置达亚美微柱凝胶卡专用保温孵育器中孵育15min, 然后放在专用离心机中离心10min, 观察并记录抗筛结果。
1.5.3 测定抗筛阳性者抗体效价
孕妇血清200μl, 加入浓度为0.2M的2-Me液200μl, 充分混匀后置37℃孵育30min制成中和血清, 取6只试管, 第一管加350μl 0.9%氯化钠溶液, 其余5管各加200μl 0.9%氯化钠溶液, 取中和血清50μl加入第1管, 混匀后取出200μl放于第2管, 依次倍比稀释至第6管, 分别是1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512, 将微柱凝胶低离子/抗人球蛋白卡的6孔封口打开, 加入丈夫0.8%的红细胞悬液50μl, 然后分别加各种稀释度的血清各25μl, 将卡置于孵育器中, 37℃孵浴15min, 然后放在专用离心机中离心10min, 发生凝集的最高稀释度即为该孕妇血液不规则抗体的效价。
2 结果
2.1 1100例孕产夫妇中易造成新生儿溶血疾病的有98例 (见表1) 。
2.2 98例孕产妇抗筛阳性者有12例抗体效价≥64, 11例是易造成新生儿溶血病的常见夫妇血型, 有1例在此之外。
2.3 不规则抗体筛查阳性者的效价测定结果显示, 孕妇出现流产、死胎及其胎儿新生儿出现溶血、黄疸与孕妇体内抗体效价高低有直接关系 (见表2) 。
3讨论
微柱凝胶技术是利用抗原与相应抗体的免疫特异反应和微柱凝胶的分子筛作用[1], 通过离心将发生凝集反应的红细胞阻滞于凝胶之上, 未凝集的红细胞通过凝胶间隙到达凝胶的底部, 从而区分有无凝集, 实验结果清晰, 不需要用显微镜观察, 操作简单, 省去了多次洗涤的繁琐, 并且具有血清用量少、反应灵敏度高、结果可以反复观察的优点, 尤其是抗体效价检测结果, 各梯度的凝集强度一目了然, 与传统的抗人球蛋白实验比更能准确检测孕妇血液中的免疫性IgG抗体和效价。统计显示, 1100例孕妇中易造成新生儿溶血病的常见夫妇血型有98例, 占8.9%, 在鉴定夫妇血型后, 对易造成新生儿溶血病的常见夫妇血型的孕妇重点动态进行不规则抗体筛查和效价测定, 早期发现、早期预防和早期针对性治疗对避免造成严重后果具有重要意义。
参考文献
青霉素酶抗体的制备及效价检测 篇3
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器
青霉素酶, 中国兽医药品监察所产品;牛血清白蛋白, 美国SIGMA公司产品;弗氏佐剂, 美国GIBCO品牌;羊抗鼠酶标二抗, 河南华美生物工程有限公司产品;550型酶标仪, 美国BIO-RAD公司产品;高速匀浆机, 美国BECKMAN公司产品。6周龄BALB/C小鼠购自郑州大学医学院。
1.2 小鼠免疫
用青霉素酶免疫6周龄BALB/C小鼠, 每组3只, 背部皮下分点注射。首次免疫加等体积的弗氏完全佐剂进行乳化[10 m L青霉素酶+90 m L磷酸盐缓冲液 (PBS) +100 m L佐剂], 间隔20 d进行第2次免疫, 二免改用弗氏不完全佐剂进行乳化, 第3次免疫后10 d对小鼠断尾采血, 分离血清。
1.3 青霉素酶抗体的检测
将青霉素酶包被酶标板 (10 m L青霉素酶溶解于10 m L碳酸盐包被液) , 37℃温箱内培养2 h, 然后用磷酸盐缓冲液洗3次, 每次3 min, 于吸水纸上拍干;用含0.1%牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液封闭, 37℃温箱内孵育1 h, 然后洗涤 (方法同上) ;将1∶100的血清进行倍比稀释, 同时设阴性对照 (小鼠的阴性血清) 和空白对照 (磷酸盐缓冲液) , 37℃温箱内培养30 min, 然后洗涤;加入1∶1 000的酶标二抗 (GAMIgG-HRP) , 37℃温箱内培养30 min;然后加底物液显色, 10 min后中止反应, 用酶标仪测OD450值。阴性对照OD值为N, 阳性OD值为P, 以P/N≥2.1且OD>0.2判为阳性。
2 结果与分析
间接酶联免疫吸附试验 (间接ELISA) 测定效价, 结果见表1。以P/N≥2.1且OD>0.2判为阳性, 结果3只小鼠的效价均达到1∶3 200。表明小鼠血清中产生了青霉素酶的抗体。
3 讨论
抗体效价测定 篇4
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 主要试验仪器
酶标仪:TECAN Sunrise 2酶标仪;洗板机:美国宝特Elx50自动洗板机;恒温培养箱:哈尔滨市东明医疗仪器厂生产。
1.1.2 试剂
蓝耳病抗体检测试剂盒均有北京天之泰生物科技有限公司提供。
1.1.3 样品
对我镇采集的猪血清进行抽检, 通过抗体检测, 测定免疫抗体效价。
1.1.4 疫苗
由中牧实业股份有限公司成都药剂厂生产的高致病性蓝耳病冻干苗。
1.2 试验方法
1.2.1 加样
添加阳性对照50μL到酶标板A1、B1孔;添加阴性对照50μL到酶标板C1、D1孔;取经稀释液200倍稀释的待测血清样品50μL到酶标板内;轻轻震荡均匀后, 贴上封板膜置于37℃中孵育1h。
1.2.2 添加酶标二抗
洗板3次, 每孔添加50μL酶标二抗, 震荡混匀后, 贴上封板膜置于37℃中孵育1h。
1.2.3 添加底物溶液
洗板3次, 每孔添加底物溶液50μL, 轻摇2s, 将酶标板置于黑暗条件下21℃作用10min。
1.2.4 显色
每孔添加50μL终止液, 混匀。30min内在450nm波长下读数。
1.3 判断标准
为确保试验有效, 阴性对照的平均吸光度应该小于0.3, 阳性对照的平均值和阴性对照的平均值之差大于0.15。
1.3.1 S/P值的计算
(待检样品的平均值-阴性对照的平均值) / (阳性对照的平均值-阴性对照的平均值) =S/P
1.3.2 判定标准
2 试验结果
3 小结
3.1本试验采用的进口ELISA试剂盒, 具有灵敏性高、特异性强、稳定性良好等特点, 使检测结果更加准确, 真实地反映出猪蓝耳抗体水平的高低。
3.2通过本试验检测结果可以知道我镇各养殖户都进行了猪蓝耳病的免疫, 免疫效果总体良好, 平均合格率达到了72%。但是免疫效果参差不齐, 大的规模场免疫效价和合格率均明显高于一般养殖场户, 合格率达到76.47%, 说明疫苗可以有效的预防本病的发生, 但是一般养殖户和散养户的合格率仅为69.7%, 说明免疫次数或程序存在一定问题。
抗体效价测定 篇5
关键词：新生儿溶血病,母婴血型不合,ABO血型,RhD血型,抗体效价
新生儿溶血病(hemolytic disease of newborn,HDN)是由于母婴血型不合,母体血液中含有针对胎儿或新生儿红细胞抗原免疫性抗体(IgG类),并通过胎盘绒毛膜进入胎儿血液循环,致敏胎儿而发生同种免疫引发溶血。在人类已经发现的血型系统中,ABO-HDN是以母婴ABO系统血型不合引起的,发病率最高,约占HDN总发病率的85.3%,病死率约为1.4%[1],其次为Rh血型系统,其他血型系统HDN较少见[2]。笔者将从2008年起对云浮市级医院就诊的ABO/RhD血型不合的孕妇血清进行IgG-A或IgG-B、抗-D效价测定,分析HDN与孕妇妊娠次数及年龄之间的关系,分析抗体效价与发生HDN的关联性,以便于对高危孕妇进行早期干预,有效预防HDN的发生或减少对胎儿的危害,对优生优育、提高胎儿生存质量具有重要意义[3]。
1 对象与方法
1.1 检测对象
选择云浮市市级医院门诊及住院孕妇,在妊娠早期10～16周选择孕妇ABO血型为O型,丈夫为A型或B型;孕妇为A型,丈夫为B型或AB型;孕妇为B型,丈夫为A型或AB型;共计380例。Rh血型系统孕妇为RhD阴性者8例。其中ABO血型系统孕妇1次妊娠者238例(62.63%),多次妊娠(2次及2次以上,包括有流产史)者142例(37.36%),孕妇年龄在21～40岁之间,其中分21～30岁年龄段(适龄产妇)和31～40岁年龄段(高龄产妇)两组。
1.2 试剂和仪器
ABO血型抗-A、抗-B及抗-D血型定型试剂(由长春博德生物技术有限责任公司提供);IgM-D筛选试剂(由上海血液生物医药有限责任公司提供);抗球蛋白试剂和2-巯基乙醇(2-Me,由上海血液生物医药有限责任公司提供);凝聚胺试剂盒(由长春博德生物技术有限责任公司提供);微柱凝胶检测卡(由长春博迅生物技术有限责任公司提供);ABO标准试剂红细胞由本站血型参比试验室自制;CCBY免疫微柱孵育器(由长春博迅生物技术有限责任公司提供);KA-2200离心机(日本KUBOT生产),OLYMPUS-CX21型生物显微镜(日本OLYMPUS生产)。
1.3 检测方法
1.3.1 输血规程
夫妇ABO/RhD血型检测严格按照《中国输血技术操作规程(血站部分)》执行。
1.3.2 微柱凝集法孕妇血清红细胞不规则抗体筛选及鉴定[4]
分别在3个微柱孔下标记Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,在反应池中分别加10μL5%相应筛检红细胞,再分别各加40μL待检血清,置微柱凝胶专用孵育器孵育(37℃,10 min);取出后置专用微柱凝胶离心机离心。观察结果:红细胞全部沉于微柱底部者为阴性,全部或部分红细胞滞留于微柱凝胶孔中者为阳性。如红细胞不规则抗体筛选阳性需进一步进行抗体鉴定,操作方法同上。自身抗体阳性的待检血样采用微柱凝胶自身抗体分型卡(AHG/IgG/C3d)进行抗体分型,操作方法同上。
1.3.3 IgG-A或IgG-B及抗-D抗体效价检测
参考具体文献[5]执行。
1.4 统计学处理
采用SAS 8.1统计软件进行统计学分析,计数资料采用χ2检验,P<0.05或<0.01均表示有统计学意义。
2 结果
2.1 孕妇血清IgG-A或IgG-B抗体效价测定
共检测380例ABO血型不合孕妇血清中的IgG-A或IgG-B抗体效价,其中孕妇为O型367例(96.7%),A型7例(1.8%),B型6例(1.5%)。在380例孕妇中检出IgG-A或IgG-B抗体效价≥1∶64者204例(53.6%),其中1次妊娠且年龄在21～30岁者94例(39.5%),多次妊娠且年龄在31～40岁者110例(77.4%),多次妊娠者IgG-A或IgG-B抗体效价≥1∶64者明显多于1次妊娠者(P<0.01);在31～40岁年龄段的孕妇IgG-A或IgG-B抗体效价≥1:64者明显多于21～30岁年龄段的孕妇(P<0.01),结果见表1、2。
注:两组比较,χ2=11.543,P<0.01
2.2 Rh系统抗-D效价检测
在8例RhD阴性孕妇中检出抗-D者5例(62.5%),抗-D效价≥l∶32者1例(12.5%),抗-D效价≥l∶64者2例(25.0%),抗-D效价≥l∶128者2例(25.0%)。
3 讨论
产前IgG型血型抗体的检测作为预防HDN的早期检查已备受重视。妊娠期间母婴的血液循环为各自独立的系统,血液有形成分一般是不相通的。但在妊娠期间难免有少许绒毛破损,可能会发生极少胎儿血液进入母体血液循环。当一次进入母体的血液达到1 ml以上时,就能致敏孕妇产生抗体。一旦致敏,再次妊娠时如果极少量的带有相应抗原的胎儿血液进入母体,回忆反应就会导致孕妇体内抗体迅速升高。5%～10%的孕妇在妊娠2个月时,在血液中可以找到胎儿红细胞;有10%～20%的胎儿红细胞进入母体量在0.1～30 ml。母婴血液互相渗透,会发生同种免疫应答,产生IgG类抗体,该类抗体可以自由通过胎膜屏障,进入到胎儿血液循环致敏胎儿红细胞,导致胎儿红细胞发生血管外溶血,引起胎儿或出生后HDN。而ABO、RhD血型系统引起的HDN最为常见。当孕妇血清中IgG-A或IgG-B抗体效价≥1∶64或RhD阴性孕妇血液中产生针对胎儿RhD抗原的抗-D抗体时,胎儿有可能发生HDN。临床通常以IgG-A或IgG-B抗体效价≥1∶64作为阳性指标,当IgG-A或IgG-B抗体效价≥1∶128时,新生儿发生HDN的几率增大,IgG-A或IgG-B抗体效价≥1∶512时,新生儿几乎100%的受害,因此,临床上要采取早期预防措施[6]。对孕妇为O型或RhD阴性,丈夫为A、B、AB型或RhD阳性者,在妊娠6个月时进行IgG抗体效价检测,凡抗体效价在1∶64以上即开始进行治疗,有效地预防了宫内发育迟缓,减少了流产或死胎的发生。但是有必要了解妊娠次数与年龄因素与发生HDN的风险关系,本次研究表明,多次妊娠的孕妇其产生IgG-A或IgG-B抗体效价≥1∶64者明显多于1次妊娠者,且年龄在31～40岁年龄段的孕妇其产生IgG-A或IgG-B抗体效价≥1∶64者明显多于21～30岁年龄段者,说明多次妊娠者及高龄产妇发生ABO-HDN的几率较高,应当对这些特征的孕妇定期进行IgG-A或IgG-B抗体效价检查,对IgG-A或IgG-B效价≥1∶64者早期采取有效的预防措施及产后的治疗措施。
由于我国汉族人群RhD阴性率为0.4%[7],因此Rh血型系统抗原引起的HDN相对ABO较少,但病情程度严重。Rh血型不合引起的HDN一般不发生于第一胎[6]。但多次妊娠,血型抗体产生的几率会增加,胎儿患病可能性也增大。本研究在8例RhD阴性孕妇血清中检出抗-D 5例(62.5%),4名孕妇有2次以上妊娠史,1名有输血史,因此产前RhD的常规检测是十分必要的,对首次妊娠检测出抗-D的孕妇应在产后72h内预防性注射免疫球蛋白,防止在下次妊娠时发生HDN。目前对HDN的预防,主要依赖于孕妇产前ABO/RhD血型鉴定及其抗体效价检测的血型血清学指标,因此,夫妇血型不合的孕妇产前抗体效价普查的意义显得格外重要。为围产期HDN的监测、预防、治疗提供了可靠依据,发现异常及时进行妊娠期干预治疗,可以有效地预防和减少HDN的发生率[9],对优生优育工作及提高人口素质有重要意义。
参考文献
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抗体效价测定 篇6
花椒籽油中脂肪酸的主要成分是油酸、亚油酸和亚麻酸,其次是含量较低的软脂酸、硬脂酸和棕榈油酸,最后是微量组分十七碳烯酸,不含花生四烯酸[4],其中富含的 α - 亚麻酸是合成二十碳五烯酸( EPA) 和二十二碳六烯酸( DHA) 的前体物质,与大脑和视网膜的发育有关; 还可以增强机体免疫能力; 防治多种心脑血管疾病,并有抗炎、抗过敏、抗癌、抗衰老、抗抑郁及促进毛发生长等多种作用[5 -7]。用富含 α - 亚麻酸等化合物的花椒籽饲喂动物可以得到含n -3系多不饱和脂肪酸的肉制品和奶制品[8]。
花椒籽中油脂含量为27% ~ 31%,出油率为20% ~ 25% ,高于大豆、棉籽。除含丰富的油脂外,花椒籽脱脂后的饼粕中蛋白质含量在48% 以上,其氨基酸成分比较齐全[9 -10],且各种必需氨基酸的含量较高,与大豆相比,有些氨基酸含量较低,但可作为鸡、猪等畜禽的饲料与其他谷物混合使用。花椒籽油含有丰富的钙、镁、铁、锌及较高的锶、锰等机体必需的矿物质元素[6]。花椒籽中的香豆素使其具有芳香甜味,可增加雏鸡的适口性,使雏鸡的采食量提高[11]。花椒籽中含丰富的油脂、不饱和脂肪酸和蛋白质,是优质的能量饲料,可部分代替玉米,作为一种重要的原料添加到饲料中[12]。
谢红兵等[13 -14]研究发现: 适当添加花椒对肉鸡及肉雏鸡的生长、免疫等机能有促进作用; 花椒籽作为一种高能饲料添加原料,所含有的不饱和脂肪酸类,芳樟醇、柠檬烯等挥发油类,香豆素类,氨基酸及微量元素等多种物质与花椒化学成分相同[15]。本试验旨在通过研究花椒籽对肉雏鸡免疫器官指数及抗体生成的影响,为其生产应用提供数据支持。
1材料与方法
1. 1试验药品
花椒籽粉末,选自四川省汉源县,粉碎过40目筛; 盐酸小檗碱( 批号为20110205) ,购自石家庄正大鸿福牧业有限公司。
1. 2试验动物与分组
选择11日龄健康雄性青脚麻肉鸡( 以下简称肉鸡,由四川农业大学家禽育种场提供) 150只,随机分成空白对照组,药物对照组,试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组,每组设3个重复,每个重复10只鸡。空白对照组饲喂基础日粮; 药物对照组饲喂基础日粮+ 0. 2% 盐酸小檗碱; 试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组分别饲喂基础日粮+ 0. 5% 、1. 0% 、1. 5% 花椒籽粉,试验时间为42 d。基础日粮参照美国NRC( 1994年) 《家禽的营养需要量》配制,其组成及营养水平见表1。
注: 每千克维生素预混料含维生素A 54 000 000 IU,维生素B12 000 IU,维生素D310 800 000 IU,维生素B215 000 IU,维生素E 18 000 IU,维生素B67 000 IU,维生素K 35 000 IU,维生素B1230 mg, D - 泛酸钙25 000 IU,烟酸35 000 IU,叶酸500 mg,生物素500 mg; 每千克矿物质预混料含铜8. 0 mg,锌40 mg,锰60 mg,碘0. 35 g,硒0. 15 g。
1. 3饲养管理
试验鸡饲养于育雏舍内,自由采食、饮水,保持舍内空气新鲜,舍内温度在肉雏鸡7日龄为35 ℃左右, 以后每周下降2 ~3 ℃,直至常温。人工饲喂,最初几天,每隔4 h饲喂1次,每昼夜6次。以后随着日龄的增长逐渐减少,到第4周时每天饲喂4次。最初的1周雏鸡饮用温水,1周后饮用冷水。保证水的清洁和鸡舍内良好的环境卫生,并按照正常免疫流程进行免疫。免疫流程为: 5 d用新城疫疫苗+ 传染性支气管炎疫苗滴鼻点眼; 12 d用传染性法氏囊疫苗饮水并注射禽流感H5疫苗; 20 d再进行新城疫疫苗及传染性支气管炎疫苗滴鼻点眼。
1. 4样品采集
于1,14,28,42日龄每个重复中随机取3只雏鸡空腹称其体重,颈静脉放血处死,分离脾脏、胸腺、法氏囊并称重,计算免疫器官指数,计算公式: 免疫器官指数= 免疫器官重量( g) /动物体重( kg)[13]。
分别于1,14,28,42日龄每组随机抽取16只鸡, 经翅静脉采血,分离血清,进行血凝和血凝抑制试验, 测定其新城疫和禽流感H5抗体效价。
1. 5统计学分析
采用SPSS 17. 0软件中的ANOVA模块进行单因子方差分析和Duncan’s多重比较,以P <0. 05为显著水平,试验数据用平均数 ± 标准差表示。
2结果与分析
2. 1花椒籽对肉雏鸡免疫器官指数的影响( 结果见表2)
注: 同列数据肩标字母完全不同表示差异显著( P < 0. 05) ,含相同字母或无肩标表示差异不显著( P >0. 05) 。
由表2可知: 各组胸腺指数进行比较,1日龄时, 各组间差异不显著( P >0. 05) ; 14日龄时,试验Ⅱ组比空白对照组提高8. 79% ( P <0. 05) ; 28日龄时,各组间差异不显著( P >0. 05) ; 42日龄时,药物对照组和试验 Ⅱ 组分别比空白对照组提高11. 69%、 12. 95% ( P < 0. 05) 。各组法氏囊指数进行比较,1, 14日龄时,各组间差异不显著( P > 0. 05) ; 28日龄时,试验Ⅱ组比空白对照组提高13. 55%( P <0. 05) ; 42日龄时,试验 Ⅱ 组比空白对照组提高14. 04% ( P <0. 05) 。各组脾脏指数进行比较,1日龄时,各组间差异不显著( P >0. 05) ; 14日龄时,试验Ⅱ组比空白对照组提高15. 91% ( P < 0. 05) ; 28日龄时,试验 Ⅱ组与试验Ⅲ组分别比空白对照组提高18. 78% 、 20. 44% ( P < 0. 05) ; 42日龄时,药物对照组、试验Ⅱ组与试验Ⅲ组分别比空白对照组提高18. 75%、24. 48%、 16. 15% ( P < 0. 05) ,比试验Ⅰ组分别提高12. 87% 、 18. 32% 、10. 40% ( P < 0. 05) 。从以上结果可以看出, 花椒籽对肉鸡免疫器官有一定的促生长作用。
2. 2花椒籽对肉雏鸡抗体效价的影响( 见表3、 表4)
lb
注: 同列数据肩标字母完全不同表示差异显著( P < 0. 05) ,含相同字母或无肩标表示差异不显著( P >0. 05) 。
由表3可知: 1,14日龄时,各组间差异不显著( P >0. 05) ; 28日龄时,药物对照组、试验Ⅱ组与试验 Ⅲ组分别比空白对照组提高9. 93% 、15. 03% 、 12. 16% ( P < 0. 05) ; 42日龄时,试验Ⅱ组比空白对照组提高8. 23%( P <0. 05) 。
lb
注: 同列数据肩标字母完全不同表示差异显著( P < 0. 05) ,含相同字母或无肩标表示差异不显著( P >0. 05) 。
由表4可知: 1日龄时,各组间差异不显著( P > 0. 05) ; 14日龄时,试验Ⅱ组比空白对照组提高14. 13% ( P <0.05) ; 28日龄时,试验Ⅱ组比空白对照组、试验Ⅰ 组显著提高11.20%、6.68%; 试验Ⅲ组比空白对照组、 试验Ⅰ组提高9.83%、5.37%( P <0. 05) ; 42日龄时,药物对照组、试验Ⅱ组、试验Ⅲ组分别比空白对照组提高6. 22% 、6. 85% 、5. 46% ( P < 0. 05) 。
3讨论
胸腺、法氏囊和脾脏是肉鸡最重要的免疫器官, 参与全身的细胞免疫和体液免疫。胸腺是细胞免疫的中枢器官,是畜禽的一级淋巴器官及血液中淋巴细胞的主要来源,法氏囊属淋巴样上皮结构,是禽类特有的免疫器官,是血清抗体生成系统的细胞成长和分化部位,法氏囊分化生成大量的浆细胞和各种特异性的细胞,转移到脾脏、盲肠、扁桃体及其他淋巴组织中,参与体液免疫反应,从而产生抗体提高机体免疫力。脾脏则是禽类最大的外周免疫器官,产生大量的淋巴细胞,参与全身的细胞免疫和体液免疫[16]。A. Rivas等[17]研究发现,胸腺、脾脏及法氏囊的器官指数可用于评价雏鸡的免疫状态,这些免疫器官的绝对重量和相对重量越大,则说明机体的细胞免疫和体液免疫机能越强。本试验结果表明,添加适量花椒籽可有效提高肉雏鸡的免疫器官指数,在一定程度上增加免疫器官重量,表现出对机体免疫功能的增强效果。
饲喂花椒籽后新城疫抗体效价在28,42日龄时差异显著( P < 0. 05) ,而禽流感H5抗体效价在14, 28,42日龄差异显著( P < 0. 05) ,说明添加适量花椒籽可提高新城疫及禽流感H5抗体效价水平,并延长其抗体效价值的高峰期,从而起到提高动物抗病力的作用。
花椒籽具有提高动物机体免疫机能的作用,其原因可能是: 首先,机体的免疫功能与自由基的关系非常密切,花椒籽所含的 α - 亚麻酸具有清除自由基的功能,从而增强肉鸡的免疫功能[18]。另外,花椒籽含有多种花椒挥发油有效成分,有助于降低肠道微生物所产毒素的浓度,通过增加溶菌酶含量及巨噬细胞吞噬活性来增强机体的免疫能力。研究显示,花椒中含有大量的活性物质,对炭疽杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等革兰阳性菌及大肠杆菌、变形杆菌、霍乱弧菌等革兰阴性菌均有不同程度的抑制作用,从而提高机体抗病力[19]。与此同时,花椒籽中含有丰富的蛋白质、维生素及微量元素,丰富的蛋白质资源对于免疫器官的发育和抗体生成有重要作用[20]。这些物质的摄入可以促进机体及免疫器官的发育,使抗体效价升高,效价值延长,从而增强动物机体免疫力。
摘要：为了研究花椒籽对肉鸡免疫器官指数和抗体生成的影响,试验选用1日龄健康肉鸡150只,随机分成空白对照组,药物对照组,试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组,每组设3个重复,每个重复10只鸡。空白对照组饲喂基础日粮;药物对照组饲喂基础日粮+0.2%盐酸小檗碱;试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组分别饲喂基础日粮+0.5%、1.0%、1.5%花椒籽粉,试验时间为42 d。分别在1,14,28,42日龄剖杀试验鸡,计算免疫器官指数,同时检测血清中鸡新城疫(ND)和禽流感H5抗体效价。结果表明:试验Ⅱ组鸡的胸腺、法氏囊和脾脏指数分别在14,42日龄、28,42日龄、14,28,42日龄与空白对照组比较差异显著(P<0.05),其中脾脏指数在42日龄时与试验Ⅰ组比较差异显著(P<0.05);药物对照组在42日龄时的胸腺指数与空白对照组比较差异显著(P<0.05),脾脏指数与空白对照组和试验Ⅰ组比较差异显著(P<0.05);试验Ⅲ组的脾脏指数在28日龄时与空白对照组比较差异显著(P<0.05),在42日龄时与空白对照组和试验Ⅰ组比较差异显著(P<0.05)。饲喂花椒籽后新城疫抗体效价在28,42日龄时差异显著(P<0.05),禽流感H5抗体效价在14,28,42日龄时差异显著(P<0.05)。说明在日粮中添加花椒籽粉可以显著提高肉鸡的免疫器官指数,并提高肉鸡的免疫抗体效价,增强动物机体的免疫机能。
抗体效价测定 篇7
范文颖等[4]的研究表明, 新城疫或禽流感疫苗二免21 d后 (在有基础免疫的情况下) 卵黄抗体水平与血清抗体水平接近, 卵黄抗体水平直接反映了血清抗体水平的高低。在蛋禽疾病防治中, 为了及时掌握禽流感、新城疫、产蛋下降综合征等疫苗的免疫效果, 了解产蛋家禽抗体水平的高低, 以便制定正确的免疫程序, 临床上需要对免疫家禽的卵黄抗体水平进行多次监测。这在一定程度上避免了因采血测定血清抗体给家禽造成的应激反应, 不致引起家禽产蛋量的下降。应用血凝抑制试验 (HI试验) 检测禽蛋卵黄抗体水平是最简便、经济、准确的血清学检测方法。本试验随机检测了宁夏地区14个蛋鸡场140枚鸡蛋卵黄抗体效价, 为了解宁夏地区鸡新城疫的防治效果提供了试验数据。
1 材料与方法
1.1材料待检鸡蛋分别来自宁夏银川郊区、银南地区、银北地区等的14个蛋鸡场。Lasota IV系弱毒株由宁夏大学生物制品中心保存, 新城疫阳性血清购自北京华业寰宇化工有限公司, 阴性血清和鸡红细胞由本试验自制。
1.2方法
1.2.1鸡红细胞悬液的制备采集3只健康公鸡的血液与等体积阿氏液混合, 用p H 7.2 0.01 mol/L的PBS液洗涤3次, 每次均以1 000 r/min离心10 min, 用吸管吸去上清液和白细胞薄膜, 将沉淀的红细胞加PBS反复洗涤3次, 上述PBS配成体积分数为0.8%红细胞悬液, 4℃保存, 现用现配。
1.2.2抗原制备非免疫受精种蛋置37℃恒温孵化箱中孵化至第10 d, 剔除死胚, 无菌条件下注入0.5%稀释的新城疫病毒Lasota IV系弱毒株0.2 m L于尿囊腔内, 蜡封。置37℃恒温孵化箱中, 72 h后收获病毒。尿囊液经2 800 r/min低速离心60 min后沉淀病毒, 沉淀物用p H7.2 0.01 mol/L PBS重悬, 置-20℃保存备用, 临用前解冻。
1.2.3血凝试验 (HA) 检测新城疫病毒的血凝效价在微量反应板的1~12孔均加入25μLPBS, 吸取25μL抗原加入第l孔, 混匀后从第1孔吸取25μL, 病毒液加入第2孔, 混匀后吸取25μl加入第3孔, 以此进行倍比稀释至第11孔, 从第11孔吸取25μL弃之, 每孔再加入25μL PBS, 每孔均加入25μL体积分数为1%鸡红细胞悬液, 振荡混匀后在室温 (20~25℃) 下静置40 min后观察结果。以100%凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价, 即为1个凝集单位。
1.2.4 4单位抗原的校正配制4单位抗原并进行校正, 向反应板的第2孔至第6孔加生理盐水25µL, 吸取4单位抗原25μL分别加入第1孔、第2孔中, 充分混合后吸出25μL至第3孔, 依次倍比稀释到第5孔, 弃去25μL, 再吸取1%红细胞悬液依次加入1~6孔, 每孔25μL, 振荡1分钟后室温静置30 min后观察结果, 如第1~3孔为完全凝集, 第4孔红细胞为50%沉淀, 第5孔为对照完全沉淀, 表明所配4单位抗原准确, 校正成立, 4单位抗原现配现用。
1.2.5鸡卵黄提取液的制备将被检鸡蛋消毒, 在气室端开窗, 弃净卵清, 只留卵黄, 搅开, 取2 m L卵黄, 于试管加等量的PBS, 混合后再按混合液的2倍量加入氯仿, 振匀, 见卵黄凝结成脑样为宜, 室温下静止1 h后, 1 500 r/min离心20 min, 吸出上清液-20℃保存备用备。
1.2.6血凝抑制 (HI) 试验在96孔微量反应板上, 每排第2~12孔各加入25μL稀释液, 每排第1孔和第2孔各加入25μL卵黄抗体上清液, 从第2~10孔开始进行倍比稀释, 第11孔为抗原对照, 第12孔为稀释液对照。另设1排1~11孔倍比稀释的阳性血清对照。然后在1~11孔各加入25μL 4单位抗原, 最后1排加入25μL稀释液, 充分震荡1 min后室温放置20~30 min, 每孔加入25μL配置好并充分混匀的0.8%红细胞悬液, 充分震荡后室温放置20~30 min后, 观察结果并读数。结果判定, 以完全抑制4单位抗原的卵黄抗体最高稀释倍数作为HI效价[5]。
2 结果与分析
2.1血凝试验结果对自制新城疫病毒抗原进行血凝试验, 不同时间3个批次的9份尿囊液HA血凝效价均值为8 log2, 结果如表1所示。
2.2 4单位抗原校正结果血凝试验测得新城役病毒HA效价平均为1:28, 则单位抗原为1:64, 四单位抗原校正结果显示, 前3孔为红细胞完全凝集, 第4孔为红细胞50%凝集, 第5孔为红细胞完全沉淀, 说明抗原校正成功。
2.3血凝抑制试验结果通过血凝抑制试验对宁夏地区鸡卵黄抗体进行检测, 结果显示各地区鸡卵黄体抗体效价均大于10 log2, 平均为10~13 log2之间, 结果如表2所示。
3 讨论
卵黄抗体是鸡受到外界特异性抗原的刺激后, 体内发生免疫应答反应, 产生免疫球蛋白, 并通过卵泡膜进入卵黄, 并在卵黄中大量蓄积, 形成卵黄抗体, 也称卵黄免疫球蛋白[6], 由于卵黄抗体的累积作用, 使卵黄中的抗体明显高于血清中的含量, 为雏鸡提供母源保护[7]。用特异的抗原多次免疫母禽后, 所产的蛋黄中针对抗原的抗体含量会明显增加, 特异的、高效价的卵黄抗体可以应用生物化学技术从蛋黄中提出[8]。卵黄抗体与哺乳动物初乳中的抗体一样, 都是由母体产生, 通过特殊机制从血液中转运而来。曹丹的[9]研究表明新城疫卵黄抗体与血清抗体间存在很高的相关性, 鸡新城疫疫苗免疫蛋鸡后不同时期血清抗体和卵黄抗体效价基本一致, 升降趋势相同。类似报道都证实卵黄抗体的检测可以很好地反映血清中的抗体[10,11,12]。卵黄抗体的检测方法更加简易, 还能避免采血时鸡群对的应激反应, 节省人力和时间。因此, 通过检测卵黄抗体也可以推测鸡群的免疫状况。