急性酒精性肝损伤（精选4篇）
急性酒精性肝损伤 篇1
肝脏是酒精代谢的主要场所, 短时期大量饮酒, 可引起急性酒精性肝损伤[1]。其发生机制尚不清楚, 可能与乙醇及其代谢产物的损伤、炎症介质及氧化应激等有关。本实验通过灌胃法制备急性酒精性肝损伤的动物模型, 探讨肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α, TNF-α) 及核转录因子-κB (nuclear transcription factor-κB, NF-κB) 在急性酒精性肝损伤中的作用, 为研究急性酒精性肝损伤发生的机制提供理论和实验数据。
1 材料与方法
1.1 大鼠急性酒精性肝损伤模型的制造和取材
雄性Wistar大鼠92只随机分为两组:对照组46只, 模型组46只。模型组给予56%酒精10 g/ (kg·d) , 每日分3次灌胃, 共5 d。对照组给予等量的生理盐水。自由饮水, 饲以条杆状动物饲料。实验第3天和第5天末各组选18只麻醉后采血 (分离血清冰冻待用) 处死的大鼠取肝 (用10%中性福尔马林固定待做病理和免疫组织化学检测) 。
1.2 检测方法
1.2.1 血清指标测定
用全自动生化分析仪测定血清丙氨酸氨基转移酶 (alanine aminotransferase, ALT) 和天门冬氨酸氨基转移酶 (aspartate aminotransferase, AST) 的含量。
1.2.2 组织形态学检查
取肝组织做石蜡切片, 用40 g/L的多聚甲醛固定, 行苏木精-伊红染色, 光镜下观察肝组织的病理学改变。
1.2.3 TN F-α和N F-κB的表达
采用免疫组织化学法 (SABC) 进行测定, 试剂均购于武汉博士德公司, 具体方法按试剂盒的说明书操作。镜下以中央静脉为中心随机取4个视野, 计数至少1 000个细胞;每张切片中阳性细胞率<5%为阴性 (-) , 5%~25%为弱阳性 (+) , 25%~50%为中等强度阳性 (++) , >50%为强阳性 (+++) 。
1.3 统计学处理
用SPSS11.5软件处理数据, 计量数据以均数±标准差 (x±s) 表示, 进行单因素方差分析、χ2检验及Spearman等级相关检验, 检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 大鼠血清ALT和AS T值的比较
实验第3天和第5天, 模型组与对照组比较, 血清ALT和AST值均明显升高, 差异有显著性 (P<0.01) ;模型组第5天与第3天比较, 血清ALT和AST值明显升高, 差异有显著性 (P<0.01) (见表1) 。
2.2 肝组织病理学改变
对照组肝小叶的结构正常, 肝细胞以中央静脉为中心, 呈放射状分布, 肝细胞无变性、坏死;第3天模型组的肝细胞肿胀, 肝窦变窄, 可见大小不等的脂肪空泡, 部分处可见点状坏死和炎症细胞浸润;第5天模型组的肝细胞变性, 点状、灶状坏死及炎症细胞浸润增多。
注:1) 与对照组比较, P<0.01;2) 与第3天的模型组比较, P<0.01
2.3 大鼠急性酒精性肝损伤中TNF-α和NF-κB的表达
免疫组织化学结果示:TNF-α和NF-κB主要在中央静脉周围的肝细胞中呈阳性表达, 实验第3天和第5天, 模型组与对照组比较, TNF-α和NF-κB的阳性表达率均明显增高, 差异有显著性 (P<0.01) ;模型组第5天与第3天比较, 阳性表达率均明显增高, 差异有显著性 (P<0.05) (见表2和图1~6) 。
注:TNF-α:1) 与对照组比较, χ2=14.761, P<0.01;2) 与对照组比较, χ2=21.095, P<0.01;3) 与第3天的模型组比较, χ2=9.600, P<0.05;NF-κB:4) 与对照组比较, χ2=13.833, P<0.01;5) 与对照组比较, χ2=20.179, P<0.01;6) 与第3天的模型组比较, χ2=8.104, P<0.05
2.4 大鼠急性酒精性肝损伤的肝组织中TNF-α与NF-κB之间的相关性
在29只NF-κB阳性表达的标本中, TNF-α的阳性表达数为24只;7只NF-κB阴性表达的标本中, TNF-α的阳性表达数为3只。TNF-α和NF-κB的表达间密切相关, 且两者之间存在正相关关系 (r=0.687, P<0.01) (见表3) 。
3 讨论
随着生活条件的改善, 过量饮酒及酗酒现象日益增多, 酗酒所带来的身体危害也较为普遍。本实验采用灌胃法建立急性酒精性肝损伤的动物模型, 结果显示, 模型组与对照组比较, 血清ALT和AST值均明显升高, 并且随着造模时间的延长其值升高得更明显。光镜下的病理变化显示, 模型组大鼠的肝细胞肿胀, 肝窦变窄, 中央静脉周围的肝细胞可见弥漫性大小不等的脂肪空泡, 部分处可见点状和灶状坏死, 并有炎症细胞浸润。
TNF-α在肝脏主要由激活的枯否细胞产生, 并作为重要的促炎因子和免疫调节因子参与各种肝脏疾病的发生与发展。肝脏是TNF-α的重要靶器官, 许多文献提示, TNF-α在酒精性肝损伤的过程中起着一定作用。酒精诱导枯否细胞的激活是导致肝损伤的重要机制, 酒精并不能直接激活枯否细胞, 但可以间接使枯否细胞激活并使其分泌细胞因子的量增加, 主要是TNF-α增加, 从而导致肝损伤[2]。TNF-α主要位于肝细胞胞浆中, 引起炎症和细胞毒效应。TNF-α介导肝细胞损伤的直接作用机制之一为氧化损伤, 尤其是线粒体损伤。线粒体功能障碍是TNF-α损伤肝细胞的重要原因, 由于乙醇代谢造成乙醛和氧自由基的产生增多, 使线粒体功能严重受损, 呼吸抑制造成线粒体内的活性氧增多和抗氧化物水平进一步下降, 引起细胞凋亡而加重肝细胞损伤。本实验结果表明, 模型组不同时段大鼠肝组织中TNF-α表达的强度均高于对照组, TNF-α阳性细胞主要分布于肝脏中央静脉周围, 随造模时间的延长其表达强度增强, 与文献报道的结果基本一致[3], 这提示TNF-α在急性酒精性肝损伤中可能起一定的作用。
NF-κB是普遍存在于细胞浆中的一种快反应转录因子, 属NF-κB/Rel家族的一员, 是由p50和p65组成的异源二聚体。细胞处于静息状态时, NF-κB位于细胞浆中, 与NF-κB抑制蛋白单体结合成非活性状态。当细胞受到外界刺激时, 如氧化应激和细胞因子等作用下, NF-κB抑制蛋白发生磷酸化和降解并与NF-κB解离, 解离后的NF-κB转移到细胞核与其调控的靶DNA上的特异位点 (k B位点) 结合, 激活其靶基因的转录[4]。故NF-κB是一种调控炎症和免疫反应、细胞周期控制与分化、细胞凋亡以及对感染与应激反应的一种多向因子。本实验结果表明, 模型组不同时段的大鼠肝组织中NF-κB的表达强度均高于对照组, NF-κB阳性的细胞主要分布于肝脏中央静脉周围, 随造模时间的延长其表达强度增强, 与文献报道的结果基本一致[5], 提示NF-κB在急性酒精性肝损伤中可能起一定的作用。
NF-κB的活化可引起多种细胞因子的过量表达。研究表明, NF-κB参与调节免疫反应及炎症过程, 促进前炎症因子 (TNF-α和IL-1) 、趋化因子 (IL-8) 等炎性基因及转化生长因子-β基因的转录, 从而参与不同原因引起的肝损伤过程[6]。而NF-κB, 进一步放大炎症反应。因此, TNF-α与NF-κB之间造成细胞因子网络中的恶性循环。在本实验中, 模型组大鼠肝脏中NF-κB的表达和TNF-α的表达呈正相关关系, 提示TNF-α可能通过NF-κB的活化参与急性酒精性肝损伤的发生。
参考文献
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中药对酒精性肝损伤的保护作用 篇2
1中草药抑制细胞色素P450 2E1 酶 ( CYP2E1) 的作用
氧化应激为酒精性肝病发生发展过程中的重要致病因素, 在酒精性肝病进程中起了重要作用[2]。国内外研究证实, CYP2E1 的活化是酒精导致氧化应激的主要通路, 在酒精性肝病的发生发展中扮演着极其重要的角色[3]。急性或者慢性酒精摄入均会导致CYP2E1 的活性增强和高表达。CYP2E1 催化酒精代谢过程中会产生大量活性氧如O2-·和H2O2; 在铁离子的存在下, 也能够产生强毒性物质如- OH, 使得活性氧过量生成, 进而使体内抗氧化机制失衡, 导致肝细胞损伤。
已有很多文献报道, 一些中药提取物或者单体活性成分对酒精性肝损伤具有一定的保护作用, 可能与其抑制CYP2E1 的活性和表达及其抗氧化作用有关。C57BL/6 小鼠急性酒精性肝损伤研究中, 一定量的甜菜碱 ( Betaine) 明显抑制了小鼠肝细胞内酒精诱导的CYP2E1 的表达[4]; 另外, 200 mg/kg条叶龙胆 ( Gentiana manshurica) 甲醇提取物[5]也明显地下调了急性酒精诱导的C57BL/6 小鼠肝内CYP2E1 的高表达。张建军等[6]对昆明小鼠慢性酒精肝损伤研究结果表明, 酒精组中CYP2E1 的表达量明显高于空白组; 而10、20 和40 mg/kg的蛇床子素 ( Osthole) 给予6 周后, 肝组织内CYP2E1 的表达明显下调。研究证实, 蛇床子素能够有效治疗小鼠酒精性肝损伤, 其机制可能与抑制CYP2E1 的表达、降低ROS的生成, 提高抗氧酶活性, 从而缓解氧化应激有关。
Chen Kuo - Hsin等[7]以雌性Wistar大鼠为研究对象, 研究了绿茶提取物对酒精性肝损伤的保护作用。其研究发现, 与空白组相比, 酒精组中ALT、TG、ROS的水平及CYP2E1 的表达显著增加 ( p < 0. 01) ; 而绿茶提取物组表现出明显回调的趋势, 表明其对CYP2E1 的抑制作用在缓解酒精性肝损伤方面发挥了重要作用。 另外, Kim Hye Hyung等[8]也研究发现桔梗 ( Platycodonis Radix) 提取物能够显著地下调酒精诱导的CYP2E1的高表达。
2 中草药清除活性氧、自由基的作用
酒精诱导的氧化应激的特征性表现为机体氧化物和抗氧系统之间的动态失衡。机体内源性抗氧酶系统包括超氧化物歧化酶 ( SOD) 、过氧化氢酶 ( CAT) 、谷胱甘肽- S - 转移酶 ( GST) 、谷胱甘肽过氧化物酶 (GPx) , 而非酶类抗氧物质包括还原型谷胱甘肽 ( GSH) 、维生素C和E。它们可以作为机体抵御氧化性损伤的第一道防线, 有效清除机体内过量生成的活性氧和自由基。
卢振明等[9]采用急性酒精性肝损伤SD大鼠模型, 研究了药用真菌牛樟芝 ( Antrodia Camphorata) 总三萜、总多糖和总多酚3 种提取物对肝损伤的保护作用。研究发现, 与酒精组相比, 只有总三萜提取物组能够显著提高肝组织内的SOD、GPx的活性及GSH的含量, 降低丙二醛 ( MDA) 的生成。结果证实, 牛樟芝总三萜提取物是其发挥保肝作用的主要成分群, 其作用机制与其清除自由基、提高肝组织抗氧化能力有关。
与牛樟芝类似, 还有许多中药提取物具有抗氧化活性, 能够改善机体抗氧系统、清除自由基。许多中药材如条叶龙胆 ( Gentiana manshurica) [5]、枸杞子 ( Lycium barbarum) [10]、木豆 ( Cajanus cajan L. ) [11]、葛根 ( Puerariae Radix) [12]、蹄叶橐吾 ( Ligularia fischeri L. ) [13]、枳椇子 ( Semen Hoveniae) [14]的提取物均具有提高SOD、CAT的活性, 增加GSH的含量的功效。另外, 单体活性成分如熊果酸 ( Ursolic acid ) [15]、 葛根素 ( Puerarin) [16]、茶氨酚 ( L - Theanine) [17]也具有抗氧化活性, 对酒精性肝损伤具有一定保护作用。
3 中草药的抗炎作用
炎症反应, 特别是对于酒精诱导下由脂肪变性发展到脂肪性肝炎的过程中, 在ALD发生发展进程中也扮演了重要角色。因此, 减少酒精摄入引起的炎症反应或许能够阻止或延缓ALD病情的加重。
研究表明, 内毒素激活Kupffer细胞是ALD的一个重要病理生理机制。长期大量饮酒时, 酒精使得肠道菌群生态失衡, 细菌过度生长, 导致肠道上皮黏膜屏障被破坏、肠道通透性增加, 肠源性内毒素 ( 脂多糖, LPS) 进入肝脏, 从而激活Kupffer细胞, 启动肝脏炎性损伤。Bharrhan等[18]采用慢性酒精诱导雌性Wistar大鼠肝损伤模型来研究儿茶素 ( Catechin) 对酒精性肝损伤的保护作用。发现酒精组大鼠表现出了明显的内毒素血症, 并且出现了明显的肝脏脂肪变性; 同时, 伴有转录因子NF - κB的激活以及细胞毒性介质肿瘤坏死因子 ( TNF - α) 水平的增加, 从而诱导了炎症的发生。而给予儿茶素 ( 50 mg/kg) 能够显著下调内毒素介导的NF - κB的高表达以及TNF - α 的表达, 减弱大鼠的肝损伤程度。结果表明, 儿茶素能够通过抑制NF - κB来缓解实验动物的酒精性肝损伤, 从而为从抗内毒素介导的酒精性肝损伤的角度来设计新药提供了新思路。
肠源性内毒素LPS进入门脉循环系统后可结合到LPS - 键合蛋白上, 随后被Kupffer细胞上的Toll样受体 ( TLR - 4) 识别并结合, 激活Kupffer细胞TLR - 4 介导的信号通路, 进一步激活转录因子NF - κB。研究证实, 中药提取物或单体活性成分能够通过抑制TLR - 4 信号传导途径来抑制Kupffer细胞的激活。Yoon等[19]采用Lieber - De Carli液体食物法构建大鼠慢性肝损伤模型来研究欧洲龙牙草叶水提取物 ( Agrimonia eupatoria water extract, AE) 的保肝作用。研究发现, AE抑制了酒精引起的CYP2E1 的激活, 降低了脂质过氧化程度, 提高了GSH的浓度水平, 同时也显著下调了酒精引起的TLR - 4、NF - κB以及COX - 2 的高表达。另外, 肉桂 ( Cinnamon) 乙醇提取物[20]以及黄芩苷[21] ( Baicalin) 、甜菜碱[22]也能够通过抑制肝Toll样受体mRNA和蛋白的表达水平, 抑制转录因子NF - κB的活化, 减少ROS的生成, 从而减弱肝损伤程度。
Kupffer细胞激活后, 能够引起大量细胞因子和炎症介质的释放, 如细胞因子 ( TNF -α、IL - 1、IL - 6、IL - 8 和IL - 12等) 、炎症介质 ( MCP - 1) 、粘附因子。其中, TNF - α 是介导肝脏损伤的主要细胞因子。实验表明, ALD血液循环中TNF -α 水平降低, 肝脏损伤也随之减轻。研究证实, 黄芩苷[21]也具有抑制NF - κB、TNF - α、IL - 6 和COX - 2 表达的作用。Lv等[23]证实咖啡因 ( Caffeine) 具有下调肝细胞中TNF - α、IL - 1、IL - 6、IFN - γ 和MCP - 1 的mRNA和蛋白的表达, 且咖啡因组小鼠的ROS的生成相比于酒精组也明显减少。
此外, 葛根的甲醇提取物[12]也能够显著抑制酒精诱导的肠通透性增加, 从而发挥其抑制ALD的作用。这可能与其促进肠道紧密结合蛋白zonula occludens - 1 ( ZO - 1) 的表达, 恢复肠道黏膜屏障的完整性有关。
4 展望
急性酒精性肝损伤 篇3
1 材料与方法
1.1 药物
清肝利胆口服液(河南信心药业有限公司提供,批号:20070302),每毫升含原生药2 g,成人日服剂量40 ml,为1.33 g原生药/(kg·d)。
1.2 动物
Wistar大鼠,雄性,体质量(180±20)g,二级,48只,河北省实验动物中心提供,合格证号:医动字第07296号。
1.3 仪器与试剂
40B离心机,上海安亭科学仪器厂产品;美国ACE全自动生化分析仪;722分光光度计为上海第三分析仪器厂生产;56°二锅头白酒,北京红星股份有限公司生产,用蒸馏水配成50%白酒备用。血清天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)试剂盒为中生北控生物科技股份有限公司产品;丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)试剂盒由南京建成生物工程研究所提供,批号为20070106。
1.4 实验方法
采用酒精性肝损伤模型[3],对大鼠进行适应性饲养1周后,按体质量随机分为4组,即正常对照组、肝损伤模型组及清肝利胆口服液低剂量组、高剂量组,各12只[低、高剂量组给药剂量分别为6.5 g原生药和13 g原生药/(kg·d),分别相当于临床剂量的5倍和10倍]。除正常对照组外,其余各组均给予50%白酒灌胃,连续8周。第1~4周灌胃体积为10 ml/(kg·d),第5~8周灌胃体积增大至20 ml/(kg·d)。在模型制备的第5周时,2个给药组分别在灌酒后6 h灌胃给予清肝利胆口服液,正常对照组和模型对照组大鼠灌胃同体积生理盐水,连续4周。末次给药24 h后,各组大鼠禁食不禁水12 h,用戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后,打开腹腔,经下腔静脉取血,3 000 r/min离心15 min,分离血清,按试剂盒说明测AST、ALT。取肝组织用冷生理盐水制成10%肝匀浆,检测肝组织SOD和MDA的含量;剖取肝脏,在距边缘0.5 cm处取样,10%甲醛溶液固定,石蜡包埋切片,HE染色,光镜观察。
1.5 统计学分析
所有实验数据均用SPSS统计软件进行分析,计量资料用均数±标准差表示,组间比较采用t检验。
2 结果
对肝损伤大鼠血清AST、ALT、GSH和MDA含量的影响,见表1。
与正常对照组比较,#P<0.01;与模型对照组比较,*P<0.05,**P<0.01
2.1 对肝损伤大鼠血清AST、ALT含量的影响
从表1可见,模型对照组大鼠血清ALT和AST水平明显升高,与正常对照组比较差异非常显著(P<0.01),说明肝损伤模型成立。与模型组比较,清肝利胆口服液高、低剂量组血清ALT和AST水平均明显降低,高剂量组的效应尤其明显,具有显著性或极显著性差异(P<0.05或P<0.01),提示清肝利胆口服液对大鼠酒精性肝损伤模型血清ALT和AST水平升高有明显的拮抗作用,呈一定的量效关系。
2.2 对肝损伤大鼠肝组织GSH和MDA含量的影响
由表1可见,肝损伤模型对照组大鼠肝组织GSH含量明显低于正常对照组,MDA含量显著高于正常对照组,两者与正常对照组比较差异均非常显著(P<0.01),表明肝损伤模型成立。清肝利胆口服液各剂量组大鼠的肝组织GSH含量均高于模型对照组,高剂量组与模型对照组的差异具有显著性(P<0.05),表明该受试样品具有提高酒精性肝损伤的大鼠肝组织中GSH含量的作用;清肝利胆口服液各剂量组大鼠的肝组织MDA含量均低于肝损伤模型对照组,高剂量组与模型对照组的差异具有显著性(P<0.05),表明该样品对酒精性损伤的大鼠肝组织中的过氧化脂质含量具有降低作用。
2.3 对肝组织病理的影响
光镜下观察,正常对照组大鼠肝细胞结构清晰,细胞索整齐,细胞核圆而大,胞质丰富。模型对照组大鼠肝细胞体积明显增大,包膜紧张,细胞脂肪变性,肝小叶界限不清,细胞索紊乱,细胞核被挤向细胞周边,部分细胞核体积缩小,可见点、片状坏死,伴有大量炎性细胞浸润。经清肝利胆口服液治疗的各剂量组大鼠肝脏颜色红润,被膜光滑,质地接近正常肝组织。与模型对照组对比,给药各剂量组大鼠肝细胞的脂肪变性、炎症反应都有所减轻,肝细胞核周围脂肪空泡明显减少,肝小叶内有少量炎症细胞浸润,未见点状坏死,肝小叶结构清晰,细胞索排列较整齐,高剂量组接近正常对照组水平。提示该药具有减轻酒精性肝损伤的作用,且呈一定的量效关系。
3 讨论
酒精性肝损伤是指长期大量饮酒或含有乙醇的饮料造成的肝脏疾患,包括轻症酒精性肝病、酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化、酒精性肝硬化等。其发病机制在肝脏等脏器、组织损伤或坏死时,酶从细胞内逸出,进入血液。在肝细胞损伤、细胞膜通透性增加时,细胞内转氨酶也可由于这种浓度梯差而渗漏入血中,可使血中酶活性增高1倍,因此转氨酶是肝细胞损害的敏感标志,也是乙醇所致肝损伤最敏感的指标,酒精性肝炎AST多增高且增高明显。乙醇损害各种细胞器和酶的结构功能,并损害脂肪酸线粒体β-氧化,引起脂质过氧化反应,抑制谷胱甘肽的生物合成,减弱超过氧化酶的抗氧化功能,导致各种肝损伤,ALT、AST等指标升高[4]。MDA是脂质过氧化的终产物,它既能反映人体内氧化反应,也能作为损害因子对人体进行损伤。MDA具有强交联性质,可使胞浆、膜蛋白及某些酶交联成二聚体或更大的聚合物,使其本身丧失活性、结构改变,乃至整个细胞功能丧失。GSH是一种低分子清除剂,是GSH-PX的底物,对脂自由基及脂质过氧化自由基等具有较强的清除作用[5]。机体氧化反应亢进时,GSH不断消耗,可导致GSH不足以清除自由基,形成自由基的损伤。自由基引起肝细胞微粒体膜磷脂中多价不饱和脂肪酸发生脂质过氧化,破坏细胞膜及内膜结构,使肝脏受损。此外,自由基极易与膜蛋白、酶蛋白结合,降低细胞中抗氧化物和蛋白含量,使细胞器中酶性及膜功能降低,影响物质在肝脏中代谢[6]。
本实验表明,乙醇导致酒精性肝损伤大鼠血清ALT、AST升高,肝组织过氧化脂质降解产物丙二醛含量升高,GSH含量降低,并对肝组织结构、肝小叶、肝细胞造成一定损害。清肝利胆口服液能显著降低酒精性肝损伤大鼠血清ALT、AST的含量,尤其是高剂量组效果明显,与模型组比较,血清ALT、AST的含量降低差异非常显著(P<0.01),呈一定的量效关系;对酒精性损伤的大鼠肝组织中的MDA含量具有降低作用,可提高其肝组织中的GSH含量,阻止GSH的耗竭,提高GSH活性,对抗过氧化反应,减轻其肝组织的脂肪变性程度。肝组织病理学观察亦显示对肝损伤改善较为明显,接近于正常对照组,该作用在大剂量时更明显,提示该药减轻酒精性肝损伤的作用呈现一定的量效关系。
实验结果显示,清肝利胆口服液对大鼠酒精性肝损伤具有较好的保护作用,其广泛的作用机制,尚待进行深入的实验研究。
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急性酒精性肝损伤 篇4
1材料
1.1 实验动物
健康雄性SD大鼠, 体重180～200g, 由湖北省动物实验中心提供。
1.2 药品
舒肝健脾口服液:由湖北省恩施自治州中心医院中医药制剂室提供, 批号:070927, 每毫升含生药2克 (2.0g/ml) 。小柴胡颗粒:天津市爱康药业公司生产, 批号:011202。
1.3 主要试剂和仪器
55°红星二锅头白酒:北京酿酒总厂。谷丙转氨酶 (ALT) 、谷草转氨酶 (AST) 生化检测试剂盒:山东3V生物工程有限公司。免疫球蛋白IgA、胆固醇 (TC) 、甘油三酯 (TG) 试剂盒:美国波音特提供。AEROSET 09D05-01全自动生化分析仪:美国。TL-16G型高速冷冻离心机:上海实验仪器厂。全自动血液流变快速分析仪:重庆大学维多生物工程研究所。
2方法
2.1 动物分组及给药
将SD雄性大鼠, 随机分4组, 每组15只, 即正常组、模型组、舒肝健脾口服液治疗组 (40g/kg) , 阳性对照组 (给予小柴胡制剂灌胃, 2.7g/kg) 。将各组动物 (除正常组外) , 清晨白酒灌胃, 酒的摄入量为 (10～18) g/kg[3], 随时间递增, 共8周, 即第1周为10g/kg·d-1, 第2周为14g/kg·d-1, 第3周起为18g/kg·d-1, 以后维持此量, 直至8周结束。正常组以生理盐水替代同量酒精灌胃, 共8周。造模成功后实施灌胃 (ig) 给药治疗, 每日1次, 正常组、病理模型组ig给等容积生理盐水, 自由进食、饮水。治疗4周后各组动物禁食12小时, 以20%氨基甲酸乙酯 (1g/kg) 行腹腔麻醉后, 颈动脉采血, 测定生化指标。处死后作组织病理学检查。
2.2 指标及检测方法
血清ALT、AST、TC、TG:采用生化分析仪检测。血液流变学检测:由湖北民院附属州中心医院检验科完成。血黏度 (ηb) 取高切值 (ηbH) 、低切值 (ηbL) , 血浆黏度 (ηp) 。组织病理学检查:取大鼠左叶肝组织, 在10%中性福尔马林液中固定, 常规石蜡切块, HE染色, 在光学显微镜下进行观察。
2.3 统计学处理
采用统计软件SPSS11.5处理, 进行t检验。
3结果
3.1 一般情况
实验过程中造模组大鼠共死亡8只, 其中4只为灌胃时酒精误入气管所致, 3只因胃扩张穿孔所致, 1只不明原因死亡, 正常组大鼠无死亡。正常组大鼠精神状态好, 食欲佳, 无嗜睡等现象, 体重持续增长, 大便正常。造模组在第1、2周体重增长不明显, 少数动物在第2周内体重相对下降, 自第4周起缓慢增长, 毛发光泽度差, 大便呈软便或溏便, 6周后, 灌食酒精后均出现流涎、四肢无力、嗜睡、精神萎靡、食欲减退、行动迟缓等现象, 于2小时后缓解两用药组情况明显改善。
3.2 肝脏病理组织学变化
肉眼观察:正常大鼠肝脏被膜光滑, 呈红褐色, 质地柔软。造模组大鼠肝脏外观色红黄, 体积增大, 重量增加, 质地较正常组硬, 色泽较暗淡。镜下观察:酒精造模组大鼠, 大部分大鼠肝脏切片显示大于2/3肝小叶组织出现不同程度空泡变性, 肝小叶的坏死灶及肝窦内可见较多量多核细胞、淋巴细胞及单核细胞浸润, 肝细胞肿胀呈气球样变, 细胞内充满大小不一的脂滴, 胞质疏松其内可见大小不等、数量不一的脂肪空泡, 细胞核被挤向一边, 肝细胞的脂肪变性以肝小叶中央区最为明显, 肝细胞呈点片状坏死, 还可见肝汇管区的小动静脉、肝小叶中央静脉、肝窦有血液淤滞及血栓现象。舒肝健脾口服液治疗组和小柴胡对照组与造模组相比均有不同程度的改善和恢复。
3.3 肝功能、血脂和血液流变学检测
见表1。
与正常组比较△P<0.05, △△P<0.01;与模型组比较*P<0.05, **P<0.01
4讨论
酒精性肝病 (alcoholic liver disease, ALD) 是由于长期酗酒过度引起的慢性、进行性、弥漫性肝损害, 是一种进行性发展且后期会严重危害身体健康及生命的疾病。本实验以阶梯酒精灌胃法使大鼠血清转氨酶水平上升, 肝脏出现脂肪变性、炎症、坏死等变化, 提示大鼠酒精性肝损伤动物模型复制成功。
中医学认为, 酒为大热有毒之品, 长期嗜酒必伤及脾胃肝胆而引发疾病。酒精性肝病患者大多神疲乏力, 舌下静脉呈中度青紫曲张, 表现为气虚血瘀。中医药治疗酒精性肝病已取得良好效果[1,4]。本研究采用本院肝病中心自行研制的中药复方制剂舒肝健脾口服液, 对大鼠酒精性肝损伤动物进行实验研究。方中太子参、黄芪、云苓、白术为益气健脾药, 根据“脾为后天之本, 治肝必先实脾”的理论而设, 四君子汤加黄芪为基本方治疗慢性活动性肝炎, 有提高细胞免疫和抑制体液免疫的作用;丹参、柴胡、板蓝根、垂盆草、地耳草有疏肝利胆、解酶降毒作用, 使肝气畅达;佐以赤芍、姜黄、山楂、土大黄等活血化瘀药, 具改善微循环、抗肝纤维化、促进肝细胞再生的作用;炒莱菔子性味辛甘平, 归脾胃肺经, 有消食导滞、降气祛痰作用, 《医学衷中参西录》云:“莱菔子无论或生或炒, 皆能顺气开郁, 消胀除满, 此乃化气之品, 非破气之药”;甘草调和诸药, 共达疏肝健脾、活血祛瘀、降酶解毒之功。本研究结果表明:长期服用舒肝健脾口服液, 能较好降低酒精性肝损伤动物模型大鼠血清中的ALT、AST, 抑制TC、TG含量的增高, 不同程度改善血液流变学的各项指标, 改善酒精性损伤肝脏组织学病变。提示该药有保护肝脏的作用。
参考文献
[1]郭晓萍, 程宇甫, 袁勤钊, 等, 加味四逆散防治大鼠酒精性肝病实验研究.中国中医药信息杂志, 2006, 13 (5) :33.
[2]叶任高.内科学.北京:第5版, 人民卫生出版社, 2001:456.
[3]王凯.肝胆病学.太原:山西科学技术出版社, 1997:217.