外周血免疫T细胞亚群

外周血免疫T细胞亚群（共8篇）

外周血免疫T细胞亚群 篇1

重症加强医疗病房(ICU)患者极大部分都是病因复杂,病情变化较快,大多存在由一开始的单一器官、系统功能异常和障碍转向多器官、多系统的功能异常和障碍。多器官功能障碍综合征(MODS)和多器官功能衰竭(MOF)以及脓毒血症是ICU患者的常见而且危重的并发症,MOF病死率可高达60%~94%[1]。近年来的许多研究表明免疫系统功能的状态在ICU患者整个疾病的发生、发展与转归中起到了重要的作用[2]。本文通过研究检测ICU患者外周血T淋巴细胞亚群数量水平,旨在探讨ICU患者的免疫功能变化和疾病的发生、发展之间的关系,为临床提供诊断和治疗的依据。

1资料与方法

1.1一般资料:选择2014年1月至2015年5月本院ICU的住院患者100例,其中男62例,女38例;年龄21~88岁,平均年龄(62.5±10.5)岁。所有病例均排除自身免疫性疾病和免疫缺陷性疾病,并且近期也未使用过影响免疫系统功能的药物。选择同期本院健康体检者50例为健康对照组,其中男29例,女21例;年龄23~79岁,平均年龄(60.3±11.6)岁。两组在年龄及性别构成比差异上无统计学意义(P>0.05),具有可比性。

1.2仪器与试剂:流式细胞仪为美国BD公司的FACSCalibur三色单平台仪器,检测试剂

CD4-FITC/CD8-PE/CD3-Per CP抗体、Trucount TM计数管、FACS(10X)溶血素、四色荧光标准微球也来自于BD公司,并严格按照使用说明书使用。所有检测项目均严格执行室内质量控制,质控品来自于BECKMAN COULTER(贝克曼)公司。

1.3方法:两组均采用相同的样本处理及检测方法,采集清晨空腹肘静脉血2.0 m L,加入含有EDTA-K2抗凝的专用真空采集管中,充分混匀抗凝。分别在Trucount TM计数管中加入CD3-FITC/CD4-APC/CD8-PE抗体20μL,用反向加样法准确加入抗凝全血50μL,充分混匀,室温避光放置15~20 min后再加入450μL专用FACS(10X)溶血剂,混匀,室温放置15 min后上机运行Multiset程序检测获取数据,处理好的样本在2 h内检测完毕。

注:*与健康对照组比较,差异具有极显著意义(P<0.01)

注:*与重症组比较,差异具有极显著意义P<0.01

1.4统计学处理:采用SPSS20.0软件对数据进行统计学分析,计量资料采用均数±标准差(±s)表示,组间统计比较采用方差分析和t检验,以P<0.05为差别有统计学意义。

2结果

2.1观察组与健康对照组比较,观察组外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞数量、CD4+%、CD4+/CD8+明显低于健康对照组,差异均具有极显著意义(P<0.01);而外周血CD8+%明显高于健康对照组,差异具有极显著意义(P<0.01)。见表1。

2.2将观察组按序贯器官衰竭评估(S O FA)标准,分为重症组(SOFA<3分)和危重症组(SOFA评分≥3分)。两组比较,危重症组外周血CD3+、CD4+T淋巴细胞数量、CD4+%、CD4+/CD8+明显低于重症组,差异具有统计学意义(P<0.01);CD8+T淋巴细胞变化不明显(P>0.05);而CD8+%明显高于重症组,差异均有统计学意义(P<0.01)。见表2。

3讨论

重症加强医疗病房(ICU)的住院患者,常常由于重大的创(烧)伤、手术操作、恶性肿瘤、出血、缺血缺氧、休克、急性中毒等非感染因素和多种病原微生物感染引发的脓毒血症所引起。患者病因错综复杂,病情危重且变化较快,患者机体往往处于一个急性应激状态,主要表现为蓝斑-交感-肾上腺髓质系统和下丘脑-垂体-肾上腺皮质系统兴奋,肾上腺糖皮质激素分泌旺盛。如果这种应激状态过于强烈而且持续时间较长,就会引起机体代谢和器官功能的变化以及组织器官的损伤。甚至会引发多器官功能障碍综合征(MODS)和多器官功能衰竭(MOF)。此时,患者机体就会发生一系列的病理生理变化,包括心血管系统、消化系统、凝血系统、免疫系统等方面的变化,而免疫系统功能的状况和ICU患者疾病的发生、发展与转归密切相关[3]。MODS/MOF是重症患者死亡的主要原因之一,因此,研究ICU患者的免疫功能状况,对于患者的病情判断以及指导治疗就显得尤为重要。

外周血中T淋巴细胞来源于骨髓,在胸腺中发育成熟。T细胞(抗原)受体与CD3分子复合物(TCR-CD3)是T淋巴细胞的特有标志。T淋巴细胞具有高度的异质性,根据其表面标志和功能特性,可以分为CD3+CD4+的辅助性T淋巴细胞(CD4+Th)和CD3+CD8+的抑制性T淋巴细胞(CTL)。CD4+T淋巴细胞在调节免疫系统中对免疫反应的启动、最终表现形式和强弱起着关键作用。CD4+Th细胞在初始阶段接受抗原刺激后,继续分化为分泌型的Th细胞亚群:Th1细胞、Th2细胞、Th3细胞和Th17细胞。Th1细胞能分泌γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-2(IF-2)。Th1细胞的主要功能是增强吞噬细胞介导的抗感染、抗肿瘤免疫,在细胞免疫应答中发挥重要作用,在病理情况下,Th1细胞还参与迟发型的超敏反应和器官特异性自身免疫性疾病。Th2细胞分泌一些细胞因子(IF-4、IF-5、IF-6、IF-10及IF-13),Th2细胞的主要功能是辅助体液免疫应答,并在过敏性疾病和感染性疾病中发挥重要作用。CTL细胞通过分泌穿孔素、颗粒酶、淋巴毒素以及通过Fas L途径导致靶细胞的裂解和凋亡。T淋巴细胞是细胞免疫中最主要的免疫细胞,几乎参与了所有的特异性免疫反应。既是直接抵御抗原和肿瘤细胞的效应细胞,又是体液免疫与细胞免疫反应之间的调节者[4]。其各亚群之间的动态平衡,对于维持与调节机体的免疫系统功能状态尤为重要。

正常情况下,CD3+细胞、CD4+T细胞和CD8+T细胞的数量处于一个动态平衡并且相互调节的状态。CD4+/CD8+的值反映了机体的免疫平衡状态,CD4+/CD8+明显降低、说明机体处于免疫抑制状态[5,6]。本文研究显示,ICU患者外周血CD3+、CD4+T淋巴细胞数量、CD4+%、CD4+/CD8+明显低于健康对照组,CD8+%明显高于健康对照组,说明患者的免疫功能明显低下,细胞免疫功能处于明显抑制状态。其机制可能为:当机体遭受严重创(烧)伤、恶性肿瘤、急性中毒、休克、感染后所致脓毒症等,T淋巴细胞对特异性抗原刺激无增殖性反应,大量的T淋巴细胞发生凋亡。凋亡清除了大量活化的T淋巴细胞,使诱导T淋巴细胞克隆无反应,患者淋巴细胞数量明显减少,患者机体的特异性免疫功能处于抑制状态,而非特异性免疫功能则呈高度活跃状态;另一方面,一些严重的病因使得CD4+T淋巴细胞分化异常,CD4+/CD8+比值失衡,Th1细胞/Th2细胞平衡状态发生漂移,其分泌的细胞因子也随即发生改变,结果导致了机体免疫功能的障碍[7]。这样一来,ICU的患者就很容易丧失对迟发型过敏反应的能力、清除病原体无力、容易引起医源性感染和罹患恶性肿瘤以及病情迁延不愈,甚至恶化。本研究中,观察组CD8+T淋巴细胞绝对数量较对照组明显降低,而CD8+的百分比明显升高,是因为观察组中总T淋巴细胞绝对数量明显降低所致,并无矛盾之处。另外,本研究还显示,危重症组较重症组患者外周血CD3+、CD4+、CD8+淋巴细胞数量、CD4+百分比、CD4+/CD8+明显降低,CD8+的百分比明显升高,说明危重症组比重症组免疫功能障碍更严重,从而说明患者病情越严重,机体的免疫功能抑制越严重[8],患者的预后更差。当然,由于条件所限,未能同时进行如淋巴细胞亚群中B细胞、NK细胞以及免疫球蛋白,补体等的检测是本研究的不足之处,如能进行,将会对ICU患者的免疫功能监测更客观和全面。

综上所述,ICU患者存在免疫功能障碍,尽早和动态对其外周血T淋巴细胞亚群进行检测,对于ICU患者病情的判断、指导综合治疗具有重要的临床意义。

摘要：目的 探讨外周血T淋巴细胞亚群免疫分型在重症患者中的变化及临床意义。方法 收集2014年1月至2015年5月我院重症加强医疗病房(ICU)的住院患者100例为观察组,并选择同期健康体检人员50例为健康对照组,采用流式细胞仪分别检测两组人员的外周血T淋巴细胞亚群数量(绝对计数)和百分数。另将观察组按序贯器官衰竭评估(SOFA)标准,分为重症组(SOFA<3分)和危重症组(SOFA≥3分)进行比较,并进行统计分析。结果 观察组外周血CD3+淋巴细胞(简称CD3+)、CD3+CD4+T淋巴细胞数量(简称CD4+)、CD3+CD8~+T淋巴细胞数量(简称CD8+)、CD4+%、CD4~+/CD8+比值明显低于健康对照组,差异均具有统计学意义(P<0.01);而外周血CD8+%明显高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。重症组和危重症组比较,危重症组CD3+、CD4+细胞数量、CD4+%、CD4+/CD8+比值明显低于重症组,差异均具有统计学意义(P<0.01);而CD4+%明显高于重症组,差异有统计学意义(P<0.01);CD8+变化不明显(P>0.05)。结论 重症加强医疗病房(ICU)患者存在外周血T淋巴细胞水平异常,表明患者机体免疫功能存在障碍,且免疫功能状态与病情危重程度有关。尽早检测ICU患者外周血T淋巴细胞数量,对于ICU患者病情的早期诊断、评估及指导临床治疗具有较好的临床意义。

关键词：T淋巴细胞亚群,绝对计数,重症患者,免疫功能

参考文献

[1]邱海波,周韶霞.多器官功能障碍综合征现代治疗[M].北京:人民军医出版社,2001:8-11.

[2]陈永斌,张敏珍,杨国辉.细胞免疫功能测定在危重症患者中的临床意义[J/CD].中国危重症医学杂志:电子版,2010,3(6):384-388.

[3]曹相原.重症医学教程[M].北京:人民卫生出版社,2014:55-83.

[4]金伯泉.医学免疫学[M].5版.北京:人民卫生出版社,2008:101-107.

[5]陈红芳,王香梅,罗建勤,等.脑出血体液免疫变化及其临床意义[J].中国危重病急救医学,2005,17(3):177-179.

[6]路静.外周血T细胞亚群检测在恶性肿瘤中的价值[J].中国现代药物应用,2014,8(20):35-36.

[7]张庆红,姚咏明.进一步重视创(烧)伤脓毒症的免疫监控[J].中华急诊医学杂志,2014,23(2):125-128.

[8]戴凌燕,章义利,程碧环.T淋巴细胞亚群变化与脓毒症发病的关系[J].中华全科医学,2014,12(5):715-716.

外周血免疫T细胞亚群 篇2

【关键词】胸腺肽；系统性红斑狼疮；T细胞亚群

【中图分类号】R593.24+1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）19-0035-02

系统性红斑狼疮（SLE）属自身免疫性疾病，国内外相关研究表明SLE患者外周血CD3+、CD4+、CD8+细胞数的表达与疾病活动度相关。本病目前常用糖皮质激素与环磷酰胺冲击治疗，笔者在此方案基础上联合应用胸腺肽，研究对于SLE患者外周血CD3+、CD4+、CD8+细胞水平影响及临床疗效。

1资料和方法

1.1病例选择选取2011年12月至2013年12月在南华大学附属第二医院风湿科住院治疗的SLE患者98例；两组患者均为女性，对照组49例，患者年龄20～46岁，平均年龄（27.3±6.8）岁，SLE病程0.9～6.2年，平均病程（2.5±1.2）年；观察组49例，患者年龄21-45岁，平均年龄（26.9±6.7）岁，SLE病程1～6.3年，平均病程（2.5±1.3）年。两组患者在性别、年龄、病程、病情等方面具有均衡性，无统计学差别。

1.2随机分组 按照随机数字表法分为治疗组与对照组。

1.3纳入标准 上述患者经诊断，均符合1997年美国风湿病协会（ACR）制订的 SLE 分类标准[1]，患者对治疗知情，并签署知情同意书。

1.4排除标准 有肝炎、恶性肿瘤病史。

1.5退出标准 不符合纳入标准者，有严重不良反应及并发症，难以继续治疗者，应用其他可能影响治疗效果的药物者。

1.6治疗方法对照组采用糖皮质激素+环磷酰胺，观察组在此基础上，配合应用胸腺肽。

1.6.1对照组治疗泼尼松1mg/（kg·d），1次/d，口服，6周后，以每周减少10%用量速度递减，减到0.5 mg/（kg·d）时，减慢减药的速度，减至0.2mg/（kg·d）时，维持治疗；0.9% 氯化钠250ml+环磷酰胺0.5mg/m2静滴，1次/3周。2个月为1个疗程，间隔3周随访1次[2]。

1.6.2观察组治疗在对照组治疗的基础上，配合应用胸腺肽，用法：0.9% 氯化钠250ml+胸腺肽100mg，日一次静点。6周为一疗程[3]。

1.7观察指标

1.7.1临床疗效评定标准参考1993年卫生部制定SLE疗效判定标准。痊愈：治疗3～4个月内主要症状及伴随症状消失，检验指标完全缓解；显效：治疗3～4个月内主症好转，兼症大部分消失，指标基本缓解，病情稳定；有效：治疗3～4个月内主症及兼症有所好转，检验指标部分符合缓解条件；无效：治疗半年以上，症状改善不明显，且病情反复[4]。

1.7.2免疫功能判断记录入院及治疗半年后患者T淋巴细胞亚群（CD3+、CD4+、CD8+）细胞表达水平。

1.8统计学方法计量资料应用t检验，计数资料应用卡方检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

2结果

2.1观察组和对照组治疗疗效情况，详见表1。

【摘要】目的：胸腺肽对系统性红斑狼疮患者外周血T细胞亚群的影响及临床疗效。方法：将98例患者随机分为两组，每组49例。对照组采用糖皮质激素配合环磷酰胺，观察组在对照组用药基础上，联合应用胸腺肽，对比两组治疗前后自身及组间患者外周血CD3+、CD4+、CD8+细胞水平变化。结果：观察组总有效率优于对照组（P<0.05）；治疗后，观察组患者外周血CD3+、CD4+细胞水平较治疗前升高（P<0.05），与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）；两组CD4+/CD8+较治疗前升高，且观察组优于对照组。两组治疗后CD8+细胞水平下调，与治疗前相比，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：在常规治疗基础上应用胸腺肽对于系统性红斑狼疮患者外周血CD3+、CD4+细胞水平上调作用明显，临床疗效显著。

【关键词】胸腺肽；系统性红斑狼疮；T细胞亚群

【中图分类号】R593.24+1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）19-0035-02

系统性红斑狼疮（SLE）属自身免疫性疾病，国内外相关研究表明SLE患者外周血CD3+、CD4+、CD8+细胞数的表达与疾病活动度相关。本病目前常用糖皮质激素与环磷酰胺冲击治疗，笔者在此方案基础上联合应用胸腺肽，研究对于SLE患者外周血CD3+、CD4+、CD8+细胞水平影响及临床疗效。

1资料和方法

1.1病例选择选取2011年12月至2013年12月在南华大学附属第二医院风湿科住院治疗的SLE患者98例；两组患者均为女性，对照组49例，患者年龄20～46岁，平均年龄（27.3±6.8）岁，SLE病程0.9～6.2年，平均病程（2.5±1.2）年；观察组49例，患者年龄21-45岁，平均年龄（26.9±6.7）岁，SLE病程1～6.3年，平均病程（2.5±1.3）年。两组患者在性别、年龄、病程、病情等方面具有均衡性，无统计学差别。

1.2随机分组 按照随机数字表法分为治疗组与对照组。

1.3纳入标准 上述患者经诊断，均符合1997年美国风湿病协会（ACR）制订的 SLE 分类标准[1]，患者对治疗知情，并签署知情同意书。

1.4排除标准 有肝炎、恶性肿瘤病史。

1.5退出标准 不符合纳入标准者，有严重不良反应及并发症，难以继续治疗者，应用其他可能影响治疗效果的药物者。

1.6治疗方法对照组采用糖皮质激素+环磷酰胺，观察组在此基础上，配合应用胸腺肽。

1.6.1对照组治疗泼尼松1mg/（kg·d），1次/d，口服，6周后，以每周减少10%用量速度递减，减到0.5 mg/（kg·d）时，减慢减药的速度，减至0.2mg/（kg·d）时，维持治疗；0.9% 氯化钠250ml+环磷酰胺0.5mg/m2静滴，1次/3周。2个月为1个疗程，间隔3周随访1次[2]。

1.6.2观察组治疗在对照组治疗的基础上，配合应用胸腺肽，用法：0.9% 氯化钠250ml+胸腺肽100mg，日一次静点。6周为一疗程[3]。

1.7观察指标

1.7.1临床疗效评定标准参考1993年卫生部制定SLE疗效判定标准。痊愈：治疗3～4个月内主要症状及伴随症状消失，检验指标完全缓解；显效：治疗3～4个月内主症好转，兼症大部分消失，指标基本缓解，病情稳定；有效：治疗3～4个月内主症及兼症有所好转，检验指标部分符合缓解条件；无效：治疗半年以上，症状改善不明显，且病情反复[4]。

1.7.2免疫功能判断记录入院及治疗半年后患者T淋巴细胞亚群（CD3+、CD4+、CD8+）细胞表达水平。

1.8统计学方法计量资料应用t检验，计数资料应用卡方检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

2结果

2.1观察组和对照组治疗疗效情况，详见表1。

【摘要】目的：胸腺肽对系统性红斑狼疮患者外周血T细胞亚群的影响及临床疗效。方法：将98例患者随机分为两组，每组49例。对照组采用糖皮质激素配合环磷酰胺，观察组在对照组用药基础上，联合应用胸腺肽，对比两组治疗前后自身及组间患者外周血CD3+、CD4+、CD8+细胞水平变化。结果：观察组总有效率优于对照组（P<0.05）；治疗后，观察组患者外周血CD3+、CD4+细胞水平较治疗前升高（P<0.05），与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）；两组CD4+/CD8+较治疗前升高，且观察组优于对照组。两组治疗后CD8+细胞水平下调，与治疗前相比，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：在常规治疗基础上应用胸腺肽对于系统性红斑狼疮患者外周血CD3+、CD4+细胞水平上调作用明显，临床疗效显著。

【关键词】胸腺肽；系统性红斑狼疮；T细胞亚群

【中图分类号】R593.24+1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）19-0035-02

系统性红斑狼疮（SLE）属自身免疫性疾病，国内外相关研究表明SLE患者外周血CD3+、CD4+、CD8+细胞数的表达与疾病活动度相关。本病目前常用糖皮质激素与环磷酰胺冲击治疗，笔者在此方案基础上联合应用胸腺肽，研究对于SLE患者外周血CD3+、CD4+、CD8+细胞水平影响及临床疗效。

1资料和方法

1.1病例选择选取2011年12月至2013年12月在南华大学附属第二医院风湿科住院治疗的SLE患者98例；两组患者均为女性，对照组49例，患者年龄20～46岁，平均年龄（27.3±6.8）岁，SLE病程0.9～6.2年，平均病程（2.5±1.2）年；观察组49例，患者年龄21-45岁，平均年龄（26.9±6.7）岁，SLE病程1～6.3年，平均病程（2.5±1.3）年。两组患者在性别、年龄、病程、病情等方面具有均衡性，无统计学差别。

1.2随机分组 按照随机数字表法分为治疗组与对照组。

1.3纳入标准 上述患者经诊断，均符合1997年美国风湿病协会（ACR）制订的 SLE 分类标准[1]，患者对治疗知情，并签署知情同意书。

1.4排除标准 有肝炎、恶性肿瘤病史。

1.5退出标准 不符合纳入标准者，有严重不良反应及并发症，难以继续治疗者，应用其他可能影响治疗效果的药物者。

1.6治疗方法对照组采用糖皮质激素+环磷酰胺，观察组在此基础上，配合应用胸腺肽。

1.6.1对照组治疗泼尼松1mg/（kg·d），1次/d，口服，6周后，以每周减少10%用量速度递减，减到0.5 mg/（kg·d）时，减慢减药的速度，减至0.2mg/（kg·d）时，维持治疗；0.9% 氯化钠250ml+环磷酰胺0.5mg/m2静滴，1次/3周。2个月为1个疗程，间隔3周随访1次[2]。

1.6.2观察组治疗在对照组治疗的基础上，配合应用胸腺肽，用法：0.9% 氯化钠250ml+胸腺肽100mg，日一次静点。6周为一疗程[3]。

1.7观察指标

1.7.1临床疗效评定标准参考1993年卫生部制定SLE疗效判定标准。痊愈：治疗3～4个月内主要症状及伴随症状消失，检验指标完全缓解；显效：治疗3～4个月内主症好转，兼症大部分消失，指标基本缓解，病情稳定；有效：治疗3～4个月内主症及兼症有所好转，检验指标部分符合缓解条件；无效：治疗半年以上，症状改善不明显，且病情反复[4]。

1.7.2免疫功能判断记录入院及治疗半年后患者T淋巴细胞亚群（CD3+、CD4+、CD8+）细胞表达水平。

1.8统计学方法计量资料应用t检验，计数资料应用卡方检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

2结果

外周血免疫T细胞亚群 篇3

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2008年2月至2010年2月收治的肝硬化患者64例, 男41例, 女23例;年龄28～85岁, 平均年龄41.8岁;全部患者肝硬化病症均由乙型肝炎所致, 其中LCC患者31例, CC患者33例。另选取经体检确定为健康者60例作为对照组患者, 包括34例男性和26例女性, 年龄22～81岁, 平均年龄37.8岁。各组患者在年龄、性别等方面的差异对比无统计学意义, 有可比性。

1.2 方法

患者在治疗前给予静脉血采集2～3mL及EDTA-K2抗凝。采用Beckman-Coulter XL4MCL型流式细胞仪进行T细胞亚群的检测, SSC FSC设门淋巴细胞, 对总T细胞、T4细胞、T8细胞、双阳性T细胞、双阴性T细胞的绝对含量和百分含量进行分析, 并对T4/T8的比值进行计算。

1.3 统计学方法

采用SPSS13.0统计学软件对相关数据进行统计分析, 采用t检验计量资料组间差异, 方差分析百分数组间差异, P<0.05说明各组差异对比具有统计学意义。

2 结果

对三组患者进行比较分析, 可知CC组患者T4/T8比值和T4细胞百分含量较对照组有所升高;总T细胞、T4和T8细胞、双阴性和双阳性T细胞的绝对含量有所下降;双阴性T细胞和T8细胞的百分含量有所下降。而LCC组患者与对照组患者相比, 总T细胞、双阴性T细胞、T8细胞的百分含量有所下降;T4/T8比值则有所升高;总T细胞、T4和T8细胞、双阴性和双阳性T细胞的绝对含量同样有所下降。就T4/T8比值而言, LCC组患者下降程度较CC组患者更为显著;对照组、CC组、LCC组T4/T8比值分别为 (1.55±0.52) 、 (3.14±1.49) 、 (2.44±0.79) 。外周血T淋巴细胞亚群具体检测结果见表1、表2。

3 讨论

本组病例研究显示, LC组患者体内T细胞免疫功能的异常问题较为明显, 存在T细胞生成抑制、T细胞免疫功能下降、T4细胞功能相对亢进、T4细胞应答能力减弱等异常现象[1]。由此可知, 在LC的影响下, 患者肝细胞容易生成炎性而坏死, 对肝细胞再生有一定的刺激性, 也会促使假小叶的形成, 而随着代偿向失代偿的转化, 肝组织内外血循环障碍也就会更加严重, 从而促成肝功能进行性恶化现象。当前, 对于LC的研究, 调节性T细胞、细胞因子的分析报告比较的多, 而总T细胞、T4和T8细胞等项目的分析报告则比较的少。而要掌握患者T淋巴细胞各亚群的变化规律, 就要对T细胞免疫功能状态进行全面掌握[2]。本组研究显示, LC患者T细胞各亚群的绝对含量与健康者相比均有所下降, 提示患者T细胞免疫功能受到抑制;而LCC组患者与健康者相比, T4细胞百分含量较高, T8细胞百分含量较低, 进而T4/T8比值有所提升, 显示LCC患者T细胞免疫功能受到抑制, 但T4细胞和T8细胞失衡, 有T4细胞功能相对亢进现象的存在;由于患者病情的进一步加重[3,4], 失代偿期后的T4细胞和T8细胞失衡会得到一定程度的缓解, 而这则是一种好转假象的呈现, 多是因为T4细胞应答减退所致。对于双阴性和双阳性T细胞而言, 其LC患者的的细胞含量相对减少, 说明T细胞生成得以减少。相关报告指出, 原发性胆汁性LC患者体内存在的CD8+细胞和CD4+细胞侵润至肝组织现象较为明显, 而肝组织中这两种细胞的数量则会有所增加。而事实上, 早期LC患者外周血T4和T8细胞可以向肝组织迁移[5], 而肝组织则会含有大量的T4和T8细胞, 外周血T4和T8细胞的数量则会降低;而当患者病情加重后, T细胞免疫就会受到抑制, T细胞生成、外周血及肝组织中的T4和T8细胞数量也会有所减少。与此同时, T4和T8细胞LC患者体内会出现失衡现象, T4细胞则相对比较亢进。在LC代偿期、失代偿期, 均有T4和T8细胞失衡问题的存在, 但与失代偿期T4和T8细胞失衡相比, 代偿期细胞失衡的程度更为明显[6]。

总之, 通过流式细胞术的应用, 检测外周血总T细胞、T4细胞、T8细胞、双阳性T细胞、双阴性T细胞的绝对含量和百分含量, 对T细胞免疫功能状态的信息掌握非常重要, 可促使患者病情判断、预后评估、疗效检测的有效开展和实施, 同时对疾病相关规律及机制的发现和总结也有着重要的研究意义。

摘要：目的 对肝硬化患者外周血T淋巴细胞亚群变迁及免疫功能状态进行分析。方法 选取64例肝硬化患者和60例健康者作为研究对象, 其中肝硬化患者分为31例LCC患者和33例CC患者。通过流式细胞术的应用, 对全组患者外周血T淋巴细胞亚群水平进行检测, 并对检测结果进行分析和对比。结果 LCC和CC组患者与对照组患者相比, 总T细胞及格亚群细胞的绝对含量均有所降低, 双阴性T细胞百分含量也有所降低, 而T4/T8比值则得以上升, 其中CC组患者T4/T8比值与LCC组患者相比, 升高程度更为显著。结论 LC组患者体内T细胞免疫功能的异常问题较为明显, 在病情加重的情况下, T4细胞的应答能力则会减退。

关键词：外周血T淋巴细胞亚群,免疫功能,肝硬化

参考文献

[1]吴继周, 周桂英, 罗光汗, 等.细胞免疫状态的慢性乙肝肝组织学及免疫组织化学变中的作用[J].中华传染病杂志, l997, l5 (3) :l58.

[2]吴本俨, 沙之阁, 司永仁, 等.肝硬化与肝癌患者T细胞亚群研究[J].中华消化杂志, l989, 9 (5) :284.

[3]张静, 徐维家, 王青.乙肝后肝硬化患者外周血T淋巴细胞亚群及HBV-DNA含量变化分析[J].国际检验医学杂志, 2006, 27 (12) :1081-1082.

[4]贾绮宾, 梁学亚, 吴改玲, 等.肝癌、肝硬化患者血清TNF-α, IL-2, sIL-2R检测的临床意义[J].胃肠病学和肝病学杂志, 2002, 20 (3) :243-244.

[5]吴丽娟, 刘霞, 赵文利.流式单平台和双平台计数定量检测外周血淋巴细胞亚群的实验研究[J].国际检验医学杂志, 2012, 33 (2) :143-145.

外周血免疫T细胞亚群 篇4

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2010年1月—2012年1月上高县人民医院收治的行手术治疗的结肠癌患者100例, 按数字随机法将患者分为观察组和对照组, 每组50例。患者术后均经病理检查确诊为结肠癌。本研究经医院伦理委员会审核批准, 患者均签署知情同意书。观察组中男25例, 女25例;年龄26~78岁, 中位年龄49岁:体质量41~83kg, 平均 (68.2±28.5) kg。对照组中男23例, 女27例;年龄28~76岁, 中位年龄48岁;体质量42~81kg, 平均 (66.8±27.4) kg。两组患者一般资料比较, 差异无统计学意义 (P>0.05) , 具有可比性。

1.2 治疗方法

患者均接受常规手术治疗。对照组患者术后采取常规治疗。观察组患者在对照组的基础上采取辅助化疗和免疫治疗, 具体如下:辅助化疗:采用方案:化疗第1天:奥沙利铂130mg/m2, 甲酰四氢叶酸钙 (CF) 200mg/m2, 静脉滴注, 2h内滴完;第2天之后:奥沙利铂130mg/m2, 5-氟尿嘧啶 (5-Fu) 500mg/m2, 4~6h滴完;治疗21d为1周期, 根据患者情况术后辅助化疗4周以上。免疫治疗:在手术和化疗的基础上, 患者在化疗期间接受树突状细胞免疫治疗, 将树突状细胞悬液置于0.9%氯化钠溶液2ml中并于腹股沟淋巴结处注射, 腹股沟两侧各注射1ml, 注射完成后观察30min, 患者无不良反应后方可离开。免疫治疗前2周为1次/周, 之后为1次/2周, 治疗期间每周检查患者的血常规, 对出现白细胞计数异常等患者进行升白药物治疗后继续行免疫治疗。

1.3 检测方法

外周血检测T淋巴细胞亚群数量:采用流式细胞分析仪 (美国BD公司的FACSCalibur流式细胞仪) 对血液样本的T淋巴细胞亚群数量进行检测, 荧光标记单克隆抗体亦由美国BD公司提供。术前和术后每3个月抽取空腹外周血100μl, 于血液标本中加入CD3+、CD4+和CD8+单克隆抗体并摇匀后于室温下静置20min后加入红细胞裂解液1.5ml, 再次静置10min后以3000/min离心处理10min, 去上清液并加入磷酸盐缓冲液1ml混匀后置于流式细胞仪检测。

1.4 统计学方法

采用SPSS 13.0统计学软件进行数据处理, 计量资料以±s表示, 组间比较采用t检验;计数资料采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

两组术前及术后3个月的外周血T淋巴细胞亚群数量比较, 差异无统计学意义 (P>0.05) ;观察组术后6个月、12个月及24个月的外周血T淋巴细胞亚群数量高于对照组, 差异有统计学意义 (P<0.05, 见表1) 。

3 讨论

近年来结肠癌的发病率不断上升, 作为我国常见的消化道恶性肿瘤, 结肠癌具有起病隐匿、病情发展缓慢的特点, 因此大部分患者发现明显症状时已属于中晚期[5,6]。结肠癌的治疗常采用手术治疗结合放化疗等治疗方法, 然而长时间的放化疗可导致明显的毒副作用, 影响患者的化疗耐受性, 造成过度治疗[7]。近年来有研究表明, 免疫治疗可在一定程度上缓解结肠癌症状[8]。目前国内外免疫治疗在结肠癌综合治疗中应用的报道较少, 明确术后辅助化疗联合免疫治疗对结肠癌外周血T淋巴细胞亚群数量的影响可为结肠癌多学科综合治疗提供有力的临床依据。

本研究结果显示, 术后辅助化疗联合免疫治疗可使患者外周血CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD4+和CD4+CD8+等T淋巴细胞亚群数量明显增加, 且随着时间的延长, 患者外周血等T淋巴细胞亚群数量亦不断增加, 术后辅助化疗联合免疫治疗是增加患者外周血T淋巴细胞亚群数量、改善患者免疫力的有效方法。

综上所述, 术后辅助化疗联合免疫治疗可有效增加结肠癌患者外周血T淋巴细胞亚群数量, 增强患者免疫力, 是结肠癌的有效治疗方法。

参考文献

[1] 杨震宇.结肠癌病人新辅助化疗与营养支持的综合治疗[J].肠外与肠内营养, 2012, 19 (2) :122-124.

[2] 王绛辉, 郭立达, 杨帆, 等.姜黄素对结肠癌的化学预防作用[J].时珍国医国药, 2012, 23 (11) :2725-2726.

[3] 傅传刚, 高显华.结直肠癌的综合治疗[J].上海医学, 2011, 34 (11) :812-815.

[4] 李莎, 李岩, 梁婧, 等.DC-CIK联合化疗治疗结肠癌的临床研究[J].中国免疫学杂志, 2012, 28 (9) :835-839.

[5]万德森.结肠癌手术治疗值得关注的若干问题[J].中国实用外科杂志, 2011, 31 (6) :466-469.

[6] 王征, 周志祥.结直肠癌综合治疗的个体化原则[J].实用肿瘤杂志, 2013, 28 (1) :1-5.

[7] 王永鹏, 马思平, 宋纯, 等.晚期结肠癌综合治疗及毒副反应处理[J].中国实用内科杂志, 2012, 32 (3) :178-181.

外周血免疫T细胞亚群 篇5

1 资料和方法

1.1 仪器和主要试剂

EPICS-XL型流式细胞仪由美国贝克曼库尔特公司制造。白介素2 (IL-2) 、白介素4 (IL-4) 、白介素6 (IL-6) 等细胞因子检测试剂盒购自美国T&B生物公司。

1.2 对象

2005年11月至2007年12月我院住院白血病患儿35例为治疗组, 男21例, 女14例, 年龄4～12岁, 平均 (7.82±3.46) 岁。所有病例的诊断、分型及疗效判定均参考文献[1]标准, 包括急性淋巴细胞白血病22例、急性非淋巴细胞白血病8例和急性早幼粒细胞白血病5例。随机选取我院健康体检合格儿童30名为对照组, 男18名, 女12名, 年龄7～18岁, 平均年龄 (12.55±1.22) 岁。实验组和对照组性别、年龄比较差异无统计学意义具有可比性

1.3 治疗方法

急性淋巴细胞白血病治疗用药为长春新碱加强的松加门冬酰胺酶加柔红霉素 (VPLD方案) 行诱导化疗, 巩固治疗用替尼泊苷 (VM 26) 或依托泊苷 (VP16) 加阿糖胞苷 (Ara-c) 及环磷酰胺加长春新碱加柔红霉素加强的松 (CODP方案) ;环磷酰胺加长春新碱加阿糖胞苷加强的松 (COAP) 以及大剂量甲氨喋呤 (MTX) 等。急性非淋巴细胞白血病采用柔红霉素加阿糖胞苷 (DA方案) , 三尖杉酯碱加阿糖胞苷 (HA方案) , 米托蒽醌加阿糖胞苷 (MA方案) , 大剂量阿糖胞苷等方案交替进行。急性早幼粒细胞白血病先采用维甲酸诱导, 继之以其他化疗方案治疗。

1.4 检测方法

治疗组患儿开始化疗前1d、化疗结束后第2天空腹抽静脉血。取3ml置肝素抗凝管中, 用流式细胞仪检测CD 3+、CD 4+和CD 8+含量, 操作按说明书进行。取静脉血2ml, 不抗凝, 室温下2 500r·min-1离心15min, 分离血清, 置-20℃保存备用, 用ELISA双抗体夹心酶联免疫吸附法检测血清IL-2、IL-4和IL-6水平, 操作按说明书进行。对照组仅采血检查1次。

1.5 统计学处理

用SPSS10.0统计软件包进行处理, 计数资料比较采用χ2检验, 患者治疗前后采用两个样本均数的t检验, 治疗组与对照组比较采用配对资料的t检验。

2 结果

与对照组相比, 治疗组外周血CD 3+、CD 4+和CD 8+含量, CD 4+/CD 8+值和IL-2水平均下降, IL-4和IL-6水平均升高, 差异均具有统计学意义 (P<0.01, P<0.05) 。化疗后, 治疗组CD 3+、CD 4+、CD 8+含量, CD 4+/CD 8+值和IL-2水平升高, IL-4和IL-6水平均下降, 与治疗前比较差异具有统计学意义 (P<0.01, P<0.05) 。见表1、2。

与对照组比较, *P<0.05, **P<0.01;与治疗前相比, ▼P<0.05, ▼▼P<0.01

与对照组比较, **P<0.01;与治疗前比较, ▼P<0.05, ▼▼P<0.01

3 讨论

白血病属于造血干细胞异常增生的恶性肿瘤, 细胞免疫在抗肿瘤免疫中起着主要调节作用[2]。机体维持正常的免疫功能有赖于各种免疫细胞, 特别是T细胞亚群之间相互协作和相互制约。CD 3+是成熟T细胞的重要标志, 通常代表总T细胞;CD 4+是辅助性T细胞的代表, CD 8+是抑制性T细胞的代表。CD 4+/CD 8+值是机体免疫调控网络的重要枢纽, 生理状态下CD 4+和CD 8+之间始终保持动态平衡, 调节机体的免疫状态[3]。本研究中治疗组CD 3+、CD 4+、CD 8+含量, 以及CD 4+/CD 8+值明显低于对照组, 反映白血病患儿细胞免疫应答能力低下, 免疫功能紊乱。有报道认为, CD 3+、CD 4+和CD 8+含量以及CD 4+/CD 8+值降低可刺激B细胞分泌抗体形成免疫复合物并激活补体, 致机体生理功能紊乱及组织损伤[4]。因此, 细胞免疫功能受损会进一步加重患儿的病情, 改善机体细胞免疫功能可能有助于恢复机体的生理功能。化疗是临床治疗白血病的常规手段, 本组病例化疗后, CD 3+、CD 4+和CD 8+含量以及CD 4+/CD 8+值明显上升, 提示化疗可增强机体免疫功能, 提高患者抗肿瘤能力。

根据分泌细胞因子的不同, CD 4+T细胞分为Th1和Th2两种亚型, Th1亚型分泌的IL-2、IL-12、干扰素 (IFN) -γ等细胞因子在机体细胞免疫应答中发挥重要作用, Th2亚型分泌的IL-4、IL-5、IL-6、IL-10等细胞因子主要调节机体体液免疫应答[5]和在功能上相互拮抗, 只有各种细胞因子处于平衡状态, 机体才能进行正常的免疫应答。IL-2可促进Thl细胞活化, 促进T细胞增殖及提高杀伤作用, 促进B细胞分泌抗体等功能。而IL-4是Th2细胞活化的决定性因素[5]。IL-6主要由单核巨噬细胞、T细胞、内皮细胞产生, 在肿瘤患者中明显升高。本实验结果显示, 治疗前白血病患儿IL-2水平低于健康体检儿童, IL-4、IL-6水平高于健康体检儿童, 而化疗后两组比较差异无统计学意义, 表明化疗前患儿细胞因子网络失衡, 抑制了细胞免疫, 促进了白血病细胞的增生, 化疗后患儿免疫细胞调节功能得到一定程度的恢复, 机体的免疫状态总体上接近正常水平, 可见化疗可以改善机体细胞因子紊乱状态。

综上所述, 白血病患儿细胞免疫功能低下, 细胞因子水平紊乱, 化疗可以增强机体细胞免疫功能, 改善细胞因子水平。因此, 外周血T细胞亚群和细胞因子的测定可作为判断白血病患者病情变化程度和预后的辅助指标对临床诊断及疗效判定具有一定意义。

摘要：目的探讨化疗对白血病患儿细胞免疫功能的调节作用。方法在白血病患儿化疗前、后用流式细胞仪检测外周血CD3+、CD4+和CD8+含量, 用ELISA双抗体夹心酶联免疫吸附法检测血清白介素2 (IL-2) 、白介素4 (IL-4) 和白介素6 (IL-6) 水平, 比较治疗前后各检测值的变化。以健康体检合格儿童30名为对照组。结果白血病组外周血CD3+、CD4+和CD8+含量, CD4+/CD8+值和IL-2水平均低于对照组, 而IL-4和IL-6水平均高于对照组, 差异均有统计学意义 (P<0.01, P<0.05) 。与化疗前相比, 白血病患儿化疗后外周血CD3+、CD4+、CD8+含量, CD4+/CD8+值和IL-2水平升高, 而IL-4和IL-6水平均下降, 差异也均有统计学意义 (P<0.01, P<0.05) 。结论积极稳妥的化疗可调节白血病患儿T细胞亚群和细胞因子水平, 提高机体免疫力。

关键词：白血病,化疗,T细胞亚群,细胞因子

参考文献

[1]张之南, 沈悌.血液病诊断及疗效标准[M].2版.北京:科学出版社, 1998:168-169.

[2]曹广文, 杜平.现代癌症生物治疗学[M].北京:人民军医出版社, 1995:9-20.

[3]崔玉宝, 李朝品, 王健.粉尘螨浸液免疫治疗螨性哮喘患者的免疫功能观察[J].中国寄生虫病防治杂志, 2003, 16 (5) :305-307.

[4]金波, 郑帼, 傅雷.癫痫患者血清IL-2、IL-6、TNF-α含量和外周血B细胞及T淋巴细胞亚群水平[J].放射免疫学杂志, 2006, 19 (6) :474-475.

外周血免疫T细胞亚群 篇6

1 对象与方法

1.1 对象

收集2005年9月至2007年3月鹤壁煤业集团总医院门诊就医的URM患者35例,非孕期,排除染色体、生殖道解剖结构、内分泌异常和生殖道感染,年龄27～34(30.33±3.25)岁;NNP妇女40例,年龄23～32(28.36±5.23)岁。

1.2 方法

(1)标本收集:分别采集受试者外周静脉血2mL,肝素抗凝。(2)细胞培养:96孔培养板中取2孔,每孔加入同一份血样标本肝素钠抗凝全血100μL和RPMI-1640培养基100μL,加入刺激剂佛波乙醇脂25ng,离子霉素1μg和莫能霉素2μL。37℃体积分数为0.05的CO2培养箱孵育18h。(3)流式CD4+淋巴细胞胞内细胞因子检测:取2只试管,分别为测定管和阴性对照管,上述培养细胞混匀,各取100μL,均加入10μLPE-cy5标记的鼠抗人CD4单抗,混匀,4℃避光孵育20min,加1mL溶血素裂解液,混匀,室温放置10min,离心弃上清,PBS洗涤1次。加入500μL破膜剂,混匀,室温放置10min,离心弃上清后进行细胞内因子标记。测定管中加入0.5μg异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)和PE标记的白细胞介素10(interleukin-10,IL-10),对照管加入相应的同型对照,混匀,4℃避光孵育20min,PBS洗涤一次后上机检测。上述试剂均购自美国eBioscience公司。应用FAC-CALIBUR型流式细胞仪,对FL1和FL2通道分别以相应的同种型IgG染色细胞为阴性对照,设置各通道之间的荧光补偿后,对CD4+细胞胞内的Th1型细胞因子IFN-γ和Th2型细胞因子IL-10进行检测。测出相应的Th1型细胞和Th2型细胞百分比。

1.3 主要观察指标

35例URM患者及40例NNP外周血中Th1和Th2细胞的百分率。

1.3 统计学处理

实验数据以χ—±s表示,使用SPSS12.0统计软件进行方差分析及两两比较,组内前后比较用配对t检验,P<0.05为有统计学意义。

2 结果

URM组与NNP组比较,前者的CD4+IFN-γ+表达水平升高,CD4+IL-10+表达水平降低,Th1/Th2值升高,见表1。

与NNP比较*P<0.05

3 讨论

T辅助细胞的功能性分化是近年来免疫学研究的热点之一。T辅助细胞分化后产生Th1/Th2两类不同细胞的细胞因子,以调节人体的免疫平衡。最近的研究表明[1],Th1/Th2型细胞因子的调节机制也开始用于解释母胎界面的细胞调节现象。胎儿作为一种同种的半异体抗原能够在母体内生存、生长和发育而不被排斥,其中发生在母胎界面的特殊免疫现象起着关键性作用。

Th1细胞分泌I类细胞因子(T辅助l类细胞因子),包括IL-2和IFN-γ,主要介导细胞免疫功能。Th2细胞分泌Ⅱ类细胞因子(T辅助2类细胞因子),包括IL-4、-6、-10,主要介导体液免疫功能。两类细胞都可产生IL-3、12和粒-巨噬细胞集落刺激因子;两类细胞都有共同的前体Th0细胞。事实上,Thl和Th2细胞是在抗原的刺激及细胞因子参与下由成熟但未致敏的Th0细胞分化而来,分别介导细胞免疫和体液免疫。Th1细胞以分泌IFN-γ为主要特征,参与细胞介导的促进抗体IgG2α的产生。Th2细胞主要分泌IL-4,参与体液免疫应答,即IgG1和IgE抗体产生和嗜酸粒细胞活化。Th2类的细胞因子属于炎症性细胞因子。这些细胞因子及其受体在免疫排斥反应中扮演主要的角色。Th2细胞因子被认为是免疫调节性因子。这些反应的产物可刺激B细胞生长并下调Th1反应,诱导母体对胎儿同种移植产生免疫耐受,可能是促进成功妊娠滋养层生长的自然反应。Th2细胞因子的产生缺陷,可能导致反复自然流产。已有研究证明[2],反复自然流产妇女蜕膜免疫细胞产生过量胚胎毒性细胞因子,Thl/Th2平衡偏向Th1,但促成其向Th1偏向的原因尚不清楚。有学者认为,Th1细胞与某种特定抗原反应的倾向是由Ⅱ类组织相容性白细胞抗原基因决定的。另有研究表明[3],Th1类的细胞因子在正常妊娠前3个月胎盘组织中没有表达,这可能导致局部IL-10的产生增高,有利于胚胎的着床。国外有学者分析相同孕周的正常孕妇及不明原因的反复自然流产患者的淋巴细胞,经反复证实,正常孕妇淋巴细胞培养的上清液中以Th2类细胞因子为主。所以研究者认为,成功的妊娠同样是以Th2细胞为主的,而Th1类细胞因子对胚胎有害。通过分析针对丈夫淋巴细胞免疫治疗的HUA患者发现,其中能够正常妊娠的HUA患者外周血Th1类细胞因子,如IL-2、IFN-γ下降,而Th2类细胞因子,如IL-10则明显升高。对滋养层组织的研究表明,滋养层具有特殊的免疫学特性,在整个孕期为胎儿提供特殊的植入保护,合体滋养层和细胞滋养层都不表达典型的I型或Ⅱ型HLA抗原,但绒毛外细胞滋养层表达非典型I类主要组织相容性复合物,即组织相容性白细胞抗原G。这一抗原具有限制性分布和非多态性的特点,可降低滋养层对天然杀伤细胞介导的、溶细胞的细胞毒作用的敏感性。当人体组织的相容性白细胞抗原G表达异常或在接触其他机体组织相容性白细胞抗原G时释放细胞因子异常,将会对滋养层生长产生负性影响,导致流产。邱丽华等[4,5]报道,正常妊娠与非妊娠妇女外周血Th细胞亚群差别无统计学意义,而URM妇女外周血Th2细胞亚群较正常非妊娠妇女显著下降。陈巧英等[6]发现,早孕期正常妊娠者外周血Th1/Th2比例显著低于早孕期自然流产患者及黄体期育龄妇女。Nishikawa等[7]证实Th2细胞具有强的抑制CD4+CD-25T细胞和T8细胞增殖的活性。Taams等[8]发现,Th2细胞与单核细胞/巨噬细胞共培养,单核细胞仅产生最小剂量的细胞因子,而与CD4+CD-25T细胞共培养,则使后者产生大量亲炎症因子(TNF-α,IFN-γ和IL-6)。因此,Th2细胞亚群数量的相对减少不能正常有效地诱导孕妇免疫耐受,容易发生对异型抗原的免疫排斥反应,乃至影响胚胎着床而流产。董琳等[9]应用环孢素A上调孕鼠外周Th2细胞,诱导母胎免疫耐受,可降低孕鼠自然流产模型胚胎吸收率,改善妊娠预后。杨金英等[10]以正常生育非孕妇女(n=20)为对照,以URM(n=25)为研究对象,采用实时荧光定量PCR分析外周血单个核细胞Foxp3转录水平,以流式细胞术分析外周血CD4+CD+25T细胞Foxp3翻译水平,结果显示URM患者的Foxp3转录水平明显低于正常对照组(P<0.01)。杨卉等[11]对URM妇女实施主动免疫治疗,妊娠成功者Th2细胞显著多于妊娠失败者。本试验中,通过检测URM患者及NNP者细胞因子发现URM患者Th1型细胞因子IFN-γ表达增高,Th2型细胞因子IL-10水平降低,也表明在URM患者体内存在Th1/Th2细胞功能失调。Th1/Th2升高导致炎症介质大量增加,抗炎细胞因子增加不明显或者降低,致使URM患者细胞因子网络失衡及外周血T细胞杀伤功能增强。

本研究表明,URM患者由于Th1/Th2细胞群的失衡,激活病理性免疫反应,导致一系列的病理生理改变和免疫功能紊乱。孕妇体内Th1细胞亚群升高及Th2细胞亚群相对减少可能是URM发病重要机制之一,并有望成为临床免疫治疗的靶点和疗效监测指标之一。

摘要：目的观察原因不明复发性流产(URM)患者外周血Th1型细胞因子干扰素γ及Th2型细胞因子白细胞介素10水平的变化。方法选择2005年9月至2006年4月河南省鹤壁煤业集团总医院妇产科35例URM(非孕期)患者和40例正常非孕(NNP)妇女,采用流式细胞分析法对各组患者进行CD4+Th1型细胞因子干扰素γ和Th2型细胞因子白细胞介素10水平进行检测,从而测出相应Th1、Th2细胞的百分比。结果URM患者CD4+干扰素γ表达水平和Th1/Th2值高于NNP组(P<0.05),CD4+白细胞介素10表达水平低于NNP组(P<0.05)。结论URM患者存在Th1/Th2失衡,且可能与URM发病有一定关联。

外周血免疫T细胞亚群 篇7

1 资料与方法

1.1 研究对象

2006年1月～2008年2月在我院住院治疗的结直肠癌患者80例,均经病理确诊。根据国际新TNM分期标准将结直肠癌患者进行临床病理分期[3],其中I期2例,Ⅱ期9例,Ⅲ期23例,Ⅳ期46例。其中男性46例,女性34例,年龄28～78岁,平均(55.03±13.11)岁。正常对照组22例,为本院健康体检者,其中男性16例,女性4例,年龄26～58岁,平均(48.38±13.58)岁。所有受检对象均无免疫系统疾病或使用过免疫抑制剂。

1.2 试剂和仪器.

单克隆抗体抗CD3FITC、抗CD4PE、抗CD8PE及CD16+56PE,均由美国Becton Dickinson公司生产,CD3+、CD4+、CD8+、CD16+56+分别代表总T、Th、Ts、NK细胞。红细胞裂解液由BD公司生产。FACSCan流式细胞仪为美国Becton Dickinson公司产品。

1.3 检测方法

取肝素抗凝的新鲜外周血100μl,加入上述单抗20μl,混匀,室温避光20min染色;加入1.5ml红细胞裂解液,混匀后室温避光放置10min,破坏红细胞;1500r/min离心5min,弃上清;每管加入2ml 0.1%叠氮钠的磷酸盐缓冲液混匀,1000r/min离心5min,弃上清;加PBS 1 ml,混匀,2h内上机检测。采用FACSCan型流式细胞仪CellQuest软件获取与分析数据。以FSC2H/SSC2H设定淋巴细胞门,IgG/FITC/IgG2aPE确定FL1和FL2的非特异性结合水平,同时调节FSC、SSC电压,FSC阈值,FL12FL2%、FL22FL1%荧光补偿。每管获取1万个细胞。

1.4 统计学处理

数据以表示,用统计分析软件SPSS11.5对各指标表达结果进行统计学处理,取α=0.05水准。

2 结果

与正常对照组比较,结直肠癌各期患者CD3+细胞、CD4+细胞、CD4+/CD8+细胞比值及NK细胞数量均显著降低(P<0.05),而CD8+细胞值则显著升高(P<0.05),尤其是Ⅳ期患者差异更为显著(P<0.01)。Ⅰ期～Ⅳ期结直肠癌患者,CD3+细胞、CD4+细胞、CD4+/CD8+细胞比值及NK细胞数量逐渐下降,CD8+细胞水平逐渐升高,其中Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌患者之间以及Ⅲ、Ⅳ期结直肠癌患者之间比较无显著差异(P>0.05)。但Ⅲ、Ⅳ期结直肠癌患者CD3+细胞、CD4+细胞、CD4+/CD8+细胞比值及NK细胞数较I、Ⅱ期显著下降(P<0.05),而CD8+细胞水平显著升高(P<0.05)。见表1。

3 讨论

机体抗肿瘤免疫机制十分复杂,它涉及多种免疫成分,包括体液免疫和细胞免疫,以及起免疫调节作用的各种可溶性分子。抗肿瘤免疫一般以细胞免疫为主,体液免疫也起重要作用。许多研究表明[3,4,5],肿瘤病人常伴有免疫抑制,且随病情的进展而加重。有研究发现,结直肠癌患者CD3+、CD4+、NK、CD4+/CD8+比例明显低于正常对照组,而CD8+细胞数显著增高,表明细胞免疫功能明显受抑制[5,5]。肿瘤患者血清中存在抑制淋巴细胞分化增殖的可溶性免疫抑制因子,包括肿瘤细胞产生的PGE2和免疫抑制酸性蛋白等,导致淋巴细胞表面CD3+、CD4+抗原表达明显减少;CD8+细胞增高是以抑制性T细胞(Ts)增多为主。CD4+细胞的减少及CD8+细胞的增多造成结直肠癌患者CD4+/CD8+比例明显失调。肿瘤患者CD4+细胞释放的白介素-2、γ-干扰素减少,血清中可溶性IL-2受体水平异常增高,必然导致NK细胞数量减少,活性降低,免疫监视功能减弱[7]。本研究结果显示,结直肠癌患者外周血CD3+细胞、CD4+细胞、CD4+/CD8+细胞比值均明显低于正常人,而CD8+细胞则明显高于正常人,与文献报道一致,说明结直肠癌患者免疫功能较正常人明显低下,其机制可能与肿瘤在发生、发展过程中分泌大量的免疫抑制因子(tumor-derived immunosuppressive factor,TDSF)有关[8,9],TDSF可广泛抑制杀伤细胞的活性,同时在肿瘤抗原的刺激下,脾细胞免疫抑制细胞前体被激活,分泌免疫抑制因子,从而导致结直肠癌患者免疫功能低下。

也有研究发现,大肠癌患者IgA、IgG、IgM、C3、C4低于正常对照组,表明体液免疫功能明显受抑制[10]。恶性肿瘤患者能够针对肿瘤抗原产生特异性抗体,抗体可以通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)介导肿瘤细胞溶解,这对防止肿瘤细胞的血流播散与转移有重要意义。抗体与肿瘤细胞结合,可以激活补体而溶解肿瘤细胞(complement-dependent cytotoxicity,CDC)。抗体与补体的减少,必然导致机体抗肿瘤效应减弱。由于这种免疫抑制是肿瘤源性的,因此表现为患者的免疫状态与病情呈显著的负相关。在本研究中,随着结直肠癌患者病情的发展,由Ⅰ期至Ⅳ期机体外周血细胞免疫功能逐渐下降,Ⅰ、Ⅱ期与Ⅲ、Ⅳ期患者之间有显著性差异,提示结直肠癌患者免疫状态与TNM分期呈负相关,患者的病期越晚,免疫状态越差,反之,患者的免疫功能越低下,提示病期越晚、预后越差。故患者的免疫状态可间接提示患者预后。

也有文献报道[11,12],NK细胞是在肿瘤早期发挥作用的效应细胞,不需要预先接触抗原,无MHC限制性,不依赖抗体或补体即可直接杀伤MHCI类分子表达低下或缺如的肿瘤细胞,被称为抵抗肿瘤生长的第一道防线,其表面标志是CD16+CD56+。本研究结果显示,结直肠癌患者NK细胞数量明显低于对照组,且与TNM分期有关,TNM分期越晚,NK细胞数量越低,其原因可能是在杀伤肿瘤细胞的过程中消耗了大量的NK细胞,肿瘤细胞分泌的TDSF使NK活性降低,NK细胞在血液循环中再分布等。

本文研究结果进一步证实了结直肠癌患者细胞免疫功能降低,即机体抗肿瘤免疫功能低下,导致肿瘤细胞逃避了免疫监视持续生长,因此,应用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞和NK细胞等指标可用于结直肠癌患者的免疫状态监测,提示结直肠癌患者的免疫辅助治疗应主要围绕提高CD3+细胞、CD4+细胞及NK细胞的数量和功能,提高患者免疫功能。对于结直肠癌患者T淋巴细胞变化规律、发生机制以及作为判定肿瘤患者预后指标的临床意义,还需要进一步深入研究。

摘要：目的:探讨结直肠癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞检测的临床意义及与健康人的差异。方法:采用流式细胞仪测定结直肠癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的活性,以健康人作对照分析。结果:结直肠癌患者外周血CD3+、CD4+、NK细胞数量及CD4+/CD8+比值较正常对照组均明显下降(P<0.05),而CD8+细胞水平显著升高。外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞数量的改变与结直肠癌临床病理分期有关,分期越晚,CD3+、CD4+及NK细胞数量CD4+/CD8+细胞比值越低,CD8+细胞水平越高;Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌患者与Ⅲ、Ⅳ期患者之间有显著差异(P<0.05)。结论:检测淋巴细胞亚群对判断患者的免疫功能、预测肿瘤患者的预后以及指导临床合理应用免疫增强药物均有重要意义。

关键词：结直肠癌,T淋巴细胞亚群,NK细胞

参考文献

[1] Yoshimura K,Laird LS,Chia CY,et al. Live attenuated Listeria monecytogenes effectively treats hepatic colorectal cancer metastases and is strongly enhanced by depletion of regulatory T cells[J]. Cancer Bes, 2007; 67(20) :10058-10066

[2] 李虹,马莉,杨沽.鼻咽癌患者外周血T细胞亚群及活化T淋巴细胞的检测及放疗后对其变化的影响[J].微量元素与健康研究,2006;23(3) :10-12

[3] 张为,曾丽.CD4~+T细胞及其亚群与多发性硬化[J].中国临床康复,2006;10(4) :156-158

[4] Wood AH,Zhang X,Farber DL,et al. CD8~+ memory T lymphocytes from bone marrow-immune function and therapeutic petential[J]. Crit Rev Immunol,2007;27(6) :527-537

[5] Ling KL, Pratap SE,Bates GJ,et al. Increased frequency of regulatory T cells in peripheral blood and tumour infiltrating lymphocytes in colorectal cancer patients[J]. Cancer Immun,2007;28(7) :1-7

[5] Koch M,Beckhove P,Op den Winkel J,et al. Tumor infiltrating T lymphocytes in. colorectal cancer:Tumor-selective activation and cytotoxic activity in [J]. Ann Surg,2006;244(6) :986-993

[7] Buaaing A,Stumpf C,Troger W,et al Course of mitogen-stimulated T lymphocytes in cancer patients treated with Viscum album extracts[J].Anticancer Ras,2007;27(4) :2903-2910

[8] Diederichsen AC, Hjelmborg JB, Christensen PB, et al. Prognostic value of the CD4~+/CD8~+ ratio of tumour infiltrating lymphocytes in colorectal cancer and HLA～DR expression on tumour cells[J]. Cancer Immunol Immunother,2003;52(7) :423-428

[9] Kim R, Emi M, Tanabe K, et al. Tumor-driven evolution of immunosuppressive networks during malignant progression[J]. Cancer Res,2006;66(11) :5527-5536

[10] 邹忠武,胡加鹏,陈德峰.胃肠道癌术后化疗T细胞亚群和sIL-2R的比较研究[J].湖北职业技术学院学报,2006;9(1) :103-105

[11] Milasiene V, Stratilatovas E, Norkiene V. The importance of T-lymphocyte subsets on overall survival of colorectal and gastric cancer patients[J].Medicina,2007;43(7) :548-554

外周血免疫T细胞亚群 篇8

1 资料与方法

1.1 一般资料

30例RSA非孕期患者的血清由江苏大学附属第四人民医院中心实验室收集保存, 筛选标准为患者有两次或两次以上的自然流产史,年龄在22～40岁,平均年龄28岁。30例正常非孕(NNP)妇女选自与RSA无关的健康个体,年龄在23～40岁,平均年龄27岁。两组母体均否认高血压、糖尿病、肝炎、肾炎严重器质性疾病,血清标本于-80℃保存。

1.2 试剂和仪器

PE标记抗人CD4抗体,FITC标记抗人IL-17, APC标记抗人IFN-γ、IL-4抗体及其相匹配的同型对照抗体,莫能霉素(monensin),离子霉素(ionomycin)、乙酸肉豆蔻佛波醇(phorbolmyristic acetate, PMA)购自Sigma公司;RPMI-1640培养液、小牛血清购自Gibco公司;Ficoll购自天津TBD公司;Trizol试剂及逆转录酶购自 Invitrogen 公司;ExTaq DNA聚合酶,DL2000购自 Takara公司;酶联免疫吸附双抗体夹心(ELISA)检测试剂盒购自美国 Adlitteram Diagnostic Laboratories公司;引物由上海生工生物技术有限公司合成。

1.3 方法

1.3.1 PBMC分离和体外培养 取抗凝静脉血收集单个核细胞层,将PBMC加入24孔板,同时加入PMA、离子霉素和莫能霉素刺激5小时后收集细胞,进行细胞表面CD4分子、胞内IFN-γ、IL-4和IL-17及相应同型对照抗体染色,利用BD公司FACSCalibur流式细胞仪进行检测。

1.3.2 采用ELISA法测定血清中细胞因子IFN-γ、IL-4及IL-17水平的含量,测定过程按试剂盒说明书进行。

1.3.3 qRT-PCR检测T-bet、GATA-3和STAT-3 mRNA表达水平 提取总RNA,逆转录生成cDNA后,采用qRT-PCR技术扩增T-bet、GATA-3、STAT-3 mRNA,T-bet:上游引物5′-CGTTCCCATTCCTGTCATTTAC-3′,下游引物5′-TCTCCGTCGTTCACCTCA-3′。GATA-3:上游引物5′-GTAGCTGTAAGGCATGAAGGATG-3′,下游引物5′-ACTGGTGAACGGTAACACTGATT-3′。STAT-3:上游引物5′-AACATGCCCATTCGCTTTAC-3′,下游引物5′-TCTCCTTCCCCATACACCTG-3′。GAPDH:上游引物 5′-GAAGGTGAAGGTCGGAGT-3′,下游引物5′-GAAG-ATGGTGATGGGATTTC-3′。

1.4 统计学处理

采用 SPSS 12.0 软件包进行分析,结果以undefined表示,经方差齐性检验后,采用t检验。

2 结 果

2.1 通过FCM检测Th1、Th2和Th17细胞比例,RSA组与NNP组比较,前者的Th1细胞百分比和Th17细胞百分比明显升高,而Th2细胞百分比降低。见表 1。

2.2 通过ELISA法检测培养上清中IFN-γ、IL-4和IL-17的表达水平。由表2可见,RSA 组培养上清中 Th1 细胞因子IFN-γ的含量显著高于NNP组(P <0.05);Th17细胞因子IL-17的含量显著高于NNP组(P <0.05);而Th2 细胞因子IL-4则相反,RSA组低于NNP组(P< 0.05)。

2.3 qRT-PCR检测T-bet、GATA-3和STAT-3 mRNA表达水平。各个指标mRNA的相对表达量用(2Δct值×103)表示结果显示,以NNP组各指标表达量为1,RSA组T-bet mRNA与STAT-3 mRNA的表达与NNP组之间相比呈显著性增高,差异有高度统计学意义(P<0.01),而GATA-3 mRNA的表达却显著性降低(P<0.05)。见表3。

3 讨 论

Th1型细胞主要分泌炎性细胞因子,包括 IL-1、IL-2、IFN-γ及 TNF-α等,Th2类细胞因子主要有 IL-4和IL-10等。机体正常状态时,两型细胞因子处于动态平衡,维持正常的细胞免疫和体液免疫功能。T-bet是T-box家族成员,作为Th1细胞特异性转录因子,可强力转录激活和诱导 IFN-γ产生,抑制 IL-4分泌。GATA-3是一种锌指蛋白,作为Th2细胞特异性转录因子,能诱导产生IL-4[4,5]。转录因子是Th细胞极性分化的重要调控因素,T-bet 促进Th1发育,GATA-3促进Th2发育,两者有交互抑制作用[6,7]。Th17细胞是近年发现的一种不同于Th1、Th2细胞的新型CD4+效应性T细胞亚群,主要分泌IL-17A/F,IL-6,TNF等细胞因子,Th17的分化过程中特异性地表达转录因子STAT-3和核受体RORγt[8]。

近年研究发现,T细胞亚群的失衡与妊娠结局有很大关系[9]。Lin等[10]报道,正常妊娠与非妊娠妇女外周血Th细胞亚群差异无统计学意义,而RSA妇女外周血Th17细胞亚群较正常非妊娠妇女显著增加。本研究从转录因子水平探讨T-bet、GATA-3和STAT-3对T细胞的免疫调控作用。通过检测RSA组培养上清中Th1和Th17细胞百分比及Th1型细胞因子IFN-γ和Th17型细胞因子IL-17表达均高于NNP组,Th2细胞百分比及Th2型细胞因子IL-4的表达则均低于NNP组,表明在RSA患者体内存在T细胞亚群比例及功能的失调状态,Th1细胞和Th17细胞呈优势表达。同时结果显示,RSA组PBMC中T-bet mRNA和STAT-3 mRNA表达增多,而GATA-3 mRNA表达减少,再次证实Th1和Th17细胞特异性转录因子呈优势表达。综上所述,在RSA 患者中出现了T淋巴细胞亚群之间的失衡现象,表明免疫因素参与了流产的发生,对其检测不仅可作为监测RSA患者治疗和再次妊娠结局的指标,也为RSA的治疗和机制的探讨提供了新的思路。

摘要：目的:检测复发性流产患者外周血中Th1、Th2和Th17细胞的变化情况及相关转录因子T-bet、GATA-3和STAT-3mRNA的表达水平。方法:对30例复发性流产(RSA)非孕期患者和30例正常非孕(NNP)妇女抽取抗凝静脉血5ml,Ficoll分离外周血单个核细胞(PBMC),采用流式细胞术检测Th1、Th2和Th17细胞的比例,PBMC培养5小时后采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清中IFN-γ、IL-4和IL-17的水平,同时检测T-bet、GATA-3和STAT-3mRNA的表达水平。结果:RSA患者Th1细胞的百分比和Th17细胞的百分比均高于NNP组(P<0.05),Th2细胞的百分比低于NNP组(P<0.05)。RSA组PBMC培养上清中IL-4水平低于NNP组(P<0.05),而IFN-γ和IL-17水平明显高于NNP组(P<0.05)。RSA患者GATA-3mRNA表达较NNP组减少(P<0.05),而T-bet和STAT-3mRNA明显高于NNP组(P<0.01)。结论:RSA患者PBMC合成IFN-γ和IL-17的水平明显增高,合成IL-4的水平明显降低,表明存在T细胞亚群的分化失衡状态。这种失衡状态可能受到相应的核转录因子T-bet、GATA-3和STAT-3的调控。

关键词：复发性流产,T细胞亚群,转录因子

参考文献

[1]Beydoun H,Saftlas AF.Association of human leucocyte antigen sha-ring with recurrent spontaneous abortions[J].Tissue Antigens,2005,65(2):123-135.

[2] Saini V, Arora S, Yadav A, et al. Cytokines in recurrent pregnancy loss[J]. Clin Chim Acta, 2011, 412(9-10): 702-708.

[3]Yan WH,Lin A,Chen BG,et al.Possible roles of KIR2DL4ex-pression on uNK cells in human pregnancy[J].Am J Reprod Immu-nol,2007,57(4):233-242.

[4] Szabo SJ, Kim ST, Costa GL, et al. A novel transcription factor, T-bet, directs Th1 lineage commitment [J]. Cell, 2000, 100(6):655-669.

[5]Erpenbeck VJ,Hagenberg A,Krente H,et al.Regulation of GA-TA-3,c-maf and T-bet mRNA expression in bronchoalveolar lavage cells and bronchial biopsies after segmental allergen challenge[J].Int Arch Allergy Immunol,2006,139(4):306-316.

[6]Tykocinski LO,Hajkova P,Chang HD,et al.A critical control ele-ment for interleukin-4memory expression in T helper lymphocytes[J].J Biol Chem,2005,280(31):28177-28185.

[7] Hwang ES, Szabo SJ, Schwartzberg PL, et al. T helper cell fate specified by kinase-mediated interaction of TVbet with GATA3 [J]. Science, 2005, 307(5708):430-433.

[8] Ivanov Ⅱ, Zhou L, Littman DR. Transcriptional regulation of Th17 cell differentiation[ J]. Semin Immunol, 2007, 9(6):409-417.

[9]Kheshtchin N,Gharagozloo M,Andalib A,et al.expression of Th1and Th2related chemokine receptors in women with recurrent miscar-riage:the impact of lymphocyte immunotherapy[J].Am J Reprod Immunol,2010,64(2):104-112.