小表达（通用11篇）
小表达 篇1
摘要：本文通过对小汉斯被压抑的欲望的分析, 结合案例中出现的幻觉, 尝试对语言在其中的作用进行探索。并在此基础之上, 讨论儿童人格发展期内的欲望和语言的作用。
关键词：欲望,语言,幻觉
一、小汉斯案例中的欲望分析
弗洛伊德1909年发表了《一个五岁男孩的恐惧症》, 这是弗洛伊德的经典精神分析案例之一, 也是唯一的儿童精神分析个案。文中弗洛伊德称该男孩为“小汉斯”。根据弗氏的观点, 小汉斯的焦虑来自于占有母亲的渴望被压抑以及他努力想要摆脱自己婴儿时期的自慰习惯。其中一些焦虑来自于他感到自己的“便便”太小了, 这种烦恼与手淫带给他的快乐感相互冲突。还有一些是来自于他对父亲的恐惧, 而对父亲的恐惧又导致了他对父亲的抵制和逆反心理。这种恐惧来源于他目睹了一匹马的倒下。当汉斯看见马倒下的时候, 他想起了父亲, 认为父亲和跌到与死亡相关。对于父亲的焦虑是小汉斯的案例中的一大特征, 主要体现在: (1) 焦虑状态的出现得很突然——即在看见马倒下的第一眼产生; (2) 过早的性欲也转变为焦虑。 (3) 对父亲的恐惧转移到马上。 (4) 对马的恐惧转移到了马的跌到和与马的跌倒相关的其他事情上。 (5) 汉斯的记忆引发了联想:马的跌掉被当成是死亡。 (6) 突然产生关于“粪便”的幻想, 但没有引起父亲的注意。 (7) 在目睹了马的跌倒和他的朋友在玩马时失足跌落的场景之后, 小汉斯将其认作父亲的代替者。
小汉斯妹妹的出世剥夺了他原有受关注的地位以及婴儿时期所享受的快乐, 因目睹母亲的分娩唤起了他对性的渴望, 但是又得不到满足。妹妹的出世迫使他开始思考婴儿是从何而来的, 在他的幻想里这与排便相关。直到汉斯发现他的父亲和婴儿的出生相关, 使得他对父亲产生了敌意。
弗洛伊德在对小汉斯的分析中采用了性欲的观点, 并根据小汉斯的反映了解了他恐惧的原因:此举被认为是对儿童精神生活研究的启示。最初, 小汉斯将排便认作是性生活。此外, 还有关于婴儿性调查的讨论, 考虑到自发的性欲, 生殖部位不但给人提供了快感, 而且还有排泄功能, 而无论是直接快感还是排泄带来的间接的快感都受到了不同程度的抑制。小汉斯的成长发育过程明显是一夫多妻制的 (与女性玩伴一起睡觉) 我们发现, 小汉斯试图将对母亲的喜爱转移到其他目标上, 但由于目标的匮乏, 他又将这种感情转移回了母亲身上, 而由此又导致了他精神的崩溃。小汉斯也被看作是“小俄狄浦斯”, 他不想看到父亲, 进而发展为希望父亲永远消失, 即死亡。汉斯希望父亲死亡带来的恐惧感也被认为是在分析中最主要的障碍。
弗洛伊德对恐惧症的理解包括:汉斯在看见马跌倒的瞬间突然产生了焦虑感, 暴露了他焦虑的原因主要来自于目睹的这个场景。弗洛伊德将焦虑的发作归类为焦虑性癔症引起的综合症状。恐惧症和焦虑性癔症之间的区别在于, 焦虑性癔症病发时, 患者体内的释放出来的性欲并不能转换到躯体神经之中, 而是被当作焦虑释放出来。在对癔症的研究中, 弗洛伊德认为焦虑性癔症是来自于身体的刺激而非精神层面。焦虑性癔症就是典型的“儿童时期神经症”。这种神经症多发于易感染体质的人群。焦虑性癔症很容易发展成为恐惧症, 但需要各种各样的抑制和限制条件, 因此要预防恐惧症的产生, 只能够切断所有因受压抑受限制所产生的精神障碍可能导致焦虑发展的机会。
在研究中, 弗洛伊德提出了神经症之外的概念。他提醒了我们致病还存在着多种因素的结合和一系列刺激性的原因。他还提出了通过暴力手段是无法治疗恐惧症的, 例如通过剥夺病人的防御的手段, 将病人置于一种无法表达焦虑又不能逃脱的境地。弗洛伊德将此种恐惧症称为“诱发性”恐惧, 这种恐惧无法在正常人中产生。
二、压抑与幻觉——语言的作用
压抑是另一个要讨论的话题, 压抑的本质简而言之就是将事物忽略并且无意识地与之保持距离。压抑的类型包括: (1) 原始压抑, 最初的精神压抑表现为本能被否定, 无法进入意识, 这个过程中建立了一种固定模式, 而剩余的本能则附属于该模式。 (2) 选择性压抑, 这种形式的压抑作用于被压抑代表的精神衍生物, 起源与前者不同, 但有联系。这种联系导致了这样的想法与原始压抑有着同样的命运。
压迫的机制包括: (1) 压抑产生了一种新的代替模式;以及 (2) 压抑产生症状, 并以某种方式表现出来。因此, 在小汉斯的案例中, 一种本能的冲动被加以抑制, 表现为即为父亲担心, 同时有矛盾地害怕父亲。当压抑的冲动从意识中消失之后, 父亲的取代物出现, 并且或多或少地成为汉斯焦虑中的一部分。
弗洛伊德还指出, 要找到汉斯焦虑的确切原因是不可能的。汉斯焦虑的根源是: (a) 在智力上他无法理解分娩现象; (b) 他在本质上无法抗拒自己在经常性的手淫中获取的快感弗洛伊德认为汉斯的恐惧源于目睹了马的跌倒, 而后来, 马发展成为了汉斯焦虑的对象。仅仅是马的跌倒并不足够, 但是加上汉斯的玩伴和父亲就足够使得小汉斯产生神经症, 并在同时, 汉斯产生了对焦虑的反应 (例如对俄狄浦斯情节的矛盾心理) 。
在儿童的心理/精神生活方面, 弗洛伊德提到以下几点: (1) 遗传并不是决定性因素; (2) 小汉斯并不是一个堕落的孩子; (3) 所有神经症的病因最终都能在幼稚性欲中被发现。弗洛伊德的观点在充分肯定了后天因素的作用, 这中间暗含着对语言在其中扮演重要角色的支持。正是由于性欲的压抑和语言的不充分的、歪曲的表达, 使得在正常成人看来小汉斯处于心理疾病状态。幻觉的产生即是由于欲望的压抑和语言的扭曲。在儿童尚未完全驾驭语言的各种指代关系之前, 错位的能指将导致错位的知觉和思维, 这一点在儿童处于极度压抑的状态下时更为显著:此时儿童将面对大量的错位事实和幻觉而无法自控, 心理疾病即由此产生。
在拉康看来, 无意识像语言那样构成, 是语言的出现导致了无意识的产生。儿童最初的需要、缺失、愿望在进人语言能指的网络后, 失去了其本来能指的意向, 最终被这一中介机制异化地表达出来, 因此成了无意识的东西。所以在拉康看来, 无意识的内容是由被压制的和在意识水平上被另外一些能指所替代的能指构成的。
弗洛伊德在《释梦》中将梦的无意识作用机制分为置换与凝缩。对于拉康来说, 无论语言学中的隐喻与换喻, 还是无意识领域内的凝缩与移置, 所涉及的都是一个思想或者一个能指的异化, 这一异化源于思想必然在语言中被中介化的事实。就此而言, 从原始文本直到其构成, 无意识都显示出在结构上可与语言相比较的特征。拉康认为, 一开始固定冲动性兴奋的当然是音素, 该音素与主体的兴奋乃是一体, 作为能指, 它与所指的兴奋冲动并没有区别。但在功能平面上, 它还不能够等同于意识的语言, 要想在意识化的语言中将其表达出来, 它必须接受这个对它来说是既定的语言系统的修饰、改装和过滤。而中间所要经历的, 就是它必须把自己的表现转移到语言中的另一些词项上, 从一个能指转到另一个能指, 穿过复杂的、交织在一起的语言能指网络传递到意识。直到最后的结果是, 它以面目全非的样子出现在意识语言中。或者说它被替代了, 成了无意识。通过这种从能指到能指的投注的移置与凝缩, 无意识组织成一个多重关系的网络。
语言这一能指系统所指的并不是它自己的字面对象, 因此它会常常出错, 出现语误, 出现空白和间断而在这种错误里呈现出的, 恰恰是无意识的愿望和动机。就此而言, 无意识是一个次级结构, 它通过话语的节点而被插人。拉康对无意识的完整定义就依此产生:“无意识是具体话语的这一部分, 作为超个体的东西, 它属于主体为重建其意识话语的连续性的能力的缺乏。”从因缺乏而出现的梦、语误、过失行为、妙语等特殊因素出发, 精神分析通过自由联想力图重新找到补充节点的无意识文本。弗洛伊德的性学理论指出, 人类的生物本我一直在寻求发泄力比多、解除紧张的快感。拉康则进一步发现, 幼儿最早通过性感区而获得身体感受时, 总是同时会获得一个区分此快感内容和界限的标记——一个音素, 而这一音素在语言中就是象征它发音的一个字母。精神分析的全部任务就是要通过自由联想找到这些在语言中丢失了的几个音素、音节或字母, 它们是无意识的基本文本。因此, 拉康认为, 精神分析就是语言的分析, 它的问题因语言而产生, 也只有在语言中才能获得解决。笔者认同拉康的这一观点, 但是对于幻觉和梦境等, 并不是只有语言的作用, 本我的力量仍旧强大, 二者不可偏废。综合弗洛伊德和拉康的观点, 在临床实践中将得到更好的效果。
三、个体发展与临床应用
儿童时期是自我的塑造时期, 本我的语言化/逻辑化时期, 也是本我的伪装期, 弗洛伊德说过:“当我们在测度这个世界的时候‘自我’始终是标准。我们不断地将自己与外物进行对比, 由此我们学会了理解外物的方式。”这句话换算成科学的可操作的语言是:人格中的“自我”部分是认识和评价世界的标准, 自我本身就是一系列标准的集合, 是一系列行为模式的集合, 以及操作这些标准和模式的过程。儿童时期正是在本我的基础上, 自我超我的形成时期, 如前所述, 这一时期的儿童对语言的掌握尚不完满, 因此在构建自我和超我的时候所用的逻辑工具会出现不完整、不合理、不连续、不协调等现象。一般来说, 随着儿童逐步地面相现实以及语言能力的不断提高, 这些问题将会迎刃而解。但例外总会发生, 小汉斯就是这样的例子。
在所有人的意识和无意识的活动中, 只有感觉和情绪是真实的, 即使这种真实也只是相对的。这种真实只是在如下的立场上成立:人类神经系统加工的信号只能来自于感受器的编码活动。尽管人类有能力将理性的思考延展到感受材料之外, 进行心理研究却不可将这些推演出来的现象作为依据, 因为推演过程背后使用规则太过复杂且各有不同。人类通常可以准确的描述自己的情感, 但却总是限于语言而表述不清。另一方面, 人类总是认为可以使用语言准确描述所见所闻, 事实上, 语言的相对准确掩盖了他们对事实的歪曲的认知。这样一来幻觉就更容易发生和被相信。实际上, 即使是正常人, 幻觉也常伴其每日生活, 对于事物的刻盘印象、欲望的投射、心中恐惧和焦虑的事物都常常是幻觉的来源, 只是这种幻觉与现实偏差较小, 不多加注意则常常被忽略。
在心理学研究中, 语言的使用是要细加考虑的:形容词, 数词能模糊的词汇很容易造成逻辑误判。语法的正确, 语言的正常应答可以给表达者一种如实、成功表述的假象, 并坚定其对表述内容的肯定程度, 这一过程一旦发生则表达者将修正元记忆。人称代词的使用, “我”, “你”, “他”及其单复数, 在儿童时期同样是难以学习掌握的。因此在这一时期, 儿童的记忆和思维必须有本我的辅助才能正确完成。压抑和矛盾的本我与自我, 将顺理成章地产生问题。记忆的调用是又原始材料 (记忆数据) 加上即时演算来完成的, 即时演算使用的规则也是记忆的范畴, 但是对应的投射区域不同于原始材料, 这些规则是长期以来形成的、相对稳定的规则。这些不断变化和生成的规则将构建起一个人的自我和超我。
由小汉斯以及弗洛伊德的其他经典案例可以看出, 在临床实践中, 现实比理论更为重要。任何理论尤其是临床理论都只有在实践的检验下才能辨别优劣, 正如弗洛伊德所说, “严格地说, 精神分析根本不是一种客观的科学方法, 而是一种带治疗性质的精神干预。精神分析并不指望其自身能证明什么, 而只是希望能对病人有所改变。”对欲望的压抑和语言的错位导致的幻觉和心理症的治疗必须在充分了解患者的情况的基础上进行。在儿童精神分析的实践中, 要尽量掌握该儿童在当下和之前所使用语言的特点, 用儿童自己的语言去分析儿童, 这样才能达到更好的效果。
参考文献
[1]S.弗洛伊德.狼人的故事:弗洛伊德心理治疗案例三种[M].李韵, 译.上海:上海社会科学院出版社, 2007.
[2]尹立.拉康的精神分析语言观[J].四川大学宗教学研究所, 华中科技大学学报, 2003, 2.
[3]王琳, 卢照忠.试评拉康的精神分析理论在心理治疗中的应用[J].社会心理学, 2004 (1) .
[4]弗洛伊德.精神分析引论[M].高觉敷, 译.北京:商务出版社, 1985.
[5]刘广林.从“小汉斯”的阉割焦虑分析儿童性别认同的心理机制[J].高等教育研究, 2010, 5.
小表达 篇2
“孩子，爱是需要好好表达的，你的做法让弟弟感受到你对他的爱了吗?”邻居阿姨柔声说道。
“是吗?哦!真是这样呀!”菲儿恍然大悟，“谢谢阿姨，我懂了。”......
菲儿的妈妈要外出一周才能回来。
“女儿呀，妈妈走的这些天，你要照顾好弟弟。”妈妈一边说一边走出家门。
“放心吧，妈妈，我一定会好好照顾他的。”菲儿答应得很干脆。
妈妈放心地走了。
早晨，菲儿给弟弟做好饭，分成四份，两份早晨吃，另外两份分别装进两个饭盒，这是他们带到学校的午餐。
可是晚上弟弟回到家，大声喊饿，菲儿发现弟弟的午餐一个饭粒都没动。
“你为什么没吃午餐呢?”菲儿疑惑地问道。
“早晨吃的就是这个鸡蛋炒饭，我都吃腻了。”弟弟嘀咕着。
“你可真气人，饿死你算了!哼!”菲儿生起气来。
“你快点给我做晚饭吃吧!我真的要饿死了!”弟弟急得直跳脚。
“不管，不管!”
“哇哇哇——”猴子弟弟坐在地上撒起泼来。
菲儿扬起手照着弟弟的屁股“啪啪啪”三下。
“哎呦!哎呦!疼死我啦，你敢打我，我要告诉妈妈。”弟弟哭着喊道。
菲儿气的不理他，走进了自己的房间。
过了一会儿，弟弟没了声音。菲儿出来一看，弟弟竟然躺在地上睡着了。她把弟弟抱上床，盖好被子，心里很自责。唉!其实自己生气的原因是弟弟没吃午饭，让他挨了一顿饿，很心疼。自己答应妈妈照顾好弟弟的，可是，现在……唉!还把弟弟打了，晚饭也没让他吃上。
菲儿急忙走进厨房做了弟弟最爱吃的松仁玉米，悄悄地放在了他的床头。
弟弟半夜饿醒了，一看见床边的松仁玉米，就大口地吃了起来。嗯，真香呀!
第二天，弟弟竟然偷偷地和同学去河里游泳。老师曾经向学生三令五申，不要到河里游泳，因为去年有一个孩子因为野浴淹死了。
菲儿知道后，急忙跑到河边，把弟弟叫上了岸。
“叫你不要到河里游泳!怎么明知故犯呢?”她气坏了，“啪啪啪”又是三巴掌，弟弟的屁股肿了起来。
“呜呜呜——你又打我!你跟我有仇呀?我恨你!”
邻居阿姨看见了，走过来对菲儿说：“你这个当姐姐的，怎么总是打弟弟呢?”
“唉!我是担心他呀!他是我惟一的弟弟，我非常爱他，可是他总是做一些让我很心疼很担心的事情啊。”菲儿委屈地说道。
“孩子，爱是需要好好表达的，你的做法让弟弟感受到你对他的爱了吗?”邻居阿姨柔声说道。
“是吗?哦!真是这样呀!”菲儿恍然大悟，“谢谢阿姨，我懂了。”
此时，躲在大树后面的弟弟听到了这番话，明白了姐姐原来是爱自己的呀!他心里暖暖的，屁股好像也没有那么疼了，擦干眼泪走了出来。
“姐姐，我错了，我再也不饿着自己，再也不去河里游泳了。”弟弟低着头小声说道。
“姐姐打你是不对的，我向你道歉，今后我一定要学会控制自己的情绪，好好表达自己的内心真实想法。”菲儿轻轻地抚摩着弟弟的圆脑瓜，姐弟俩都笑了。菲儿的妈妈要外出一周才能回来。
“女儿呀，妈妈走的这些天，你要照顾好弟弟。”妈妈一边说一边走出家门。
“放心吧，妈妈，我一定会好好照顾他的。”菲儿答应得很干脆。
妈妈放心地走了。
早晨，菲儿给弟弟做好饭，分成四份，两份早晨吃，另外两份分别装进两个饭盒，这是他们带到学校的午餐。
可是晚上弟弟回到家，大声喊饿，菲儿发现弟弟的午餐一个饭粒都没动。
“你为什么没吃午餐呢?”菲儿疑惑地问道。
“早晨吃的就是这个鸡蛋炒饭，我都吃腻了。”弟弟嘀咕着。
“你可真气人，饿死你算了!哼!”菲儿生起气来。
“你快点给我做晚饭吃吧!我真的要饿死了!”弟弟急得直跳脚。
“不管，不管!”
“哇哇哇——”猴子弟弟坐在地上撒起泼来。
菲儿扬起手照着弟弟的屁股“啪啪啪”三下。
“哎呦!哎呦!疼死我啦，你敢打我，我要告诉妈妈。”弟弟哭着喊道。
菲儿气的不理他，走进了自己的房间。
过了一会儿，弟弟没了声音。菲儿出来一看，弟弟竟然躺在地上睡着了。她把弟弟抱上床，盖好被子，心里很自责。唉!其实自己生气的原因是弟弟没吃午饭，让他挨了一顿饿，很心疼。自己答应妈妈照顾好弟弟的，可是，现在……唉!还把弟弟打了，晚饭也没让他吃上。
菲儿急忙走进厨房做了弟弟最爱吃的松仁玉米，悄悄地放在了他的床头。
弟弟半夜饿醒了，一看见床边的松仁玉米，就大口地吃了起来。嗯，真香呀!
第二天，弟弟竟然偷偷地和同学去河里游泳。老师曾经向学生三令五申，不要到河里游泳，因为去年有一个孩子因为野浴淹死了。
菲儿知道后，急忙跑到河边，把弟弟叫上了岸。
“叫你不要到河里游泳!怎么明知故犯呢?”她气坏了，“啪啪啪”又是三巴掌，弟弟的屁股肿了起来。
“呜呜呜——你又打我!你跟我有仇呀?我恨你!”
邻居阿姨看见了，走过来对菲儿说：“你这个当姐姐的，怎么总是打弟弟呢?”
“唉!我是担心他呀!他是我惟一的弟弟，我非常爱他，可是他总是做一些让我很心疼很担心的事情啊。”菲儿委屈地说道。
“孩子，爱是需要好好表达的，你的做法让弟弟感受到你对他的爱了吗?”邻居阿姨柔声说道。
“是吗?哦!真是这样呀!”菲儿恍然大悟，“谢谢阿姨，我懂了。”
此时，躲在大树后面的弟弟听到了这番话，明白了姐姐原来是爱自己的呀!他心里暖暖的，屁股好像也没有那么疼了，擦干眼泪走了出来。
“姐姐，我错了，我再也不饿着自己，再也不去河里游泳了。”弟弟低着头小声说道。
表达的不仅仅是小清新 篇3
例如这组纯黑与纯白的人像，我们表达的反而是一种另类的喜悦和小清新，今儿老邓就跟各位聊聊这纯色摄影。
主体的表达
单一色彩在创作中表达某种意境与情调时，主要还是取决于摄影者对被摄体的感受、想象和创造。取决于因景而情的作品内涵。例如此图中所示，摄影者将感受融入到作品当中，让其心景聚合，虽然只是女孩和墙壁这种单一的主题，色彩是昏暗的，但作品出来后会产生一种情景交融的浓厚情调。因此，单一色彩情调依赖的不是色彩本身。任何离开作品需要和人的感受去随意增添、调整和改变色彩，失去的只能是作品应有的情调。
空白部分
在单一色彩摄影构图中，画面的空白部分并不都是指照片中白色的、没有任何形象的部分，而是指除了主体实像以外的部分。例如图中，画面大胆留白，女孩于思考中仿佛有曙光出现，画面简单而纯净。因此，构图上的空白并不一定是白色的。在一个摄影画面中，主体实像与空白部分是互为依存的。空白部分既可以衬托、说明主体，同时还可以对主体形象进行补充、强化。
画幅形式的重要性
画幅的形式是指照片是如何采用横幅面、竖幅面，或者是其他形式来进行构图的。比如，采用横画幅拍摄坐着的人物；采用竖画幅拍摄站立着的人物等，例如图中所示，女孩比例到位，恬静的性格一览无遗。所以在进行单一色彩人像构图时，摄影者首先需要考虑，采用何种画幅形式来框取被摄体。如果仅仅考虑使画面适合被摄体的需要，则可以按被摄体的具体形态来确定画幅形式。如果要使画面更有创意，则可根据表现意图的需要，使用其他形式的画幅。总之，确定画幅同被摄主体之间的关系，是单一色彩人像构图的首要步骤。
兴趣中心的选取
单一色彩人像摄影画面中的主体实像部分，即摄影者想要表现的人物主体。其表达方式有两种：
一是通过人像构图公式法，即采用特写公式构图、半身公式构图、七分身公式构图和全身公式构图；
二是带景艺术构图法，即通过人物和景物的完美搭配来进一步美化和表现主体。不论是采用哪种方式，都需要在构图中确定主体实像的兴趣中心。
画面主体的兴趣中心，是指画面主体最引人注目的部分，它不一定占据很大的面积。如图，在人像特写画面中，眼睛往往就是兴趣中心；在半身人像照片中，脸部就成了兴趣中心。一幅画面一般只有一个兴趣中心，或者只能有一个主要的兴趣中心。否则，就有可能破坏画面的完整性，造成构图上的无序和混乱。
小表达 篇4
1 对象与方法
1.1 研究对象
2007年12月~2009年12月我院胸外科切除手术标本、经病理科确诊为非小细胞肺癌60例,并以良性病变肺组织54例作为对照组。60例NSCLC中,每一例均有详细的临床资料、手术记录,所有患者均无远处转移,术前均未接受化疗和放疗,分类按WHO《肺肿瘤组织学分型》(2000)标准,分期按照1997年国际抗癌联盟制订的肺癌的TNM分期法,其中,男性27例,女性23例;年龄40~78岁,平均(65.7±12.1)岁,肿瘤最大直径<3 cm者19例,>3 cm者41例。肿瘤部位:中央型30例,周围型30例;组织学:鳞癌29例,腺癌31例;中、高分化13例,未、低分化47例。按2002年国际抗癌联盟(UICC)标准进行TNM分期:Ⅰ~Ⅱ期41例,Ⅲ~Ⅳ期19例。有淋巴结转移者27例,无淋巴结转移者33例。
1.2 组织芯片的制备
将非小细胞肺癌及癌旁正常对照标本制作成组织芯片,组织芯片由上海生物芯片有限公司制备。步骤如下:(1)每个病理蜡块均先经切片HE染色复核病理诊断并标记病变区、设计阵列分布,每一例标本取1个点,制作12×8点阵,共90个点。(2)用组织包埋机制备合适的空白受体蜡块并打孔。(3)组织阵列仪抽提病理蜡块组织芯并按阵列设计转移到空白蜡块相应的小孔中。(4)52℃恒温箱中加热融合,使组织芯与受体蜡块紧密相连。(5)修整蜡块,4μm连续切片,切片置60℃下烤片16 h后放于切片盒中,密封后置-20℃冰箱内保存备用。
1.3 结果判断标准
FHIT、Survivin蛋白以细胞呈棕黄色颗粒定为阳性,阳性判定方法:于高倍镜下随机取10个不同视野,各计数100个细胞,对结果进行半定量分析。对阳性细胞染色强度进行评分:无色为0分,淡黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分;再对阳性细胞所占百分比进行评分:0分为阴性,1分为阳性细胞≤25%,2分为阳性细胞占26%~50%,3分为阳性细胞占51%~75%,4分为阳性细胞>75%。FHIT结果取两者评分之乘积,染色强度与阳性细胞百分比的乘积>3分判为免疫阳性,乘积为0~3分判为阴性。Survivin评分略改动,只计为阴性与阳性,乘积<1分为阴性,其余均为阳性。Ezrin阳性着色出现在细胞胞膜和胞质内,呈均匀弥漫分布的棕黄色细小颗粒。阳性判定方法:于高倍镜下随机取10个不同视野,各计数100个细胞或肺泡上皮细胞并计算阳性表达细胞的比率。参照文献[3]根据阳性表达细胞数和细胞染色强度进行分级:阳性细胞所占百分比<50%,细胞阳性表达或染色较浅判定为低表达,无表达或低表达判定为阴性;阳性细胞所占百分比≥50%,细胞阳性表达且染色深判定为异常表达,异常表达判定为阳性。
1.4 统计学分析
采用SPSS 16.0软件分析,数据采用均数±标准差表示,P<0.05为差异有统计学意义。计量资料组间比较采用完全随机设计的t检验,组内比较采用配对t检验;计数资料采用率描述,率的比较采用χ2检验;相关分析用Spearman相关分析。
2 结果
2.1 FHIT、Survivin和Ezrin蛋白在NSCLC与肺良性病变组织中的阳性表达结果
60例NSCLC组织中FHIT蛋白阳性表达率为51.7%(31/60),与肺良性病变组织的87.0%(47/54)比较,差异有统计学意义(χ2=16.456,P<0.01);Survivin蛋白阳性表达率为71.6%(43/60),与肺良性病变组织的20.4%(11/54)比较,差异有统计学意义(χ2=29.997,P<0.01);Ezrin蛋白异常表达率为53.3%(32/60),与肺良性病变组织的7.4%(4/54)比较,差异有统计学意义(χ2=27.744,P<0.01)。见表1。
2.2 FHIT、Survivin和Ezrin蛋白在NSCLC与肺良性病变组织间的表达及与NSCLC患者临床病理特征的关系
NSCLC组织中FHIT的阳性率与患者性别、有无淋巴结转移及组织分型相关(P<0.05),与患者的年龄、临床分期、细胞分化程度、肿瘤大小、肿瘤部位无关(P>0.05);Survivin的阳性率与患者临床分期、有无淋巴结转移相关(P<0.05),与其他差异均无关(P>0.05);Ezrin的异常表达率与患者的临床分期和有无淋巴结转移具有相关性(P<0.05),而与年龄、性别、肿瘤大小、组织分型、细胞分化程度和肿瘤部位的差异均无关(P>0.05)。见表2。
2.3 FHIT蛋白表达与Survivin和Ezrin蛋白表达的关系
在43例Survivin蛋白高表达者中FHIT蛋白阳性表达为18例,而在17例Survivin蛋白表达阴性者中FHIT蛋白阳性表达为13例,FHIT与Survivin蛋白表达呈显著负相关(r=-0.636,P<0.01);在32例Ezrin蛋白高表达者中FHIT蛋白阳性表达为11例,而在28例Ezrin蛋白表达阴性者中FHIT蛋白阳性表达为20例,FHIT与Ezrin蛋白表达呈显著负相关(r=-0.714,P<0.01);在43例Survivin蛋白高表达者中Ezrin蛋白阳性表达为20例,而在17例Survivin蛋白表达阴性者中Ezrin蛋白阳性表达为11例,Ezrin与Survivin蛋白表达不相关(r=0.157,P>0.05)。
3 讨论
NSCLC的发生及发展是一个涉及一系列基因[癌基因和(或)抑癌基因]异常改变的多基因参与的多步骤、多阶段的、体内外因素相互作用的复杂过程。近年来,随着生物学和人类基因组学的发展,人们对NSCLC的发生、发展、侵袭、转移的分子机制的认识得到进一步加强。FHIT基因是Ohta等[3]于1996年用差异显示分析探针和外显子捕获法在3p14.2上确定的一个新的抑癌基因,由该基因c DNA推算的蛋白质与具有3价组氨酸结构域的HIT蛋白质家族高度同源,又因为此基因跨越脆性位点(fragile site),故命名为脆性组氨酸三连体(fragile histidine triad,FHIT)。在许多肿瘤组织或细胞中,FHIT基因呈现纯合性或杂合性缺失[4],此基因的异常表达可能与肿瘤的发生有关。江拥军等[5]研究发现,非小细胞肺癌组织中FHIT蛋白的失表达率(53.75%)显著低于肺良性病变组织(10.00%)。Yang等[6]则在48%的乳腺癌组织中检测到FHIT基因的异常甲基化,他们认为FHIT基因的异常甲基化与杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH)有密切关系,“两次打击模式”(two-hit model)是FHIT基因失活的重要机制。本研究结果表明,FHIT蛋白在肺良性病变组织中的表达率(87.0%)显著高于癌组织(51.7%),证实FHIT基因是一种抑癌基因,提示虽然肺良性病变组织也可能出现FHIT基因的异常,但是非小细胞肺癌出现FHIT基因异常的概率明显较高,FHIT蛋白表达下调在非小细胞肺癌发生中是一个频发事件。笔者发现,FHIT蛋白在非小细胞肺癌中的表达与性别、有无淋巴结转移及组织分型密切相关,女性、无淋巴结转移、腺癌组FHIT的阳性表达明显高于男性、有淋巴结转移、鳞癌组,与王萍等[7]的研究结果相一致,推测FHIT在非小细胞肺癌的发生及发展中扮演了重要角色。
Survivin是新近发现的一种结构独特的哺乳类凋亡抑制蛋白(inhibition apoptosis pretein,IAP),广泛表达于人类各种肿瘤组织,具有抑制细胞凋亡和调节细胞有丝分裂的双重作用。Survivin蛋白是一种位于细胞核-质之间的穿梭蛋白,在NSCLC中表达上调,与细胞增殖关系密切,对NSCLC的发生、发展起重要作用,Survivin的细胞核表达是NSCLC患者预后差的主要原因[8]。本研究表明,非小细胞肺癌组织中71.6%的组织表达Survivin蛋白,临床病理分析显示,Survivin蛋白表达仅与临床分期和有无淋巴结转移相关,而与其他无明显相关性,说明Survivin蛋白的过表达预示肿瘤有较高的侵袭性和不良预后。韩晓黎等[9]检测56例NSCLC组织中Survivin的表达阳性率为64.3%,明显高于肺良性病变组织的8.3%,与本研究结果大致相符,他们的研究同时发现Survivin蛋白表达与病理分级、临床分期和淋巴结转移密切相关,本研究结果表明Survivin蛋白表达与病理分级没有相关性,与丛德刚等[10]的研究结果相一致。
Ezrin蛋白又称为cytovillin,为膜细胞骨架连接蛋白,是连接细胞膜和细胞骨架之间的ERM家族成员之一。有研究显示,肿瘤细胞中Ezrin异常表达,与恶性肿瘤的浸润和转移密切相关[11]。研究结果表明,Ezrin在NSCLC组织中的表达明显增高,异常表达率高于肺良性病变组织,Ezrin表达与临床分期和有无淋巴结转移密切相关,淋巴结转移组的阳性表达高于不伴淋巴结转移组,Ⅲ~Ⅳ期组高于Ⅰ~Ⅱ期。王静等[12]的研究结果显示,Ezrin与NSCLC淋巴结转移密切相关,淋巴结转移组的阳性表达高于不伴淋巴结转移组,而且随着NSCLC临床分期的增高,表达也随之增高,与本研究结果一致。本研究结果提示,Ezrin在NSCLC的发生、发展中可能起作用,Ezrin的异常表达可能是NSCLC的一个普遍特征。
小表达 篇5
根据考研英语大纲要求，小作文主要考查考生进行一般性应用文写作的能力。应用文的类型包括私人和公务信函、备忘录、报告、通知等。其中书信类应用文是历年考研英语考试的考查重点。而从共性上来看，大部分书信类应用文体现的交际目的是交流自己因某事物产生的某种情绪，重在阐述情绪衍生的相应行为。今天，文都网校考研英语老师就交流基础情绪过程中的常见表达给大家进行总结。
一、交流欣喜或感动
1）It is a delight to do sth.例：很高兴你们成为我们的校友。
It is a delight to have you as our schoolmates.2）Undoubtedly,....gives me much delight/ happiness/ gladness/ joy.例：毫无疑问，你们的到来让我很高兴。
Undoubtedly, your coming gives me much gladness.3）I wish to heartily congratulate you on sth.例：我想对你考试取得的优异成绩表示真心祝贺。
I wish to heartily congratulate you on your excellent exam results.4）I appreciate the time and efforts you extended on...例：我很感激你投入时间和精力减轻我的心理痛苦。
http:///kaoyan/ I appreciate the time and efforts you extended on alleviating my mental sufferings.二、交流喜欢、感兴趣
1）I have a great passion for...例：我对开创自己的企业充满兴趣。
I have a great passion for creating my own business.2）.....holds strong attraction for me.例：在你的学校进一步学习对我有强大的吸引力。
Pursuing further study in your university holds strong attraction for me.3）I can’t wait to / don’t hesitate to recommend to you.....例：我忍不住向你推荐这部电影。
I can’t wait to recommend to you this film.4）I would like to know whether I can obtain the opportunity to...例：我想知道我是否能拥有在贵校学习的机会。
I would like to know whether I can obtain the opportunity to study in your school.三、交流不喜欢、厌恶
1）I would like to express my disappointment / dissatisfaction at...例：我想表达对多收电话费的不满。
http:///kaoyan/ I would like to express my dissatisfaction at the overcharged phone bill.2）I am sorry to inform you that I will resign from....例：我很遗憾地通知您我将从《设计·时尚》杂志辞职。
I am sorry to inform you that I will resign from the magazine Designs &Fashions.3）...can no longer be tolerated.例：不能再容忍插队了。
Jumping the queue can no longer be tolerated.四、交流困扰和担忧
1）I particularly worry / I’m particularly confused about...例：我对学生身体状况下降非常担心。
I particularly worry about the deterioration of students’ physical condition.2）Facing..., I become completely confused.例：面对这个复杂的局面，我完全迷惑了。
Facing this complicated situation, I become completely confused.3）I want to get detailed guide on how to....例：我想得到关于如何确定职业方向的详细指导。
I want to get detailed guide on how to decide on my career direction.http:///kaoyan/ 绪过程中的常见英文句式表达。希望大家能够结合句式表达下面的例句将上述英文句式表达熟练掌握。
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小表达 篇6
[关键词] 非小细胞肺癌晚期；吉非替尼靶向治疗；外周血肿瘤标记物；癌胚抗原
[中图分类号] R734.2 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2012）08-35-02
随着人体分子生物学和免疫学的不断发展，人们对肺癌的肿瘤标志物（TM）有了深刻认知，并取得了较多进展，TM对肺癌治疗疗效及预后评价也有着非常重要的临床意义。同时，分子靶向药物吉非替尼对晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者也表现出了较好的抗肿瘤作用。笔者对43例晚期NSCLC患者进行了吉非替尼靶向治疗，治疗前后进行外周血肿瘤标记物标本采集，并按疗效进行分组比较，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择2009年1月～2011年6月在笔者所在医院内科住院治疗的肺癌患者43例。纳入标准：（1）经临床、影像学和病理确诊的肺腺癌患者。（2）临床分期为ⅢB或Ⅳ期。（3）预计生存期≥3个月。（4）签署知情同意书。排除标准：（1）中、重度吸烟者。（2）有精神疾病或严重智力、认知障碍患者。本研究共入选43例晚期NSCLC患者，男15例，女28例；年龄41～79岁，平均（59.27±15.70）岁。
1.2 方法
1.2.1 给药方法及疗效评估 空腹口服吉非替尼（商品名：易瑞沙，英国阿斯利康公司，250 mg/片）250 mg/d，1次/d，顿服，不限疗程，直至出现严重不良反应或死亡停服，或因经济原因而终止。选择近期EJC组织公布的实体瘤疗效标准（RECIST）1.1版为本研究疗效评估标准：完全缓解（CR）、部分缓解（PR）、疾病稳定（SD）和疾病进展（PD）。疾病控制患者包括经确认的肿瘤缓解者（CR+PR）及SD的患者。
1.2.2 外周血肿瘤标记物检测方法 入选对象均在清晨抽取空腹静脉血4 mL，分离血清后-20℃冷冻保存备用。血清癌胚抗原（CEA）、碳水化合物抗原125（CA 125）和角蛋白19片段（Cyfra21-1）测定均采用放射免疫法，试剂选择北京北方生物有限公司生产的相应试剂盒，由固定人员操作，方法严格按照仪器和试剂使用说明书进行。两组血清标本采样时间均在开始治疗前和接受治疗后3个月。
1.3 统计学处理
使用SPSS10.0分析软件对数据进行处理，所有外周血肿瘤标记物检测结果用（）表示，用t检验进行组间显著性测定，P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 NSCLC患者吉非替尼治疗前后外周血肿瘤标记物浓度变化比较
43例晚期NSCLC患者接受吉非替尼治疗时间3～25个月，平均（9.62±3.85）个月。NSCLC患者吉非替尼治疗前后外周血肿瘤标记物浓度变化比较见表1。
2.2 不同疗效NSCLC患者吉非替尼治疗后外周血肿瘤标记物浓度变化比较
43例晚期NSCLC患者接受吉非替尼靶向治疗后，CR7例（16.28%）、PR15例（34.88%）、SD9例（20.93%）、PD12例（27.91%），病情控制患者（CR+ PR+ SD）31例（72.09%），病情未控制患者（PD）12例（27.91%）。不同疗效NSCLC患者吉非替尼治疗后外周血肿瘤标记物浓度变化比较见表2。
3 讨论
肺癌是我国中、老年人群较为常见的恶性肿瘤之一，其患病率及死亡率不断增加，且多数NSCLC患者首诊时已属中、晚期，各种方法治疗疗效多不尽人意。新近推出的分子靶向治疗通过干预表皮生长因子（EGFR）受体酪氨酸激酶信号转导进行阻止肿瘤新生血管的生成，断绝癌细胞血液和养分供给，并取得了突破性成果[1-2]。目前临床中使用较多的肺癌分子靶向治疗药物是吉非替尼，通过与三磷酸腺苷竞争性结合抑制EGFR受体，并阻断下游信号，使肿瘤细胞发生凋亡，吉非替尼对NSCLC疗效肯定，尤其适用于亚裔不吸烟腺癌患病人群。TM是由癌细胞基因表达而合成分泌或是由机体对肿瘤反应而升高的一类物质，临床中理想的TM可以对肺癌进行早期诊断，并用于患者疗效评估和监测病情进展情况。本研究选择了肺癌常用TM（包括CEA、CA 125和Cyfra21-1）为血清学疗效指标，观察对象为近期来诊的晚期NSCLC患者，他们接受了吉非替尼靶向治疗前后进行外周血TM标本采集。结果显示，晚期NSCLC患者治疗结束后外周血CEA、CA 125和Cyfra21-1浓度值均明显低于治疗前，同时治疗结束后病情控制患者的外周血CEA、CA 125和Cyfra21-1浓度值均明显低于病情控制患者，这些结论与国内周欣、施瑞浩[3-4]结论一致，提示靶向药物吉非替尼可明显降低晚期NSCLC患者外周血各种TM表达，疗效较好，患者变化更为明显。
综上所述，外周血TM可较为准确预示和反应晚期NSCLC患者临床疗效，同时其还具有简便、无辐射危害和成本低廉等特点，动态观察血清学各类TM指标旨在更好地认知、完善吉非替尼等靶向药物临床使用指征。
[参考文献]
[1] 刘杰，成媛，贾永旭，等.血清CEA水平与EGFR-TKI治疗晚期非小细胞肺癌疗效及预后分析[J].第三军医大学学报，2011，33（7）：728-731.
[2] 邵强，吴斌.吉非替尼治疗非小细胞肺癌疗效及对癌胚抗原的影响[J].基层医学论坛，2011，15（16）：497-498.
[3] 周欣，于壮.血清肿瘤标记物在吉非替尼治疗晚期非小细胞肺癌中的应用价值[J].山东医学高等专科学校学报，2011，33（2）：91-93.
[4] 施瑞浩，张新，白春学.吉非替尼治疗41例选择性非小细胞肺癌患者的疗效及对血清癌胚抗原的影响[J].中国临床医学，2008，15（3）：322.
（收稿日期：2012-03-09）
小表达 篇7
1 材料和方法
1.1 研究对象
随机选取2007年12月至2009年5月在林州市肿瘤医院手术切除后经病理证实的非小细胞肺癌标本65例, 其中男39例, 女26例, 年龄38~75岁, 平均62.7岁。按WHO标准分类, 鳞癌33例, 腺癌22例, 大细胞癌10例;病理学分级:高、中分化41例, 低分化24例;TNM分期:Ⅰ期19例, Ⅱ期27例, Ⅲ期19例;伴有淋巴结转移者27例, 无淋巴结转移者38例。取正常肺组织标本33例作对照。
1.2 实验方法
兔抗人MMP-10、TIMP-3多克隆抗体及S-P试剂盒均购自于北京中杉公司。所有标本经10%甲醛固定, 石蜡包埋, 4µm连续切片。切片常规脱蜡水化, 二甲苯透明, 微波抗原修复;0.3%H2O2阻断内源性过氧化物酶, 血清封闭, 分别滴加MMP-10、TIMP-3一抗;于4℃冰箱中过夜后, 依次滴二抗及链霉卵白素, DAB显色, 苏木素复染, 分化、脱水、透明封片;用PBS液代替一抗做阴性对照。
1.3 结果判定
参照相关文献, 结果判定标准如下:每张切片随机选取5个高倍视野, 每个视野计数1000个细胞, 按着色细胞百分数计分:着色细胞<10%为0分;10%~25%为1分;26%~50%为2分;>50%为3分。按着色强度计分:无着色为1分;淡黄色为2分;棕黄色为3分。两项相乘, 总计分0~2分为阴性 (-) ;>3分为阳性 (+) 。
1.4 统计学处理
统计学处理采用SPSSl6.0统计软件包完成。采用χ2检验, 检验标准取α=0.05。
2 结果
2.1 MMP-10、TIMP-3的表达
MMP-10的阳性染色主要为细胞质内出现棕黄色颗粒, 在癌组织中的阳性表达率明显高于正常肺组织。TIMP-3的阳性染色主要为细胞质内出现棕黄色颗粒, 在癌组织中的阳性表达率明显高于正常肺组织。差异均有统计学意义 (P<0.05) , 见表1。
2.2 MMP-10和TIMP-3的表达与非小细胞肺癌的临床生物学关系
MMP-10和TIMP-3在非小细胞肺癌患者的不同年龄、性别、病理类型和肿瘤大小之间的表达差异均无统计学意义 (P>0.05) 。MMP-10在淋巴结转移组中的表达明显高于无转移组;TIMP-3在淋巴结转移组中的表达低于无转移组, 差异均有统计学意义 (P<0.05) 。MMP-10在不同TNM分期中, Ⅲ期的表达明显高于Ⅰ、Ⅱ期;TIMP-3在Ⅲ期的表达明显低于Ⅰ、Ⅱ期的表达, 差异均有统计学意义 (P<0.05) 。MMP-10在低分化组中的表达明显高于高、中分化组;TIMP-3在低分化组中的表达低于高、中分化组, 差异均有统计学意义 (P<0.05) 。
3 讨论
恶性肿瘤的侵袭转移是一个复杂的多步骤、多阶段的病理过程, 肿瘤的浸润和转移是肿瘤细胞与肿瘤基质成分共同参与的过程。Liotta等[1]1991年提出肿瘤浸润三步学说, 即黏附、降解和移动, 首次明确提出肿瘤浸润与肿瘤细胞间质降解之间的关系。转移的过程虽复杂, 但基本步骤是癌细胞对细胞外基质和血管基底膜的降解和破坏。正常基底膜是由Ⅳ型胶原等多种成分构成, 为一致密的网状结构, 固有细胞不能通过, 细胞外基质是肿瘤细胞浸润扩散过程中的一道天然屏障。
本研究表明, MMP-10、TIMP-3在肺癌组织中主要存在于癌细胞胞质中, 成纤维细胞及内皮细胞胞质中亦有表达。本研究结果与文献报道[2,3,4]一致。MMP-10、TIMP-3的表达强度与淋巴结转移显著相关;MMP-10的表达与淋巴结转移呈正相关, 而TIMP-3的表达与淋巴结转移呈负相关。MMP-10通过对细胞外基质及基底膜中胶原的特异性降解, 使肿瘤细胞浸润能力增强, 发生转移的可能性增加。TIMP-3通过与MMP-10以1∶1比例特异性结合, 抑制MMP-10活性的表达, 使肿瘤细胞发生转移的能力降低。MMP-10与TIMP-3平衡系统的破坏是肺癌细胞浸润、转移及影响预后的因素。
癌组织内MMP-10蛋白表达水平的上调, 促使癌细胞发生浸润和转移、影响预后, 这就为临床防治肺癌转移提供新的思路, 可以用反义技术进行基因转染, 人为地降低MMPs的表达、提高TIMPs的表达, 使MMP-10表达受到抑制, 癌细胞的浸润和转移能力大大下降。这些方法有望成为手术、放化疗等传统治疗措施的理想补充。
摘要：目的探讨非小细胞肺癌 (NSCLC) 组织中基质金属蛋白酶10 (MMP-10) 和组织金属蛋白酶抑制剂3 (TIMP-3) 的表达及其意义。方法采用免疫组化S-P法检测65例非小细胞肺癌组织和33例正常肺组织中MMP-10和TIMP-3的表达。结果非小细胞肺癌组织中MMP-10的表达显著高于正常肺组织 (P<0.05) 。非小细胞肺癌中MMP-10的表达有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者 (P<0.05) , Ⅲ期高于Ⅰ、Ⅱ期 (P<0.05) 。非小细胞肺癌组织中TIMP-3的表达显著高于正常肺组织 (P<0.05) , 非小细胞肺癌中TIMP-3的表达有淋巴结转移低于无淋巴结转移 (P<0.05) 。结论MMP-10和TIMP-3表达与非小细胞肺癌的侵袭、转移密切相关。
关键词：非小细胞肺癌,MMP-10,TIMP-3,免疫组织化学
参考文献
[1]Liotta LA, Steeler-Stevenson WG.Tumor invasion and metastasis:an imbalance of positive and negative regulation[J].Cancer Res, 1991, 51 (18Suppl) :5054s-5059s.
[2]Thomas P, Khokha R, Shepherd FA, ale.tDifferential expression of matrix metalloproteinases and their inhibitors in non-small cell lung cancer[J].J Pathol, 2000, 190 (2) :150-156.
[3]Mathew R, Khanna R, Kumar R, et al.Stromelysin-2 (MMP-10) overe-xpression in human esophageal squanmous cell carcinoma:potential clinical implications[J].Cancer Detect Prev, 2002, 26 (3) 222-228.
小表达 篇8
1 材料与方法
1.1 一般资料
收集天津市大港油田总医院2009年10月~2011年10月经手术切除的新鲜非小细胞肺癌病例手术标本100例, 及远离癌组织的正常肺组织标本15例作为对照。所有患者术前均未接受放、化疗及其他免疫治疗。将所取得的标本分为两部分, 一部分置于中性福尔马林内固定以备行免疫组化, 另一部分迅速置液氮冷冻, -80℃贮存, 以备行RT-PCR。其中男72例, 女28例, 年龄35~81岁, 平均 (67.8±12.5) 岁;病理类型:鳞癌65例 (高分化10例, 中分化40例, 低分化15例) , 腺癌35例 (高分化9例, 中分化18例, 低分化8例) ;根据WHO (2004) 进行临床分期:Ⅰ期15例, Ⅱ期50例, Ⅲ期30例, Ⅳ期5例;有淋巴结转移75例。对照组15例, 选择距肿块5 cm以上的外周正常肺组织作为对照, 并经病理切片证实。
1.2 主要试剂
兔抗人多克隆抗体XIAP购自Santa Cruz公司, 鼠抗人单克隆抗体Smac购自武汉博士德生物有限公司, 免疫组化即用型SP试剂盒购和DAB显色试剂盒均购自福建迈新生物技术有限公司, PAS组织化学染色试剂盒购自珠海贝索生物公司, Trizol试剂购自GIBOC公司。
1.3 试验方法
1.3.1 免疫组织化学染色
采用免疫组织化学SP法进行染色。标本经福尔马林固定, 脱水, 石蜡包埋组织4μm连续切片, 染色严格按试剂盒说明书进行, 抗体稀释至1∶100, 二氨基联苯胺染色, 苏木精复染, 中性树胶封片。取已知阳性切片作阳性对照, PBS代一抗作阴性对照。每张切片至少观察5个高倍视野, 每个高倍视野至少随机观察100个细胞。结果判定:由两位病理科医生进行双盲阅片, 避开肿瘤坏死区域及边缘区域。采用半定量分析法, 结果的判断标准:XIAP和Smac以胞质或和胞核呈棕黄色为阳性。按阳性细胞百分比积分:1分:0%~25%;2分:26%~50%;3分:51%~75%;4分:76%~100%。按显色有无及深浅评分:0分:无显色;1分:淡黄色或者黄色;2分:浅棕色或者棕黄色;3分:棕褐色。最后按阳性细胞百分比积分x染色强度的深浅积分计算最终积分。积分1~2分为阴性, 3~12分为阳性。
1.3.2 半定量逆转录-聚合酶链反应 (RT-PCR)
Trizol试剂提取组织总RNA, 引物设计:XIAP:上游序列:5'-TGGCAGATTATGAAGCAC-3', 下游序列:5'-CTCCTCCACAGTGAAAGC-3', 预扩增片断为202bp;Smac:上游序列:5'-CCTGTGTGCGGTTCCTATTG C-3', 下游序列:5'-TGATTCCTGGCGGTTATAGAG-3', 预扩增片断为399 bp;GAPDH:上游序列:5'-AT GACCACAGTCCATGCCAT-3', 下游序列:5'-TTCCT CTTGTGCTCTTGCTG-3', 预扩增片断为526 bp。经过94℃变性1 min, 56℃退火40 s, 72℃延伸30 s, 30个循环后, 72℃延伸10 min。产物琼脂糖凝胶电泳, 并应用电泳成像系统进行扫描分析。
1.4 随访
对所有患者均进行随访, 随访主要以电话及书信的方式进行。随访原则:以手术日作为随访开始之日, 截止日期为2012年10月。随访期内未死亡患者的随访时间记为截尾时间, 随访期内死亡患者的随访时间记为完全数据。
1.5 统计学分析
所有数据均经SPSS 17.0统计软件包进行统计分析, 计量资料数据以 (±s) 表示, 率的比较采用χ2检验和t检验, 生存数据采用Kaplan-Meier法, 应用Log-rank检验差异性, 相关性分析采用Spearman等级相关分析, 检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 免疫组化染色结果
免疫组化结果 (见图1) , 在非小细胞肺癌组织中XIAP的阳性表达率为78.0% (78/100) , 在正常肺组织中XIAP的阳性表达率为13.3% (2/15) , 两者差异有显著性 (P<0.01) ;在非小细胞肺癌组织中Smac的阳性表达率为30.0% (30/100) , 在正常肺组织中Smac的阳性表达率为73.3% (11/15) , 两者差异有显著性 (P<0.01) 。
A:XIAP在非小细胞肺癌中阳性表达 (SP×400) ;B:XIAP在非小细胞肺癌中阴性表达 (SP×400) ;C:Smac在非小细胞肺癌中阳性表达 (SP×400) ;D:Smac在非小细胞肺癌中阴性表达 (SP×400)
2.2 逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR) 结果
RT-PCR结果显示 (见图2) , 非小细胞肺癌组织中XIAP m RNA相对表达水平明显高于正常肺组织, 非小细胞肺癌组织中XIAP m RNA为 (0.89±0.11) , 正常肺组织中为 (0.21±0.09) , 两组差异有显著性 (P<0.01) 。非小细胞肺癌组织中Smac m RNA相对表达水平明显低于正常肺组织, 非小细胞肺癌为 (0.09±0.04) , 正常肺组织中为 (0.67±0.12) , 两组差异有显著性 (P<0.01) 。
1、2:正常肺组织;3、4:非小细胞肺癌组织
2.3 XIAP和Smac的表达与非小细胞肺癌患者临床病理特征的关系
非小细胞肺癌组织XIAP和Smac的蛋白及m RNA表达均与分化程度密切相关 (P<0.01) , 而与组织学类型、年龄、性别、临床分期、淋巴转移无关 (P>0.05) 。
2.4 XIAP蛋白和Smac蛋白在非小细胞肺癌组织中表达的相关性
Spearman等级相关分析显示, XIAP蛋白和Smac蛋白的表达呈负相关 (r=-0.51, P<0.05) 。
2.5 非小细胞肺癌组织中XIAP蛋白和Smac蛋白的表达与患者预后的关系
对所有100例非小细胞肺癌患者进行随访, 总的3年生存率为51.5%, Kaplan-Meier生存分析显示非小细胞肺癌患者XIAP蛋白阳性与阴性患者3年生存率分别为23.5%和65.4%, 差异有显著性 (P<0.05) ;Smac蛋白阳性与阴性患者3年生存率分别为71.1%和28.9%, 差异有显著性 (P<0.05) 。
3 讨论
细胞凋亡是细胞在生理或者病理条件下, 遵循着自身程序, 由基因来控制的细胞的自主性死亡方式, 细胞凋亡的过程涉及复杂的生化反应。IAPs是近年来发现的一类在结构上具有同源性的细胞凋亡抑制蛋白, 与肿瘤的发生、发展有着密切的关系[2,3]。目前己经发现的IAPs家族成员包括XIAP、c-IAP1、c-IAP2、Livin和Survivin等[4], 其中XIAP的抗凋亡活性最强。XIAP在不同的组织中的表达水平不同, 研究显示XIAP在人类的多种恶性肿瘤中均呈过度表达状态[5,6,7], 正是由于XIAP过表达导致细胞的凋亡过程受到抑制, 细胞凋亡与增值失衡, 从而促进了恶性肿瘤的发生、发展。本实验中发现, XIAP在非小细胞肺癌组织中呈过表达状态, 并且XIAP的表达与肿瘤的分化程度密切相关。有研究认为某些肿瘤组织中XIAP的表达水平与肿瘤患者的预后密切相关, YAN等[8]报道在成人和儿童的急性髓细胞样白血病 (AML) 患者中, XIAP低表达患者的生存率明显高于XIAP高表达的患者;在本实验中非小细胞肺癌患者中XIAP高表达患者的3年生存率明显高于XIAP低表达的患者的3年生存率。
Smac是目前发现的哺乳动物细胞中唯一能够直接抑制IAPs家族的蛋白。Smac在人体组织中广泛表达, 并且表达水平较高, 但在恶性肿瘤组织中其表达水平显著降低[9,10]。MIZUTANI等[11]报道在肾细胞癌组织中Smac的表达水平明显低于正常肾组织, 并且Smac的表达与肾细胞癌的分期和预后有显著相关性。SEKIMURA等[12]在研究中发现肺癌组织中Smac m RNA的表达较正常肺组织明显下降, 且Smac m RNA低表达的病人预后较差。研究中笔者发现, 在非小细胞肺癌组织中Smac的表达明显降低, 并且Smac的表达与肿瘤的分化程度密切相关。同时笔者也发现Smac低表达的非小细胞肺癌患者3年生存率明显低于Smac高表达患者。
本实验结果提示在非小细胞肺癌组织中XIAP的表达与Smac的表达呈负相关, Smac对XIAP具有抑制作用, Smac通过与凋亡启动因子Caspase-9竞争性结合XIAP的BIR3区解除XIAP对Caspase-9的抑制作用, 并且Smac还可以同时竞争性与XIAP的BIR2区结合, 解除XIAP对Caspase-3/Caspase-7的抑制作用, 导致细胞凋亡。
XIAP和Smac在非小细胞肺癌的发生、发展中起着重要的作用, 联合检测XIAP和Smac的表达可作为非小细胞肺癌临床诊断及预后预测的参考指标。
参考文献
[1]ECKELMAN BP, SALVESEN GS, SCOTT FL.Human inhibitor of apoptosis proteins:why XIAP is the black sheep of the family[J].EMBO ReP, 2006, 7 (10) :988-994.
[2]WATANABE SI, MIYATA Y, KANDA S, et al.Expression of X-linked inhibitor of apoptosis protein in human prostate cancer specimens with and without neo-adjuvant hormonal therapy[J].J Cancer Res Clin Oncol, 2010, 136 (5) :787-793.
[3]CHENG YJ, JIANG HS, HSU SL, et al.XIAP-mediated protection of H460 lung cancer cells against cisplatin[J].Eur J Pharmacol, 2010, 627 (1-3) :75-84.
[4]VAUX DL, SILKE J.Mammalian mitochondrial IAP binding Proteins[J].Biochem Biophys Res Commun, 2003, 304:499-504.
[5]寇有为, 王强.XIAP caspase-3在胃癌中表达及其相关性[J].中国现代医学杂志, 2011, 21 (28) :3490-3494.[5]KOU YW, WANG Q.Expression of XIAP and caspase-3 in gastric cancer and their relationship[J].China Journal of Modern Medicine, 2011, 21 (28) :3490-3494.Chinese
[6]XIANG G, WEN X, WANG H, et al.Expression of X-linked inhibitor of apoptosis protein in human colorectal cancer and its correlation with prognosis[J].Surgical Oncology, 2009, 100 (8) :708-712.
[7]SHIRAKI K, SUGIMOTO K, YAMANAKA Y, et al.Overexpression of X-linked inhibitor of apoptosis in human hepatocellular carcinoma[J].Int J Mol Med, 2003, 12 (5) :705-708.
[8]YAN Y, MAHOTKA C, HEIKAUS S, et al.Disturbed balance of expression between XIAP and Smac/DIABLo during tumour progression in renal cell carcinomas[J].Br J Cancer, 2004, 91:1349-1357.
[9]XUAN Y, XUAN XY, ZANG W, et al.The expressions of survivin in esophageal carcinoma and its correlation with smac basic and clinical[J].Oncology 2009, 22 (4) :285-288.
[10]张水军, 余江涛, 吴阳, 等.原发性肝细胞癌组织Smac、XIAP蛋白的表达变化及意义[J].山东医药, 2009, 49 (50) :55-56.[10]ZHANG SJ, YU JT, WU Y, et al.Expression and significance of Smac and XIAP in tissue of hepatocellular carcinoma[J].Shandong Medical Journal, 2009, 49 (50) :55-56.Chinese
[11]MIZUTANI Y, NAKANISHI H, YAMAMOTO K, et al.Downregulation of Smac/DIABLO expression in renal cell careinoma and its prognostic significance[J].J Clin Oncol, 2005, 23 (3) :448-454.
小表达 篇9
1 对象与方法
1. 1 研究对象
新鲜手术标本来源于2012年6月至2013年6月在东南大学附属中大医院胸外科行肺部分切除术的NSCLC患者( 22例,分别取肺癌组织及癌旁肺组织)和肺部感染患者( 6例) ,术中送至病理科做快速冰冻切片病理确定病变性质( NSCLC或肺部细菌、真菌、结核感染) 的病例。所纳入的22例取得癌和癌旁肺组织的患者,年龄43 ~ 78岁,平均( 63 ± 7. 8) 岁; 腺癌16例,鳞癌6例; TNM分期ⅠA期11例,ⅠB期6例,ⅡA期3例,ⅢA期2例。肺部感染患者包括真菌感染5例和结核感染1例。
1. 2 研究方法
取NSCLC癌组织及癌旁肺组织各100 ~ 200 mg,取感染肺组织100 ~ 200 mg,将其置于放有800 μl RNA稳定剂( 购自福州迈新生物有限公司) 的2 ml离心管中,存于 - 20 ℃冰箱。并于20 d内提取RNA,测定IFI 16 RNA水平。取相同组织纳入蜡块用IHC测定IFI 16蛋白水平。
1. 2. 1逆转录-聚合酶链 反应 ( RT- PCR )提取RNA,再将其调至1 μg·μl- 1,取5 μg( 即5 μl) 行逆转录,用特异性引物[9]( 表1) 对逆转录后产物进行PCR扩增。将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,分析结果。电泳条件: 60 ~ 80 V,30 ~ 35 min。紫外分析仪检查电泳结果。将图像输入Photoshop CS6软件进行灰度扫描及灰度分析。Actin为内部参照基因。RT-PCR试剂盒购自上海博彩生物科技有限公司。
1. 2. 2免疫组织化学方法 ( IHC )IHC测定IFI 16mRNA和蛋白表达情况,试剂盒购自生工生物( 上海)股份有限公司,按说明书操作。免疫组化结果判定方法: 显微镜下观察染色结果,胞浆着色为阳性,评分由病理医师独立打分,评分标准由染色强度和染色细胞百分比综合评定。每张切片至少选取5个高倍( ×400)视野,每个视野计数100个细胞。首先按阳性细胞所占百分比评分: 阴性为0分,阳性细胞数≤10% 为1分,> 10% ~ 50% 为2分,> 50% ~ 75% 为3分,> 75% 为4分; 再按染色强度评分: 无色为0分,淡黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分; 最后按两者乘积分数分为4个等级,“- ”: 0 ~ 2分,“+ ”: 3 ~ 4分,“+ + ”:6 ~ 8分,“ + + + ”: 9 ~ 12分。我们将分数≥3定为阳性,< 3为阴性。
1. 3 统计学处理
应用SPSS 20. 0统计学软件进行统计学分析,数据不符合正态分布,用秩和检验的统计方法比较IFI 16表达在各组间的差别,P < 0. 05为差异有统计学意义。
2 结果
2. 1 肺组织 IFI 16 mRNA 表达水平
NSCLC肺组织IFI 16 mRNA的表达上升,与癌旁肺组织比较其差异有统计学意义( P < 0. 05) ; NSCLC肺组织与肺部感染肺组织以及癌旁肺组织与肺部感染肺组织比较,IFI 16 mRNA的表达差异均无统计学意义。见表2。
2. 2 肺组织 IFI 16 蛋白的表达水平
与癌旁肺组织比较,NSCLC肺组织中IFI 16蛋白的表达上升,其差异有统计学意义( P < 0. 05) ; NSCLC肺组织与肺部感肺组织以及癌旁肺组织与肺部感染肺
与癌旁肺组织比较,a P < 0. 05 注: 括号内为百分率
组织比较,IFI 16蛋白的表达差异均无统计学意义,见表3。镜下观察,IFI 16表达阳性者均在细胞浆中,而不是在细胞核中,见图1。
与癌旁肺组织比较,a P < 0. 05
A. NSCLC 癌组织; B. NSCLC 癌旁肺组织; C. 肺部感染组织; 箭头示表达 IFI 16 的细胞
3 讨论
研究已证实IFI 16是炎症与肝癌发生过程中的桥梁,但与肺癌 的相关研 究目前报 道较少。Gariglio等[10]通过IHC证实人气管和肺组织均有IFI 16表达,慢性阻塞性肺 疾病患者 的肺组织CD3+T细胞和CD20+B细胞IFI 16高表达,而在正常肺组织中IFI 16的表达主要在上皮细胞[11]。Kim等[12]观察到IFI 16高表达可以使小细胞肺癌细胞株DMS53生长受到抑制,减少细胞集落形成。本实验观察到IFI 16 mRNA和蛋白质在NSCLC细胞中的表达均明显升高,故推测IFI 16参与了肺癌的发生发展,结合文献推测IFI 16可能参与了细胞凋亡过程及细胞周期调控,但具体机制和作用尚需进一步研究。
小表达 篇10
我们采用免疫组织化学技术 (SP法) 检测72例非小细胞肺癌组织中p53 和PCNA的表达, 以探讨p53蛋白和PCNA的表达同NSCLC的发生、发展及生物学行为的关系。
1资料和方法
1.1 资料
收集我院胸外科2006-2008年经肺部手术切除的存档蜡块, 其中 NSCLC癌组织标本72例, 所有标本均经病理学证实。其中男性32例, 女性40例, 年龄34～75岁, 平均54.5岁;高中分化24例, 低分化48例;肿瘤直径小于5cm者28例, 大于5cm者44例;无淋巴结转移者28例, 有淋巴结转移者44例。另取癌旁正常肺组织标本10例作对照。所有患者术前均未接受过放、化疗。
1.2 方法
标本经10%福尔马林固定, 常规脱水, 石蜡包埋, 4μm连续切片。免疫组化试剂为即用型, 购自福州迈新生物技术有限公司产品。操作步骤按试剂盒说明书进行。染色方法为SP法。
1.3 结果判定标准
p53和PCNA分别以阳性细胞数<5%和15%为 (-) ;5%～30%和15%～50%为 (+) ;>30%和>50%为 (++) 。
1.4 统计学方法
所有数据均用SAS软件处理。组间分析用χ2检验, 相关性分析用Spearman 秩和相关检验。
2结果
2.1 p53、PCNA在NSCLC组织中的表达及分布特征
p53蛋白在10例正常支气管黏膜组织中未见表达, 在肺癌组织中阳性表达率为58.3% (42/72) , 染色局限于细胞核内。PCNA在正常支气管黏膜组织中见少量表达, 在肺癌中的表达也局限于细胞核, 其阳性表达率为91.7% (66/72) 。PCNA阳性细胞弥散分布, 呈明显异质性。
2.2 p53、PCNA在肺癌中的表达与临床病理因素的关系
见表1。
2.2.1 p53表达与临床病理因素的关系:
从表1见, p53表达与肿瘤分化程度、肿瘤大小、有无淋巴转移有关 (P<0.05) 。
2.2.2 PCNA强阳性表达率与临床病理因素的关系:
因PCNA在肺癌组织中的阳性表达率高达91.7% (66/72) , 故选取强阳性表达率作为比较对象。PCNA强阳性表达与肿瘤分化程度、肿瘤大小、有无淋巴结转移有关 (P<0.05) 。
2.3 p53 蛋白表达与细胞增殖活性的关系
p53阳性表达者, 细胞增殖极其活跃, 见表2。运用Spearman秩和相关分析, rs=0.58681 (P<0.05) , 说明p53与PCNA在肺癌中的表达呈正相关关系。
3讨论
p53是一种抑癌基因, 是人类肿瘤中突变率最高的基因[1]。p53基因突变引起的结果主要是: (1) 野生型基因的抑癌功能丧失。 (2) 其突变产物可中和另一个野生型等位基因产物的抑癌功能。 (3) 突变的p53基因具有癌基因的功能[2]。Gessner等[3]检测NSCLC患者呼出气体冷凝液标本中p53突变, 发现在支气管非典型增生患者的冷凝液标本中即可检出突变的 p53基因。研究证明, 大约50%的肺癌存在着p53基因的突变[2]。本研究结果显示, p53蛋白在肺癌组织中阳性表达率为58.3 %, 与相关文献结果相似[4]。NSCLC组织中p53阳性表达率明显高于癌旁正常组织, 伴有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者, 提示它与肺癌的生物学行为有着密切的联系, 因此通过p53的检测对肺癌的诊断及预后判断有重要意义。
近年来, PCNA作为原位检测肿瘤细胞增殖状态的新探针开始用于肿瘤的动力学研究。PCNA是一种分子量为36kD的蛋白, 为DNA聚合酶δ的辅助因子直接参与细胞增殖过程中DNA的复制, 它协调DNA前导链和后随链的合成, 是一种核内蛋白质, 在静止期细胞中其量很少, 于G1晚期开始增加, S期达到高峰, G2M期明显下降[5]。它的出现明显与细胞增殖有关, 其量的变化与DNA合成相一致, 是反映细胞增殖的主要生物学指标。肿瘤组织具有旺盛的增殖活性, 因此其含量明显高于正常细胞。本研究结果显示, PCNA在肺癌中的阳性表达率为91.7%, 强阳性表达率为58.3%。其强阳性表达率与肿瘤分化程度、肿瘤直径及是否伴有淋巴结转移密切相关, 其差异具有显著性 (P<0.05) 。说明PCNA表达越强, 肺癌的分化程度越差, 越容易发生淋巴结转移, 与文献报道一致[6,7]。分析了p53蛋白与PCNA阳性表达间的关系, 结果发现p53蛋白与PCNA 表达强度呈正相关 (P<0.05) 。可能是p53突变的癌细胞常呈现高增殖状态, 肿瘤细胞的不断增生是肿瘤浸润的前提, 增生导致肿瘤组织内压力增高、细胞趋向周围扩散更容易引起转移。因此, 检测p53、PCNA将有助于肺癌的早期诊断及预后判断, 制定出针对性的治疗方案, 以改善 NSCLC的预后。
摘要：目的:探讨p53蛋白、增殖细胞核抗原 (proliferating cell nuclear antigen, PCNA) 在非小细胞肺癌 (NSCLC) 组织中的表达及意义。方法:采用免疫组化技术 (SP法) 对72例NSCLC组织及10例正常支气管黏膜组织进行p53蛋白与PCNA的检测。结果:p53蛋白与PCNA在NSCLC组织中的表达明显高于正常组织, 在NSCLC组织中的阳性表达率分别为58.3% (42/72) , 91.7% (66/72) ;PCNA强阳性表达率为58.3% (42/72) ;p53阳性表达率及PCNA强阳性表达率均与肺癌组织的分化程度、肿瘤组织大小、淋巴转移等因素密切相关, 差异具有显著性 (P<0.05) ;p53蛋白阳性表达与PCNA阳性表达呈正相关 (P<0.05) 。结论:p53蛋白及PCNA的表达与肺癌的发生发展过程并与分化程度及有否淋巴结转移有关。
关键词：非小细胞肺癌,p53,增殖细胞核抗原,免疫组织化学
参考文献
[1]金惠铭.病理生理学 (M) .第6版.北京:人民卫生出版社, 2004.121.
[2]亓梅, 赵慧, 王翠萍.p53与肺癌诊断治疗研究进展 (J) .临床肺科杂志, 2007, 12 (11) :1239.
[3] Gessner C, Kuhn H, Toepfer K, et al.Detection of p53 gene muta-tions in exhaled breath condensate of non-small cell lung cancerpatients (J) .Lung Cancer, 2004, 43 (2) :215.
[4]胡云伦, 何向蕾.非小细胞肺癌中p53蛋白表达及临床意义 (J) .肿瘤学杂志, 1997, 1 (3) :34-35.
[5] Kurki DP, Vanderlan M, Dolbeare F.Expression of proliferatingcell nuclear antigen (PCNA) /cylin during the cell cycle (J) .ExpCell Res, 1986, 166 (1) :209.
[6]高进, 刘晓雨, 计雪梅, 等.增殖细胞核抗原与癌基因在肺癌中的表达及意义 (J) .齐齐哈尔医学院学报, 2000, 21 (3) :243-244.
小表达 篇11
1 资料与方法
1.1 标本来源
西安交通大学医学院第二附属医院胸外科2006年8月至2009年5月的新鲜手术标本。78例肺癌手术标本按癌组织、癌旁组织(距癌组织>3cm)、正常组织(距癌组织>10cm)及淋巴结切取后立即放置于液氮中保存备用,其余部分常规送病理检查。
1.2 临床资料
78例患者,男性45例,女性33例。年龄30--76岁,平均58.6岁。按照WHO肺癌分型标准及UICC1997年新的国际肺癌分期标准进行分型、分期,磷癌42例;腺癌27例;腺磷癌9例。I期16例;Ⅱ期27例;Ⅲ期35例。年龄≤40岁12例,年龄4l岁-60岁49例,年龄>60岁17例。有淋巴结转移29例,无淋巴结转移49例,患者手术前均未接受过化疗,放疗等辅助治疗。78例标本均经病理检查证实。
1.3 试剂
免提抗人MTAI多克隆抗体购自美国UCL公司,稀释浓度为l:100IER、PR抗体及SP试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。
1.4 方法
免疫组织化学染色标本常规方法脱蜡,其他步骤按链霉素抗生物素蛋白.过氧化物酶(S-P)法试剂盒说明书步骤进行。用己知阳性表达的非小细胞肺癌组织做阳性对照;PBS代替一抗作阴性对照。
1.5 阳性结果判定标准
MTAI蛋白阳性信号呈棕黄色颗粒状。主要在细胞核内表达,部分在细胞质中表达。染色阳性信号以细胞核着色为准。细胞染色强度明显高于背景呈棕黄色者为阳性。细胞蛋白表达强度根据阳性物质着色深浅及阳性细胞的多少分为4级:无阳性细胞或阳性细胞<l O%或背景同空白对照者为".'每张切片仅有<25%的细胞明显阳性为"+气25%~50%细胞明显呈阳性为"+,I>50%细胞呈阳性为"+++竹。前两级用低表达表示,后两级用高表达表示。ER、PR阳性物质呈棕黄色颗粒,主要位于癌细胞核内,计数500个肿瘤细胞内每100个细胞的阳性细胞数≥15%为阳性,<15%为阴性。
1.6 统计学方法
采用SPSS 11.O统计软件进行统计学处理,阳性率之间的比较采用χ2检验,α=0.05作为检验水准。
2 结果
2.1 不同分期组织非小细胞肺癌MTAl的表达
不同分期的非小细胞肺癌组织中,细胞核MTAI蛋白在Ⅲ期的表达率为82.9%(29/35),高于I~Ⅱ期的58.1%(25/43),χ2=5.534,P<0.05。
2.2 MTA1表达与淋巴结转移的关系
有淋巴结转移组非小细胞肺癌中,细胞核MTA1蛋白表达率为86.2%(25/29),高于无淋巴结转移组的59.2%(29/49),χ2=6.245,P<O05。在乳腺癌中。MTAl的表达与病理分级和淋巴结转移相关,而与年龄、性别无关。详见表l。
3 讨论
MTAl基因是于1994年由Toh等[1,2]应用差异c DNA杂交技术,首次从13762NF大鼠乳腺癌转移系统筛选克隆出肿瘤转移相关基因MTA1,继后在人类高转移乳腺癌细胞株中发现其对应的人类同源物MTA1,因该基因的表达与乳腺癌转移能力成正相关,故被命名为肿瘤转移相关基因l。MTA1基因定位于人染色体14q32.3,编码一个含715个氨基酸残基的蛋白,相对分子质量82×l o,。目前已确认有3类(MTAI、MTA2、MTA3),均被认为是ATP依赖的核小体重建和组蛋白去乙酰化核小体复合物(Nu RD)的组成部分,它们通过调控组蛋白去乙酰基来发挥其生物学效应,与恶性肿瘤的侵袭和转移过程密切相关[3]。研究发现,过表达MTAl的癌组织具有明显的高浸润率和淋巴结转移率,且更易血行转移。在有浸润和转移的鳞癌中,过表达MTAl基因促进了肿瘤的浸润和转移以及细胞凋亡的丧失[4]。近年常近年常有它与人喉癌、食管癌、肝癌、乳腺癌、大肠癌、卵巢癌、前列腺癌等浸润、转移密切相关的报导[5,6,7,8]。而有关MTAl蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达,国内报道甚少。
本研究通过免疫组化的方法研究癌MTA1蛋白的表达,发现MTA1蛋白在非小细胞肺癌癌中存在不同程度的表达。本研究通过免疫组化的方法研究非小细胞肺癌MTAI蛋白的表达,发现MTAI蛋白在癌组织、癌旁组织(距癌组织>3cm)、正常组织(距癌组织>10cm)中都存在不同程度的表达,但非小细胞肺癌组织MTA1蛋白细胞核高表达率显著高于癌旁组织及正常组织。并且癌组织MTA1蛋白阳性表达率与相应的癌旁组织及正常组织相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。提示细胞核内MTAl基因激活在非小细胞肺癌的发生、发展过程中可能起重要作用。研究还发现,非小细胞肺癌组织中有局部淋巴结转移组MTAl蛋白细胞核高表达率为(86.2%),明显高于无淋巴结转移组的(59.1%)(P<0.05)I在Ⅲ期的表达率(82.8%)显著高于I~Ⅱ期(58.1%)(P<0.05),与年龄、性别无关(P>0.05)。说明MTAl蛋白细胞核高表达与非小细胞肺癌淋巴结转移及临床分级密切有关。上述证明了MTAl是肿瘤发生的一个关键性角色。MTA1的检测有可能作为临床判断恶性肿瘤演进的重要指标,其实际意义仍有待进一步观察。同时,MTAl是参与转移的主要因素之一,MTAl的检测也有可能成为预测非小细胞肺癌淋巴结转移的生物学指标。对MTAl基因的进一步研究,明确其对非小细胞肺癌转移的作用机制,将对控制非小细胞肺癌的转移发挥重要作用。
摘要：目的探讨转移相关基因l(metastasis-associated genel,MTA1)蛋白表述与非小细胞肺癌生物学行为之间的关系。方法采用免疫组织化学sP法检测78例非小细胞肺癌组织MTAl蛋白的表达。结果①非小细胞肺癌细胞核MTAl蛋白高表达显著高于癌旁肺组织和正常肺组织;②MTA1蛋白在Ⅲ期的高表达率为82.9%(29/35),显著高于I～Ⅱ期58.1%(25/43),P<O.05;③有淋巴结转移组的非小细胞肺癌中的高表达率为86.2%(25/29),显著高于无淋巴结转移组的59.2%(29/49),P<0.05。结论MTA1蛋白高表达可能在非小细胞肺癌发生中起重要作用且与淋巴结转移和临床分期密切相关。
关键词：非小细胞肺癌,MTAI蛋白,免疫组织化学
参考文献
[1]Toh Y,Pencil SD,Nicolson GL.A Novel candidme metastasis-associated gene,ratal,difereatially expressed in highly metastatic mammary adenoeareinoma cell lines[J].J Biol Chcra,1994,269(37):22958-22963.
[2]Toh Y,PenciI SD,Nicolson GL.Analysis ofthe complete sequence of the novel candidate metastasis-associated gene,mtal,diferentially expressed in highly metastatic mammary adenocareinoma and breast canggT cell tines[J].Gene,1995,159(1):97-104.
[3]Hao ZL,Clifton S,Steph∞,et a1.Metastasis tunlor antigen family protein during breast cancer progression and metastasis in areliable mouse model forhuman breast cancer.j.Clin Cancer Res,2006,12(5):1479.1486.
[4]Mahoney MG,Simpson A,Jost M,et a1.Metastasis asseciated protein(MTAl)l enhances migration,invasion and anchorage'independent survival of immortalized human keratinocytes[J].Oncogene,2002,21(14):216l-2170.
[5]唐桥斐,季文樾,潘子民,等.转移相关基因表达与喉鳞状细胞癌淋巴结转移的关系[J].耳鼻咽喉科杂志,2003,38(3):213-216.
[6]Sasaki H,Moriyama S'Nakashima V,et a1.Expression ofMTAImRNA in ad-vanced lung cancer[J].Lung Cancer,2002,35(2):149·154.
[7]杜彬,周序珑.大肠癌qbMTAl和ram23一HI蛋白的表达及意义川[J].暨南大学学报(医学版),2005,26(6):751-755.