戊型肝炎病毒（精选8篇）
戊型肝炎病毒 篇1
戊型肝炎病毒(HEV)属肝炎病毒科,是一种无包膜的正链RNA病毒,其基因组大小约为7.2 kb,包含3个互相重叠的开放阅读框(ORF1、ORF2、ORF3),主要通过粪—口途径在易感宿主间传播[1]。戊型肝炎病毒主要分为5个基因型,Ⅰ型和Ⅱ型仅发现于人类,Ⅲ型和Ⅳ型为人和家畜共患,Ⅴ型仅发现于禽类[2]。有研究表明,鸡戊型肝炎病毒(avian Hepatitis virus,a HEV)的抗血清可以与猪戊型肝炎病毒(swine Hepatitis virus,s HEV)核衣壳蛋白发生交叉反应[3],但关于a HEV是否可以感染人和家畜迄今尚无确切结论。为进一步探索a HEV和s HEV之间的相关性,试验从生物信息学角度着手,收集已公布且具有代表性的a HEV和s HEV全基因组序列,并对a HEV、s HEV、s HEV/a HEV分别进行了基因的重组分析,以明确a HEV和s HEV之间是否存在基因重组现象,为s HEV和a HEV致病相关性研究提供参考。
1 材料和方法
1.1 基因的收集及比对分析
搜索Gen Bank中收录的s HEV和a HEV全基因组序列,采用MEGA5软件对序列进行比对分析,序列对齐并删除空位,之后对序列进行同源性检测,删除同源性达100%的相同序列,只保留其中具有代表性的序列(包括61条s HEV全基因组序列,11条a HEV全基因组序列)参与后续分析。
1.2 重组分析
重组事件的分析主要应用RDP 4.24软件和Sim Plot 3.5.1软件完成。首先应用RDP 4.24软件中的RDP、Max Chi、GENECONV、Boot Scan、Chimaera、Si Scan 6个模块对序列进行分析,判断出可能出现重组现象的毒株,之后进一步对上述可能出现重组的毒株进行大小亲本分析和置信度分析,初步确定重组毒株。对上述初步确定序列的断裂点位置以及重组出现的可能性做进一步分析,得到每个模块对重组现象评价的P值。最后利用Sim Plot 3.5.1软件对重组序列、母序列和1条外群序列(AM943647.2)进行相似性和Boot Scan分析,进一步验证重组现象的真实性。
2 结果
2.1 基因比对分析结果
在Gen Bank中共收集a HEV全基因组序列11条,s HEV全基因组序列84条,剔除其中同源性100%的基因序列,将剩余的72条序列(即a HEV11条,s HEV 61条)绘制进化树,见279页彩图1。
2.2 基因重组分析结果
将11条a HEV全基因组序列以及61条s HEV全基因组序列采用MEGA5软件的Clustal W程序进行比对分析,比对后序列用RDP4.24软件中重组检测程序RDP、GENECONV、Boot Scan、Max Chi、Chimaera、Si Scan进行检测。
a HEV全基因组序列公布时间较晚且序列数目较少,基因间同源性较高,并未检测出重组现象。检测到存在重组的s HEV子序列包括DQ450072、NC023425、AB091394、JQ013791、D11092、FJ906895、EU676172、JQ655736、AB301710、AB291963、GU206559。其中NC023425、EU676172、JQ655736以及GU206559亲本不详,AB091394、JQ013791、FJ906895、AB301710及AB291963大小亲本明确,但经软件检测后重组现象的置信度不高。将上述重组现象中大小亲本不明确以及大小亲本明确但置信度不高的序列剔除不予分析,同时剔除研究人员已发现的重组序列D11092[3],选定DQ450072序列,经过6个高置信度的重组检测方法判断出2个潜在的重组现象,见表1。
2.3 Sim Plot分析和Boot Scan分析结果
为进一步验证DQ450072序列重组现象的真实性,以检测到的重组序列为子序列、两条大小亲本(JF915746.1、GU188851.1)以及一个外群序列(AM943647.2)4条序列利用Sim Plot 3.5.1软件进行Sim Plot分析和Boot Scan分析,结果见280页彩图2。在Sim Plot分析和Boot Scan分析都发现了明确的重组信号,Sim Plot 3.5.1软件分析的重组现象基本和RDP 4.24分析结果基本一致。
2.4 进化树拓扑结构分析结果
将重组区间片段进行ML进化树和全序列ML进化树对比,会发现两种进化树的拓扑结构发生了相应的变化,进一步验证了重组检测结果的真实性,结果见280页彩图3、彩图4。
由280页彩图3和彩图4可以看出,两段重组片段的拓扑结构发生相应的改变,进一步验证了重组事件发生的可能性。
3 讨论
HEV是引起急性肝炎流行的重要病原之一,发病地区主要在亚热带和卫生条件相对较差国家[4]。HEV有动物储存宿主,这点不同于甲、乙、丙和丁型肝炎病毒。有研究表明,人HEV与猪HEV可以发生交叉感染[5]。a HEV是2001年由美国学者从患肝脾肿大综合征(hepatitis-splenomegaly,HS)或大肝大脾病(Big liver and spleen disease,BLS)的鸡群分离出的一种新型病毒[6],目前关于a HEV是否与人HEV、s HEV发生交叉感染尚无确切的结论。有资料报道,a HEV ORF2蛋白与人HEV和s HEV ORF2蛋白存在共同的抗原表位[7]。但梁久红等[8]研究结果表明,a HEV与s HEV ORF2编码蛋白抗原性差异有统计学意义。用人HEV抗原来检测广东、广西等不同地区鸡血清抗HEV抗体得到阳性率很低的结果。上述结果提示a HEV与人HEV、s HEV无血清学相关性,人们据此推测a HEV可能构成了HEV另一个血清型。这使a HEV是否作为人兽共患病的问题更加扑朔迷离。目前,关于HEV重组分析的报道较少,基因重组在逆转录病毒中发生相对较频繁,近年来关于正链RNA病毒重组的报道较多[9]。基因重组的理论基础是同一个宿主必须同时感染两个或多个不同的毒株,病毒在复制的过程中,转录酶从一个毒株模板跳跃至另一个毒株模板,从而导致基因重组;通过重组和突变,促进形成新的变种,从而适应不断变化的环境和宿主基因型的改变[10]。a HEV和s HEV均为正链RNA病毒,重组是正链RNA病毒一个比较普遍的现象,基因重组会引发病毒的进化[11]。本研究旨在从生物信息学角度对s HEV和a HEV的相关性进行分析,共有72条HEV全基因序列参与重组分析,包括11条a HEV和61条s HEV。经分析可知,目前公布的a HEV全基因组序列的毒株之间以及a HEV和s HEV之间未检测到重组现象发生。在收集的61条s HEV之间共检测出11个重组信号,包含4个亲本不详、5个置信度不高以及1个已经被证实的重组事件。与邵忠军等[11]的分析结果不同,本研究中发生重组子序列DQ450072为Ⅲ型HEV,母序列GU188851、JF915746均为Ⅳ型,这可能是由于HEVⅢ、Ⅳ基因型为人畜共患基因型、变异性较大的原因[12]。上述分析结果将为阐明a HEV和s HEV的致病相关性提供参考。
有研究表明,诺沃克病毒(一种可以引起急性腹泻的正链RNA病毒)衣壳蛋白内的重组已经被报道[13,14]。病毒衣壳蛋白的基因重组可能对病毒毒力的强弱有重要影响,新的重组病毒可能具备逃避免疫反应,并避免其本身被消灭的能力。本研究发现的重组事件2发生在戊型肝炎病毒的衣壳蛋白内,这种重组的突变可能会产生一种蛋白质,进而提高病毒的效价以及病毒在体内的适应能力。因此,HEV重组分析将为病毒的深入研究提供借鉴。
注:粉色标记序列为a HEV序列(AY043166、NC023425、AY535004、EF206691、AM943647、KC454286、JN597006、KF51179、JN997392、AM943646、GU954430);蓝色标记序列为参与重组事件分析的s HEV序列(GU188851、JF915746、DQ450072、AB091394)。
注:图2A中竖线区域是Boot Scan检测到的重组区域;图2B中竖线区域是RDP4.24检测到的断裂点,竖线是重组断点。
注:红色为重组事件子序列,绿色、蓝色为母序列。
注:红色为重组事件子序列,绿色、蓝色为母序列。
孕妇要远离戊型肝炎 篇2
特别值得注意的是戊型肝炎对孕妇生命的威胁。孕妇一旦患戊型肝炎，产妇往往在分娩或流产后立即病情加重，或在分娩前一天急剧恶化，迅速发生肝昏迷，死亡率极高。戊型肝炎孕妇流产或死胎现象也极为普遍。有人对379例患戊型肝炎的孕妇进行随访，发现早、中、晚期孕妇的死亡率分别为1.5％、8.5％和21.0％。还有人报道，孕妇患戊型肝炎的病死率高达40％。另有人报告12例妊娠重型戊型肝炎，其中11例死亡，死亡率高达90.9％。所以，把戊型肝炎称为孕妇杀手，一点也不为过，必须引起人们的高度重视。
戊型肝炎是由戊型肝炎病毒引起的传染病。戊型肝炎病毒存在于人的粪便中，猪、鸡、牛、羊等动物的体内也可检出戊型肝炎病毒。所以，戊型肝炎是一种人畜共患病。戊型肝炎的传播方式主要有(1)水传播：戊型肝炎多在雨季和洪水过后发生，水源被带戊型肝炎病毒的粪便污染，造成大规模流行。1988年新疆地区曾发生一起水源性戊型肝炎暴发流行，发病人数119 280例，死亡707例，是迄今为止世界上最大规模的一次戊型肝炎流行。(2)食物污染：是散发性戊型肝炎的主要原因。病人多因吃了未煮熟的肉类、蔬菜、壳类水产品等，这些食物被戊型肝炎病毒污染，导致发病。(3)日常生活接触传播：通过被戊型肝炎病毒污染的手、用具、餐具等，或直接与病人接触而传染。病人在发病前1周和发病后的1周，传染性最强。(4)媒介传播：如苍蝇、蟑螂等都可将戊型肝炎病毒从病人的粪便、排泄物中带到食物上，充当传播媒介。
戊型肝炎病毒通过饮水、食物进入人体后，潜伏期为2～10周，平均6周左右。一般起病很急，黄疸明显。初期病人表现与感冒相似，食欲不振、精神疲乏、恶心、呕吐、发热、腹痛等。数天后，病人会出现黄疸，眼睛甚至皮肤都会发黄，小便变成深黄色。之后多数病人会逐渐好转，食欲增加，退烧，各种症状减轻或消失；持续数天或数周后，病人会慢慢痊愈。戊型肝炎是一种自限性疾病，不会发展为慢性肝炎。但有少数人会发展成重型肝炎，发生消化道出血、肝昏迷等合并症，危及生命。
目前对戊型肝炎没有疫苗可以预防，也没有特效治疗药物，只能进行对症治疗和营养支持疗法。因此，提高认识，搞好个人卫生，加强自我预防，是防治戊型肝炎的重要措施。(1)不要进食不洁或未煮熟的食物，尤其是壳类水产品。生吃瓜果、蔬菜必须干净清洁。(2)不要饮用未煮沸的水，不要在无卫生保障的排档、食摊等处进餐。(3)注意个人卫生，入厕后、吃饭前及接触食物前要洗手。外出旅游或出差时更要注意饮食安全。(4)卫生行政部门应加强粪便管理，及时隔离病人，开展清洁卫生运动，消灭苍蝇、蟑螂等害虫。
127例戊型病毒性肝炎临床分析 篇3
1 资料与方法
1.1 一般资料
127例病例均为我科于2008年12月至2011年12月收治的住院患者,均符合2000年9月西安中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会修订的《病毒性肝炎防治方案》[2]中的诊断标准。其中,男94例(74.0%),女33例(26.0%),年龄23～79岁,平均(48.7±12.1)岁。
1.2 治疗方法
所有病例给予促进肝细胞再生、修复肝细胞膜、退黄、支持等治疗,重症肝炎患者给予输血浆、人血白蛋白及血浆置换等综合治疗。
1.3 研究方法
对127例患者的临床表现、实验室检查、影像学检查及治疗效果等资料进行回顾性分析。
1.4 统计学方法
使用SPSS 13.0统计学软件处理数据,计量资料采用t检验,计数资料采用χ2检验。
2 结果
2.1 职业与季节分布
127例患者中农民52例(40.9%),公务员13例(10.2%),个体经营者31例(24.4),工人22例(17.3%),学生3例(2.4%),其他6例(4.7%),以农民和个体经营者为主。其中,第一季度37例(29.1%),第二季度52例(40.9%),第三季度23例(18.1%),第四季度15例(11.8%),第二季度发病率较高。
2.2 症状与体征
127例患者中有发热37例(29.1%),乏力114例(89.8%),厌食113例(89.0%),恶心63例(49.6%),呕吐45例(35.4%),腹胀88例(69.3%),腹泻9例(7.1%),皮肤瘙痒24例(18.9%),肝区叩痛106例(83.5%)。
2.3 实验室及其他检查
所有病例均查抗HEV-IgM阳性,其中HBsAg阳性有16例(12.6%),抗-HCV阳性有1例(0.8%),有酒精性肝病(诊断依据2010年1月中华医学会肝脏病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组修订的《酒精性肝病诊疗指南》[3]中的诊断标准)17例(13.4%)。单纯戊型肝炎患者(单纯组)中谷丙转氨酶(ALT)279.5～5361.7U/L,平均(921.5±485.2)U/L,谷草转氨酶(AST)237.6～5198.2U/L,平均(762.4±387.2)U/L,总胆红素(TBIL)38.7～427.3 μmol/L,平均(187.9±112.8)μmol/L,血清白蛋白(ALB)23.6～48.9 g/L,平均(39.2±10.1)g/L,凝血酶原活动度(PTA)38%～112%,平均(70±28)%。非单纯戊型肝炎患者(非单纯组)中谷丙转氨酶(ALT)290.2～5137.1U/L,平均(897.9±496.3)U/L,谷草转氨酶(AST)259.7～4975.3U/L,平均(790.6±405.4)U/L,总胆红素(TBIL)65.2～493.7 μmol/L,平均(259.7±157.9)μmol/L,血清白蛋白(ALB)24.8～41.6 g/L,平均(34.1±9.8)g/L,凝血酶原活动度(PTA)29%～108%,平均(60±29)%。通过比较发现(见表1),两组患者的ALT与AST无统计学差异(P>0.05),但非单纯组的总胆红素明显高于单纯组(P<0.05),非单纯组的ALB、PTA明显低于单纯组(P<0.05)。腹部B超提示有肝大35例(27.6%),脾大12例(9.4%),腹水12例(9.4%),肝硬化2例(1.6%),脂肪肝17例(13.4%)。
注:非单纯组与单纯组比较,*P<0.05
2.4转归
有2例患者因重症肝炎并发上消化道出血、肝性脑病死亡,病死率为1.6%,与相关著作记载相似[4],其余患者均治愈好转出院。
3讨论
戊型病毒性肝炎主要通过污染的水或食物经消化道传播,可引起暴发、流行,本组均为散发病例。职业以农民和个体经营者为主,考虑与这些人群饮食卫生习惯及在外就餐机会多有关。发病季节以第二季度为主,与感染戊型肝炎病毒机会多有关。男性戊型肝炎发表率一般高于女性,男女发病率之比为1.3∶1～3∶1[5],本组资料,男:女为2.8∶1,与之相似。男性发病率高可能与其感染戊型肝炎病毒机会多有关。
曾有文献报道戊型病毒性肝炎有慢性化的趋势[6],但本组病例均表现为急性肝炎,以消化道症状为主要表现,黄疸多见,并可伴有不同程度的胆汁瘀积。有17例患者重叠感染肝炎病毒,其中以乙、戊重叠感染为主,可能与我国乙型肝炎病毒感染率较高有关。通过比较发现,非单纯组戊型肝炎患者更易出现高胆红素血症、低蛋白血症及凝血功能异常,更易损害肝脏的合成功能及储备功能,更易引起重症肝炎,可能是由于非单纯组患者已存在细胞免疫功能紊乱及肝细胞损害,而感染戊型肝炎病毒后再次加重了肝细胞的免疫性损伤,引起大量肝细胞变性坏死。
目前戊型肝炎疫苗仍在研制过程中,预防以管理传染源、保护水源、加强饮食卫生管理、切断传播途径为主,要做到早期诊断,积极治疗,防治并发症,提高治愈率。
摘要：目的 探讨戊型病毒性肝炎的临床特点。方法 将127例戊型病毒性肝炎患者的临床资料进行回顾性分析。结果 127例患者中以农民和个体经营者为主,在第二季度发病率较高。所有患者以消化道症状为主要表现。非单纯戊型肝炎组的总胆红素水平明显高于单纯戊型肝炎组(P<0.05),而血清白蛋白及凝血酶原活动度明显低于单纯戊型肝炎组(P<0.05),但在谷丙转氨酶与谷草转氨酶方面无统计学差异(P>0.05)。有2例患者死亡,其余均治愈好转出院。结论 戊型病毒性肝炎以男性农民和个体经营者多见,大多预后良好,但非单纯戊型肝炎患者更易出现高胆红素血症、低蛋白血症及凝血功能异常。
关键词：戊型肝炎,病毒性肝炎,临床特点
参考文献
[1]庄辉.戊型肝炎防治不容忽视.中国实用内科杂志,2011,31(2):81-82.
[2]中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会.病毒性肝炎防治方案.中华传染病杂志,2001,19(1):56-62.
[3]中华医学会肝脏病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组.酒精性肝病诊疗指南.现代医药卫生,2011,27(6):801-804.
[4]陈灏珠.实用内科学.第12版,北京:人民卫生出版社,2005:341-343.
[5]斯崇文,贾辅忠,李家泰.感染病学.第1版,北京:人民卫生出版社,2004:430-435.
戊型肝炎病毒 篇4
天山马鹿是产于新疆维吾尔自治区天山山脉的一个鹿品种, 是国家二类保护动物, 天山马鹿是否也是HEV的易感宿主, 目前尚未见文献报道。研究通过对新疆地区集约化养殖和散养的天山马鹿进行HE血清学检测, 以调查当地天山马鹿HEV的感染状况, 旨在了解天山马鹿在当地HE传播中的作用。
1 材料
血清样本分别采自新疆3个集约化养殖鹿场和1个散养鹿群, 共410份, 采集样品全部有年龄记录, 血清样品于-20℃条件下冷冻保存, 备用。
2 方法
2.1 检测方式
试验采用双抗原夹心酶联免疫吸附试验 (ELISA) 法检测血清抗HEV Ig G抗体。试剂盒 (编号为HEV-0296) , 购自北京万泰生物药业股份有限公司, 按照说明书进行操作。
2.2 结果判定
在BIO-Te K酶标仪上读取OD450值, 临界值=阴性对照孔OD均值NC+0.12。样品OD450值≥临界值, 为HEV抗体阳性;样品OD450值<临界值, 为HEV抗体阴性。
2.3 数据的统计分析
采用SPSS 19.0统计学软件比较不同来源鹿场血清和不同年龄段血清HEV Ig G抗体阳性率差异。
3 结果与分析
3.1 不同鹿场HEV抗体检测结果
ELISA结果表明, 试验共检测鹿血清410份, 其中133份为阳性, 阳性率达32.4%。χ2检验结果表明, 不同鹿群之间抗体阳性率差异极显著 (P<0.01) , 其中集约化养殖鹿场的抗体阳性率明显高于散养鹿群, 见表1。
3.2 不同年龄鹿HEV抗体检测结果
χ2检验结果表明, 各年龄段鹿抗体阳性率差异极显著 (P<0.01) , 其中2~4岁鹿的抗体阳性率高达43.8%, 明显高于2岁以下的鹿抗体阳性率 (9.3%) , 见表2。
4 讨论
HE作为一种新型的人畜共患病, 其易感动物一直是流行病学研究关注的焦点, 目前已在多种动物体内检测到HEV抗体, 并且已经在部分动物体内检测到病毒RNA[14,15,16,17,18,19,20,21,22,23]。S.Tei等[1]在鹿肉和食用生鹿肉的患者体内检测到高度相似的HEV RNA, 表明鹿可以作为HEV的易感动物。新疆是我国人源HE的高发地区, 曾经有大规模流行的历史。目前, 已有关于当地多种动物感染HEV的报道[10,11,12], 天山马鹿作为国家二级保护动物在当地养殖已久, 为了解当地天山马鹿HEV的感染状况, 研究分别选择集约化养殖和散养两种饲养方式的鹿群进行血清采集, 并对鹿血清进行HEV Ig G检测, 结果表明, 抗体阳性率高达32.4%。由于目前尚没有有效的动物HE疫苗获准上市, 因此在马鹿体内检测到HEV抗体应该是自然感染的结果。虽然研究检测结果不能确定HEV在不同饲养方式鹿群中的传播途径, 但集约化养殖鹿群的抗体阳性率明显高于散养鹿群的抗体阳性率, 在某种程度上反映了当地马鹿饲养方式与HE在鹿群中流行的态势。在不同年龄鹿群对HEV的易感性方面, 统计学分析结果表明, 鹿的年龄与HEV Ig G阳性率明显相关, 2~4岁马鹿的抗体阳性率明显高于2岁以下马鹿的抗体阳性率和4岁以上马鹿的抗体阳性率。原因是马鹿感染HEV与其年龄呈正相关, 4岁以上马鹿的抗体阳性率小于2~4岁马鹿的抗体阳性率是因为当抗体滴度达到峰值时, 随着感染时间的增加抗体滴度逐渐降低。
天山马鹿所产鹿茸、鹿胎、鹿血、鹿筋、鹿角胶等十几种产品都是高级补品, 因此HEV在鹿群中的感染情况涉及公共卫生问题。在尚不明确HE在鹿群中传播机制的情况下, 应当加强对鹿群的饲养管理、引种检疫和防止外源性污染等, 以阻断HEV在鹿群中的传播。研究表明:新疆天山马鹿存在HEV感染, 并具有相对较高的抗体阳性率;然而作为一种新型的人畜共患病, 还需要进一步分离、鉴定其病原的基因型, 以确定其在当地动物HE流行过程中的地位和作用。
摘要：为了解新疆天山马鹿戊型肝炎病毒 (HEV) 的感染情况, 试验采用双抗原夹心酶联免疫吸附试验 (ELISA) 法对新疆地区3个集约化鹿场和1个散养鹿场的410份马鹿血清进行抗戊型肝炎病毒Ig G抗体检测, 比较不同鹿群及不同年龄段马鹿HEV抗体阳性率的差异。结果表明:所检测的血清总的抗体阳性率为32.4% (133/410) , 4个鹿群的抗体阳性率依次为:32.5% (65/200) 、46.0% (46/100) 、21.0% (20/95) 、13.3% (2/15) , 且差异极显著 (P<0.01) ;3个年龄段鹿群的抗体阳性率依次为:9.3% (7/75) 、43.8% (92/210) 、27.2% (34/125) , 且差异极显著 (P<0.01) 。说明新疆天山马鹿存在HEV的自然感染。
戊型肝炎病毒 篇5
戊型肝炎病毒是一种单股正链的RNA病毒, 全基因组长约7.5 kb, 包括3个开放阅读框 (ORF) , 其中ORF1长约5 kb, 主要编码与病毒RNA复制有关的结构蛋白;ORF2长约2 kb, 编码产物主要构成病毒的衣壳蛋白;ORF3是一个小的开放阅读框, 基因片段长仅有369 bp, 其3′末端与ORF2有328 bp重叠, 与ORF1 5′末端有1 bp的重叠。长期以来, 对戊型肝炎病毒的研究主要集中在ORF1和ORF2及编码蛋白的功能上, 其中ORF2的几个抗原决定簇已经被确定, 并且在多种原核细胞和真核细胞中进行表达。但最近的研究表明, ORF3的编码蛋白 (pORF3) 至少含有4个线性的抗原表位[1], 其在细胞的信号转导、病毒颗粒的装配与释放及机体的免疫抑制方面发挥重要作用。
1 pORF3的结构
pORF3大小约为13.5 ku, 通过32P和35S跟踪标记及免疫印迹试验发现, pORF3 是一个经Ser修饰过的磷蛋白, 缺失突变和定向位点突变证实Ser80为其磷酸化位点, 位于相对保守的aa 78～83序列内, 其中含有多种蛋白的识别序列, 目前是唯一明确的pORF3的磷酸化位点[2]。在pORF3的N末端有2个高度疏水的区域, 分别位于aa 16～32和aa 37～62 位, 聚丙烯酰胺凝胶电泳时发现pORF3可以形成二聚体, Korkaya H等推测该二聚体的形成可能与N端的疏水区有关, 但后续的酵母双杂交系统研究表明该二聚体位于pORF3的C末端 (aa 81～123) , 此区域包含1个较短的疏水区 (aa 84～95) 和2个富含Pro的区域 (aa 75～86, aa 104～113) 。pORF3通过自连形成二聚体或低聚体, 可能对自身的功能具有一定的影响。
2 pORF3与细胞的信号转导
促分裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 级联在哺乳动物中有3种类型的信号转导途径。其中, 细胞外信号调节蛋白激酶 (ERK) 与之构成的信号转导途径活化蛋白激酶和调节蛋白激酶, 主要负责介导并调控细胞的增殖和分化, 而且还能调控细胞的凋亡。pORF3经宿主表达之后, 广泛分布于细胞质、内质网和高尔基体。Korkaya H等发现磷酸化的pORF3可以与活化蛋白激酶和调节蛋白激酶细胞信号转导途径上的通路蛋白结合, 其中包括蛋白激酶Src、Hck、Fyn等, 从而参与细胞有丝分裂和细胞存活信号的转导。研究pORF3在细胞信号转导方面作用的另一个线索是脯氨酸区域的发现, Tyagi S等通过对pORF3的研究发现在pORF3的aa 75～86位和aa 104～113位, 存在2个多脯氨酸区域, 其中之一可以与SH3结构域结合, 该结构域作为Src、Hck、Fyn等蛋白激酶的共有部分, 是活化细胞表面与各种细胞内信号转导蛋白之间连接的桥梁。由于pORF3是SH3的配体, 因此推测pORF3也可能在信号转导中起到一定的作用。
3 pORF3与免疫抑制
Tyagi S等最近的研究表明, N端缺失的人ɑ1m微球蛋白/bikunin前提蛋白 (AMBP) 可以与pORF3发生特异性结合, 通过对完整的AMBP研究发现该前提蛋白可以加工成2个成熟的不相关蛋白ɑ1m和bikunin。ɑ1m主要位于肝脏和肾脏当中, 加工后的ɑ1m从肝细胞中释放出来, 抑制由抗原诱导引起的外周淋巴细胞的增殖, 中性粒细胞的迁移及由T淋巴细胞、B淋巴细胞引起的粒细胞的趋化等。当pORF3存在时能够促进ɑ1m蛋白从肝细胞中输出, 加强ɑ1m蛋白对免疫系统的抑制作用, 进而有利于戊型肝炎病毒在肝细胞中的存活。bikunin是一种Ser蛋白酶抑制剂, 从肝细胞中分泌出来之后稳定地存在于血液、尿液和其他组织当中, 能够阻碍肿瘤细胞的扩散, 抑制胰腺炎和关节炎。最近的研究表明, bikunin是与pORF3强烈作用的配体[3], 与pORF3的作用区域位于pORF3的C端 (aa 83～123) , 而不在磷酸化的位点, 但是该区域与pORF3的二聚体形成位点 (aa 81～123) 和pORF3与SH3的结合位点 (aa 77～113) 有重叠, pORF3与bikunin的结合抑制了bikunin对肿瘤细胞扩散的阻碍作用。
4 pORF3与戊型肝炎病毒颗粒的释放
研究表明, 戊型肝炎病毒感染宿主细胞之后先表达pORF3, 然后pORF3可以进一步激活MAPK和ERK的通路, 从而使得宿主细胞始终处于增殖、分化的状态, 而在病毒感染的后期才产生pORF2。Tyagi S等通过酵母双杂交及免疫荧光定位技术发现pORF3可以与非糖基化的pORF2结合, 进一步研究表明其结合位点在pORF3的aa 57～81位, 并且pORF3 Ser80的磷酸化和pORF2的非糖基化均对两者的结合有影响。Panteva M等[4]研究发现, pORF3与非糖基化的pORF2结合可以加速宿主细胞的死亡和成熟的戊型肝炎病毒颗粒的释放。
由此可见, 戊型肝炎作为一种新型的人畜共患病, 国内外对其研究尚不深入, 尽管在其疫苗研制当中取得了阶段性进展[5], 但对戊型肝炎病毒的致病机理知之甚少, 通过对pORF3功能的深入研究, 希望能为戊型肝炎病毒致病机理的研究和抗戊型肝炎病毒疫苗的合理设计开辟新的途径。
摘要：戊型肝炎是由戊型肝炎病毒感染引起的经肠道传播的人兽共患疾病, 文章就戊型肝炎病毒开放阅读框ORF3编码蛋白在细胞信号转导、病毒颗粒的释放及机体免疫抑制方面的功能研究进行了综述, 旨在为深入研究戊型肝炎病毒的致病机理及抗戊型肝炎病毒疫苗的开发提供参考。
关键词：戊型肝炎,ORF3蛋白,信号转导,免疫抑制
参考文献
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戊型肝炎病毒 篇6
1 资料与方法
1.1 一般资料
以本院2006年2月~2014年4月收治的174例急性散发性戊型病毒性肝炎患者作为研究对象。男147例, 女27例, 年龄17~84岁, 平均年龄 (47.2±14.8) 岁。纳入标准: (1) 符合临床诊断标准, 谷草转氨酶 (AST) 、ALT短期内升高正常上限2.5倍以上; (2) 病原学检测阳性; (3) 临床资料完整; (4) 未合并免疫性疾病; (5) 非哺乳期、妊娠期。按照是否合并HBV感染分为合并组35例和对照组139例。
1.2 方法
调取患者病历, 对其进行回顾性分析。
1.3 统计学方法
采用SPSS18.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差 (±s) 表示, 采用t检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 整体情况
急性散发性戊型病毒性肝炎分型:急性黄疸型152例, 急性非黄疸型17例, 急性重症肝炎1例, 亚急性肿胀肝炎3例, 慢性重症肝炎1例。合并症:自身免疫性肝病1例, 酒精性脂肪肝15例, 脂肪肝4例。并发症:腹腔积液14例, 肝性脑病1例。以纳差30例、乏力119例、尿黄114例、恶心呕吐91例为主要症状表现。
2.2 两组患者临床资料对比
对照组平均年龄 (53.3±14.2) 岁, 男129例, 急性黄疸型120例;合并组平均年龄 (46.5±11.5) 岁, 男21例, 急性黄疸型12例。两组患者年龄、急性散发性戊型病毒性肝炎分型差异具有统计学意义 (P<0.05) 。
2.3两组患者实验室指标水平比较
对照组:PT (12.8±0.32) s, PTA (88.4±11.5) %, AST (332±169) U/L, ALT (758±254) U/L, ALP (154±44) U/L, GGT (178±80) U/L, TP (64.2±7.4) g/L, ALB (34.1±6.3) g/L, GLB (28.9±6.5) g/L, DNA (3.53±1.55) ×104copy/ml, AFP (8.88±1.93) μg/ml。合并组:PT (13.9±0.36) s、PTA (72.3±11.6) %, AST (169±93) U/L, ALT (158±89) U/L, ALP (133±32) U/L, GGT (104±49) U/L, TP (61.3±7.5) g/L, ALB (30.13±6.4) g/L, GLB (30.1±7.0) g/L, DNA (5.14±1.83) ×104copy/ml, AFP (57.41±11.69) μg/ml。两组患者PT、PTA、ALT、GGT、TP、ALB比较, 差异均具有统计学意义 (P<0.05) 。
2.4两组患者预后情况比较
对照组肝衰竭8例, 死亡0例。合并组肝衰竭8例, 死亡2例。对照组肝衰竭率低于合并组, 差异具有统计学意义 (P<0.05) 。
3 讨论
我国是戊型肝炎高发国家, 虽无集中爆发, 但散发病数居高不下, 2010年统计在案戊型肝炎发病数23682例, 其中死亡24例, 发病例、死亡例呈逐渐上升趋势[2]。戊型肝炎多见于中年人, 本次研究也证实了这一点, 发病与原发肝病有关, 酒精肝、脂肪肝等肝病均可能增加感染风险, 同时老年患者发病率居高不下。流行病学研究显示, 不同年龄段戊型肝炎临床表现存在较大差异, 老年人以肝功能退行性表现为病理基础, 合并戊型肝炎感染, 以瘀胆为主要病理表现, 易被误诊为梗阻性黄疸, 而年轻人以肝病为主要影响因素, 发病时部分病情危重[3]。本次研究中性非黄疸型17例、急性重症肝炎1例、亚急性肿胀肝炎4例、慢性重症肝炎1例, 仅2例非黄疸型戊型肝炎为老年人, 提示中年人病理分型更复杂。
对比单纯戊型肝炎、合并HBV感染者, 结果显示年龄、急性散发性戊型病毒性肝炎分型、PT、PTA、ALT、GGT、TP、ALB水平、肝衰竭率比较, 差异具有统计学意义 (P<0.05) , 提示合并乙肝可致不同病理表现, 合并与年龄有关, 合并症年龄相对更轻, 可能与中年人合并原发肝病比重更高有关。中年人对自身健康意识缺乏足够的重视, 饮酒过量者比重相对较高, 肝负荷大, 加之接触人群复杂、工作压力大、饮食无规律者众多, 合并有潜在的肝病风险较高, 一旦爆发, 病情多较凶险[3]。
HBV感染是否会对HEV感染产生影响尚不明确定论, 但考虑并非所有HEV均有明显临床表现, 漏诊率相对较高, 合并有HBV可能加重症状表现, 促患者就医。研究显示合并组PTA低于对照组, PT高于对照组, 提示合并感染者肝负荷更重, 具体作用机制尚有待深入研究。考虑到HEV感染发生率远低于HBV, 在HBV感染中筛查HEV应成为公共卫生工作重点。
综上所述, 急性散发性戊型病毒性肝炎合并HBV感染率较高, 合并者急症重症比重较高, 肝功能严重受损, 预后相对较差, 应注意鉴别老年急性散发性戊型病毒性肝炎。
参考文献
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[2]李芳, 占国清, 郭鹏, 等.老年性散发性戊型肝炎临床特点分析.湖北医药学院学报, 2014, 33 (3) :258-259.
戊型肝炎病毒 篇7
关键词：戊型肝炎,疫情分析,疾病控制
0 引言
戊型病毒性肝炎 (以下简称戊肝) 是由戊型肝炎病毒引起的急性肠道传染病, 主要通过消化道感染传播, 病例以散发为主, 也可暴发流行。近10年来由于甲、乙肝疫苗的广泛接种, 甲、乙肝发病率呈下降趋势, 戊肝发病却呈上升趋势。为了解高邮市戊肝的发病趋势和流行特征, 为制定戊肝防控策略和措施提供科学依据, 本文对高邮市2005-2014年戊肝疫情资料进行统计分析。
1 材料与方法
(1) 资料。戊肝发病资料来源于国家传染病报告信息管理系统, 高邮市2005-2014年传染病疫情信息报告资料。人口资料来源于高邮市统计局。
(2) 方法。用Excel软件对数据进行整理统计, 运用描述性流行病学方法进行分析, 并依据国家传染病报告信息管理系统年度报表中的指标进行统计分析。
2 结果
2.1 病毒性肝炎疫情概况
高邮市2005-2014年肝炎发病及流行趋势统计分析如图1所示。
图1显示, 2005-2014年病毒性肝炎病例报告总数呈逐年下降趋势, 戊肝在各分型中总体上, 相对其它分型上升较为明显, 除2009年明显高于其他年份之外, 2005-2009年丙肝发病数呈逐年上升的趋势, 2010年以后呈逐年下降的趋势, 2014年戊肝病例数较2005年减少了41.30%。甲、乙肝以及未分型肝炎的病例数总体上呈现减少趋势。甲肝除2008, 2014年略高之外, 从2005-2014年呈现逐年平稳下降趋势, 2015年甲肝病例数较2004年减少了64.15%;其中除未分型肝炎2009年、乙肝2013年略高之外, 乙肝、未分型肝炎总体均呈现下降趋势, 且较为显著。2005-2014年丙肝发病处于低位平稳上升趋势。
2.2 戊肝发病情况
2005-2014年, 全市累计报告戊肝727例, 标化年均发病率9.13/10万。戊肝则明显上升, 年均增长速度达43.84%。戊肝在甲、乙、丙、丁、戊5型病毒性肝炎中所占比例平均为 (25.80%) 。戊肝所占比例及发病顺位2005-2009年逐年上升趋势明显, 2010-2014年呈逐年下降趋势 (见表1) 。
2.3 流行特征
2.3.1 时间分布
图2显示, 2005年、2014年戊肝在3~4月出现相对发病高峰 (戊肝占33.33%~45.65%) , 其他月份无明显高峰、低谷, 且随月份迁移发病数趋于平稳缓慢下降。
2.3.2 性别分布
男女均有发病, 以男性发病较多。2005年、2014年戊肝发病率男女性别比分别为4.89∶1, 3.07∶1。
2.3.3 年龄分布
戊肝相对高发年龄段:2005年在35~70岁, 2014年在45~70岁。年龄发病高峰都大致以各自的高发年龄段为界。2005年25-组、75-组、85-组分别发生1, 2, 1例, 2014年15-、30-、35-组各发生1例, 其余各年龄段均无病例 (见图3) 。
2.3.4 职业分布
发病的前3位职业分布主要集中在农民、工人、民工, 其中农民的戊肝发病数占比例均在80%以上;戊肝的前3位职业分布的发病数占比例均在92%以上 (见表2) 。
3 讨论
对2005-2014年病毒性肝炎统计分析结果显示, 高邮市的甲、乙型及未分型病毒性肝炎发病率逐年下降, 戊型病毒性肝炎发病率高于其他分型, 且有上升趋势。从各型肝炎统计来看, 甲、乙肝病例逐年减少, 原因可能有: (1) 防制知识宣传覆盖面广, 增强人群对于病毒性肝炎自我防护意识, 减少自我暴露的机会。 (2) 甲乙肝免疫水平提高。实行新生儿乙肝疫苗免费接种, 以及在成人中开展乙肝疫苗接种和母婴“乙肝阻断行动”。我市从1994年起每年开展对重点人群肝炎“压春峰”“压秋峰”行动, 每年春节对全市外出务工人员、秋季对全市小学一年级及初中一年级学生实施甲肝疫加强免疫, 在重点人群中建立了牢固的免疫屏障。我省从2008年5月1日起将甲肝疫苗免费接种纳入到扩大免疫规划, 接种率大幅度提高。 (3) 农村改水改厕。高邮市居民消毒净化自来水普及率100%, 逐年推进农村三格式无害化户厕项目。 (4) 开展无偿献血活动。安全用血, 强化打击非法行医及非法采供血。近10年来, 丙肝发病数有平稳上升趋势, 详细原因待查, 可能原因有:医疗机构院内感控制不严格。群众自我保健意识增强健康体检人员大幅增加, 集中查出了一些既往感染的慢性丙肝病例。未分型肝炎病例急剧减少, 一是检测技术的提高使肝炎分型率上升, 二是我市近年来疾控部门对病毒性肝炎分型监测考核要求提高, 复核实验室诊断核实后的未分型肝炎, 减少肝炎未分型的临床诊断率。
2005年以来, 戊肝报告病例数逐年上升, 甲肝发病率逐年下降, 2006年以后戊肝报告病例数超过甲肝。甲肝、戊肝均是粪—口途径的肠道传染病, 但发病趋势截然相反。戊肝在病毒性肝炎中发病顺位前移, 这与国内及省内多数地区的分析报道基本一致[1,2]。影响甲、戊肝发病率的因素与人群免疫水平、个人卫生意识、环境卫生条件等有关。原因主要有: (1) 甲肝疫苗接种工作富有成效, 群体免疫水平高, 接种工作力度大, 开展时间长。而戊肝疫苗虽已上市, 但由于需要接种3针次, 且免疫人群为16周岁以上人群, 价格较昂贵, 完成全程免疫需花半年时间, 群众自觉自愿接种的依从性较差, 目前在我市尚未得到有效推广使用。 (2) 戊肝免疫水平低, 由于我市经济发展的需要, 外来人口大量流入, 而人群对戊肝普遍缺乏免疫力, 导致戊肝感染机率加大。 (3) 检测技术发展和检测水平提高, 戊肝实验室诊断比例提高[3], 导致该病发病率上升。 (4) 与甲、戊肝病毒理化特性、病原特点不同有关。甲肝的水源和食用海水产品传播途径得到有效控制。文献报道, 戊肝感染在国内外的猪、鸡等群中普遍存在, 其感染戊肝后多为隐性感染, 容易被忽视, 且又是与人类生活接触较密切的猪、鸡等动物宿主, 通过加工、屠宰过程感染人类[4,5]。感染机率较高的途径是家庭食品加工中生熟不分[6]。
戊肝发病高峰显著分布在3~4月份, 综合以农民职业分布为主来分析, 与春节前后农村自办家宴有较大关系。农村居民食品卫生安全意识差, 普遍易感, 因此建议: (1) 开展形式多样、群众乐于接受的农村健康教育, 养成良好的个人卫生习惯和饮食习惯。 (2) 加强农村自办家宴管理, 加强卫生监督巡查力度, 并按自办家宴管理办法, 加强指导和严格管理。 (3) 严格执行家宴申报制度, 准确、及时地掌握基本情况及疫情动态, 建立健全防治预案, 及时、科学、规范地处置散发疫情。 (4) 加强疫苗研发工作, 合理定价, 推广苗接种工作。 (5) 继续推进农村改水改厕项目工作。
戊肝年龄分布以中老年为主。其主要原因可能有: (1) 国家层经济状况改善, 人口的老龄化, 中老年人口占比较以往增加。 (2) 家庭层面经济条件提高, 家庭成员中年轻的独生子女, 文化程度受教育水平相对较以前提高, 对健康饮食、卫生安全等重视程度较高。 (3) 中老年人预防意识不高、体质变弱, 感染发病机率上升, 以50岁以上发病年龄段为主, 有明显老年化的趋势。
戊肝的职业分布以农民为主, 近10年来有增加趋势。基于戊肝防控工作的职业群体的针对性, 尤其是戊肝疫情的较快上升, 要加强对相应重点人群防控策略的制定和实施。戊肝发病男性明显高于女性, 提示随年龄的增长, 男女接触感染机会不同, 这跟男性的社会活动、生活饮食习惯、劳动强度、体质变化有关。
高邮市戊肝发病有逐年升高的趋势, 在抓好甲、乙肝防治工作的同时, 应加强对戊肝的综合防制措施。由于戊肝疫苗尚未普遍推广使用, 应强化落实对传染源管理、卫生监督巡查协管、改水改厕和健康教育等综合防控措施, 控制传染源, 切断传播途径, 以中老年农民、工人、民工以及食品生产加工经营人员为重点人群, 推广使用高效戊肝诊断试剂, 认真开展疫情监测工作, 加强对戊肝病人检索和监测, 以便早发现、早治疗、早开展防控措施, 防止戊肝疫情的蔓延和暴发。同时对戊肝传播方式、防控措施应进一步研究并广泛开展宣传。
参考文献
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猪戊型肝炎研究进展 篇8
戊型肝炎病毒是1982年发现的一种新型肝炎病毒[1], 当时称为肠道传播的非甲非乙型肝炎病毒, 1989年正式命名为Hepatitis E virus (HEV) 。戊型肝炎病毒主要经粪—口传播, 能够感染人、猪、野猪、鸡、鸟、鼠、猫等多种动物, 表明人畜是该病毒的共同宿主。美国学者在1997年发现了第一株猪戊型肝炎病毒[2], 发现其与人的戊型肝炎病毒有很高同源性, 并可感染黑猩猩和恒河猴, 并首次证实了该病毒存在种间传播方式[3]。之后一些发达国家及印度等发展中国家相继有猪戊型肝炎感染的相关报道, 但主要爆发和流行于发展中国家, 散发病例呈世界性分布, 对其研究具有十分重要的公共卫生意义。
1 流行情况
世界上第一次戊型肝炎的暴发应该在1955年印度的德里地区, 是由于自来水源污染引起, 共29万人感染[4]。从此, 戊型肝炎的暴发时有发生。1957年前苏联吉尔吉斯, 约10 000人感染;1978~1982年, 印度喀什米尔52 000人感染;1991年印度米尔共52 000人感染;1991年印度坎普尔约有79 000人发病等[3]。我国新疆南部地区在1986~1988年发生戊型肝炎大流行, 导致119 280人发病, 707人死亡。我国卫生部门公布2005~2009年中国甲乙丙类传染病疫情报告表明, 近5年来戊型肝炎在急性病毒性肝炎感染中所占比例有稳步上升趋势, 到2009年3月底戊型肝炎占病毒性肝炎的25%, 而相应的甲型肝炎所占比例呈下降趋势, 这是一个新的流行的特点。调查发现, 20岁以上的人群易感, 20岁以下感染率很低, 有报告表明只有1%左右[5], 男性的感染率和发病率高于女性。患戊型肝炎的成年人死亡率达0.5%~3%, 孕妇高达15%~20%[6]。且与猪接触的职业人群血清抗戊型肝炎病毒抗体高于非职业人群。
猪戊型肝炎病毒在世界各地猪群中均有存在, 我国猪的HEV感染率较高, 葛胜祥等[7]检测我国不同地区的8 626头商品猪, 抗体阳性的7 191只, 总阳性率达83.4%。不同地区阳性率有所不同, 阳性率最高的地区为内蒙古 (100%) 和重庆 (99%) ;华东地区高达88.7%, 其中上海为85.4%;华中地区阳性率较低 (77.2%) ;其中湖北68%和湖南73.3%。Li等[8]对北京的猪HEV感染情况进行了调查, 结果表明北京地区的猪HEV感染率很高, 北京郊区猪HEV的平均感染率为47.5%~100%。
2 病原特征
戊型肝炎病毒 (HEV) 是一种无囊膜的病毒, 为球形颗粒。直径为27~34 nm, 表面呈尖刺和锯刺状, 呈现两种不同形态, 即一种内部致密, 为完整的病毒颗粒, 另一种内部含电荷透亮区, 为不含完整基因的病毒颗粒。HEV不稳定, 对高盐、氯化铯、氯仿敏感, 对高热敏感, 猪肉制品油煎5 min或煮沸5 min都可以完全杀灭。目前随着HEV不断被分离、克隆和鉴定, 经核苷酸同源性、氨基酸同源性的大小及系统进化树分析, 将HEV分为8个基因型。对不同基因型研究后发现:不同基因型之间基因的同源性差异较大, 来自同一地区的分离株核苷酸序列相对保守;同一地区可以存在2种及2种以上的基因型;同一基因型可以在不同地域分布;而且不同基因型的毒株在氨基酸水平上相对保守, 从而表明HEV只存在一个血清型。其中基因I型在世界范围内广泛流行, 曾被认为只在人群中流行, 但在2006年有研究报道在柬埔寨的猪粪中检测到基因I型HEV的RNA[9], 但其确切情况还需进一步证实。基因III型和基因IV被认为是人畜共患病病原。基因IV型在1993年首先在我国人群中被发现, 而且是我国猪场中存在的主要基因型, 从我国甘肃、北京、辽宁、广州、厦门等地都曾分离到。基因III型于2006年首先在上海地区猪场中被检测到[10], 基因序列分析显示上海存在的III型HEV与流行于美国的US1和US2等毒株的遗传关系最近, 表明我国III型HEV可能是随进口从美国或欧洲发达国家引入。迄今为止我国境内存在I、III、IV三个基因型的HEV。
不同HEV基因型具有相似的结构, 基因组长约7.5kb, 含有3个互相重叠的ORF, 分别为ORF1、ORF2、ORF3。ORF1和ORF2是HEV两个重要的读码框, 占全基因的95%以上。ORF1长约5kb主要编码与病毒复制有关的非结构蛋白[11], 核苷酸序列变化最大, 其高变区的长度在不同HEV病毒株中有所不同。ORF2是主要的结构基因编码区, 长约2kb, 其核苷酸序列最保守, 其中与ORF3重叠的部分是ORF2中最保守的部分, 但编码的氨基酸序列变异最大, 可能是由于此区的核苷酸折叠形成较强的RNA次级结构, 从而抑制了核苷酸序列的变异。不同基因型和亚型HEV的ORF2编码的蛋白上存在多种类型抗原表位, 这些表位与天然HEV颗粒上的抗原表位具有相同的免疫学特征。ORF2表达的蛋白因其具有良好的抗原性是目前公认的最有应用前景的亚单位候选疫苗, 有许多ORF2基因或其片段在不同细胞中成功的进行了表达, 且其表达产物均具有良好的免疫原性。ORF3编码磷酸化蛋白, 目前为止还不是很清楚其主要功能。但一些学者认为ORF3与戊肝病毒基因型有密切关系。目前的研究表明, 在HEV ORF1上有12个抗原表位 (尤其在RNA聚合酶区域) , ORF2蛋白上有6个抗原表位, ORF3蛋白上有3个抗原表位, 这些为免疫和诊断方法的建立奠定了基础。
3 人HEV与猪HEV的关系
猪HEV与人HEV相似, 都包括5', 3'非结构区及三个ORF。种系进化分析表明, 猪HEV与人HEV同源性很高, 而且也随地区的不同而呈现出不同的同源性, 美国分离到的猪HEV与2株美国人HEV高度同源, 在核苷酸和氨基酸水平上分别有92%~93%、99%~100%的同源性。Hsieh等[12]基于台湾猪HEV研究发现, 其与台湾人HEV的核苷酸同源性为97.3%。研究证明我国猪与人源HEV的同源性很高, 达到89%~100%, 且都为基因4型[13]。有报道称2007年从猪分离的基因4型HEV的ORF2片段基因序列与日本人源的HE-JK4株同源性达90%;与一个中国基因4型的分离株的同源性为88.7。表明对基因4型HEV来说, 人猪之间以日本人源的HE-JK4株同源性最大, 达90%;与一个中国基因4型的分离株 (CCC220) 的同源性略低, 为88.7%[14]。以上事实说明对基因4型来说, 人猪之间已没有大的差异, 而且地域差异较小。基因3型在我国尚未发现人感染, 可能与现阶段分析的样品不够多, 调查范围还不够大有关。
4 诊断与防控
4.1 免疫学诊断
猪自身感染HEV无明显的肝炎临床症状, 对猪HEV感染的诊断要通过实验室手段来检验。而且猪HEV和人的HEV在遗传学上没有太大差异, 因此用于人HEV的诊断方法也适用于猪HEV的诊断。酶联免疫吸附试验:该方法是目前用于检测血清HEV抗体最常用的一种方法, 检测的血清抗体主要是Ig G、Ig M和Ig A。其中以间接ELISA用途最广。Ig G抗体的检测比较常用, Ig M抗体的检测可以区分是新近感染还是既往感染复发。Chau等于1993年首次提出用ELISA检测Ig A抗体, 作者认为这种方法可作为Ig M诊断的确诊手段。常用的用于检测HEV的抗原主要是ORF2的表达抗原, ORF3的表达抗原及同时含有ORF2和ORF3编码的重组表达抗原。此外应用联合单克
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隆抗体建立的间接ELISA也可用于HEV血清抗原的检测[15]。这种检测抗原的ELISA方法可检测HEV的衣壳蛋白, 而且实验表明, 在HE发展期检测抗原的效果要优于检测抗体。
4.2 分子生物学诊断方法
RT-PCR检测HEV病毒的RNA, 由两步或三步组成。该方法存在着易被污染, 不能确定病毒量和费时的缺点。目前快速且敏感性高的实时定量RT-PCR可以应用于临床病样的HEV-RNA的检测[16]。在人类患急性HE的血清和粪样及家猪病料和其他动物病料, 如野猪、猴、鸡的病料都可以用RT-PCR检测HEV-RNA, 同样也可以检测被HEV污染的水源。HEV RNA在感染后6~40 d均可检测到, 并且出现的时间要早于ALT水平的升高及抗体的出现[17]。值得关注的是这种方法不但可以检测出HEV的感染, 而且可以对HEV RNA进行基因的分型, 有利于流行病学的追踪、分布研究, 是今后发展HEV检测的重要方向。
4.3 猪HEV的防控