食管磷状细胞癌（共6篇）
食管磷状细胞癌 篇1
我院自1999年1月-2008年6月, 在电子胃镜检查中使用了细胞刷片检查 (下称刷片) , 或与活组织病理检查 (下称病检) 联合使用 (下称两检) , 明显地提高了上消化道癌肿的检出率。通过细胞刷片检查, 还发现了3例早期胃癌和2例早期食管癌。现将结果报告如下。
1 资料与方法
1.1 资料来源
在所有统计的年度内, 通过胃镜检查, 经刷检和两检而诊断的上消化道癌共652例, 其中食管癌275例, 贲门癌117例, 胃癌260例。
1.2 方法
在电子胃镜直视下, 使用刷擦法。即从内镜活检钳孔送入细胞刷, 将刷子头部插到癌性变或可疑病灶部位, 在病灶及其周围进行擦拭, 然后将细胞刷先退回到活检钳孔出口处, 与胃镜一齐拔出, 从细胞刷的不同部位, 将取得的材料涂在载玻片上, 每次涂片4张, 不待干燥迅速置固定液内, 然后进行HE染色。
阴性:刷片中为正常之鳞状或柱状上皮, 以及一些轻度核异质细胞。
2 结果
本组经刷检及病检联合使用671例, 单做刷检35例。其中刷检阳性631例 (96.78%) , 病检阳性532例 (86.22%) , 两检均阳性512例 (78.53%) , 单做刷检阳性34例 (7.14%) , 两检不相符99例, 其中有94例经再次病检或手术后证实为癌肿的91例, 见表1。
由表1可见, 食管癌275例, 刷检阳性267例 (97.09%) , 贲门癌117例, 刷检阳性114例 (97.44%) , 胃癌260例, 刷检阳性250例 (96.15%) 。大部分患者在我院行手术切除, 术后病理检查, 发现其中属早期食管癌2例, 早期胃癌3例。
3 讨论
本文结果表明, 刷检阳性符合率显著高于单独病检。本组刷检阳性率达96.78%, 病检阳性率为86.22%, 刷检与病检联合使用可明显提高食管癌、贲门癌和胃癌的检出率。一是临床上常遇到内镜诊断为癌, 而病检没有取到癌组织, 这可能由于病变部位有出血, 造成钳取组织时观察不清。二是由于钳子较小, 钳取的组织过小, 易造成钳取错误。三是由于可屈型器械有时压力太轻, 当病理改变仅以正切位看到时, 活检钳溜滑而难以钳取到所需要组织。所以在这些情况下活检阴性也不能排除肿瘤的存在。而胃镜下刷检, 能从每一个部位对准目标, 与点状活检相反, 刷检容易取自较大面积的病灶, 得到大片区域的标本, 对溃疡及浅表扩散性病变最为相宜。食管下端-贲门部癌发病率高, 黏膜面积远比胃腔小, 刷检时不易遗漏, 安全简便。在活检困难或不可能活检的食管狭窄患者, 刷检细胞学检查就成为特别重要的手段。有时在内镜检查直视诊断癌无疑时, 由于病灶面积大、出血多、溃疡深, 为取得手术依据及减少活检并发症, 往往不做病检而单做刷片。本组35例, 仅有1例不能确诊。刷检也可提高早期癌的检出率, 本组检出的3例早期胃癌中有2例在内镜下仅见小区域黏膜糜烂渗出, 内镜诊断为糜烂出血性胃炎。病检1例为中度慢性浅表性胃炎, 小区域黏膜腺上皮有轻～中度不典型增生;另1例为中度慢性浅表性胃炎。但以上2例刷检均为阳性, 经手术切除病灶, 病理诊断均为黏膜内腺癌。临床实践证实, 部分病检阴性的病例, 在细胞刷片中查到了肯定的癌细胞。可以认为, 刷检不仅能获得黏膜及黏膜下的癌细胞, 而且可以获得黏膜表面及混入黏液、血液和坏死组织中的癌细胞, 所以阳性率较高。
在刷检中有时会出现假阴性, 则可能由于细胞刷没有紧贴病灶, 擦刷抽动时仅刷到病灶表面炎性坏死组织。刷检和病检联合应用可取长补短, 避免漏诊。而且刷检具有操作简便、快速省时、安全经济、不显著延长内镜检查时间、不增加并发症等优点, 尤其是基层无病理检查的单位, 细胞刷片可起到快速诊断的作用, 为及时治疗提供了依据。
食管磷状细胞癌 篇2
1 对象与方法
1.1 对象
选择扬州大学第六附属医院 (泰兴人民医院) 2011年2月至2012年6月期间的食管鳞癌住院患者90例, 男57例, 女33例;年龄43~76岁, 平均63岁。排除可能影响肿瘤标志物水平的其他疾病与因素。所有患者入组时均为未经治疗的、经胃镜病理明确诊断为食管鳞癌。通过对该类患者的随访 (无论是手术、放疗、化疗) , 体检, 复查胸腹部CT、ECT等, 确认45例为淋巴结转移和 (或) 远处转移 (肝脏、骨、肾上腺转移等) 。选择本院健康体检者45例作为对照组, 其中男23例, 女22例;年龄45~70岁, 平均55岁。所有研究对象均为泰兴户籍, 在泰兴地区居住20年以上。
1.2 方法
对照组体检者, 初次诊断为食管鳞癌的患者, 体检和 (或) CT、MRI等提示淋巴结转移和 (或) 远处转移即病情进展者均空腹采集外周静脉血3 ml, 血液凝固后4 000 r·min-1离心15 min分离血清, 采用电化学发光法分别进行CYFRA21-1与CEA质量浓度检测。
1.3 仪器与试剂实验
选用罗氏ELECSYS 2010全自动电化学发光免疫分析系统, CYFRA21-1与CEA检测配套试剂由罗氏公司提供。CYFRA21-1参考临界值为3.3μg·L-1, >3.3μg·L-1为阳性。CEA参考临界值为10μg·L-1, >10μg·L-1为阳性。
1.4 统计学处理
采用SPSS 17.0统计软件建立数据库并进行统计分析。CYFRA21-1和CEA质量浓度在对照组与食管癌组、食管癌淋巴结转移和 (或) 远处转移组的均数比较采用t检验, 比较CYFRA21-1与CEA在初次诊断时及出现进展时阳性率的差异采用χ2检验, P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 对照组与食管癌组血清CYFRA21-1与CEA质量浓度
初次诊断为食管鳞癌的患者CYFRA21-1和CEA质量浓度明显高于对照组[分别为 (3.81±1.7) μg·L-1比 (1.15±0.68) μg·L-1, (7.36±3.5) μg·L-1比 (1.34±0.65) μg·L-1, 均P<0.05]。食管鱗癌进展组血清中CYFRA21-1和CEA质量浓度高于初次诊断时的质量浓度[分别为 (4.93±0.83) μg·L-1比 (2.04±0.29) μg·L-1, (16±2.96) μg·L-1比 (7.55±1.23) μg·L-1], 差异有统计学意义 (均P<0.05) 。
2.2 初次诊断时CYFRA21-1、CEA检测结果
90例食管鳞癌患者初次诊断时CYFRA21-1共检出51例阳性 (其中CEA阳性10例, 阴性41例) , 血清CEA共检出18例阳性 (其中CYFRA21-1阳性13例, 阴性5例) 。食管癌患者CYFRA21-1阳性率 (56.7%, 51/90) 高于CEA (20.0%, 18/90) , 差异有统计学意义 (χ2=25.59, P<0.01) 。
2.3 食管癌进展时患者的血清CYFRA21-1、CEA检测结果
45例食管癌患者出现病情进展[淋巴结转移和 (或) 远处转移]时血清CYFRA21-1共检出32例阳性 (其中CEA阳性12例, 阴性20例) , 血清CEA共检出12例阳性 (其中CYFRA21-1阳性8例, 阴性4例) 。食管癌进展组CYFRA21-1阳性率为71.1% (32/45) 高于CEA的26.7% (12/45) , 差异有统计学意义 (χ2=17.79, P<0.01) 。
3 讨论
食管癌是发生在食管上皮组织的恶性肿瘤, 目前尚无统一的监测食管癌预后及疗效的肿瘤标志物。我国是食管癌高发区, 其中大部分经病理证实为食管鳞状细胞癌, 而欧美国家的食管癌大多为食管腺癌, 因此在诊断和治疗方面不能完全照搬美国国家综合癌症网络 (NCCN) 指南。食管癌在我国有明显的地理聚集现象, 高发病率及高病死率地区相对集中, 江苏泰兴地区是我国食管癌高发地之一。目前认为, CEA广泛存在于内胚叶起源的消化系统癌中, 如胃癌、大肠癌、肝癌、胰腺癌等。有研究表明, CEA可作为食管癌诊断的辅助指标, 但经过本次试验临床实践检测, CEA在食管癌中的阳性比例相当低 (约20%) , 临床上一般作为联合检测的指标之一[5]。细胞角蛋白是构成上皮细胞内细胞骨架的中间纤丝类蛋白质, CYFRA21-1为CK19的可溶性片段, 在恶性上皮肿瘤中, 激活的蛋白酶加速了细胞的降解, 使大量可溶性的CK19片段释放, 造成组织液、体液中可溶性的CK19片段浓度升高。早在1997年就有报道认为, CYFRA21-1是食管鳞癌的有效的肿瘤标志物[4], 但近来研究较多的是其与非小细胞肺癌的关系[1,2,3]。
血清肿瘤标志物水平的动态变化和肿瘤病情有明显的相关性。肿瘤经过各种手段治疗后, 血液中肿瘤标志物水平下降, 是肿瘤好转的标志。本研究表明, 泰兴地区食管鳞癌患者CYFRA21-1和CEA在病情进展后明显高于初次诊断时以及对照组的水平, 且CYFRA21-1阳性表达率比CEA高得多。联合检测CYFRA21-1、CEA对食管鳞癌患者具有更好的诊断和预后判断价值[6,7]。
本研究观察到90例食管鳞癌患者初次诊断时和病情进展后血清CYFRA21-1阳性率均比CEA高, 说明血清CYFRA21-1对于食管鳞状细胞癌的诊断和预后判断都有一定的参考价值, 明显优于血清CEA。这并非我们独有的发现。Yamamoto等[4]研究了6株体外培养的食管上皮细胞和48例食管癌患者CYFRA21-1水平发现, 6个细胞株中5株的细胞质中都有细胞角蛋白19的表达, 并产生了可溶性的细胞角蛋白19片段;48例患者中有23例血清CYFRA21-1阳性, 对照发现CYFRA21-1阳性检出率明显高于鳞状细胞癌抗原 (SCCA) 、CEA, 表明其敏感性优于SCCA、CEA。在食管鳞状细胞癌患者的研究中, Kawaguchi等[8]对随访患者血清CYFRA21-1检测发现, 76.9%的肿瘤复发患者CYFRA21-1升高, 而69.2%的CYFRA21-1升高时间早于临床及X线表现1~13个月。Banki等[9]发现, CEA检测复发食管癌患者的敏感性为33%, 只有17%复发食管癌患者在有临床症状前CEA升高。本组食管癌进展组患者血清CYFRA21-1阳性率明显高于血清CEA的阳性率, 其升高越明显, 局部淋巴结转移和远处转移的发生率越高, 且进展后患者血清的CYFRA21-1水平较初次诊断时均有不同程度升高。
迄今为止, 对于食管癌的诊断、疗效评估和判断复发, 尚无标准的敏感性和特异性均优的肿瘤标志物。一方面, 我们要联合多种标志物一同检测, 提高肿瘤诊断的准确性;另一方面, 我们要通过临床实践, 寻找相对有效及敏感性高的标志物。通过本次研究, 我们发现, 在泰兴地区食管鳞癌患者中血清CYFRA21-1质量浓度高于正常者, 阳性率较CEA要高, 对于该类患者的诊断及预后判断具有重要的临床应用价值, 但是目前该地区在食管鳞癌的诊治中, 还未常规开展血清CYFRA21-1的检测。根据本次研究, 建议将血清CYFRA21-1作为食管鳞癌诊断及预后判断的标志物之一, 为CYFRA21-1的实际应用价值提供循证医学的证据, 以进一步提高食管癌的诊疗水平。另外, 食管癌分子靶向治疗是当前的研究热点[10]。本研究证实血清CYFRA21-1在食管鳞癌患者中水平随着病情进展而升高, 可进一步研究表达该蛋白的细胞信号通路, 在控制点进行阻断, 进而达到控制食管癌病情进展的目的。
摘要：目的:探讨细胞角蛋白19片段 (CYFRA21-1) 在食管鳞状细胞癌诊断中的应用价值。方法:采用电化学发光法分别检测健康对照组 (45例) 和初次诊断食管鳞状细胞癌患者 (90例) 血清中CYFRA21-1和癌胚抗原 (CEA) 质量浓度, 并对患者进行随访, 出现淋巴结转移和 (或) 远处转移者再次检测血清中CYFRA21-1和CEA质量的浓度。结果:食管磷状细胞癌组CYFRA21-1和CEA质量浓度明显高于对照组[分别为 (3.81±1.7) μg·L-1比 (1.15±0.68) μg·L-1, (7.36±3.5) μg·L-1比 (1.34±0.65) μg·L-1, 均P<0.05]。食管磷状细胞癌组出现淋巴结转移和 (或) 远处转移者CYFRA21-1和CEA质量浓度高于初次诊断时[分别为 (4.93±0.83) μg·L-1比 (2.04±0.29) μg·L-1, (16±2.96) μg·L-1比 (7.55±1.23) μg·L-1], 差异具有统计学意义 (均P<0.05) 。初次诊断食管鳞癌患者CYFRA21-1阳性率 (56.7%, 51/90) 高于CEA (20.0%, 18/90) , 差异有统计学意义 (χ2=25.59, P<0.01) ;出现淋巴结转移和远处转移的患者CYFRA21-1阳性率 (71.1%, 32/45) 高于CEA (26.7%, 12/45) , 差异有统计学意义 (χ2=17.79, P<0.01) 。结论:血清CYFRA21-1对食管鳞状细胞癌诊断和判断预后方面比CEA更优。
关键词：食管鳞状细胞癌,细胞角蛋白19片段,癌胚抗原
参考文献
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食管磷状细胞癌 篇3
关键词：胃肠间质瘤,食管,鳞状细胞癌,临床病理,免疫组织化学
胃肠间质瘤 (gastrointestinal stromal tumor, GIST) 是胃肠道最常见的间叶源性肿瘤, 由突变的c-kit或血小板源性生长因子受体α (PDGFRA) 基因驱动;在分化上具有Cajal间质细胞的表型特征;组织学上多由梭形细胞、上皮细胞、偶或多形性细胞, 排列成束状或弥漫状图像。GIST可以与各种肿瘤同时存在, 如胃癌、淋巴瘤等[1]。本文收集16例胃肠间质瘤合并食管鳞状细胞癌的病例, 进行临床、组织病理及免疫组化特征分析。现报道如下:
1 资料与方法
1.1 病例来源
收集南昌大学第一附属医院病理科2007年9月1日~2013年9月经手术切除的551例GIST, 其中有16例GIST同时伴有食管鳞状细胞癌。所有病例的病理切片均经2位高年资病理科医师阅片复诊。GIST的诊断标准参照2009年版“中国胃肠间质瘤诊断治疗共识”的病理诊断依据。
1.2 资料收集
收集包括患者年龄、性别、主要症状、术前胃镜、影像学检查结果。食管鳞状细胞癌及胃肠GIST的大体标本、HE片、免疫组织化学染色等病理资料。胃GIST根据2008年版美国国家卫生署 (National Institutes of Health, NIH) 危险度分级标准, 对术后患者进行风险分级。
1.3 组织病理学及免疫组织化学检查
所有标本均经4%中性甲醛固定、常规脱水、石蜡包埋、切片、HE染色、镜下观察。行免疫组织化学SP法检测。
1.4 随访
术后通过电话进行随访, 16例患者均获得随访资料。中位随访41个月 (3~72个月) , 3例死亡。
2 结果
2.1 临床特征
胃肠间质瘤同时性食管鳞状细胞癌发病率为2.9%。本组16例患者中男12例, 女4例;年龄54~77岁, 中位年龄63岁;主诉进行性吞咽困难14例, 腹胀1例, 胸骨后疼痛1例。均无胃肠间质瘤家族史。病程20 d~1年。按照2009年第7版UICC/AJCC食管癌的TNM分期标准, Ⅰ期3例, Ⅱ期5例, Ⅲ期8例, Ⅳ期0例。
2.2 病理组织学特点
胃间质瘤病灶大小0.3~2.5 cm, 平均0.8 cm, 位于胃壁13例, 贲门3例。根据2008版NIH标准进行风险分级, 极低风险12例 (75.0%) , 低度风险4例 (25.0%) , 中度及高度风险均为0。术前及术中诊断均为0例, 术后诊断16例。食管癌病灶位于食管上段4例, 食管中段9例, 食管下段3例。鳞状细胞癌Ⅰ级3例, Ⅱ级8例, Ⅲ级5例。
2.3 免疫组织化学特点
所有病例的GIST肿瘤组织均表达CD34和DOG-1。14例表达CD117, 2例CD117阴性的病例, 均表达DOG-1。16例SMA、S100、Des均为阴性。见附图。
A:GIST中CD34表达阳性;B:GIST中DOG-1表达阳性;C:GIST中CD117表达阳性;D:GIST中SMA表达阴性;E:GIST中S100表达阴性;F:GIST中Des表达阴性。
3 讨论
胃肠间质瘤是一种少见的胃肠道间质肿瘤, 每年发病率为1.5/10万[2]。GIST同时伴发第二肿瘤非常少见, 发病率约为4.5%~33.0%, 平均13.0%;以个例报道为主, 胃肠道腺癌最多, 其次还有血液肿瘤, 类癌, 黑色素瘤, 软组织肿瘤, 乳腺癌, 肾癌, 前列腺癌、女性生殖器官、胆囊癌及肺癌[1,3,4]。本文为国内第一篇单纯报道胃肠间质瘤同时性食管鳞状细胞癌, 发病率为2.9%, 且均为术后病理发现。波兰胃肠间质瘤临床登记中心显示, 10.0%的胃肠间质瘤病人会伴发第二肿瘤[5]。AU等在74例GIST病例中, 31例 (41.0%) 诊断第二原发肿瘤[6]。与文献报道相比, 本组GIST同时伴发食管鳞状细胞癌的发病率较低, 分析其原因, 如下:①本文仅统计GIST伴发食管鳞状细胞癌, 排除了同时伴发的其他肿瘤, 如:胃肠道肿瘤;②90%的病人以进行性吞咽困难就诊, 临床医生首先考虑食管癌, 主要进行食管癌相关方面的检查, 从而忽略了胃肠间质瘤的检查;③本组病例, 间质瘤均较小, 平均直径0.8 cm, 都是在术中偶然发现, 术后病理确诊, 病灶以胃壁结节为主。如果术前未考虑到本病, 术中容易忽略探查;④食管癌手术时, 对于胃周小肿块, 在考虑小的转移灶同时, 还要考虑小的间质瘤病灶。由于以上原因, 病变的实际发病率也许被低估了。
尽管关于GIST的分子生物学研究在过去的10年有很大的进展, 但是对于GIST同时性不同组织来源的恶性肿瘤的发生机制, 没有确切的解释。越来越多的学者认为它们的发生绝非偶然。有观点认为是相同的致癌因素导致了两种类型肿瘤的同时发生。将小鼠同时暴露于亚硝胍和乙酰水杨酸, 可以导致小鼠同时发生胃癌及胃平滑肌肉瘤[7]。分子生物学的研究提示, 位于人类1q13染色体的一种肿瘤抑癌基因与头颈部鳞癌、GIST和恶性黑色素瘤相关[8]。从饮食方面来说, 亚硝酸类物质在食管癌的发生发展中起重要作用。SESHADRI等认为共同的饮食致癌物可能与消化系统的上皮癌及间质肿瘤的同时发生有关[9]。因此, 关于GIST同时性恶性肿瘤的发病机制, 还有待于分子生物学的进一步研究。
胃肠道间质肿瘤的免疫组织化学的诊断特征是细胞表面抗原CD117 (KIT蛋白) 阳性, CD117在胃肠道间质肿瘤的细胞表面和细胞浆内广泛表达, 而在所有非胃肠道间质肿瘤的肿瘤细胞内均不表达, CD117的高灵敏性和特异性使得它一直是胃肠道间质肿瘤的确诊指标。DOG-1 (discovered on Gist1) 是一种膜蛋白, 在GIST细胞及其前体细胞卡哈尔细胞中存在特异性的高表达。对于CD117阴性的病例, DOG-1阳性可以提高诊断率[10]。因此, 临床常将两者联合应用。文献报道, GIST中免疫组化检测CD117阳性率为95.0%, DOG-1阳性率98.0%, CD34阳性率70.0%, a-SMA阳性率40.0%, S100蛋白阳性率5.0%, 以及Desmin阳性率2.0%[11]。本组病例CD117阳性率87.5%, DOG-1、CD34阳性率均为100%, SMA、S100、Des均为阴性。2例CD117阴性的病例, 其DOG-1均为阳性, 与文献报道一致。
ABBAS AGAIMY等分析同时伴发第二肿瘤的235例间质瘤病例, 发现73.0%的病例为小于5 cm及低度分裂活性, 仅27.0%为中等或高风险[1]。本文的16例GIST病例极低风险12例 (75.0%) , 低度风险4例 (25.0%) , 中度及高度风险均为0例。食管癌主要临床症状为进食困难, 患者出现症状后, 就诊相对较积极, 能更早发现伴发的间质瘤, 故恶性程度较低。本组食管癌合并胃肠间质瘤由于间质瘤恶性程度均较低, 术后均未口服格列卫治疗, 预后主要取决于食管癌病灶的恶性程度。随访时未见胃间质瘤病灶复发转移的迹象。
对于食管癌伴发的GIST病灶, 由于术前发现GIST较困难, 对于术中发现的GIST病灶, 完整的手术切除是最佳的治疗手段。因为不存在跳跃转移, 所以, 不推荐广泛切除;另外, 切缘的微小浸润不影响生存[12,13,14]。因为较少淋巴结浸润, 所以, 不推荐常规淋巴结清扫[15]。
食管磷状细胞癌 篇4
关键词：芹菜素,食管鳞状细胞癌,顺铂,敏感性
食管癌是世界排名第6 位的致死性肿瘤[1],在我国则表现为第4 位致死性的肿瘤,在高发的省份如河南、河北和四川,其致死性居肿瘤第1 位[2]。 食管癌主要包括食管鳞状细胞癌(以下简称“食管鳞癌”)和食管腺癌两大类型,在我国食管癌病例中90%为食管鳞癌[3]。 相当多的食管癌患者在确诊时已经无法单纯通过外科手术根治,即使术前予以新辅助化疗,联合手术治疗的预后仍不佳,5 年存活率仅为20%[4]。 因此,如何提高食管癌放化疗有效性成为近年来食管癌的研究热点之一。 顺铂是食管鳞癌化疗方案中的一种重要化疗药物,其抗肿瘤作用在多年临床应用中已得到了较好的验证,但常规顺铂化疗剂量亦常常会导致消化道不良反应、过敏反应、肾毒性、骨髓抑制、神经毒性、耳毒性,使得顺铂的临床应用受到了一定的影响。如何降低顺铂的不良反应,同时保留其杀伤肿瘤的有效性,成为临床医务工作者和科研人员所关注的重要问题。
芹菜素(Apigenin)是一种广泛存在于水果和蔬菜当中的植物黄酮,食用安全性较好。 近年来已有多项研究报道,芹菜素具有抗感染、抗氧化和抗肿瘤等生物学活性[5]。 并且,芹菜素已被报道对多种肿瘤如乳腺癌、胃癌、结肠癌、皮肤癌、前列腺癌和血液系统等肿瘤细胞的生长具有抑制作用或引起肿瘤细胞的凋亡[5,6,7,8,9,10,11]。 但是芹菜素对食管鳞癌顺铂敏感性影响的研究国内外鲜有报道。 如果芹菜素可以增强食管鳞癌细胞对顺铂的敏感性,则有可能在临床中作为一种有效的辅助用药可以减少顺铂的用量,进而减少药物不良反应的发生。 因此,本研究使用芹菜素联合顺铂对食管鳞癌TE-1 细胞进行干预,采用体外药敏实验和细胞凋亡等实验观察联合芹菜素干预前后食管鳞癌TE-1 细胞对顺铂的敏感性改变, 初步阐明芹菜素在食管鳞癌细胞对顺铂药物敏感性中的作用和机制。
1 材料与方法
1.1 实验材料
SDS -PAGE凝胶配制试剂盒、RIPA裂解液、PMSF、5X蛋白上样缓冲液、丽春红染色液、CCK-8 试剂盒和结晶紫(自碧云天生物技术研究所);RPMI 1640培养基和Hyclone胎牛血清(Hyclone公司);NC膜和ECL (Millipore);Hoechst染色试剂盒( 碧云天生物技术研究所);anti-β-actin一抗(sc-47778)和anti-GRP78一抗(sc-166490)(Santa Cruz Biotechnology);辣根过氧化物酶标记的山羊抗小鼠和山羊抗兔二抗(北京中杉金桥生物技术有限公司);cisplatin和pigenin(SIGMA-ALDRICH公司); 人食管鳞癌TE-1 细胞购自中科院上海细胞库。
1.2 实验方法
1.2.1细胞培养
培养TE-1细胞使用添加有10%胎牛血清和加入青霉素/链霉素的RPMI 1640。细胞置于含5%CO2的恒温培养箱内37℃培养。用于实验的细胞均处于对数生长期。
1.2.2 CCK-8生长曲线和药敏实验
使用胰酶消化细胞,培养液重悬,以5×103个/孔(生长曲线实验中为1×103个/孔)接种于96孔板,每孔加培养液200μL,细胞贴壁16 h后加入适当浓度药物进行体外药物敏感性检测,同时设置调零孔和对照孔,继续孵育72 h(生长曲线实验培养1~7 d);72 h以后(生长曲线实验则每天取出)取出96孔板,每孔加入CCK-8 20μL,孵育4 h;酶标仪检测吸光度并分析。1设置5、10、20μmol/L芹菜素干预组,仅加入同等浓度溶媒DMSO的细胞组作为对照组,观察不同浓度芹菜素对TE-1细胞的生长抑制作用。2设置加入0.000、0.008、0.040、0.200μg/m L顺铂的4个TE-1细胞组,每组细胞还分为加入0、5、10、20μmol/L的芹菜素,观察不同浓度芹菜素联合顺铂对TE-1细胞的杀伤作用。
1.2.3克隆形成实验
使用胰酶消化细胞,培养液重悬,以1×103个/孔的密度接种于24孔板,细胞贴壁16 h后加入适当浓度的药物进行体外药物敏感性检测,每隔3 d更换培养液,共培养14 d;之后,弃培养液,PBS洗3次;甲醇固定10 min,弃固定液,加入含0.5%结晶紫甲醇染色10 min,PBS洗3次;晾干培养板,用数码相机拍照,使用Photoshop CS3软件进行图像分析。设置1个加入0μg/m L顺铂TE-1细胞组和3个加入0.04μg/m L顺铂的TE-1细胞组,后3个组分别加入0、5、10μmol/L的芹菜素,通过克隆形成实验观察芹菜素联合顺铂对TE-1细胞克隆形成的影响。
1.2.4 Hoechst核染色凋亡检测
使用胰酶消化细胞,按1×106个/孔的密度接种于6孔板,细胞贴壁16 h后加入适当浓度药物,置于培养箱中孵育36 h诱导凋亡,弃培养液,固定液固定20 min,弃固定液,PBS洗2次,加0.5 m L Hoechst 33258染色液,避光染色5 min,弃染色液,PBS避光洗2次,抗荧光淬灭液封片,荧光显微镜观察并拍照。凋亡的判断方法:正常细胞的细胞核呈正常的蓝色,而凋亡细胞的细胞核会呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染,颜色发白。凋亡率的计算方法:随机选择200倍镜下5个视野计算凋亡率,并取平均值。设置1个加入0μg/m L顺铂TE-1细胞组和3个加入0.2μg/m L顺铂的TE-1细胞组,后3个组分别加入0、5、10μmol/L的芹菜素,通过Hoechst 33258核染色实验观察芹菜素对TE-1细胞在顺铂作用下凋亡的影响。
1.2.5 Western blot
使用胰酶消化细胞,提取总蛋白,测定蛋白浓度,加入5X蛋白上样缓冲液加热5 min,SDS-PAGE蛋白电泳,将分离的蛋白湿转至NC膜,丽春红染色,裁剪,PBST洗膜3次,以5%脱脂牛奶PBST封闭1 h,封闭液稀释适当浓度的一抗后与条带在4℃过夜,PBST洗膜3次,用封闭液稀释适当浓度的二抗与条带室温下孵育1 h;PBST洗膜4次,加ECL溶液,暗室显影观察。设置3个加入0.2μg/m L顺铂的TE-1细胞组,分别加入0、5、10μmol/L的芹菜素,通过Western blot实验检测芹菜素对顺铂作用下TE-1细胞中GRP78蛋白表达的影响。
1.3 统计学方法
使用SPSS 17.0 统计软件进行实验数据分析,正态分布计量资料以均数±标准差(±s)表示,多组间比较采用方差分析,两两比较采用LSD-t检验。 以P <0.05 为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 芹菜素对TE-1 细胞的抑制作用
CCK-8 实验结果提示,芹菜素对TE-1 细胞具有生长抑制的作用,且有明显的浓度依赖性。 见表1。
2.2 不同浓度芹菜素联合顺铂对TE-1 细胞的杀伤作用
使用不同浓度芹菜素联合低浓度顺铂共同作用于TE-1 细胞以后,CCK-8 药敏实验结果提示, 与单用顺铂比较,芹菜素可以显著增加食管鳞癌TE-1 细胞对顺铂的药物敏感性(P < 0.05),且这一作用随芹菜素浓度增加而增强,有浓度依赖性。 见表2。
注:与同浓度顺铂组的0.000 μmol/L芹菜素比较,*P < 0.05
2.3 芹菜素联合顺铂可显著减少TE-1 细胞的克隆形成
不同浓度芹菜素和顺铂作用于TE-1 细胞后,平板克隆实验结果提示, 与仅加入顺铂组克隆形成率(82.83%) 比较, 加入5 μmol/L的芹菜素以后,TE-1细胞克隆形成率明显减少(44.30%);进一步提高芹菜素浓度(10 μmol/L)后,TE-1 细胞克隆形成率出现进一步下降(29.77%),差异有统计学意义(P < 0.05),提示芹菜素可以增强顺铂对TE-1 细胞的杀伤作用。
2.4 芹菜素可明显增加TE-1 细胞在顺铂作用下的凋亡
Hoechst 33258 核染色结果显示, 与不加药对照组和仅加顺铂组相比,在芹菜素联合顺铂作用于TE-1 细胞后核浓染和碎裂的细胞显著增多(图1),且当加入的芹菜素浓度逐步增加后, 发生凋亡和坏死的细胞数目均进一步增多,差异有高度统计学意义(P <0.01)(图2),提示芹菜素促进了顺铂诱发的TE-1 细胞凋亡。
2.5 芹菜素可在联合顺铂作用下使TE-1 细胞GRP78的表达减少
Western blot检测结果提示,与单用顺铂组比较,TE-1 细胞在联合芹菜素作用后GRP78 蛋白的表达显著减少, 且这一作用随芹菜素浓度升高更加明显。见图3。
3 讨论
近年来,芹菜素作为天然存在于水果和蔬菜的一种植物黄酮,因其具有较强的抗炎、抗氧化和抗肿瘤等生物活性,受到了越来越多的关注。 在抗肿瘤方面,目前研究发现芹菜素可以通过多种途径抑制肿瘤的生长和促进凋亡的发生[5],提示其在抗肿瘤的临床治疗中具有较好的应用前景。 芹菜素曾被报道可以通过G2/M细胞周期阻滞和诱导凋亡而对食管鳞癌KYSE-510 细胞产生细胞毒性作用,具体机制与上调p21 和PIG3 及下调cyclin B1 有关[12]。 但是,芹菜素对食管鳞癌细胞化疗药物敏感性和应激抵抗的影响尚不清楚,芹菜素与顺铂联合在食管鳞癌治疗方面的研究也鲜有报道。
在本研究中,首先检测了芹菜素对TE-1 细胞的抑制作用,初步确定了芹菜素单独作用抑制细胞生长的能力;然后,在顺铂联合不同浓度的芹菜素干预下,发现芹菜素有助于提高顺铂对TE-1 细胞的杀伤性,且这一作用随芹菜素浓度增加而增强;进一步的凋亡检测结果提示,联合芹菜素可以增加顺铂导致的TE-1细胞凋亡;最后,在Western blot检测中还发现,芹菜素联合顺铂作用于TE-1 细胞后GRP78 的表达明显减少,提示抵抗应激能力的减弱可能也是芹菜素联合顺铂对TE-1 细胞杀伤作用增强的机制之一。
GRP78 是非折叠蛋白反应中一种重要的应激保护蛋白,也是膜蛋白和分泌蛋白正确折叠和组装的一种重要的内质网分子伴侣[13,14,15]。 诸如缺氧、营养物质缺乏和毒性物质导致的多种应激均可引起GRP78 的表达增加, 多个研究发现过表达的GRP78 存在于多种恶性肿瘤中,并可以导致肿瘤细胞对应激抵抗能力和化疗药物耐药性的增强以及促进侵袭和转移的发生[13,16,17,18,19,20]。 在本研究中发现小剂量芹菜素在联合较低浓度顺铂的作用下可以明显增强其抗肿瘤作用,并且这一作用与促进凋亡和引起应激保护蛋白GRP78 的表达减少有关,提示芹菜素很可能通过影响食管鳞癌细胞抗凋亡和对应激抵抗的能力,进而导致其对顺铂敏感性发生改变。 然而,引起这些作用的具体信号途径还有待进一步研究进行阐明。
食管磷状细胞癌 篇5
1 材料与方法
1.1 标本来源
选择中国医科大学附属盛京医院胸外科2004年12月至2006年1月间切除的食管癌组织标本91例,中位年龄58.8岁。其中男性82例,女性9例。经手术后病理诊断证实为食管鳞状细胞癌。病变浸润粘膜层5例,肌层31例,外膜层55例。伴有局部淋巴结转移的32例,无淋巴结转移的59例。TNM分期:其中Ⅰ期3例,Ⅱa期53例,Ⅱb期29例,Ⅲ期6例。病变长度小于等于5cm有63例,大于5厘米有28例。病变高分化42例,中分化39例,低分化10例。另取10例正常食管组织作为对照。患者术前均未接受放化疗。
1.2 试剂
鼠抗人CD44v6和E-cadherin单克隆抗体,免疫组化S-P试剂盒,DAB试剂盒(购于北京中杉金桥生物技术有限公司)。
1.3 方法
每例标本常规石蜡切片2张,采用S-P免疫组化方法分别进行CD44v6和E-cadherin染色各一张,S-P染色法按照S-P试剂盒说明书进行。阳性对照为已知阳性的组织标本染色片,阴性对照使用PBS替代一抗。
1.4 统计学分析
采用SPSS 13.0专业统计软件,采用X2检验,Spearman秩相关检验,检验标准α=0.05。
2 结果
2.1 CD44v6在食管鳞状细胞癌组织中和正常食管组织中的表达
91例食管鳞状细胞癌组织中CD44v6表达阳性率为75.8%(69/91),阳性反应物质定位于细胞膜。在10例正常食管组织中CD44v6阳性率为10.0%(1/10),CD44v6在食管鳞状细胞癌中的阳性表达率显著高于正常的食管组织(P<0.05)。
2.2 CD44v6与食管鳞状细胞癌的关系
CD44v6的高表达与浸润深度,淋巴结转移及临床分期均呈正相关(P<0.05),而与肿瘤的分化程度,肿瘤长度无明显相关性。(P>0.05),见附表。
与浸润至外膜层比较,a P<0.05;与无转移比较,b P<0.05;与Ⅰ期～Ⅱa期比较,c P<0.05。
2.3 E-cadherin在食管鳞状细胞癌组织中和正常食管组织中的表达
91例食管鳞状细胞癌组织中E-cadherin 表达阳性率为47.3%(43/91),阳性反应物质定位于细胞膜或细胞浆。在10例正常食管组织中E-cadherin均呈不同程度阳性反应100%(10/10)。E-cadherin在食管鳞状细胞癌中的阳性表达率明显低于正常的食管组织(P<0.05)。
3 讨论
CD44v6 是CD44 的一种拼接变异体,其表达可改变肿瘤细胞表面粘附分子的构成和功能,有助于肿瘤细胞获得转移潜能。CD44v6 的促进转移作用机制可能是表达CD44v6 的肿瘤细胞与淋巴管或血管内某一配体结合,使转移至那里的肿瘤细胞更加稳定地寄宿与生长,有效形成转移瘤。近年研究证实,CD44v6 和转录分子水平的过量表达与乳腺癌、胃癌、食管癌等许多肿瘤的发生、发展、侵袭和转移密切相关[1]。E-cadherin 是钙粘附蛋白分子家族中跨膜蛋白亚型的一种,主要存在于人和动物的上皮细胞,集中表达在粘着连接,对维护上皮细胞的形态和结构完整性起着重要作用。E-cadherin 主要介导同型细胞的粘附功能,E-cadherin 表达下降或缺失,细胞间的相互粘附力下降,造成细胞容易分散而向外周浸润性生长,一旦获得转移的必要条件, 就可脱离原发灶而发生转移[2],这已在甲状腺乳头状癌、膀胱癌、前列腺癌和胆囊癌等的研究中得到证实[3]。我们采用免疫组织化学技术,检测91 例食管鳞状细胞癌、10 例正常食管组织中的CD44v6 和E-cadherin 蛋白表达。结果显示,CD44v6 在食管癌组织中表达阳性率显著高于正常食管组织(P<0.05) ,E-cadherin 在食管癌组织中的表达阳性率显著低于正常食管组织(P<0.05) 。CD44v6 高表达和E-cadherin 低表达与食管癌的临床分期、浸润深度、有无淋巴结转移呈显著正相关(P<0.05) ,表明CD44v6 在食管癌的发生、发展和转移过程中起着重要促进作用, E-cadherin 在其过程中起着抑制作用,检测CD44v6 和E-cadherin 蛋白表达均可作为预测食管癌侵袭转移及估计预后的客观指标。
在恶性肿瘤发生机制的癌基因研究中,许多学者提出了基因协同作用假说,认为在恶性肿瘤发生,发展和转移的各阶段,至少有两个或两个以上功能不同的异常激活的基因各自发挥不同作用,并在时间和空间上相互配合,协同促进了
细胞的癌变[4]。我们发现,在食管癌中CD44v6 表达与E-cadherin 表达呈负相关。表明在食管癌的发生发展过程中,CD44v6 与E-cadherin 具有负调节的协同作用可能。深入探讨它们之间的作用机制,将对阐明和阻断肿瘤转移的形成具有重要价值。
摘要：目的 研究CD44v6和E-cadherin在食管鳞状细胞癌中的表达及其与食管鳞状细胞癌浸润转移的关系。方法 选取91例食管鳞状细胞癌组织和10例正常食管组织石蜡标本,应用免疫组化方法检测CD44v6和E-cadherin的表达。结果 (1)CD44v6在食管鳞状细胞癌中阳性表达率高于正常食管组织(P<0.05);E-cadherin在食管鳞状细胞癌中阳性表达率低于正常食管组织(P<0.05)。(2)CD44v6的高表达和E-cad-herin的低表达与食管鳞状细胞癌的浸润程度,淋巴结转移和临床分期呈正相关(P<0.05);而与肿瘤的分化程度和肿瘤的长度无明显相关性。(3)CD44v6和E-cadherin在食管鳞状细胞癌中的表达呈负相关(r=-0.545,P<0.01)。结论 CD44v6和E-cadherin在食管鳞状细胞癌组织中的表达与浸润程度,淋巴转移和临床分期密切相关。
关键词：食管肿瘤,CD44v6,E-cadherin,免疫组织化学
参考文献
[1]谷化平,倪灿荣,詹容洲,等.CD15 mRNA,CD44v6 mRNA及nm232H1 mRNA在乳腺癌中的表达及其临床意义[J].中华医学杂志,2000,80(11):854-857.
[2]Bornman DM,Mathew S,Alsruhe J,et al.Methylation of the E-cadherin gene bladder neoplasia and in normal urothelial expressionfrom elderly individuals[J].Am J Pathol,2001,159(3):834-835.
[3]谷化平,刘艳茹,尚培中.nm23-H1和E-cadherin基因蛋白在胆囊癌组织中的表达[J].中国现代普通外科进展杂志,2002,5(1):29-31.
食管磷状细胞癌 篇6
肿瘤的生长、浸润和转移是一个复杂的多步骤、多阶段的酶联反应过程, 涉及肿瘤细胞、宿主细胞及细胞外基质之间的一系列复杂多步骤相互作用。骨桥蛋白 (osteopontin, OPN) 是一种具有多种功能的分泌性钙结合磷酸化糖蛋白, 其中含有特异的与细胞黏附有关的RGD[精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸 (ArgGly-Asp) ]序列, 能与整合素, CD44 (cell adhesionmolecules CAM, 或者Cluster of differentiation 44, 丛集分化群第44号) , 特别是CD44拼接变异体6 (variant isoform 6 of CD44, CD44v6) 等结合来促进细胞的趋化、黏附和迁移, 在肿瘤的浸润和转移中起到一定作用[3]。本研究通过测定OPN和CD44v6在食管鳞状细胞癌中的表达情况, 探讨OPN和CD44v6与食管鳞状细胞癌的临床病理特征之间的关系, 从而为食管鳞状细胞癌的浸润、转移机制提供理论依据, 以期能成为预测、监测食管鳞状细胞癌复发、转移及判断预后的诊断指标之一。
1 材料与方法
1.1 临床资料
选取山东省青岛市中心医院2011年1月~2011年12月经手术切除并经病理证实的食管鳞状细胞癌标本54例, 入选条件为:本院首诊的食管癌患者, 所有患者取病理之前未接受过化疗和放疗;均具有完整的临床资料和病理资料。其中男性37例, 女性17例;年龄38~78岁, 中位年龄58.5岁;高分化鳞癌14例, 中分化鳞癌18例, 低分化鳞癌16例, 未分化癌6例。采用2009年国际抗癌联盟 (UICC) 食管癌TNM标准:T1癌组织浸润深度为黏膜固有层及黏膜下层14例;T2癌组织浸润固有肌层20例;T3癌组织浸润纤维膜16例;T4癌组织有远处转移4例。淋巴结转移24例, 无淋巴结转移30例。每例标本均取原发灶癌组织及距癌灶5 cm以上的食管正常组织, 同时经病理确定26例标本距离癌组织边缘3 cm以内存在不典型增生, 所有标本均用10%的福尔马林液固定, 常规石蜡包埋连续切片, 厚度4μm, 分别做HE染色和免疫组织化学染色。
1.2 试剂
兔抗人CD44v6单克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司;鼠抗人OPN单克隆抗体、免疫组织化学试剂盒及DAB试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。
1.3 实验方法
全部标本组织经10%中性福尔马林固定, 石蜡包埋, 4μm连续切片, 采用免疫组织化学SP法 (链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法) 。PBS替代一抗做为阴性对照, 已知阳性切片做为阳性对照。严格按照实验试剂盒说明书步骤进行。
1.4 结果判定
OPN主要在细胞胞浆内表达, 呈棕黄色或棕褐色颗粒, 胞膜时有表达;CD44v6染色主要分布于细胞膜, 呈棕黄色为阳性。观察阳性反应采用双盲法, 并由2位高年资病理科医师独立观察每张切片后一起做出判断。判断标准:每张切片随机选取5个高倍视野, 每个视野计数100个细胞观察阳性细胞染色强度, 计数阳性细胞百分数。按着色细胞百分数计分:着色细胞<10%为0分, ≥10%但<40%为1分, ≥40%但<70%为2分, ≥70%为3分。按着色强度计分:无着色为0分, 淡黄色为1分, 棕黄色为2分。将着色细胞百分数计分与着色强度计分相乘做为总计分。总计分0分为阴性 (-) , 1~3分为阳性 (+) , 4分以上为强阳性 (++) 。统计时以 (-) 判定为阴性, (+) 和 (++) 判定为阳性。
1.5 统计学方法
采用SPSS 13.0软件包进行统计学分析, 免疫组织化学结果用χ2检验, 相关性分析用Spearman等级相关分析, P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 OPN、CD44v6在正常食管组织、食管不典型增生组织及食管鳞状细胞癌中的表达
54例正常食管组织中OPN阳性表达11例, 强阳性表达7例, 阳性表达率33.33% (18/54) ;26例食管不典型增生组织中OPN阳性表达8例, 强阳性表达7例, 阳性表达率57.69% (15/26) ;54例食管鳞状细胞癌组织中OPN阳性表达27例, 强阳性表达10例, 阳性表达率68.52% (37/54) 。OPN在正常食管组织、食管不典型增生组织及食管鳞状细胞癌组织中表达逐渐增强, 其比较差异有统计学意义 (χ2=13.782, P<0.05) 。OPN在食管不典型增生组织和食管鳞状细胞癌组织中表达均高于正常食管组织 (χ2=4.297, 13.375, P<0.05) , 但在食管不典型增生组织和食管鳞状细胞癌组织中的表达差异无统计学意义 (χ2=0.094, P>0.05) 。54例正常食管组织中CD44v6阳性表达9例, 强阳性表达5例, 阳性表达率25.93% (14/54) ;26例食管不典型增生组织中CD44v6阳性表达8例, 强阳性表达5例, 阳性表达率50.00% (13/26) ;54例食管鳞状细胞癌组织中CD44v6阳性表达23例, 强阳性表达10例, 阳性表达率61.11% (33/54) 。CD44v6在正常食管组织、食管不典型增生组织及食管鳞状细胞癌组织中表达逐渐增强, 其比较差异有统计学意义 (χ2=13.874, P<0.05) 。CD44v6在食管不典型增生组织和食管鳞状细胞癌组织中的表达均高于正常食管组织 (χ2=4.549, 13.599, 均P<0.05) , CD44v6在食管不典型增生组织和食管鳞状细胞癌组织中的表达差异无统计学意义 (χ2=0.887, P>0.05) 。见表1。OPN、CD44v6在各组织中的表达见图1~6。
注:OPN、CD44v6在各组组织中的表达比较:1) 与正常食管组织比较, P<0.05;2) 与食管鳞状细胞癌比较, P>0.05
2.2 OPN和CD44v6的表达与食管鳞状细胞癌临床病理特征的关系
在食管鳞状细胞癌中, OPN和CD44v6的表达与患者的性别无关 (χ2=0.167, 0.697, 均P>0.05) , OPN和CD44v6的表达与患者的组织学类型、TNM分期和淋巴结转移有关。OPN和CD44v6在未分化-低分化食管鳞状细胞癌中的表达较中-高分化食管鳞状细胞癌中的表达明显升高, 差异有统计学意义 (χ2=5.902, 9.155, 均P<0.05) ;在食管鳞状细胞癌的TNM分期中, 随着浸润深度的增加OPN和CD44v6的表达也随之升高, 其差异有统计学意义 (χ2=7.840, P=0.049<0.05, χ2=10.480, P=0.015<0.05) ;有淋巴结转移的食管鳞状细胞癌中OPN和CD44v6的表达较没有淋巴结转移的食管鳞状细胞癌明显升高, 差异有统计学意义 (χ2=7.972, 11.627, 均P<0.05) 。见表2。
例
例
2.3 食管鳞状细胞癌中OPN和CD44v6表达的相关性分析
配对资料的Spearman相关分析显示, OPN和CD44v6在54例食管鳞状细胞癌中的表达呈正相关关系 (r=0.304, P=0.025<0.05) 。见表3。
3 讨论
OPN最早由SENGER等[4]从骨基质中分离出来的一种分泌型钙结合磷酸化糖蛋白, 具有广泛的生物学功能, 如细胞粘附、迁移、促血管生长作用、抑制细胞凋亡作用等。近年来, OPN与肿瘤的发生、发展, 特别是它与肿瘤转移的关系日益引起人们的关注。KIM等[5]研究认为OPN通过与整合素和CD44受体结合调节细胞-基质间的分子信号传导参与肿瘤进展的各环节。ZHENG等[6]通过转染下调前列腺癌PC-3细胞中OPN的表达, 发现出现细胞生长停滞, S期阻滞及细胞凋亡。在乳腺癌细胞中, 过度表达的OPN能够刺激上皮-间质转变转录因子表达, 从而使乳腺癌细胞更具有侵袭性[7]。COPPOLA等[8]对一组包括头颈、食管、乳腺、肺、肝、胃肠、膀胱、子宫等全身实体肿瘤组织大宗病例OPN表达研究比较发现, OPN表达普遍增强, 尤其在胃肠、泌尿生殖和妇科系统, 且其表达程度与临床分期有关, 并与肿瘤病理分级密切相关。WU等[9]研究OPN在食管癌组织中的表达时, 运用低聚核苷酸微点阵技术和RT-PCR方法, 发现OPN在食管癌组织中的表达大约是正常组织的2倍, OPN m RNA的表达与临床分期密切相关, 分期越晚OPN m RNA的表达越高。本实验结果显示, OPN在正常食管组织、食管不典型增生组织及食管鳞状细胞癌的阳性表达率呈现上升的趋势, 其差异具有统计学意义, 同时, OPN在食管不典型增生组织及食管鳞状细胞癌的阳性表达均高于正常食管组织, 且差异具有统计学意义, 而在食管不典型增生组织和食管鳞状细胞癌组织中虽然OPN的表达升高, 但差异无统计学意义, 表明OPN的过度表达可能参与食管鳞状细胞癌的发生, 而且其参与过程可能在食管不典型增生阶段就已经发生, 因此, 推测早期检测, 特别是在食管不典型增生阶段同时检测组织中OPN水平, 有可能对患者的预后有一定参考意义。进一步的实验结果显示, 食管鳞状细胞癌中OPN的阳性表达与患者的性别无关, 随着组织分化程度的降低, OPN的阳性表达率升高;随着浸润深度的增加, OPN的阳性表达也随之升高;OPN在有淋巴结转移的食管鳞状细胞癌中的阳性表达率显著高于无淋巴结转移者。说明OPN的表达与食管鳞癌的组织学分级、浸润深度、淋巴结转移均有关系, 提示OPN在食管鳞状细胞癌的浸润转移中扮演重要角色。
CD44v6是一种存在于细胞表面整合的跨膜糖蛋白, 是黏附分子家族成员之一, 许多研究证实, CD44v6在胰腺癌、胃癌以及膀胱移行细胞癌中表达升高, 可能参与肿瘤的浸润及转移过程[10,11,12]。另有研究表明[13], CD44v6的过度表达可使肿瘤细胞牢固地锚定在宿主细胞基底膜及细胞外间质中, 形成稳定的侵袭或转移。本研究发现, 与OPN类似, CD44v6在正常食管组织、食管不典型增生组织及食管鳞状细胞癌的阳性表达率呈现上升的趋势, 其差异具有统计学意义, 进一步的实验结果显示, 食管鳞状细胞癌中CD44v6的阳性表达与其组织分化、浸润深度及淋巴结转移有关。因此提示, CD44v6可能与食管鳞状细胞癌的发生发展密切相关。
在恶性肿瘤发生机制的癌基因研究中, 许多学者提出了基因协同作用假说, 认为在恶性肿瘤发生、发展和转移的各阶段, 至少有2个或2个以上功能不同的异常激活的基因各自发挥不同作用, 并在时问和空间上相互配合, 协同促进了细胞的癌变。GAO等[14]采用Western blotting方法检测Hep G2肝癌细胞株中OPN对CD44v6的影响, 结果发现OPN能上调CD44v6蛋白的表达, 这种调节表现为浓度依赖性和时间依赖性, 同时随着CD44v6的升高, Hep G2细胞粘附基质的能力增强。OUARINO等[15]通过免疫组织化学方法检测乳头状甲状腺肿瘤中OPN和CD44v6的表达, 研究发现OPN在甲状腺癌中呈高表达, OPN过表达促进甲状腺细胞的侵袭、转移, 用抗CD44抗体能阻断这一反应, 表明OPN和CD44v6表达可能具有一致性, OPN表达增强可能使CD44v6表达上调。本研究中发现, OPN和CD44v6在食管鳞状细胞癌中均有很高的阳性表达率, 且OPN与CD44v6呈高度正相关 (r=0.304, P=0.025<0.05) , 由此可推测OPN与CD44v6可能在食管鳞状细胞癌中通过协同作用在肿瘤的转录调控阶段, 激活某种信号传导途径, 使得CD44v6表达上调, 引起恶性细胞的趋化粘附和浸润迁移, 同时两者结合后可能使肿瘤细胞逃避宿主免疫系统的识别和杀伤功能, 从而导致肿瘤的发生、发展和转移, 但具体机制尚不确定, 还待进一步研究发现。
综上所述, 本研究中发现在食管鳞状细胞癌中CD44v6和OPN均高表达, 且两者成正相关, 推测在食管鳞状细胞癌中两者通过协同作用在肿瘤的转录调控阶段通过某些相同的激活通道, OPN表达增强可能使CD44v6表达上调, 从而促进肿瘤的发生和转移, 且CD44v6与OPN高表达与食管鳞状细胞癌的组织学类型、浸润深度及淋巴结转移有关, 为临床上对肿瘤的监测及预后判断等提供了参考指标。进一步深入了解OPN与CD44v6在食管鳞状细胞癌浸润、转移过程中所发生的基因和分子变化的关系, 对开创肿瘤诊断和治疗的新局面非常必要。在治疗方面, 针对其受体从基因启动到信号传导途径的成功干预, 将有效地降低肿瘤的生物学恶性程度, 延长患者的生存时间, 提高其生存质量。
摘要：目的 检测骨桥蛋白 (OPN) 和CD44v6在食管鳞状细胞癌中的表达情况, 探讨OPN和CD44v6在食管鳞状细胞癌中的表达及其与食管鳞状细胞癌临床病理特征之间的关系。方法 采用免疫组织化学SP法 (链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法) , 对54例食管鳞状细胞癌组织、26例食管不典型增生组织及54例正常食管组织中OPN和CD44v6的表达进行检测, 探讨二者的表达与临床病理特征的关系, 并进行相关分析。结果 ①OPN和CD44v6在正常食管组织、食管不典型增生组织及食管鳞状细胞癌中表达逐渐增强, 比较其差异有统计学意义 (χ2=13.782, P<0.05;χ2=13.874, P<0.05) 。②在食管鳞状细胞癌中, OPN和CD44v6的表达与患者的性别无关 (χ2=0.167, 0.697, 均P>0.05) , 与患者的组织学类型、TNM分期和淋巴结转移有关 (χ2=5.902, 9.155, 均P<0.05;χ2=7.840, 10.480, 均P<0.05;χ2=7.972, 11.627, 均P<0.05) 。③OPN和CD44v6在54例食管鳞状细胞癌组织中的表达呈正相关关系 (r=0.304, P=0.025<0.05) 。结论 OPN和CD44v6在食管不典型增生组织、食管鳞状细胞癌中的高表达与肿瘤的发生及浸润性生长相关, 且两者在肿瘤侵袭性改变中可能起协同作用。二者联合检测可能为临床上对肿瘤的监测及预后判断等提供参考指标。